專利名稱：：一種重組人血清白蛋白與干擾素α融合蛋白的藥物組合物的制作方法
技術領域：
：本發明涉及生物
技術領域：
。具體涉及一種穩定化的含有重組人血清白蛋白與干擾素a融合蛋白的液體藥物組合物，及其一種裝有該穩定化的液體藥物組合物的無菌密封的容器。
背景技術：
：干擾素(IFN)是一組具有多種功能的活性蛋白質(主要是糖蛋白)，是一種由單核細胞和淋巴細胞產生的細胞因子。它們在同種細胞上具有廣譜的抗病毒、影響細胞生長和分化、調節免疫功能等多種生物活性。根據干擾素蛋白質的氨基酸結構、抗原性和細胞來源，可將其分為IFNa(白細胞型)、IFNP(成纖維細胞型)、IFNY(免疫型)。IFNco屬于IFNa家族，其結構和大小與其它IFNa稍有差異，但抗原性有較大的不同。現在公認IFNP和IFN丫只有一個亞型，而IFNa有約二十余個亞型。自80年代以來，許多研究顯示，干擾素(尤其是IFNa及IFNY)除具有抗病毒、免疫調節的作用外，還具有明顯的抗細胞增殖作用。因此，目前干擾素已被用于治療多種人類疾病。人重組干擾素在臨床上都已被廣泛的運用于抗病毒及抗腫瘤。多年來，干擾素--直被用于治療丙型，乙型肝炎的首選用藥。但是干擾素的療效不太理想，只有較小比例的患者在停止用藥之后仍能維持對病毒的抑制作用。主要的問題在于干擾素的血液半衰期只有僅僅3-6個小時，一般肝炎病人需要每周至少接受三次注射來到達治療效果，給病人帶來巨大的痛苦。針對上述干擾素在人體內半衰期短的缺點，美國的羅氏制藥(Roche)和先靈葆雅(Schering-Plough)將干擾素聚乙二醇化，以保障一個穩定的血漿濃度，聚乙二醇化的干擾素展示出較好的臨床治療效果。目前，聚乙二醇化的干擾素在臨床上已經在很大程度上替代了普通干擾素單體。此外，采用重組人血清白蛋白與干擾素的融合蛋白也可以克服干擾素在人體內半衰期較短的缺點，研究表明，在克魯維氏酵母中表達的HSA-IFNa融合蛋白(Albuferon)在獼猴體內的半衰期比普通IFNa延長了大約18倍(OsbornB,OlsenH,NardelliB,etal.PharmacokineticandPharmacodynamicStudiesofaHumanSerumAlbumin隱Interferon-aFusionProteinin3CynomolgusMonkeys.JPharmacolExpTher2002Nov;303:540-548.)。然而，無論是聚乙二醇化的干擾素，還是重組人血清白蛋白與干擾素的融合蛋白，它們都是屬于蛋白藥物。由于蛋白質的分子量大，結構復雜，蛋白質分子很不穩定，易受物理或化學因素的影響而變性，喪失其生物活性。尤其當蛋白類藥物制劑中所含生物活性蛋白濃度較低時，易出現蛋白降解或蛋白被管壁吸附等現象，從而影響蛋白質制劑的藥效。因此，本領域迫切需要提供一種穩定化的含有重組人血清白蛋白與干擾素融合蛋白的液體藥物組合物，這將十分有利于該種新型藥物制劑在臨床上的應用推廣。
發明內容本發明的目的是提供一種穩定化的含有重組人血清白蛋白與干擾素a融合蛋白的液體藥物組合物。為了實現上述目的，本發明首先提供了一種穩定化的液體藥物組合物，它是由治療有效量的重組人血清白蛋白與干擾素a融合蛋白、(較佳5.0mM50mM，更佳10mM40mM，還要佳20mM~30mM)pH值為5.5~8.5(更佳pH6.57.5，還要佳pH7.07.5)的緩沖液、溶液滲透壓維持劑、非離子表面活性劑、以及藥用防腐劑組成的。在一個優選的實施方案中，所述重組人血清白蛋白與干擾素a融合蛋白中的干擾素a選自干擾素a-2a、干擾素a-lb、或干擾素a-2b，即重組人血清白蛋白與干擾素a-2a融合蛋白、重組人血清白蛋白與干擾素a-lb融合蛋白、或重組人血清白蛋白與干擾素a-2b融合蛋白。更優選，在所述整個液體藥物組合物中，所述重組人血清白蛋白與干擾素a(較佳干擾素a-2b)融合蛋白的濃度為O.lmg/ml2.5mg/ml(較佳0.5mg/ml1.8mg/ml，更佳0.8mg/ml1.5mg/ml)。在另一個優選的實施方案中，所述緩沖液是pH5.58.5(更佳pH6.57.5，還要佳pH7.07.5)的磷酸緩沖液(磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液)。更優選，其濃度為5.0mM~50mM(較佳10mM40mM，更佳20mM30mM)。在還有一個優選的實施方案中，所述藥用防腐劑是苯甲醇。更優選，在所述整個液體藥物組合物中，其濃度為1.0mg/ml10mg/ml;還要優選，其濃度為3.0mg/ml7.0mg/ml，最優選，其濃度為4.0mg/ml6.0mg/ml。在本發明液體藥物組合物中的，所述溶液滲透壓維持劑優選蔗糖或葡萄糖。在一個較佳的實施方案中，所述溶液滲透壓維持劑是蔗糖。更佳地，所述整個液體藥物組合物中，其濃度為5.0mg/ml~50mg/ml(優選10mg/ml30mg/ml)。在另一個較佳的實施方案中，所述溶液滲透壓維持劑是葡萄糖。更佳地，在所述整個液體藥物組合物中，其濃度為5.0mg/ml50mg/ml(優選10mg/ml30mg/ml)。在本發明液體藥物組合物中的，所述非離子表面活性劑優選聚山梨酯80或泊洛沙姆188。在一個較佳的實施方案中，所述非離子表面活性劑是聚山梨酯80。更佳地，在所述整個液體藥物組合物中，其濃度為0.1mg/ml~0.5mg/ml(優選0.1mg/ml0.3mg/ml)。在另一個較佳的實施方案中，所述非離子表面活性劑是泊洛沙姆188。更佳地，在所述整個液體藥物組合物中，其濃度為1.0mg/ml5.0mg/ml(優選1.0mg/ml~3.0mg/ml)。本發明另一方面還提供了一種無菌密封的容器，它裝有所述穩定化的含有重組人血清白蛋白與干擾素a融合蛋白的液體藥物組合物。在一個優選的實施方案中，所述容器是一種預先注入的單劑量給藥或者多劑量給藥的注射器。在一個更優選的實施方案中，所述容器是一種預先注入的單劑量給藥的注射器。本發明所述液體藥物組合物中的重組人血清白蛋白與干擾素a融合蛋白(即藥物活性成分)能夠穩定保存，并且本發明將所述液體藥物組合物注入預裝式注射器中，能使藥物在生產、運輸、儲藏過程中更加穩定，醫療使用時更加安全和便利。圖1顯示了配方14成品在0天(25°C±2°C)時的SDS-PAGE電泳圖與Western-blot的檢測圖(實施例4)。A表示不同配方的SDS-PAGE電泳圖；B表示不同配方使用抗人血白蛋白一抗的Western-blot檢測圖；C表示不同配方使用抗干擾素a-2b—抗的Western-blot檢測圖。圖中，M:Marker,h配方1，2:配方2，3:配方4，4:配方3，5:人血白蛋白，6:干擾素a-2b。圖2顯示了配方1~4成品在6個月(25°C±2°C)時的SDS-PAGE電泳圖與Western-blot的檢測圖(實施例4)。A表示不同配方的SDS-PAGE電泳圖；B表示不同配方使用抗人血白蛋白一抗的Western-blot檢測圖；C表示不同配方使用抗干擾素a-2b—抗的Western-blot檢測圖。圖中，M:Marker,1:配方1，2:配方2，3:配方4，4:配方3，5:人血白蛋白，6:干擾素a-2b。圖3顯示了配方79成品分別在0天、1個月、6個月、12個月、24個月(2°C~8°C)時的SDS-PAGE電泳圖(實施例6)。A表示配方7成品的SDS-PAGE電泳圖；B表示配方8成品的SDS-PAGE電泳圖；C表示配方9成品的SDS-PAGE電泳圖。圖中，M:Marker(從上至下依次分別為116、66.2、45、35、25、18.4、14.4kDa)，1:0天，2:l個月，3:6個月，4:12個月，5:24個月。圖4顯示了配方1012成品分別在0天、1個月、6個月、12個月、24個月(2'C8。C)時的SDS-PAGE電泳圖(實施例6)。A表示配方10成品的SDS-PAGE電泳圖；B表示配方11成品的SDS-PAGE電泳圖；C表示配方12成品的SDS-PAGE電泳圖。圖中，M:Marker(從上至下依次分別為116、66.2、45、35、25、18.4、14.4kDa)，1:0天，2:l個月，3:6個月，4:12個月，5:24個月。具體實施方案具體而言，本發明提供了一種穩定化的液體藥物組合物，它是由治療有效量的重組人血清白蛋白與干擾素a融合蛋白、(較佳5.0mM50mM，更佳10mM40mM，還要佳20mM30mM)pH值為5.58.5(更佳pH值為6.57.5、還要佳pH7.0~7.5)的緩沖液、溶液滲透壓維持劑、非離子表面活性劑、以及藥用防腐劑組成的。需要說明的是，本發明液體藥物組合物中所述的緩沖液、溶液滲透壓維持劑、非離子表面活性劑、藥用防腐劑都是藥學上或者人體能夠接受的藥用輔料，并且都可以通過市售獲得。本發明液體藥物組合物中的活性成分是重組人血清白蛋白與干擾素a融合蛋白，是指使用基因工程手段獲得的一種重組融合蛋白。一般包括但不限于，重組人血清白蛋白與干擾素a-2a融合蛋白、重組人血清白蛋白與干擾素ct-lb融合蛋白、或重組人血清白蛋白與干擾素a-2b融合蛋白。在本發明的一個實施方案中，使用了重組人血清白蛋白與干擾素a-2b融合蛋白作為本發明液體藥物組合物的活性成分。所述干擾素a可直接連接在人血清白蛋白的N末端或C末端形成重組融合蛋白(IFNa-HSA、或HSA-IFNa);也可以通過一個連接肽(例如(G4S、，n宜為3或4)連接兩種蛋白，形成干擾素a-連接肽-人血清白蛋白融合蛋白(IFNa-L-HSA)、或人血清白蛋白-連接肽-干擾素a融合蛋白(HSA-L-IFNa)。考慮到連接肽毒理評價問題(如在體內增加新的免疫原性的可能性)尚存爭議，本發明液體藥物組合物中優選干擾素a(較佳干擾素a-2b)直接連接在人血清白蛋白的N末端或C末端形成的重組融合蛋白作為藥物活性成分。干擾素a(如干擾素a-2a、干擾素a-lb、或干擾素a-2b等)或者人血清白蛋白的氨基酸序列是本領域技術人員所熟知的，或者也可以通過搜索網上數據庫(例如GenBank)獲得。如無特別說明，本發明所述的各種"干擾素"或"IFN"都是指"人干擾素"。本發明所述"干擾素a"或者"人血清白蛋白"多肽包括與其相同(同源)或基本相同(同源)的多肽，例如，有至少60%、較佳70%、更佳80%、還要佳90%、最佳95%以上的同源性或相同性的多肽，當然，其相同(同源)或基本相同(同源)的多肽與所述蛋白多肽應具有相同或相似的生物活性或功能。當然，所述"干擾素"或者"人血清白蛋白"多肽還包括與所述蛋白多肽具有相同或相似生物活性或功能的突變形式。這些突變形式包括但并不限于，相對于天然蛋白的氨基酸序列有若干個(通常為l-50個，較佳地l-30個，更佳地l-20個，最佳地1-10個)氨基酸的缺失、插入和/或取代。因此，所述重組人血清白蛋白與干擾素a融合蛋白也包括了上述相同(同源)或基本相同(同源)多肽的重組融合蛋白，以及上述突變形式多肽的重組融合蛋白。此外，所述重組人血清白蛋白與干擾素a(較佳干擾素a-2b)融合蛋白的制備方法可以參考中國專利CN1405181、CN1583795或CN1896104，或者也可以通過市售直接獲得。在本發明液體藥物組合物中，所述治療有效量的重組人血清白蛋白與干擾素a融合蛋白的具體濃度(及劑量)可根據干擾素a、及其應用治療疾病的種類等因素所決定，本領域技術人員可以很方便地通過有限次的實驗確定。在所述整個液體藥物組合物中，所述重組人血清白蛋白與干擾素a(較佳干擾素a-2b)融合蛋白的濃度一般為0.1mg/ml~2.5mg/ml，優選0.5mg/ml1.8mg/ml，更優選0.8mg/ml1.5mg/ml(即每毫升液體藥物組合物中含有多少毫克的所述重組融合蛋白)；其中，所述重組融合蛋白的干擾素生物活性(比活性)優選2.57.5xl05IU/mg，更優選3.(K7.0xl05IU/mg，還要優選3.256.75x105IU/mg(即每毫克所述重組融合蛋白具有多少單位的干擾素生物活性)。發明人考察了在不同pH值條件下重組人血清白蛋白與干擾素a(較佳干擾素a-2b)融合蛋白的穩定性(是否發生降解或者聚合)，經過25"C士2'C存放3個月，通過SDS-PAGE電泳方法檢測發現，在pH5.5~8.5(更佳pH6.5~7.5，還要佳pH7.07.5)條件下重組人血清白蛋白與干擾素a(較佳干擾素a-2b)融合蛋白最為穩定。因此，在本發明液體藥物組合物中選用了pH值為5.58.5(更佳pH6.57.5，還要佳pH7.07.5)的緩沖液作為藥用輔料之一。所述pH值為5.58.5(更佳pH6.5~7.5，還要佳pH7.0~7.5)的緩沖液是藥學上或者人生理上可接受的，包括但不限于，磷酸緩沖液(磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液)、磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀緩沖液、磷酸氫二鈉_檸檬酸緩沖液、檸檬酸_檸檬酸鈉緩沖液、Tris-鹽酸緩沖液、乙酸-乙酸鈉緩沖液等。所述pH值為5.58.5(更佳pH6.57.5，還要佳pH7.0~7.5)的緩沖液的濃度應滿足兩個條件①所述緩沖液的濃度足以使整個液體藥物組合物的pH值維持在一個特定pH值(pH5.58.5，更佳pH6.57.5，還要佳pH7.07.5)±0.5(更佳±0.3，還要佳±0.2，最佳士O.l)個pH單位內；②所述緩沖液的濃度是人體可以接受的。一般，所述緩沖液的濃度優選5.0mM50mM，更優選10mM40mM，還要優選20mM~30mM。在本發明一個優選的實施方案中，所述緩沖液是pH5.58.5(更佳pH6.57.5，還要佳pH7.07.5)的磷酸緩沖液(磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液)，其濃度為5.0mM50mM(更佳10mM~40mM，還要佳20mM~30mM)。術語"溶液滲透壓維持劑"是指人生理上可耐受的，并且可以賦予所述液體藥物組合物適宜的滲透壓，使藥物更容易吸收。一般所述溶液滲透壓維持劑包括但不限于，多元醇(如丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇、聚乙二醇)、糖類(如葡萄糖、蔗糖、乳糖、海藻糖)、鹽類(如氯化鈉)等，或其組合。其中，優選蔗糖、葡萄糖、氯化鈉、或其組合。在本發明一個較佳的實施方案中，所述溶液滲透壓維持劑是蔗糖。更佳地，在所述整個液體藥物組合物中，其濃度為5.0mg/ml50mg/ml(還要佳10mg/ml30mg/ml)。在本發明另一個較佳的實施方案中，所述溶液滲透壓維持劑是葡萄糖。更佳地，在所述整個液體藥物組合物中，其濃度為5.0mg/ml~50mg/ml(還要佳10mg/ml30mg/ml)。在本發明一個更佳的實施方案中，所述溶液滲透壓維持劑是蔗糖與氯化鈉的組合。還要佳地，在所述整個液體藥物組合物中，氯化鈉的濃度為5.0mg/ml10.0mg/ml(最佳6.0mg/ml~8.0mg/ml)，蔗糖的濃度為5.0mg/ml50mg/ml(最佳10mg/ml3()mg/ml)。在本發明另一個更佳的實施方案中，所述溶液滲透壓維持劑是葡萄糖與氯化鈉的組合。還要佳地，在所述整個液體藥物組合物中，氯化鈉的濃度為5.0mg/ml10.0mg/ml(最佳6.0mg/ml~8.0mg/ml)，葡萄糖的濃度為5.0mg/ml~50mg/ml(最佳10mg/ml30mg/ml)。術語"藥用防腐劑"是本領域技術人員所熟知的，它的作用是防止或抑制病原微生物的生長。藥用防腐劑包括，但不限于，苯酚、硫柳汞、苯甲酸、山梨酸、對羥基苯甲酸酯類(尼泊金類)、苯甲醇、苯乙醇等，或其組合。藥用防腐劑的用量一般與防腐劑的種類，藥物的種類、劑型、pH值等多種因素有關。一般優選藥用防腐劑的濃度為0.01%3.0%(w/v)，即0.1mg/ml30mg/ml。在本發明一個優選的實施方案中，所述藥用防腐劑是苯甲醇。更優選，在所述整個液體藥物組合物中，其濃度為0.1%~1.0%(w/v);還要優選，其濃度為0.3%0.7%(w/v)，最優選，其濃度為0.4%0.6%(w/v)。術語"非離子表面活性劑"能降低液體表面張力，增加液體溶解度，改進藥物的吸收與利用。常用的非離子表面活性劑包括但不限于，聚山梨酯(如聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯80)、泊洛沙姆(如泊洛沙姆124、泊洛沙姆188、泊洛沙姆237、泊洛沙姆338、泊洛沙姆407)等，或其組合。在本發明一個優選的實施方案中，所述非離子表面活性劑是聚山梨酯80。更優選，在所述整個液體藥物組合物中，其濃度為0.01%~0.05%(w/v)(還要優選0.01%~0.03%(w/v))。在本發明另一個優選的實施方案中，所述非離子表面活性劑是泊洛沙姆188。更優選，在所述整個液體藥物組合物中，其濃度為1.0mg/ml~5.0mg/ml(還要優選1.0mg/ml3.0mg/ml)。優選地，本發明液體藥物組合物是由治療有效量(較佳O.lmg/ml2.5mg/ml，更佳0.5mg/ml1.8mg/ml，還要佳0.8mg/ml1.5mg/ml)的重組人血清白蛋白與干擾素a(較佳干擾素a-2b)融合蛋白、(較佳5.0mM50mM，更佳10mM40mM，還要佳20mM30mM)pH值為5.58.5(更佳pH6.5~7.5，還要佳pH7.07.5)的緩沖液、(較佳5mg/ml~50mg/ml，更佳10mg/ml30mg/ml)葡萄糖或(較佳5mg/ml~50mg/ml，更佳10mg/ml30mg/ml)蔗糖、(較佳0.01%~0.05%(w/v)，更佳0.01%~0.03%(\￥~))聚山梨酯80或(較佳1.0mg/ml5.0mg/ml，更佳1.0mg/ml3.0mg/ml)泊洛沙姆188、以及(較佳0.1%~1.0%(w/v)，更佳0.3%0.7%(w/v)，還要佳0.4%0.6%(w/v))苯甲醇組成的。更優選地，本發明液體藥物組合物是由治療有效量(較佳0.1mg/ml2.5mg/ml，更佳0.5mg/ml1.8mg/ml，還要佳0.8mg/ml~1.5mg/ml)的重組人血清白蛋白與干擾素a(較佳干擾素a-2b)融合蛋白、(較佳5.0mM50mM，更佳10mM40mM，還要佳20mM~30mM)pH值為5.58.5(更佳pH6.57.5，還要佳pH7.07.5)的緩沖液、(較佳5mg/ml50mg/ml，更佳10mg/ml30mg/ml)葡萄糖或(較佳5mg/ml50mg/ml，更佳10mg/ml30mg/ml)蔗糖、(較佳5.0mg/ml~10.0mg/ml，更佳6.0mg/ml~8.0mg/ml)氯化納、(較佳0.01%0.05%(w/v)，更佳0.01%0.03%(w/v))聚山梨酯80或(較佳1.0mg/ml5.0mg/ml，更佳1.0mg/ml~3.0mg/ml)泊洛沙姆9188、以及(較佳0.1%1.0%(w/v)，更佳0.3%0.7%(w/v)，還要佳0.4%0.6%(w/v))苯甲醇組成的。本發明液體藥物組合物中所述各組分所使用的濃度單位可以相互換算，例如1.0%(w/v)=1.0g/100ml=10mg/ml。因此，所附權利要求的范圍也覆蓋了其濃度單位的任何轉換方式。術語"穩定化"是指所述液體藥物組合物中的重組人血清白蛋白與干擾素a融合蛋白的降解、聚合、修飾(包括去糖基化、糖基化、氧化等)、生物活性等的變化處在可控制(或者可接受)的范圍之內，一般即所述液體藥物制劑還可以安全用于人體，并且相應的療效還能得到保證。在無菌密封的容器(優選預裝式注射器)中，本發明液體藥物組合物在28"C條件下較佳的儲存期為至少36個月，更佳至少30個月，還要佳至少24個月，最佳至少18個月。特別應該指出的是，發明人在進行所述液體藥物組合物的穩定性考察時發現，重組人血清白蛋白與干擾素a(較佳干擾素a-2b)融合蛋白和普通干擾素的穩定性考察有很大的不同，不能簡單地根據生物活性的測定結果來判斷該藥物組合物是否穩定。如發明人在進行6個月的加速試驗(25°C±2°C)時(實施例4)，配方4成品的生物活性在6個月時并沒有降低，反而比起始時增加IO倍以上(超出了正常檢測范圍)。經對該樣品進行SDS-PAGE與Western-blot分析后發現，重組人血清白蛋白與干擾素a-2b融合蛋白已有明顯降解，并產生了與普通干擾素分子量一致的分解片段，說明使用該配方的成品并不穩定。如在人體使用時，將會因這種降解產物(非融合干擾素分解片段)的高度生物活性而產生嚴重的副作用，并由于其分子量小而被機體迅速清除，這同時就意味著也失去了重組人血清白蛋白與干擾素a-2b融合蛋白"長效"的優勢。因此發明人設計了如表1的多個檢測項目來判斷所述重組人血清白蛋白與干擾素a融合蛋白的穩定性。表1重組人血清白蛋白與干擾素a融合蛋白穩定性實驗測定項目與方法<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>為了進一步驗證本發明液體藥物組合物"長效"的優勢，發明人將本發明實施例中配方1~3、配方712成品(注入預裝式注射器中)于28。C條件下保存2430個月，通過獼猴分別注射(SC或IV)不同劑量的上述藥物成品，在0、0.5、1、3、6、10、24、48、96、144、192、240、288、336小時分別取lml的加入抗凝劑(EDTA)的血(用于ELISA檢測)。血樣置冰浴上l小時，離心后取上清液，-2(TC保存待測定。用ELISA試劑盒(美國PBLBiomedicalLaboratories公司生產)測定血漿中融合蛋白含量，獲得單次用藥在獼猴體內的藥代動力學資料。本發明實施例中配方13、配方712成品的實驗結果類似，一次單劑量50300嗎/kg給藥，其血清濃度呈緩慢下降，半衰期為70-90小時，而文獻報道的普通干擾素的半衰期為3-8小時。由此顯示，本發明液體藥物組合物在28°<3條件下保存2430個月后，其生物活性與"長效"優勢都是穩定可靠的。本發明所述液體藥物組合物的劑型選自注射用水劑、噴霧劑、眼用液體制劑、鼻用液體制劑、外用溶液劑、口服液等，其中，優選注射用水劑。當所述液體藥物組合物為一種注射用水劑時，其具體給藥途徑選自皮下注射、皮內注射、肌肉注射、靜脈注射、靜脈滴注等，其中，優選皮下注射。由于干擾素(特別是重組人血清白蛋白與干擾素融合蛋白)的療效受到多種因素的影響，所以治療要個性化，包括劑型、劑量、療程的個性化，以達到良好的治療效果。在本發明的一個實施方案中，所述液體藥物組合物的活性成分為重組人血清白蛋白與干擾素a-2b融合蛋白，其劑型為注射用水劑，給藥途徑為皮下注射，治療慢性乙型肝炎或者慢性丙型肝炎時，一般推薦劑量為1.0-1.2mg/次(比活性優選2.57.5xl()5lU/mg，更優選3.07.0x105IU/mg，還要優選3.256.75xl()5lU/mg)，每14天一次，治療時間(療程)至少一年。本發明還提供了一種無菌密封的容器，它裝有所述穩定化的含有重組人血清白蛋白與干擾素a融合蛋白的液體藥物組合物。在一個較佳的實施方案中，所述容器選自玻璃安瓿瓶、玻璃瓶、塑料瓶、預裝式注射器等。考慮到使用時的安全、方便，在一個更佳的實施方案中，所述容器是一種預先注入的單劑量給藥或者多劑量給藥的注射器(預裝式注射器)。在一個還要佳的實施方案中，所述容器是一種預先注入的單劑量給藥的注射器(預裝式注射器)。下面將結合實施例進一步詳細地描述本發明。然而應當理解，列舉這些實施例只是為了起說明作用，而并不是用來限制本發明的范圍。實施例1重組人血清白蛋白與干擾素a-2b融合蛋白的制備具體方法參考中國專利CN1405181、CN1583795或CN1896104。本發明配制液體藥物組合物時，所使用的重組人血清白蛋白與干擾素a-2b融合蛋白(HSA-IFNa-2b)由浙江德清安平生物制藥有限公司提供。質檢報告分子量85.7kDa土8.5kDa，總蛋白濃度不低于1.5mg/ml，比活性不低于3.25x105IU/mg蛋白，純度不低于95.0%。實施例2含有重組人血清白蛋白與干擾素a-2b融合蛋白注射用水劑的配方實施例1的重組人血清白蛋白與干擾素a-2b融合蛋白(HSA-IFN(x-2b)與若干藥用輔料的配方如下配方1:HSA-IFNa-2b1.2mg，蔗糖20mg，泊洛沙姆1882.0mg，苯甲醇4.0mg，用20mMpH7.5的磷酸緩沖液加至1ml。配方2:HSA-IFNa-2b1.2mg，葡萄糖20mg，聚山梨酯800.2mg，苯甲醇6.0mg，用30mMpH6.5的磷酸緩沖液加至1ml。配方3:HSA-IFNa-2b1.2mg，氯化鈉7.0mg，蔗糖20mg，聚山梨酯800.2mg，苯甲醇5.0mg，用25mMpH7.2的磷酸緩沖液加至1ml。配方4:HSA-IFNa-2b1.0mg，氯化鈉7.0mg，蔗糖20mg，苯甲醇5.0mg，用25mMpH7.2的磷酸緩沖液加至1ml。配方5:HSA-IFNa-2b1.0mg，泊洛沙姆1882.0mg，苯甲醇5.0mg，用25mMpH7.0的磷酸緩沖液加至1ml。配方6:HSA-IFNa-2bl.Omg，葡萄糖20mg，苯甲醇5.0mg，用25mMpH7.0的磷酸緩沖液加至1ml。上述磷酸緩沖液(磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液)是用注射用水配制而成的。實施例3含有重組人血清白蛋白與干擾素a-2b融合蛋白注射用水劑的配制分別根據實施例2的配方16，先用較小體積的磷酸緩沖液溶解藥用輔料，再加入實施例1的重組人血清白蛋白與干擾素a-2b融合蛋白(HSA-IFNa-2b)，最后用相同濃度及pH值的磷酸緩沖液定容。過濾除菌后以lml/支的規格分別注入預裝式注射器(美國BDPharmaceuticalsystems的預灌封注射器)中(過濾和分裝在局部IOO級的環境中進行)，裝上注射器的推桿，貼標簽，制得含有重組人血清白蛋白與干擾素a-2b融合蛋白注射用水劑成品，用于實施例4的加速穩定性實驗。實施例4含有重組人血清白蛋白與干擾素a-2b融合蛋白注射用水劑的加速穩定性實驗(25X:土21C)12將配方6含有重組人血清白蛋白與干擾素a-2b融合蛋白注射用水劑(實施例3)在25卩±2"條件下(SPX-250C型恒溫恒濕培養箱，上海博訊醫療設備有限公司醫療設備廠)存放6個月，分別于O天、l個月、2個月、3個月、6個月取樣檢測，考察項目包括外觀、pH值、生物活性(比活性)、無菌檢測(表2、表3)。<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注-一_表示干擾素生物活性太高超出了正常檢測范圍。從實驗結果見表2與表3可知，配方5、配方6成品的干擾素生物活性(比活性)在3個月、6個月(25°C±2°C)時都有明顯下降；而配方13成品的干擾素生物活性(比活性)一直都較穩定；配方4成品在6個月(25°C±2°C)時干擾素生物活性(比活性)太高超出了正常檢測范圍，這一點很出乎發明人的意料。為了更好地考察配方4成品中重組融合蛋白的穩定性，發明人對于配方14成品在0天、6個月(25°C±2°C)時分別進行SDS-PAGE電泳與Western-blot的檢測(圖l、圖2)。從實驗結果圖1與圖2可知，配方13成品中的重組融合蛋白在6個月(25°C±2°C)時都很穩定，沒有出現條帶異常。而對配方4成品進行Western-blot分析后發現，重組融合蛋白已有明顯降解，并產生了與普通干擾素a-2b分子量一致的分解片段，說明在該配方條件下產品并不穩定。如在人體使用時，將會因這種降解產物(非融合干擾素a-2b分解片段)的髙生物活性而產生嚴重的副作用，并由于其分子量小而被機體迅速清除，這同時就意味著也失去了重組人血清白蛋白與干擾素a-2b融合蛋白"長效"的優勢。因此，綜合以上實驗結果，發明人確定了本發明液體藥物組合物是由治療有效量的重組人血清白蛋白與干擾素a(較佳干擾素a-2b)融合蛋白、pH值為5.58.5(更佳pH6.57.5、還要佳pH7.07.5)的緩沖液(優選磷酸緩沖液)、溶液滲透壓維持劑(優選蔗糖、或葡萄糖，更優選蔗糖與氯化鈉組合、或葡萄糖與氯化鈉組合)、非離子表面活性劑(優選聚山梨酯80、或泊洛沙姆188)、以及藥用防腐劑(優選苯甲醇)組成的。實施例5含有重組人血清白蛋白與干擾素a-2b融合蛋白注射用水劑的配方及其配制實施例1的重組人血清白蛋白與干擾素a-2b融合蛋白(HSA-IFNa-2b)與若干藥用輔料的配方如下配方7:HSA-IFNa-2b1.0mg，蔗糖10mg，聚山梨酯800.1mg，苯甲醇6.0mg，用10mMpH7.2的磷酸緩沖液加至1ml。配方8:HSA-IFNa-2b1.0mg，蔗糖40mg，聚山梨酯800.4mg，苯甲醇6.0mg，用20mMpH7.2的磷酸緩沖液加至1ml。配方9:HSA-IFNa-2b1.0mg，葡萄糖10mg，泊洛沙姆1884.0mg，苯甲醇5.0mg，用30mMpH7.2的磷酸緩沖液加至1ml。配方10:HSA-IFNa-2b1.2mg，葡萄糖40mg，泊洛沙姆1881.0mg，苯甲醇5.0mg，用40mMpH7.2的磷酸緩沖液加至1ml。配方lhHSA-IFNa-2b1.2mg，氯化鈉6.0mg，葡萄糖30mg，聚山梨酯800.3mg，苯甲醇4.0mg，用25mMpH7.0的磷酸緩沖液加至1ml。配方12:HSA-IFNa-2b1.2mg，氯化鈉8.0mg，蔗糖30mg，，泊洛沙姆1883.0mg,苯甲醇4.0mg，用15mMpH7.0的磷酸緩沖液加至1ml。14上述磷酸緩沖液(磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液)是用注射用水配制而成的。分別根據上述配方712，先用較小體積的磷酸緩沖液溶解藥用輔料，再加入實施例1的重組人血清白蛋白與干擾素a-2b融合蛋白(HSA-IFNa-2b)，最后用相同濃度及pH值的磷酸緩沖液定容。過濾除菌后以lml/支的規格分別注入預裝式注射器(美國BDPharmaceuticalsystems的預灌封注射器)中(過濾和分裝在局部100級的環境中進行)，裝上注射器的推桿，貼標簽，制得含有重組人血清白蛋白與干擾素a-2b融合蛋白注射用水劑成品，用于實施例6的長期穩定性實驗。實施例6含有重組人血清白蛋白與干擾素a-2b融合蛋白注射用水劑的長期穩定性實驗(2"C81C)將配方712含有重組人血清白蛋白與干擾素(x-2b融合蛋白注射用水劑(實施例5)在2'C8"C條件下(BC/B-518A型海爾冷柜，海爾電器有限公司)存放24個月，分別于0天、l個月、6個月、12個月、24個月取樣檢測，考察項目包括外觀、pH值、生物活性(比活性)、無菌檢測(表4、表5)，SDS-PAGE電泳(圖3、圖4)。表4分別按照配方79制得的注射用水劑成品的穩定性實驗(2°C8°C)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表5分別按照配方1012制得的注射用水劑成品的穩定性實驗(2°C~8°C)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>從實驗結果表4與表5、圖3與圖4可知，在2。C8。C條件下經過24個月，配方712成品的各項檢測指標都很穩定。該實驗結果表明在2'C8t:條件下配方712成品(液體藥物組合物)至少在24個月內，其穩定性是可以得到保證的，可以安全有效地運用到臨床醫療中。盡管本發明描述了具體的例子，但是有一點對于本領域技術人員來說是明顯的，即在不脫離本發明的精神和范圍的前提下可對本發明作各種變化和改動。因此，所附權利要求覆蓋了所有這些在本發明范圍內的變動。權利要求1.一種穩定化的液體藥物組合物，其特征在于，它是由治療有效量的重組人血清白蛋白與干擾素α融合蛋白、pH值為5.5～8.5的緩沖液、溶液滲透壓維持劑、非離子表面活性劑、以及藥用防腐劑組成的。2.根據權利要求1所述的液體藥物組合物，其特征在于，所述緩沖液是pH值為5.58.5的磷酸緩沖液。3.根據權利要求1或2所述的液體藥物組合物，其特征在于，所述緩沖液的濃度為5.0mM50mM。4.根據權利要求1所述的液體藥物組合物，其特征在于，所述重組人血清白蛋白與干擾素a融合蛋白中的干擾素a選自干擾素a-2a、干擾素a-lb、或干擾素a-2b。5.根據權利要求1所述的液體藥物組合物，其特征在于，所述藥用防腐劑是苯甲醇，在所述整個液體藥物組合物中，所述苯甲醇的濃度為1.0mg/ml10mg/ml。6.根據權利要求1所述的液體藥物組合物，其特征在于，所述溶液滲透壓維持劑是蔗糖，在所述整個液體藥物組合物中，所述蔗糖的濃度為5.0mg/ml50mg/ml。7.根據權利要求1所述的液體藥物組合物，其特征在于，所述溶液滲透壓維持劑是葡萄糖，在所述整個液體藥物組合物中，所述葡萄糖的濃度為5.0mg/ml50mg/ml。8.根據權利要求1所述的液體藥物組合物，其特征在于，所述非離子表面活性劑是聚山梨酯80，在所述整個液體藥物組合物中，所述聚山梨酯80的濃度為0.1mg/ml~0.5mg/ml。9.根據權利要求l所述的液體藥物組合物，其特征在于，所述非離子表面活性劑是泊洛沙姆188，在所述整個液體藥物組合物中，所述泊洛沙姆188的濃度為1.0mg/ml5.0mg/ml。10.—種無菌密封的容器，其特征在于，它含有權利要求l-9任一項所述穩定化的液體藥物組合物。全文摘要本發明公開了一種穩定化的含有重組人血清白蛋白與干擾素α融合蛋白的液體藥物組合物，它是由治療有效量的重組人血清白蛋白與干擾素α融合蛋白、pH值為5.5～8.5的緩沖液、溶液滲透壓維持劑、非離子表面活性劑、以及藥用防腐劑組成的。本發明還公開了一種無菌密封的容器，它裝有所述穩定化的含有重組人血清白蛋白與干擾素α融合蛋白的液體藥物組合物。文檔編號A61K9/00GK101664378SQ20081021577公開日2010年3月10日申請日期2008年9月6日優先權日2008年9月6日發明者萍楊申請人:浙江省德清安平生物制藥有限公司