專利名稱：具有增強免疫功能作用的組合物及其用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及的海洋蛋白肽是以來源廣泛的海洋魚類(三文魚、大馬哈魚、羅非魚等)的魚肉經為原料，通過水解制造出分子量在100～2000D的寡肽配伍劑，具有容易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好等特點。已有研究表明，海洋蛋白肽單獨作用具有增強免疫功能的作用。
本發明涉及的核苷酸是核糖核酸(RNA)為原料經酶法降解生產的，純度在99％以上的5’AMP∶5’CMP∶5’GMPNa2∶5’UMPNa2按照22.8∶26.6∶30.2∶20.4配比而成的5’核苷酸混合物。之前的研究也發現，單獨補充核苷酸能緩解無核酸飼料喂養小鼠引起的免疫功能抑制，起到增強機體的免疫功能的作用。
而迄今為止，還沒有關于海洋蛋白肽與核苷酸配伍劑在增強免疫功能藥品、增強免疫功能保健食品以及增強免疫功能食品中應用的任何報道。
發明內容
本發明旨在通過進一步研究，提供海洋蛋白肽與核苷酸配伍劑在制備免疫調節藥物或食品中的用途，為通過飲食改善機體免疫功能提供一種新途徑。
本發明的技術解決方案是一種具有增強免疫功能的組合物，其特征在于由海洋蛋白肽和核苷酸按重量比為45∶8的比例配制而成。
一種具有增強免疫功能作用的組合物作為制備增強免疫功能藥物、增強免疫功能保健食品或增強免疫功能食品的用途。
其中所述的藥物、保健食品為粉劑、顆粒劑、膠囊、片劑、丸劑或口服液。
其中所述的食品為淀粉制品、乳及乳制品、豆制品、烘焙制品。
具體實施方案 以下通過動物實驗來闡明本發明所述海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑在增強免疫功能方面的作用效果。
1.材料和方法 1.1受試樣品海洋蛋白肽，由北京中食海氏生物技術有限公司制備。核苷酸(5’AMP∶5’CMP∶5’GMPNa2∶5’UMPNa2＝22.8∶25.8∶30.2∶20.4)由大連珍奧公司提供。將海洋蛋白肽和核苷酸按重量比為45∶8的比例配制而成。
1.2實驗動物清潔級雌性Balb/c小鼠160只，6～8周齡，18～22克，由北京大學醫學部實驗動物中心提供，批準號為SCXK11-00-0004，清潔級動物房飼養，飼養環境溫度25℃，濕度60％RH。
1.3檢驗指標小鼠脾臟和胸腺重；抗體形成細胞(IgM-PFC/脾)測定，采用Jerne改良玻片法；血清抗體滴度，采用血清半數溶血值HC50；遲發型變態反應(DTH)，采用足跖腫脹法測定；ConA刺激的小鼠脾淋巴細胞增殖功能，采用MTT法；巨噬細胞吞噬功能的檢測，采用碳粒廓清法及腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞(半體內法)測定；NK細胞活性測定，采用乳酸脫氫酶(LDH)測定法。
1.4實驗方法動物分成空白對照組，海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑高、中和低劑量組。將海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑配成高、中、低三個濃度，劑量分別為0.795g/kgBW、0.265g/kgBW和0.0883g/kgBW，受試物按不同比例摻于飼料中，空白對照組給予正常飼料。每周稱量體重以及進食量。實驗期間動物自由進食、飲水。4周后實驗結束時按照衛生部《保健食品功能學評價程序和檢驗方法》進行上述指標檢測。
1.5統計方法 所有結果以均數±標準差表示，采用SPSS11.0軟件進行單因素方差分析，比較各實驗組與對照組的差異。但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F值＜F0.05，結論各組均數間差異無顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計；對非正態或方差不齊的數據進行適當的變量轉換，待滿足正態或方差齊要求后，用轉換后的數據進行統計；若變量轉換后仍未達到正態或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統計。
1.6結果判定依據 《保健食品檢驗與評價技術規范》(2003版)規定在細胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細胞功能、NK細胞活性四個方面任兩個方面結果陽性，可判定該受試樣品具有增強免疫功能功能作用。其中細胞免疫功能測定項目中的兩個實驗結果均為陽性，或任一個實驗的兩個劑量組結果陽性，可判定細胞免疫功能測定結果陽性。體液免疫功能測定項目中的兩個實驗結果均為陽性，或任一個實驗的兩個劑量組結果陽性，可判定體液免疫功能測定結果陽性。單核-巨噬細胞功能測定項目中的兩個實驗結果均為陽性，或任一個實驗的兩個劑量組結果陽性，可判定單核-巨噬細胞功能結果陽性。NK細胞活性測定實驗的一個以上劑量組結果陽性，可判定NK細胞活性結果陽性。
2.結果 2.1海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑對小鼠免疫器官重量的影響 由表1可見，小鼠的初始體重各劑量組與對照組比較差異無顯著性，經口給予小鼠不同劑量的配伍劑4周后，配伍劑中、低劑量組的脾臟/體重比值明顯升高(P＜0.05)；而各劑量組小鼠的體重、胸腺/體重的比值與對照組比較差異均無顯著性，即配伍劑對小鼠體重和胸腺相對重量無影響(P＞0.05)。
表1海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑對小鼠體重及免疫器官相對重量的影響(x±s)
*與正常對照組比較有顯著性差異，P＜0.05 2.2海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑對小鼠細胞免疫功能的影響 由表2可見，經口給予小鼠不同劑量的配伍劑4周后，與正常組比較，配伍劑低劑量組能顯著增強ConA誘導的小鼠淋巴細胞轉化能力(P＜0.05)，配伍劑中、低劑量組能顯著增強小鼠遲發型變態反應能力(P＜0.05)。上述結果表明海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑對小鼠細胞免疫功能中的遲發性變態反應(DTH)和ConA刺激的T淋巴細胞增殖有明顯的增強作用。
表2海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑對小鼠細胞免疫功能的影響(x±s)
*與正常對照組比較有顯著性差異，P＜0.05 2.3海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑對小鼠體液免疫功能的影響由表3可見，經口給予小鼠不同劑量的配伍劑4周后，與正常對照組比較，配伍劑中、低劑量組能顯著提高小鼠抗體生成細胞數(P＜0.05)。各劑量組對小鼠半數溶血值也有所提高，但差異無顯著性(P＞0.05)。上述結果表明海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑可明顯提高小鼠抗體生成細胞的數量，對小鼠血清抗體滴度沒有明顯影響；結果提示海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑對小鼠體液免疫功能有增強的作用。
表3海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑對小鼠體液免疫功能的影響(x±s)
*與正常對照組比較有顯著性差異，P＜0.05 2.4海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑對小鼠巨噬細胞吞噬功能的影響由表4可見，經口給予小鼠不同劑量的配伍劑4周后，與正常組比較，吞噬率和吞噬指數差異無顯著性(P＞0.05)，即對小鼠巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力無影響。小鼠碳粒廓清指數(α)無顯著性差異(P＞0.05)，即對小鼠碳粒廓清能力無影響。
表4海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑對小鼠單核-巨噬細胞吞噬功能的影響(x±s)
2.5海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑對小鼠自然殺傷(NK)細胞活性的影響由表5所示，經口給予小鼠不同劑量的配伍劑4周后，與正常組比較，小鼠NK細胞活性有所增強，但差異無顯著性(P＞0.05)，即對小鼠NK細胞活性無影響。
表5海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑對小鼠NK細胞活性的影響(x±s)
3.結論 經口給予小鼠不同劑量的海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑4周后，與正常組比較，配伍劑低劑量組對脾臟體比、ConA誘導的小鼠淋巴細胞增殖能力、遲發型變態反應(DTH)程度、抗體生成細胞功能(IgM-PFC)均有顯著提高；配伍劑中劑量組對脾臟體比、遲發型變態反應(DTH)程度、抗體生成細胞功能(IgM-PFC)有顯著提高。各劑量組對小鼠體重增長、胸腺臟體比、單核-巨噬細胞吞噬功能以及NK細胞活性均無影響。根據《保健食品檢驗與評價技術規范》對增強免疫功能保健食品的判定標準可知，海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑具有增強免疫功能的功能。
權利要求
1.一種具有增強免疫功能作用的組合物，其特征在于由海洋蛋白肽和核苷酸按重量比為45∶8的比例配制而成。
2.根據權利要求1所述的具有增強免疫功能作用的組合物，其特征在于所述的海洋蛋白肽是以來源廣泛的海洋魚類(三文魚、大馬哈魚、羅非魚等)的魚肉經為原料，通過水解制造出分子量在100～2000D的寡肽配伍劑。
3.根據權利要求1所述的具有增強免疫功能作用的組合物，其特征在于所述的核苷酸是核糖核酸(RNA)為原料經酶法降解生產的，純度在99％以上的5’AMP∶5’CMP∶5’GMPNa2∶5’UMPNa2按照22.8∶26.6∶30.2∶20.4配比而成的5’核苷酸混合物。
4.一種如權利要求1所述的具有增強免疫功能作用的組合物，作為制備增強免疫功能藥物、增強免疫功能保健食品或防輻射食品的用途
5.按權利要求4，其中所述的增強免疫功能藥物或增強免疫功能保健食品為粉劑、顆粒劑、膠囊、片劑、丸劑或口服液。
6.按權利要求4，其中所述的增強免疫功能食品為淀粉制品、乳及乳制品、豆制品或烘焙制品。
全文摘要
本發明公開一種具有增強免疫功能作用的組合物，是由海洋蛋白肽和核苷酸按重量比為45∶8的比例配制而成，作為制備增強免疫功能藥物、增強免疫功能保健食品或增強免疫功能食品的用途。所得制劑具有容易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好等特點。本發明制劑可明顯增強小鼠遲發性變態反應(DTH)能力和ConA刺激的T淋巴細胞增殖；同時可明顯增加抗體生成細胞數量。上述結果表明海洋蛋白肽與核苷酸配伍劑對免疫功能具有增強作用。
文檔編號A61K31/7072GK101559214SQ200910011720
公開日2009年10月21日 申請日期2009年5月27日 優先權日2009年5月27日
發明者恕 李, 勇 李, 鋒 董 申請人:珍奧集團股份有限公司