專利名稱：：包含鞘磷脂的脂質體系統的制作方法
技術領域：
：本發明涉及脂質體
技術領域：
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背景技術：
：除了其他應用之外，脂質體作為藥物載體用于經由多種機制進行遞送。為此，使用了各種類型的脂質體，包括小單層囊泡(SUV)、大單層囊泡(LUV)、多層囊泡(MLV)、多泡囊泡(MVV)、大多泡囊泡(LMVV，有時也稱為巨大多泡囊泡“GMV”)、寡層囊泡(OLV)等等。本領域的技術人員理解的是，LMVV與各種尺寸的具有“洋蔥樣”MLV結構的單層囊泡稍有不同。在LMVV中，相對于脂質的量的形成水相的水性介質的量多于MLV中的情況，這可能使更多量的藥物裝載入水相中，即與尺寸分布類似的MLV系統相比具有更高的藥物/脂質摩爾比。該差異已由Grant等，2004[Anesthesiology101(1)133-7，2004]和美國專利6，162，462例證。已經發現MLV與LMVV的結構差異不僅能夠使更多量的藥物裝載入脂質體中，而且延長了藥物從LMVV系統的釋放。具體而言，美國專利6，162，462公開了脂質體布比卡因組合物，其中布比卡因通過跨膜硫酸銨梯度裝入，所述脂質體是巨大多泡囊泡(GMV，LMVV的異名)，在所述脂質體組合物中包封的藥物與脂質的摩爾比為至少1.0。US6，162，462的脂質體中包封的具體藥物是兩親性止痛藥布比卡因(BUP)。這些裝載了布比卡因的LMVV顯示出對小鼠和人提供了優異的鎮痛作用[Grantetal.2004和US6，162，462，同上]。然而，利用這些LMVV仍未解決的現象在于在4°C或室溫保存期間從LMVV泄露布比卡因。因此，一段時間之后，系統中包含游離藥物(其量高于藥物MTD)，施用包含該游離藥物的脂質體系統可能導致毒性和有害的副作用(源自與高含量的游離藥物接觸)、不利的藥物代謝動力學和較短的治療效果持續時間。因此，本領域需要提供一種能夠減少或防止在保存期間藥物自包封該藥物的脂質體泄露的系統。
發明內容本公開基于以下發現如果脂質體膜包含鞘磷脂，而且LMVV位于與脂質體內水性介質處于等滲平衡的水性介質中，則裝載有大量兩親性藥物(布比卡因，BUP)的大多泡囊泡(LMVV)在減少BUP泄露方面能夠得到穩定。因此，本公開根據其第一方面提供一種脂質體系統，所述脂質體系統包括水性介質，在所述水性介質中分散有脂質體，所述脂質體在其脂質體內水性區室中包封至少一種活性劑，所述水性介質與所述脂質體內水性區室處于等滲平衡，所述脂質體具有包含形成脂質體的脂質的膜，所述形成脂質體的脂質中的至少一種是鞘磷脂(SPM)，所述脂質體系統相比于不含SPM的同種脂質體(S卩，形成脂質體的膜中不含SPM)具有更大的穩定性。在一個實施方式中，所述脂質體系統在長期保存期間穩定，所述穩定性的特征在于在所述保存之后所述水性介質中存在不超過30%的所述至少一種活性劑。本公開根據其第二方面還提供一種保存脂質體的方法，所述脂質體在其脂質體內水性區室中包封至少一種活性劑，所述脂質體具有包含形成脂質體的脂質的膜，至少一種形成脂質體的脂質是鞘磷脂(SPM)，所述方法包括形成脂質體系統，在所述脂質體系統中所述脂質體分散在與所述脂質體的脂質體內水性區室處于等滲平衡的水性介質中；和保存所述脂質體系統，所述脂質體系統相比于不含SPM的同種脂質體具有更大的穩定性。本公開的一些方面還提供本文中所定義的脂質體系統用于制備藥物或診斷組合物的應用；以及所定義的脂質體系統用于醫療狀況的治療或用于醫療狀況的診斷。此外，本公開的一個方面提供一種藥物或診斷組合物，所述藥物或診斷組合物包含本文中所定義的脂質體系統和至少一種生理上可接受的載體。進而本公開提供一種用于治療或診斷醫療狀況的方法，所述方法包括向對象施用一定量的本文中所定義的脂質體系統。在一個優選實施方式中，所述活性劑是兩親性化合物，通過主動裝載(remoteloading)技術裝載入脂質體中；SPM是合成或半合成的C16或C18SPM，所述脂質體是大多泡囊泡(LMVV)。本公開的具體脂質體系統包括由至少氫化大豆卵磷脂(HSPC)、C16SPM、膽固醇和包封的BUP的組合形成的LMVV。為理解本發明并領會如何實際實施本發明，現將通過僅非限制性實例的方式，參照如下附圖對實施方式進行說明，附圖中圖IAIB是顯示在4°C(圖1A)或37°C(圖1B)保存期間，布比卡因(BUP)從具有不同脂質組成(設定各自的BUP與磷脂的摩爾比)的大多泡囊泡(LMVV)中釋放的圖示，所述大多泡囊泡利用通過跨膜硫酸銨(AQ梯度驅動的主動裝載而已經裝載入BUP。圖2A2B是顯示在4°C(圖2A)或37°C(圖2B)保存期間，布比卡因(BUP)從具有不同脂質組成(設定各自的BUP與磷脂的摩爾比)的大多泡囊泡(LMVV)中釋放的圖示，所述大多泡囊泡利用通過跨膜醋酸鈣(CA)梯度驅動的主動裝載而已經裝載入BUP。圖3A;3B是顯示在4°C(圖3A)或37°C(圖3B)保存期間，布比卡因(BUP)從具有不同脂質組成(HSPC/CH0L6/4摩爾比；HSPC/C16SPM/CH0L3/3/4摩爾比；和HSPC100/CHOL6/4摩爾比，設定各組成的BUP與磷脂的摩爾比)的LMVV中釋放的圖示，所述LMVV使用被動裝載法已經裝載入BUP。圖4A4C是顯示使用表8中標示為制劑18的各脂質體系統(在附圖中用對應的制劑編號“X”標示為“lipX”)的小鼠鎮痛作用的持續時間的圖示，圖4A顯示脂質體BUP或其游離態的注射體積的效果，BUP的量為恒定的6mg/小鼠；圖4B顯示5種不同的LMVV制劑的效果，BUP的量為恒定的3mg；圖4C描述八種不同的LMVV制劑(表8)在^ig/小鼠的劑量時的對比。圖5A5F是比較表8中標示的5種不同的LMVV制劑(圖5A5E中的“lipχ”)的兩種不同劑量的BUPCMg/小鼠和6mg/小鼠)，以及兩種不同量(0.375mg/小鼠和0.75mg/小鼠)的非包封(游離)的BUP(圖5F中)的鎮痛作用持續時間的圖示；圖5A比較lip2(3mgBUP/小鼠和6mgBUP/小鼠)的效果，圖5B比較lip3(3mgBUP/小鼠和6mgBUP/小鼠)的效果，圖5C比較lip4CBmgBUP/小鼠和4.5mgBUP/小鼠)的效果，圖5D比較lip5(3mgBUP和6mgBUP)的效果，圖5E比較lip8(3mgBUP/小鼠和6mgBUP/小鼠)的效果，圖5F比較使用兩種體積(150μ1和300μ1)在0.375mg/小鼠時和使用150μ1體積在0.75mg/小鼠時的游離(非脂質體)BUP的效果。圖6是顯示包含HSPCC16SPM膽固醇[3/3/4]3mgBUP的LMVV禾口Grantetal.2004描述的LMVV以及游離的BUP0.75mg/小鼠(最大耐受劑量，MTD)在20小時之后的體內鎮痛作用的圖示。圖7是顯示包含HSPCC16SPM膽固醇[3/3/4]3mgBUP-LMVV的LMVV和游離的BUP0.75mg/小鼠(最大耐受劑量，MTD)在40小時之后的體內鎮痛作用的圖示.圖8A8E是比較當保存在各種保存介質(鹽水、0.5%BUP或2.0%BUP)中時按原樣經由AS跨膜裝載有布比卡因的HSPC100/C16SPM/CH0L(3/3/4摩爾比)LMVV在4°C于標示的保存時間期間的游離布比卡因的水平的變化(以保存介質中的％表示)的圖示。具體實施例方式本公開基于以下理解諸如US6，162，462和Grantetal.(Grantetal.2004，同上)中描述的那些等現有的布比卡因脂質體制劑在低溫下進行長期保存期間存在泄漏的趨勢，這可能在給需要該藥物的對象進行施用時導致中毒的風險。這些布比卡因脂質體制劑在大多泡囊泡(LMVV，在US6，162,462中稱為巨大多泡囊泡，GMV)中包含的藥物/磷脂比很高(>0.5摩爾/摩爾)，但是在保存之后，發現大量的先前包封的藥物存在于外部介質中。因此，設計了一種新型的脂質體系統，在這種脂質體系統中，與迄今為止現有的布比卡因脂質體制劑相比，在脂質體外部的介質中的游離布比卡因的量在4°C進行長期保存后明顯減少。還發現，盡管所述脂質體系統在4°C保存期間是穩定的，但在生理條件下(即，在37°C時)，布比卡因以可控的持久的速率從脂質體中釋放從而獲得長期(持久的)鎮痛作用。具體而言，已經發現，在脂質體雙層中包含用于形成脂質體雙層的全部磷脂的至多75%的量或全部脂質(包含約33摩爾％的膽固醇)的50%的量的鞘磷脂的脂質體減少了泄漏量，而且沒有損害布比卡因在37°C從脂質體中的釋放率并且沒有損害藥物在脂質體中的高裝載。因此，根據本公開的第一方面，本公開提供一種脂質體系統，所述脂質體系統包括水性介質，在所述水性介質中分散有脂質體，所述脂質體在其脂質體內水性區室中包封至少一種活性劑，所述水性介質與所述脂質體內水性區室處于等滲平衡，所述脂質體具有包含形成脂質體的脂質的膜，所述形成脂質體的脂質中的至少一種是鞘磷脂(SPM)，所述脂質體系統是穩定的。已經發現，包含SPM的脂質體的穩定性明顯高于在其脂質膜中不含SPM的脂質體的穩定性。脂質體系統的穩定性也根據長期保存性確定，所述穩定性的特征在于在所述保存之后所述水性介質中存在不超過30%，有時不超過20%，甚至不超過10%的所述系統的所述至少一種活性劑。正如本文中使用的，術語“脂質體系統”表示包含形成至少一種脂質體并封住至少一個脂質體內水性區室的有組織集合的脂質的系統。除了脂質體之外，所述系統還包含其中分散或懸浮所述脂質體的水性介質。所述水性介質是具有所期望的滲透壓摩爾濃度和離子濃度的任何水基緩沖液，應當理解為包括各種生理上可接受的緩沖液。緩沖系統通常是弱酸及其可溶性鹽的混合物，如檸檬酸鈉/檸檬酸；或二元酸的單陽離子或雙陽離子鹽，如酒石酸氫鉀；酒石酸氫鈉、磷酸/磷酸二氫鉀和磷酸/磷酸氫二鈉。弱酸緩沖液是具有47的恒定的pH值的緩沖溶液，弱堿緩沖液是具有710的恒定的pH值的緩沖溶液。可用于制造本公開的水性介質的緩沖液的一些非限制性實例包括生理鹽水(0.9%NaCl)、磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)、蔗糖緩沖液、組氨酸緩沖液等，PH設定在約48，或5.57(如通常用于脂質體藥物遞送系統)。在一個實施方式中，所述水性介質包含一定量的游離活性劑，水性介質中存在所述游離活性劑可實現或參與形成所述等滲平衡。游離活性劑的量確定為以致形成所述等滲平衡。如本文中的實例所示，水性介質中游離試劑的存在也減少了試劑從脂質體中的泄露(這比得上水性介質中不含游離藥物的相同制劑)。在水性介質中分散有脂質體。術語“分散”用于表示脂質體在水性介質中的分布或懸浮。正如所知的，脂質體由以下討論的包含形成脂質體的脂質的脂質雙層和水性脂質體內核心構成。根據本公開，脂質體外部的水性介質和脂質體內水性區室處于等滲平衡。所述等滲平衡應當理解為意指水性介質與脂質體內水性區室的介質具有相似的滲透壓摩爾濃度，相似性定義為滲透壓摩爾濃度差不超過50m0Smole。根據一個實施方式，所述水性介質和所述脂質體內水相的滲透壓摩爾濃度為約50m0sm/kg約600m0sm/kg，或甚至為約250m0sm/kg約550m0sm/kg。等滲平衡可通過用具有與脂質體內水性區室相似的滲透壓摩爾濃度的緩沖溶液洗滌包封活性劑的脂質體獲得。具體而言，一旦活性劑裝載入脂質體中，未被包封的試劑可由選擇的緩沖溶液洗去。脂質體的膜是雙層膜，可制備為包含各種生理上可接受的形成脂質體的脂質。正如本文中使用的，術語“形成脂質體的脂質”用來主要表示甘油磷脂和鞘磷脂。甘油磷脂具有甘油骨架，其中，首基處的至少一個、優選兩個羥基被酰基、烷基或烯基鏈、磷酸酯基團的一種或兩種、或以上基團的任何組合和/或以上基團的衍生物取代，并且可以在首基處包含化學反應性基團(例如胺、酸、酯、醛或醇)，由此使脂質具有極性首基。鞘磷脂由1位上連接有磷酰膽堿部分的神經酰胺單元構成，因而實際上為N-酰基鞘氨醇。鞘磷脂中的磷酰膽堿部分構成鞘磷脂的極性首基。在形成脂質體的脂質中，酰基鏈的長度通常為14約M個碳原子，并具有為完全氫化、部分氫化或非氫化脂質的不同的飽和度。此外，脂質基質可以是天然來源的、半合成的或者全合成的脂質，并且可以是電中性的、帶負電的或帶正電的。形成脂質體的甘油磷脂的實例包括但不限于甘油磷脂、磷脂酰甘油(PG)，包括二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)；磷脂酰膽堿(PC)，包括蛋黃磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)U-棕櫚酰-2-油酰磷脂酰膽堿(POPC)、氫化大豆磷脂酰膽堿(HSPC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)；磷脂酸(PA)、磷脂酰肌醇(PI)和磷脂酰絲氨酸(PS)。正如所知的，形成脂質體的脂質還可以包括陽離子脂質(單陽離子或多陽離子脂質)。陽離子脂質通常由親脂性部分構成，例如固醇或同一甘油骨架，兩個酰基或兩個烷基，或者一個酰基和一個烷基鏈向其貢獻兩親性分子的疏水區域，由此形成具有整體上的凈正電荷的脂質。優選的是，脂質的首基帶正電。單陽離子脂質例如可包括1，2-二肉豆蔻酰-3-三甲基銨丙烷(DMTAP)、1，2-二油烯氧基-3-(三甲基氨基)丙烷(D0TAP)、N-[l-(2，3-二(十四烷氧基))丙基]_N，N-二甲基-N-羥乙基溴化銨(DMRIE)、N-[1-(2，3-二油烯氧基)丙基]-N，N-二甲基-N-羥乙基-溴化銨(DORIE)、N-[l-(2，3-二油烯氧基)丙基]-N，N,N-三甲基氯化銨(DOTMA)、3β[N-(N'，N'-二甲基氨基乙烷)氨基甲酰基]膽固醇(DC-Chol)和二甲基-二(十八烷基)溴化銨(DDAB)。多陽離子脂質可包括與單陽離子脂質相似的親脂性部分，其上連接精胺或亞精胺。這些包括但不局限于N-[2-[[2，5-雙(3-氨丙基)氨基]-1-氧戊基]氨基]乙基]-N，N-二甲基-2，3-雙[(1-氧-9-十八碳烯基)氧基]-1-丙銨(DOSPA)和神經酰胺氨基甲酰基精胺(CCS)。陽離子脂質可形成衍生的磷脂的一部分，例如，中性脂質二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)與聚賴氨酸衍生，從而形成陽離子脂質聚合物。根據本公開，形成脂質體的脂質至少包括鞘磷脂。本文中使用的術語“鞘磷脂”或“SPM”表示與磷酰膽堿基團結合的任何N-酰基鞘氨醇，所述磷酰膽堿基團形成鞘磷脂的極性首基(N-酰基鞘氨醇磷酰膽堿)。與鞘氨醇的伯氨基連接的酰基鏈可以是飽和的或不飽和的，支化的或不支化的。在一個實施方式中，酰基鏈包含12M個碳原子(C12C24)，有時為1420個碳原子。在一些優選實施方式中，SPM是C16:0或C18:0鞘磷脂，S卩，飽和的C16或C18SPM。SPM優選是合成的或半合成的SPM，即，天然的SPM的衍生物，并且可包括天然的D-赤式(2S，3R)異構體和非天然的L-蘇式(2S，3S)異構體，不過前者(也就是天然的異構體)是優選的。另外，在本公開的情況下，鞘磷脂也用于表示對應的二氫物種，S卩，與本文中如上限定的SPM對應的任何二氫鞘磷脂(DHSM)。在一個實施方式中，所述脂質體系統包含的脂質體膜中的SPM的含量為所述膜中的全部磷脂(形成脂質體的脂質)的25摩爾％75摩爾％，或在包含膽固醇時為全部脂質的約50摩爾％。在另一個實施方式中，除SPM之外的所述形成脂質體的脂質與所述SPM的摩爾比為1121，與本公開使用的SPM無關。通常，形成脂質體的脂質在組裝為脂質體膜時具有的固體有序相(SO)到液體無序相(LD)的相變溫度具有限定*Tm>37°C的特征溫度。Tm是SO至LD相變溫度范圍內相變的熱容量發生最大變化時的溫度。令人感興趣的是，已經發現而且如下所示，固體有序相到液體無序相的Tm為約53°C的HSPC與Tm為約41.4°C的C16SPM的組合令人意外地形成了穩定的脂質體系統，也就是說，與缺少C16SPM的脂質體系統相比，4°C保存期間的藥物泄露減少，缺少C16SPM的脂質體系統欠穩定，S卩，在4°C保存(S卩，相同的保存條件)期間顯示更高的藥物泄露速率。在本公開的上下文中，術語“穩定性”用來表示，得到的脂質體與然而不含SPM的同種脂質體(即，脂質體膜不包含SPM作為形成脂質體的脂質的一部分)相比更為穩定(在保存期間或保存后較少的試劑從脂質體中泄露，泄露差在統計上顯著)。所述穩定性也可以定義為裝載藥物的脂質體在4°C保存至少3個月的時間時不會發生化學和物理變化。所述穩定性例如通過測定存在于或釋放(泄露)至脂質體外水性介質的游離活性劑(即未包封的活性劑)的量而確定，表示穩定性的該量小于脂質體系統內的活性劑的總量(總量包括包封的和未包封的試劑)的30%、20%、有時甚至小于10%。令人驚訝的是，本文中呈現的結果表明，當對脂質體制劑(例如包含HSPC和膽固醇)比較包封的試劑從同種制劑中的泄漏量時，若脂質膜中含有SPM，試劑的泄露減少。所述脂質體還可以包含通常用于形成脂質體的其他脂質，例如，用于穩定化，用于影響表面電荷、膜的流動性和/或輔助將活性劑裝載入脂質體中。該脂質的實例可包括固醇，如膽固醇、膽固醇半琥珀酸酯、膽固醇硫酸酯或膽固醇的任何其他的衍生物。脂質體還可包含脂質聚合物。術語“脂質聚合物”本文中用于表示在其極性首基處由親水性聚合物修飾的脂質物質。脂質聚合物的聚合物首基通常是水溶性的，并且與疏水的脂質區域共價或非共價連接。通常，親水性聚合物具有的分子量等于或高于750Da，可以是極性的或非極性的。諸如根據本公開可以使用的那些等脂質聚合物已知對于形成長循環脂質體是有效的。有大量的可以連接到脂質上形成脂質聚合物的聚合物，例如但不限于聚乙二醇(PEG)、聚唾液酸、聚乳酸(也稱為聚丙交酯)、聚羥基乙酸(也稱為聚乙交酯)、聚乳酸-聚羥基乙酸、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚甲基噁唑啉、聚乙基噁唑啉、聚羥乙基噁唑啉、聚羥丙基噁唑啉、聚天冬酰胺、聚羥丙基甲基丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、聚二甲基丙烯酰胺、聚乙烯基甲基醚、聚丙烯酸羥乙基酯、諸如羥甲基纖維素或羥乙基纖維素等衍生纖維素。這些聚合物可以以均聚物或嵌段共聚物或無規共聚物的形式使用。衍生為脂質聚合物的脂質可以是中性、帶負電以及帶正電的。最常使用的市售的可衍生為脂質聚合物的脂質是基于磷脂酰乙醇胺(PE)、通常為二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)的那些脂質。可根據本公開使用的一族具體的脂質聚合物是連接至DSPE的單甲基化PEG(具有不同長度的PEG鏈)，其中所述PEG聚合物通過氨基甲酸酯鍵與脂質相連而形成帶負電的脂質聚合物，或中性的甲基聚乙二醇二硬脂酰甘油(mPEG-DSG)和中性的甲基聚乙二醇羥羰基-3-氨基-1，2-丙二醇二硬脂酰酯(mPEG-DS)[Garbuzenko0.等，Langmuir.212560-2568(2005)]。另外的脂質聚合物是磷脂酸PEG(PA-PEG)。所述PEG部分的首基的分子量為約750Da約20，OOODa，有時為約750Da約12，OOODa，通常為約1，OOODa約5，OOODa0脂質體中通常采用的一種具體的PEG-DSPE是其中PEG具有2000Da分子量的PEG-DSPE，在本文中稱為2_PEG_DSPE或者2kPEG_DSPE。脂質體系統的脂質包封至少一種活性劑。包封包括在脂質體內相中俘獲/封入至少一種活性劑。俘獲是非共價的俘獲，即，在脂質體水相中，活性劑游離地分散而且在適宜的條件下可從脂質體中以可控的方式釋放。所述活性劑可以是小分子量的化合物以及聚合物(例如，肽、蛋白質、核酸序列等)。術語“活性劑”用于表示包封的試劑一旦施用則具有有益的效果，例如，作為治療劑，作為造影劑(例如，放射性核素染料或與載體配合的染料、發色團或熒光團生成劑等)、作為保健用化合物等。所述活性劑可以是水溶性的、親水性化合物以及兩親性化合物。在一個實施方式中，所述活性劑是兩親性化合物。術語“兩親性化合物”用來表示同時具有親水性和親脂性的活性劑。有各種本領域中已知的具有生物活性的兩親性化合物。一個實例包括抗癌化合物阿霉素。將阿霉素(例如D0XIL)裝載入預制的脂質體中通過跨膜硫酸銨梯度驅動(美國5，192,549,US5，316，771和Haran等[HaranG，etal.(1993)Transmembraneammoniumsulfategradientsinliposomesproduceefficientandstableentrapmentofamphipathicweakbases.BiochimBiophysActa.1151(2)201-15]。在一個其他的實施方式中，兩親性活性劑是止痛藥。所述止痛藥通常用于局部止痛。一組非限制性的止痛藥選自由苯坐卡因、氯普魯卡因、可卡因、環美卡因、二甲卡因、丙氧卡因、普魯卡因、丙美卡因、丁卡因、阿替卡因、布比卡因、卡鐵卡因、辛可卡因、依替卡因、左布比卡因、利多卡因、甲哌卡因、哌羅卡因、丙胺卡因、羅哌卡因、三甲卡因、蛤蛘毒素和河豚毒素組成的組。一組優選的止痛藥包括但不限于布比卡因、利多卡因、羅哌卡因、左布比卡因、普魯卡因、氯普魯卡因、苯坐卡因、依替卡因、甲哌卡因、丙胺卡因、ciprocaine、丁卡因、地布卡因、庚卡因、美索卡因、丙泮卡因、卡比唑卡因和布他卡因。本公開的具體的止痛藥是布比卡因(以下有時稱為“BUP”)。在另一個實施方式中，所述活性劑是水溶性分子，例如肽、蛋白質或核酸序列，例如包括細胞因子、抗體、免疫刺激寡核苷酸(ISS-ODN)、siRNA等。正如所知的，脂質體通常可具有各種形狀和尺寸。所述脂質體可以是多層脂質體(MLV)或多泡囊泡(MVV)。MVV脂質體已知具有多個非同心的緊密填裝的內部水性腔室由脂質膜的網絡分隔并包封在脂質膜內。在本發明的上下文下，MVV稱為大多泡囊泡(LMVV)，在本領域中也以術語巨大多泡囊泡(GMV)指代。根據一個實施方式，脂質體通常具有的直徑為至少200nm，一般在約200nm25μm的范圍內，有時為約250nm25μm。當所述脂質體是MVV或LMVV時，應當理解將試劑裝載入LMVV中包括使所述試劑容納在通過脂質膜形成的多個水性區室中，并且通常還處于環繞非同心的脂質膜的水性環境中。有時，所述試劑可以被俘獲(嵌埋)在脂質膜中，例如，在所述活性劑是親脂性化合物的時候。本文中公開的脂質體系統的特征在于具有很高的活性劑/脂質比，即，相對于脂質體而言活性劑的水平很高。盡管不排除其他情況，不過高裝載一般取決于使用的脂質體的種類、它們的尺寸、裝載條件等。在一個實施方式中，通過在高初始活性劑濃度的條件下將所述活性劑主動裝載(見下文)入LMVV中實現高裝載。在本公開的上下文中，高裝載用于表示這樣的裝載在得到的脂質體系統中活性劑與脂質的比例為至少約0.5摩爾藥物/摩爾形成脂質體的磷脂(摩爾/摩爾)的比例(這是本公開的LMVV的特性)。將活性劑裝載入脂質體中可通過本領域中已知的任何技術進行。這樣的技術通常包括將試劑被動裝載或主動(“remoteloading")裝載入脂質體中。將試劑包封入脂質體中的被動裝載技術通常涉及在制備脂質體的過程中裝載試劑，例如，用活性劑的溶液使干燥的形成脂質體的脂質水合。利用被動裝載，試劑可以與脂質體膜結合或包封在水性核心中。Bangham等[BanghamAD,StandishMM,WatkinsJC(1965)Diffusionofunivalentionsacrossthelamellaeofswollenphospholipids.JMoIBiol.13(1):238-52]記載了一種用于被動裝載的方法，其中，使含有所關注的試劑的水相與沉積在反應容器壁上的干燥的形成脂質體的脂質的膜接觸。在機械手段攪拌下，脂質發生溶脹，由此形成多層囊泡(MLV)。用于被動裝載的其他方法是Szoka禾口Papahadjopoulos[SzokaF.C.Jr5PapahadjopoulosD.(1978)Procedureforpreparationofliposomeswithlargeinternalaqueousspaceandhighcapturebyreverse-phaseevaporation.ProcNatlAcadSciUSA.75(9):4194-8.]描述的反相蒸發(REV)法，根據該方法，將脂質在水不溶性有機溶劑中的溶液在水性載體相中乳化，隨后在減壓下除去有機溶劑。被動裝載的其他方法包括使脂質體進行連續的脫水和再水合處理，或冷凍和解凍。脫水通過蒸發或凍干進行[KirbyCandGregoriadisG(1984)Dehydration-RehydrationVesicles:ASimpleMethodforHighYieldDrugEntrapmentinLiposomes.Nat.Biotechnol.2，979-984]，或者使通過在水溶液中進行超聲波處理而制備的脂質體與待包封的溶質混合，然后將混合物在氮氣下在旋轉燒瓶中干燥。再水合時，制得大脂質體，其中包封了大部分的溶質[ShewRL,DeamerDff.(1985)Anovelmethodforencapsulationofmacromoleculesinliposomes.BiochimBiophysActa.816(1):1_8]0裝載還可以通過使活性劑與干燥的形成脂質體的脂質共同凍干而改善[國際專利申請公報W003000227]。也可使用主動裝載技術。例如，利用離子梯度或PH梯度作為預制的脂質體裝載驅動力來裝載脂質體。利用PH梯度的裝載可以根據美國專利5，616，341、5，736，155和5，785，987、美國5，192，549、美國5，316，771和Haran等[HaranG,etal.(1993)Transmembraneammoniumsulfategradientsinliposomesproduceefficientandstableentrapmentofamphipathicweakbases.BiochimBiophysActa.1151(2)201-15]中描述的方法進行，以引用的方式并入本文中。PH梯度可以是基于檸檬酸鈣的梯度或基于硫酸銨的梯度。根據一個實施方式，脂質體具有多層囊泡(MLV)或多泡囊泡(MVV)的形式，優選大多泡囊泡(LMVV)。本公開還提供一種如上所限定的脂質體的保存方法，S卩，在脂質體內水性區室中包封至少一種活性劑，所述脂質體具有包含形成脂質體的脂質的膜，至少一種形成脂質體的脂質是鞘磷脂(SPM)，所述方法包括形成脂質體系統，在所述脂質體系統中所述脂質體分散在與所述脂質體的脂質體內水性區室處于等滲平衡的水性介質中；和保存所述脂質體系統，由此在所述保存之后所述水性介質中存在不超過30%，有時不超過20%，甚至不超過10%的所述至少一種活性劑。所述方法可實現長期穩定的保存(在低溫下，例如4°C)所述脂質體。盡管最小的穩定保存期是3個月，不過如將在以下非限制性實例中展示的，在4°C保存時也可以獲得4個月(120天)、4.5個月、甚至達到6個月的穩定保存。不過，如上所示，在低于身體的生理溫度(即，低于37°C)的任何其他溫度也可以維持所述穩定性。當提及較低的溫度時，應當理解合理的保存溫度應當為比體中心溫度低至少15°C，S卩，低于22°C。根據一個實施方式，在約2°C8°C的溫度保存。由于在含有SPM的LMVV的保存期間活性劑的泄露較少，因而已經發現不必在將脂質體系統施用給需要的對象之前洗滌該脂質體系統。所述脂質體系統可直接施用給需要的對象，或可以與生理上可接受的添加劑組合。因此，本發明還提供如上限定的脂質體系統用于制備藥物或診斷組合物的應用，以分別用于治療醫療狀況或用于診斷的目的。除了所述脂質體系統之外，組合物通常還包含至少一種生理上可接受的添加劑。此外，本發明提供一種用于治療或診斷醫療狀況的方法，所述方法包括向需要所述治療或診斷的對象施用一定量的如上限定的脂質體系統或包含該脂質體系統的生理上可接受的組合物。單獨的或組合了生理上可接受的添加劑的脂質體系統可通過本領域中可接受的任何途徑施用。根據一個實施方式，脂質體系統的施用通過胃腸外注射或輸注進行。這包括但不限于靜脈內、動脈內、肌內、腦內、腦室內、心臟內、皮下、骨內(進入骨髓)、皮內、鞘內、腹膜內、膀胱內、海綿體腔內和硬腦膜外(硬膜外)注射或輸注。胃腸外施用也可包括經皮施用(例如通過透皮貼劑)、透粘膜施用(例如，通過擴散或注射到腹膜內)、吸入和玻璃體內施用(通過眼睛)。當活性劑是止痛藥時，施用的優選模式是通過可由醫生或任何其他適合的醫師確定的任何可接受的途徑的局部施用。脂質體系統的施用量以及由此的包封在其中的活性劑的量對于在目標位點實現活性劑的所期望的效果應當是有效的。例如，如果活性劑是藥物，則脂質體系統的量應確定為使得在目標位點處包封在脂質體系統中的藥物的量足以實現所期望的治療效果。該所期望的治療效果可包括但不限于改善與醫療狀況有關的癥狀、防止與醫療狀況有關的癥狀的顯現、減緩醫療狀況的進展狀態、增強好轉期的開始、防止或減緩由醫療狀況所造成的不可逆的損害、減輕醫療狀況的嚴重性、治愈醫療狀況或防止其發展等。用脂質體系統治療的醫療狀況可以是任何可通過包封在本公開的脂質體中的活性劑治療的狀況。此外，活性劑可以是診斷劑。為此，脂質體系統的量應當使得能夠在目標位點令標記物成像。脂質體系統的量將根據本領域中已知的那些考慮因素而確定，通常使用恰當設計的臨床試驗(劑量范圍研究等)來確定。本文中使用的形式“a”、“an”和“the”包括單數以及復數指代，除非上下文另有明確規定。例如，術語“alipsomeforminglipid”包括一種或多種能夠形成脂質體的脂質。此外，本文中使用的術語“包含(包括)”意指所述脂質體系統包含所列舉的成分，即，形成脂質體的脂質、SPM和活性劑，但是并不排除其他要素，諸如生理上可接受的載體和賦形劑以及其他活性劑。術語“主要由……構成”用來限定脂質體系統包含所列舉的要素但是不含其他可能對脂質體系統實現的效果具有重要意義的要素。“由……構成”應當意味著不含超過痕量的其他要素。由這些轉換術語各自限定的實施方式均在本發明的范圍內。此外，所有的數值，例如，當提及構成包含所列舉的要素的脂質體系統的要素的量或范圍時，是由所述的值變化⑴或㈠至多20%，有時至多10%的近似值。應當理解的是，即使并不總是明確規定，所有的數值標示前均可加上術語“約”。下面，將在以下根據本發明進行的試驗的描述中對本發明舉例說明。應當理解，這些實施例旨在描述的性質而非限制。顯然，根據以上教導，能夠實現這些實施例的許多修改和變化。因此，應理解的是，在所附權利要求的范圍內，本發明可以以無數可能的方式另外實施，而非以下所具體描述的方式。一些非限制性實例的說明材料藥物鹽酸布比卡因(BUP)USPXXIII(Orgamol,SA,Evionnaz,Switzerland)。甲潑尼龍琥珀酸鈉(MPS)(PHARMACIANV/SAPuurs-Belgium)。脂質膽固醇(CHOL)(NE；SolvayPharmaceuticals(Veenedaal,Netherlands))。完全氫化的大豆卵磷脂(HSPC-100)，Phospholipon100H，批次號50190(PhospholipidsGmbHNattermannallee1*D50829KoIn，Germany)。HSPC100^99.5純度，即，包含的IysoPC和脂肪酸的量低于檢測限。完全氫化的大豆卵磷脂(HSPC)(LipoidGmbh,Ludwigshafen,Germany)。98.0純度，即，包含少于1.2%的IysoPC和約的脂肪酸。完全合成的N-棕櫚酰基-D-赤式-鞘氨醇-1-磷酰膽堿，N-棕櫚酰基鞘磷脂，(C16-SPM)>98%純度，批號546701(BiolabLtd.，POB34038Jerusalem91340)。緩沖液硫酸銨(AS，MERCK)；醋酸鈣一水合物(CA，Aldrich)；氯化鈣二水合物(MERCK)；方法裝載藥物的LMVV的制備大多泡囊泡(LMVV)的制備將具有所期望的摩爾比(關于成分及摩爾比的細節見表1)的脂質的粉末混合物溶解在60°C65°C的乙醇中，然后添加至水溶液(硫酸銨(AQ、醋酸鈣(CA)或其他緩沖液，如下所示)中以達到最終磷脂(PL)濃度為60mM且最終乙醇濃度為10%。使得到的溶液于65°C混合30分鐘以獲得多層囊泡(MLV)。也可以使用制備MLV的替代方法(例如參見Barenholz&Crommelin,1994,In!EncyclopediaofPharmaceuticalTechnology.(Swarbrick,J.andBoylan,J.C.,Eds.),Vol.9,MarcelDekker,NY,1-39頁)。使用所期望的水相(例如，硫酸銨250mM或127mM，醋酸鈣250mM或200mM，或所期望的緩沖液)由MLV制得LMVV，即，由MLV使其經歷10個在液氮中冷凍然后在60°C的水浴中解凍的循環由此形成LMVV。在每一個循環時，將每Iml的分散的LMVV溶液在液氮中保持1分鐘。例如，3ml的分散液在液氮中保持3分鐘。梯度生成通過從脂質體外水相除去AS或CA(分別地)并以NaCl取代，由此生成跨膜AS或CA梯度。三種方法用來生成pH梯度⑴離心法(Grantetal2004，同上)，用于AS和CA梯度，在1000g，溫度4°C，持續5分鐘。除去上清液，在4°C用鹽水洗滌球粒。洗滌過程重復7次。(ii)使用MWCO12_14000Dalton滲析管的滲析法(iii)使用具有中空纖維盒500000NMWC的Midjet臺式系統(GEHealthcareBio-SciencesCorp.ffestborough,MA01581USA)的滲濾法。布比卡因的裝載使用兩種替代性方法使LMVV裝載布比卡因具有跨膜硫酸銨(AQ梯度的預制脂質體的主動裝載(Haran等(199，BBA，1151201-215)，改進為適應LMVV(Grant等2004，同上)；或裝載入具有跨膜醋酸鈣(CA)梯度的預制LMVV中(Clerc&Barenholz.(1995)，BBA，1240，65-257，Avniretal(2008)Arthritis&Rheumatism，58，119-1)。該方法利用BUP與阿霉素類似是兩親性弱堿這一事實。(ii)使用BUP的水溶液通過脂質水合進行被動裝載，以形成裝載BUP的MLV，由該MLV如上所述制備裝載BUP的LMVV(LMVV制備)。在兩種方法中，裝載于60°C65°C進行，該溫度高于HSPC和C16SPM的固體有序相(so)到液體無序相(LD)的相變溫度范圍(Tm)。注意，HSPC和C16SPM是此處描述的LMW的形成脂質體的脂質。對于主動裝載，裝載于60°C65°C，使用處于蒸餾水中的4.5%、5.5%或5.7%的BUP(與(鹽水=0.9%重量/體積)的滲透壓摩爾濃度相當)，或6%的BUP作為脂質體外部水相進行30分鐘。0.5ml的量的濕LMVV球粒和2ml的BUP溶液用于主動裝載。然后將混合物冷卻至4°C一整夜。BUP的被動裝載通過用包含4.5%(231m0sm/kg)、或5.5%(285m0sm/kg)、或6%(301m0sm/kg)、或7%(346m0sm/kg)、或8%(373m0sm/kg)或10%(454m0sm/kg)BUP(W/V)的蒸餾水的水溶液于65°C將脂質乙醇溶液水合30分鐘來進行。對于該過程，使用包含225mg磷脂和77mgCHOL的0.5ml脂質乙醇溶液。將該溶液與5ml的上述BUP水溶液中的一種混合。用10個冷凍解凍循環(如上所述)處理懸浮液，然后使其在冷室內6°C)保持一整夜。游離藥物的除去未包封的BUP通過用鹽水洗滌(Iml脂質體/細1鹽水)然后在IOOOg于4°C5°C將分散液離心5分鐘而從LMVV除去。洗滌過程重復7次。用于替換CA梯度裝載的脂質體的脂質體外部分的最終的介質(本文中稱為“水性介質”)是PBS。PBS的使用優于鹽水。AS和用于脂質體的被動裝載的介質被替換，LMVV用非緩沖鹽水洗滌。LMVV濃縮至2%BUP的最終溶液用于被動裝載和AS裝載。對于CA梯度裝載，使用具有1%BUP最終濃度的LMVV，因為這些LMVV的體積很大。這些濃度接近用于BUP注射的最高濃度。針對在4°C保存期間BUP從脂質體中的釋放率來測定由此形成的LMVV的穩定性。在等滲條件下的布比卡因的裝載當提及等滲條件時，應當理解意指脂質體內水性核心和脂質體內外的外部介質的滲透壓摩爾濃度基本相等或接近，均如上所限定。測試了三種滲透壓摩爾濃度(i)280m0sm/kg等滲于生理鹽水(0.9%NaCl)條件AS和CA梯度LMVV用約20mg/ml的AS或CA溶液制備，通過AS或CA溶液調節至^OmOsm/kg。BUP裝載濃度為在水中5.7%BUP，或在NaCl溶液中4.5%BUP以達到^0m0sm/kg。(ii)550m0sm/kg，等滲于250mMAS用于生成AS梯度的洗滌溶液和用于在裝載后除去游離藥物的溶液是NaCl溶液，調節至550m0sm/kg。藥物裝載濃度為在NaCl溶液中4.5%BUP，或在蔗糖溶膠中4.5%BUP以達到550m0sm/kg。(iii)650m0sm/kg，等滲于250mMCA。布比卡因與脂質的比例使用三種類型的BUP與脂質的體積比將BUP裝載入AS-LMVV中。(i)濕LMVV球粒5.7%BUP脂質，14體積/體積。(ii)濕LMVV球粒5.7%BUP脂質，12體積/體積。(iii)濕LMVV球粒5.7%BUP脂質，11體積/體積。表1中提供了得到的LMVV的特征。表1:BUP裝載的LMVV脂質/Chol比裝載方法平均尺寸(μm)SPM/CH0L6/4CA梯度8.33±4.71SPM/CH0L6/4AS梯度5.7±2.6HSPC/CH0L6/4被動6.0±3.2此外，圖IA和IB比較了根據在4°C(圖1A)和37°C(圖1B)的釋放率測定的BUP-LMVV(通過類似的步驟制備，不過用H100)的裝載穩定性。所述比較涉及的LMVV的不同脂質組成如下(i)HSPC(LipoidGmbH的)和CHOL的先前的制劑，如美國6，162，46中描述的，其內容以引用的方式并入本文中；(ii)HSPC-100(PhospholipidsGmbH,Germany)和CHOL；(iii)HSPC/C16SPM和CHOL；(iv)HSPC100/C16SPM和CH0L。圖IA和IB中提供的數據表明，HSPC/CH0L脂質體在4°C保存60天期間BUP的釋放率最高，然后是HSPC100/CH0L脂質體的釋放率。HSPC100/C16SPM/CH0L脂質體實現最低的釋放率。在M小時內，在37°C的釋放達到脂質體的BUP的60%70%的水平-該情況下沒有達到穩定水平。因此推斷盡管在由HSPC100/C16SPM/CH0L構成的LMVV的情況中BUP的裝載稍有降低(較低的BUP/PL比)，但在4°C時該特定制劑的BUP的低釋放率仍然使得這一組合是優選的制劑。此外還推斷出，與不含SPM的同種制劑相比SPM的存在減少了泄漏。檢驗了使用不同的裝載技術、不同的活性劑(BUP或MPS，即“藥物”)和不同的水性介質(洗滌緩沖液)的包含HSPC100/C16SPM/CH0L3/3/4(所述的SUV或者LMVV)的脂質體的釋放率。結果顯示在表2中。圖2A禾口2的相同脂質組成的(圖2B)從具有與圖IAIB所用？鈣梯度主動裝載。使用的SPM是13/22頁(P寸坩)s^s^^^s-ss^sss寸§loH3/wds9io/02odsH￠6SSVSs卜πdnOQ-ΛΛΙηIsolmro9.fes制輯SVdnpq-AAm-SOMONinmS制輯SVS日卜ΠdnCQ-AAmιωοΝOSVossosrNISIAnSI-HOSvoss卜0s§_AAmO(NCOmS制輯SVSUI卜^<Ια9_ΛΛ1ΑηsetOO<ΝT-Hdns%/.o若朝SVSUIAndnpq-AAmΠσ\<Νdna%6.0芩朝SVδε卜πdns_AAmuojNO/OSA.T—ι#SVIAOAIO。das_AAm(NC\Q\(N寸+κ!Ν%卜.1輯SVSUIOadnpq-AAmdnm^朝SvssoszdnPQ-AAmΙΛ11—1τ~I輯voSUIASdnPQ-AAmSe(Ndne%9o長朝V3Ss/.οdna_AAm寸寸6+6I-HI-HOOοdnCQ%rsed齡輯νοΙΛΙεοζdas_AAm9寸I-HdnPQ-AAm1OmSTCNIT-Hdna%9標堪dnpq-AAme.9rn6.0<N卜+dnoq-AAm8+ζ.ITiT-Hχ/朝dna%s.寸涵寵dnm-AAmIT9Irs.寸lKogH<06H<9卜H<〇寸Η<εΗ<<ΝΗ<卜雪幾7蓉椒^ssC16SPM,與HSPC/SPM/CH0L和HSPC100/SPM/CH0L的比較也在4°C進行。用于CA梯度裝載的BUP/PL比低于AS梯度裝載獲得的比例。穩定性根據4°C的釋放評估。該比例也比于37°C通過AS梯度主動裝載的LMVV得到的比例低(即，更高的釋放率)。所述釋放率與通過AS梯度裝載BUP的LMVV的釋放率相似，不同之處在于在第一個10小時釋放率更快，隨后幾乎達到穩定。由圖2A明顯可知，HSPC100LMVV具有比基于HSPC的LMVV更好的穩定性(即，在4°C的泄露較少)，而且C16SPM對于改善穩定性的效果遠大于兩種HSPC制劑間的差異。C16SPM還使兩種HSPC組合物的泄漏率降低了類似的程度。圖3A和;3B描述了與圖IA和IB所用相同的脂質組成的BUP裝載的LMVV在4°C(圖3A)和37°C(圖:3B)的釋放率，其中LMVV被動裝載BUP。使用的SPM是C16SPM，與HSPC/SPM/CH0L和HSPC100/SPM/CH0L的比較也在4°C進行。通常，所用的3種脂質組成的被動裝載的LMVV在4°C的釋放率高于經由CA梯度主動裝載的釋放率，甚至與AS主動裝載的LMVV相比也更高。不過，LMVV脂質組成在4°C和37°C對于釋放率的影響類似于(不過在量值上更大)對通過AS和CA梯度驅動的主動裝載所觀察到的，因此表明離子梯度驅動的主動裝載增大了4°C時的裝載穩定性。LMVV的優化制備具有不同的HSPC100C16SPM摩爾比的各種制劑以確定這兩種成分的最優比例。表3A和3B中提供了各種制劑。表3A利用AS梯度通過主動裝載形成的HSPC100/C16SPM/CH0LLMVV中的HSPC100C16SPM摩爾比的影響權利要求1.一種脂質體系統，所述脂質體系統包括水性介質，在所述水性介質中分散有脂質體，所述脂質體在其脂質體內水性區室中包封至少一種活性劑，所述水性介質與所述脂質體內水性區室處于等滲平衡，所述脂質體具有包含形成脂質體的脂質的膜，所述形成脂質體的脂質中的至少一種是鞘磷脂(SPM)，所述脂質體系統相比于不含SPM的同種脂質體具有更大的穩定性。2.如權利要求1所述的脂質體系統，所述脂質體系統在長期保存期間穩定，所述穩定性的特征在于在所述保存之后所述水性介質中存在不超過30%的所述至少一種活性劑。3.如權利要求2所述的脂質體系統，其中，在所述保存之后所述水性介質中存在不超過10%的所述至少一種活性劑。4.如權利要求13中任一項所述的脂質體系統，其中，所述SPM是C12C24SPM。5.如權利要求13中任一項所述的脂質體系統，其中，所述SPM是C16SPM。6.如權利要求15中任一項所述的脂質體系統，其中，所述SPM是合成或半合成的SPM。7.如權利要求16中任一項所述的脂質體系統，其中，所述膜包含的SPM的量為所述膜中全部磷脂的25摩爾％75摩爾％。8.如權利要求17中任一項所述的脂質體系統，所述脂質體系統包含的除SPM之外的所述形成脂質體的脂質與所述SPM的摩爾比為1121。9.如權利要求18中任一項所述的脂質體系統，其中，所述形成脂質體的脂質共同具有的固體有序相到液體無序相的相變溫度(Tm)高于37°C。10.如權利要求19中任一項所述的脂質體系統，其中，所述膜包含固醇。11.如權利要求10所述的脂質體系統，其中，所述固醇是膽固醇。12.如權利要求111中任一項所述的脂質體系統，其中，所述脂質體是多層囊泡(MLV)或多泡囊泡(MVV)。13.如權利要求12所述的脂質體系統，其中，所述MVV是直徑為200nm25μm的大MVV(LMVV)。14.如權利要求113中任一項所述的脂質體系統，其中，所述水性介質和所述脂質體內水性區室具有的滲透壓摩爾濃度為50m0sm/kg600m0sm/kg。15.如權利要求14所述的脂質體系統，其中，所述水性介質和所述脂質體內水性區室具有的滲透壓摩爾濃度為275m0sm/kg550m0sm/kg。16.如權利要求115中任一項所述的脂質體系統，其中，所述水性介質和所述脂質體內水性區室具有的滲透壓摩爾濃度差為不超過50m0Smole。17.如權利要求116中任一項所述的脂質體系統，其中，所述水性介質包含一定量的游離態的所述至少一種活性劑。18.如權利要求117中任一項所述的脂質體系統，其中，所述水性介質是生理上能夠接受的介質。19.如權利要求118中任一項所述的脂質體系統，其中，所述活性劑是兩親性化合物。20.如權利要求19所述的脂質體系統，其中，所述兩親性化合物是止痛藥。21.如權利要求20所述的脂質體系統，其中，所述止痛藥是選自由苯坐卡因、氯普魯卡因、可卡因、環美卡因、二甲卡因、丙氧卡因、普魯卡因、丙美卡因、丁卡因、阿替卡因、布比卡因、卡鐵卡因、辛可卡因、依替卡因、左布比卡因、利多卡因、甲哌卡因、哌羅卡因、丙胺卡因、羅哌卡因、三甲卡因、蛤蛘毒素和河豚毒素組成的組中的局部止痛藥。22.如權利要求21所述的脂質體系統，其中，所述止痛藥選自由布比卡因、利多卡因、羅哌卡因、左布比卡因、普魯卡因、氯普魯卡因、苯坐卡因、依替卡因、甲哌卡因、丙胺卡因、ciprocaine、丁卡因、地布卡因、庚卡因、美索卡因、丙泮卡因、卡比唑卡因和布他卡因組成的組。23.如權利要求122中任一項所述的脂質體系統，其中，所述活性劑與所述形成脂質體的脂質的摩爾比為高于0.5摩爾/摩爾。24.如權利要求123中任一項所述的脂質體系統，其中，所述長期保存包括在4°C保存至少3個月的時間。25.一種保存脂質體的方法，所述脂質體在其脂質體內水性區室中包封至少一種活性劑，所述脂質體具有包含形成脂質體的脂質的膜，至少一種形成脂質體的脂質是鞘磷脂(SPM)，所述方法包括形成脂質體系統，在所述脂質體系統中所述脂質體分散在水性介質中，所述水性介質與所述脂質體的脂質體內水性區室處于等滲平衡；和保存所述脂質體系統，所述脂質體系統相比于不含SPM的同種脂質體具有更大的穩定性。26.如權利要求25所述的方法，其中，在所述保存之后所述水性介質中存在不超過30%的所述至少一種活性劑。27.如權利要求沈所述的方法，其中，在所述保存之后所述水性介質中存在不超過10%的所述至少一種活性劑。28.如權利要求2527中任一項所述的方法，所述方法包括將所述活性劑裝載入所述脂質體內水性區室中，所述裝載包括主動裝載或被動裝載。29.如權利要求觀所述的方法，其中，所述活性劑是兩親性化合物，利用PH梯度將所述兩親性化合物主動裝載到脂質體的所述脂質體內水性區室中。30.如權利要求四所述的方法，其中，所述pH梯度是硫酸銨或醋酸鈣梯度。31.如權利要求2530中任一項所述的方法，其中，所述SPM是C12C24SPM。32.如權利要求31所述的方法，其中，所述SPM是C16SPM。33.如權利要求2532中任一項所述的方法，其中，所述SPM是合成或半合成的SPM。34.如權利要求2533中任一項所述的方法，其中，所述膜包含的SPM的量為所述膜中全部脂質的25摩爾％75摩爾％。35.如權利要求2534中任一項所述的方法，所述方法包括使除SPM之外的所述形成脂質體的脂質與所述SPM的摩爾比為1121。36.如權利要求2535中任一項所述的方法，其中，所述形成脂質體的脂質共同具有的固體有序相到液體無序相的相變溫度(Tm)高于37°C。37.如權利要求25沈中任一項所述的方法，其中，所述脂質體膜包含固醇。38.如權利要求37所述的方法，其中，所述固醇是膽固醇。39.如權利要求2537中任一項所述的方法，所述方法包括選自多層囊泡(MLV)或多泡囊泡(MVV)的脂質體。40.如權利要求39所述的方法，其中，所述MVV是直徑為200nm25μπι的大MVV(LMVV)。41.如權利要求2540中任一項所述的方法，其中，所述水性介質和所述脂質體內水性區室具有的滲透壓摩爾濃度為50m0sm/kg600m0sm/kg。42.如權利要求41所述的方法，其中，所述水性介質和所述脂質體內水性區室具有的滲透壓摩爾濃度為275m0sm/kg295m0sm/kgo43.如權利要求2542中任一項所述的方法，其中，所述水性介質和所述脂質體內水性區室具有的滲透壓摩爾濃度差為不超過50m0Smole。44.如權利要求2543中任一項所述的方法，所述方法包含一定量的游離態的所述至少一種活性劑。45.如權利要求2544中任一項所述的方法，其中，所述水性介質是生理上能夠接受的介質。46.如權利要求2545中任一項所述的方法，其中，所述兩親性試劑是止痛藥。47.如權利要求46所述的方法，其中，所述止痛藥是選自由苯坐卡因、氯普魯卡因、可卡因、環美卡因、二甲卡因、丙氧卡因、普魯卡因、丙美卡因、丁卡因、阿替卡因、布比卡因、卡鐵卡因、辛可卡因、依替卡因、左布比卡因、利多卡因、甲哌卡因、哌羅卡因、丙胺卡因、羅哌卡因、三甲卡因、蛤蛘毒素和河豚毒素組成的組中的局部止痛藥。48.如權利要求47所述的方法，其中，所述止痛藥選自由布比卡因、利多卡因、羅哌卡因、左布比卡因、普魯卡因、氯普魯卡因、苯坐卡因、依替卡因、甲哌卡因、丙胺卡因、ciprocaine、丁卡因、地布卡因、庚卡因、美索卡因、丙泮卡因、卡比唑卡因和布他卡因組成的組。49.如權利要求2548中任一項所述的方法，其中，在制備的所述脂質體中所述活性劑與所述形成脂質體的脂質的摩爾比為高于0.5摩爾/摩爾。50.如權利要求2549中任一項所述的方法，所述方法包括在4°C保存所述脂質體至少3個月的時間。51.權利要求1M中任一項所述的脂質體系統用于制備藥物或診斷組合物的應用。52.權利要求1M中任一項所述的脂質體系統，所述脂質體系統用于醫療狀況的治療或用于醫療狀況的診斷。53.一種藥物或診斷組合物，所述藥物或診斷組合物包含權利要求1M中任一項所述的脂質體系統，以及生理上能夠接受的載體。54.一種用于治療或診斷醫療狀況的方法，所述方法包括向對象施用一定量的權利要求12中任一項所述的脂質體系統或權利要求53所述的組合物。全文摘要本公開提供一種脂質體系統，所述脂質體系統包括水性介質，在所述水性介質中分散有脂質體，所述脂質體在其脂質體內水性區室中包封至少一種活性劑，所述水性介質與所述脂質體內水性區室處于等滲平衡，所述脂質體具有包含形成脂質體的脂質的膜，所述形成脂質體的脂質中的至少一種是鞘磷脂(SPM)，所述脂質體系統相比于不含SPM的同種脂質體具有更大的穩定性，而且在一個實施方式中在長期保存期間具有穩定性，所述穩定性的特征在于在所述保存之后所述水性介質中存在不超過30％的所述至少一種活性劑。本公開還提供利用所述脂質體系統保存脂質體的方法；所述脂質體系統用于治療醫療狀況或用于診斷醫療狀況的應用；包含所述脂質體系統的藥物或診斷組合物；以及治療或診斷醫療狀況的方法，所述方法包括向對象施用一定量的所述脂質體系統。文檔編號A61K31/445GK102223878SQ200980147144公開日2011年10月19日申請日期2009年10月11日優先權日2008年10月7日發明者葉切科爾·巴倫霍茨,瑞夫卡·科恩申請人:耶路撒冷希伯來大學伊森姆研究發展公司