專利名稱：一種治療腦中風的藥物的制作方法
技術領域：
本發明涉及腦中風的治療，具體涉及用LJP1207治療腦中風或其他神經科疾 病/障礙。 背聚技術腦中風是一組好發于中、老年人的急性腦血管病，其特點是發病率高、死 亡率高、致殘率高、并發癥多，因此又稱"三高一多"癥，是嚴重威脅人類健康的 疾病。有關數據統計，目前全國共約有515-745萬人患中風，郎在我國每年每W 萬人口中就有185-219例。統計顯示，中風發病率隨年齡增加而增長，在每W萬 人口中70%左右的是65歲以上的老年人首次發生中風，患病率在每10萬人口中約 有430-615例，中風的死亡率為每年每10萬人口中有116-l幼例，中風存活后的 病人約60-80%有不同程度的殘疾，嚴重者甚至喪失正常生活能力。另外，有中 風病史的患者，約25-80%可能在2-5年內復發。多數患者由于偏癱致殘喪失勞動 力和生活自理能力，精神和肉體蒙受著極大的痛苦，同時也給社會和家庭帶來 了沉重的負擔。所以，積極有效的治療中風及其后遺癥，減少中風患者的致殘 率，可以解除患者病痛，同時也為社會和家庭減輕負擔，它是擺在醫藥工作者 面前的一項嚴峻挑戰，具有重大的現實意義。但是，迄今為止，臨床上缺乏有效的治療中風的方法和藥物，世界上公認 的溶栓療法僅限于中風發生三小時內，可多數病人送到醫院救治時，已超過溶 栓療法的有效作用時間。另外，大多數針對急性中風治療(,神經保護)的治療 劑主要涉及靶向谷氨酸受體及其已知參與急性細胞死亡的下游信號傳導途徑。 然而，在臨床試驗中已經證明這些策略是不成功的，它們經常與劑量局限性副 作用有關。另一方面，近年來的大量研究表明，腦中風后的神經病理損傷與腦血管白 細胞的粘附與滲出有關(l),腦中風后炎癥反應在中風引起的腦損害中起著重要 作用。血管粘附蛋白-l (VA P — 1 /SSAO)是一種內皮唾液酸糖蛋白，其細胞表面 表達受炎癥條件誘導。先前已顯示它能調節再循環淋巴細胞以L選擇蛋白非依賴方式與人外周淋巴結血管內皮細胞的結合。V A P — 1是一種有雙重功能的 新型粘著分子。伴隨適當的糖基化，和恰當的炎癥環境，在調節淋巴細胞粘著 位點中的管腔內皮細胞表面上表達的V A P —1使其作為與淋巴細胞歸巢有關 的一種粘著受體而發揮功能。VAP-l在其它位點的主要功能可取決于其內在胺氧 化酶的活性。VAP在促進白細胞的粘附與遷移中起重要作用。因此，研究抑制 VAP-l的表達的藥物，尋找選擇性的VAP-l抑制劑成為治療包括腦中風在內炎癥 相關疾病一條新途徑(2)。發明內容本發明推出的治療腦中風藥物具有如下主要特征以LJP1207[N'-(2-phenyl-allyl)-hydrazine hydrochloride]為有效成份。本發 明所涉及的LJP1207是一種小分子化合物，包含一個肼功能基團，分子量為 184 67。 LJP1207是VAP-l的強效、高選擇性抑制劑。在對其藥理學特性的研究 表明，LJP1207對于大鼠VAP-1/SSAO的IC50值為7.5nM,對于人MP-1/SSA0的IC50 值為17nM,而對于其它胺氧化酶，如MA0"A和MA0"B的IC50值分別為225uM和 100uM,因此，LJP1207對于VAP-1結合力至少是其它胺氧化酶的1000到10000倍, 具有很好的選擇性(3)。本發明旨在推出一種以LJP1207為有效成分的抗缺血/出血及再灌注損傷藥 物，并將其用于腦中風的治療或預防。該藥物也可用于治療或預防其它神經科 疾病包括創傷性腦損傷，脊髄損傷，阿爾茨海默病，額顳癡呆(tau蛋白病)，周 圍神經^^病，帕金森病，亨廷頓舞蹈病和多發性硬化。藥理研究表明，LJP1207是一種優良的炎性滲出抑制劑，能顯著抑制急慢 性炎癥反應，對于降低腦血管急慢性損傷后導致的炎性損傷和腫脹反應具有重 要意義。該作用注射與口服給藥均有效。LJP1207對于炎癥的抑制，與其對于VAP-1/SSA0介導的細胞粘附的抑制有 關。LJP1207在阻斷VAP-1的胺氧化酶的催化位點時，也降低了該分子的粘附， 而且，這種作用是呈劑量依賴性的。此外，在暫時性局灶性腦缺血模型上還觀 察到缺血即刻給予LJP1207抑制了白細胞的滲出，改善了神經功能(2)。 口服 LJP1207還能顯著減輕水腫，降低包括PGE2， OT-a在內的數種局部炎癥介質的表達(3)。本發明所述的LJP1207的首次使用可在中風發生當時至發生1月內，較優的 選擇是發生當時至發生72小時內。首次注射后每隔24小時給藥一次，連續給藥3 到7天。與溶栓療法相比，LJP1207的治療時間窗更為寬廣，治療效果顯著，具 有重要的臨床應用價值。本發明所述藥物的特征在于給藥途徑以口服給藥為主，也可采用注射給藥, 包括靜脈滴注、靜脈注射，或可采用肌肉、腹腔注射。藥物劑型以口服劑型為 主，也包括注射劑型。制備這些劑型的方法在藥劑學中是已知的，該領域的技 術人員根據需要可以理解和實施。本發明所述藥物的特征還在于在組成上包括有效劑量的LJP1207和藥學上 可以接受的載體、輔料和(或)其它藥物。有關LJP1207的合成已公布，見參考文獻(4)。以下是本發明的實施例，該敘述的目的是為了更好地說明本發明如何實施 及其效果。目的僅在于說明，而并不以任何形式限制本發明。實施例中所使用 的LJP1207按照上述公布的方法合成。實施例lLJP1207對腦缺血后白細胞粘附和滲出的影響選用SD大鼠，用含l. 2%異 ^-70%笑氣-3W&氧氣的麻醉混合氣體麻醉SD大 鼠，顱窗制備及微循環觀測如下，固定大鼠，右側顱頂部皮膚切開，暴露顱骨。 以矢狀縫外2咖、冠狀縫下2咖處為中心，用牙科鉆打一個圓孔，揭去顱骨， 暴露腦膜。將大鼠頭部固定在立體定位儀上，置于顯微鏡下，以冷光源照射。 應用微循環顯微鏡及其圖像分析系統觀察大鼠右側軟腦膜小動脈和小靜脈管徑 (AD、 W)的動態變化。給予大鼠右側前腦缺血，具體方法如下夾閉右側頸 總動脈，同時從鎖骨下靜脈抽血，使得皮層腦血流降到基礎值的20%(用激光多 普勒檢測)，30分鐘后松開動脈夾，將抽出的血液回輸入大鼠體內。腦缺血手術 后，進行顱窗觀察，將一直徑為O. 8鵬的激光多普勒探針置于右頂葉皮層，圃定 在顱窗上。使用能過濾羅丹明的數碼照像記錄系統，該系統與顯微鏡相連。靜 脈注射l邁l羅丹明，繼以lml/h的速度連續輸入羅丹明。白細胞被羅丹明標記， 用MetaMorph軟件系統存取圖像。分別在缺血再灌注后2， 4, 6,. 8和10小時記錄白細胞的動力學變化。實驗結果顯示，再灌注同時至io小時內靜脈給予LJP1207(30mg/kg),顯著抑制了缺血引起的白細胞的粘附及滲出。 實施例2LJP1207對腦缺血所致的缺血梗塞灶的影響。使用大腦中動脈缺血模型，方法如下采用含l. 2%異氟烷-70%笑氣-30%氧 氣的混合氣體麻醉SD大鼠，應用恒溫儀使直腸溫度保持在37C，分離右側頸外、 頸內、頸總動脈，結扎橋動脈(連接頸內、頸外動脈的小動脈，位于頸內頸外 動脈的分叉處)，結扎頸外動脈遠離頸總動脈的一端，在其另一端剪一小口，將 帶有硅膠的尼龍線從小口插向頸總動脈，在小口處剪斷頸外動脈，辨與頸總動 脈相連的頸外動脈殘端往下拉直至與頸內動脈成一直線，尼龍線沿頸內動脈方 向插入長度為19-20咖，阻斷大腦中動脈血流60 min后，將尼龍線撤出，進行再 灌注。實驗過程中腦血流用多普勒光纖探頭進行監測,探頭位置為囟門旁開5 nm, 后lmm,只有腦血流值降低到基礎值的10-15%,再灌注血流恢復到90%以上為梗 死再灌注模型成功。在各實驗組中，分別在再灌注后2小時，6小時及12小時給 予LJP1207 (30rag/kg，口服)，每隔24小時重復給藥一次，直至再灌后72小時。 再灌3天時，斷頭取腦，腦組織被切成l咖厚腦片，立即應用2%氯化三苯氮唑染 色，應用顯像分析系統區分梗死區和非梗死區并計算梗塞灶體積。實驗結果顯示，與對照組梗塞體積(222土74nun3)相比，使用LJP1207各組的 梗塞體積均顯著下降，其中，再灌后2小時給予LJP1207的梗塞體積(104:t43nitfi, p<0. 01), 6小時組為(84 ± 69咖3， p<0.01),再灌后12小時給予LJP1207的梗塞 體積(91 ± 57mm3， p<0.01)。實施例3LJP1207對腦缺血后神經功能恢復的作用大腦中動脈缺血模型，各實驗分組同實施例2。腦缺血后神經功能評估實施 如下從缺血后第一天起，每日一次，直至缺血后三天。神經功能評價分為六 項，包括感覺和運動功能評估(l)意識知覺，0正常l不安；2怠惰，不愿 動；3昏迷；4癍癇；5死亡(2)走路，0正常；l前肢內收；2運動減弱；3朝偏癱側轉圈4不能站起(3)平臺攀爬運動，0爬上平臺；1后肢上提，肢體 懸吊平臺達5秒2肢體懸吊平臺達5秒3肢體懸吊平臺少于5秒；4無法 抓住平臺(4)翻轉運動，0翻轉180°,四肢抓住翻轉平臺的時間超過5秒1翻 轉180°,四肢抓住翻轉平臺的時間少于5秒3翻轉卵n,四肢抓住翻轉平臺的 時間超過5秒；；4翻轉穿，無法抓住平臺，摔下(5)肢體肌張力，0正常/ 對稱；1—側下降(6)疼痛反射，0反應正常；1反應下降。各項得分高表明 神經損傷重，得分低表明功能恢復好。研究結果如下，與對照組相比(24±4),使用LJP1207各組的神經功能評分 顯著下降，神經功能顯著恢復，其中，再灌后2小時給予LJP1207的神經功能評分 (15 ±4, p<0.01), 6小時組為(14±3， p〈O.OD，再灌后12小時給予LJP1207 的神經功能評分(14 ± 2, p<0. 01)。結論1丄JP1207可抑制腦中風引起的細胞粘附及滲出，進而減輕中風所致的炎癥， 起到治療中風的作用。2.腦中風后給予LJP1207可以縮小梗塞灶，促進中風后神經功能的恢復，而且， LJP1207具有較寬廣的治療窗，從中風發生當時至發生至少12小時內，均有治 療效果。以上提示，LJP1207對于腦中風的治療有顯著的效果，具有重要的臨床應 用價值。以上盡管我們描述了本發明的實施方案與效果，顯然并不意味著僅限于此。 實際上，本發明的實施方案可以進行許多改變以充分利用本發明的用途而不超 出本發明的范圍和精神。因此應該理解，本發明的保護范圍應當由所附權利要 求書來限定，而不是由實施例方式表示的特定實施方案來限定。參考文獻L Fri加s CJ and Kappelle LJ (2002) Inflammatory cell adhesion molecules in ischemic cerebrovascular disease. Strode 33: 2115-21222. Xu HL et al. (2006) Vascular adhesion protein-l plays eui important role in postisch棚ic inf lannnation and neuropathology in diabetic, estrogen—treated ovariectomized female rats subjected to transient forebrain ischemia, //%ansiscoJ 怨er. 317:19-293. Salter~Cid OI et al. (2005) Anti-inflammatory effects of inhibiting the amine oxidase activity of semicarbazide—sensitive amine oxidase. //%araJacoi /Ser. 315:553~624 WangEYetal. (2006) Design, Synthesis, and Biological Evaluation of Semicarbazide~Sensitive Amine Oxidase (SSAO) Inhibitors with Anti-inflaimnatory Activity. / ifei/. (Se風，49: 2166—217權利要求
1.一種治療或預防人的中風或其他神經科疾病/障礙的藥物，其特征在于(1)以LJP1207[N’-(2-phenyl-allyl)-hydrazine hydrochloride]為有效成份，(2)不但具有顯著的抗缺血性或出血性腦損傷的作用，還具有顯著的抗再灌注損傷作用(3)是血管粘附蛋白-1(VAP-1)的選擇性抑制劑。
2. —種治療或預防人的中風或其他神經科疾病/障礙的方法，所述的方法包括給 予有需要的病人有效量的權利要求l中的藥物，所述的病人患有中風或其它神 經科疾病或者處于發生所述疾病的危險之中。
3. 根據權利要求1-2,所述的藥物和方法用于腦中風或其他神經科疾病/障礙的 治療或預防，其中所述其它神經科疾病包括創傷性腦損傷，脊髓損傷，阿爾茨 海默病，額顳癡呆(tau蛋白病)，周圍神經科疾病，帕金森病，亨廷頓舞蹈病 和多發性硬化。
4. 根據權利要求1或2，所述藥物的可用于腦中風發生當時到發生l月內，較優的 選擇是發生當時至發生72小時內。
5. 根據權利要求1或2，所述藥物的特征在于給藥途徑以口服給藥為主，也可采用 注射給藥,包括靜脈滴注、靜脈注射，或可采用肌肉、腹腔注射。
6. 根據權利要求l， 2或5，所述藥物的特征在于劑型以口服劑型為主，也包括注射 劑型。
7. 根據權利要求1或2，所述藥物的特征在于在組成上包括有效劑量的LJP1207和 藥學上可以接受的載體、輔料和(或)其它藥物。
全文摘要
本發明涉及用一種血管粘附蛋白的抑制劑治療或預防腦中風及其它神經科疾病/障礙，具有重要的臨床應用前景。
文檔編號A61P9/00GK101401802SQ20081020249
公開日2009年4月8日 申請日期2008年11月10日 優先權日2008年11月10日
發明者陶英亮 申請人:陶英亮