專利名稱：伊曲康唑納米混懸劑凍干組合物及其制備和使用方法
技術領域：
本發明涉及醫藥技術領域，確切的說是一種伊曲康唑注射用納米混懸劑凍干組合物及其 制備方法和使用方法。
背景技術：
伊曲康唑(Itraconazole )為第二代三唑類合成廣譜抗真菌藥，由4種異構體按等比 例組成，對真菌細胞色素P450具有高選擇性作用，在皮膚、黏膜及指(趾)甲、頭發等真菌易 感染部位具有高聚集性，對于治療由真菌感染引起的疾病具有很好的療效。廣泛用于淺表性 和深部真菌感染，其抗菌譜廣，耐受性好，主要代謝產物羥基伊曲康唑也有較高的抗真菌活 性，該藥在治療曲霉菌、全身性念珠菌以及腦膜炎隱球菌感染上取得了較好療效。隨著廣譜 抗菌藥的大量應用，骨髓或器官移植的開展，糖皮質激素與免疫抑制劑的廣泛使用，各種導 管介入治療的普遍采用及艾滋病的出現，使得系統性真菌感染(systemic fungal infection, SFI)與日俱增。系統性真菌感染的特點是診斷困難，病情進展快，死亡率高，有效藥物少， 并且一般需要長期用藥。市售伊曲康唑口服膠囊劑的生物利用度低，限制了它在難以吞咽(如 患有粘膜炎)的重癥患者及患有侵襲性感染、需盡快達到最低穩態藥物谷濃度，且需維持高 血藥濃度的患者中的應用。目前可注射用抗真菌藥物制劑十分缺乏，迫切需要開發安全、高 效、穩定、可控的可注射的伊曲康唑制劑。
然而，伊曲康唑在水中的溶解度很低(約50ng/ml )，微溶于乙醇，易溶于二氯甲垸， 為弱堿性化合物(沐3=3.7 )，油水分配系數為5.66，只有在低pH條件下，才可在胃液 中被離子化。這些理化性質大大限制了其注射制劑的發展，難以采用傳統增溶手段實現大劑 量靜脈輸注。PCTW085/02767和美國專利4,764,604報道了一種通過將伊曲康唑與羥丙基 倍他環糊精包合來增加伊曲康唑溶解度的方法。中國專利公開號1596897報道了一種伊曲康 唑注射劑及其制備方法，中國專利公開號1739519報道了一種伊曲康唑注射乳劑及其制備方 法；中國專利公開號1969830報道了一種伊曲康唑脂質體及其制備方法；但是，伊曲康唑為 油水兩相皆不易溶解，臨床用量每次200rag以上，且初始給藥每天兩次， 一般需要長期用藥， 給伊曲康唑的注射制劑開發和臨床使用帶來巨大困難。至今為止，僅由伊曲康唑的環糊精包 合物制備的注射液獲得上市許可，通過進口現已在中國上市，價格昂貴，制備工藝復雜，且 由于其大量使用羥丙基倍他環糊精作為增溶劑，不僅加劇了不良反應和毒副作用，同時也增 大了制劑成本，運輸和儲藏不便，臨床使用煩瑣，不安全因素增加；靜脈注射用乳劑和脂質 體的載藥性能和穩定性不佳，容易藥物析出，也存在增大了制劑成本，運輸和儲藏不便的問題。中國專利公開號1041655和1970557將伊曲康唑和硫酸及甲磺酸成鹽試圖通過改變的伊
曲康唑成鹽屬性，增加開發成本和療效不確定性。
發明內容
本發明的主要目的在于提供一種可直接用于靜脈注射的制備方便、穩定性好、效果顯著 的伊曲康唑注射用凍干納米混懸劑。本發明還有一個目的是在于提供一種伊曲康唑注射用凍 干納米混懸劑組合物的制備和使用方法。
本發明基于這樣的認識白蛋白是主要的血清蛋白，可與許多內源及外源性化合物結合。 藥物在人體內代謝動力學數據顯示伊曲康唑在體內主要和蛋白結合，蛋白結合率達99.8%。 而且人血清白蛋白具備良好的親水膠體性質，含有豐富的巰基，具備一定的表面活性，是藥 劑學常用的凍干保護劑和混懸劑的親水穩定劑。選擇人血清白蛋白作為主要的制劑輔料，采 用高壓均質納米乳化技術聯合液中干燥技術，實現伊曲康唑納米顆粒化，并實現冷凍干燥儲 藏，且復溶迅速、稀釋穩定、使用期間穩定，且無毒，無剌激，不溶血，無溶劑殘留，可過 濾滅菌的實用化的伊曲康唑注射用凍干納米混懸劑。從而減少環糊精包合制劑的不良反應和 毒副作用；解決靜脈注射用乳劑、脂質體載藥容量小，易析出的問題；解決環糊精包合制劑、 靜脈注射用乳劑、脂質體等的生產、運輸和儲藏、臨床使用煩瑣和制劑成本高昂的問題。
我們對伊曲康唑納米混懸劑的制備工藝進行了深入地研究，同時采用冷凍干燥技術制得 所述產品，有效解決了伊曲康唑臨床使用存在的問題。
本發明要解決的第一個技術問題是提供伊曲康唑納米混懸劑凍干組合物，其中伊曲康唑 和白蛋白是必須組分，伊曲康唑與白蛋白的比例為1: 200—10: 1。將其配制在藥學上可接 受的水性稀釋劑中，重建后伊曲康唑納米顆粒的粒徑小于0.3urn，制成可供靜脈注射的納米 混懸劑。其凍干組合物包含以下組分和百分比
伊曲康唑0. 05-90%
白蛋白5-99.95%
表面活性劑0-5 %
支架劑0-10 %
滲透壓調節劑0-10%
其他必要的注射添加劑諸如抗氧劑、抑菌劑等0-5%
其中所述的白蛋白為無病毒、無菌、無熱原、無致免原性的合乎人體靜脈輸注質量標準 的動物和人的血清白蛋白，本發明優選人血清白蛋白(HBA)，在臨床常用于危重疾病的治療。 由于白蛋白具有表面活性劑作用和凍干支架劑作用，組合物中所含白蛋白的用量，在能夠實 現優良凍干成型和迅速復溶重建混懸劑，并實現膠體穩定時間超過6小時的前提下，支架劑、
表面活性劑、滲透壓調節劑都不是必須的。例如滲透壓調節可以由復溶稀釋的注射用糖水或 生理鹽水來提供。表面活性劑選自卵磷脂(包括大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂等)，吐溫80，泊 洛沙姆188，去氧膽酸納、聚氧乙烯蓖麻油中的一種或其任意混合物；所述的支架劑為多糖 或者多元醇，選自蔗糖、乳糖、葡糖糖、海藻糖、麥芽糖、甘露醇、山梨醇中的一種或其任
意混合物。本發明的伊曲康唑納米混懸劑凍干組合物還可以包括滲透壓調節劑，選自葡萄糖、 氯化納、甘油、山梨醇、木糖醇中的一種或其任意混合物。
本發明要解決的第二個技術問題是提供伊曲康唑納米混懸劑凍干組合物的制備方法，第 一步是利用高壓均質機或高剪切攪拌機或者探針超聲儀的高剪切和空化作用，表面活性劑和 助表面活性劑的穩定作用下，將伊曲康唑溶于有機溶劑獲得的油相和白蛋白溶于注射用水所 得的水相，制備得到粒徑小于500nm的納米乳劑。上述有機溶劑選自氯仿、二氯甲烷、四氯 化碳、乙酸乙酯等或其任意混合物，選擇的原則必須是伊曲康唑的良溶劑，并且在水中較少 與水互溶，能夠通過干燥技術從最終產品中完全除去。本發明優選氯仿或二氯甲烷或其任意 混合物，更優選臨床毒性小，溶劑殘留少的二氯甲烷，其用量為0.5-20% (V/V)優選l-10% (V/V)，制備納米乳劑時伊曲康唑在二氯甲烷中的濃度影響溶劑蒸發后藥物顆粒的析出粒徑， 本發明優選伊曲康唑在二氯甲垸中的濃度大于25mg/ml，能夠制備得到小于200rai的顆粒。 上述助表面活性劑為小分子醇類，能減小納米乳滴的粒徑，乙醇為優選，可以在隨后的蒸發 千燥程序中除去，用量優選為乙醇(V/V) 0.2-5%。制備納米乳劑的乳化設備本發明優選高壓 均質機，優選先采用高剪切攪拌機混合油相和水相制備初乳，然后采用高壓均質機，在低于 7(TC的制備溫度下，50-1500bar的壓力下， 一次或多次循環，進行納米乳化。本發明優選 200-900bar，保持低于50°C， 3-9次循環。為保證白蛋白在強烈的均質環境下不發生變性沉 淀，還需調整水相酸堿度接近5-7之間，優選5.S，調節酸堿度可添加醋酸、檸檬酸、磷酸 和氫氧化鈉等注射劑常用添加劑。表面活性劑在本發明中起到加強乳化能力，減小乳劑粒徑 或穩定乳劑作用，選自卵磷脂(包括大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂等)，吐溫80 ，泊洛沙姆188 ， 去氧膽酸納、聚氧乙烯蓖麻油中的一種或其任意混合物。其他鹽類和雜質保持控制，防止蛋 白鹽析。以上多項措施能使得凍干后復溶混懸液的穩定性提高到12小時以上。制備過程混合 物中各組分用量或比例
伊曲康唑(W/V) 0.01-10%
白蛋白(W/V)0.1-40%
無菌二氯甲烷或氯仿(V/V) 1-15%
乙醇(V/V) 0.2-15%
其他乳化劑0-20%
注射用水100 (pH 5.6)
第二步通過旋轉蒸發、真空千燥、噴霧干燥或直接深度冷凍干燥制成穩定的粉末，所得 的凍干制品經適量藥用水或者等滲液稀釋后可迅速重建成膠態分散體。本發明優選先在真空 旋轉薄膜蒸發器上，控制溫度低于60'C，旋轉蒸發除盡有機溶劑和乙醇，本發明優選低于45 'C，真空1_4小時除去溶劑。然后添加凍干保護或滲透壓調節劑等(不是必須的)，本發明優 選不添加任何添加劑，以白蛋白實現凍干保護和重組輔組劑的雙重作用。接著采用過濾滅菌 (0.22um膜濾過或無菌操作)，然后通過超濾濃縮藥液，達到裝樣范圍，在無菌條件下凍干 10-48小時，封裝制得成品。本發明根據臨床制劑的需求和具體生產設備，調整凍干的周期。 通常可將均勻的制劑置于10至50ml的西林瓶中，預凍溫度為-40至-60'C ，預凍時間為3 小時至24小時。凍干溫度為-10至-20'C ，凍干時間為10小時至48小時。凍干組合物的 最終含水量一般低于3%，有機溶劑殘留合格。另外，本發明組合物中不含乙醇等有機溶劑 和環糊精等添加劑、吐溫等增溶劑，因此避免了毒性和刺激性反應。
本發明要解決的第三個技術問題是提供伊曲康唑納米混懸劑凍干組合物在制備注射劑中 的應用，所述的注射劑包括注射液和無菌粉針。本發明伊曲康唑納米混懸劑凍干組合物適合 臨床上應用。在使用前，可加入適量的無菌藥用水稀釋(例如注射用水、生理鹽水、葡萄糖 水等)，重建成供靜脈滴注用的膠態分散體，本發明優選5%葡萄糖水作為重組稀釋劑。參照 市售制劑伊曲康唑環糊精包合注射劑的劑量和給藥體積設計臨床使用方案，優選 200mg/20-100ml，靜脈滴注或推注，或按臨床疾病發展確定劑量，體積和次數。
本發明伊曲康唑注射用納米混懸劑凍干組合物較之現有技術所具有的優點1 )由于本 發明組合物不含環糊精和乙醇等有機溶劑，因此制成供靜脈注射的注射劑時，避免了剌激反 應，降低了毒副作用；納米混懸劑粒徑微小，不會堵塞毛細血管，載藥量大，從而提高了安 全性和療效；2)本發明組合物含有白蛋白作為穩定劑，制成的凍干產品具有良好的儲藏穩 定性和重組分散穩定性，從而可以方便使用，有利于藥物的運輸和儲存。3)本發明制備工藝 簡單，成份單純，所選用標準化制藥設備，易于生產控制，有廣闊的產業化前景。
圖l、實施例l制備得到的樣品，5%葡萄糖注射液復溶重建后的透射電鏡照片。
具體實施例方式
為闡明本發明的特征，現在描述它的一些非限定性的實施例。但應將處方和條件的變化 理解為說明書的精神和權利要求的范圍。以下通過實施例形式的具體實施方式
再對本發明的 上述內容作進一步的詳細說明，但不應就此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實例。 在不脫離本發明上述技術思想情況下，根據本領域普通技術知識和慣用手段做出的相應替換
或變更的修改，均包括在本發明的范圍內。
實施例1
二氯甲垸為溶劑的制備過程
以注射用水將符合注射質量要求的人血清白蛋白(HAS)配置成3W(W/V)無菌水溶液，以 檸檬酸將pH調節到5.6，檸檬酸與白蛋白中的一些堿性基團成鹽，穩定白蛋白，攪拌并添加 1.3%的二氯甲垸制備其飽和水溶液。將200ml預先除菌的所述白蛋白溶液,在強力攪拌下與 4.0ml無菌二氯甲垸藥物溶液，預先溶有0.6g (白蛋白重量的10 % )粉末狀無菌伊曲康 唑(效價> 99 % )，采用高剪切攪拌機攪拌混合物制備初乳，滴加無菌乙醇6.0ml，高速攪 拌均勻。將混合物初乳在高壓均質機內(適當地滅菌)控制制備溫度于5(TC，經50bar壓力 下循環1次，經200bar循環1次，經500bar循環3次，處理直至得到納米乳劑(平均粒徑〈 0.2微米)，呈現藍白色乳光。在無菌條件下將其導入旋轉薄膜蒸發器的圓底燒瓶中，維持水 浴溫度40'C，啟動真空泵，真空旋轉蒸發2小時。采用0.22濾膜過濾、除菌，除去不溶物 和大顆粒，在無菌操作條件下，超濾濃縮，測定含量，達到分裝要求后，灌入至25ml西林瓶。 快速冷凍到-40'C，凍結8小時，接著真空凍干24小時。將得到含有8. 12% (W/W )伊曲康 唑和2% (W/W)水的凍干疏松粉末，與0. 5 %葡萄糖水溶液復溶重建形成伊曲康唑濃度為2 mg/ml 的溶液。得到平均粒徑0. 185微米的納米顆粒混懸液，pH=5.6 , 4'C放置無任何沉淀和顏色 變化，穩定性> 12小時，達到臨床注射劑質量要求。
注說明書附圖，圖1、為實施例1制備得到的樣品，5%葡萄糖注射液復溶重建后的透 射電鏡照片。
實施例2
氯仿為溶劑的制備過程
以注射用水將符合注射質量要求的人血清白蛋白(HAS)配置成1.5M(W/V)無菌水溶液， 將pH調節到7. 0。將200ml的所述白蛋白溶液,在強力攪拌下與6. Oml無菌氯仿藥物溶液， 預先溶有0.3g (白蛋白重量的10% )粉末狀無菌伊曲康唑。采用高剪切攪拌機攪拌混合物 制備初乳，添加無菌乙醇2.0ml，攪拌均勻。將混合物初乳在高壓均質機內(適當地滅菌) 控制制備溫度于50。C，經200bar循環2次，經500bar循環3次，恥0 bar循環1次，處理 直至得到納米乳劑。在無菌條件下將其導入旋轉薄膜蒸發器的圓底燒瓶中，維持水浴溫度40 。C，啟動真空泵，真空旋轉蒸發l小時。采用0.22濾膜無菌過濾，快速冷凍到-4(TC/24小 時，并真空凍干24小時。將得到含有5.74% (W/W )伊曲康唑和2% (W/W)水的凍干疏松粉 末，與0. 5 %葡萄糖水溶液重制形成伊曲康唑濃度為5rog/ml的溶液。得到平均粒徑約0. 2微
米的納米顆粒混懸液，pH二7， 4'C放置穩定性大于12小時。與實施例1比較，乙醇的用量影 響納米乳劑的粒徑，從而析出較大的顆粒，過濾損失較大，再則酸堿性不利于白蛋白穩定， 導致混懸劑不能長時間穩定。藥物在氯仿中的濃度較低也不利于迅速大量析出更為細小的納 米顆粒。
實施例3
增加氯仿用量的制備過程
以注射用水將符合注射質量要求的人血清白蛋白(HAS)配置成3W(W/V)無菌水溶液，以 醋酸和氫氧化鈉將pH調節到6.0 ,用1%的氯仿將水溶液飽和。將200ml所述白蛋白溶液,在 強力攪拌下與8. Oml無菌氯仿藥物溶液混合，氯仿溶液預先溶有0.6g (白蛋白重量的10%) 粉末狀無菌伊曲康唑(效價> 99 % )，采用高剪切攪拌機攪拌混合物制備初乳，添加無菌乙 醇2.0ml，攪拌均勻。將混合物初乳在高壓均質機內(適當地滅菌)控制制備溫度于50'C， 經200bar循環2次，經500bar循環3次，處理直至得到納米乳劑。在無菌條件下將其導入 旋轉薄膜蒸發器的圓底燒瓶中，維持水浴溫度40'C，啟動真空泵，真空旋轉蒸發l小時。采 用0.22濾膜無菌過濾，快速冷凍到-40'C/24小時，并真空冷凍干燥24小時。將得到含有 4.26% (W/W )伊曲康唑和3% (W/W)水的凍干疏松粉末，與0.5 %葡萄糖水溶液重制形成伊 曲康唑濃度為2 rag/ml的溶液。得到的制劑具有0.200微米的納米顆粒混懸液，pH=6 ， 4 °0放置穩定性>12小時，過濾導致伊曲康唑相當大的損失，原因是乳劑油相中藥物含量較低， 氯仿乳劑顆粒大，不穩定，從而析出顆粒較大。
實施例4
含有其他添加劑的制備過程
以注射用水將符合注射質量要求的人血清白蛋白(HAS)配置成5呢(W/V)無菌水溶液，滴 加0. 5ml吐溫80，以檸檬酸將pH調節到5. 6 。將200ml所述白蛋白溶液,在強力攪拌下與6. Oml 無菌二氯甲烷混合，再加入1.0g (白蛋白重量的20% )粉末狀無菌伊曲康唑原料藥物，采 用高剪切攪拌機攪拌混合物攪拌30分鐘，溶解藥物制備初乳，添加無菌乙醇6.0ml，撹拌均 勻。將混合物初乳在高壓均質機內(適當地滅菌)控制制備溫度于5(TC,經50bar壓力下循 環1次，經500bar循環1次，經800bar循環5次，處理直至得到納米乳劑，平均粒徑小于 200納米，在無菌條件下將其導入旋轉薄膜蒸發器的圓底燒瓶中，維持水浴溫度4(TC,啟動 真空泵，真空旋轉蒸發2小時，采用0.22濾膜無菌過濾，添加甘露醇1.5% (W/W)快速冷 凍到-4(TC/8小時，并凍干24小時。將得到含有5.56% (W/W )伊曲康唑和3% (W/W)水的 凍干疏松粉末，與0.5 %葡萄糖水溶液重制形成伊曲康唑濃度為2 mg/ml的溶液。得到平均粒徑約0. 2微米的納米顆粒混懸液，pH=5.6 ， 4'C放置穩定性M2小時，達到臨床注射劑質 量要求。提示白蛋白用量對制備小粒徑乳劑和凍干復溶有重要意義，可使用甘露醇等支架劑， 但不是必須的，吐溫等表面活性劑可以作為乳化劑使用，如果白蛋白用量合適，這些表面活 性劑表面活性劑、支架劑都可以節省或不用，為保證輸液的安全性，應盡量減少不必要的輔 料。
權利要求
1.伊曲康唑納米混懸劑凍干組合物，其特征在于伊曲康唑與白蛋白的比例為1∶200-10∶1，其他組分包含以下組分和質量百分比伊曲康唑0.05-90％白蛋白5-99.95％表面活性劑0-5％支架劑0-10％其他注射劑添加劑0-10％。
2、 根據權利要求1所述的伊曲康唑納米混懸劑凍干組合物，其特征在于采用5%葡 萄糖輸液或臨床可接受的輸液復溶重建，復溶重建后的膠體化納米混懸體系中伊曲康唑納米 顆粒的平均粒徑小于1微米，膠體體系穩定超過6小時。
3、 根據權利要求1所述的伊曲康唑納米混懸劑凍干組合物，所述的白蛋白為合乎人體 靜脈輸注質量標準的動物和人的血清白蛋白，所述的表面活性劑選自卵磷脂、吐溫80、泊洛 沙姆188 、脫氧膽酸納、聚氧乙烯蓖麻油中的一種或其任意混合物。
4、 根據權利要求1所述的伊曲康唑納米混懸劑凍干組合物，所述的支架劑為多糖或者 多元醇，選自蔗糖、乳糖、葡糖糖、海藻糖、麥芽糖、甘露醇、山梨醇中的一種或其任意混 合物。
5、 根據權利要求1所述的伊曲康唑納米混懸劑凍干組合物，所述的其他注射劑添加劑 為藥學上可接受的抗氧劑、抑菌劑、離子絡合劑、滲透壓調節劑等中的一種或其任意混合物。
6、 權利要求1所述的伊曲康哇納米混懸劑凍干組合物的制備方法，包括如下步驟 第一步是將伊曲康唑溶于有機溶劑獲得的油相和將白蛋白溶于注射用水所得的水相相混合，控制混合體系溫度低于6CTC，采用藥劑學使用的生物相容性酸將pH調節到4-8，先采用 高剪切攪拌機混合油相和水相制備初乳，添加乙醇作為助乳化劑，然后釆用高壓均質機，制 備溫度低于60°C，均質壓力在50-1500bar， 一次或多次循環，進行納米乳化，制備得到粒 徑小于500nm的納米乳劑，第二步通過在真空旋轉薄膜蒸發器上，控制溫度低于6(TC，真空0.1-4小時旋轉蒸發除 盡有機溶劑和乙醇，第三步可采用0.22um膜濾過滅菌或在全制備過程中實行無菌操作，通過濾過除去注射 劑限制的大顆粒和不溶物，然后在無菌操作條件下，濃縮藥液，達到裝樣范圍，分裝后真空 凍干，得到伊曲康唑納米混懸劑凍干組合物的疏松粉末，封裝。
7、 根據權利要求6所述的方法，其特征在于所述的藥劑學使用的生物相容性酸是鹽酸、 檸檬酸、磷酸或醋酸等。
8. 根據權利要求6所述的方法，所述的有機溶劑是無菌氯仿或二氯甲垸或其任意混合物， 占乳劑混合物的1-15%V/V，伊曲康唑占0.01-10。/。W/V，白蛋白占0.140%W/V，乙醇用量 占0.1-15% V/V。
9. 權利要求1所述的伊曲康唑納米混懸劑凍干組合物在制備伊曲康唑注射劑中的應用。
10. 根據權利要求9所述的應用，伊曲康唑注射劑為凍干組合物疏松粉末制備的無菌粉 針，在加入選自氯化鈉注射液或者葡萄糖注射液或臨床可接受的等滲液或高滲輸液，制成可 直接靜脈使用的制劑。
全文摘要
本發明公開了一種伊曲康唑注射用納米混懸劑凍干組合物及其制備和使用方法。選擇人血清白蛋白作為主要的制劑輔料，采用高壓均質納米乳化技術聯合液中干燥技術和冷凍干燥技術，成功實現伊曲康唑納米顆粒化，可過濾滅菌，并實現凍干粉儲藏。將其配制在藥學上可接受的水性稀釋劑中，重建后伊曲康唑納米混懸劑的平均粒徑小于0.3um，可制成可供靜脈注射的納米混懸劑。它由以下成分組成其中伊曲康唑與白蛋白的比例為1∶200-10∶1。還包括表面活性劑，支架劑，滲透壓調節劑，其他注射劑添加劑等。本發明的納米混懸劑載藥量大，安全、低毒。制劑穩定性高；通針性好；沒有溶血作用和靜脈血管刺激性；制備方法簡便易行，容易實現產品化。
文檔編號A61K31/496GK101199530SQ20071013528
公開日2008年6月18日 申請日期2007年11月15日 優先權日2007年11月15日
發明者周建平, 輝 張, 張志祥 申請人:中國藥科大學