專利名稱：一種中藥組合物的萃取方法
技術領域：
本發明涉及中醫藥制藥工藝領域，尤其是一種中藥組合物的萃取方法。
背景技術：
紫草，中國2010版藥典中收載為新疆紫草和內蒙紫草的干燥根。《本草綱目》中記 載“紫草，其功長于涼血活血，利大小腸。故痘疹欲出未出，血熱毒盛，大便閉塞者用之，已 出而紫黑便閉者可用。”功能清熱涼血，活血，解毒透疹。臨床應用于溫病血熱毒盛，斑疹 紫黑，麻疹不透，瘡瘍，濕疹，水火燙傷。苦參為豆科植物苦參的干燥根。功效清熱燥濕，殺蟲，利尿。應用于陰腫陰癢、濕 疹濕瘡、皮膚瘙癢、疥癬等。本品對結核桿菌、痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌均有抑 制作用，對多種皮膚真菌也有抑制作用。苦參臨床用于治療神經性皮炎、濕疹、燙傷。大黃為蓼科植物掌葉大黃、唐古特大黃或藥用大黃的干燥根及根莖。功效瀉下 攻積，清熱瀉火，涼血解毒，逐瘀通經。應用于積滯便秘、血熱吐衄、熱毒瘡瘍、燒燙傷、瘀血 證、濕熱痢疾等。藥理作用大黃有抗感染作用，對多種革蘭氏陽性和陰性細菌均有抑制作 用，其中最敏感的為葡萄球菌和鏈球菌，其次為白喉桿菌、傷寒和副傷寒桿菌、肺炎雙球菌、 痢疾桿菌等。白芷為傘形科植物白芷的干燥根。功效解表散寒，祛風止痛，通鼻竅，燥濕止帶， 消腫排膿。應用風寒感冒、頭痛、牙痛、鼻淵、帶下證、皮膚風濕瘙癢。白芷主要含揮發油，并 含歐前胡素、白當歸素等多種香豆素類化合物，另含白芷毒素、花椒毒素、留醇、硬脂酸等。 白芷對大腸桿菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌、綠膿桿菌、變形桿菌有一定抑制作用；呋喃香豆素類 化合物為“光活性物質”，可用以治療白癜風及銀屑病。上述四種藥材為中藥制劑中的常用藥物，例如用于制備治療燒傷外傷瘡瘍的中 藥組合物，然而現有技術中其萃取方法均采用了高溫麻(豬)油炸料制備工藝(公開號 CNlOl 116688A、CN101513441A)，所述方法具有提取周期長，溶媒溫度高使大多數有效物質 降解或變性，空氣環境污染大等眾多缺點，無法在同一工藝流程中，一次性獲得四味中藥的 多個揮發性物質。
發明內容
本發明所要解決的技術問題在于提供一種中藥組合物的萃取方法，該方法具有提 取率高、操作溫度低、中藥有效成分不被破壞、無污染和工藝簡單等優點。為解決上述技術問題，本發明的技術方案是一種中藥組合物的萃取方法，包括以下步驟(1)取苦參、大黃、紫草、白芷四味藥物混合，-4 0°C低溫粉碎過30 100目篩；(2)將步驟(1)的藥粉置于超臨界CO2萃取設備中，在萃取溫度30 60°C，萃取 壓力20 45Mpa，CO2流量為1. 5 3. 5L/min條件下直接靜態萃取0. 5 1小時，然后打 開出口閥，維持CO2流量為1. 5 3. 5L/min流速繼續動態萃取1 2. 5小時；
(3)將步驟⑵得到的萃取物在操作溫度50 60°C和操作壓力6 IOMpa條件 下，在萃取釜中進行分離除去CO2，得到含有揮發性成分的紅褐色膏狀萃取物。優選的，上述中藥組合物的萃取方法，所述步驟(1)中四味藥物按其重量份數計 為苦參1 2份、大黃3 5份、紫草2 4份、白芷1 2份。優選的，上述中藥組合物的萃取方法，所述步驟(1)中四味藥物粉碎過30 80目 篩。優選的，上述中藥組合物的萃取方法，所述步驟(2)中萃取溫度55°C，萃取壓力 20 40Mpa, CO2流量為1. 5 3L/min，動態萃取1 2小時。優選的，上述中藥組合物的萃取方法，所述步驟(3)中膏狀萃取物用于制備治療 燒傷外傷瘡瘍的藥物。本發明的有益效果是所述中藥組合物的萃取方法，可以在同一工藝流程中，一次性獲得四味中藥的多 個揮發性物質，克服了以往治療燒傷外傷瘡瘍中藥所采用高溫麻(豬)油炸料工藝的不足， 便于有效成分檢出，提高了生產效率，減少了對環境的污染，具有提取率高、操作溫度低、中 藥有效成分不被破壞、無污染和工藝條件簡單等優點，具有非常重要的生產實踐意義，適合 規模化工業生產的需要。
圖1為大黃薄層圖譜；圖2為對照品-大黃素HPLC圖譜；圖3為超臨界提取對照品(蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚)HPLC圖譜；圖4為超臨界提取大黃樣品HPLC圖譜；圖5為白芷薄層圖譜；圖6為對照品-歐前胡素(白芷)HPLC圖譜；圖7為超臨界白芷樣品HPLC圖譜；圖8為苦參薄層圖譜；圖9為對照品-苦參堿HPLC圖譜(-C18柱分離)；圖10為對照品-氧化苦參堿、苦參堿HPLC圖譜(-氨基柱分離)；圖11為對照品-氧化苦參堿HPLC圖譜-C18柱分離；圖12為超臨界提取_苦參HPLC圖譜-C18柱分離；圖13為超臨界提取_苦參HPLC圖譜-氨基柱分離；圖14為紫草薄層圖譜；圖15為對照品-阿卡寧HPLC圖譜；圖16為超臨界提取_紫草HPLC圖譜。
具體實施例方式為了使本領域的技術人員更好的理解本發明的技術方案，下面結合附圖及具體實 施方式對本發明所述技術方案作進一步的詳細說明。實施例1
將苦參10g、大黃50g、紫草40g、白芷IOg混合，_4°C低溫粉碎過50目篩；藥粉置 于超臨界CO2萃取設備中，在萃取溫度55°C，萃取壓力25Mpa，CO2流量為2. 5L/min條件下 直接靜態萃取0. 5小時，然后打開出口閥，維持CO2流量為2. 5L/min流速繼續動態萃取1. 5 小時；得到的萃取物在操作溫度60°C和操作壓力6Mpa條件下，在萃取釜中進行分離除去 CO2,，得到含有揮發性成分的紅褐色膏狀萃取物，總提收率為3. 2%，用HPLC法測定萃取物 中β，β-二甲基丙烯酰阿卡寧含量1.534% (g/g)。實施例2將苦參20g、大黃30g、紫草20g、白芷20g混合，0°C低溫粉碎過80目篩；藥粉置于 超臨界C02萃取設備中，在萃取溫度60°C，萃取壓力30Mpa，CO2流量為3. 5L/min條件下直 接靜態萃取1小時，然后打開出口閥，維持CO2流量為3L/min流速繼續動態萃取2小時；得 到的萃取物在操作溫度50°C和操作壓力SMpa條件下，在萃取釜中進行分離除去CO2,，得到 含有揮發性成分的紅褐色膏狀萃取物，總提收率為2. 73%。，用HPLC法測定萃取物中β， β-二甲基丙烯酰阿卡寧含量0.201% (g/g)。實施例3將苦參15g、大黃40g、紫草30g、白芷15g混合，_2°C低溫粉碎過30目篩；藥粉置 于超臨界CO2萃取設備中，在萃取溫度35°C，萃取壓力40Mpa，CO2流量為1. 5L/min條件下直 接靜態萃取0. 75小時，然后打開出口閥，維持CO2流量為3. 5L/min流速繼續動態萃取2. 5 小時；得到的萃取物在操作溫度55°C和操作壓力IOMpa條件下，在萃取釜中進行分離除去 CO2,，得到含有揮發性成分的紅褐色膏狀萃取物，總提收率為2. 2%，用HPLC法測定萃取物 中β，β-二甲基丙烯酰阿卡寧含量1.268% (g/g)。實施例4將苦參15g、大黃45g、紫草35g、白芷IOg混合，_3°C低溫粉碎過100目篩；藥粉 置于超臨界CO2萃取設備中，在萃取溫度45°C，萃取壓力20Mpa，CO2流量為3. OL/min條件 下直接靜態萃取0. 5小時，然后打開出口閥，維持CO2流量為1. 5L/min流速繼續動態萃取 1小時；得到的萃取物在操作溫度60°C和操作壓力7Mpa條件下，在萃取釜中進行分離除去 CO2,，得到含有揮發性成分的紅褐色膏狀萃取物，總提收率為2. 73%，用HPLC法測定萃取物 中β，β -二甲基丙烯酰阿卡寧含量1. 174% (g/g)。實施例5將苦參20g、大黃35g、紫草25g、白芷20g混合，_1°C低溫粉碎過60目篩；藥粉置 于超臨界CO2萃取設備中，在萃取溫度30°C，萃取壓力45Mpa，CO2流量為2. 5L/min條件下 直接靜態萃取0. 5小時，然后打開出口閥，維持CO2流量為2. 5L/min流速繼續動態萃取1. 5 小時；得到的萃取物在操作溫度60°C和操作壓力9Mpa條件下，在萃取釜中進行分離除去 CO2，，得到含有揮發性成分的紅褐色膏狀萃取物，總提收率為1. 20 %，用HPLC法測定萃取物 中β，β-二甲基丙烯酰阿卡寧含量0.573% (g/g)。實施例6大黃鑒別如圖1-圖4所示，取實施例3所述紅褐色膏狀萃取物O.lg，加甲醇20ml，浸泡1 小時，濾過，取濾液5ml，蒸干，殘渣加水IOml使溶解，再加鹽酸1ml，加熱回流30分鐘，立即 冷卻，用乙醚分2次振搖提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷Iml使溶解，作為供試品溶液。另取大黃對照藥材O.lg，同法制成對照藥材溶液。再取大黃酸對照品， 加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶 液各4μ 1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以石油醚(30 60°C)_甲酸乙酯-甲酸(15 5 1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈 (365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的五個橙黃色熒 光主斑點；在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點，置氨蒸氣中熏后，斑 點變為紅色。含量測定照高效液相色譜法測定色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0. 1% 磷酸溶液(72 28)為流動相；檢測波長為254nm。理論板數按大黃素峰計算應不低于 3000。對照品溶液的制備精密稱取蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃素對照 品、大黃酚對照品適量，加甲醇分別制成每Iml含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚各 80 μ g，大黃素甲醚40 μ g的溶液；分別精密量取上述對照品溶液各2ml，混勻，即得(每Iml 中含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚各16 μ g，含大黃素甲醚8 μ g)。供試品溶液的制備取實施例3所述紅褐色膏狀萃取物約0. 15g，精密稱定，置 具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用甲醇 補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液5ml，置燒瓶中，揮去溶劑，加8%鹽酸溶液 10ml，超聲處理2分鐘，再加三氯甲烷10ml，加熱回流1小時，放冷，置分液漏斗中，用少量 三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次 10ml，合并三氯甲烷液，減壓回收溶劑至干，殘渣加甲醇使溶解，轉移至IOml量瓶中，加甲 醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。測定法分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀， 測定，即得。本品按干燥品計算，含蘆薈大黃素(C15HltlO5)、大黃酸(C15H8O6)、大黃素(C15HltlO5)、 大黃酚(C15HltlO4)和大黃素甲醚(C16H12O5)的總量不得少于1. 5%。實施例7白芷鑒別如圖5-圖7所示，取實施例3所述紅褐色膏狀萃取物0. 5g，加乙醚IOml，浸泡1小 時，時時振搖，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作為供試品溶液。另取歐前胡 素對照品、異歐前胡素對照品，加乙酸乙酯制成每Iml各含Img的混合溶液，作為對照品溶 液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各4μ1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合 劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(30 60°C)-乙醚(3 2)為展開劑，在25°C以下展開， 取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯 相同顏色的熒光斑點。含量測定照高效液相色譜法測定色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水 (55 45)為流動相；檢測波長為300nm。理論板數按歐前胡素峰計算應不低于3000。對照品溶液的制備精密稱取歐前胡素對照品適量，加甲醇制成每Iml含10 μ g的溶液，即得。供試品溶液的制備取實施例3所述紅褐色膏狀萃取物約0. 4g，精密稱定，置50ml 量瓶中，加甲醇45ml，超聲處理(功率300W，頻率50kHz) 1小時，取出，放冷，用甲醇稀釋至 刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μ 1，注入液相色譜儀，測 定，即得。本品按干燥品計算，含歐前胡素(C16H14O4)不得少于0.080%。實施例8苦參鑒別如圖8-圖13所示，取實施例3所述紅褐色膏狀萃取物0. 5g，加濃氨試液0. 3ml、 三氯甲烷25ml，放置過夜，濾過，濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷0. 5ml使溶解，作為供試品溶 液，另取苦參堿對照品、槐定堿對照品，加乙醇制成每Iml各含0. 2mg的混合溶液，作為對照 品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各4 μ 1，分別點于同一用2%氫氧化鈉溶液 制備的硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-甲醇(8 3 0.5)為展開劑，展開，展距8cm，取 出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水(2 4 2 1)10°C以下放置的上層溶液為展 開劑，展開，取出，晾干，依次噴以碘化鉍鉀試液和亞硝酸鈉乙醇試液。供試品色譜中，在與 對照品色譜相應的位置上，顯相同的橙色斑點。取氧化苦參堿對照品，加乙醇制成每Iml含0. 2mg的溶液，作為對照品溶液。 照薄層色譜法試驗，吸取上述鑒別項下的供試品溶液及上述對照品溶液各4μ1，分別 點于同一用2%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-濃氨試液 (5 0.6 0.3)10°C以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，依次噴以碘化鉍鉀 試液和亞硝酸鈉乙醇試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的橙色斑 點ο含量測定照高效液相色譜法測定色譜條件與系統適用性試驗以氨基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-無水乙醇
磷酸溶液(80 10 10)為流動相；檢測波長為220nm。理論板數按氧化苦參堿峰計算應 不低于2000。對照品溶液的制備精密稱取苦參堿對照品、氧化苦參堿對照品適量，分別加乙 腈_無水乙醇(80 20)溶解，制成每Iml含苦參堿0. 05mg,氧化苦參堿0. 15mg的溶液，即得。供試品溶液的制備取實施例3所述紅褐色膏狀萃取物約0. 3g，精密稱定，置具 塞錐形瓶中，加濃氨試液0. 5ml，精密加入三氯甲烷20ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率 250W,頻率33kHz) 30分鐘，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過。精 密量取續濾液5ml，通過中性氧化鋁柱(100 200目，5g，內徑Icm)，依次以三氯甲烷、三氯 甲烷-甲醇(7 3)各20ml洗脫，收集洗脫液，回收溶劑至干，殘渣加無水乙醇適量使溶解， 并轉移至IOml量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法分別精密吸取上述對照品溶液各5μ 1與供試品溶液5 10μ 1，注入液 相色譜儀，測定，即得。本品按干燥品計算，含苦參堿(C15H24N2O)和氧化苦參堿(C15H24N2O)的總量不得少于 1. 2%。實施例9紫草含量測定如圖14-圖16所示，羥基萘醌總色素取取實施例3所述紅褐色膏狀萃取物適量， 于50°C干燥3小時，粉碎(過三號篩)精密稱取約0. 5g，置IOOml量瓶中，加乙醇至刻度，4 小時內時時振搖，濾過，精密量取續濾液5ml，置25ml量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻。照分光
光度法，在516nm波長處測定吸收度，按左旋紫草素(C16H16O5)的吸收系數丨^ )為242計
算，即得。本品含羥基萘醌總色素以左旋紫草素(C16H16O5)計，不得少于0. 80%。β，β ’ _ 二甲基丙烯酰阿卡寧照高效液相色譜法測定。色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙 腈-水-甲酸(700 700 0. 5)為流動相；檢測波長為275nm。理論板數按β，β，- 二 甲基丙烯酰阿卡寧峰計算應不低于2000。對照品溶液的制備精密稱取β，β ’ _ 二甲基丙烯酰阿卡寧對照品適量，加乙醇 制成每Iml含0. IOmg的溶液，即得。供試品溶液的制備取實施例3所述紅褐色膏狀萃取物約0. 5g，精密稱定，置具 塞錐形瓶中，精密加入石油醚(60 90°C ) 25ml，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率 33kHz) 30分鐘，放冷，再稱定重量，用石油醚(60 90°C )補足減失的重量，搖勻，濾過。精 密量取續濾液10ml，蒸干，殘渣用流動相溶解并轉移至IOml量瓶中，加流動相至刻度，搖 勻，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測 定，即得。上述參照具體實施方式
對該一種中藥組合物的萃取方法進行的詳細描述，是說明 性的而不是限定性的，可按照所限定范圍列舉出若干個實施例，因此在不脫離本發明總體 構思下的變化和修改，應屬本發明的保護范圍之內。
權利要求
一種中藥組合物的萃取方法，其特征在于包括以下步驟(1)取苦參、大黃、紫草、白芷四味藥物混合，-4～0℃低溫粉碎過30～100目篩；(2)將步驟(1)的藥粉置于超臨界CO2萃取設備中，在萃取溫度30～60℃，萃取壓力20～45Mpa，CO2流量為1.5～3.5L/mi n條件下直接靜態萃取0.5～1小時，然后打開出口閥，維持CO2流量為1.5～3.5L/min流速繼續動態萃取1～2.5小時；(3)將步驟(2)得到的萃取物在操作溫度50～60℃和操作壓力6～10Mpa條件下，在萃取釜中進行分離除去CO2，得到含有揮發性成分的紅褐色膏狀萃取物。
2.根據權利要求1所述的中藥組合物的萃取方法，其特征在于所述步驟(1)中四味 藥物按其重量份數計為苦參1 2份、大黃3 5份、紫草2 4份、白芷1 2份。
3.根據權利要求1或2所述的中藥組合物的萃取方法，其特征在于所述步驟(1)中 四味藥物粉碎過30 80目篩。
4.根據權利要求1所述的中藥組合物的萃取方法，其特征在于所述步驟(2)中萃取 溫度55°C，萃取壓力20 40Mpa，CO2流量為1. 5 3L/min，動態萃取1 2小時。
5.根據權利要求1所述的中藥組合物的萃取方法，其特征在于所述步驟(3)中膏狀 萃取物用于制備治療燒傷外傷瘡瘍的藥物。
全文摘要
本發明提供了一種中藥組合物的萃取方法，將苦參、大黃、紫草、白芷四味藥物混合過篩后，藥粉置于超臨界CO2萃取設備中萃取，將萃取物在萃取釜中進行分離除去CO2即可；該方法具有提取率高、操作溫度低、中藥有效成分不被破壞、無污染和工藝簡單等優點，可以在同一工藝流程中，一次性獲得四味中藥的多個揮發性物質。
文檔編號A61P17/02GK101879222SQ201010235610
公開日2010年11月10日 申請日期2010年7月23日 優先權日2010年7月23日
發明者劉文偉, 劉玉璇, 國大亮, 李曉峰, 田松江, 艾慶波, 董村, 趙宇, 郝潔 申請人:天津達仁堂京萬紅藥業有限公司