專利名稱：一種馬錢子總生物堿的提取方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥有效成分的提取方法，特別是涉及一種從中藥馬錢子中提取馬錢子總生物堿的方法，屬于藥物技術領域。
背景技術：
馬錢子又名番木鱉，始載于《本早綱目》，味苦，寒性，有大毒，歸肝，脾經，功效為通絡止痛，散結消腫。臨床上用與風濕頑痹，麻木癱瘓，跌打損傷，癰疽腫痛，小兒麻痹后遺癥， 類風濕性關節炎等疾病；但具有劇毒的特性嚴重影響其在臨床上的應用，所謂“毒藥猛劑善起沉疴”。馬錢子的治療量為O. 3-0. 6g，過量易出現中毒，如何合理安全使用馬錢子，成為近年的研究熱點之一。
研究表明，總生物堿是馬錢子中最主要的有效部位，包括馬錢子堿、士的寧、番木鱉次堿、馬錢子新堿、番木鱉甙、依卡精等，其中馬錢子中的主要生物堿成分中馬錢子堿具有抗炎、鎮痛作用，而其中士的寧是中樞神經興奮劑，主要在臨床上治療面癱，神經麻痹等， 同時其為主要的毒性成分，基本無抗炎、鎮痛作用；文獻報道小鼠灌服士的寧、馬錢子堿、馬錢子仁的LD50分別為3. 27mg/kg、233mg/kg和234. 5mg/kg ;小鼠腹腔注射上述藥物的LD50 分別為1. 53mg/kg、69. 77mg/kg和76mg/kg，其口服中毒劑量成人為5 10mg，口服致死量為30mg。表明士的寧是馬錢子中的主要毒性成分。有文獻報道，分別用士的寧和馬錢子堿給小鼠灌胃，兩者的LD50分別為3. 27mg/kg和233mg/kg，由此可以得知士的寧的安全性很低，如果能除去馬錢子總生物堿中的部分士的寧，則既能降低其毒性，又能保留其原有的抗炎鎮痛的藥理活性，提高臨床用藥的安全性。因此，現代研究中需要一種能降低士的寧含量的馬錢子總堿的提取方法。發明內容
本發明的 目的在于提供一種安全、成本低、收率高、能降低士的寧含量的馬錢子總生物堿的提取方法。
本發明是通過以下技術方案實現的
(I)取馬錢子，粉碎成粗粉，備用；
(2)將馬錢子粗粉加酸液提取，合并提取液，過濾，得馬錢子提取液，調整pH值至2-10，濾過；
(3)濾液上大孔吸附樹脂柱吸附，先以去離子水洗脫，棄去洗脫液，再用酸液洗脫， 棄去洗脫液,最后用乙醇/酸醇洗脫,收集乙醇/酸醇洗脫液；
(4)洗脫液減壓濃縮，調節pH值至8-11，加入適量硅藻土，攪勻，蒸干，得固體物；
(5)固體物加有機溶劑提取，過濾，回收有機溶劑，減壓干燥，粉碎，得藥粉；
(6)藥粉用甲醇處理，放冷至室溫，過濾，濾液減壓干燥，粉碎，即得馬錢子總生物堿。
基于上述工藝過程，發明人又進行了進一步的研究，細化各步驟的參數，從而篩選出最優方案，具體內容如下
步驟(I)中的馬錢子是指制馬錢子；
步驟⑵中的酸液是指1^-5%的鹽酸、O. 5%-2%的硫酸、鹽酸乙醇溶液、硫酸乙醇溶液中的一種；
其中酸醇溶液優選50-80 % ETOH · O. 5-5% HCl, 50-80 % ETOH · O. 5-2% H2804。
提取方法為滲漉法，回流法、攪拌法中的一種，優選加熱回流法。
酸液用量為5-12倍量，加熱回流次數為1-3次，每次O. 5-2小時；
優選酸液酸液用量為10倍量，加熱回流次數為2次，每次1. 5小時；
提取液上柱前可調節PH2-10，優選調節pH6_7。
步驟(3)中樹脂可選用AB_8、D101、732陽離子交換樹脂，優選DlOl。
洗脫速度為l_3BV/h ;優選2BV/h。
洗脫用去離子水用量為1-3倍柱體積；酸液用量為O. 5-2倍柱體積；乙醇用量為2-6倍柱體積；
洗脫用酸液為1-5%鹽酸或1-5%硫酸；優選3%鹽酸。
洗脫用乙醇濃度為50-95% ;優選50%乙醇
酸醇可用50-80% ETOH · 1-10% HCl, 50-80% ETOH · O. 5-5% H2S04。
步驟⑷中硅藻土的用量為1/20-1/5倍藥材量；優選1/10倍藥材量
步驟(5)中有機溶劑可選用氯仿、乙酸乙酯、丙酮等極性較小的有機溶劑，優選氯仿作為純化溶劑。提取方式可選擇攪拌、回流、超聲等方法，優選回流提取。氯仿的用量為3-10倍量；加熱回流1-3次，每次1-2小時；
步驟(6)中處理方法為攪拌、回流、超聲，優選超聲處理，甲醇的用量為1-5倍量。
由于馬錢子藥材中馬錢子堿和士的寧含量的差異，通過以上方法制得的馬錢子總生物堿含量彡50%，其中馬錢子堿與士的寧的含量之比為1.8-2. 5 I。
優選馬錢子總生物堿含量>50%，其中馬錢子堿與士的寧的含量之比為2 I
本發明藥物的活性成分可以加入藥劑學上可接受的輔料按常規工藝制備成所需制劑。如可以制成常用的片劑(分散片、泡騰片、口腔崩解片、含片、咀嚼片、泡 騰片)、膠囊劑(硬膠囊、軟膠囊劑)、顆粒劑、丸劑(滴丸劑)、散劑等固體制劑形式的口服藥物，也可以制成糖漿、口服液等液體制劑形式的口服藥物；還可以制成膏劑、凝膠劑、軟膏劑、巴布劑、 貼膏劑、搽劑、洗劑、涂膜劑等外用制劑形式的外用藥物。因此，該藥物組合物中除有效成分外，還可以含有藥學上可以接受的輔料。
這里所述的輔料，可以根據不同的制劑有所不同，如在片劑、膠囊劑、顆粒劑等固體制劑中常用的稀釋劑、崩解劑、賦形劑、粘合劑、潤滑劑、表面活性劑、填充劑等；在糖衆、 口服液等液體制劑形式中常用的表面活性劑、稀釋劑、防腐劑、穩定劑、矯味劑、增稠劑、助流劑等；在凝膠劑、軟膏劑等外用制劑形式中常用的藥用油性基質、水性基質、防腐劑、抗氧劑、保濕劑、透皮吸收促進劑、表面活性劑等。
其常用輔料如淀粉、乳糖、糊精、糖粉、微晶纖維素、甘露醇、木糖醇、聚乙二醇、硫酸鈣、磷酸氫鈣、碳酸鈣、改良淀粉、山梨醇、聚乙烯吡咯酮、重質碳酸鎂、羧甲基纖維素鈉、 羥丙甲基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、羧甲淀粉鈉、羥丙基纖維素、聚維酮K30、白陶土、預膠化淀粉、硬脂酸鎂、滑石粉、微粉硅膠、甜葉菊苷、甜菜堿、阿司帕坦、甘草甜素、糖精鈉、枸櫞酸、碳酸氫鈉、碳酸鈉、卡拉膠、瓊脂、明膠、海藻酸鈉、黃原膠、瓜耳豆膠、西黃耆膠、 阿拉伯膠、槐豆膠、刺梧桐膠、硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、聚丙烯酰胺、交聯型聚丙烯酸鈉、聚乙烯醇、卡波姆、山梨酸、山梨酸鉀、羥苯乙酯、苯甲醇、尼泊金、硫柳汞、二甲基亞砜、氮酮、 三乙醇胺、氫氧化鈉、甘油、丙二醇、BHT、BHA、十二烷基硫酸鈉、吐溫類、司盤類等。
馬錢子為馬錢科植物馬錢(Strychnos nux-vomica L.)的干燥成熟種子經炮制所得制馬錢子，具有通絡止痛、消腫散結的功效，臨床用于治療風濕頑痹、麻木癱瘓、跌打損傷和癰疽腫痛等疾病。馬錢子主要活性成分為總生物堿，其中生物堿成分中馬錢子堿具有較好的抗炎鎮痛的藥理活性，是馬錢子的主要有效成分，而另一含量較高的士的寧是強毒性成分，同時為無效成分，所以在提取過程中需要提高馬錢子堿的含量，降低士的寧的含量。
馬錢子總生物堿中馬錢子堿、士的寧在水中溶解度小，但易溶于醇、氯仿等，提取時一般采用溶劑法。對不同種類不同濃度的酸水和不同濃度的酸乙醇溶液進行溶劑的篩選，選擇出馬錢子堿轉移率和含量較高而士的寧轉移率較低的溶劑，從而確定提取溶劑。然后再用優選出的溶劑，對滲漉法、回流法和攪拌法進行比較，確定合適的提取方法。在確定了提取溶劑和提取方法的基礎上，為了全面考察影響提取效果的因素，對提取方法中影響提取效果的主要因素進行考察，對提取的條件進行優選，確定提取工藝的最佳條件。
實驗例1:提取工藝技術條件的研究
1.1提取溶劑的考察
根據提取工藝的試驗設計，對提取溶劑即不同種類不同濃度的酸水和不同濃度的酸性乙醇進行優選。試驗中設計了分別以酸水和50^^80%的乙醇作為提取溶液， 以提取物中馬錢子堿和士的寧的轉移率為考察指標，對不同的提取溶劑進行考察。具體實驗方法如下
取馬錢子粗藥3份，每份10g，分別加入8倍量的不同的提取溶劑，對藥材進行回流提取，每次lh，提取2次，將提取液分別濾過，濾液于70°C減壓濃縮。然后放入干燥器中，冷卻，準確稱重，并測定馬錢子堿和士的寧的含量，結果見表I。
表I不同溶劑提取馬錢子總生物堿的實驗結果
權利要求
1.一種馬錢子總生物堿的提取方法，其特征在于，步驟以下 (1)取馬錢子，粉碎成粗粉，備用； (2)將馬錢子粗粉加酸液提取，合并提取液，過濾，得馬錢子提取液，調整pH值至2-10，濾過； (3)濾液上大孔吸附樹脂柱吸附，先以去離子水洗脫，棄去洗脫液，再用酸液洗脫，棄去洗脫液，最后用乙醇或酸醇洗脫，收集乙醇或酸醇洗脫液； (4)洗脫液減壓濃縮，調節pH值至8-11，加入硅藻土，攪勻，蒸干，得固體物； (5)固體物加有機溶劑提取，過濾，回收有機溶劑，減壓干燥，粉碎，得藥粉；有機溶劑為氯仿、乙酸乙酯、丙酮中的一種； (6)藥粉用甲醇處理，放冷至室溫，過濾，濾液減壓干燥，粉碎，即得馬錢子總生物堿。
2.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟(2)中的酸液是指1%_5%的鹽酸、O. 5% -2%的硫酸、鹽酸乙醇溶液、硫酸乙醇溶液中的一種。
3.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟(2)中酸液用量為5-12倍量，力口熱回流次數為1-3次，每次O. 5-2小時。
4.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟(3)中乙醇或酸醇用量為5-6倍柱體積；乙醇濃度為50-95%。
5.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟(3)中洗脫速度為l-3BV/h。
6.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟(4)中硅藻土的用量為1/20-1/5倍藥材量。
7.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟(5)中氯仿的用量為3-10倍量；加熱回流1-3次，每次1-2小時。
8.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟(6)中甲醇的用量為1-5倍量。
9.根據權利要求1-8中任意一項所述的提取方法，其特征在于，制得的馬錢子總生物堿含量≥50%，其中馬錢子堿與士的寧的含量之比為1.8-2. 5 I。
10.根據權利要求1-8中任意一項所述的一種馬錢子總生物堿的提取方法，其特征在于，將所制得的馬錢子總生物堿加入適量輔料按常規工藝制成藥劑學上可接受的制劑。
全文摘要
本發明公開了一種馬錢子總生物堿的提取方法，屬于藥物的技術領域。該方法包括將馬錢子粗粉經酸提、上柱、分離、純化去除部分士的寧等步驟，制備得到的馬錢子總生物堿含量在50％以上，其中馬錢子堿和士的寧的含量比約為2∶1，能有效降低其毒性，提高臨床用藥的安全性。該提取方法可以高效率的從中藥馬錢子中分離出高純度的馬錢子總生物堿。
文檔編號A61P29/00GK103027946SQ20111029473
公開日2013年4月10日 申請日期2011年9月30日 優先權日2011年9月30日
發明者張保獻, 胡杰 申請人:北京因科瑞斯醫藥科技有限公司