專利名稱：一種復合多糖免疫制劑及其制備方法
技術領域：
本發明具體涉及一種復合多糖免疫制劑及其制備方法。
背景技術：
人們生活的外界環境中有為數眾多的致病因子，但是多數人并不發生疾病，其主要原因是由于人們有免疫力，免疫力是人體的一種保護性反應，是在進化過程中與各種引起感染的病原生物作斗爭時獲得的，免疫不僅使人們抵抗外界的各種致病因子，同時對體內有時出現的衰老細胞和腫瘤細胞也有監視作用，免疫能清除體內的衰老細胞，殺傷腫瘤細胞，從而保持人體的穩定。但是隨著當今社會生活節奏的加快，競爭加劇，生活壓力大，不正常的生活飲食習慣等等因素使許多人的自身免疫力出現了下降。由于機體免疫力降低而引起的惡性腫瘤是一種高病痛且死亡率極高的病癥。據統計惡性腫瘤已經成為人類死亡的第一位或者第二位原因，每年全世界約有700萬人死于癌癥。盡管與發達國家相比，如美國，英國，法國等，我國惡性腫瘤死亡率及占總死亡的比率相對較低，但在全世界范圍內惡性腫瘤在各種死因中也排到第二位，在大城市則已排到首位。 目前世界上仍然沒有可以完全治愈的藥物，現用于治療的藥物多為化學藥物，雖然可以緩解癥狀，但是仍存在很多問題；如不能徹底清除體內病毒，停藥反彈，易產生不良反應，副作用大且治療費用昂貴等等，使得這些藥物的應用受到了很大的限制。病毒病是病毒從外界傳染人人體后產生的疾病。我們常說的病毒病或流感性病毒病是現代醫學的病名，如“非典”、腦膜炎、鼠疫、甲型Hmi流感、禽流感。近幾年來病毒病接連發生，對人類的正常生活和身體健康造成了嚴重的影響，引起了大家的恐慌。如自從最早的人禽流感病例出現在1997年的香港后，到目前為止全球共有15個國家和地區的393人感染，其中248人死亡，死亡率63%。中國從2003年至今有31人感染禽流感，其中21人死亡。2003年爆發的非典造成了全球近千人的死亡，此病病死率約在15%左右，主要是冬春季發病。其發病機制與機體免疫系統受損有關。病毒在侵入機體后，進行復制，可引起機體的異常免疫反應，由于機體免疫系統受破壞，導致患者的免疫缺陷。同時SARS病毒可以直接損傷免疫系統特別是淋巴細胞。自從2009年Hmi流感爆發以來，已造成全球六千多人死亡，其中美國就有大約3900人死亡，引起了全世界的恐慌。產生病毒病的主要決定因素是人體的免疫功能，不是病毒的作用。就是人的周圍或內部有了病毒，正常運作的免疫系統就像正常運作的機器一樣能抵抗或滅掉所有妨害機能運作的病毒。免疫系統運作正常，體內的病毒必然被正常運作的免疫系統消滅；免疫系統失常，就會產生生理性的病變，體內產生病毒，外界病毒也可以乘虛而人。因此提高人類機體的免疫力是非常必要的。提高人體的免疫力對于罹患多種疾病，尤其是腫瘤的病人是非常重要的，各種原因引起的免疫功能降低不僅常見于亞健康狀態下對細菌和病毒感染的抵抗力下降，也是導致癌癥以及一些慢性疾病并發感染性疾病的重要原因。因此，糾正失調的免疫功能，對于防病，治病，提高人們生活質量具有重大意義。在如何充分調動、增強自身的免疫力，從而更有效的對抗、預防疾病這個問題上，已有了經過實踐證明的有效手段。醫學上經過反復研究表明，各種疾病幾乎都與糖類和相關的糖鏈結構變化有關，都有可能通過調整和補充細胞表面的糖鏈而得到改善，特別是針對于作為現代醫學難題的慢性疾病，多糖及以其為主要成分的多糖類產品，針對這類慢性疾病有著顯著的使用效果，美國FDA(食品藥品管理局)也公開宣布多糖能夠減少人類疾病的發病率。
發明內容
本發明旨在提供一種提高人體免疫力，且能夠抑制腫瘤和抗病毒病的復合多糖免疫制劑。為實現上述目的，本發明所涉及的一種復合多糖制劑，其特征在于該制劑是由胞外多糖和牛蒡水提物共同組成，其配比按重量百分數為A、胞外多糖20 40份B、牛蒡水提物60 80份將上述配料溶水混合為復合多糖免疫制劑成品。所述的胞外多糖為擬康氏木霉胞外多糖。所述的牛蒡水提物為牛蒡低聚寡糖。按照上述的一種復合多糖免疫制劑的制備方法，其特征是采用以下工藝(1)、胞外多糖的制備a、將擬康氏木霉孢子懸液接種于液體PDA培養基中J8°C、120rpm振蕩培養10 天；b、用4層紗布過濾除去菌絲和孢子，將濾液60°C減壓濃縮至原體積的1/3 ；c、用4倍體積的95%乙醇進行沉淀，靜置過夜后離心，將沉淀物依次用無水乙醇、 丙酮、乙醚洗滌，然后將沉淀充分溶解后離心，取上清液；d、將上清液經D301-R型樹脂柱脫色，通過柱的流出液，濃縮后采用木瓜蛋白酶-Sevage法脫蛋白，重復5次左右直至液面交界處無膠狀物；c、除去殘留有機溶劑，透析、冷凍、干燥。O)、牛蒡水提物的制備a、將牛蒡洗凈切成片狀，加水煮沸30分鐘，4層紗布過濾得濾液；b、將濾液60°C減壓濃縮至原體積的1/3 ；C、用4倍體積的95%乙醇進行濾液沉淀，靜置過夜后離心；d、將沉淀物依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，然后將沉淀充分溶解后12000rpm， 離心10分鐘，取上清液；e、將上清液經D301-R型樹脂柱脫色，通過柱的流出液，濃縮后采用木瓜蛋白酶-Sevage法脫蛋白，重復5次左右直至液面交界處無膠狀物；f、除去殘留有機溶劑，透析、冷凍。將上述經過制備過程處理過的胞外多糖和牛蒡水提物，按比例溶水混合為復合多糖免疫制劑。所述胞外多糖制備工藝a步驟中所述的液體PDA培養基為馬鈴薯200g/L，葡萄糖 10g/L。
所述胞外多糖制備工藝d步驟中和牛蒡水提物制備工藝e步驟中所述的木瓜蛋白酶-Sevage法中氯仿與正丁醇的比為4 1。本發明與已有技術相比具有提高免疫、抑制腫瘤、抗病毒等優點。
具體實施例方式下面將結合實施例對本發明做詳細地說明。實施例1本發明復合多糖制劑抑制腫瘤細胞活性實驗1、材料1. 1實驗動物昆明種小鼠，清潔級，雌性，4-8周齡，體重20士2g，由山東大學實驗動物中心提{共。1. 2主要藥品和試劑小鼠S180瘤株，由山東省醫學科學院藥物所提供。2、方法2. 1動物模型的建立取經多次傳代的S180肉瘤腹水小鼠，于傳代第6-9天后無菌抽取腹水。用無菌生理鹽水洗滌腫瘤細胞2-3次，并制備成IX IO7個/ml的細胞懸液，臺盼藍染色檢查腫瘤細胞活力在95%以上。于小鼠右上肢腋下皮下接種腫瘤細胞懸液0. anl，建立S180腫瘤小鼠模型。2. 2動物分組及給藥方法接種后給藥組小鼠接種M小時后，隨機分組，每組8只，分為對照組和給藥組 (給予已配制的復合多糖免疫制劑250、500和lOOOmg/kg/day)。小鼠灌胃給藥，每日一次， 連續9天。給藥組給予不同劑量的復合多糖制劑的水溶液，對照組給予相同體積的蒸餾水。預給藥組小鼠接種前7天隨機分組，每組8只，分為對照組和給藥組(給予免疫制劑250、500和lOOOmg/kg/day).小鼠灌胃給藥，每日一次，連續7天。給藥組給予不同劑量的復合多糖制劑水溶液，對照組給予相同體積的蒸餾水.第8天建立S180腫瘤模型，繼續給藥9天。3、抑癌率末次給藥M小時后，稱重，放血處死小鼠，剝離腫瘤組織和脾組織，分別稱重，按以下公式計算抑癌率。抑癌率(％ )=(對照組組瘤重一用藥組瘤重)/對照組組瘤重X 100%4、結果表1復合多糖制劑接種后給藥對小鼠S180肉瘤的抑制作用
權利要求
1.一種復合多糖免疫制劑，其特征在于該制劑是由胞外多糖和牛蒡水提物共同組成，其配比按重量百分數為A、胞外多糖20 40%B、牛蒡水提物60 80%將上述配料溶水混合為復合多糖免疫制劑成品。
2.根據權利要求1所述的一種復合多糖免疫制劑，其特征在于所述的胞外多糖為擬康氏木霉胞外多糖。
3.根據權利要求1所述的一種復合多糖免疫制劑，其特征在于所述的牛蒡水提物為牛蒡低聚寡糖。
4.按照權利要求1所述的一種復合多糖免疫制劑的制備方法，其特征是采用以下工藝(1)、胞外多糖的制備a、將擬康氏木霉孢子懸液接種于液體PDA培養基中，28°C、120rpm振蕩培養10天；b、用4層紗布過濾除去菌絲和孢子，將濾液60°C減壓濃縮至原體積的1/3；c、用4倍體積的95%乙醇進行沉淀，靜置過夜后離心，將沉淀物依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，然后將沉淀充分溶解后離心，取上清液；d、將上清液經D301-R型樹脂柱脫色，通過柱的流出液，濃縮后采用木瓜蛋白酶-Sevage法脫蛋白，重復5次左右直至液面交界處無膠狀物；e、除去殘留有機溶劑，透析、冷凍、干燥。 O)、牛蒡水提物的制備a、將牛蒡洗凈切成片狀，加水煮沸30分鐘，4層紗布過濾得濾液；b、將濾液60°C減壓濃縮至原體積的1/3；c、用4倍體積的95%乙醇進行濾液沉淀，靜置過夜后離心；d、將沉淀物依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，然后將沉淀充分溶解后12000rpm，離心 10分鐘，取上清液；e、將上清液經D301-R型樹脂柱脫色，通過柱的流出液，濃縮后采用木瓜蛋白酶-Sevage法脫蛋白，重復5次左右直至液面交界處無膠狀物；f、除去殘留有機溶劑，透析、冷凍。將上述經過制備過程處理過的胞外多糖和牛蒡水提物，按比例溶水混合為復合多糖免疫制劑。
5.根據權利要求4所述的一種復合多糖免疫制劑的制備方法，其特征是胞外多糖制備工藝a步驟中所述的液體PDA培養基為馬鈴薯200g/L，葡萄糖10g/L。
6.根據權利要求4所述的一種復合多糖免疫制劑的制備方法，其特征是胞外多糖制備工藝d步驟中和牛蒡水提物制備工藝e步驟中所述的木瓜蛋白酶-Sevage法中氯仿與正丁醇的比為4 1。
全文摘要
本發明公開了一種復合多糖免疫制劑及其制備方法，它是由胞外多糖和牛蒡水提物混合制成的一種復合多糖免疫制劑，其中胞外多糖占20～40重量份，牛蒡水提物占60～80重量份。本制劑產品穩定，藥效作用明顯，它既能夠抗病毒，又能夠顯著提高免疫力和抑制腫瘤，并且沒有毒副作用。
文檔編號A61P37/04GK102406680SQ20101028949
公開日2012年4月11日 申請日期2010年9月20日 優先權日2010年9月20日
發明者陳靠山 申請人:陜西嘉諾生物科技企業集團有限公司