一種抗癌美洲大蠊的凍干方法
【專利摘要】本發明涉及一種抗癌美洲大蠊的凍干方法，方法是捕捉后用乙醇浸泡殺死或沸水燙死，凍干，制備的美洲大蠊抗癌作用強，臨床效果好。
【專利說明】發明領域
[0001] 本發明涉及藥品制法，特別涉及一種抗癌美洲大蠊的凍干方法，屬醫藥【技術領域】。
【背景技術】
[0002] 美洲大鐮（Periplanetaamerican)屬昆蟲綱，蜚鐮科，俗稱幢螂。美洲大鐮作為 藥用最初見于《神農本草經》，用于治血痰癥、寒熱、破積聚、喉咽痹、內寒無子。目前以美洲 大鐮為藥用原料，有康復新、心脈龍、肝龍等中成藥在市場銷售。
[0003] 中藥干燥在我國有很長的歷史，經干燥的中草藥可保持一定的藥用成分以及不易 腐敗變質，干燥作為保證中草藥品質的重要措施，是中草藥加工中一個必不可少的工藝過 程，干燥與中藥生產的關系密切，干燥的方法將直接影響產品的療效。現有文獻美洲大鐮的 干燥方法，捕捉后用乙醇浸泡殺死或沸水燙死，曬干或60°C烘干。
[0004] 真空冷凍干燥又稱凍干，可最大限度地保存藥用有效成分的活性，較好地保持藥 材的外觀品質、顏色、氣味，脫水徹底，保存性好。真空冷凍干燥的目的是最大限度地保存鮮 藥的有效成分，使其與鮮藥活性相當。本發明人曾對不同方法凍干美洲大鐮對乙醇致大鼠 胃黏膜損傷的保護作用進行過研宄，結果乙醇殺死凍干美洲大蠊作用明顯強于沸水燙死凍 干美洲大蠊。
[0005] 本領域專業技術人員公知，沸水和乙醇都可使蛋白質變性，用沸水和乙醇殺死美 洲大蠊，是否影響其藥理活性，本發明人曾對不同方法凍干美洲大鐮對乙醇致大鼠胃黏膜 損傷的保護作用進行過研宄，結果乙醇殺死凍干美洲大蠊作用明顯強于沸水燙死凍干美洲 大蠊(另案申請專利)。用沸水和乙醇殺死美洲大蠊，不影響其抗癌活性，且凍干后活性更高 未見文獻報道。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的是提供一種抗癌美洲大蠊的凍干方法，該方法凍干的美洲大蠊，抗 癌作用強，臨床效果好。
[0007] 本發明是這樣實現的： 一種抗癌美洲大蠊的凍干方法，其特征在于：捕捉后用乙醇浸泡殺死或沸水燙死，凍 干。
[0008] 本發明的一種抗癌美洲大蠊的凍干方法，其特征在于：捕捉后用乙醇浸泡殺死或 沸水燙死，置凍干機內，冷凍至-l〇°C以下，抽真空至干燥室壓力30Pa以下，加熱升華；升 華的溫度應控制在40°C以下，解析階段的溫度控制在45°C以下，至干。
[0009] 本發明制備的美洲大蠊，抗癌作用強，臨床效果好。
[0010] 下面通過藥效學研宄進一步說明本發明的有益之處，試驗例旨在進一步說明本發 明的有益之處，而非對本發明的限制。
[0011] 一、將捕捉的同一批美洲大蠊，按以下方法進行加工。
[0012] 1)乙醇殺死烘干：用乙醇浸泡殺死，60°C烘干以下烘干； 2) 乙醇殺死凍干：用乙醇浸泡殺死，置凍干機內，冷凍至-20°C以下，抽真空至干燥室 壓力45Pa以下，加熱升華，升華的溫度應控制在40°C以下，解析階段的溫度控制在45°C以 下，至干，取出，密封包裝； 3) 沸水燙死凍干：沸水燙死，置凍干機內，冷凍至_20°C以下，抽真空至干燥室壓力 45Pa以下，加熱升華，升華的溫度應控制在40°C以下，解析階段的溫度控制在45°C以下，至 干，取出，密封包裝； 4) 沸水燙死：沸水燙死，不干燥。
[0013] 二、不同方法干燥的美洲大蠊抗人肺源腺癌細胞SPCA-I、人肝癌細胞系H印G2和 人慢性髓系白血病細胞K562試驗。
[0014] 1、制備美洲大蠊提取物分別取不同上述方法制備的美洲大蠊粉碎，各加水煎煮 兩次，第一次加水8倍量(沸水燙死美洲大蠊以干品計，下同)，煎煮2小時，第二次加水8倍 量，煎煮1小時，合并藥液，藥液濾過，取濾液，濃縮至相對密度為1. 10 (60°C)時，加入乙醇 使含醇量達到75%，沉淀，靜置36小時，吸取上清液，回收乙醇，濃縮，干燥，粉碎，得不同方 法干燥的美洲大蠊提取物。
[0015] 2、腫瘤細胞株人肺源腺癌細胞SPCA-1、人肝癌細胞系HepG2和人慢性髓系白血 病細胞K562,用RPMI-1649培養液，37°C，5%C02,相對濕度100%培養，貼壁細胞0. 25%胰 蛋白酶消化傳代。
[0016] 3、方法MTT比色法測定提取物對腫瘤細胞生長的抑制作用。取對數生長期細胞， 用新鮮的RPMI-1640培養液配制成細胞懸液，懸浮細胞IX105個/ml貼壁細胞0. 8X105個 /ml。懸浮細胞分別加入不同濃度實驗藥物后接種于96孔培養板中；貼壁細胞先接種于96 孔培養板中，每孔90y124h后分別加入不同濃度實驗藥物。終體積為每孔100y1且每組 設3個平行孔，分組：受試藥組（培養液+細胞懸液+不同濃度受試藥）、陰性對照組（培 養液+細胞懸液）、藥物顏色對照組（培養液+不同濃度受試藥）、空白對照組（培養液+ 生理鹽水）。受試藥濃度依次為10yg/ml、30yg/ml、50yg/ml。置37°C，5%C02培養箱中 培養72h后，向每孔加入MTT溶液10y1震蕩混勻后，繼續培養4h，加入SDS90y1終止培 養，37°C過夜，然后室溫下在微量振蕩器上震蕩lOmin，酶標儀測定570nm波長處的吸光度 (OD值），實驗重復3次。
[0017] 按以下公式計算生長抑制率： 生長抑制率（%) = (N組OD均值-B組OD均值）一（T組OD均值-TC組OD均值）/N組OD均值-B組OD均值X100%。
[0018] 4、抑制率結果見表1、表2、表3。
【權利要求】
1. 一種抗癌美洲大蠊的凍干方法，其特征在于：捕捉后用乙醇浸泡殺死或沸水燙死， 凍干。
2. 根據權利要求1的一種抗癌美洲大蠊的凍干方法，其特征在于：捕捉后用乙醇浸泡 殺死或沸水燙死，置凍干機內，冷凍至-l〇°C以下，抽真空至干燥室壓力30Pa以下，加熱升 華；升華的溫度應控制在40°C以下，解析階段的溫度控制在45°C以下，至干。
【文檔編號】A61K35/64GK104473884SQ201410694803
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年11月27日 優先權日:2014年11月27日
【發明者】周冉, 李詩標, 石紅艷, 劉金磊, 劉圣梅 申請人:濟南康眾醫藥科技開發有限公司