一種維庫溴銨脂質體注射劑的制作方法

專利名稱：一種維庫溴銨脂質體注射劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種脂質體注射劑及其制法，具體涉及一種維庫溴銨脂質體注射劑及其制法，屬于醫藥技術領域。
背景技術：
維庫溴銨，化學名稱為溴化1_[3 α，17 β -二乙酰氧基_2_ β (1-哌啶基)-5 α -雄甾烷-16 β -基]-1-甲基哌啶，分子量637. 73，結構式如下
O生物相容性。作為一種新型藥物制劑，脂質體制劑具有以下優點(1)具有緩釋作用活性成分緩慢釋放，延緩腎排泄和代謝，從而延長作用時間， 提高質量效果；(2)降低藥物毒性；(3)增加藥物的溶解性，提高制劑質量；(4)具有靶向性脂質體所載的藥物在肝、脾網狀內皮系統臟器局部維持高濃度， 從而起到藥物器官靶向性作用；(5)具有對活性藥物成分的保護作用。脂質體(Liposome)最初是由英國學者Bangham和Mandlish將磷脂分散在水中進行電鏡觀察時發現的。磷脂分散在水中自然形成多層囊泡，每層均未脂質的雙分子層；囊泡中央和各層之間被水相隔開，雙分子層厚度約為4nm。后來，將這種具有類似生物膜結構的雙分子小囊稱為脂質體。脂質體可分為多室脂質體和膽識脂質體。單室脂質體又分為小單室脂質體和大單室脂質體。小單室脂質體為球形，尺寸一般為20-50納米；大單室脂質體的尺寸為微米數量級。1971年英國萊門等人開始將脂質體用于藥物載體，主要作用機理是將藥物粉末或溶液包裹在脂質體雙層脂質膜所封閉的水相中或嵌入脂質體雙層脂質膜中，這種微粒具有類細胞結構，進入人體內主藥被網狀內皮系統吞噬而激活機體的自身免疫功能，并改變被包封藥物的體內分布，使藥物主要在肝、脾、肺和骨髓等組織器官中積蓄，從而提高藥物的治療指數，減少藥物的治療劑量和降低藥物的毒性。近年來，隨著生物技術的不斷進展，脂質體制備工藝逐步完善，脂質體作用機制進一步闡明，加之脂質體適合體內降解、無毒性和無免疫原性，特別是大量試驗數據證明脂質體作為藥物載體可以提高藥物治療指數、降低藥物毒性和減少藥物副作用，并減少藥物劑
量等優點。由于維庫溴銨注射劑的不足，目前對于維庫溴銨脂質體注射劑存在需求。

發明內容
為了形成品質優良的維庫溴銨脂質體注射劑，重要的是尋找能與維庫溴銨良好相容從而將其良好包封且不滲漏的成膜材料，以及尋找能使脂質體形成穩定注射劑的賦形劑成分。為了實現上述目的，本發明人進行的大量研究和實現，發現特定重量配比的維庫溴銨、膽固醇、磷脂酰乙醇胺、大豆磷脂、吐溫80、海藻糖和PVP能制成維庫溴銨脂質體注射劑，其中，作為藥物活性成分的維庫溴銨的包封率高，脂質體粒徑小且分布均勻，與現有技術中的維庫溴銨注射劑相比，本發明制劑的藥物活性成分在體循環中的保留時間顯著延長，藥物的生物相容性高，生物利用度明顯提高，療效明顯提高。一方面，本發明提供一種維庫溴銨脂質體注射劑，其主要由以下重量配比的成分制成維庫溴銨4份膽固醇50-200 份磷脂酰乙醇胺50-300 份大豆磷脂10-50 份吐溫801-60 份海藻糖10-150 份甘露醇10-150 份PVP50-250 餘。優選地，本發明的維庫溴銨脂質體注射劑主要由以下重量配比的成分制成
維庫溴銨4份
膽固醇75-150 份磷脂酰乙醇胺100-200 份大豆磷脂25-50 份吐溫8010-40 份海藻糖20-100 份甘露醇20-80 份PVP80-200 份，優選地，膽固醇與大豆磷脂的重量之和與磷脂酰乙醇胺之間的重量比為 1:1-1: 2之間，進一步優選地，膽固醇與大豆磷脂的重量之和與磷脂酰乙醇胺之間的重量比為1 1-3 4之間。進一步優選地，根據本發明的維庫溴銨脂質體注射劑由包括以下重量配比的藥物
和賦形劑成分制成維庫溴銨4份膽固醇100-150 份磷脂酰乙醇胺150-200 份大豆碑脂25-50 份吐溫8010-20 份海藻糖20-50 份甘露醇30-60 份PVP100-150 份，優選地，膽固醇與大豆磷脂的重量之和與磷脂酰乙醇胺之間的重量比為1 1。作為用于形成脂質體的磷脂，可以使用天然磷脂和合成磷脂。在本發明中，作為藥物活性成分的維庫溴銨，其水溶性差，脂溶性良好。針對維庫溴銨的特點，本發明人通過研究發現磷脂酰乙醇胺特別適于作為基礎磷脂成膜材料。磷脂酰乙醇胺(phosphatidyl ethanolamine,ΡΕ)作為一種天然磷脂，其含量非常高，容易獲得，價格低廉。磷脂酰乙醇胺的相變溫度較高，易于形成穩定的脂質體膜。在本發明的維庫溴銨脂質體注射劑中，相對于4重量份的維庫溴銨而言，磷脂酰乙醇胺的用量為50-200重量份。如果磷脂酰乙醇胺的用量低于50重量份，則無法形成穩定的脂質體；反之，如果磷脂酰乙醇胺的用量的用量高于200重量份，則作為藥物活性成分的維庫溴銨的包封率下降，注射劑的品質以及療效降低。在本發明的維庫溴銨脂質體注射劑中，膽固醇和大豆磷脂協同用于調節脂質體的膜穩定性。本發明人經過研究發現，當膽固醇與大豆磷脂的重量之和與磷脂酰乙醇胺重量比為1 1-1 2時，能形成穩定的維庫溴銨脂質體。當膽固醇與大豆磷脂的重量之和與磷脂酰乙醇胺重量比低于1 1時，膜穩定性降低，維庫溴銨易于滲漏；當膽固醇與大豆磷脂的重量之和與磷脂酰乙醇胺重量比高于1 2時，維庫溴銨脂質體膜流動性過高，被包裹在脂質體內的維庫溴銨易于釋放。此外，研究發現，當膽固醇與大豆磷脂的重量之和與磷脂酰乙醇胺重量比為1 1-1 2時，所形成的脂質體毒性低。研究表明，脂質體的穩定性與生物利用度有密切的對應關系。穩定性越高，生物利用度越高。因此，本發明的維庫溴銨脂質體注射劑的穩定性高，是導致藥物生物利用度高的因素之一。另一方面，本發明人研究發現，在本發明的維庫溴銨脂質體注射劑中，相對于4 重量份的維庫溴銨而言，磷脂酰乙醇胺的用量為50-200重量份，膽固醇為50-200重量份，大豆磷脂為10-50重量份，且膽固醇與大豆磷脂的重量之和與磷脂酰乙醇胺重量比為 1:1-1: 2時，所形成的維庫溴銨脂質體注射劑的包封率高。在本發明的維庫溴銨脂質體注射劑中，使用吐溫80來進一步改進脂質體膜的穩定性。吐溫80(聚山梨醇80)是一種非離子表面活性劑，當用于磷脂酰乙醇胺雙層膜中時， 能提高該雙層膜之間的化學能，從而提高脂質體在水性液體中的化學穩定性，進而提高維庫溴銨脂質體注射劑的穩定性。在本發明的維庫溴銨脂質體注射劑中，相對于4重量份的維庫溴銨而言，吐溫80 的用量為1-60重量份。如果吐溫80的用量低于1重量份，則由于其用量過低導致對維庫溴銨脂質體注射劑的穩定性改進不夠，反之，如果吐溫80的用量高于60重量份，則用于其用量過高而導致脂質體膜易于泄露。研究發現，當使用上述特定量的維庫溴銨、磷脂酰乙醇胺、膽固醇、大豆磷脂和吐溫80時，可以得到品質優良的維庫溴銨脂質體，其包封率和穩定性都很高，毒性低，生物利用度高。在本發明的維庫溴銨脂質體注射劑中，使用海藻糖、甘露醇和聚乙烯吡咯烷酮作為賦形劑，進一步用于形成穩定的注射劑。海藻糖是由兩個葡萄糖分子以α，α，1，1_糖苷鍵構成的非還原性糖，自身性質非常穩定，它最明顯的性質是在無水的條件下有保護生物膜的能力，使脂質體即使在脫水的情況下也保持形態完整。在本發明的維庫溴銨脂質體注射劑中，海藻糖能有效保護脂質體顆粒的形態和穩定性，進一步提高脂質體注射劑的穩定性。聚乙烯吡咯烷酮(PVP)是高分子化合物，熔點高，在水和有機溶劑中的溶解性均良好，毒性低，生理相容性良好，具有分散藥物的作用，由于它的存在可使水相粘稠度增加， 包封在脂質體中間的水膜中使水溶性藥物具有較高的包封率，并且能使藥物在儲存中穩定。甘露醇在醫藥上是良好的利尿劑，降低顱內壓、眼內壓及治療腎藥、脫水劑、食糖代用品、也用作藥片的賦形劑及固體、液體的稀釋劑，尤其能為凍干粉針劑提供良好的成型支撐。本發明的維庫溴銨脂質體注射劑，其維庫溴銨的規格可以為aiigdmg和10mg。另一方面，本發明還提供一種維庫溴銨脂質體注射劑的制備方法，具體包括如下制備步驟(1)將膽固醇、磷脂酰乙醇胺、大豆磷脂、吐溫80溶于適量的緩沖鹽溶液中，制成空白脂質體；(2)將上述制備的空白脂質體經流通蒸汽滅菌處理，然后超聲處理兩次，每次15 分鐘；(3)無菌條件下，向熔融狀態的脂質體中加入維庫溴銨，不斷攪拌下加入海藻糖， 甘露醇和PVP ；(4) 0. 45 μ m微孔濾膜過濾，灌裝，然后進行凍干，即得維庫溴銨脂質體注射劑。上述所述的制備方法，其中所述的緩沖鹽溶液選自磷酸鹽緩沖溶液、枸櫞酸鹽緩沖溶液、碳酸鹽緩沖溶液、硼酸鹽緩沖溶液中的一種，優選為pH為7. 2的磷酸鹽緩沖溶液。上述所述的制備方法，其中步驟(3)中所述的熔融狀態脂質體的溫度為60°C。上述所述的制備方法，其中步驟中所述的凍干時預凍溫度為-30 -60°C，預凍時間為2 5小時，升華時間為12 48小時，干燥溫度為25 35°C，干燥時間為2 4小時。有益效果本發明人通過選擇適當的材料成分、采用合適的制備工藝，獲得了品質優良的維庫溴銨脂質體注射劑，脂質體粒徑小，粒徑分布均勻，包封率高，穩定性高。本發明的脂質體注射劑減少了毒副作用，提高了制劑產品質量，具有良好的制劑穩定性，冷凍過程中脂質體不會因脫水、融合、冰晶等發生破裂，長期儲存后，脂質體同樣保持良好的包封率。通過本發明方法制得的維庫溴銨脂質體注射劑，提高了維庫溴銨的溶解度，提高了制劑產品的質量，減少了毒副作用，增加了藥物在體循環中的保留時間，提高了藥物的生物利用度，療效明顯提高；并且制備方法簡單，適合于工業化大生產。


圖1是維庫溴銨脂質體注射劑的血藥濃度-時間曲線。
具體實施例方式以下通過具體實施方式
本發明進行進一步說明，本發明的特點和優點將隨著這些說明而變得更為清楚，這些實施例僅是說明性的，并不應理解為對本發明的限制。實施例1維庫溴銨脂質體灃射劑的制備所用成分及其重量如下
維庫溴銨4g膽固醇120g磷脂酰乙醇腰150g大豆磷脂30g吐溫80IOg海藻糖IOOg甘露醇70gPVP80g采用制備工藝制備維庫溴銨脂質體注射劑(1)將120g膽固醇、150g磷脂酰乙醇胺、30g大豆磷脂和IOg吐溫80溶于IOOOml PH為7. 2的磷酸鹽緩沖鹽溶液中，制成空白脂質體；(2)將上述制備的空白脂質體經流通蒸汽滅菌處理，然后超聲處理兩次，每次15 分鐘；(3)無菌條件下，向60°C熔融狀態的脂質體中加入4g維庫溴銨，不斷攪拌下加入IOOg海藻糖、70g甘露醇和80g PVP ；(4) 0. 45 μ m微孔濾膜過濾，灌裝，然后進行凍干，預凍溫度為_30°C，預凍時間為5 小時，升華時間為48小時，干燥溫度為35°C，干燥時間為2小時，即得維庫溴銨脂質體注射劑。實施例2維庫溴銨脂質體灃射劑的制備所用成分及其重量如下
維庫溴銨4g膽固醇75g磷脂酰乙醇胺100g大豆磷脂25g吐溫8020g海藻糖30g甘露醇30gPVP40g采用制備工藝制備維庫溴銨脂質體注射劑(1)將75g膽固醇、IOOg磷脂酰乙醇胺、25g大豆磷脂和20g吐溫80溶于IOOOml 的pH為7. 2的磷酸鹽緩沖鹽溶液中，制成空白脂質體；(2)將上述制備的空白脂質體經流通蒸汽滅菌處理，然后超聲處理兩次，每次15 分鐘；(3)無菌條件下，向60°C熔融狀態的脂質體中加入4g維庫溴銨，不斷攪拌下加入 30g海藻糖、30g甘露醇和40g PVP ；(4) 0. 45 μ m微孔濾膜過濾，灌裝，然后進行凍干，預凍溫度為_60°C，預凍時間為2 小時，升華時間為12小時，干燥溫度為25°C，干燥時間為4小時，即得維庫溴銨脂質體注射劑。實施例3維庫溴銨脂質體灃射劑的制備所用成分及其重量如下維庫溴銨2g膽固醇30g磷脂酰乙醇胺40g大豆磷脂IOg吐溫80IOg海藻糖IOg甘露醇IOgPVP30g采用制備工藝制備維庫溴銨脂質體注射劑(1)將30g膽固醇、40g磷脂酰乙醇胺、IOg大豆磷脂和IOg吐溫80溶于IOOOml的 PH為7. 2的磷酸鹽緩沖鹽溶液中，制成空白脂質體；(2)將上述制備的空白脂質體經流通蒸汽滅菌處理，然后超聲處理兩次，每次15 分鐘；(3)無菌條件下，向60°C熔融狀態的脂質體中加入2g維庫溴銨，不斷攪拌下加入 IOg海藻糖、IOg甘露醇和30g PVP ；(4) 0. 45 μ m微孔濾膜過濾，灌裝，然后進行凍干，預凍溫度為_45°C，預凍時間為 3. 5小時，升華時間為25小時，干燥溫度為30°C，干燥時間為3小時，即得維庫溴銨脂質體注射劑。對比例1-3維庫溴銨脂質體注射劑的制備將如下表1中所示的對比例1-3中的成分分別采用與實施例1-3中相同的生產工藝，制成維庫溴銨脂質體注射劑表1對比例1-3中所用原料成分
權利要求
1. 一種維庫溴銨脂質體注射劑，其主要由以下重量配比的成分制成維庫溴銨4份膽固醇50-200 份磷脂酰乙醇胺50-300 份大豆磷脂10-50 份吐溫801-60 份海藻糖10-150 份甘露醇10-150 份PVP50-250 份。優選地，膽固醇與大豆磷脂的重量之和與磷脂酰乙醇胺之間的重量比為1 1-1 2。
2.根據權利要求1所述的維庫溴銨脂質體注射劑，其主要由以下重量配比的成分制成維庫溴銨4份膽固醇75-150 份磷脂酰乙醇胺100-200 份大豆磷脂25-50份吐溫8010-40 份海藻糖20-100 份甘露醇20-80 份PVP80-200 份，優選地，膽固醇與大豆磷脂的重量之和與磷脂酰乙醇胺之間的重量比為1 1-3 4。
3.根據權利要求1所述的維庫溴銨脂質體注射劑，其主要由以下重量配比的成分制成維庫溴按4份膽固醇100-150 份磷脂酰乙醇胺150-200 份大豆磷脂25-50 份吐溫8010-20 份海藻糖20-50 份甘露醇30-60 份PVP100-150 份，優選地，膽固醇與大豆磷脂的重量之和與磷脂酰乙醇胺之間的重量比為1 1。
4.根據權利要求1-3中任一項所述的維庫溴銨脂質體注射劑，其特征在于維庫溴銨的規格為&1^、％^或10mg。
5.一種制備維庫溴銨脂質體注射劑的方法，其特征在于包括如下步驟(1)將膽固醇、磷脂酰乙醇胺、大豆磷脂和吐溫80溶于緩沖鹽溶液中，制成空白脂質體；(2)將上述制備的空白脂質體經流通蒸汽滅菌處理，然后超聲處理兩次，每次15分鐘；(3)無菌條件下，向熔融狀態的脂質體中加入維庫溴銨，不斷攪拌下加入海藻糖，甘露醇和PVP ；(4)0. 45 μ m微孔濾膜過濾，灌裝，然后進行凍干，即得維庫溴銨脂質體注射劑。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于所述的緩沖鹽溶液是選自磷酸鹽緩沖溶液、枸櫞酸鹽緩沖溶液、碳酸鹽緩沖溶液、硼酸鹽緩沖溶液中的一種。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于所述的緩沖鹽溶液為pH為7.2的磷酸鹽緩沖溶液。
8.根據權利要求5所述的維庫溴銨脂質體注射劑的制備方法，其特征在于步驟(3)中所述的熔融狀態脂質體的溫度為60°C。
9.根據權利要求5所述的維庫溴銨脂質體注射劑的制備方法，其特征在于步驟(4)中所述的凍干時預凍溫度為-30 _60°C，預凍時間為2 5小時，升華時間為12 48小時， 干燥溫度為25 35°C，再干燥時間為2 4小時。
10.根據權利要求1所述維庫溴銨脂質體注射劑在制備肌松藥中的用途。
全文摘要
本發明公開一種維庫溴銨脂質體注射劑及其制法。該脂質體注射劑由特定重量配比的維庫溴銨、膽固醇、磷脂酰乙醇胺、大豆磷脂、吐溫80、海藻糖、甘露醇和聚乙烯吡咯烷酮制成。本發明的脂質體注射劑具有良好的制劑穩定性，冷凍過程中脂質體不會因融合、冰晶等發生破裂，長期儲存后，脂質體同樣保持良好的包封率；本發明提高了維庫溴銨的溶解度，提高了制劑產品的質量，減少了毒副作用，增加了藥物在體循環中的保留時間，提高了藥物的生物利用度，療效明顯提高；并且制備方法簡單，適合于工業化大生產。
文檔編號A61K9/127GK102319215SQ20111028274
公開日2012年1月18日 申請日期2011年9月22日 優先權日2011年9月14日
發明者陶靈剛 申請人:海南靈康制藥有限公司