專利名稱：：木犀草素-7-O-β-D葡萄糖醛酸苷在制備治療癡呆疾病藥物中的用途的制作方法
技術領域：
：本發明涉及木犀草素-7-o-e-D葡萄糖醛酸苷新的醫藥用途，公開了木犀草素-7-0-D葡萄糖醛酸苷在制備治療癡呆疾病藥物中的用途，屬于中醫藥有效成分提取
技術領域：
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背景技術：
：本發明涉及的木犀草素-7-o-e-D葡萄糖醛酸苷是菊科植物抱莖苦賣菜(熟稱苦碟子)中提取的黃酮類化合物，結構式如下OHOHO分子式C21H18012分子量462經檢索未見該物質用于治療癡呆疾病藥物中的應用。
發明內容本發明提供一種木犀草素-7-O-e-D葡萄糖醛酸苷在制備治療癡呆疾病藥物中的用途。本發明以木犀草素-7-0-D葡萄糖醛酸苷作為主要活性成分制備治療癡呆疾病藥物，可加入一種或多種天然或合成的與其具有協同或輔助作用的活性成分制成。本發明木犀草素-7-0-e-D葡萄糖醛酸苷制備的抗癡呆疾病藥物包括藥物學上的任何劑型。本發明以木犀草素-7-o-e-D葡萄糖醛酸苷作為主要活性成分制備抗癡呆藥物，具有明顯的療效，以下實驗表明對癡呆疾病的治療效果試驗目的選用相近似的動物模型或試驗方法，對木犀草素-7-0-e-D葡萄糖醛酸苷的抗癡呆作用進行研究，為其有效性做出科學的評價。1對海人藻酸損傷邁內特基底核致老年性癡呆的治療作用1-1藥物木犀草素-7-O-e-D葡萄糖醛酸苷由吉林省中醫藥科學院提供，批號20071025，純度與性狀均為98%，黃色；海人藻酸為Sigma產品，批號20070914。1-2動物雄性Wistar大鼠120只，體重230250g，由吉林大學基礎醫學院實驗動物中心提供，合格證號SYXK-(吉)2003-0001。1-3試驗方法按文獻^^方法制作大鼠老年性癡呆模型。氯胺酮100mg/kg麻醉大鼠，將麻醉大鼠固定于立體定位儀上，調節固定平面使門齒比內耳連線中點低2mm，清潔頭頂皮膚做正中豎切口，剝開皮下筋膜暴露頂骨，在兩側冠狀縫后鉆出小孔，取出碎骨屑，保持硬腦膜的完整。邁內特基底核定位坐標前囟后1.4mm，中線外側2.4mm，硬腦膜下7.4mm。每側用微量注射器分別注入l嗎海人藻酸(正常組給生理鹽水)，進針速度0.2pl/min，每側總體積l)al，注射后留針5min，以免拔針時藥物溢出。術后牙托粉封固顱骨孔，縫合皮膚，三日內每日肌注青霉素GIO萬單位抗感染。在術后第3天分組，開始給藥。第①組為正常組，第②組為模型組，均灌胃給蒸餾水0.5ml/100g，第③組灌胃木犀草素-7-0-e-D葡萄糖醛酸苷。連續給藥15天后進行水迷宮試驗及跳臺試驗，試驗期間繼續給藥。水迷宮試驗連續7天，前6天，在l、2、3、4象限四個不同的入水點，測定大鼠到達平臺的時間及游程，第7天撤掉平臺，測定大鼠在2min內的穿越平臺的次數，在平臺區的逗留時間、在平臺象限內的逗留時間。水迷宮試驗結束后，進行跳臺試驗，記錄每只鼠5min內受到電擊的次數或叫錯誤次數，以此作為學習成績。24小時后重新做測驗，此即為記憶保持測驗，記錄第l次跳下平臺的潛伏期和5min內的錯誤總數。跳臺試驗結束后快速取腦，甲醛固定，進行病理檢查。1-4試驗結果與正常組比較，模型組大鼠第2天至第6天到達平臺的潛伏期及游程明顯延長(PO.05或PO.01)，第7天大鼠在2min內穿越平臺的次數，在平臺區的逗留時間明顯降低(PO.05或PO.01)，第1天跳臺的錯誤次數及第2天錯誤次數明顯增加(PO.01);與模型組比較，木犀草素-7-0-0-D葡萄糖醛酸苷組大鼠第3天、第4天、第5天及第6天達到平臺的潛伏期及游程均明顯縮短(PO.05或PO.01)，第7天大鼠在2min內的穿越平臺的次數、臺上逗留時間明顯增加(PO.05)，大鼠第1天及第2天跳臺錯誤次數明顯降低(PO.05或PO.01)，見表l、2、3、4。表1.木犀草素-7-O-p-D葡萄糖醛酸苷對海人藻酸致老年性癡呆大鼠到達平臺潛伏期(s)的影響(i^l0,x士s)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>表2.木犀草素-7-0-(3-D葡萄糖醛酸苷對海人藻酸致老年性癡呆大鼠到達平臺游程(cm)的影響(n=10,x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>與模型組比較*P<0.05，**P<0.01表4.木犀草素-7-O-p-D葡萄糖醛酸苷對海人藻酸致大鼠老年性癡呆的防治作用(跳臺法，n=10,x±s)表3<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>與模型組比較:*P<0.05，病理顯示正常對照組可見腦膜血管輕度擴張充血，大腦皮質神經細胞胞體大，核大，染色淡、均勻，核膜、核仁清楚。海馬神經細胞數量多，層次清楚，排列整齊，神經細胞胞體大，核大，染色均勻。基底核神經細胞數量多，排列比較均勻；模型組可見腦膜血管擴張，部分區域有出血，腦內血管周圍有淋巴細胞套。大腦皮質有灶狀神經細胞變性、壞死，有較多的膠質細胞增生。變性神經細胞胞體變大，尼氏小體邊集，壞死神經細胞核固縮，核仁不清，或核消失，胞漿染色深，細胞呈梭形。海馬神經細胞數量無明顯變化，層次清楚，排列整齊，神經細胞胞體大，核大，染色均勻。基底核神經核團細胞數量明顯減少，可見較多的變性、壞死細胞，噬神經細胞現象較多；木犀草素-7-0-D葡萄糖酸酸苷可見腦膜血管擴張充血，大腦皮質的壞死灶中神經細胞基本消失，壞死區呈篩網狀或有較多的膠質小結形成。海馬神經細胞層次清楚，排列整齊，無明顯變化。基底核神經核團細胞數未見明顯減少，變性、壞死細胞數較少，噬神經細胞現象較少。病理結果表明木犀草素-7-0-D葡萄糖醛酸苷對海人藻酸所致大鼠癡呆引起的腦組織病理改變均有一定改善作用。2對P-淀粉樣蛋白致老年性癡呆的治療作用2-1藥物木犀草素-7-0-P-D葡萄糖醛酸苷由吉林省中醫藥科學院提供，批號20071025，純度與性狀均為98%，黃色;A卩25-35為Sigma產品，批號20071209。2-2動物雄性Wistar大鼠120只，體重280310g，由吉林大學基礎醫學院實驗動物中心提供，合格證號SYXK-(吉)2003-0001。2-3試驗方法按參考文獻fHJ制作大鼠老年性癡呆模型。氯胺酮100mg/kg麻醉大鼠，將麻醉大鼠固定于立體定位儀上，調節固定平面使門齒比內耳連線中點低2mm，清潔頭頂皮膚做正中豎切口，剝開皮下筋膜暴露頂骨，在兩側冠狀縫后鉆出小孔，取出碎骨屑，保持硬腦膜的完整。海馬區定位坐標前囟后3.5mm，中線外側2.0mm，硬腦膜下2.7mm。每側用微量注射器分別注入5pl(10pg)聚集肽的A卩25-35，5min內注完，注射后留針5min，以免拔針時藥物溢出。正常組手術方法相同，注射同體積的鹽水。術后牙托粉封固顱骨孔，縫合皮膚，三日內每日肌注青霉素G10萬單位抗感染，在術后第3天分組，開始給藥。第①組為正常組，第②組為模型組，均灌胃給蒸餾水0.5ml/100g，第③組灌胃木犀草素-7-0-e-D葡萄糖酸酸苷。連續給藥15天后進行水迷宮試驗及跳臺試驗，試驗期間繼續給藥。水迷宮連續試驗7天，前6天，在l、2、3、4象限四個不同的入水點，測定大鼠到達平臺的時間及游程，第7天撤掉平臺，測定大鼠在2min內穿越平臺的次數，在平臺區的逗留時間。水迷宮試驗結束后，進行跳臺試驗，并記錄每只鼠5min內受到電擊的次數或叫錯誤次數，以此作為學習成績。24小時后重新做測驗，此即為記憶保持測驗，記錄第1次跳下平臺的潛伏期和5min內的錯誤總數。跳臺試驗結束后快速取腦進行病理檢査，觀察海馬、皮層的病理變化。2-4試驗結果與正常對照組比，模型組大鼠第2天至第6天到達平臺的潛伏期明顯延長(PO.05或P〈0.01)，第3天至第6天到達平臺的游程明顯延長(P<0.05)，第7天大鼠在2min內的穿越平臺的次數，在平臺區的逗留時間明顯降低(PO.05或PO.01),第1天、第2天跳臺的錯誤次數明顯增加(PO.05或PO.01),第2天的錯誤潛伏期明顯縮短(PO.05);與模型組比較，木犀草素-7-0-e-D葡萄糖醛酸苷組水迷宮第3天至第6天達到平臺的潛伏期明顯縮短(PO.05或P〈0.01)，第4天至第6天到達平臺的游程明顯縮短(PO.05),第7天大鼠在2min內穿越平臺的次數、臺上逗留時間明顯增加(PO.05或PO.01),大鼠第1天、第2天跳臺的錯誤次數明顯減少(PO.05或PO.Ol)，第2天的錯誤潛伏期有明顯延長(P<0.05)，見表5、6、7、8。表5.木犀草素-7-O-P-D葡萄糖醛酸苷對(3-淀粉樣蛋白致老年性癡呆大鼠到達平臺潛伏期(s)的影響(n=10,x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>本發明6015.59±10.15**14.22±11.03**15.70±11.73**與模型組比較*P<0.05，**P<0.01表6.木犀草素-7-O-p-D葡萄糖醛酸苷對卩-淀粉樣蛋白致老年性癡呆大鼠到達平臺游程(cm)的影響(n=10,x±s)組別劑量(mg/kg)第l天第2天第3天組另IJ劑量(mg/kg)第4天第5天第6天與模型組比較*P<0.05表7.木犀草素-7-O-P-D葡萄糖醛酸苷對(3-淀粉樣蛋白致老年性癡呆大鼠第7天水迷宮的影響(n=10,x±s)組別劑量平臺區內平臺象限內穿臺次數(mg/kg)時間(s)時間(s)與模型組比較*P<0.05,**P<0.01表8.木犀草素-7-0-p-D葡萄糖醛酸苷對p-淀粉樣蛋白致大鼠老年性癡呆的防治作用(跳臺法，n=10，x±s)組別劑量第l天錯第2天錯誤第2天錯(mg/kg)誤次數潛伏期(秒)誤次數與模型組比較*P<0.05，**PO.01病理顯示正常對照組可見皮質神經細胞數多，排列均勻，神經細胞胞體大、核大，核膜、核仁清楚，偶見嗜神經細胞現象，未見膠質小結及軟化灶。海馬神經細胞-.—1253.12±443.16659.59±396.46417.15±278.23*一1356.30±518,62903.45±402.26821.55士512.12601210.24±338.56710,19±386.98528.49±415.51一389.81±135.20*320.42±168.37*337.18±160.91*—842.15士310.81805.38±340.45932.50±495.3160405.44±162.15*352.50±130.58*352.83士165.38*—4.70±1.25**38.23±11.3012.55士3.17**—1.58±1.0534.24±15.605.81士2.30604.68±1.04**39.27±14.511.97±2.45**——5.62±2.57*252.50±45.78*0.48±0.21**一9.20±3.18175.23±81.243.30±1.92605.50±2.80*250.42±34.25*0.60±0.27**且Rd月常型發正模本R:Lnd月纟-纟-常型發正模本常型發正模本常型發正模本數多，層次清楚，排列整齊，神經細胞胞體大、核大，核膜、核仁清楚。模型組可見皮質神經細胞數輕度減少，排列不均勻，神經元細胞退化，核固縮，深染的壞死神經細胞較多，嗜神經細胞現象多見。海馬神經細胞數明顯減少，呈節段性丟失，神經細胞排列不整齊、層次不清，可見大量的核固縮、深染的壞死細胞。木犀草素-7-0-f5-D葡萄糖醛酸苷皮層神經細胞數多，排列均勻，核固縮，深染的壞死神經細胞較少，偶見嗜神經細胞現象。海馬神經細胞排列整齊，層次清楚，神經細胞數無明顯減少，偶見壞死的神經細胞。病理結果表明木犀草素-7-0-13-D葡萄糖醛酸苷組可減輕P-淀粉樣蛋白所致大鼠腦皮層及海馬的病理損害，對p-淀粉樣蛋白致大鼠癡呆有一定的治療作用。3對大腦中動脈梗塞(MCAO)擬血管性癡呆的治療作用3-1藥物木犀草素-7-0-D葡萄糖醛酸苷由吉林省中醫藥科學院提供，批號20071215，純度與性狀均為98%，黃色。3-2動物雄性Wistar大鼠120只，體重280320g，由吉林大學基礎醫學院實驗動物中心提供，合格證號SYXK-(吉)2003-0001。3-3試驗方法按文獻^方法制作大鼠MCAO擬血管性癡呆模型，此方法是在線栓法所致腦缺血再灌注損傷的基礎上改良的。用10%水合氯醛(300mg/kg)腹腔注射麻醉禁食，仰位固定，頸部備毛，用強力碘消毒后，手術剪剪開皮膚，用蚊氏鉗小心鈍性分離粘膜及肌層，找到并分離右側頸總動脈、頸內動脈及頸外動脈，穿線(0號絲線)備用。結扎頸總動脈及頸外動脈，在頸總動脈分叉處2mm處剪一小切口，將一端加熱成球形的尼龍絲線插入，在入口處用絲線將頸內動脈及尼龍絲線輕輕結扎固定，然后繼續插入尼龍絲線，至劃線處(20mm)處時可感覺到有一落空感，此時再將尼龍絲線稍稍撤回至刻度(18mm)處，即完成大腦中動脈栓塞(MCAO)。然后及時結扎入口處頸內動脈的絲線以固定插入的尼龍線。在手術視野內灑青霉素少許，縫合皮膚，將尼龍線留在體外約lcm。2小時后，輕輕提拉留在體外的尼龍絲線至有阻力，此時實現大腦中動脈再灌注。假手術大鼠僅結扎頸總、頸內及頸外動脈。造模成功后，可見動物出現對側前肢倦曲或行走轉圈或行走向對側倒的體征。術后每日給予青霉素抗感染，80萬單位/kg。大鼠正常飲食飲水。術后第10日開始給藥。①組為正常組，②組為模型組，均灌胃給蒸鎦水0.5ml/100g，第①組為正常組，第②組為模型組，均灌胃給蒸餾水0.5ml/100g，第③組灌胃木犀草素-7-0-0-D葡萄糖醛酸苷。術后第30天，進行水迷宮練習及測試，期間一直給藥。學習記憶行為學與神經功能觀測具體方法各組動物在從MCAO造模后第30天，采用Morris水迷宮實驗觀測動物學習記憶行為學功能。Morris水迷宮為不銹鋼的圓形水池，直徑200cm，高50cm，水深30cm,水溫25il'C，池壁標明4個入水點，由此將水池分為4個象限，任選其中1個象限，正中放置1個直徑為llcm，高29em的平臺。迷宮上方裝有攝像機及錄像機以及顯示器連接，自動錄入大鼠游泳軌跡進行分析。水迷宮試驗連續7天，前6天進行定位航行試驗將大鼠面向池壁放入水中，上下午各一次，記錄其在2min內尋找平臺的時間及游泳路徑。若其在2min內未找到平臺，則潛伏期為120s,并由實驗者用手牽引其至平臺上，讓大鼠停留10s，再放回籠內。第7天進行空間探索試驗:將大鼠從前6天訓練的入水點放入水中，記錄其在2min內的游泳軌跡及時間，若其在2min內未找到平臺，則潛伏期為120。并分析大鼠在原平臺象限游泳的時間(tP)和路徑(dP)與總游泳時間(tT)和總游泳路徑(dT)之比。分析大鼠的空間學習、記憶能力的變化。水迷宮后，斷頭取腦，于4%甲醛溶液中固定，送病理檢測。3-4試驗結果與假手術組比較，模型組大鼠第3天至第6天到達平臺的潛伏期明顯延長(P<0.05)，第4天至第6天到達平臺的游程明顯延長(PO.05),第7天大鼠空間探索的tP/tT及dP/dT均明顯降低(PO.05或PO.01);與模型組比較，木犀草素-7-0-e-D葡萄糖醛酸苷第4天至第6天達到平臺的潛伏期明顯縮短(P<0.05)，第5天及第6天到達平臺的游程明顯縮短(P0.05)，第7天大鼠空間探索的tP/tT及dP/dT均明顯增加(PO.05或PO.Ol)，見表9、10、11。表9.木犀草素-7-O-p-D葡萄糖醛酸苷對MCAO擬血管性癡呆大鼠到達平臺潛伏期(s)的影響(n=10，x±s)組別劑量(mg/kg)第1天第2天第3天正常組一44.18±20.6928.48土13.669.18±4.42*模型組一63,79±21,0742.58±14.5018.70±7.45本發明6046.23±13.1627.67±11.2213.26±9.13組另!J劑量(mg/kg)第4天第5夭第6天正常組一9.83±5.19*6.10±2.56*6.89±3.15*<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表11.木犀草素-7-0-p-D葡萄糖醛酸苷對MCAO擬血管性癡呆大鼠tP/tT及dP/dT的影響(n=10，x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>病理顯示假手術組可見腦膜血管正常，無擴張、充血現象。皮質神經細胞數多，排列均勻，神經細胞胞體大、核大，染色均勻，核膜、核仁清楚，偶見嗜神經現象。海馬神經細胞數多，胞體大、核大，核仁清楚；模型組可見皮質神經細胞數減少，多數神經細胞呈固縮、深染的三角形，核膜、核仁不清，多見神經細胞空泡變性，嗜神經現象較多，可見軟化灶及膠質小結形成。海馬神經細胞明顯減少，層次不清，排列不整，噬神經細胞現象較多，多見深染、固縮的三角形細胞；木犀草素-7-0-e-D葡萄糖醛酸苷14組可見皮質神經細胞數無明顯減少，核固縮、深染的三角形神經細胞及嗜神經細胞現象較模型組減少，未見軟化灶及膠質小結。海馬神經細胞數無明顯減少，變性、壞死細胞比模型組少，可見嗜神經細胞現象。病理結果表明木犀草素-7-0-0-D葡萄糖醛酸苷可不同程度地減輕大腦中動脈梗塞(MCAO)擬血管性癡呆大鼠的病理性變化，對血管性癡呆有一定的治療作用。4對頸內動脈注射微小栓子致血管性癡呆的治療作用4-1藥物木犀草素-7-0-f3-D葡萄糖醛酸苷由吉林省中醫藥科學院提供，批號20071025，純度與性狀均為98%，黃色。4-2動物雄性Wistar大鼠120只，體重350450g，由吉林大學基礎醫學院實驗動物中心提供，合格證號SYXK-(吉)2003-0001。4-3試驗方法根據參考文獻[911]制作栓塞液，Wistar大鼠無菌自然干燥的血凝塊研碎分級過篩，選直徑100200目的微粒溶于生理鹽水中，制成2mg/ml的懸濁液即栓塞液。按參考文獻[1()]制作大鼠老年性癡呆模型。用20%的烏拉糖腹腔注射麻醉大鼠，頸中切開皮膚，暴露左側頸總動脈及頸內、頸外動脈，用動脈夾暫時夾閉頸總動脈，從頸外動脈處逆行穿刺插管注入0.3ml栓塞液(正常對照組給同容積的生理鹽水)，結扎頸外動脈，放開頸總動脈夾，使栓子通過頸內動脈進入顱內至大腦各動脈，造成多灶性腦梗塞。術后3天分組，給藥。①組為正常組，②組為模型組，均灌胃給蒸餾水0.5ml/100g，第③組灌胃木犀草素-7-0-P-D葡萄糖醛酸苷。連續給藥15天后進行水迷宮試驗及跳臺試驗，試驗期間繼續給藥。水迷宮試驗連續7天，前6天，在l、2、3、4象限四個不同的入水點，測定大鼠到達平臺的時間及游程，第7天撤掉平臺，測定大鼠在2min內穿越平臺的次數，在平臺區的逗留時間及在平臺象限內的逗留時間。水迷宮試驗結束后，進行跳臺試驗，記錄每只鼠5min內受到電擊的次數或叫錯誤次數，以此作為學習成績。24小時后重新做測驗，此即為記憶保持測驗，記錄第一次跳下平臺的潛伏期和5min內的錯誤次數。跳臺試驗結束后快速取腦固定，進行病理檢查。4-4試驗結果與正常對照組比，模型組大鼠第2天至第6天到達平臺的潛伏期明顯延長(P0.05)，第1天至第3天、第5天及第6天到達平臺的游程明顯延長(P0.05)，第7天大鼠在2min內的穿越平臺的次數，在平臺象限的逗留時間及平臺區象限內的游程占總游程的百分比均明顯降低(PO.05或PO.01)，第1天、第2天跳臺的錯誤次數明顯增加(PO.Ol)，第2天的錯誤潛伏期明顯減少(PO.05);與模型組比，木犀草素-7-0-P-D葡萄糖醛酸苷組第2天至第6天達到平臺的潛伏期及游程均不同程度地縮短(PO.05或P<0.01)，第7天大鼠在2min內的穿越平臺的次數及在平臺區的逗留時間均明顯增加(P<0.05)，第1天、第2天跳臺的錯誤次數明顯減少(P<0.05)，第2天的錯誤潛伏期明顯延長(P<0.05)，見表12、13、14、15。表12.木犀草素-7-O-p-D葡萄糖醛酸苷對頸內動脈注射微小栓子致老年性癡呆大鼠到達平臺潛伏期(s)的影響(n=10,x±s)組另U劑量(mg/kg)第1天第2天第3天正常組一44.33±14.6918.45±13.66*9.10±4.09*模型組一63.71±15.0732.50±10.5019.72士10.41本發明6049.34士15.4419,86±10.15*1U3±7.22*組別劑量(mg/kg)第4天第5天第6天正常組一9.14土4.23*6.10±2.56*6.89±3.15*模型組一16.48±5.3111.83±5.0514.54±5.47本發明6010.22±5.36*7.40±2.38*6.96±3.36*與模型組比較*P<0.05,**P<0.01表13.木犀草素-7-0-(3-D葡萄糖醛酸苷對頸內動脈注射微小栓子致老年性癡呆大鼠到達平臺游程(cm)的影響(n=10，x±s)組另lj劑量(mg/kg)第l天第2天第3天正常組一1012.36土408.68*526.85±332.17*255.67±128.45*模型組一1522.95±415.05939.45±391.68493.21±230.05本發明601365.74±327.72597.19±236.07*276.83±129.21*組別劑量(mg/kg)第4天第5天第6天正常組一294.51±142.95163.85±66.92*195.43±92.88*模型組一464,52±178.82312.23±121.65367.55±126.61本發明60285.35±108.53*180.75±102.78*193.2U102.12*與模型組比較*P<0.05表14.木犀草素-7-0-(3-D葡萄糖醛酸苷對頸內動脈注射微小栓子致老年性癡呆大鼠第7天水迷宮的影響(n=10，x±s)組別劑量平臺區內平臺象限內穿臺次數(mg/kg)時間(s)時間(s)正常組一5.59土1.61*46.17±6.60*17.48±2.45**模型組一3.38±1.1235.87±7.129,12±3.13本發明605.46±1.31*48.53±5.79*15.60±4.09*與模型組比較-.*P<0.05,**P<0.01表15.木犀草素-7-O-p-D葡萄糖醛酸苷對頸內動脈注射微小栓子致大鼠老年性癡呆的防治作用(跳臺法，n=10,x±s)組別劑量第l天錯第2天錯誤第2天錯(mg/kg)誤次數潛伏期(秒)誤次數正常組一4.32±2.33**242.43±61.54*0.72士0.35**模型組一7.87±1.24150.12±53.412.56士1.35本發明604.70±1.28*234.15±51.45*0.80±0.63*與模型組比較*P<0.05，**P<0.01病理顯示正常組可見腦膜為正常結構，無明顯擴張、充血。大腦皮層神經細胞數多，細胞胞體大，核大，染色淡，核膜、核仁清楚。海馬神經細胞數多，排列整齊，層次清楚，胞體大、核大，核仁清楚。皮層、海馬無軟化灶及膠質小結；模型組可見部分腦膜血管擴張、充血，大腦皮質及基底節多發、散在灶狀壞死，壞死神經細胞核固縮，染色深，核仁不清，局部區域有較多的膠質細胞增生，膠質小結形成。海馬神經細胞數明顯減少，噬神經細胞現象明顯增加，局部區域神經細胞節段性壞死，壞死細胞深染，細胞核消失；木犀草素-7-0-e-D葡萄糖醛酸苷組均可見腦膜血管擴張、充血，大腦皮質及基底節可見多發、散在壞死灶，與模型組無明顯差異，有較多的膠質小結形成。海馬神經細胞數目減少，局部區域神經細胞節段性消失，噬神經細胞現象較多。病理結果表明木犀草素-7-0-D葡萄糖醛酸苷14對頸內動脈注射微小栓子所致大鼠癡呆的病理改變無明顯減輕作用。結論在海人藻酸損傷邁內特基底核致大鼠老年性癡呆模型，與正常組比較，模型組大鼠第2天至第6天到達平臺的潛伏期及游程明顯延長(PO.05或PO.01)，第7天大鼠在2min內穿越平臺的次數，在平臺區的逗留時間明顯降低(PO.05或PO.01)，第l天跳臺的錯誤次數及第2天錯誤次數明顯增加(PO.01);與模型組比較，木犀草素-7-0-3-D葡萄糖醛酸苷組大鼠第3天、第4天、第5天及第6天達到平臺的潛伏期及游程均明顯縮短(PO.05或PO.01)，第7天大鼠在2min內的穿越平臺的次數、臺上逗留時間明顯增加(P0.05)，大鼠第1天及第2天跳臺錯誤次數明顯降低(P0.05或PO.01);病理顯示木犀草素-7-0-e-D葡萄糖醛酸苷組對海人藻酸所致大鼠癡呆引起的腦組織病理改變有一定的改善作用。在P-淀粉樣蛋白致大鼠老年性癡呆模型，與正常對照組比，模型組大鼠第2天至第6天到達平臺的潛伏期明顯延長(PO.05或PO.01)，第3天至第6天到達平臺的游程明顯延長(P<0.05)，第7天大鼠在2min內的穿越平臺的次數，在平臺區的逗留時間明顯降低(P〈0.05或P〈0.01)，第1天、第2天跳臺的錯誤次數明顯增加(PO.05或PO.Ol)，第2天的錯誤潛伏期明顯縮短(PO.05);與模型組比較，木犀草素-7-0-0-D葡萄糖醛酸苷組水迷宮第3天至第6天達到平臺的潛伏期明顯縮短(P0.05或PO.Ol)，第4天至第6天到達平臺的游程明顯縮短(P<0.05)，第7天大鼠在2min內穿越平臺的次數、臺上逗留時間明顯增加(PO.05或PO.01)，大鼠第1天、第2天跳臺的錯誤次數明顯減少(PO.05或P<0.01)，第2天的錯誤潛伏期有明顯延長(PO.05);病理顯示木犀草素-7-D葡萄糖醛酸苷組均可不同程度地減輕(3-淀粉樣蛋白所致大鼠腦皮層及海馬的病理損害，對p-淀粉樣蛋白致大鼠老年性癡呆有一定的治療作用。在大腦中動脈梗塞(MCAO)擬血管性癡呆模型，與假手術組比較，模型組大鼠第3天至第6天到達平臺的潛伏期明顯延長(P<0.05)，第4天至第6天到達平臺的游程明顯延長(PO.05),第7天大鼠空間探索的tP/tT及dP/dT均明顯降低(P<0.05或PO.01);與模型組比較，木犀草素-7-0-P-D葡萄糖醛酸苷組第4天至第6天達到平臺的潛伏期明顯縮短(PO.05),第5天及第6天到達平臺的游程明顯縮短(P〈0.05)'第7天大鼠空間探索的tP/tT及dP/dT均明顯增加(PO.05或PO.01);病理顯示木犀草素-7-0-0-D葡萄糖醛酸苷均可減輕大腦中動脈梗塞(MCAO)擬血管性癡呆大鼠的病理性變化，對血管性癡呆有一定的治療作用。在頸內動脈注射微小栓子致大鼠血管性癡呆模型，與正常對照組比，模型組大鼠第2天至第6天到達平臺的潛伏期明顯延長(P<0.05)，第1天至第3天、第5天及第6天到達平臺的游程明顯延長(P<0.05)，第7天大鼠在2min內的穿越平臺的次數，在平臺象限的逗留時間及平臺區象限內的游程占總游程的百分比均明顯降低(PO.05或P《.01)，第1天、第2天跳臺的錯誤次數明顯增加(P<0.01)，第2天的錯誤潛伏期明顯減少(PO.05);與模型組比，木犀草素-7-0-e-D葡萄糖醛酸苷組第2天至第6天達到平臺的潛伏期及游程均不同程度地縮短(P<0.05或PO.Ol)，第7天大鼠在2min內的穿越平臺的次數及在平臺區的逗留時間均明顯增加(P<0.05),第1天、第2天跳臺的錯誤次數明顯減少(P<0.05)，第2天的錯誤潛伏期明顯延長(P<0.05)。病理顯示木犀草素-7-0-P-D葡萄糖醛酸苷對頸內動脈注射微小栓子所致大鼠癡呆的病理改變無明顯的減輕作用。在大鼠腦原代神經細胞培養實驗，木犀草素-7-0-D葡萄糖醛酸苷對過氧化氫(H202)及氯化鉀(KC1)所致大鼠腦神經細胞的損傷均具有明顯保護作用。本發明的積極效果在于為純中藥制劑，臨床癥狀消失迅速，治療癡呆疾病效果顯著o具體實施例方式本發明以木犀草素-7-0-3-D葡萄糖醛酸苷作為主要活性成分與一種或多種醫藥上可接受的載體或賦性劑按適當比例混合，制成適用于臨床上使用的不同劑型的藥物組合物，例如將其配制成可供靜脈內、肌肉內、腹腔內、皮下、腦脊髓腔內等注射給藥的注射劑，或者制成適于口服給藥的片劑、顆粒劑、滴丸、沖劑、液體制劑、粉末劑、丸劑、膠囊劑和懸浮劑，以及適用于局部給藥的噴霧劑、氣霧劑、霜劑、軟膏和栓劑。本發明公開的用于制備治療癡呆疾病藥物是由0.1-100%的木犀草素-7-o-e-D葡萄糖醛酸苷和99.9-0%藥用輔料組成藥物制劑。為了制備適于胃腸道外途徑要的溶液劑，例如可使用蒸餾水、注射用水、等滲氯化鈉溶液或葡萄糖溶液，或者低溶液(例如1-lOOmM)磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)作為載體或賦形劑。為了制備適于口服給藥的片劑、粉末劑、懸浮劑或膠囊劑，可以使用蔗糖、半乳糖、玉米淀粉、明膠、脂質、微晶纖維素、滑石粉等作為載體或賦形劑。在這些適于口服給藥的制劑中，還可含有其他適當的添加劑，例如增溶劑、崩解劑、潤滑劑、吸收促進劑、防腐劑、矯味劑、稀釋劑、吸附劑、賦形劑、分散劑、表面活性劑、著色劑等。最好將本發明的藥物組合物制成給藥途徑是靜脈內或肌肉內注射適于這些給藥途徑的注射液，例如注射劑、凍干粉針劑等。權利要求1、木犀草素-7-O-β-D葡萄糖醛酸苷在制備抗癡呆疾病藥物中的用途。2、木犀草素-7-0-5-D葡萄糖醛酸苷制備的抗癡呆疾病藥物包括藥物學上的任何劑型。全文摘要本發明涉及木犀草素-7-O-β-D葡萄糖醛酸苷新的醫藥用途，尤其是在制備抗癡呆疾病藥物中的用途，制劑為純中藥制劑，臨床癥狀消失迅速、效果顯著。文檔編號A61P25/28GK101301302SQ20081005087公開日2008年11月12日申請日期2008年6月25日優先權日2008年6月25日發明者姜瑞芝,睢大員,陳英紅,高其品申請人:通化華夏藥業有限責任公司;華玉強