專利名稱：：4-苯胺喹唑啉衍生物的制藥用途的制作方法
技術領域：
：本發明涉及4-苯胺喹唑啉衍生物的制藥用途。具體的說，本發明涉及4-苯胺喹唑啉衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應用。
背景技術：
：癌癥被認為是細胞內信號傳導系統或信號傳導機制的疾病。細胞接受許多來自細胞外的指令，指導細胞是否增殖，信號傳導系統的目的是接受細胞表面的這些或其它信號，將其導入細胞內，然后將這些信號傳遞到細胞核、細胞骨架，以及轉運和蛋白合成結構。癌癥的最常見病因是一系列的缺損，所述缺損可以是某些蛋白質的缺損(當其突變時)，或者是對細胞內蛋白質的量的調節的缺損，從而使蛋白過度產生或產生不足。通常，在細胞內存在重要損傷，該損傷導致組成型狀態，由此使細胞核收到增殖信號，而事實上這些信號并不存在。這可以通過多種機制發生。有時細胞會在不應該的情況下開始生產其自身受體的真正的生長因子，所謂的自分泌環機制。細胞表面存在大量的受體，生長因子與這些受體的相互作用是細胞生長正常調節的必需事件。然而，在某些條件下，由于這些受體或者突變或者過量表達，這些受體可變為異常，其結果是細胞繁殖不受控制，最終導致腫瘤的生長。表皮生長因子受體(EGFR)被確定為在細胞生長和繁殖過程中至關重要的驅動因素，在常見的腫瘤，如非小細胞肺癌中，表皮生長因子受體大量表達，遠遠超出正常范圍。表皮生長因子受體家族由EGFR(Erb-Bl)、Erb-B2(HER-2/neu)、Erb-B3和Erb-B4組成。表皮生長因子受體與大部分癌癥的疾病進程有關，特別是結腸癌和乳腺癌。該受體的過度表達和突變已被明確證實是預后不好的乳腺癌的主要危險因素。此外，已證實該受體家族的所有四個成員均可與該家族的其它成員聚合為異源二聚體，形成信號傳導復合物，如果該家族中有一個以上的成員在惡性腫瘤中過度表達，便可導致協同的信號傳導作用。EGFR屬于蛋白酪氨酸激酶(PTK)家族，蛋白酪氨酸激酶是一類將磷酸基團從ATP催化轉移到位于蛋白質底物的酪氨酸殘基的酶。蛋白酪氨酸激酶在正常細胞生長中起作用。EGFR的過度表達，導致受體在缺乏配體的條件下被激活，使某些蛋白發生磷酸化，產生了細胞分裂的信號。因此，EGFR通過自身酪氨酸激酶的作用，導致了弱信號的過度放大，引起了細胞的過量增值。由于異常的受體激酶在癌發病機理中所起作用的重要性，因此最近的許多研究都涉及作為潛在抗癌治療藥物的特異的PTK抑制劑的研制。歐洲專利申請520722Al公開了某些4-苯胺基間二氮雜萘具有PTK抑制劑活性。歐洲專利申請566226Al公開了在位置5-8含有許多取代基的4-苯胺基間二氮雜萘具有PTK抑制劑活性。從歐洲專利申請635498Al得知，在位置6含有許多取代基、在位置7必須有一個鹵素的某些4-苯胺基間二氮雜萘也具有PTK抑制劑活性。W096/30347(中國專利CN96102992)涉及一些4-(取代苯氨基)喹唑啉衍生物、其前藥和其藥學上可接受的鹽，用于治療過度增生疾病。W097/38983(中國專利CN97194458)提供了作為酪氨酸激酶不可逆抑制劑的化合物。W000/06555(中國專利CN99808949)也涉及某些取代的喹唑啉的衍生物具有PTK抑制劑活性。W099/35146(中國專利CN99803887)公開了作為蛋白酪氨酸激酶抑制劑的二環雜芳族化合物。PCT/CN2006/002786公開了一類新型的4-苯胺喹唑啉衍生物。其中，實施例8制備的化合物為N-H-[3-氯-4-(3-氟-芐氧基)苯基胺基]-喹唑啉-6-基-卜丙烯酰胺，實施例14制備的化合物為N-{4-[3-氯-4-(3-氟-節氧基)苯基胺基]-7-甲氧基-喹唑啉-6-基-}-丙烯酰胺，初步結果證明其具有良好的抑制腫瘤活性。
發明內容本發明人經過廣泛而深入的研究，證明如下式結構I化合物具有良好的抗腫瘤效果，尤其是對于表皮生長因子受體高表達的腫瘤，具有良好的抑瘤效果，在此基礎上完成了本發明，其中，R為H或甲氧基。本發明提供了一種上述通式I所示化合物，也就是N-{4-[3-氯-4-(3-氟-節氧基)苯基胺基]-喹唑啉-6-基-}-丙烯酰胺或N-{4-[3-氯-4-(3-氟-芐氧基)苯基胺基]-7-甲氧基-喹唑啉-6-基-}-丙烯酰胺在制備抗腫瘤藥物中的應用。在本發明中，所述腫瘤類型優選為表皮生長因子受體，即EGFR高度表達的腫瘤類型。EGFR可以理解為它的四種亞型，如EGFR(erb-Bl)、erb-B2(服R-2/neu)、erb-B3或erb-B4。本發明所述腫瘤類型更優選為erb-B2(HER-2/neu)高度表達的腫瘤類型，如erb_B2高度表達的肺癌、卵巢癌、乳腺癌等。如本領域技術人員所公知，可以通過添加藥學上可接受的載體的方法，來制備含有上述所示化合物的藥物，從而可用于治療腫瘤。所示化合物可以與至少一種常規惰性賦形劑(或載體)混合，如檸檬酸鈉或磷酸二鈣，或與下述成分混合(a)填料或增容劑，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合劑，例如，羥甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠；(C)保濕劑，例如，甘油；(d)崩解劑，例如，瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些復合硅酸鹽、和碳酸鈉；(e)緩溶劑，例如石蠟；(f)吸收加速劑，例如，季胺化合物；(g)潤濕劑，例如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯；(h)吸附劑，例如，高嶺土；和(i)潤滑劑，例如，滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉，或其混合物。可以通過常規的混合、制粒、壓片或包囊的方法，將含有所示化合物的藥物制備成為顆粒劑、片劑、膠囊劑。如果需要，例如所選用的填充劑或崩解劑對水分比較敏感時，還可按照制藥實踐中常規的方法，選用對水分具有隔離作用的薄膜衣材料進行包衣，或出于獲得更好的口感的需要，還可按照制藥實踐中常規的方法，可以包糖衣層。本領域內技術人員經過簡單的處方和工藝篩選，即可得到合理的處方配比和制備方法。還可以將所示化合物制備成液體劑型，包括藥學上可接受的乳液、溶液、懸浮液、糖漿或酊劑。除了活性化合物外，液體劑型可包含本領域中常規采用的惰性稀釋劑，如水或其它溶劑，增溶劑和乳化劑，例知，乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1，3—丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特別是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油或這些物質的混合物等。除了這些惰性稀釋劑外，組合物也可包含助劑，如潤濕劑、乳化劑和懸浮劑、甜味劑、嬌味劑和香料。除了活性化合物外，懸浮液可包含懸浮劑，例如，乙氧基化異十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨醇酯、微晶纖維素、甲醇鋁和瓊脂或這些物質的混合物等。上述制備完成的含有所示化合物的藥物可直接給藥于人，給藥途徑可以是口服或舌下給藥，優選為口服給藥。可以單獨給藥，或者與其他藥學上可接受的化合物聯合使用。在本發明的另一方面，還提供了一種應用通式I所示化合物治療腫瘤的方法，包括給予腫瘤病人應用0.l-50呢/kg體重/天的式I化合物。(I)其中，R為H或甲氧基。給藥方式通常為口服，給予人體所示化合物的劑量可以是一個應用藥物的常規劑量范圍，如O.1-50mg/kg體重/天，優選0.5-20mg/kg體重/天，具體地說，劑量范圍可以是20mg1000mg/天，優選地，每天給予藥物的單位劑量是較高的劑量，以獲得良好的抗腫瘤治療作用。圖1化合物對Erb-B2磷酸化的抑制作用圖中標示1306為化合物1;圖中標示1328為化合物2。下面結合具體實施方式，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，或按照制造廠商所建議的條件。具體實施例方式N-{4-[3-氯-4-(3-氟-芐氧基)苯基胺基]-喹唑啉-6-基-}_丙烯酰胺(化合物1)在一個裝有冷凝裝置的燒瓶中，將原料6-硝基-4-氯-喹唑啉1.20g(5.7mmo1)和4_間氟芐氧基-3-氯苯胺1.37g(5.6mmo1)溶于80ml異丙醇，回流反應3h，體系中析出大量黃色固體，過濾，固體用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌至pP^8。樣品真空干燥，經鑒別該化合物為4-[3-氯-4-(3-氟-芐氧基)苯基胺基]-6-硝基喹唑啉，收率67%。在一個裝有回流冷凝裝置的燒瓶中加入4-[3-氯-4-(3-氟-芐氧基)苯基胺基]_6-硝基喹唑啉1.60g(3.77咖o1)，還原鐵粉1.05g(18.85mniol，5eq),冰醋酸2ml，甲醇40ml，85'C油浴下回流反應2.5h后，過濾除去鐵粉，濾液用乙酸乙酯稀釋，碳酸氫鈉溶液洗滌，水洗，有機相干燥濃縮，得到黃色固體，經鑒別該化合物為4-[3-氯-4-(3-氟-芐氧基)苯基胺基]-6-胺基喹唑啉，收率61%。在一個100ml燒瓶中，在冰浴下加入4-[3-氯-4-(3-氟-芐氧基)苯基胺實施例1基]-6-胺基喹唑啉1.2g(3.04咖o1)，三乙胺O.6ml(4.58醒o1，1.5eq)，丙烯酰氯O.28ml(3.33mmo1，1.leq)，THF40ml，逐漸升至室溫反應，3h后，停止反應，過濾，固體水洗至中性，干燥，得到固體1.Og。經鑒別該化合物為N-{4-[3-氯-4-(3-氟-節氧基)苯基胺基]-喹唑啉-6-基-)-丙烯酰胺。MS:449。mp:222-225。C。實施例2N-{4-[3-氯-4-(3-氟-芐氧基)苯基胺基]-7-甲氧基-喹唑啉-6-基-}-丙烯酰胺(化合物2)4-氯-2-胺基苯甲酸10.Og溶于50ml甲酰胺，回流反應5h,析出大量固體，過濾干燥得7-氯喹唑酮11.5g。取10.Og喹唑酮，冰浴下緩慢加入到濃硫酸和發煙硝酸(l:1)混酸40ml中，然后升溫90'C反應3h,體系澄清溶液，小心傾入300ml冰水中，析出淺黃色固體，過濾水洗，再溶于熱的冰醋酸中，析出6-硝基-7-氯喹唑酮晶體，收集得產物6.50g。取4.OOg該產物與15ml三氯氧磷一起回流反應2h，傾入冰水中，過濾干燥得6-硝基-4,7-二氯喹唑啉中間體；將之溶于30ml異丙醇中，加入3.00g3-氯-4-(間氟芐氧基)-苯胺回流反應2h，析出大量固體，過濾真空干燥得6-硝基-7-氯-4-[3-氯-4-(3-氟-芐氧基)苯基胺基-喹唑啉固體產物3.83g。將上述產物與甲醇鈉-甲醇體系反應，生成6-硝基-7-甲氧基-4-[3-氯-4-(3-氟-芐氧基)苯基胺基-喹唑啉；接著以常規方法還原硝基，再與丙烯酰氯反應，純化后得標題產物。1HNMR(300MHz,CDC13):S9.80(1H，s),9.70(1H，s)，8.91(1H，s)，8.50(1H，s)，7.98(1H,d,J=2.44Hz)，7.69(1H，dd，J=2.44Hz，9.16Hz),7.51-7.42(1H,m)，7.39-7.16(5H,m),6.75(1H，q，J=10.06Hz，16.78Hz)'6.31(1H,dd，J=2.14Hz，7.09Hz)，5.80(1H,dd,J=2.14Hz,10.06Hz),5.27(2H，s)'4.02(3H,s)。實施例3:體外腫瘤細胞抑制實驗將化合物l、2分別配制成5個濃度梯度，參照活細胞的改良MTT方法，分別將1X105不同的腫瘤細胞，如A431(人表皮樣鱗癌細胞，erbBl高表達/erbB2低表達)、Calu-3(人肺癌細胞，erbBl低表達/erbB2高表達)、BT-474(人乳腺癌細胞，erbBl低表達/erbB2高表達)、SKBR3(人乳腺癌細胞，erbBl低表達/erbB2高表達)、SK0V3(人卵巢癌細胞，erbBl低表達/erbB2高表達)懸液lOOul接種于96孔培養板內，然后加入不同濃度藥液10ul，使其達到終濃度；置37。C濕性培養箱中，72小時后取出培養板，每孔再加MTT，繼續培養6hr，加入100ulSDS終止液。在自動酶標儀測定各孔光密度(0D)值，計算出抑制率，并計算50%抑制濃度IC5。(單位uM)。結果表明化合物l、2對EGFR高表達的腫瘤細胞株有良好的抑制作用，尤其對于erbB2高表達的腫瘤細胞株，如人乳腺癌細胞BT-474有良好的抑制作用。<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實施例4:荷瘤小鼠體內抑瘤實驗分別取生長良好的A431實體瘤，無菌條件下切割成2-3mm大小的均勻小塊，用套管針在小鼠右腋皮下接種一塊，接種后7日起開始給藥，連續經口灌胃13天，接種后23天脫頸處死動物，解剖取瘤塊，稱瘤重，計算抑瘤率。結果如下<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>complextableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>小鼠分別接種BT-474、SKBR3、SK0V3、Calu-3細胞，連續經口灌胃13天(50mg/kg)，按照相同試驗方法，計算抑瘤率。結果如下<table>complextableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表明化合物l、2對EGFR高表達細胞株接種的荷瘤小鼠生長有良好的抑制作用，尤其對于erbB2高表達細胞株，如人乳腺癌細胞BT-474接種的荷瘤小鼠生長有良好的抑制作用。實施例5:化合物對Erb-B2磷酸化的抑制作用人乳腺癌BT474細胞調整到合適濃度，接種于培養板，經化合物處理1.5小時；然后，收集并裂解細胞，定蛋白到相同的量。蛋白變性后，進行SDS-PAGE,轉移到硝酸纖維素膜，分別與抗磷酸化抗體(一抗)，抗e—tublin抗體(一抗)，抗小鼠IgG抗體(二抗)雜交，最后用ECL試劑盒檢測，X光片曝光。根據相應蛋白條帶的大小及密度，評價化合物對Erb-B2激酶的抑制程度。結果如圖1所示與市售藥物Iressa(EGFR抑制劑)相比，化合物1和2在0.1yM和1uM下具有更優的抑制活性。在本發明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應理解，在閱讀了本發明的上述講授內容之后，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。權利要求1.一種如通式I所示化合物在制備抗腫瘤藥物中的應用，其中，R為H或甲氧基。2.如權利要求l所述的應用，其中R為H。3.如權利要求l所述的應用，其中R為甲氧基。4.如權利要求2或3所述的應用，其中所述腫瘤為表皮生長因子受體高度表達的腫瘤類型。5.如權利要求4所述的應用，其中所述腫瘤為erbB2受體高度表達的腫瘤類型。6.如權利要求5所述的應用，其中所述腫瘤為erbB2高度表達的肺癌、卵巢癌、乳腺癌。7.—種應用通式I所示化合物治療腫瘤的方法，包括給予腫瘤病人應用0.l-50mg/kg體重/天的式I化合物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>(I)其中，R為H或甲氧基。8.如權利要求7所述的方法，其中R為H。9.如權利要求7所述的方法，其中R為甲氧基。10.如權利要求8或9所述的方法，其中所述腫瘤表現為表皮生長因子受體高度表達。11.如權利要求10所述的方法，其中所述腫瘤表現為erbB2高度表達。12.如權利要求11所述的方法，其中所述腫瘤為erbB2高度表達的肺癌、卵巢癌、孚L腺癌。全文摘要本發明提供了通式I化合物，也就是N-{4-[3-氯-4-(3-氟-芐氧基)苯基胺基]-喹唑啉-6-基-}-丙烯酰胺或N-{4-[3-氯-4-(3-氟-芐氧基)苯基胺基]-7-甲氧基-喹唑啉-6-基-}-丙烯酰胺在制備抗腫瘤藥物中的應用，尤其是在制備治療表皮生長因子受體高度表達的腫瘤藥物中的應用。本發明尤其提供了通式I化合物在制備治療erb-B2高度表達的腫瘤類型，如erb-B2高度表達的肺癌、卵巢癌、乳腺癌等藥物中的應用。文檔編號A61P11/00GK101347433SQ20071009396公開日2009年1月21日申請日期2007年7月20日優先權日2007年7月20日發明者勇姜,郭建輝申請人:上海艾力斯醫藥科技有限公司