專利名稱：損傷后神經組織的再生和修復的制作方法
技術領域：
本發明涉及用于神經學損傷的基于細胞的治療或再生治療領域。具體而言，本發明提供使用細胞再生或修復神經組織的藥物組合物、試劑盒和方法。
背景技術：
各種專利和其它出版物在整個本說明書提及。這些出版物中的每一個都在此整體引入作為參考。神經學疾病以及中樞和外周神經系統的其它障礙是個體可以遭受的最使人虛弱的情況之一，這不僅是因為它們的身體影響，而且是因為它們的持久性。在過去，患有腦或脊髓損傷、或中樞或外周神經系統的神經變性狀況諸如帕金森氏病、阿爾茨海默氏病或多發性硬化(僅舉幾個例子)的患者恢復或治愈的希望很小。神經學損害和神經變性疾病被長期認為是不可逆的，這是因為神經元和神經系統的其它細胞不能在成體中生長。然而，成體哺乳動物腦保留一些能力用于可塑性和損傷后的神經元再生。(參見，Kolb, B, Can J Exp Psycho, 1999; 53:62-76; Stroemer, RP,等 k ,Stroke, 1998; 29:2381-93; Walter, DH, ^ A ,Circulation, 2002; 105(25):3017-24; Plate, KH, J Neuropathol Exp Neurol, 1999; 58 (4):313-20; Szpak, GM,等 k ,Folia Neuropathol37(4) :264-8; Jin, K,等人， Natl Acad Sci USA, 2001; 98(8) :4710-5; Parent, JM,等)κ ,Ann Neurol, 2QQ2·, 52(6) :802-13; Stroemer, RP,等 k, Stroke, 1995; 26(11) :2135-44; Keyvani, K,等 k, J Neuropathol Exp Neurol，2WYl\ 61(10) :831-40; Lois, C,等人，1996; 271 (5251) :978-81;和 Dutton, R,等)κ ,Dev Neurosci，2·.，22 (1-2) :96-105)。例如， 室下區(SVZ)包含能夠經歷分化成為各種細胞類型，包括神經元的細胞群(參見，Chen, J,等 k, Stroke, 2001; 32:1005-1011; Evers, BM,等)κ, J Am Coll Surg, 2003; 197:458-478; Seyfried, D,等k ,J Neurosurg, 2006; 104:313-318)并且缺血性損傷和外傷性腦損傷(TBI)的實驗提示該區域中的細胞參與恢復過程。臨床研究和動物模型都提示有幾個機制與顱內出血(ICH)后的細胞損傷有關。這些包括外傷或機械組分、缺血組分和血凝塊的直接毒性作用。(參見，Gong, C,Neurosurgery, 2001; 48:875-883; Gong, C,等)κ,Brain Res, 2000; 871:57-65; Hua, Y,等k,J Cereb Blood Flow Metab, 2002; 22:55—61; Matsushita, K,等)κ ,J Cereb Blood Flow Metab, 2000; 20:396-404; Xi, G,等Jk ,Stroke, 2001; 32:2932-2938;和 Seyfried, D,等人，/ Neurosurg, 2004; 101:104-107)。在臨床上，ICH緊密接近室系統發生，且因此，ICH后的損傷恢復可牽涉SVZ。另外，用于組織修復和再生的基于干細胞的療法的最近出現提供了用于許多神經變性病理學和其它神經學障礙的有希望的治療。干細胞能夠自我更新并分化以產生多種成熟的神經細胞譜系。可以將這種細胞的移植用作臨床工具用于重構靶組織，從而恢復生理學和解剖學功能性。干細胞技術的應用是廣泛的，包括組織工程改造、基因治療遞送、和細胞治療，即，通過外源提供的產生或包含這些試劑的活細胞或細胞組分將生物治療劑遞送到靶位置。已從成體組織中分離了具有神經潛能的干細胞。例如，神經干細胞在發育中的腦和在成體神經系統中存在。這些細胞可以經歷擴增并且可以分化成神經元、星形膠質細胞和少突膠質細胞。然而，成體神經干細胞是稀有的，以及僅可通過侵入性程序得到，并且可具有比胚胎干細胞更有限的在培養中擴增的能力。其它成體組織也可產生用于基于細胞的神經治療的祖細胞。例如，最近已報道，來源于骨髓和皮膚的成體干細胞可以在培養中擴增并且產生多個譜系，包括一些神經譜系。產后組織諸如臍帶已作為干細胞的可選來源引起興趣。例如，已描述了用于通過灌注胎盤或從臍帶血或組織收集而回收干細胞的方法。從這些方法獲得干細胞的限制一直是得到的臍帶血體積或細胞量不足，以及從那些來源得到的細胞群的異質性或缺乏表征。另外，腦缺血后間充質干細胞(MSC)引起的神經再生與生長因子諸如定位于損傷區域的血管內皮生長因子(VEGF)和腦衍生神經營養因子(BDNF)升高的水平相關。在圍繞實驗性梗死的腦區域中，已顯示存在增加的微血管(microvessel)形成和細胞沿微血管遷移的證據，尤其是來自SVZ的細胞。(參見，Evers，BM, ,J Am Coll Surg, 2003; 197:458-478)。另外，已顯示出，MSC與增加的突觸發生相關，因而新形成的或恢復中的細胞展現更多的連接，這與改進的功能恢復的觀察一致。(參見，Seyfried，D,等人，/ Neurosurg, 2006; 104:313-318)。細胞恢復過程可受到碎片去除和/或生長因子分泌的幫助，從而產生可誘導神經元細胞再生的環境。已知神經學損傷的虛弱性質，需要開發細胞再生療法來幫助恢復。發明概述
本發明提供可應用于針對神經學損傷的基于細胞的再生治療的組合物、試劑盒和方法。具體而言，本發明的特征在于使用產后組織來源的細胞再生或修復神經組織的藥物組合物、設備和方法。本發明的一方面的特征在于治療患有神經學損傷的患者的方法，所述方法包括以有效治療神經變性狀況的量給患者施用臍帶組織-來源的細胞(UTC)。在某些實施方案中， 神經學損傷是腦缺血、急性缺血后再灌注、圍產期缺氧-缺血性損傷、心跳停止、顱內出血、 顱內損害、頸椎挫傷或驚嚇嬰兒綜合征(whiplash or shaken infant syndrome)。本發明的另一方面特征在于刺激患者SVZ再生能力的方法，所述方法包括以有效增加SVZ中神經發生、血管發生或突觸發生的量給患者施用臍帶組織-來源的細胞。本發明的另一方面特征在于減少患者腦的損害或損傷部分中的凋亡的方法，所述方法包括以有效減少患者腦的損害或損傷部分中的凋亡細胞數目的量給患者施用臍帶組織-來源的細胞。本發明的另一方面特征在于改進患有神經學損傷的患者的神經學功能的方法，所述方法包括以有效改進神經學功能的量給患者施用臍帶組織-來源的細胞。本發明的另一方面特征在于用于治療患有神經學損傷的患者的藥物組合物，所述組合物包含藥學上可接受的載體和臍帶組織-來源的細胞。待治療的神經學損傷可為腦缺血、急性缺血后再灌注、圍產期缺氧-缺血性損傷、心跳停止、顱內出血、顱內損害、頸椎挫傷或驚嚇嬰兒綜合征。在某些實施方案中，藥物組合物包含在組合物配制前已被體外誘導以分化成神經細胞或其它譜系的細胞，或已被基因工程改造以產生促進神經學損傷治療的基因產物的細胞。在某些實施方案中，藥物組合物包含至少一種其它細胞類型，諸如星形膠質細胞、少突膠質細胞、神經元、神經祖先、神經干細胞或其它多能(multipotent)或多潛能 (pluripotent)干細胞。在這些或其它實施方案中，藥物組合物包含至少一種其它試劑，諸如用于神經治療的藥物，或另一有益的附加試劑，諸如抗炎藥、抗凋亡劑、抗氧化劑或生長因子。在某些實施方案中，藥物組合物被配制用于通過注射或輸注施用。可選地，其可包含其中被囊化有細胞的可植入設備、或含有細胞的基質或支架。根據本發明的再另一方面，提供了用于治療患有神經學損傷的患者的試劑盒。該試劑盒包含藥學上可接受的載體、臍帶組織-來源的細胞群和在治療患者的方法中使用試劑盒的說明書。該試劑盒可進一步包含至少一種試劑和用于培養臍帶組織-來源的細胞的說明書。其也可包含至少一種其它細胞類型的群體、或用于治療神經學損傷的至少一種其它試劑。根據本發明的另一方面，提供了用于治療患有神經學損傷的患者的方法，所述方法包括給患者施用由臍帶組織-來源的細胞制成的制劑。這種制劑可包括臍帶組織-來源的細胞的細胞裂解物(或其級分)、臍帶組織-來源的細胞的細胞外基質、或臍帶組織-來源的細胞在其中生長的條件培養基。在另一方面，本發明特征在于包含藥學上可接受的載體和由臍帶組織-來源的細胞制成的制劑的藥物組合物，所述制劑可為臍帶組織-來源的細胞的細胞裂解物(或其級分)、臍帶組織-來源的細胞的細胞外基質、或臍帶組織-來源的細胞在其中生長的條件培養基。也提供用于實施本發明該方面的試劑盒。它們可包含藥學上可接受的載體或其它劑或試劑中的一種或多種，來自臍帶組織-來源的細胞的細胞裂解物或其級分、細胞外基質或條件培養基中的一種或多種，以及試劑盒組分的使用說明書。在各種實施方案中，臍帶組織-來源的細胞在施用前被體外誘導以分化成神經細胞或其它譜系。在一些實施方案中，細胞被基因工程改造以產生促進神經學損傷治療、改進神經學功能和/或促進再生能力的基因產物。在本發明的各種實施方案中，將臍帶組織-來源的細胞連同至少一種其它細胞類型施用，諸如星形膠質細胞、少突膠質細胞、神經元、神經祖先、神經干細胞或其它多能或多潛能干細胞。在這些實施方案中，其它細胞類型可以與臍帶組織-來源的細胞同時、在臍帶組織-來源的細胞之前或在臍帶組織-來源的細胞之后施用。同樣地，在這些或其它實施方案中，將細胞連同至少一種其它試劑，諸如用于神經治療的藥物，或另一有益的附加試劑諸如抗炎藥、抗凋亡劑、抗氧化劑或生長因子施用。在這些實施方案中，其它試劑可以與臍帶組織-來源的細胞同時、在臍帶組織-來源的細胞之前或在臍帶組織-來源的細胞之后施用。在一些實施方案中，將細胞施用在患者的中樞或外周神經系統中的預定位點。可以將它們通過注射或輸注、或被囊化在可植入設備中、或通過植入含有細胞的基質或支架而施用。在某些實施方案中，將細胞在神經學損傷后不同的時間點施用。例如，可在范圍為損傷后約M小時至約168小時(約1天至約7天)的時間施用細胞。根據下面的詳述和實施例，本發明的其它特征和優點將是顯而易見的。附圖簡述
圖1示出在損傷后M小時或72小時用PBS或3X IOfiUTC治療大鼠(n=8)中的損傷后 1天、4天、7天、14天、21天和28天的改良的神經學嚴重性分數，如在0至18的評分等級上通過運動、感覺、平衡和反射測試所測定的，0是正常分數，并且18是最大缺陷。圖2示出在損傷后M小時或72小時用PBS或3X IO6UTC治療大鼠(n=8)中的損傷后1天、4天、7天、14天、21天和28天的墻角測試分數。圖3示出在損傷并隨后在損傷后72小時用PBS治療(圖3A)、在損傷后72小時用3X IOfiUTC治療(圖3B)、在損傷后M小時用PBS治療(圖3C)、和在損傷后M小時用 3 X IOfiUTC治療(圖3D)之后，大鼠中SVZ的細胞中的BrdU摻入；圖3E示出在損傷并隨后在損傷后72小時用PBS或3X IO6UTC治療之后，大鼠SVZ中BrdU陽性細胞的平均數目(n=8)， 以及圖3F示出在損傷后M小時應用PBS ^ 3 X IO6UTC的平均數目(n=8)。圖4示出在損傷并隨后在損傷后M小時用PBS治療(圖4A)、在損傷后M小時用3X IOfiUTC治療(圖4B)、在損傷后72小時用PBS治療(圖4C)、和在損傷后72小時用 3X IO6UTC治療(圖4D)之后，大鼠腦損害區域中血管中的VWF表達；圖4E示出在損傷并隨后在損傷后M小時用PBS或3 X IO6UTC治療之后，大鼠腦損害區域中血管的平均直徑(μ m) (n=8)；以及圖4F示出在損傷后72小時應用PBS或3X IOfiUTC的平均直徑(μ m) (n=8)。圖5A示出在損傷之后，大鼠腦損害區域中的血管內皮細胞中的BrdU摻入。圖5B 示出在損傷之后，大鼠腦損害區域中的血管中的VWF表達。圖5C示出在損傷之后，在大鼠腦損害區域中的血管中，與VWF表達組織共定位的內皮細胞中的BrdU摻入。圖6示出在損傷并隨后在損傷后M小時用PBS治療(圖6A)、在損傷后對小時用3X IOfiUTC治療(圖6B)、在損傷后72小時用PBS治療(圖6C)、在損傷后72小時用 3X IO6UTC治療(圖6D)之后，大鼠腦的SVZ中的雙皮層蛋白(DCX)表達；圖6E示出在損傷并隨后在損傷后M小時用PBS或SXlOfiUTC治療之后，對雙皮層蛋白(DCX)表達呈陽性的大鼠腦SVZ的平均面積百分比(n=8)，并且圖6F示出在損傷后72小時應用PBS或 3X IO6UTC,對雙皮層蛋白(DCX)表達呈陽性的平均面積百分比(ri=8)。圖7示出在損傷并隨后在損傷后M小時用PBS治療(圖7A)、在損傷后M小時用3X IO6UTC治療(圖7B)、在損傷后72小時用PBS治療(圖7C)、和在損傷后72小時用 3X IO6UTC治療(圖7D)之后，大鼠腦的SVZ中的TUJl表達；圖7E示出在損傷并隨后在損傷后M小時用PBS或3X IOfiUTC治療之后，對TUJl表達呈陽性的大鼠腦SVZ的平均面積百分比(n=8)，并且圖7F示出在損傷后72小時應用PBS或3X IO6UTC,對TUJl表達呈陽性的平均面積百分比(n=8)。圖8示出在損傷并隨后在損傷后M小時用PBS治療(圖8A)、在損傷后M小時用3X IOfiUTC治療(圖8B)、在損傷后72小時用PBS治療(圖8C)、和在損傷后72小時用 3X IO6UTC治療(圖8D)之后，大鼠腦的血腫界面區中的突觸小泡蛋白表達；圖8E示出在損傷并隨后在損傷后M小時用PBS或3X IO6UTC治療之后，對突觸小泡蛋白表達呈陽性的大鼠腦的血腫界面區的平均面積百分比(ri=8)，并且圖8F示出在損傷后72小時應用PBS或 3X IO6UTC,對突觸小泡蛋白表達呈陽性的平均面積百分比(n=8)。圖9示出在損傷并隨后在損傷后M小時用PBS治療(圖9A)、在損傷后M小時用3X IO6UTC治療(圖9B)、在損傷后72小時用PBS治療(圖9C)、和在損傷后72小時用 3 X IOfiUTC治療(圖9D)之后，大鼠腦的損害區域中凋亡細胞的TUNEL染色；圖9E示出在損傷并隨后在損傷后M小時用PBS或3X IOfiUTC治療之后，大鼠腦的損害區域中每個載玻片的凋亡細胞平均數目(n=8)，并且圖9F示出在損傷后72小時應用PBS或3X IO6UTC的平均數目(闊)。圖10示出在損傷并隨后在損傷后M小時應用PBS或3X IOfiUTC治療(n=8)(圖 10A)、和在損害后72小時應用PBS或3X IO6UTC治療(n=8)(圖10B)之后，大鼠腦中紋狀體丟失的平均百分比。圖11示出在損傷后7天應用PBS或3X IO6UTC治療(n=10)(圖11A)、以及在損傷后3天應用PBS或SXlOfiUTC治療(n=10)(圖11B)大鼠中的損傷后1天、4天、7天、14 天、21天、28天、31天和35天的mNSS。圖12示出在損傷后7天應用PBS或3X IO6UTC治療(n=10)(圖12A)、以及在損傷后3天應用PBS或SXlOfiUTC治療(n=10)(圖12B)大鼠中的損傷后1天、4天、7天、14 天、21天、28天、31天和35天的墻角測試分數。圖13示出在損傷后7天應用PBS或3X IO6UTC治療(n=10)(圖13A)、以及在損傷后3天應用PBS或SXlOfiUTC治療(n=10)(圖13B)大鼠中的損傷后1天、4天、7天、14 天、21天、28天、31天和35天的圓筒測試分數。圖14示出在損傷后7天應用PBS或3X IO6UTC治療(n=10)(圖14A)、以及在損傷后3天應用PBS或SXlOfiUTC治療(n=10)(圖14B)大鼠中的損傷后1天、4天、7天、14 天、21天、28天、31天和35天的粘合劑測試分數。圖15示出在損傷并隨后在損傷后72小時用PBS治療(圖15A)、在損傷后72小時用3X IOfiUTC治療(圖15B)、在損傷后7天用PBS治療(圖15C)、和在損傷后7天用 3 X IOfiUTC治療(圖15D)之后，大鼠SVZ的細胞中的BrdU摻入；圖15E示出在損傷并隨后在損傷后72小時用PBS或3X IO6UTC治療之后，大鼠SVZ中BrdU陽性細胞的平均數目(n=8)， 并且圖15F示出在損傷后7天應用PBS或3X IOfiUTC的平均數目(n=8)。圖16示出在損傷并隨后在損傷后7天用PBS治療(圖16A)、在損傷后7天用 3 X IO6UTC治療(圖16B)、在損傷后72小時用PBS治療(圖16C)、和在損傷后72小時用 SXlOfiUTC治療(圖16D)之后，大鼠腦的損害區域中的血管中VWF表達；圖16E示出在損傷并隨后在損傷后7天用PBS或3X IOfiUTC治療之后，大鼠腦的損害區域中的血管平均直徑(μ m) (n=10)，以及圖16F示出在損傷后72小時應用PBS或3X IO6UTC的平均直徑(μ m) (n=10)。圖17A示出在損傷并隨后在損傷后3天用SXlOfiUTC治療之后，大鼠腦的損害區域中血管內皮細胞中的BrdU摻入(n=10)，并且圖17B示出在損傷后7天應用3X IO6UTC的內皮細胞中的BrdU摻入(n=10)。圖17C示出在損傷并隨后在損傷后3天用SXlOfiUTC治療之后，大鼠腦的損害區域中的血管中VWF表達(n=10)，并且圖17D示出在損傷后3天應用3 X IO6UTC的血管中VWF表達(n=10)。圖17E示出在損傷并隨后在損傷后3天用3 X IOfiUTC 治療之后，大鼠腦的損害區域中與血管中的VWF表達組織共定位的內皮細胞中的BrdU摻入 (n=10)，并且圖17F示出在損傷后7天應用3 X IO6UTC的內皮細胞中的BrdU摻入(n=10)。圖18示出在損傷并隨后在損傷后7天用PBS治療(圖18A)、在損傷后7天用 3 X IO6UTC治療(圖18B)、在損傷后3天用PBS治療(圖18C)、在損傷后3天用3 X IOfiUTC 治療(圖18D)之后，大鼠腦的SVZ中的TUJl表達；圖18E示出在損傷并隨后在損傷后7 天用PBS或3X IO6UTC治療之后，對TUJl表達呈陽性的大鼠腦的SVZ的平均面積百分比 (n=10)，并且圖18F示出在損傷后72小時應用PBS或3X IOfiUTC,對TUJl表達呈陽性的平均面積百分比(n=10)。圖19示出在損傷并隨后在損傷后72小時用PBS治療(圖19A)、在損傷后72 小時用SXlOfiUTC治療(圖19B)、在損傷后7天用PBS治療(圖19C)、在損傷后7天用 3 X IOfiUTC治療(圖19D)之后，大鼠腦的血腫界面區中的突觸小泡蛋白表達；圖19E示出在損傷并隨后在損傷后72小時用PBS或3X IO6UTC治療之后，對突觸小泡蛋白表達呈陽性的大鼠腦的血腫界面區的平均面積百分比(ri=10)，并且圖19F示出在損傷后7天應用PBS或 3X IO6UTC,對突觸小泡蛋白表達呈陽性的平均面積百分比。圖20示出在損傷并隨后在損傷后7天用PBS治療(圖20A)、在損傷后7天用 3X IO6UTC治療(圖20B)、在損傷后72小時用PBS治療(圖20C)、在損傷后72小時用 SXlOfiUTC治療(圖20D)之后，大鼠腦的損害區域中凋亡細胞的TUNEL染色；圖20E示出在損傷并隨后在損傷后7天用PBS或3X IOfiUTC治療之后，大鼠腦的損害區域中每個載玻片的凋亡細胞平均數目(n=10)，并且圖20F示出在損傷后72小時應用PBS或3 X IO6UTC的平均數目(n=10)。圖21A示出在損傷并隨后在損傷后7天用PBS或3X IO6UTC治療之后，大鼠腦中紋狀體丟失的平均百分比(n=10)，并且圖21B示出在損傷后72小時應用PBS或3X IO6UTC 的平均百分比(n=10)。圖22示出在損傷后M小時用PBS或4X IO6UTC或MSC治療大鼠中的損傷后1天、 4天、7天、14天、21天、觀天和35天的改良的神經學嚴重性分數(n=8)。圖23示出在損傷后M小時用PBS或4X IOfiUTC或MSC治療大鼠中(n=8)的損傷后31天、32天、33天、34天和35天的Morris水迷宮分數。圖M示出在損傷后M小時用PBS或4X IOfiUTC或MSC治療大鼠中(n=8)的損傷后作為腦半球的百分比的損害體積。圖25A示出在損傷后M小時用PBS或4X IO6UTC或MSC治療大鼠中(n=8)的損傷后35天的E5204抗體染色以鑒定UTC。利用PBS對照沒有發現陽性染色的細胞。圖25B示出在損傷后M小時用PBS或4X IO6UTC或MSC治療大鼠中(n=8)的損傷后35天的E5204 抗體染色以鑒定MSC。圖2隊示出在損傷后M小時用PBS或4X IO6UTC或MSC治療大鼠中的損傷后35 天的BrdU陽性UTC細胞。圖^B示出在損傷后M小時用PBS或4X IO6UTC或MSC治療大鼠中的損傷后35 天的BrdU陽性MSC細胞。圖27示出在損傷后M小時用PBS或4X IOfiUTC或MSC治療大鼠中(n=8)的損傷后35天損害界面區中每Him2BrdU陽性細胞的數目。圖28示出在損傷后M小時用PBS或4X IOfiUTC或MSC治療大鼠中(n=8)的損傷后35天齒狀回中每Him2BrdU陽性細胞的數目。圖^A示出在損傷后24小時用4X IO6UTC治療大鼠中的損傷后35天的vWF染
色血管。圖^B示出在損傷后24小時用4X IOfiMSC治療大鼠中的損傷后35天的vWF染
色血管。圖30示出在損傷后M小時用PBS或4X IOfiUTC或MSC治療大鼠中(n=8)的損傷后35天損害界面區中vWF陽性血管的數目。圖31示出在損傷后M小時用PBS或4X IOfiUTC或MSC治療大鼠中(n=8)的損傷后35天齒狀回中vWF陽性血管的數目。圖32A示出損害界面區中BrdU和Map_2陽性雙重染色的細胞和僅BrdU陽性染色的細胞。圖32B示出齒狀回中BrdU和Map-2陽性雙重染色的細胞以及僅BrdU陽性染色的細胞。發明詳述
在下面的說明性實施方案詳述中，對構成其一部分的附圖進行參考。這些實施方案被足夠詳細地描述，以使本領域技術人員能夠實踐本發明，并且理解的是，可以利用其它實施方案并且可以在不背離本發明的精神或范圍的情況下進行合理的結構、機械、電和化學改變。為了避免使本領域技術人員能夠實踐本文描述的實施方案所不需要的細節，該描述可省略本領域技術人員已知的某些信息。因此，下面的詳述不以限制性意義采用。對貫穿說明書和權利要求書中應用的各種術語進行定義，如下文所列出。如本文使用的術語“個體"、“患者“或“受試者“通常指任何形式的動物，包括哺乳動物，諸如人和猴，其用藥物或治療組合物或根據所描述的方法進行治療。"干細胞"是未分化的細胞，其由單細胞自我更新和分化以產生后代細胞的能力所限定，包括自我更新祖先、非更新祖先和終末分化細胞。干細胞的特征也在于它們的下列能力在體外分化成來自多胚層(內胚層、中胚層和外胚層)的各種細胞譜系的功能細胞， 以及在移植后產生多胚層的組織，和在注射到胚泡中之后基本上有助于大多數組織，如果不是所有組織的話。干細胞根據它們的發育潛能被分類為(1)全能的；(2)多潛能的 (pluripotent) ； (3)多能的(multipotent) ； (4)寡能的；和(5)單能的。“全能”細胞能夠產生全部胚胎和胚外細胞類型。“多潛能”細胞能夠產生全部胚胎細胞類型。“多能”細胞包括能夠產生細胞譜系亞群，但全部在特定組織、器官或生理學系統中的那些(例如，造血干細胞(HSC)可以產生包括HSC (自我更新)、血細胞-限制性寡能祖先及為血液正常組分的全部細胞類型和元件(例如，血小板)的后代)。“寡能”細胞可以產生比多能干細胞更加受限的細胞譜系亞群，且“單能”細胞能夠產生單細胞譜系(例如，生精干細胞)。干細胞也基于可獲得它們的來源進行分類。“成體干細胞“通常是在包含多個分化的細胞類型的組織中發現的多能的未分化細胞。成體干細胞可以自我更新。在正常情況下，其也可以分化以產生其從中起源的組織并且有可能地其它組織類型的特化的細胞類型。"胚胎干細胞"是來自胚泡期胚胎的內細胞團的多潛能細胞。“胎兒”干細胞是起源自胎兒組織或胎膜的干細胞。“產后干細胞“是基本上起源于出生后可得的胚外組織，即臍帶和胎盤的多能或多潛能細胞。已發現這些細胞擁有多潛能干細胞特有的特征，包括快速增殖和分化成許多細胞譜系的潛能。產后干細胞可為血液來源的(例如，如得自臍帶血的那些)或非血液來源的(例如，如得自臍帶和胎盤的非血液組織)。各種術語用于描述培養中的細胞。“細胞培養“通常指細胞從活生物取得并在受控條件下生長(“在培養中“或“被培養的“)。“原代細胞培養“是在第一傳代培養之前從生物(一個或多個)直接取得的細胞、組織或器官的培養。當在促進細胞生長和/或分裂的條件下將細胞置于生長培養基中時，細胞在培養中“擴增"，從而導致產生較大的細胞群。當細胞在培養中擴增時，細胞增殖速度有時通過細胞數目加倍所需的時間量測量。這被稱為“倍增時間“。術語“間充質干細胞”(MSCs)指來自未成熟的胚胎結締組織的細胞。許多細胞類型來自間充質干細胞，包括產生軟骨的軟骨細胞。術語“室下區”(SVZ)指位于整個側室側壁的成對腦結構。側室是腦的室系統的部分。側室被分類為端腦的部分，它們是室中最大的。側室通過Monro的室間孔與中央第三腦室連接。室下區連同齒狀回的顆粒下區(subgranular zone)充當成體神經發生過程中神經干細胞的來源。如本文使用的術語〃標準生長條件〃指在37°C、在包含5% CO2的標準氣氛和維持在約100%的相對濕度中培養細胞。雖然前述條件對于培養是有用的，但要理解的是，將認識到本領域中可用于培養細胞的選項的技術人員能夠改變該條件。本發明中使用的細胞通常被稱為“產后細胞“或“產后-來源的細胞“(PPDC)“。 該細胞更具體地為“臍-來源的細胞“或"臍帶-來源的細胞“(UDC)，或“臍帶組織來源的細胞"(UTC)。此外，該細胞可被描述為干細胞或祖細胞，后一術語被廣義地使用。術語" 來源的"用于指示，細胞已得自它們的生物學來源并生長或另外地在體外操作(例如，在生長培養基中培養以擴增群體和/或產生細胞系)。本發明臍干細胞的體外操作和臍-來源的細胞的獨特特征在下文詳細描述。"分化"是下列過程，通過該過程，非特化的("未定型的“)或特化較差的細胞獲得特化細胞的特征，例如，諸如神經細胞或肌細胞。“分化的“細胞是已占據細胞譜系中更加特化的(“定型的“)位置的細胞。當用于分化過程時，術語“定型的“指已在分化途徑中行進到一點的細胞，在該點，在正常情況下，其將繼續分化成特定細胞類型或細胞類型亞型，并且在正常情況下不能分化成不同細胞類型或回復成分化較差的細胞類型。“去分化“ 指下列過程，通過該過程，細胞回復到細胞譜系中特化(或定型)較差的位置。如本文所用的，細胞的"譜系“限定細胞的遺傳，即，其來自哪些細胞和其可以產生什么細胞。細胞譜系將細胞置于發育和分化的遺傳安排中。廣義地，"祖細胞“是具有產生比其本身更加分化的后代的能力、并且仍然保持補充祖先庫的能力的細胞。通過該定義，干細胞本身也是祖細胞，終末分化細胞的更直接前體也如此。當提及本發明的細胞時，如下文更詳細地描述的，祖細胞的該寬泛定義可被使用。 較狹義地，祖細胞常常被限定為在分化途徑中間的細胞，即，其起自干細胞并在成熟細胞類型或細胞類型亞型產生的中間。該類型的祖細胞通常不能自我更新。因此，如果該類型的細胞在本文中提及，其將被稱為“非更新祖細胞“或稱為“中間祖細胞或前體細胞“。
如本文所用的，短語“分化成神經譜系或表型”指變得部分或完全定型到CNS或 PNS的特定神經表型的細胞，即，神經元或神經膠質細胞，神經膠質細胞種類非限制性地包括星形膠質細胞、少突膠質細胞、施旺細胞和小膠質細胞。術語“細胞系“通常指由原代細胞培養物的一次或多次轉種形成的細胞群。每輪傳代培養被稱為傳代。當細胞被傳代培養時，它們被稱為已被"傳代"。具體的細胞群或細胞系有時通過其被傳代的次數進行提及或表征。例如，已傳代10次的培養的細胞群可被稱為PlO培養物。原代培養物，即，細胞從組織分離后的第一培養物被指定為P0。第一傳代培養后，細胞被描述為第二培養物(Pl或傳代1)。第二傳代培養后，細胞變為第三培養物(P2 或傳代幻等等。本領域的技術人員將理解，在傳代時間段期間可有許多群體倍增；因此，培養物的群體倍增數目大于傳代數目。在傳代之間的時間段期間，細胞的擴增(即，群體倍增數目)取決于許多因素，包括但不限于，接種密度、基質、培養基、生長條件和傳代之間的時間。如本文使用的，術語“生長培養基“通常指足以培養臍帶組織來源的細胞的培養基。具體地，用于培養本發明的細胞的一種培養基包括Dulbecco’ s改良必需培養基 (DMEM)。特別優選的是DMEM-低葡萄糖(DMEM-LG) (Invitrogen, Carlsbad, Ca.) DMEM-LG 優選地補加有血清，最優選地胎牛血清或人血清。一般地，加入15% (ν/ν)胎牛血清(例如，確定成分胎牛血清，Hyclone，Logan UT)連同抗生素/抗真菌劑(優選地100單位/毫升青霉素，100毫克/毫升鏈霉素和0.25微克/毫升兩性霉素B; Invitrogen, Carlsbad, Ca.)和0.001% (ν/ν) 2-巰基乙醇(Sigma, St. Louis Mo.)。在一些情況下，使用不同的生長培養基或提供不同的補充，并且這些正常在文中指示為生長培養基的補充。在某些化學成分確知培養基中，細胞可在根本不存在血清的情況下生長。在這種情況下，細胞可需要某些生長因子，其可以加入培養基以支持和維持細胞。待加入用于在無血清培養基中生長的目前優選的因子包括bFGF、EGF、IGF-I和PDGF中的一種或多種。在更優選的實施方案中，將因子中的兩種、三種或全部四種加入無血清或化學成分確知培養基中。在其它實施方案中，將LIF加入無血清培養基以支持或改進細胞的生長。“條件培養基“是其中特定細胞或細胞群已被培養并且然后被取出的培養基。 當細胞在培養基中培養時，它們可分泌可以對其它細胞提供營養支持的細胞因子。這種營養因子包括但不限于激素、細胞因子、細胞外基質(ECM)、蛋白質、小泡、抗體和顆粒 (granule)。包含該細胞因子的培養基是條件培養基。通常地，“營養因子”被定義為促進細胞存活、生長、增殖和/或成熟，或刺激細胞的增加的活性的物質。當提及培養的脊椎動物細胞時，術語“衰老”(也稱“復制衰老”或“細胞衰老”) 指可歸因于有限細胞培養的性質，即，它們不能生長超過有限的群體倍增數目(有時稱為 Hayflick's極限)。盡管細胞衰老首先使用成纖維細胞_樣細胞進行描述，但可以在培養中成功生長的大多數正常人細胞類型經歷細胞衰老。不同細胞類型的體外壽命不同，但最大壽命一般少于100次群體倍增(這是所有細胞在培養中變得衰老并且因而使得培養物不能分裂的倍增數目)。衰老不取決于按時間發生順序的時間，而是通過培養物已經歷的細胞分裂或群體倍增的數目來測量。因而，通過去除必需生長因子而休眠的細胞在重新引入生長因子時能夠恢復生長和分裂，并在之后完成與連續生長的等價細胞相同的倍增數目。類似地，當將細胞在各種數目的群體倍增之后在液氮中冷凍并隨后解凍和培養時，它們經歷與在培養物中維持未冷凍的細胞基本上相同的倍增數目。衰老細胞不是死亡或垂死的細胞，它們實際上抵抗程序性細胞死亡(凋亡)并已維持在其不分裂狀態長達3年。這些細胞非常活躍并且是代謝上有活性的，但它們不分裂。尚未發現衰老細胞的不分裂狀態可通過任何生物學、化學或病毒試劑逆轉。術語“神經學損傷”是包含性術語，其包括與神經元細胞死亡或損害有關的狀況， 包括腦血管機能不全、局灶性或彌散性腦外傷、彌散性腦損害和外傷性神經病(包括但不限于壓迫、壓榨、撕裂和節段神經病)。神經學損傷的實例是腦缺血或梗死，包括栓塞性阻塞和血栓性阻塞；急性缺血后再灌注；圍產期缺氧-缺血性損傷；心跳停止；任何類型的顱內出血(諸如硬膜外、硬膜下、蛛網膜下和大腦內)；顱內和脊椎內損害(諸如挫傷、 穿透、剪切、壓迫和撕裂)；頸椎挫傷或驚嚇嬰兒綜合征(whiplash and shaken infant syndrome)。其它神經學損傷包括腫瘤和侵襲CNS和PNS的其它瘤形成狀況。盡管基礎疾病被考慮為增殖性的(而不是損傷)，但周圍組織可被損害。另外，可利用細胞療法將凋亡或其它抗瘤分子遞送到腫瘤位點，例如，通過遞送產生這種試劑的基因修飾細胞。術語“治療神經學損傷(或神經學損傷的治療)，，指改善如本文定義的神經學損傷的影響，或延遲、停止或逆轉如本文定義的神經學損傷的發展，或延遲或防止如本文定義的神經學損傷的發病。術語刺激“SVZ的再生能力”指增加室下區再形成或重制外圍組織包括神經學和內皮組織的能力。術語改進“神經學功能”指使功能更好，所述功能諸如例如，肌肉強度、反射性反應或感覺知覺。神經學功能已得到改進的確定是通過各種行為測試以及運動、感覺、反射和平衡測試評估的。術語“減少患者腦的損害或損傷部分中的凋亡”指降低已遭受一些其它損傷或損害的患者腦的一部分中經歷凋亡或程序性細胞死亡的細胞的數目。凋亡可以通過本領域已知的任何方法進行確定，包括但不限于基于流式細胞術的凋亡檢測方法、免疫組織化學方法、DNA斷裂測定、胱天蛋白酶活性測定等。凋亡也可以通過本領域已知的模擬或預測體內反應的體外測定進行確定。術語“有效量“指如本文所描述的化合物、材料或組合物的濃度或量，其有效實現特定的生物學結果。這種結果包括但不限于體外或體內細胞生長和/或分化，以及如本文所描述的神經學損傷的治療。關于生長因子，有效量可為約1納克/ml至約1微克/ml的范圍。關于體內施用給患者的UTC，有效量可為少至幾百或更少至多至幾百萬或更多的范圍。 在具體實施方案中，有效量可為約IO3至約IO11細胞的范圍、更具體地至少約IO4細胞。將認識到，待施用的細胞數目將取決于待治療的神經學損傷的細節而變化，所述細節包括但不限于待治療的尺寸或總體積/表面積，以及施用位點對待治療區域位置的接近度，和醫學生物學家熟悉的其它因素。術語“有效期“、“有效時間段“或“有效條件“通常指時間段或其它可控條件 (例如，對于體外方法的溫度、濕度)，其對于試劑或藥物組合物實現其預期結果是必要的或優選的。
可與術語“生物相容性載體“或“生物相容性介質“互換使用的術語“藥學上可接受的載體“或“藥學上可接受的介質“指試劑、細胞、化合物、材料、組合物和/或劑型， 其不僅與待治療性施用的細胞和其它試劑相容，而且也適于與人類和動物的組織接觸使用，而沒有過度的毒性、刺激、變態反應或與合理的利益/風險比相稱的其它并發癥。如本文更詳細地描述的，適于在本發明中使用的藥學上可接受的載體包括液體、半固體(例如， 凝膠)和固體材料(例如，細胞支架和基質、管、片和如本領域已知的和本文更詳細地描述的其它這種材料)。這些半固體和固體材料可進行設計以抵抗體內降解(非-生物可降解的)或它們可進行設計以在體內降解(生物可降解的，生物可侵蝕的)。生物可降解材料可進一步為生物可再吸收的或生物可吸收的，即，它可溶解和吸收到體液中(水溶性植入物是一個例子)，或降解并最終從身體消除，或是通過轉化成其它材料或是通過天然途徑破壞和消除。幾個術語在本文中關于細胞或組織移植或細胞置換療法使用。術語"自體轉移"、 “自體移植"、"同體移植"等指其中細胞或移植供體也是細胞或移植受者的治療。術語“ 同種異體轉移"、“同種異體移植"、“同種異體移植物“等指其中細胞或移植供體與受者是相同物種但不是相同個體的治療。其中供體的細胞已與受者進行組織相容性匹配的細胞轉移有時被稱為“同系轉移“。術語“異種轉移"、“異種移植"、“異種移植物“等指其中細胞或移植供體與受者是不同物種的治療。如本文使用的術語“分離“通常指已從其天然環境中分離的細胞。該術語包括從其天然環境中總的物理分離，例如，從供體動物取出。在優選的實施方案中，分離的細胞在組織中不存在，即，細胞從與其正常接觸的鄰近細胞中分離或解離。優選地，細胞作為細胞懸浮液施用。如本文使用的，短語“細胞懸浮液“包含與培養基接觸和已例如通過使一片組織接受輕柔研磨被解離的細胞。如本文使用的術語“基質“通常指連同細胞施用給患者的生物可降解的和/或生物可再吸收的材料。基質可充當臨時支架，直至被新生長的細胞取代。在一些實施方案中， 基質可提供因子或與細胞結合使用的其它試劑的持續釋放，并且可提供用于發展患者中組織生長的結構。在其它實施方案中，基質僅提供用于發展組織的臨時支架。基質可以是顆粒形式(直徑大于10微米的大顆粒或直徑小于10微米的微粒)，或其可以是結構上穩定的三維植入物形式(例如，支架)。基質可以是漿液、水凝膠或可選地三維結構諸如立方體、圓柱體、管、塊、薄膜、片或適當的解剖形式。如本文使用的術語“支架“通常指三維多孔結構，其提供用于細胞生長的模板。支架由在體內隨時間過去降解的生物可降解的和/或生物可再吸收的材料制成。支架降解花費的時間長度可取決于材料的分子量。因而，較高分子量材料可產生較長時間段保持它們的結構完整性的聚合物支架；而較低分子量導致較慢的釋放和較短的支架壽命。支架可由本領域已知的任何方式制成。可以用于形成支架的聚合物的例子包括天然和合成聚合物。描述
包括與神經元細胞死亡或損害有關的狀況，包括腦血管機能不全、局灶性或彌散性腦外傷、彌散性腦損害和外傷性神經病的神經學損傷具有作為共同特征的神經細胞的特定或易損組的功能障礙或丟失。該共性使得能夠開發類似的治療方法用于易損或損害的神經組織的修復和再生，其中之一是基于細胞的療法。在本文描述的其各種實施方案中，本發明的特征在于用于神經修復和再生的方法和藥物組合物，其利用來源于產后組織的祖細胞和細胞群。本發明適用于任何神經學損傷，但預期其尤其適于許多損傷，所述損害非限制性地包括，腦缺血或梗死，包括栓塞性阻塞和血栓性阻塞，急性缺血后再灌注，圍產期缺氧-缺血性損傷，心跳停止，以及任何類型的顱內出血(諸如硬膜外、硬膜下、蛛網膜下和大腦內)， 以及顱內和脊椎內損害(諸如挫傷、穿透、剪切、壓迫和撕裂)，也包括頸椎挫傷或驚嚇嬰兒綜合征。如上文概述的，本發明在其一方面總的來說涉及應用分離的臍帶組織-來源的細胞(UTC)治療神經學損傷的方法，所述細胞來源于已使其基本上不含血液的臍帶組織。UTC 能夠在培養中自我更新和擴增，并且具有分化成神經表型細胞的潛能。某些實施方案的特征在于包含這種細胞的群、包含該細胞或其組分或產物的藥物組合物、和應用該藥物組合物治療患有神經學損傷的患者的方法。臍帶組織-來源的細胞已通過它們在培養中的生長性質、通過它們的細胞表面標記、通過它們的基因表達、通過它們產生某些生物化學營養因子的能力和通過它們的免疫性性質進行表征。根據本文描述的方法，對哺乳動物臍帶組織進行消化并優選地在無菌環境中分離 UTC0在分離UTC之前，優選地從產后組織除去血液和碎片。例如，可用緩沖溶液洗滌產后組織，例如但不限于磷酸緩沖鹽水。洗滌緩沖液也可包含一種或多種抗真菌和/或抗生素試劑，例如但不限于青霉素、鏈霉素、兩性霉素B、慶大霉素和制霉菌素。可通過機械力(切碎或剪切力)解聚全部組織或其片段或部分。在目前優選的實施方案中，分離程序也利用酶促消化過程。已知許多酶在本領域中用于從復合組織基質分離個別細胞以促進在培養物中生長。范圍為弱消化(例如，脫氧核糖核酸酶和中性蛋白酶， 分散酶)至強消化(例如木瓜蛋白酶和胰蛋白酶)的這種酶是可購得的。這種酶的一個非窮盡性列舉包括粘液溶解酶活性、金屬蛋白酶、中性蛋白酶、絲氨酸蛋白酶(諸如，胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶或彈性蛋白酶)和脫氧核糖核酸酶。目前優選的是選自金屬蛋白酶、中性蛋白酶和粘液溶解活性的酶活性。例如，已知膠原酶對于從組織分離各種細胞是有用的。脫氧核糖核酸酶可以消化單鏈DNA并且可以最小化分離期間的細胞-團塊化。優選的方法涉及用膠原酶和分散酶，或膠原酶、分散酶和透明質酸酶的酶促處理。技術人員將認識到，在本領域已知許多這種酶處理用于從各種組織來源分離細胞，并且被充分裝備以評估新的或另外的酶或酶組合在分離本發明的細胞中的效用。優選的酶處理可以是約0. 5至2小時長或更長。在其它優選的實施方案中，在解離步驟的酶處理過程中，于約37°C溫育組織。分離的細胞可用于起始或接種細胞培養物。將分離的細胞轉移到未包被或包被有細胞外基質或配體諸如層粘連蛋白、膠原(天然的、變性的或交聯的)、明膠、纖連蛋白和其它細胞外基質蛋白的無菌組織培養容器。細胞在能夠維持細胞生長的任何培養基中培養， 諸如但不限于，DMEM (高或低葡萄糖)、高級DMEM、DMEM/MCDB 201、Eagle's基礎培養基、 Ham's FlO 培養基(FlO) ,Ham's F-12 培養基(F12) ,Iscove's 改良 Dulbecco，s 培養基、 間充質干細胞生長培養基(MSCGM)、DMEM/F12、RPMI 1640和CELL-GR0-FREE。培養基可補加有一種或多種組分，包括例如，胎牛血清(FBS)，優選地約2-15% (ν/ν)；馬血清(ES) ’人血清(HS) ； β-巰基乙醇(BME或2-ΜΕ)，優選地約0.001% (ν/ν)；一種或多種生長因子，例如，血小板衍生生長因子(PDGF)，表皮生長因子(EGF)，成纖維細胞生長因子(FGF)，血管內皮生長因子(VEGF)，胰島素樣生長因子-1 (IGF-I)，白細胞抑制因子(LIF)和促紅細胞生成素；氨基酸，包括L-纈氨酸；和一種或多種抗生素和/或抗真菌劑以控制微生物污染， 諸如青霉素G、硫酸鏈霉素、兩性霉素B、慶大霉素和制霉菌素，單獨的或組合的。培養基優選地包括生長培養基(例如DMEM-低葡萄糖、血清、BME和抗生素試劑)。以允許細胞生長的密度將細胞接種在培養容器中。優選地，以約0至約5體積％的空氣中的ω2和約2至約25體積％的空氣中的O2，優選地約5%至約20%的空氣中的A培養細胞。細胞優選地在約25°C至約40°C培養和更優選地在37°C培養。細胞優選地在培養箱中培養。培養容器中的培養基可以是靜態的或攪動的，例如，使用生物反應器。UTC優選在低氧化應激(例如，添加谷胱苷肽、維生素C、過氧化氫酶、維生素E、N-乙酰半胱氨酸)下生長。如本文使用的“低氧化應激“指對培養的細胞沒有或具有最小自由基損害的條件。在本發明的一些實施方案中，可將UTC傳代或移動至分開的培養容器中，所述分開的培養容器含有與最初使用的相同或不同類型的新鮮培養基，在所述分開的培養容器中細胞群可進行有絲分裂擴增。本發明的方法中使用的細胞可在介于傳代0和衰老之間的任何點使用。優選將細胞傳代約3至約25次，更優選傳代約4至約12次，并優選傳代10或 11次。可進行克隆和/或亞克隆以證實已經分離到細胞克隆群。此外，可將產后組織中存在的不同細胞類型分級分離為亞群，從所述亞群中可以分離UTC。這可使用用于細胞分離的標準技術來完成，包括，但不限于，酶促處理以將產后組織解離成其組分細胞，然后是具體細胞類型的克隆和選擇，包括但不限于基于形態學和 /或生物化學標記的選擇；希望的細胞的選擇性生長(陽性選擇)；不需要的細胞的選擇性破壞(陰性選擇)；基于在混合群中有差別的細胞可凝集性的分離，例如，采用大豆凝集素； 凍融程序；在混合群中有差別的細胞粘附性質；過濾；常規的和區帶離心；離心淘析(逆流(counter-Streaming)離心)；單位重力分離；逆流分布；電泳；和熒光激活細胞分選術 (FACS)。按需要改變培養基。繼續溫育，直至足夠數目或密度的細胞在皿中積累。其后，可除去存在的任何原始的外植組織部分，并且通過胰蛋白酶消化使用標準技術或通過使用細胞刮棒從皿中分離剩余的細胞。胰蛋白酶消化之后，收集細胞，移動到新鮮培養基和如上溫育。在一些實施方案中，培養基在胰蛋白酶消化后大約M小時至少更換1次，以除去任何漂浮細胞。認為在培養物中剩余的細胞是UTC。UTC可被冷藏。因此，用于自體轉移(對于母親或孩子)的UTC可來源自孩子出生后的適當的產后組織，然后進行冷藏以便在隨后需要它們用于移植的情況下是可用的。UTC可通過下列進行表征，例如，通過生長特征(例如，群體倍增能力、倍增時間、 傳代至衰老)、核型分析(例如，正常核型、母源譜系或新生兒譜系)、流式細胞術(例如， FACS分析)、免疫組織化學和/或免疫細胞化學(例如，用于檢測表位)、基因表達概況(例如，基因芯片陣列、聚合酶鏈反應(例如，逆轉錄酶PCR、實時PCR和常規PCR))、蛋白質陣列、蛋白質分泌(例如，通過血漿凝固測定或UTC條件培養基的分析，例如通過酶聯免疫吸附測定(ELISA))、混合淋巴細胞反應(例如，作為PBMCs的刺激的測量)，和/或本領域已知的其它方法。臍組織來源的細胞的例子于2004年6月10日保藏在美國典型培養物保藏中心(American Type Culture Collection)并指定為如下 ATCC 登記號(1)株名稱 UMB 022803 (P7)指定為登記號PTA-6067 ；和O)株名稱UMB 022803 (P 17)指定為登記號PTA-6068。本發明的方法中有用的UTC可擁有下列生長特征中的一個或更多(1)它們在培養物中需要L-纈氨酸用于生長；(2)它們能夠在含約5%至約20%的氧的氣氛中生長；(3) 它們在達到衰老之前具有在培養物中至少倍增約40次的潛能；和它們在未包被或包被明膠、層粘連蛋白、膠原、聚鳥氨酸、玻連蛋白或纖連蛋白的組織培養容器上貼壁和擴增。另外，本發明的方法中有用的UTC可擁有正常核型，所述核型隨著細胞傳代保持。 用于核型分析的方法是可用的并且是本領域的技術人員已知的。同樣，本發明的方法中有用的UTC可通過某些蛋白質的產生表征，包括(1)組織因子、波形蛋白和α-平滑肌肌動蛋白中至少一種的產生；和O)⑶10、⑶13、⑶44、⑶73、 ⑶90、PDGFr-α、PD-L2和HLA-A、B、C細胞表面標記中至少一種的產生，如通過流式細胞術檢測的。此外，本發明的方法中有用的UTC可通過缺乏下列至少一種的產生表征⑶31、 CD34、CD45、CD80、CD86、CDl 17、CD141、CD178、Β7-Η2、HLA-G 和 HLA-DR、DP、DQ 細胞表面標記，如通過流式細胞術檢測的。本發明的方法中有用的UTC可產生組織因子、波形蛋白和 α-平滑肌肌動蛋白中至少兩種；或蛋白質組織因子、波形蛋白和α-平滑肌肌動蛋白中所有三種。此外，本發明的方法中有用的UTC可通過基因表達表征，所述基因表達相對于作為成纖維細胞、間充質干細胞或髂嵴骨髓細胞的人細胞，對于編碼白細胞介素8、漿膜蛋白 (reticulon) 1、趨化因子(C-X-C基序)配體1 (黑色素瘤(melonoma)生長刺激活性，α )、 趨化因子(C-X-C基序)配體6 (粒細胞趨化蛋白2)、趨化因子(C-X-C基序)配體3、腫瘤壞死因子、α -誘導的蛋白3、C-型凝集素超家族成員2、Wilms瘤1、醛脫氫酶1家族成員 A2、腎素、氧化的低密度脂蛋白受體1、智人Qtomo sapiens)克隆IMAGE:4179671、蛋白激酶 C ζ、假設的蛋白質DKFZp564F013、卵巢癌中下調的1和來自克隆DKFZpM^dll3的智人基因中至少一種的基因增加。同樣，本發明的方法中有用的UTC可通過基因表達表征，所述基因表達相對于作為成纖維細胞、間充質干細胞或髂嵴骨髓細胞的人細胞，對于編碼下列中至少一種的基因降低身材矮小癥同源框2、熱休克27 kDa蛋白2、趨化因子(C-X-C基序)配體12 (基質細胞來源的因子1)、彈性蛋白(主動脈瓣上狹窄，Williams-Beuren綜合征)、智人mRNA、 cDNA DKFZp586M2022 (來自克隆KFZp586M2022)、間充質同源框2 (生長停滯特異的同源框)、Sine oculis同源框同源物1 (果蠅屬⑵rosoMih))、晶體蛋白α B、形態發生的散亂相關活化劑2、DKFZP586BM20蛋白、類似于neuralin 1、四連蛋白(纖溶酶原結合蛋白)、src同源三(Sro)和富含半胱氨酸結構域、膽固醇25-羥化酶、runt-相關的轉錄因子 3、白細胞介素11受體α、前膠原C-內肽酶增強子、frizzled同源物7 (果蠅屬)、假設的基因BC008967、類型VIII α 1膠原、生腱蛋白C (hexabrachion)、易洛魁族人同源框蛋白 5、h印haestin、整聯蛋白β 8、突觸小泡糖蛋白2、成神經細胞瘤致瘤性的抑制1、胰島素樣生長因子結合蛋白2(36kDa)、智人cDNA FLJ12280 f is克隆MAMMA1001744、細胞因子受體樣因子1、鉀中間的/小的電導鈣-活化通道亞家族N成員4、整聯蛋白β 7、含PDZ-結合基序的轉錄輔激活物(TAZ)、sine oculis同源框同源物2 (果蠅屬)、KIAA1034蛋白、突觸小泡相關膜蛋白5 (myobrevin)、含EGF的纖蛋白(fibulin)-樣細胞外基質蛋白1、早期生長應答3、遠端較小的(distal-less)同源框5、假設的蛋白FLJ20373、醛酮還原酶家族1成員C3 (3-α羥基類固醇脫氫酶類型II)、雙糖鏈蛋白聚糖、含PDZ結合基序的轉錄輔激活物(ΤΑΖ)、纖連蛋白1、腦啡肽原、整聯蛋白樣1 (含EGF-樣重復結構域)、智人mRNA 全長插入片段cDNA克隆EUR0IMAGE 1968422、EphA3、KIAA0367蛋白、利尿鈉肽受體C/鳥苷酸環化酶C (心房鈉尿肽受體C)、假設的蛋白FLJ140M、智人mRNA、cDNA DKFZp564B222 (來自克隆KFZp564B222)、BCL2/腺病毒ElB 19kDa相互作用蛋白3-樣、AE結合蛋白1和細胞色素c氧化酶亞基VIIa多肽1 (肌肉)。另外，本發明的方法中有用的UTC可通過下列至少一種的分泌表征MCP_1、IL-6、 IL-8、GCP-2、HGF、KGF、FGF、HB-EGF, BDNF, TPO、MlPla、RANTES 和 TIMPl。此外，本發明的方法中有用的UTC可通過下列至少一種的分泌的缺乏表征JGF-β 2、ANG2、PDGFbb、MIPlb、 1309、MDC和VEGF，如通過ELISA檢測的。本發明的方法中有用的UTC優選地包括上文列出的生長、蛋白質/表面標記產生、 基因表達或物質分泌特征中的兩種或更多種。本發明的方法中有用的UTC可包括三、四、 五、六、七、八或更多種所述特征。本發明的方法中有用的UTC還可包括所有上述特征。在其幾個方面中本發明的方法中有用的UTC中的是，具有上述特征的UTC，且更特別的是那些細胞，其中細胞具有正常核型并隨著傳代保持正常核型，并且此外，其中細胞表達標記 CD10、CD13、CD44、CD73、CD90、PDGFr- α 和 HLA-A、B、C 中的每一種，其中細胞產生免疫可檢測的蛋白，所述蛋白對應于所列的標記。本發明的方法中有用的UTC還可包括除前述外不產生對應于標記⑶31、⑶；34、⑶45、⑶117、⑶141或HLA-DR、DP、DQ中任一種的蛋白質的細胞，如通過流式細胞術檢測的。具有沿著導致各種表型的系分化的潛能的某些細胞是不穩定的，并且因而可以自發地分化。本發明的方法中有用的UTC是不自發分化的細胞，例如沿著神經系。本發明的方法中有用的UTC，當在生長培養基中生長時，就在它們表面上產生的細胞標記以及就各種基因的表達模式而言，基本是穩定的，例如使用AfTymetrix GENECHIP測定的。所述細胞例如在傳代期間和經過多個群體倍增在它們的表面標記特征方面基本保持恒定。然而，本發明方法中有用的UTC的一個特征是，通過使它們經受分化-誘導細胞培養條件，可將它們故意地誘導以分化成神經譜系表型。這可通過本領域已知的一種或多種方法完成。例如，如本文所例示的，可將UTC鋪平板在瓶上，所述瓶包被以在包含B27 (B27 補充物，hvitrogen)、L-谷氨酰胺和青霉素/鏈霉素的神經基礎(NeurcAasal)-A培養基 (Invitrogen, Carlsbad, Ca.)中的層粘連蛋白，其組合在本文中稱為神經祖先擴增(NPE) 培養基。NPE培養基可進一步補充以bFGF和/或EGF。可選地，本發明方法中有用的UTC 可通過下列進行體外誘導以分化(1)共培養UTC與神經祖細胞，或O)使UTC在神經祖細胞-條件培養基中生長。UTC的分化可通過具有延長突起的雙極細胞形態學來證明。誘導的細胞群可對巢蛋白的存在染色陽性。分化的UTC可通過巢蛋白、TuJl (Bill微管蛋白)、GFAP、酪氨酸羥化酶、GABA、04和/或MBP的檢測進行評估。另外，本發明方法中有用的UTC可展示形成三維體(three-dimensional bodies)的能力，所述三維體是神經球(neurosphere)的神經元干細胞形成特有的。本發明的方法中有用的UTC可包括異質的細胞群。本發明的方法中有用的異質細胞群可包含至少約5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或95%的如上所述的UTC。本發明的方法中有用的異質細胞群可進一步包含干細胞或其它祖細胞，例如神經祖細胞， 或其可進一步包含完全分化的神經細胞。此外，群體可基本上是同質的，即，包含基本上僅僅UTC(如至少約96%、97%、98%、99%或更多的UTC)。本發明的方法中有用的同質細胞群可包含臍或胎盤-來源的細胞。臍-來源的細胞的同質群優選地不含母源譜系的細胞。胎盤-來源的細胞的同質群可以是新生兒或母源譜系的。細胞群的同質性可通過本領域已知的任何方法實現，例如，根據已知方法通過細胞分選(例如，流式細胞術)或通過克隆擴增。 因而，本發明的方法中有用的同質UTC群可包含臍帶組織來源的細胞的克隆細胞系。這種群體在具有高度希望的功能性的細胞克隆被分離時是特別有用的。另外，本發明方法中有用的UTC可包括在一種或多種因子存在下或在刺激干細胞沿神經原性途徑分化的條件下溫育的細胞群。這種因子是本領域已知的，并且技術人員將認識到，用于分化的合適條件的確定可以用常規實驗完成。這種條件的最優化可以通過統計學實驗設計和分析完成，例如反應表面方法學允許同時最優化多個變量，例如在生物學培養中。示范性因素包括但不限于因子諸如生長或營養因子、脫甲基化劑、與神經譜系細胞共培養或在神經譜系細胞-條件培養基中培養、以及本領域已知的刺激干細胞沿神經原性途徑或譜系分化的其它條件。(參見，例如，Lang，KJD,等人，7； Neurosci. Res., 2004; 76:184-192; Johe, KK,等k ,Genes Devel. , 1996; 10:3129-3140; Gottleib, Y),Ann. Rev. Neurosci. , 2002; 25:381—407)。也可將本發明方法中有用的UTC進行基因修飾，例如，以產生神經治療上有用的基因產物，或產生抗瘤劑用于治療腫瘤。遺傳修飾可用多種載體中的任一種完成，包括但不限于整合病毒載體，例如，逆轉錄病毒載體或腺伴隨病毒載體；非整合復制載體，例如，乳頭瘤病毒載體、SV40載體、腺病毒載體；或復制-缺陷型病毒載體。將DNA引入細胞中的其它方法包括使用脂質體、電穿孔、基因槍或通過直接DNA注射。宿主細胞可用DNA和選擇標記轉化或轉染，所述DNA由一種或多種適當的表達控制元件控制或與所述控制元件操作性結合，控制元件諸如啟動子或增強子序列、轉錄終止子、聚腺苷酸化位點等。任何啟動子都可用于驅動插入的基因的表達。例如，病毒啟動子包括但不限于CMV啟動子/增強子、SV 40、乳頭瘤病毒、EB病毒或彈性蛋白基因啟動子。此夕卜，用于控制目的基因表達的控制元件可以允許基因的調節的表達以便只在體內需要時才合成產物。如果瞬時表達是希望的，那么可在非-整合和/或復制-缺陷型載體中使用組成型啟動子。可選地，誘導型啟動子可用于在需要時驅動插入的基因的表達。誘導型啟動子包括但不限于與金屬硫蛋白和熱休克蛋白相關的那些。引入外來DNA后，可允許工程改造的細胞生長在富集培養基中并然后切換到選擇性培養基。外來DNA中的選擇標記賦予對選擇的抗性并允許細胞穩定地將例如質粒上的外來DNA整合到它們的染色體中并生長以形成轉化灶，其進而可以克隆和擴增為細胞系。該方法可以有利地用于工程改造表達基因產物的細胞系。本發明的方法中有用的UTC可被基因工程改造以“敲除“或“擊倒“促進植入位點處的炎癥或排斥的因子的表達。用于減少靶基因表達水平或靶基因產物活性水平的負調節技術在下文中討論。如本文使用的“負調節“指靶基因產物的水平和/或活性相對于缺乏調節治療情況下靶基因產物的水平和/或活性的減少。對神經元或神經膠質細胞為天然的基因的表達可以被降低或敲除，其中使用許多技術，包括例如，通過使用同源重組技術滅活基因抑制表達。一般地，編碼蛋白質的重要區域的外顯子(或該區域5’的外顯子)被陽性選擇標記例如neo打斷，從而防止正常mRNA從靶基因的產生并導致該基因的失活。基因也可通過在部分基因中產生缺失，或通過缺失整個基因而滅活。通過使用帶有與靶基因具有同源性的在基因組中相距很遠的兩個區域的構建體，插入這兩個區域的序列可以被缺失。(Mombaerts 等人，Proc. Nat. Acad. Sci U. S. Α. , 1991; 88:3084)。反義、DNA 核酶、核酶、小干擾RNA (siRNA)和抑制靶基因表達的其它這種分子也可以用于降低靶基因活性水平。例如，抑制主要組織相容性基因復合體(HLA)表達的反義RNA分子已顯示就免疫應答而言最通用。又進一步地，三股螺旋分子可以在降低靶基因活性水平中使用。這些技術由 Davis, L. G.等人，(eds), Basic Methods in Molecular Biology, 2nd ed. , 1994, Appleton & Lange, Norwalk, Ct.詳細描述。另外，提供了從UTC、或包含UTC的異質或同質細胞群、以及已被基因修飾或已被刺激以沿神經原性途徑分化的UTC或其群體制備的細胞裂解物和細胞可溶性級分，它們在本發明方法中是有用的。UTC裂解物可溶級分(S卩，基本上不含膜)的體內使用，例如，允許有益的細胞內環境在患者中同種異體使用，而不引入最有可能觸發排斥或其它不利的免疫應答的可觀量的細胞表面蛋白質。裂解細胞的方法是本領域公知的并包括機械破裂、酶促破裂或化學破裂或其組合的各種方式。這種細胞裂解物可在它們的生長培養基中從細胞直接制備，并且因而包含分泌的生長因子等，或它們可從例如，在PBS或其它溶液中洗滌而不含培養基的細胞制備。如果優選，那么洗滌的細胞可在大于原始群密度的濃度重懸浮。可制備發明的方法中有用的UTC的全細胞裂解物，例如，通過破裂細胞而不隨后分離細胞級分。可選地，可通過本領域已知的常規方法從細胞可溶級分分離細胞膜級分，例如，離心、過濾或類似方法。從本發明的方法中有用的臍帶組織來源的細胞群制備的細胞裂解物或細胞可溶級分可照原樣使用，通過例如超濾或凍干進一步濃縮，或甚至干燥、部分純化、與本領域已知的藥學上可接受的載體或稀釋劑組合、或與其它化合物諸如生物制品例如藥學上有用的蛋白質組合物組合。細胞裂解物或其級分可在體外或體內使用，單獨或例如連同自體或同系活細胞。裂解物如果體內引入，則可在治療位點局部引入或遠距離引入，以向患者提供例如所需的細胞生長因子。另外，本發明的方法中有用的UTC可以體外培養以高得率地產生生物學產物。例如，可以使用本文描述的培養技術克隆擴增天然產生特定的目標生物學產物(例如，營養因子)或已被基因工程改造以產生生物學產物的這種細胞。可選地，可在誘導分化為神經譜系或其他譜系的培養基中擴增細胞。在任一情況下，可以使用標準分離技術容易地從條件培養基分離細胞產生和分泌到培養基中的生物學產物，例如，諸如示差蛋白質沉淀、離子交換層析、凝膠過濾層析、電泳和HPLC，僅舉幾個例子。“生物反應器“可用于利用流動方法進行進料，例如，體外三維培養。基本上，隨著新鮮培養基通過三維培養物，生物學產物被洗出培養物并且可然后從流出物中分離，如上述。可選地，目標生物學產物可保留在細胞內，并且因而其收集可需要細胞被裂解，如上文所述。生物學產物可然后使用上文列出的技術中的任何一種或多種進行純化。另外，來自本發明的方法中有用的培養的UTC的條件培養基可在體外和體內使用，如下文所述。UTC的細胞條件培養基的應用允許UTC分泌的有益的營養因子在患者中同種異體地使用，而不引入可觸發排斥或其它不利的免疫應答的完整細胞。條件培養基通過在培養基中培養細胞，然后從培養基取出細胞制備。從本發明的方法中有用的UTC群制備的條件培養基可照原樣使用，通過例如超濾或凍干進一步濃縮，或甚至干燥、部分純化、與本領域已知的藥學上可接受的載體或稀釋劑組合、或與其它化合物諸如生物制品例如藥學上有用的蛋白質組合物組合。條件培養基可在體外或體內使用，例如單獨或與自體或同系活細胞一起。條件培養基如果體內引入，則可在治療位點局部引入或遠距離引入，以向患者提供例如所需的細胞生長或營養因子。另外，可以制備、收集且使用由在液體、固體或半固體基質上培養本發明的方法中有用的UTC產生的細胞外基質(ECM)，作為將活細胞植入需要組織修復或置換的受試者中的替代方案。在需要量的ECM在框架上分泌的條件下，在如本文其它處描述的三維框架上體外培養UTC。取出構成新組織的細胞，并處理ECM用于進一步使用，例如，作為可注射制齊U。為了完成這一點，殺死框架上的細胞并從框架除去任何細胞碎片。該過程可以許多不同方式執行。例如，可以在液氮中瞬間凍結活組織，而不冷藏，或可以在無菌蒸餾水中浸入組織以使細胞響應于滲透壓裂解。一旦細胞已被殺死，就可破裂細胞膜并通過用溫和去污劑漂洗諸如EDTA、CHAPS 或兩性離子去污劑處理除去細胞碎片。可選地，可以對組織進行酶促消化和/或用破壞細胞膜和允許去除細胞內容物的試劑提取。這種酶的例子包括但不限于，透明質酸酶、分散酶、蛋白酶和核酸酶。去污劑的例子包括非離子去污劑諸如，例如，烷基芳基聚醚醇(TRITON X-100)、辛基苯氧基聚乙氧基-乙醇(Rohm and Haas, Philadelphia, Pa.)、BRIJ-35、聚乙氧基乙醇十二烷基醚(Atlas Chemical Co. , San Diego, Ca.)、聚山梨醇酯20 (TWEEN 20)、聚乙氧基乙醇失水山梨糖醇單月桂酸酯(Rohm and Haas)、聚乙烯十二烷基醚(Rohm and Haas)；和離子去污劑諸如十二烷基硫酸鈉、硫酸化高級脂族醇、包含7至22個碳原子的支鏈或非支鏈磺化烷和磺化烷基芳烴。ECM的收集可以以多種方式完成，這例如取決于新組織是否已在生物可降解的或非生物可降解的三維框架上形成。例如，如果框架是非生物可降解的，那么ECM可以通過使框架接受超聲處理、高壓水噴射、機械刮擦或用去污劑或酶溫和處理或上述任何組合取出。如果框架是生物可降解的，那么ECM可以例如通過允許框架降解或在溶液中溶解收集。可選地，如果生物可降解的框架由本身可以連同ECM注射的材料組成，那么框架和 ECM可以整體(in toto)加工用于隨后注射。可選地，ECM可以通過上文描述的用于從非生物可降解的框架收集ECM的方法中的任一種從生物可降解的框架取出。所有收集過程優選地進行設計以便不變性ECM。已收集后，可對ECM進一步地進行加工。例如，可以使用本領域公知的技術，諸如通過超聲處理將ECM同質化為細粒，以便使其可以通過外科手術針。如果需要，那么可以通過Y照射交聯ECM的組分。例如，可以在0. 25至2百萬拉德之間照射ECM以對ECM滅菌和交聯。使用毒性試劑，諸如戊二醛的化學交聯是可能的，但通常不是優選的。通過混合本發明的方法中有用的UTC產生的ECM與一種或多種其它細胞類型的 ECM,可調整蛋白質諸如ECM中存在的各種類型的膠原的量和/或比。此外，生物活性物質諸如蛋白質、生長因子和/或藥物可以摻入ECM。示范性的生物活性物質包括組織生長因子， 諸如TGF-β等，其在注射位點促進愈合和組織修復。這種另外的試劑可連同例如UTC產生的全細胞裂解物、可溶細胞級分或進一步純化的組分和產物使用。在另一方面，本發明提供藥物組合物，其在用于治療神經學損傷、改進神經學功能、刺激SVZ再生能力或減少SVZ中凋亡的各種方法中利用UTC、UTC群、UTC組分和產物。 一些藥物組合物包括活細胞(單獨的UTC或與其它細胞類型混合)。其它藥物組合物包括 UTC細胞組分(例如，細胞裂解物、可溶性細胞級分、條件培養基、ECM或前述任一種的組分) 或產物(例如，UTC天然產生或通過遺傳修飾產生的營養和其它生物學因子，來自UTC培養物的條件培養基)。在任何情況下，藥物組合物可進一步包括其它活性劑，諸如抗炎藥、抗凋亡劑、抗氧化劑、生長因子、神經營養因子或神經再生或神經保護藥物，如本領域已知的。可加入UTC藥物組合物的其它組分的實例包括但不限于(1)其它神經保護或神經有益藥物；( 選擇的細胞外基質組分，諸如一種或多種類型的本領域已知的膠原，和/ 或生長因子，富血小板血漿和藥物(可選地，UTC可被基因工程改造以表達和產生生長因子)；(3)抗凋亡劑(例如，促紅細胞生成素(EPO)、ΕΡ0模擬體(mimetibody)、血小板生成素、胰島素樣生長因子(IGF)-I、IGF- II、肝細胞生長因子、胱天蛋白酶抑制劑)；(4)抗炎化合物(例如，p38 MAP激酶抑制劑、TGF-β抑制劑、抑制素、IL-6和IL-I抑制劑、吡嘧司特(PEMIR0LAST)、曲尼司特(TRANILAST)、REMICADE、西羅莫司(SIR0LIMUS)和非類固醇消炎藥(NSAIDS)(諸如替波沙林(TEP0XALIN)、托美汀(T0LMETIN)和 SUPR0FEN ;(5)免疫抑制或免疫調諧劑，諸如鈣依賴磷酸酶抑制劑、mTOR抑制劑、抗增殖劑、皮質類固醇和各種抗體；(6)抗氧化劑諸如丙丁酚(probucol)、維生素C和E、輔酶Q-10、谷胱苷肽、L-半胱氨酸和N-乙酰基半胱氨酸；和(7)局部麻醉劑，僅舉幾個例子。本發明包含的藥物組合物包括用藥學上可接受的載體或介質配制的UTC或其組分或產物。合適的藥學上可接受的載體包括水，鹽溶液(諸如林格液)，醇，油，明膠，和碳水化合物諸如乳糖、直鏈淀粉或淀粉，脂肪酸酯，羥甲基纖維素，和聚乙烯基吡咯烷。這種制劑可以是滅菌的，并且如果需要，則與輔助劑諸如潤滑劑、防腐劑、穩定劑、潤濕劑、乳化劑、和用于影響滲透壓的鹽、緩沖液和著色劑混合。適于在本發明中使用的藥物載體是本領域已知的禾口在例如 Pharmaceutical Sciences (17th Ed. , Mack Pub. Co. , Easton, Pa.)禾口 WO 96/05309中描述的。一般地但不是排他地，將包含UTC組分或產物而不是活細胞的藥物組合物配制為液體(或在口服遞送適當時配制為固體片劑、膠囊等)。可將這些配制用于通過本領域已知的任何可接受途徑施用，以實現藥物和生物分子向靶神經組織的遞送，包括但不限于，口、 鼻、眼和腸胃外，包括靜脈內。腸胃外施用的具體途徑包括但不限于肌內、皮下、腹膜內、大腦內、心室內、腦室內、鞘內、腦池內、脊柱內和/或脊柱旁施用途徑，其通過經顱內或脊椎內針和/或導管帶有或不帶有泵設備遞送實施。一般地，包含活UTC細胞的藥物組合物配制為液體、半固體(例如，凝膠)或固體 (例如，基質、支架等，適當地用于神經組織工程改造)。液體組合物被配制用于通過本領域已知的任何可接受的途徑施用，以實現活細胞向靶神經組織的遞送。一般地，這些包括注射或輸注到CNS或PNS中，其或是以擴散方式或是靶向神經學損傷或痛苦位點，通過包括但不限于下列的施用途徑實施眼內、大腦內、心室內、腦室內、鞘內、腦池內、脊柱內和/或脊柱旁施用途徑，通過經顱內或脊椎內針和/或導管帶有或不帶有泵設備遞送。包含半固體或固體載體中的活細胞的藥物組合物一般地配制用于在神經學損傷或痛苦位點外科手術植入。將認識到，液體組合物也可通過外科手術程序施用。此外，半固體或固體藥物組合物可包括半透凝膠、格柵、細胞支架等，其可為非生物可降解的或生物可降解的。例如，可希望或適于將外源細胞與它們的環境隔絕，而使得細胞能夠分泌和遞送生物分子(例如，神經營養因子)以包繞神經細胞。因此，細胞可配制為包含活UTC或含UTC 的細胞群的自主植入物，所述細胞或細胞群被物理上分開移植的細胞與宿主組織的非可降解的選擇性可滲透屏障包繞。這種植入物有時被稱為"免疫保護的"，這是因為它們具有在不存在藥物誘導的免疫抑制下防止免疫細胞和大分子殺死移植的細胞的能力。可選地，不同種類的可降解凝膠和網絡用于本發明藥物組合物。例如，特別適合于持續釋放制劑的可降解材料包括生物相容性聚合物，諸如聚(乳酸)、乳酸-乙醇酸共聚物、 甲基纖維素、透明質酸、膠原等。另外，可希望或適于將將細胞遞送在生物可降解的，優選地生物可再吸收的或生物可吸收的支架或基質之上或之中。一般地，這些三維生物材料包含附著于支架、在支架中分散或摻入在支架中截留的細胞外基質中的活細胞。一旦植入到身體的靶區域，這些植入物就變得與宿主組織整合，其中移植的細胞逐漸確立。(參見，例如，Tresco，PA，等 A ,Adv. Drug Delivery Rev. , 2000; 42:3-27;也參見 Hutmacher, W, J. Biomater. Sci. Polymer Edn. , 2001; 12:107—174)。可在本發明中應用的支架或基質(有時統稱為“框架”)材料的實例包括非編織的墊、多孔泡沫或自裝配肽。非編織的墊可例如使用包含乙醇酸和乳酸的合成可吸收共聚物 (PGA/PLA)的纖維形成，其在商標VICRYL下出售(Ethicon, Inc. , Somerville, N. J·)。也可利用由諸如冷凍-干燥或凍干方法形成的、由例如聚(ε-己內酯)/聚(乙醇酸)(PCL/ PGA)共聚物組成的泡沫，如美國專利號6，355，699中論述的。也可應用水凝膠諸如自裝配肽(例如，RAD16)。原位形成可降解網絡也適于在本發明中應用(參見，例如，Anseth, KS,等人，7； Controlled Release, 2002; 78:199-209; Wang, D,等k,Biomaterials, 2003; 24:3969-3980;美國專利公開2002/002^76)。將這些材料配制為適于注射的流體， 然后可通過多種方式(例如溫度、PH變化和暴露于光)誘導它們以在原位或體內形成可降解的水凝膠網絡。同樣，框架可以是氈，它可由從生物可吸收的材料制成的復絲紗(multifilament yarn)組成。所述生物可吸收的材料例如PGA、PLA、PCL共聚物或摻合物或透明質酸。使用標準的紡織工藝技術將所述紗制成氈，所述技術由卷曲、切割、梳理和針刺組成。在另一個實施方案中，可將細胞接種于泡沫支架上，所述支架可為復合結構。進一步地，可將框架模壓成有用的形狀，例如諸如具有用于神經束修復的分離柱(segregated column)的脊髓的男|3禾中(Friedman, JA, ^ A ,Neurosurgery, 2002; 51:742-51).另外，將認識到，可在預先形成的非可降解外科手術或可植入設備上培養 UTC，例如，如以相當于用于制備含成纖維細胞的GDC血管內線圈的方式(Marx，WF,等 X ,Am. J. Neuroradiol. , 2001; 22:323-333)。可在接種細胞之前處理基質、支架或設備以增強細胞附著。例如，在接種之前，可以用0. 1摩爾乙酸處理尼龍基質并將其在聚賴氨酸、PBS和/或膠原中溫育以包被尼龍。 可以應用硫酸類似地處理聚苯乙烯。也可對框架的外表面進行修飾以改進細胞的附著或生長以及組織的分化，諸如通過框架的血漿包被或一種或多種蛋白(例如，膠原、彈性纖維、網狀纖維)，糖蛋白，糖胺聚糖(例如，硫酸肝素、軟骨素-4-硫酸鹽、軟骨素-6-硫酸鹽、硫酸皮膚素、硫酸角蛋白)，細胞基質和/或其它材料諸如但不限于明膠、藻酸鹽、瓊脂、瓊脂糖和植物樹膠等的添加。含UTC框架是根據本領域已知的方法進行制備的。例如，可以使細胞在培養容器中自由生長至亞匯合或匯合，從培養物中取出并接種在框架上。可在接種細胞以觸發分化和組織形成之前、期間或之后將生長因子加入培養基，如果需要的話。可選地，可對框架本身進行修飾以便其上的細胞生長得以增強，或以便植入物的排斥風險得以降低。因而，可將一種或多種生物活性化合物，包括但不限于抗炎藥、免疫抑制劑或生長因子加入框架用于局部釋放。可以多種方式應用UTC、或包含UTC的細胞群、或UTC產生的組分或產物，以支持和促進神經細胞和組織的修復和再生。這種效用包括體外、先體外后體內和體內方法。體外和先體外后體內方法
可將UTC在體外使用以針對藥物試劑、生長因子、調節因子等的有效性和細胞毒性篩選多種化合物。例如，這種篩選可在基本上同質的UTC群中進行以評估與UTC配制或共施用來治療神經學損傷的候選化合物的功效或毒性。可選地，這種篩選可在已被刺激以分化成神經細胞或神經祖細胞的UTC上進行，用于評價新的藥物候選物的功效。在此實施方案中，將UTC在體外維持并暴露于待測試化合物。潛在的細胞毒性化合物的活性可以通過其損害或殺死培養物中的細胞的能力測量。這可通過活體染色技術容易地評估。生長或調節因子的作用可通過分析與未暴露于所述因子的細胞相比培養的細胞的數目或強壯性 (robustness)進行評估。這可應用標準的細胞學和/或組織學技術完成，包括利用限定類型特異性細胞抗原的抗體的免疫細胞化學技術的應用。另外，如上文論述的，可以在體外培養UTC以產生生物學產物，所述產物或是細胞天然產生的，或是由細胞在誘導以分化成神經或其它譜系時產生的，或是由細胞通過遺傳修飾產生的。例如，發現 TIMPl、TPO、KGF、HGF、FGF、HBEGF、BDNF、MIPlb、MCPl、RANTES、1309、 TARC、MDC和IL-8從在生長培養基中生長的UTC分泌。這些營養因子中的一些，諸如BDNF 和IL-6，在神經再生中具有重要作用。如尚未檢測到或尚未檢查到的在神經修復和再生中有用的其它營養因子有可能由UTC產生并可能分泌到培養基中。 同樣，可將UTC用于條件培養基的產生，其或是從未分化的UTC或是從在刺激分化成神經或其它譜系的條件下溫育的UTC產生。例如，這種條件培養基預期應用于神經原性前體細胞的體外或先體外后體內培養中，或在體內應用以支持包含UTC同質群或含UTC和神經祖先的異質群的移植的細胞。另外，可將UTC裂解物、其可溶性細胞級分或組分、或ECM或其組分用于多種目的。 如上文所指出的，可將這些組分中的一些用在藥物組合物中。另外，可將細胞裂解物或ECM 用于包被或以另外的方式處理待外科手術應用或用于植入或用于先體外后體內目的的物質或設備，以促進在這種治療過程中接觸的細胞或組織的愈合或存活。進一步地，可將UTC用于體外共培養中以對其它細胞，具體而言神經細胞和神經祖先提供營養支持。對于共培養，可需要UTC和需要的其它細胞在其中兩種細胞類型接觸的條件下共培養。例如，這可以通過將作為異質細胞群的細胞接種在培養基中或接種在合適的培養基質上而實現。可選地，可以首先使UTC生長至匯合，并且然后將其充當用于培養物中的第二所需細胞類型的基質。另外，可對細胞進行進一步物理分離，例如，通過膜或類似設備，以便在共培養時間段后其它細胞類型可被取出并單獨應用。UTC在共培養物中促進神經細胞類型擴增和分化的應用可在研究和在臨床/治療領域中具有可用性。例如，可利用UTC共培養來促進神經細胞在培養物中的生長和分化，例如，用于基礎研究目的或在藥物篩選測定中應用。也可利用UTC共培養進行神經祖先的先體外后體內擴增，用于針對治療目的的隨后施用。例如，可將神經祖細胞從個體收獲，在與UTC的共培養物中先體外后體內擴增，然后返回到該個體(自體轉移)或另一個體(同系或同種異體轉移)中。先體外后體內擴增之后，可將包含UTC和神經祖先的混合細胞群施用給需要治療的患者。可選地，在其中自體轉移是適當的或需要的情況下，可將共培養的細胞群在培養物中物理分離， 從而使得能夠移動自體神經祖先用于給患者施用。體內方法
如實施例2-10列出的，UTC已顯示出有效移植到體內，并且在對于其在人中的功效的可預測性公認的動物模型中提供丟失的神經功能。一旦移植到體內的靶向的神經位置，UTC 本身就可分化成一種或多種神經表型，或它們可原位提供對神經祖先和神經細胞的營養支持，或它們可以這兩種方式施加有益作用，以及其它。可將UTC單獨施用(例如，作為基本上同質群)或作為與其它細胞的混合物施用。 如上所述，可將UTC如在與基質或支架或與常規藥學上可接受的載體的藥物制劑中配制的而施用。在將UTC連同其它細胞施用的情況下，它們可與其它細胞同時或順序施用(或是在其它細胞之前或是在其它細胞之后)。可與UTC —起施用的細胞包括但不限于神經元、星形膠質細胞、少突膠質細胞、神經祖細胞、神經干細胞和/或其它多能或多潛能干細胞。可在施用前立即或不久將不同類型的細胞與UTC混合，或可在施用前將它們一起共培養一段時間。可將UTC連同其它神經-有益藥物或生物分子、或其它活性劑施用，諸如抗炎藥、 抗凋亡劑、抗氧化劑、生長因子、神經營養因子或神經再生或神經保護藥物，如本領域已知的。當將UTC連同其它試劑施用時，可將它們在單一藥物組合物中一起施用，或在分開的藥物組合物中與其它試劑同時或順序施用(在其它試劑施用之前或之后)。可連同UTC施用的其它組分的實例包括但不限于(1)其它神經保護或神經有益藥物；O)選擇的細胞外基質組分，諸如一種或多種類型的本領域已知的膠原，和/或生長因子，富血小板血漿和藥物(可選地，UTC可被基因工程改造以表達和產生生長因子)；(3) 抗凋亡劑(例如，促紅細胞生成素(ΕΡ0)、ΕΡ0模擬體、血小板生成素、胰島素樣生長因子 (IGF)-I.IGF- II、肝細胞生長因子、胱天蛋白酶抑制劑)；(4)抗炎化合物(例如，p38 MAP 激酶抑制劑、TGF-β抑制劑、抑制素、IL-6和IL-I抑制劑、吡嘧司特(PEMIR0LAST)、曲尼司特(TRANILAST)、REMICADE、西羅莫司(SIR0LIMUS)和非類固醇消炎藥(NSAIDS)(諸如替波沙林(TEP0XALIN)、托美汀(T0LMETIN)和SUPR0FEN) ； (5)免疫抑制或免疫調諧劑，諸如鈣依賴磷酸酶抑制劑、mTOR抑制劑、抗增殖劑、皮質類固醇和各種抗體；(6)抗氧化劑諸如丙丁酚、維生素C和E、輔酶Q-10、谷胱苷肽、L-半胱氨酸和N-乙酰基半胱氨酸；和(7)局部麻醉劑，僅舉幾個例子。例如，可將UTC作為未分化細胞施用，S卩，如在生長培養基中培養的。可選地，可將UTC在在培養物中暴露于刺激向所需神經表型分化的條件之后施用，所述所需神經表型例如星形膠質細胞、少突膠質細胞或神經元，和更具體地，5-羥色胺能、多巴胺能、膽堿能、 Y -氨基丁酸-能或谷氨酸能神經元(參見，例如，Isacson, Q, Lancet Neurology, 2003; 2 (7) 417-424，或支持神經再生或修復的其它譜系。可將UTC外科手術植入、注射、遞送(例如，通過導管或注射器的方式)或以其它方式直接或間接地施用到神經學損害或痛苦位點。UTC或其組合物的施用途徑包括但不限于，靜脈內、肌內、皮下、鼻內、大腦內、心室內、腦室內、鞘內、腦池內、脊柱內和/或脊柱旁施用途徑，其通過經顱內或脊椎內針和/或導管帶有或不帶有泵設備遞送實施。當將細胞在半固體或固體設備中施用時，外科手術植入到體內精確位置一般是合適的施用方式。然而，可將液體或流體藥物組合物施用到CNS或PNS中的更全面位置(例如，遍及彌散性受侵襲區域，例如，諸如在彌散性缺血損害中的情況)，因為神經祖細胞已顯示能夠從向神經系統的進入點廣泛遷移到具體位置，例如，通過跟隨放射狀神經膠質細胞或通過響應于化學信號。神經干細胞的該遷移能力已打開了用于惡性腦腫瘤治療的新途徑，S卩，應用祖細胞遞送治療性基因/基因產物用于這些遷移性腫瘤的治療。例如，已報道，神經干細胞在植入成體嚙齒類動物體內顱內神經膠質瘤時自身快速并且廣泛地通過腫瘤床分布并與擴增和前進中的腫瘤細胞并列遷移，同時持續穩定地表達外來基因(Aboody，K,等人， Natl. Acad. Sci. USA, 2000 ； 97:12846-12851) 也預期 UTC 適于這種類型的應用， 艮口，可將基因修飾以產生凋亡或其它抗瘤劑，例如IL-12 (Ehtesham, M,等k, Cancer Research, 2002; 62 5657-5663)或腫瘤壞死因子相關凋亡-誘導配體(Ehtesham, M,等 k, Cancer Research, 2002; 62:7170-7174)的UTC注射或以其它方式施用到惡性腫瘤 (例如，成膠質細胞瘤)的全面位點，然后UTC可以遷移到腫瘤細胞用于治療性試劑的局部遞送。通過分化成一種或多種神經表型或通過對神經祖先和神經細胞提供營養支持，UTC也可以促進腫瘤治療后的神經學修復，如上所述。另外，本發明提供了通過施用包含UTC細胞組分(例如，細胞裂解物或其組分)或產物(例如，UTC天然產生或通過遺傳修飾產生的營養和其它生物學因子，來自UTC培養的條件培養基)的藥物組合物治療神經學損傷的方法。再次地，這些方法可進一步包括施用其它活性劑，諸如生長因子、神經營養因子或神經再生或神經保護藥物，如本領域已知的。用于施用UTC或本文描述的任何其它藥物組合物的劑型和方案依照醫學規范 (good medical practice)考慮個別患者的狀況開發，例如，神經變性狀況的性質和程度、 年齡、性別、體重和一般醫學狀況、和醫學專業人員已知的其它因素。因而，待施用給患者的藥物組合物的有效量通過本領域已知的這些考慮確定。由于CNS是有些免疫特權的(immunoprivileged)組織，所以在起始應用UTC的細胞治療之前可不必需或希望免疫抑制患者。以前已顯示，UTC不刺激混合淋巴細胞反應中的同種異體PBMCs。(參見美國專利申請號10/877,269)。因此，用同種異體或甚至異種UTC 移植在一些情況下可耐受。在其它情況下，在起始細胞治療之前，可希望或適于藥學地免疫抑制患者。這可通過使用全身或局部免疫抑制劑完成，或其可通過在被囊化設備中遞送細胞完成，如上文所述。用于降低或消除對移植的細胞的免疫應答的這些和其它方式是本領域已知的。作為替代，UTC可被基因修飾以降低它們的免疫原性，如上所述。
移植的UTC在活患者中的存活可以通過使用多種掃描技術測定，例如，計算機控制軸向X線斷層攝影術(CAT或CT)掃描、磁共振成像(MRI)或正電子發射橫體層攝影術 (PET)掃描。移植物存活的測定也可以在死后通過取出神經組織、并視覺或通過顯微鏡檢測它進行。可選地，細胞可以用特異于神經細胞或其產物如神經遞質的染料處理。移植的細胞也可以通過在先摻入示蹤染料進行鑒定，諸如羅丹明或熒光素標記的小球體、堅牢藍、高鐵微粒、雙苯甲酰胺或遺傳引入的報道基因產物諸如半乳糖苷酶或葡糖醛酸糖苷酶。移植的UTC向受試者神經組織中的功能整合可以通過檢查損害或患病的神經功能的恢復進行評估。根據神經生物學家和醫師公知的程序，這種功能包括但不限于運動、認知、感覺和內分泌功能。可以將神經功能通過UTC的這種恢復用在神經學損傷后改進患者中神經學功能的方法中。另外，可將UTC用在刺激患者中SVZ的再生能力的方法中。例如，SVZ的再生能力可通過顯示存在神經發生、血管發生或突觸發生方面的增加得到刺激。神經發生方面的增加指示SVZ中的祖細胞在制劑中增殖以取代損傷或損害的神經細胞，并且存在新形成的成神經細胞和其它未成熟的神經元。血管發生方面的增加指示在損傷或損害區域發生新血管形成以對損傷或損害組織或對正在形成以取代損傷或損害組織的組織提供氧供應。突觸發生方面的增加指示新突觸正在形成，這最有可能是響應于引起已存在的功能突觸的數目方面的減少的一些刺激物。UTC引起神經發生、血管發生和突觸發生方面增加的能力在實施例 3-10中列出。進一步地，UTC可減少腦的損傷或損害部分中凋亡細胞的數目。凋亡可為外傷性腦損傷后繼發性腦損傷的原因，并且高凋亡速度可與外傷性腦損傷后較差的預后相關。(參 Himmhres 等)κ, Journal of Neurotrauma, 2008; 25(6) :581-591).因此，經歷損傷或損害的腦區域中凋亡的減少可增加存活、改進神經學功能和從損傷中恢復，并且可充當其它治療的輔助，諸如刺激損傷后患者中SVZ的再生能力。實施例7和9證明UTC減少腦組織的損害部分中凋亡的能力。另一方面，本發明提供在如上述用于神經再生和修復的各種方法中利用UTC、UTC 群、UTC的組分和產物的試劑盒。在用于神經學損傷的治療或其它預定治療的情況下，試劑盒可包含一種或多種細胞群，其包含至少UTC和藥學上可接受的載體(液體、半固體或固體)。試劑盒也任選地可包含施用細胞的工具，例如通過注射。試劑盒還可包含細胞的使用說明書。制備用于野戰醫院應用，諸如用于軍事應用的試劑盒可包含全部程序供應，包含組織支架、外科手術縫線等，其中將細胞與急性損傷的修復一起使用。用于如本文描述的測定和體外方法的試劑盒可包含下列中的一種或多種(1) UTC或UTC的組分或產物，(2)用于實踐體外方法的試劑，(3)適當地，其它細胞或細胞群，和用于進行體外方法的說明書。提供下列實施例以更詳細地描述本發明。它們意圖舉例說明而不是限制本發明。下列縮寫可在實施例以及說明書和權利要求書中的其它處出現 AM72 (或Aj 松)表示促血管生成素2
^ 1表示抗原呈遞細胞
廠表示腦衍生神經營養因子bFGF表示堿性成纖維細胞生長因子
bid (BID)表示“bis in die” (每日 2 次)
07S表示細胞角蛋白18
表示中樞神經系統 CXC歡體J表示趨化因子受體配體3 DMEM散示Dulbecco，s極限必需培養基 DMEM:lg、WLDMEM:Lg，DMEMLG)表示帶有低葡萄糖的 DMEM 徹7 表示乙二胺四乙酸 EGF (SJcE)表示表皮生長因子 FACS表示熒光激活細胞分選術 / 表示胎牛血清
FGF (或F)表示成纖維細胞生長因子 GCF-J 表示粒細胞趨化蛋白-2
示膠質細胞原纖維酸性蛋白 HB-EGF^mm -結合表皮生長因子 HCAEC表示人冠狀動脈內皮細胞
表示肝細胞生長因子 MST表示人間充質干細胞
HNF-I α表示肝細胞-特異性轉錄因子Ια ；表示人臍靜脈內皮細胞
1309表示趨化因子和CCR8受體的配體
IGF-I表示胰島素樣生長因子1
7Ζ-6表示白細胞介素-6 ；TZ-S表示白細胞介素8
Λ7沒表示角蛋白19 ；M表示角蛋白8
於^表示角質形成細胞生長因子
ZTF表示白血病抑制因子
MP表示髓鞘堿性蛋白
iCF-7表示單核細胞趨化蛋白1
表示巨噬細胞-來源的趨化因子 MIPla表示巨噬細胞炎性蛋白1 α MIPn表示巨噬細胞炎性蛋白1 β 表示基質金屬蛋白酶(MMP) 表示間充質干細胞 NHDF表示正常人皮膚成纖維細胞 NPE表示神經祖先擴增培養基 04表示少突膠質細胞或神經膠質細胞分化標記04 /^JC表示外周血單核細胞 / 表示磷酸緩沖鹽水 PDGFbb表示血小板/WS表示外周神經系統
Rantes ( iRANTES)表示調節活化、正常T細胞表達和分泌
表示重組人生長和分化因子5 SC表示皮下地
SDF-I α表示基質衍生因子1 α
表不 sonic hedgehog 5KF表示標準操作程序 7 ^表示胸腺和活化-調節的趨化因子
表示組織培養塑料 TCPS表示組織培養聚苯乙烯 TiFAJ 表示轉化生長因子β 2 TiFA-J表示轉化生長因子β-3 TIMPl表示組織基質金屬蛋白酶抑制劑1 TPO表示血小板生成素 71/刀表示BIII微管蛋白防表示血管內皮生長因子 rfF 表不 von Willebrand 因子 σ所表示甲胎蛋白。另外，如下列實施例和說明書中其它處所用的，可根據美國專利申請號 10/877，269的公開內容對本發明方法中有用的UTC進行分離和表征，所述申請在其涉及 UTC的描述、分離和表征的情況下整體引入作為參考。實施例1 細胞的長期神經分化
對臍-來源的細胞經歷向神經譜系細胞長期分化的能力進行了評價。如實施例13-15 中描述地對UTC進行分離和擴增。將先前在生長培養基中生長的UTC(臍(02280 Pll ； (042203)P11 ； (071003) P12)的冷凍等分試樣解凍并以5，000細胞/cm2鋪平板在T-75瓶中，所述瓶包被以含有B27 (B27補充物，InVitr0gen)、L-谷氨酰胺G mM)和青霉素/鏈霉素(10毫升)的神經基礎-A 培養基 Gnvitrogen, Carlsbad, Ca.)中的層粘連蛋白(BD, Franklin Lakes, N.J·)，其組合在本文中稱為神經祖先擴增(NPE)培養基。將NPE培養基進一步補充以bFGF QO ng/ ml, Peprotech, Rocky Hill, N. J.)禾口 EGF (20 ng/ml, Peprotech, Rocky Hill, N. J.)， 其在本文中稱為NPE + bFGF + EGF。另外，將成體人皮膚成纖維細胞(Pll，Cambrex, ffalkersville, MD)和間充質干細胞(P5，Cambrex)解凍并以相同細胞接種密度在層粘連蛋白-包被的T-75瓶中鋪平板在NPE + bFGF + EGF中。作為進一步的對照，將成纖維細胞、臍和胎盤-來源的細胞生長在生長培養基中，對所有培養物進行指定的時間段。每周1次將來自所有培養物的培養基替換以新鮮培養基，并觀察細胞擴增。一般地，每一培養物在1個月時間段內傳代1次，這是因為在NPE + bFGF + EGF中的有限生長。1個月時間段后，于室溫將所有瓶用冷4% (w/v)低聚甲醛(Sigma)固定10分鐘。應用針對iTuJl (Bill微管蛋白；1:500; Sigma, St. Louis, Mo.)和GFAP(膠質細胞原纖維酸性蛋白；1:2000; DakoCytomation, Carpinteria, Ca.)的抗體進行免疫細胞化學。簡言之，將培養物用磷酸緩沖鹽水(PBS)洗滌并將其暴露于含PBS、4% (ν/ν)山羊血清(Chemicon, Temecula, Ca.)和 0. 3% (v/v) Triton (Triton X-IOO ； Sigma)的蛋白封閉溶液中進行30分鐘以接近細胞內抗原。然后將在封閉溶液中稀釋的第一抗體應用到培養物中，在室溫進行1小時時間段。然后，除去第一抗體溶液，并在應用含有連同山羊抗-小鼠 IgG - Texas Red (1 250,Molecular Probes,Eugene,OR)禾口山羊抗-兔 IgG - Alexa 488 (1:250,Molecular Probes) 一起的封閉的第二抗體溶液(在室溫1小時)之前，將培養物用PBS洗滌。然后洗滌培養物，并應用10微摩爾DAPI (Molecular Probes)進行10 分鐘以使細胞核可見。在免疫染色后，使用適當的熒光濾光片在Olympus倒置表面熒光顯微鏡 (Olympus, Melville, N. Y.)上顯現熒光。在所有情況下，陽性染色代表高于對照染色的熒光信號，在對照染色中遵循上文概述的整個程序，除了應用第一抗體溶液外。代表性圖像是使用數字彩色攝影機和ImagePro軟件(Media Cybernetics, Carlsbad, Ca.)捕獲的。對三重染色的樣品而言，每一張圖像均是使用一次僅一個發射濾光片采集的。然后使用Adobe Photoshop軟件(Adobe, San Jose, Ca.)制備分層的蒙太奇。表1-1. 應用的第一抗體的概述
權利要求
1.治療患有神經學損傷的患者的方法，包括以有效治療所述神經學損傷的量給所述患者施用分離的臍帶組織-來源的細胞，其中所述臍帶組織-來源的細胞來源于基本上不含血液的人臍帶組織，其中所述細胞能夠在培養中自我更新和擴增，并具有分化成至少神經表型的細胞的潛能；并且其中所述細胞不表達CD117。
2.權利要求1的方法，其中所述神經學損傷是腦缺血、急性缺血后再灌注、圍產期缺氧-缺血性損傷、心跳停止、顱內出血、顱內損害、頸椎挫傷或驚嚇嬰兒綜合征。
3.權利要求1的方法，其中將所述細胞基因工程改造以產生促進所述神經學損傷治療的基因產物。
4.權利要求1的方法，其中將所述細胞連同至少一種其它細胞類型施用。
5.權利要求4的方法，其中所述其它細胞類型是星形膠質細胞、少突膠質細胞、神經元、神經祖先、神經干細胞或其它多能或多潛能干細胞。
6.權利要求1的方法，其中將所述細胞在所述患者中樞或外周神經系統中的預定位點施用。
7.權利要求1的方法，其中所述臍帶組織-來源的細胞不表達hTERT或端粒酶。
8.權利要求1的方法，其中將所述細胞通過注射或輸注施用。
9.刺激患者室下區(SVZ)的再生能力的方法，包括以有效增加神經發生、血管發生或突觸發生的量給所述患者施用分離的臍帶組織-來源的細胞，其中所述臍帶組織-來源的細胞來源于基本上不含血液的人臍帶組織，其中所述細胞能夠在培養中自我更新和擴增， 并具有分化成至少神經表型的細胞的潛能；并且其中所述細胞不表達CD117。
10.權利要求9的方法，其中將所述細胞基因工程改造以產生促進所述室下區的再生能力的基因產物。
11.權利要求9的方法，其中將所述細胞連同至少一種其它細胞類型施用。
12.權利要求11的方法，其中所述其它細胞類型是星形膠質細胞、少突膠質細胞、神經元、神經祖先、神經干細胞或其它多能或多潛能干細胞。
13.權利要求9的方法，其中將所述細胞在所述患者中樞或外周神經系統中的預定位點施用。
14.權利要求9的方法，其中將所述細胞通過注射或輸注施用。
15.權利要求1的方法，其中所述細胞需要L-纈氨酸用于生長并且可以在至少約5% 氧中生長。
16.權利要求1的方法，其中所述細胞表達⑶10、⑶13、⑶44、⑶73、⑶90、PDGFr-a和 HLA-A、B、C中的一種或多種。
17.權利要求1的方法，其中所述細胞表達⑶10、⑶13、⑶44、⑶73、⑶90、PDGFr-a和 HLA-A、B、C中的每一種。
18.權利要求1的方法，其中所述細胞不表達⑶31、⑶34、⑶45、⑶141和HLA-DR、DP、 DQ中的一種或多種。
19.權利要求1的方法，其中所述細胞不表達⑶31、⑶34、⑶45、⑶141和HLA-DR、DP、 DQ中的任一種。
20.權利要求9的方法，其中所述細胞需要L-纈氨酸用于生長并且可以在至少約5% 氧中生長。
21.權利要求1的方法，其中所述細胞表達⑶10、⑶13、⑶44、⑶73、⑶90、PDGFr-a和 HLA-A、B、C中的一種或多種。
22.權利要求1的方法，其中所述細胞表達⑶10、⑶13、⑶44、⑶73、⑶90、PDGFr-a和 HLA-A、B、C中的每一種。
23.權利要求1的方法，其中所述細胞不表達⑶31、⑶34、⑶45、⑶141和HLA-DR、DP、 DQ中的一種或多種。
24.權利要求1的方法，其中所述細胞不表達⑶31、⑶34、⑶45、⑶141和HLA-DR、DP、 DQ中的任一種。
25.用于治療患有神經學損傷的患者的藥物組合物，包含藥學上可接受的載體和有效治療所述神經學損傷的量的分離的臍帶組織-來源的細胞，其中所述臍帶組織-來源的細胞來源于基本上不含血液的人臍帶組織，其中所述細胞能夠在培養中自我更新和擴增，并具有分化成至少神經表型的細胞的潛能；并且其中所述細胞不表達CD117。
26.權利要求25的藥物組合物，其中所述細胞表達CD10、⑶13、⑶44、⑶73、⑶90、 PDGFr- α禾口 HLA-A、B、C中的一種或多種。
27.權利要求25的藥物組合物，其中所述細胞表達CD10、⑶13、⑶44、⑶73、⑶90、 PDGFr- α 禾口 HLA-A、B、C 中的每一種。
28.權利要求25的藥物組合物，其中所述細胞不表達⑶31、⑶34、⑶45、⑶141和 HLA-DR、DP、DQ中的一種或多種。
29.權利要求25的藥物組合物，其中所述細胞不表達⑶31、⑶34、⑶45、⑶141和 HLA-DR、DP、DQ 中的任一種。
30.用于治療患有神經學損傷的患者的試劑盒，所述試劑盒包含藥學上可接受的載體、 分離的臍帶組織-來源的細胞的群和在治療所述患者的方法中應用所述試劑盒的說明書， 其中所述臍帶組織-來源的細胞來源于基本上不含血液的人臍帶組織，其中所述細胞能夠在培養中自我更新和擴增，并具有分化成至少神經表型的細胞的潛能；并且其中所述細胞不表達CD117。
31.權利要求30的試劑盒，其還包含至少一種其它細胞類型的群。
32.權利要求30的試劑盒，其中所述細胞表達⑶10、⑶13、⑶44、⑶73、⑶90、PDGFr-a 和HLA-A、B、C中的一種或多種。
33.權利要求30的試劑盒，其中所述細胞表達⑶10、⑶13、⑶44、⑶73、⑶90、PDGFr-a 和HLA-A、B、C中的每一種。
34.權利要求30的試劑盒，其中所述不表達CD31、CD;34、CD45、CD141和HLA_DR、DP、DQ 中的一種或多種。
35.權利要求30的試劑盒，其中所述細胞不表達⑶31、⑶34、⑶45、⑶141和HLA-DR、 DP、DQ中的任一種。
全文摘要
公開了用于在損傷后再生或修復神經組織、減少凋亡和改進神經學功能的方法、藥物組合物和試劑盒。
文檔編號A61P25/00GK102458425SQ200980157008
公開日2012年5月16日 申請日期2009年12月19日 優先權日2008年12月19日
發明者戈謝夫斯卡 A., 賽達 A. 申請人:伊西康公司