專利名稱：甘草色素的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種甘草色素的制備方法，屬于醫藥領域范疇。
背景技術：
甘草為豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、脹果甘草 G. inflata Bat.、或光果甘草G. glabra L.的根及根莖，主產于內蒙古、新疆、甘肅等地。甘草入藥已有悠久歷史，《神農本草經》就將其列為藥之上乘，古代醫學家尊稱其為“國老”。由于其資源珍貴，被國家列入國家二級保護野生藥材。甘草化學成分種類較多，主要含三萜類皂苷類、 黃酮類、色素類、生物堿、多糖等成分。以甘草入藥開發的制劑很多，臨床上得到了較廣泛的應用，主要用于肝病、呼吸道疾病、胃病等方面的治療。近年來，隨著中藥分離純化水平的提高，甘草酸、甘草黃酮、甘草多糖等成分的相繼被開發出來并得到了廣泛的應用。甘草色素是一種由甘草中部分多酚類、黃酮類及少量皂苷類成分組成的天然色素，為黃色至棕黃色粉末，味甜。具有良好的著色性。發明人經過大量研究表明，甘草色素除了具有良好的著色、調味的功能之外，還具有顯著的抗菌、消炎抗病毒的功效。同時，由于甘草色素是天然色素類成分，具有安全、毒副作用極小的優點。因此，運用現代中藥技術，開發生產出甘草色素，在醫藥保健方面將會具有良好的應用前景。本發明目的在于運用中藥現代化分離純化技術，從甘草中制備生產出具有顯著藥理活性的甘草色素，并廣泛應用于醫藥、食品等行業，擁有很好的應用前景，具有很強的實用性。在已經公開的文獻與專利中，還沒有與本發明相關或類似的報道。
發明內容
本發明采用中藥現代化提取分離技術及合成技術，從中藥甘草中制備生產出具有良好抗菌消炎功效的甘草色素，將原本作為廢棄物的甘草色素類成分開發成具有很好應用前景的新產品，提高了甘草的綜合利用價值，擴大了甘草的應用范圍。根據本發明的比較優選的實施方案，從甘草中生產制備甘草色素的方法包括如下步驟(1)取甘草藥材，粉碎成粗粉，加入有機溶劑適量，加熱或浸泡提取數次，合并提取液，將提取液濃縮至一定體積，得到濃縮液；(2)將濃縮液加熱至一定溫度，在攪拌狀態下，加入一定濃度的堿性水溶液，保溫反應一定時間，停止攪拌。(3)反應液放冷至室溫，分層后，分取有機溶劑層。有機溶劑層中加入一定體積的水繼續萃取幾次，分取有機溶劑層。(4)取有機溶劑層，濃縮，干燥，即得甘草色素。上述步驟(1)中所述的“有機溶劑”是指乙酸乙酯、正丁醇、異丙醚等有機溶劑。由于甘草色素是一類小極性成分，易溶于有機溶劑，難溶于水，因此選擇適當的有機溶劑可以將甘草色素充分提取出來；提取溶劑的用量是甘草重量的4 10倍量，優選為8倍量；提取次數為1到3次，優選為2次；提取時間為每次提取1 3小時，優選為2小時；提取方法可以采用加熱回流提取或浸泡提取兩種方式，優選浸泡提取，提取溫度為30 80°C，優選為 60 "C。步驟O)中反應液的溫度為35 60°C，優選為50°C;所加入堿性水溶液是指氨水溶液、氫氧化鈉水溶液、氫氧化鉀水溶液、碳酸鈉水溶液、碳酸鉀水溶液，優選為氨水溶液; 溶液中堿的濃度為0. 5%，優選為0.5%。由于在步驟(1)的有機溶劑提取過程中，不但可以將甘草色素充分提取出來，而且可以將部分甘草酸類成分提取出來，因此本步驟通過加入一定的濃度的堿性溶液將溶液中的甘草酸反應生成甘草酸鹽類成分，不但可以將甘草酸類等成分單獨分離出來，而且同時也是對甘草色素類成分進行純化。根據甘草酸的性質，對其反應成鹽的溫度時間及溫度進行了考察研究，結果表明適合的反應溫度為為35 60°C，最佳的反應溫度為50°C ；反應時間為0. 5 4小時，優選1. 5小時。步驟C3)中加入水的量為有機溶劑體積的0.2 2倍量，優選為1倍量，萃取次數為1 3次，優選2次。本步驟是運用萃取的原理，將有機層中的甘草酸鹽等大極性水溶性成分充分萃取分離，達到對甘草色素進一步的純化目的。步驟(4)中，濃縮的方式可以是減壓濃縮或常壓濃縮，優選為減壓濃縮；干燥的方式可以是減壓干燥、噴霧干燥或沸騰干燥，優選為沸騰干燥。根據上述技術方案，采用科學可行的方法將中藥甘草經提取、反應除雜、萃取吸附除雜、干燥等一系列步驟，制成了脂溶性好、純度高的甘草色素，含量范圍為75% 95%。 以本發明所制備的甘草色素為原料，可以進一步加入適當的輔料，將本品制成各種適合于臨床應用的制劑，包括片劑、膠囊、滴丸、軟膠囊，也可以用于保健食品或食品添加劑等。本發明提供的技術方案經多批工業化生產驗證，工藝穩定性、重復性好，質量可控，具有很強的實用性。以下通過本發明提供的甘草色素的在抗菌、消炎、抗病毒等方面的藥理作用研究， 來進一步說明本發明的實用性1、甘草色素對肺炎雙球菌感染小鼠死亡的保護作用。取18_22g ICR種小鼠120只隨機分組，每組只，早$兼用。(1)正常對照組等量 0. 5% CMC-Na 20ml/kg(2)模型對照組等量 0. 5% CMC-Na 20ml/kg。(3)甘草色素 I 組 0. 0625g/kg。(4)甘草色素II組0. 125g/kg。(5)甘草色素III組0. 25g/kg。以上各組小鼠均灌胃給藥，給藥容量20ml/kg，1次/天X5天，第3天給藥1小時后，腹腔注射肺炎雙球菌培養液0. 5ml/只鼠(除正常對照組)，繼續給藥2天，觀察各組動物7日內死亡情況結果見表1表1甘草色素對肺炎雙球菌感染小數死亡的保護作用組別動物數劑量死亡數存活率存活天數(只)(g/kg)(只)(%)(；土S) P 值正常對照組20—0100.0模型對照組20一1820.02.35 ±1.31原料I組200.06251240.03.80±1.54p<0. 05原料II組200.125955.04.10±1.48p<0. 05原料III組200.25765.05.10 土 1.82p<0. 05 與模型組比較*P < 0. 05實驗結果所示甘草色素對肺炎雙球菌感染小鼠可延長感染小鼠的存活天數，可減少肺炎雙球菌感染小鼠的死亡數，與模型組比較具有顯著性差異(P < 0. 05)。2、甘草色素對甲型流感病毒感染小鼠的保護作用(1)血凝試驗取36孔微孔板，每孔加入生理鹽水0. 25ml。第一孔加入10—1病毒尿囊液0. 25ml， 混勻后，依次取0.25ml置第二孔，稀釋至第9孔。第十孔不加病毒尿囊液，作對照。每孔加入0. 5%雞紅細胞0. 25ml，輕輕搖勻后于室溫放置2小時觀察結果，記錄結果，血凝試驗 (HA)為 640。(2)甲型流感病毒感染小鼠半數致死量(LD5tl)滴定。取ICR小鼠48只，體重13_15g，雌雄兼用，隨機分6組，每組8只，取增毒4次的病毒尿囊液，以10倍稀釋，每組滴一個病毒濃度，各組小鼠在乙醚淺麻醉下以病毒尿囊液 30ul滴鼻，觀察14天內死亡數，按Reed-Muench法計算，結果LD5tl為IO181(3)甘草色素對甲型流感病毒感染小鼠的保護作用取ICR小鼠126只，體重13_16g，雌雄各半，隨機分7組，每組18只(1)正常對照組等量0. 5% CMC-Na 10ml/kg(2)模型對照組等量0. 5% CMC-Na 10ml/kg(3)利巴韋林組0. 75g/kg(4)甘草色素I組0. 0625g/kg(5)甘草色素II組0. 125g/kg(6)甘草色素 III組0. 25g/kg，以上各組小鼠均灌胃給藥，給藥容量10ml/kg，1次/天X5天，給藥Ih 后，在乙醚淺麻醉下，以血凝試驗640以上的尿囊液，給小鼠滴鼻感染，每鼠30ul，(20個LD5tl 致死量)，觀察動物感染后發病及死亡情況，結果見表2。表2.甘草色素對甲型流感病毒感染小鼠死亡的保護作用
權利要求
1.一種甘草色素的制備方法，由以下幾步組成(1)取甘草藥材，粉碎成粗粉，加入有機溶劑適量，加熱或浸泡提取數次，合并提取液， 將提取液濃縮至一定體積，得到濃縮液。(2)將濃縮液加熱至一定溫度，在攪拌狀態下，加入一定濃度的堿性水溶液，保溫反應一定時間，停止攪拌。(3)反應液放冷至室溫，分層后，分取有機溶劑層。有機溶劑層中加入一定體積的水繼續萃取幾次，分取有機溶劑層。(4)取有機溶劑層，濃縮，干燥，即得甘草色素。
2.根據權利要求1所述的甘草色素的制備方法，其特征在于步驟(1)中“有機溶劑”是指乙酸乙酯、正丁醇、異丙醚等有機溶劑。提取溶劑的用量是甘草重量的4 10倍量，優選為8倍量；提取次數為1到3次，優選為2次；提取時間為每次提取1 3小時，優選為 2小時；提取方法可以采用加熱回流提取或浸泡提取兩種方式，優選浸泡提取，提取溫度為 30 80°C，優選為60°C。
3.根據權利要求1所述的甘草色素的制備方法，其特征在于步驟O)反應的溫度為 35 60°C，優選為50°C ；反應時間為0. 5 4小時，優選1. 5小時。所加入堿性水溶液是指氨水溶液、氫氧化鈉水溶液、氫氧化鉀水溶液、碳酸鈉水溶液、碳酸鉀水溶液，優選為氨水溶液；堿溶液的濃度為0. 5%，優選為0. 5%。
4.根據權利要求1所述的甘草色素的制備方法，其特征在于步驟(3)中加入水的量為有機溶劑體積的0. 2 2倍量，優選為1倍量，萃取次數為1 3次，優選2次。
5.根據權利要求1所述的甘草色素的制備方法，其特征在于步驟(4)濃縮的方式可以是減壓濃縮或常壓濃縮，優選為減壓濃縮；干燥的方式可以是減壓干燥、噴霧干燥或沸騰干燥，優選為沸騰干燥。
6.根據權利要求1所述的制備方法，所制備得到的甘草色素可以加入適當的輔料或食品中，應用于藥品和食品行業，具有抗菌、消炎、抗病毒的作用。
全文摘要
本發明提供了一種甘草色素及其制備方法，本制備方法以中藥甘草為原料，經提取、堿化反應除雜、萃取、濃縮干燥等一系列步驟組成。制得的甘草色素含量高、脂溶性好。以甘草色素為原料，可以進一步將本品制成藥物制劑、功能性食品添加劑等，具有抗菌消炎、抗病毒的功效。本發明提供的甘草色素制備方法的工藝新穎，穩定性好，適合工業化生產，具有很強的實用性。
文檔編號A61P31/12GK102337042SQ20111021006
公開日2012年2月1日 申請日期2011年7月26日 優先權日2011年7月26日
發明者季浩, 易銘, 楊永安, 金顯友, 鐘慧, 陳月紅 申請人:江蘇天晟藥業有限公司