專利名稱：一種中藥楤木總皂苷的質量控制方法
技術領域：
本發明屬于中藥有效部位質量控制標準。
背景技術：
龍牙楤木(Aralia etata)、虎刺楤木(Aralia armata)、長刺楤木(Aralia spinifolia)、黃毛楤木(Aralia decaisneama)、遠東楤木(Araliaschmidtii)等系五加科楤木屬植物。這些植物的葉、莖皮、根均含有多種楤木總皂苷。經研究表明楤木總皂苷具有明顯的適應原樣作用，并具有強心、降壓、降脂、降糖、保肝等多方面生理活性。對于從中藥楤木中提取總皂苷的方法及楤木總皂苷的用途已進入了使用階段。我們曾在專利申請號為00123316.5的專利中公開了一種楤木總皂苷的提取方法及其在治療冠心病、心絞痛方面的應用。并且以該方法提取的楤木總皂苷為原料制成了膠囊劑，經臨床觀察對冠心病、心絞痛具有明顯療效。
目前為了控制楤木總皂苷的內在質量，通常采用重量法、紫外分光光度法，比色法等方法測量總皂苷的含量，以上方法雖然在某種程度上能起到控制總皂苷內在質量的作用，但專屬性不強。例如，重量法一般采用了正丁醇萃取，而從不同原料中提取、制備的總皂苷均能用正丁醇萃取；紫外分光光度法和比色法是在一定濃度下或加一定顯色劑反應后進行測定，不同來源的總皂苷也都可能在相同的測試波長下吸收。目前尚無專屬性強的測定楤木總皂苷的方法。
發明內容
本發明的目的是通過轉化使楤木總皂苷中具有齊墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷結構的其它原生苷全部轉化成齊墩果酸-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷，并采用高效液相色譜法測定其含量，以達到控制楤木總皂苷內在質量的目的。本發明采取的技術方案是色譜條件與系統適用性試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-1％乙酸(82.5∶17.5)為流動相；檢測波長210hm。理論板數按齊墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷峰計算應不低于2000；對照品溶液的制備取齊墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷對照品適量，精密稱定，加甲醇-乙酸(9∶1)混合溶液制成每1ml含0.5mg的溶液；供試品溶液的制備將精密稱定的楤木總皂苷200～250mg溶于40～50ml0～20％乙醇中，然后加1.35～2.2ml酸溶液與之混合均勻，混合后濃度為0.5mol/L～0.8mol/L，在常壓下加熱溫度為100～105℃，加熱時間為4～5小時后，靜止至室溫，濾過，溶液通過大孔吸附樹脂柱，水洗至中性，再將沉淀用0.1-2％氫氧化鈉水溶液或0.1-2％氫氧化鈉10-30％乙醇溶液100～150ml溶解后，也通過該樹脂柱、水洗至中性，繼用70％乙醇150～200ml洗脫，收集洗脫液，蒸干溶劑，殘渣用甲醇-乙酸(9∶1)定容至25ml，作為供試品溶液；測定分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定。
照上述方法測定，楤木總皂苷中齊墩果酸-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的含量應≥17％。
本發明創新點在于專屬性強，且高效液相色譜法的精密度和準確度高于重量法、紫外分光光度法和比色法，因此更具有測定意義。
通過該標準方法控制的楤木總皂苷純度高，并且經試驗證明可明顯擴張冠脈血管，增加心肌血流量，從而增加心肌供氧；減慢心率，輕度降低血壓，減少心臟負荷而降低心肌耗氧量；提高SOD活性，降低MDA，抑制自由基的產生，保護心肌細胞，抗心肌細胞調亡，使細胞漿膜、核膜、線粒體損傷減少，使缺血時心肌發生損傷減少；抑制心肌細胞Na+、K+電流，興奮Ca++電流；明顯改善血液流變性，降低血液黏度，改善微循環，防止血栓形成。臨床應用顯示用于冠心病心絞痛急性期治療與硝酸甘油合用，具有明顯的輔助治療作用，可以明顯提高硝酸甘油的停減率，減少心絞痛持續時間，減少發作次數；用于冠心病心絞痛緩解期時單獨服用可明顯改善患者的心電圖(有效率達50-60％)；明顯改善冠心病、心絞痛癥狀，且服用時間與療效呈正相關，未發現明顯的毒副作用。療效上明顯優于同類制劑地奧心血康膠囊和諾迪康膠囊。
具體實施例方式
實施例1色譜條件與系統適用性試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-1％乙酸(82.5∶17.5)為流動相；檢測波長210nm。理論板數按齊墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷峰計算應不低于2000。
對照品溶液的制備取齊墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷對照品適量，精密稱定，加甲醇-乙酸(9∶1)混合溶液制成每1ml含0.5mg的溶液即得。
供試品溶液的制備取楤木總皂苷250mg，精密稱定，加20％乙醇溶液，其中含1.8ml硫酸50ml，混合后濃度為0.6mol/L，常壓下加熱溫度為100℃，回流4小時，放冷，濾過，濾液通過D101型大孔吸附樹脂柱(2×15cm)，水洗層中性；濾渣用0.5％氫氧化鈉20％乙醇溶液100ml溶解，濾過，濾液通過上述樹脂柱，水洗至中性，繼用70％乙醇溶液150ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用甲醇-乙酸(9∶1)，混合溶液溶解，轉移至25ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液。
測定方法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定。
楤木總皂苷中，以本法測定的齊墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷的含量≥17％。
實施例2色譜條件與系統適用性試驗和對照品溶液的制備同實施例1。
供試品溶液的制備取楤木總皂苷220mg，精密稱定，加10％乙醇溶液，含2ml鹽酸45ml，混合后濃度為0.5mol/L，加熱到102℃回流4.5小時，放冷，濾過，濾液通過HPD100型大孔吸附樹脂柱(2×15cm)，水洗至中性；濾渣用0.1％氫氧化鈉10％乙醇溶液120ml溶解，濾過，濾液通過上述樹脂柱，水洗層中性，繼用70％乙醇溶液180ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用甲醇-乙酸(9∶1)，混合溶液溶解，轉移至25ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液。
測定方法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定。
楤木總皂苷中，以本法測定的齊墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷的含量≥17％。
實施例3色譜條件與系統適用性試驗和對照品溶液的制備同實施例1。
供試品溶液的制備取楤木總皂苷200mg，精密稱定，加10％乙醇溶液，含1.35ml硫酸40ml，混合后濃度為0.6mol/L，加熱到103℃回流5小時，放冷，濾過，濾液通過SIP-1100型大孔吸附樹脂柱(2×15cm)，水洗層中性；濾渣用2％氫氧化鈉30％乙醇溶液150ml溶解，濾過，濾液通過上述樹脂柱，水洗至中性，繼用70％乙醇溶液200ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用甲醇-乙酸(9∶1)，混合溶液溶解，轉移至25ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液。
測定方法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定。
楤木總皂苷中，以本法測定的齊墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷的含量≥17％。
實施例4色譜條件與系統適用性試驗和對照品溶液的制備同實施例1。
供試品溶液的制備取楤木總皂苷200mg，精密稱定，加10％乙醇溶液，含1.5ml硫酸40ml，混合后濃度為0.6mol/L，加熱到105℃回流4小時，放冷，濾過，濾液通過XAD-2型大孔吸附樹脂柱(2×15cm)，水洗層中性；濾渣用0.1％氫氧化鈉100ml溶解，濾過，濾液通過上述樹脂柱，水洗至中性，繼用70％乙醇溶液150ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用甲醇-乙酸(9∶1)，混合溶液溶解，轉移至25ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液。
測定方法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定。
楤木總皂苷中，以本法測定的齊墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷的含量≥17％。
實施例5色譜條件與系統適用性試驗和對照品溶液的制備同實施例1。
供試品溶液的制備取楤木總皂苷200mg，精密稱定，加20％乙醇溶液，含1.5ml硫酸，50ml，混合后濃度為0.5mol/L，加熱到104℃回流4.5小時，放冷，濾過，濾液通過XAD-2型大孔吸附樹脂柱(2×15cm)，水洗至中性；濾渣用1％氫氧化鈉120ml溶解，濾過，濾液通過上述樹脂柱，水洗層中性，繼用70％乙醇溶液180ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用甲醇-乙酸(9∶1)，混合溶液溶解，轉移至25ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液。
測定方法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定。
楤木總皂苷中，以本法測定的齊墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷的含量≥17％。
實施例6色譜條件與系統適用性試驗和對照品溶液的制備同實施例1。
供試品溶液的制備取楤木總皂苷200mg，精密稱定，加20％乙醇溶液，含2.2ml鹽酸40ml，混合后濃度為0.6mol/L，加熱到105℃回流5小時，放冷，濾過，濾液通過HPD300型大孔吸附樹脂柱(2×15cm)，水洗至中性；濾渣用2％氫氧化鈉150ml溶解，濾過，濾液通過上述樹脂柱，水洗層中性，繼用70％乙醇溶液200ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用甲醇-乙酸(9∶1)，混合溶液溶解，轉移至25ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液。
測定方法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定。
楤木總皂苷中，以本法測定的齊墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷的含量≥17％。
權利要求
1.一種中藥楤木總皂苷的質量控制方法，其特征在于包括下列步驟色譜條件與系統適用性試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-1％乙酸(82.5∶17.5)為流動相；檢測波長210nm。理論板數按齊墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷峰計算應不低于2000；對照品溶液的制備取齊墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷對照品適量，精密稱定，加甲醇-乙酸(9∶1)混合溶液制成每1ml含0.5mg的溶液；供試品溶液的制備將精密稱定的楤木總皂苷200～250mg溶于40～50ml0～20％乙醇中，然后加1.35～2.2ml酸溶液與之混合均勻，混合后濃度為0.5mol/L～0.8mol/L，在常壓下加熱溫度為100～105℃，加熱時間為4～5小時后，靜止至室溫，濾過，溶液通過大孔吸附樹脂柱，水洗至中性，再將沉淀用0.1-2％氫氧化鈉水溶液或0.1-2％氫氧化鈉10-30％乙醇溶液100～150ml溶解后，也通過該樹脂柱、水洗至中性，繼用70％乙醇150～200ml洗脫，收集洗脫液，蒸干溶劑，殘渣用甲醇-乙酸(9∶1)定容至25ml，作為供試品溶液；測定分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定；照上述方法測定，楤木總皂苷中齊墩果酸-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的含量應≥17％。
2.如權利要求1所述的中藥楤木總皂苷的質量控制方法，其特征在于包括下列步驟色譜條件與系統適用性試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-1％乙酸(82.5∶17.5)為流動相；檢測波長210nm。理論板數按齊墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷峰計算應不低于2000；對照品溶液的制備取齊墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷對照品適量，精密稱定，加甲醇-乙酸(9∶1)混合溶液制成每1ml含0.5mg的溶液即得；供試品溶液的制備取楤木總皂苷250mg，精密稱定，加20％乙醇溶液，其中含1.8ml硫酸50ml，混合后濃度為0.6mol/L，常壓下加熱溫度為100℃，回流4小時，放冷，濾過，濾液通過D101型大孔吸附樹脂柱(2×15cm)，水洗至中性；濾渣用0.5％氫氧化鈉20％乙醇溶液100ml溶解，濾過，濾液通過上述樹脂柱，水洗至中性，繼用70％乙醇溶液150ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用甲醇-乙酸(9∶1)，混合溶液溶解，轉移至25ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液；測定方法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定；楤木總皂苷中，以本法測定的齊墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷的含量≥17％。
全文摘要
本發明涉及一種中藥楤木總皂苷的質量控制方法，屬于中藥領域。包括色譜條件與系統適用性試驗，對照品溶液的制備，供試品溶液的制備，測定，楤木總皂苷中齊墩果酸－3－0－β－D－葡萄糖醛酸苷的含量應≥17％。本發明創新點在于專屬性強，且高效液相色譜法的精密度和準確度高于重量法、紫外分光光度法和比色法。因此更具有測定意義。
文檔編號A61P3/10GK101040884SQ20071005556
公開日2007年9月26日 申請日期2007年4月25日 優先權日2007年4月25日
發明者孫曉波, 徐惠波, 崔東濱 申請人:孫曉波, 徐惠波