專利名稱：：氨基磺酰吡唑類化合物及其用途的制作方法
技術領域：
：本發明涉及氨基磺酰吡唑類化合物及其制備方法，該類物質可用于解熱鎮痛抗炎和腫瘤防治。
背景技術：
：氨基磺酰吡唑類藥物作為新型解熱、鎮痛和抗炎藥物避免了經典NSAIDs常見的胃腸道和腎臟損害作用，將治療作用與不良作用有效分離，在很大程度上避免了傳統NSAIDs所帶來的胃腸道毒副反應，是抗炎藥發展史上的一個新的里程碑。隨著C0X-2與各器官功能及疾病關系的不斷闡明，吡唑類C0X-2選擇性抑制劑除鎮痛、解熱和抗炎用于風濕性關節炎及骨性關節炎等疾病的治療外，近年廣泛用于缺血再灌注、中風、胃腺癌、結腸癌、家族性直腸多發性息肉和老年性癡呆(AlzheimersDisease)等癥的治療中并取得一定的進展。另外，手術或創傷等組織損傷會導致炎性介質釋放，從而激活外周傷害感受器，后者被激活后，傷害性信號便會經脊髓上行傳導束傳至丘腦和大腦皮層，這些信號在中樞進行整合后就會使人產生疼痛感覺，中樞神經系統又經下行傳導通路對疼痛進行調控。選擇性C0X-2抑制劑以其獨特的藥理機制，降低了疼痛患者的痛覺超敏，實現了治療各種急性疼痛的良好療效，且患者對其耐受性較好，在手術期和其他急性疼痛治療中應用更具優勢和臨床價值，已成為急性疼痛患者治療的新選擇。發明人曾對氨基磺酰吡唑類藥物作了研究，在多個文獻中(a)ActaPharmacolSin,2005，26(12)，1505—1511；b)ActaPharmacolSin,2004,25(11),1509-1514；c)世界華人消化雜志，2008，16(2)，1287-1293；d)第四軍醫大學學位論文，張邦樂，2003；郝麗麗，2004；白卉，2008;e)中國新藥雜志，2002;11(11)859)公開了設計合成的氨基磺酰吡唑類前體藥物分子的鎮痛抗炎、腫瘤防治等作用。但已報道化合物生物利用度低，水溶性差，極大限制了其應用。本發明采用前體藥物方式，設計制備一類新型的氨基磺酰吡唑類化合物及其藥學上可接受的鹽，修飾或改變該類化合物的理化性質，并將其用于解熱鎮痛抗炎和腫瘤防治方面。
發明內容本發明的目的是提供一類具有藥用價值的氨基磺酰吡唑類化合物或其藥學上可接受的鹽，進一步的目的在于提供該類化合物在解熱鎮痛抗炎和腫瘤防治中的應用。本發明的藥物結構通式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中n為16的整數；禮為C1C9烷基，C3C7元脂肪環或雜環，鹵素、硝基、C1C6烷基、C1C6烷氧基取代或未取代的苯基、萘基、含13個雜原子的芳雜環；R2為氫；R3為氫或C02H.上述化合物藥學上可接受的鹽(R2的氫成鹽或R3中co2H成鹽CO2R4)，所述鹽R2，R4陽離子為堿金屬陽離子、堿土金屬陽離子、銨陽離子、C1C9烷基取代的銨陽離子、芳香基取代的銨陽離子或堿性氨基酸(如精氨酸、賴氨酸或組氨酸)。其中優選化合物4-[4-(5-(2-萘基)-3-三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸5N-[4-(5-(2-萘基)-3-三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺64-[4-(5-(4-甲基苯基)-3-三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸84-[4-(5-(2-萘基)-3-三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸單鈉鹽9和二鈉鹽104-[4-(5-(4-甲基苯基)-3-三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸單鈉鹽11和二鈉鹽12N-[4-(5-(2-萘基)-3-三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]-乙酰胺鈉鹽134-[4-(5-(4-叔丁基苯基)-3-三氟甲基-1-氫-卩比唑-1-基)-苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸144-[4-(5-(4-叔丁基苯基)-3-三氟甲基-1-氫-卩比唑-1-基)-苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸單鈉鹽15二鈉鹽16N-[4-(5-(4-叔丁基苯基)-3-三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]-乙酰胺17N-[4-(5-(4-叔丁基苯基)-3-三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺鈉鹽18N-[4-(5-(2-萘基)_3_三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_丙酰胺鈉鹽19N-[4-(5-(2-萘基)_3_三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_丁酰胺鈉鹽204-[4-(5-(2，4-二甲基噻唑-5-基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸214-[4-(5-(2，4-二甲基噻唑-5-基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸單鈉鹽22和二鈉鹽234-[4-(5-(噻唑-2-基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸244-[4-(5-(噻唑-2-基)_3_三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸單鈉鹽25和二鈉鹽264-[4-(5-乙基-3-三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸274-[4-(5-乙基-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸單鈉鹽28和二鈉鹽294-[4-(5-丙基-3-三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸304-[4-(5-丙基-3-三氟甲基-1-氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸單鈉鹽31和二鈉鹽324-[4-(5-(3-甲基丙基)-3-三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸334-[4-(5-(3-甲基丙基)_3_三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸單鈉鹽34和二鈉鹽354-[4-(4，5-并環己基)_3_三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸364-[4-(4，5-并環己基)_3_三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸單鈉鹽37和二鈉鹽384-[4-(5-甲基)-3-三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸394-[4-(5-甲基)-3-三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸單鈉鹽40和二鈉鹽41N-[4-(5-(4-叔丁基苯基)_3_三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]-丙酰胺42N-[4-(5-(4-叔丁基苯基)_3_三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]-丁酰胺43N-[4-(5-(4-叔丁基苯基)_3_三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]-丙酰胺鈉鹽44N-[4-(5-(4-叔丁基苯基)-3-三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]-丁酰胺鈉鹽454-[4-(5-(2,4-二氯噻吩_3_基)_3_三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸464-[4-(5-(2,4-二氯噻吩_3_基)_3_三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸單鈉鹽47和二鈉鹽484-[4-(5-(N-甲基吡咯-2-基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸494-[4-(5-(N-甲基吡咯-2-基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸單鈉鹽50和二鈉鹽514-[4-(5-環丁基-3-三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸524-[4-(5-環丁基-3-三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_4_氧代丁酸單鈉鹽53和二鈉鹽544-[4-((4，5)并(1，2)四氫萘基_3_三氟甲基氫-吡唑基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸554-[4-((4，5)并(1，2)四氫萘基_3_三氟甲基氫-吡唑基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸單鈉鹽56和二鈉鹽57N-[4-((4，5)并(1，2)四氫萘基_3_三氟甲基氫-吡唑基)-苯磺酰氨基]-乙酰胺鈉鹽58N-[4-(5-環丁基-3-三氟甲基-1-氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺鈉鹽59N-[4-(5-(N-甲基吡咯-2-基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-乙酰胺鈉鹽60N-[4-(5-(2,4-二氯噻吩_3_基)_3_三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]-乙酰胺鈉鹽61N-[4-(5-甲基-3-三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺鈉鹽62N-[4-(5-乙基-3-三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺鈉鹽63N-[4-(5-丙基-3-三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺鈉鹽64N-[4-(4，5-并環己基_3_三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]-乙酰胺鈉鹽65N-[4-(5-(3-甲基乙基)_3_三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]-乙酰胺鈉鹽66N-[4-(5-(噻唑-2-基)_3_三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]-乙酰胺鈉鹽67通式(I)化合物的制備方法通式⑴所示的衍生物可以用如下所示方法制備。以系列化合物2為原料(該類化合物的合成可采用發明人公開的文獻方法合成，見
背景技術：
相關文獻)，經與一元或二元酸或酸酐在氯化亞砜/吡啶；CH2Cl2/NEt3；或吡啶/DMAP下酰化得系列目標化合物3，3與1分子或2分子無機堿、有機堿或堿性氨基酸在溶劑甲醇、乙醇、乙醚、四氫呋喃、丙酮、水、1，4-二氧六環、N,N-二甲基甲酰胺或上述溶劑的混合溶劑中成鹽反應進一步得藥學上可接受的鹽。制備路線如下式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>以上反應路線中的取代基R1,R2,R3的含義如前所述。本發明同時提供式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽作為活性成分與適合的藥物載體或賦形劑形成的藥用組合物的應用。該類化合物或其藥學上可接受的鹽與一種或多種生理上可接受的賦形劑或載體(如生理鹽水、注射用水、淀粉、糊精等)混合后，可以配制成注射、口服、口腔、舌下、植入、局部用藥或直腸給藥的藥用組合物。本發明的氨基磺酰吡唑類衍生物或其藥學上可接受的鹽可以應用于解熱鎮痛抗炎和腫瘤防治方面。試驗結果表明，上述化合物具有明顯的解熱鎮痛抗炎和腫瘤防治作用。檢測解熱鎮痛抗炎和腫瘤防治作用效果的體內外試驗方法是本領域技術人員公知的，參見2007呂秋軍化學工業出版社《新藥藥理學研究方法》，在此引入作為參考。而且，在相關實施方案中，預期本發明的方法與其它藥物，尤其抗腫瘤療法聯合使用時，用于協同治療或降低每種療法劑量和藥物毒副作用。具體實施例方式下面通過實施例對本發明作進一步描述，本發明范圍不限于以下實例。實施例14-[4-(5-(2-萘基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸5的合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>方法1在裝有磁力攪拌器和回流裝置的干燥的250mL圓底燒瓶中加入42.2g、丁二酸酐2.65g、三乙胺3.21g和二氯甲烷50mL,加熱回流20小時(TLC檢測終點)，冷卻，減壓蒸除溶劑二氯甲烷。殘余物直接硅膠柱層析分離(二氯甲烷-甲醇為流動相)，得白色固體2.26goY=83%;mp:104°C105°C；力NMR(CD3OD,400MHz)δ7.98(d,J=8.4Hz,2H),7.857.55(m，4H)，7.527.48(m，4Η)，7.26(d，J=8.4Hz，1H)，7.06(s，1H)，2.52(s，2H),2.48(s,2H)ppm；MS(m/z,ESI+)518[M+H]541[M+Na]+；IR(KBr):3433，3055，2987，2684,2358,1629，1265cm-1.方法2在干燥的50mL圓底燒瓶中加入4，在新蒸吡啶和DMAP中110°C加熱回流12小時(TLC監測反應)，分離純化后得純品，收率46%。實施例2N-[4-(5-(2_萘基)_3_三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺6的合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>參照實施例1方法，由化合物4與醋酐制得。收率78%。IR(KBr)=3401,3052,2992,2312,1415,892,708cm_1；δ7.94(d,J=8.0Hz，2H)，7.817.53(m，4H)，7.507.47(m,4H),7.25(d,J=8.OHz,1H),7.03(s,1H),2.15(s，3H)ppm；MS(m/z,ESI+)460[M+H]+.其它氨基磺酰吡唑類化合物單酸酰化產物也參照實施例1方法制得。實施例34-[4-(5-(4-甲基苯基)_3_三氟甲基氫-吡唑基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸8的合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>參照實施例1方法由化合物7制得。mp76-78°C；IR(KBr):3389，3055，2988，2831，2685,2305,1421,897,706cm_1；1HNMR[CD3OD,400MHz]δ2.14(s,3H),2.37(t,J=9.2Hz2H)，2·53(t,J=4.4Hz2Η)，6·90(s,1Η)，7.15(d,J=8.0Ηζ，2Η)，7·21(d，J=7.2Ηζ，2Η)，7.51(d，J=8.8Ηζ，2Η)，8·01(d，J=8.4Hz，2H)ppm；MS[m/z,ESI+]:504[M+Na]+。單酸酰化產物參照實施例2方法制得。實施例44-[4-(5-(2_萘基)_3_三氟甲基氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸單鈉鹽9和二鈉鹽10的合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>在干燥的50mL圓底燒瓶中加入化合物(5)0.22g和甲醇10mL。冰浴下將溫度降至0°C-5°C，加碳酸氫鈉0.073g,攪拌下反應0.5小時后撤去冰浴。常溫下繼續反應6小時。30°C減壓蒸除溶劑。加20mL乙醚，振蕩，抽濾，干燥得白色固體(10)0.19g。收率77.3%;mp3200C(分解).MS(m/z，ESI-)516[M-2Na+H]_.IR(KBr):2925，2358，2341，1645，1097，669CHT1.同上過程，加入碳酸氫鈉0.03g可制得目標化合物9。MS(m/z,ESF)516[M-Na]".IR(KBr)=2918,2346,2337,1612,975cm_1.實施例54-[4-(5-(4-甲基苯基)_3_三氟甲基氫-吡唑基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸單鈉鹽11和二鈉鹽12的合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>參照實施例4方法由化合物7制得鹽11和12。鹽12收率87.8%;mp2200C(分解)；IR(KBr)3448,3385,2858,2341,2560,1383,1238,1138cm-1；MS[m/z,ESF]502[M-Na]^o鹽11:收率83%；IR(KBr)3398,3376,2323,1378,1234,1037cm-1；MS[m/z,ESI”480[M-Nar。實施例6N-[4-(5-(2_萘基)_3_三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺鈉鹽13的合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>參照實施例4方法，與1.2eq碳酸氫鈉制得。收率76%。IR(KBr):3048，2995，2218，1416，897cm-1；MS(m/z,ESD458[M-Na]".其它氨基磺酰吡唑類化合物單酸酰化產物鈉鹽也參照實施例4方法制得。實施例74-[4-(5-(4-叔丁基苯基)_3_三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸14參照實施例1方法制得。IR(KBr):3412，3011，2985，2834，2322，1423，891，TUcm1；1HNMR[CD30D，400MHz]δ1.34(s，9H)，2.35(t，J=9.0Hz,2H),2.50(t,J=4.2Hz，2H)，6.87(s，1H)，7.15(d，J=8.0Hz，2H)，7.38(d，J=8.2Hz，2H)，7.51(d，J=8.OHz，2H)，7.97(d，J=8.4Hz，2H)ppm.實施例84-[4-(5-(4-叔丁基苯基)_3_三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸單鈉鹽15二鈉鹽16參照實施例4方法由化合物14制得鹽15和16。鹽15收率91%;IR(KBr)3012,2987,2834,2322,1238,1138,712cm_1；MS[m/z,ESF]:522[Μ_Ν&Γ。鹽16:收率83%；IR(KBr):3398，3376，2323，1378，1234，1037cm—1；MS[m/z,ESF]522[M-2Na+H]"0實施例9N-[4-(5_(4-叔丁基苯基)_3_三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺17參照實施例1方法，與醋酐制得。收率82%。IR(KBr):3022，2995，2314，1416，895,712cm-1；1HWR(CDCl3，400MHz)δ1.33(s，9H)，2·14(s，3H)，6·75(s，1H)，7·16(d，2H)，7.40(d,2H)，7.51(d,2H)，7.93(d,2H)ppm.實施例ION-[4-(5-(4_叔丁基苯基)_3_三氟甲基氫-吡唑基)-苯磺酰氨基]-乙酰胺鈉鹽18參照實施例4方法，與1.2eq碳酸氫鈉制得。收率78%。IR(KBr)=3025,2995,2212,897cm-1；MS(m/z,ESF):464[M-Na]_.實施例114-[4-(5-(2，4-二甲基噻唑-5-基)_3_三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸21參照實施例1方法與丁二酸酐制得。IR(KBr):3408，3312，3065，1593，1526，1491，1326,1240,843cm-1；1HNMR[CD3OD,400MHz]δ2.32(t,J=8.8Hz,2H),2.51(t,J=4.OHz,2H)，2.60(s，3H)，2.85(s，3H)，6.75(s，2H)，7.12(s，1H)，7.62(d,J=8.2Hz，2H)，8.02(d,J=8.2Hz,2H)ppm.實施例124-[4-(5-(3-甲基丙基)_3_三氟甲基氫-吡唑基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸33參照實施例1方法與丁二酸酐制得。IR(KBr):3412，3360，3241，3105，2938，1610，1562,1243,1155,845cm-1；1HNMR[CD3OD,400MHz]δ0.97(d,6H),1.92(m,1H),2.31(t,J=9.0Hz，2H)，2.50(t,J=4.3Hz，2H)，2.61(d，2H)，5·32(s，2H)，6·53(s,1H)，7·64(d，2H)，8.ll(d,2H)ppm.實施例134-[4-(5-環丁基-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸52參照實施例1方法與丁二酸酐制得。IR(KBr):3410，3238，3102，2992，1598，1571，1481，1340，1248，1160，1133,849cm-1；1HNMR[CD3OD,400MHz]δ2.06(m，2H)，2·25(m,2H),2.32(t,J=9.0Hz,2H),2.38(m,2H),2.51(t,J=4.2Hz,2H),3.54(ρ,1H),6.65(s,1H)7.62(d,2H)8.10(d,2H)ppm.其它氨基磺酰吡唑類化合物單或雙取代鈉鹽類產物(通式[1])參照實施例4方法制得，如以有機堿或堿性氨基酸代替無機堿碳酸氫鈉與氨基磺酰吡唑類化合物5或7反應時可得其它藥學上可接收的鹽。當以Κ0Η，有機堿或堿性氨基酸代替無機堿碳酸氫鈉與單鈉鹽反應時，可得通式[1]中所示其它混合鹽類。實施例14氨基磺酰吡唑類化合物單或雙取代鹽類產物溶解度測定按常規藥物溶解度測定方法，建立標準曲線后測定20°C下各化合物的飽和溶液濃度，并計算溶解度。成鹽后各化合物溶解度明顯提高，其中10的溶解度為25.6mg/mL,12的溶解度為31.5mg/mL,13的溶解度為16.9mg/mL,16的溶解度為17.3mg/mL,18的溶解度為7.8mg/mL，可方便地用于藥效學評價時靜脈注射。實施例15氨基磺酰吡唑類化合物藥效學評價1實驗材料實驗中所用氨基磺酰吡唑類化合物均為實驗室合成；吐溫80為化學純，天津市博迪化工有限公司；醋酸為分析純，西安化學試劑廠；小鼠由第四軍醫大學動物中心提供，動物合格證號陜醫動第08-014號；各細胞株購于中國科學院上海細胞庫；二甲基亞砜(DMSO)，四甲基偶氮唑鹽(MTT)購于Sigma公司。小牛血清購于Hyclone公司。DMEM培養基購于Gibco公司。2實驗過程2.1小鼠炎癥模型制作及抗炎作用評價采用小鼠耳廓腫脹模型。昆明種小鼠，隨機分組，每組8只(1)模型組灌胃給予生理鹽水；(2)溶媒組灌胃給予0.5%CMC-Na;(3)陽性對照灌胃給予乙酰水楊酸(Asp)200mg/kg;(4)受試藥物組灌胃給予200mg/kg各受試氨基磺酰吡唑類化合物。各組小鼠均按0.2mL/10g灌胃給予生理鹽水、CMC-Na溶液或受試藥物-CMC-Na混懸液。給藥30min后，各鼠右耳兩側均勻涂以0.03mL二甲苯，左耳作對照，2h后將小鼠脫頸椎處死，沿耳廓基線剪下雙耳，以直徑9mm打孔器分別在左右耳同一部位打下圓形耳片，電子天平稱重。以左、右耳片重量之差作為衡量腫脹程度的指標，抗炎作用強度以抑制率表示。2.2小鼠疼痛模型制作及鎮痛作用評價昆明種小鼠，雌雄各半，體重1822g。隨機分為四組模型組(空白組)、塞來昔布組(陽性對照組)、各受試氨基磺酰吡唑類化合物組，每組10只。各受試氨基磺酰吡唑類化合物用一定量吐溫80潤濕(23滴)，用生理鹽水稀釋至所需濃度0.014mol/L,給藥容量為0.133mL/10g小鼠。每組給藥5min后，腹腔注射1%醋酸溶液(0.2mL/只)，觀察、記錄各組小鼠給藥后30min內的扭體(腹部內凹，伸展后肢，臀部抬高)次數。2.3腫瘤細胞增殖抑制作用評價2.3.1溶液的配制DMEM配養基干粉15.6g，NaHC033.7g，青霉素100U/ml，鏈霉素100U/ml，加去離子水1000ml，調pH值為7.2-7.4，0.22μm微孔濾膜濾過除菌，分裝后，4°C保存。0.lmol/LPBS液:NaC18.0g,KC10.2g,Na2HPO4·7Η202·16g,KH2PO4O.2g，加去離子水1000ml，溶解后分裝，15磅壓力滅菌30min。胰蛋白酶活力1250，用PBS磷酸鹽緩沖液配制成0.25%溶液，0.22μπι微孔濾膜過濾除菌，分裝后，_20°C冷凍保存。MTT溶液稱取250mgMTT，加入50ml0.lmol/LPBS(ρΗ7·4)，配制成5mg/ml的貯存液，0.22μm微孔濾膜過濾除菌，分裝后，4°C保存，兩周內有效。2.3.2四氮唑鹽(MTT)比色方法人肝癌細胞H印G2或其它腫瘤細胞，常規培養于含10%滅活小牛血清的DMEM培養基中，置37°C，5%CO2孵箱內培養。以IXlO4/孔的密度接種!fepG2細胞于96孔培養板，置5%CO2孵箱內過夜。細胞貼壁后，吸棄上清，加入含不同濃度受試氨基磺酰吡唑類化合物的培養液共孵育。細胞分別在給藥2d后每孔加20μ1MTT(5mg/ml)，繼續培養4h，棄上清，加DMSO150μ1，室溫震蕩lOmin，使甲臜結晶完全溶解。酶聯免疫檢測分析儀測定570nm(A570J的吸光值。結果以mean士SD表示。用origin6.0軟件非線性擬合求IC50值。3實驗數據的統計學處理實驗數據進行平均值和方差計算，兩組間比較均采用t_檢驗。4實驗結果上述實驗結果表明，受試氨基磺酰吡唑類化合物對醋酸引起的腹痛都有很強的抑制作用，與模型組比較療效顯著(P<0.5)；而且具有明顯的抗炎作用和抑制肝癌、乳腺癌和結腸癌等腫瘤細胞生長的作用，部分化合物活性如表1-表4。表1.化合物對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的抗炎作用<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>表2受試氨基磺酰吡唑類化合物對小鼠鎮痛作用的影響(扭體法)G士s，η=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>權利要求通式(I)所示的氨基磺酰吡唑類化合物或其藥學上可接受的鹽類，其中n為1～6的整數；R1為C1～C9烷基，C3～C7元脂肪環或雜環，鹵素、硝基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基取代或未取代的苯基、萘基、含1～3個雜原子的芳雜環；R2為氫；R3為氫或CO2H。FDA0000020334420000011.tif2.根據權利要求1所述氨基磺酰吡唑類化合物或其藥學上可接受的鹽類，其特征在于所述鹽陽離子選自堿金屬陽離子、堿土金屬陽離子、銨陽離子、C1C9烷基取代的銨陽離子、芳香基取代的銨陽離子或堿性氨基酸。3.權利要求1所述化合物的合成方法，其特征在于如下通式(II)化合物與一元或二元酸或酸酐在氯化亞砜/吡啶，CH2Cl2/NEt3，或吡啶/DMAP下酰化得通式(I)所示的氨基磺酰吡唑類化合物或其藥學上可接受的鹽類，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>隊為CIC9烷基，C3C7元脂肪環或雜環，鹵素、硝基、C1C6烷基、C1C6烷氧基取代或未取代的苯基、萘基、含13個雜原子的芳雜環。4.權利要求2所述化合物藥學上可接受的鹽的合成方法，其特征在于通式(I)所述的化合物與無機堿、有機堿或堿性氨基酸成鹽反應在溶劑甲醇、乙醇、乙醚、四氫呋喃、丙酮、水、1，4_二氧六環、N，N-二甲基甲酰胺或上述溶劑的混合溶劑中進行，其中通式(I)中R2=H，R3=H或C02H。5.根據權利要求1或2所述的化合物，其特征在于優選的化合物為4-[4-(5-(2-萘基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸N-[4-(5-(2-萘基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-乙酰胺4-[4-(5-(4-甲基苯基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸4-[4-(5-(2-萘基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸單鈉鹽和二鈉鹽4-[4-(5-(4-甲基苯基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸單鈉鹽和二鈉鹽N-[4-(5-(2-萘基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-乙酰胺鈉鹽4-[4-(5-(4-叔丁基苯基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸4-[4-(5-(4-叔丁基苯基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸單鈉鹽二鈉鹽N-[4-(5-(4-叔丁基苯基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-乙酰胺N-[4-(5-(4-叔丁基苯基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-乙酰胺鈉鹽N-[4-(5-(2-萘基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-丙酰胺鈉鹽N-[4-(5-(2-萘基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-丁酰胺鈉鹽4-[4-(5-(2，4-二甲基噻唑-5-基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸4-[4-(5-(2，4-二甲基噻唑-5-基)-3_三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸單鈉鹽或二鈉鹽4-[4-(5-(噻唑-2-基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸4-[4-(5-(噻唑-2-基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸單鈉鹽或二鈉鹽4-[4-(5-乙基-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸4-[4-(5-乙基-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸單鈉鹽或二鈉鹽4-[4-(5-丙基-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸4-[4-(5-丙基-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸單鈉鹽或二鈉鹽4-[4-(5-(3-甲基丙基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸4-[4-(5-(3-甲基丙基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸單鈉鹽或二鈉鹽4-[4-(4，5-并環己基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸4-[4-(4，5-并環己基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸單鈉鹽或二鈉鹽4-[4-(5-甲基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸4-[4-(5-甲基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸單鈉鹽或二鈉鹽N-[4-(5-(4-叔丁基苯基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-丙酰胺N-[4-(5-(4-叔丁基苯基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-丁酰胺N-[4-(5-(4-叔丁基苯基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-丙酰胺鈉鹽N-[4-(5-(4-叔丁基苯基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-丁酰胺鈉鹽4-[4-(5-(2，4-二氯噻吩-3-基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸4-[4-(5-(2，4-二氯噻吩-3-基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸單鈉鹽或二鈉鹽4-[4-(5-(N-甲基吡咯-2-基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸4-[4-(5-(N-甲基吡咯-2-基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸單鈉鹽或二鈉鹽4-[4-(5-環丁基-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸4-[4-(5-環丁基-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸單鈉鹽或二鈉鹽4-[4-((4，5)并(1，2)四氫萘基-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸4-[4-((4，5)并(1，2)四氫萘基-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-4-氧代丁酸單鈉鹽或二鈉鹽N-[4-((4，5)并(1，2)四氫萘基-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-乙酰胺鈉鹽N-[4-(5-環丁基-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺鈉鹽N-[4-(5-(N-甲基吡咯-2-基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-乙酰胺鈉鹽N-[4-(5-(2,4-二氯噻吩-3-基)-3-三氟甲基氫-吡唑基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺鈉鹽N-[4-(5-甲基-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺鈉鹽N-[4-(5-乙基-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺鈉鹽N-[4-(5-丙基-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺鈉鹽N-[4-(4，5-并環己基-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)_苯磺酰氨基]_乙酰胺鈉鹽N-[4-(5-(3-甲基乙基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-乙酰胺鈉Trrt.N-[4-(5-(噻唑-2-基)-3-三氟甲基-1-氫-吡唑-1-基)-苯磺酰氨基]-乙酰胺鈉Trrt.o6.一種藥物組合物，其含有權利要求1、2或5中所述的通式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽類，以及一種或多種藥物載體或賦形劑。7.權利要求1、2或5中所述的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽類在解熱鎮痛抗炎或腫瘤防治藥物方面的應用。全文摘要通式(I)所示的氨基磺酰吡唑類化合物或其藥學上可接受的鹽類，其中n為1～6的整數；R1為C1～C9烷基，C3～C7元脂肪環或雜環，鹵素、硝基、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基取代或未取代的苯基、萘基、含1～3個雜原子的芳雜環；R2為氫；R3為氫或CO2H。本發明的氨基磺酰吡唑類衍生物或其藥學上可接受的鹽可以應用于解熱鎮痛抗炎和腫瘤防治方面。文檔編號A61K31/415GK101805290SQ20101013745公開日2010年8月18日申請日期2010年4月1日優先權日2010年4月1日發明者何煒,劉宏飛,周四元,張邦樂,石鑫,祝春來,袁曉峰申請人:中國人民解放軍第四軍醫大學