專利名稱：2α-羥基原人參二醇的藥物用途的制作方法
技術領域：
本發明屬于化工領域及醫藥領域，涉及2 α-羥基原人參二醇在制備抗腫瘤藥物中的應用。
背景技術：
2 α -羥基原人參二醇，結構式如下。19991998年，Cui Jian-Fang等利用堿切除法制備了 2 α -羥基原人參二醇(表 1 中 W it 'π' ^Φ] 6, Alkaline cleavage of gypenosides and characterization of dammarane-type aglycons by gas chromatography-mass spectrometry. Phytochemical
Analysis. 9 (3)，128-133)。1999年，Cui等報道了從絞股藍中分離鑒定2 α -羥基原人參
醇白勺方^去({k/x^^ 7, Gynostemma pentaphyllum identification of major sapogenins and differentiation from Panax species. European Jo urnal of Pharmaceutical
Sciences. 8 (3)，187-191)。但是，關于2 α -羥基原人參二醇的功能，尤其是明確的藥用功能，目前的研究和報道甚少。2 α -羥基原人參二醇是天然產物，具有一定的臨床使用價值。隨著人們對此類化合物的化學和生物學研究的深入，其分子作用機制將逐步明確，這將進一步推動此類化合物的化學結構修飾和構效關系研究，并有助于提高此類化合物的藥用價值。
發明內容
本發明的目的是提供2 α -羥基原人參二醇在制備抗腫瘤藥物中的應用。本發明提供了 2 α -羥基原人參二醇在制備抗腫瘤藥物中的應用。所述的抗腫瘤藥物可以是抗胰腺癌藥物或者抗血癌藥物。該抗腫瘤藥物可以是針劑或者片劑。本發明提供了一種抑制體外腫瘤細胞增殖的方法，將2α_羥基原人參二醇加入腫瘤細胞的培養液中。所述的腫瘤細胞可以是肝血癌細胞或者胰腺癌細胞。本發明的一個實施例中采用的肝癌細胞是QGY。一般而言，加入2α-羥基原人參二醇的終濃度為 1-100 μ Mo 例如，1-5 μ Μ，1-10 μ Μ，1-20 μ Μ，1-50 μ Μ，5-10 μ Μ，5-20 μ Μ，5-50 μ Μ， 5-100 μ Μ，等等。
本發明還提供了一種抗腫瘤藥物，所述的抗腫瘤藥物的活性成分是2α-羥基原人參二醇。所述的腫瘤可以是胰腺癌或者白血病。本發明的小分子化合物2 α -羥基原人參二醇購自中國科學院藥物研究所，高效液相色譜法測純度，HPLC >98%。本發明的小分子化合物也可以采用各種常規的制備方法制備。例如，采用人工化學合成的方法。利用本發明小分子化合物，通過各種常規篩選方法，可篩選出與2 α-羥基原人參二醇發生相互作用的物質，如受體、抑制劑或拮抗劑等。本發明及其抑制劑、拮抗劑等，當在治療上進行施用(給藥)時，可提供不同的效果。通常，可將這些物質配制于無毒的、惰性的和藥學上可接受的水性載體介質中，其中ρΗ 通常約為5-8，較佳地ρΗ約為6-8，盡管ρΗ值可隨被配制物質的性質以及待治療的病癥而有所變化。配制好的藥物組合物可以通過常規途徑進行給藥，其中包括(但并不限于)肌內、腹膜內、皮下、皮內、或局部給藥。以本發明的2 α-羥基原人參二醇為例，可以將其與合適的藥學上可接受的載體聯用。這類藥物組合物含有治療有效量的化合物和藥學上可接受的載體或賦形劑。這類載體包括(但并不限于)鹽水、緩沖液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其組合。藥物制劑應與給藥方式相匹配。本發明的2 α-羥基原人參二醇可以被制成針劑形式，例如用生理鹽水或含有葡萄糖和其他輔劑的水溶液通過常規方法進行制備。諸如片劑和膠囊之類的藥物組合物， 可通過常規方法進行制備。藥物組合物如針劑、溶液、片劑和膠囊宜在無菌條件下制造。活性成分的給藥量是治療有效量，例如每天約1微克/千克體重-約5毫克/千克體重。此外，本發明的2 α -羥基原人參二醇還可與其他治療劑一起使用。當本發明的2 α -羥基原人參二醇被用作藥物時，可將治療有效劑量的2 α -輕基原人參二醇施用于哺乳動物，其中該治療有效劑量通常至少約10微克/千克體重，而且在大多數情況下不超過約8毫克/千克體重，較佳地該劑量是約10微克/千克體重-約1毫克/千克體重。當然，具體劑量還應考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫師技能范圍之內的。本發明提供了 2α_羥基原人參二醇在制備抗腫瘤藥物中的應用。2α_羥基原人參二醇是天然產物，能夠明顯抑制腫瘤細胞的增殖。本發明的小分子化合物作為新的抗腫瘤藥物或者其輔助成分進行開發，抑瘤效果明顯，綠色環保，將為治療和治愈腫瘤提供了一種新的途徑和手段。
具體實施例方式實驗方法1.細胞復蘇1)從液氮罐中取出凍存管，直接投入37°C溫水中，并不時搖動令其盡快融化。2)從37°C水浴中取出凍存管，用吸管吸出細胞懸液，注入離心管并加入10倍以上培養液，混合后低速離心，棄上清，再重復用培養液洗一次。3)用培養液適當稀釋后，接種培養瓶，放在37°C培養箱靜置培養，次日更換培養液，繼續培養。培養至一定濃度時進行傳代。PANC-I細胞培養在含10%胎牛血清的DMEM
4高糖培養基中，k562細胞培養在含10%胎牛血清的1640培養基中，培養基中含100U/ml青霉素和lOOyg/ml鏈霉素。2.細胞傳代培養每天觀察細胞生長的情況，當細胞在培養瓶中長至約90%匯合時傳代，約每隔 2-4天傳代一次。一瓶傳代成三瓶，或一個25cm2傳代于一個75cm2的培養瓶中。方法1)用IX磷酸緩沖液洗滌細胞一次。2)加入2_3ml胰酶消化液消化，置于37°C培養箱中數分鐘。用手拍打細胞培養瓶， 使細胞分離。3)用含10-15%的Gibico胎牛血清的合適培養基終止胰酶消化。將細胞分裝于新的培養瓶中，繼續培養。3.細胞凍存1)取培養至對數生長期的細胞胰蛋白酶消化，收集于離心管中并計數，離心。2)棄除胰蛋白酶及舊的培養液，加入配置好的凍存培養液(含10% DMS0,40% DMEM和50% Gibico胎牛血清)，凍存液中細胞的最終濃度為0. 5_lX107ml。用吸管輕輕吹打使細胞均勻，然后分裝入無菌凍存管中，每管加1-1. 5ml。3)將凍存管放入凍存盒置-80°C速凍，5小時后移入液氮罐中保存。4.藥物準備2 α -羥基原人參二醇溶于DMSO (二甲基亞砜)，配制成IOOmM或50mM的母液備用。實施例1 MTS法測定2 α -羥基原人參二醇對胰腺癌細胞的生長抑制作用PANC-I細胞(購自中國科學院細胞庫)3000個/孔接種至96孔板，培養M小時使之貼壁后加入2 α -羥基原人參二醇(購自中國科學院上海藥物研究所)，設6個濃度梯度，每個濃度設3個復孔。細胞在37°C，5% CO2條件下培養72小時后，倒掉培養液，用MTS 試劑盒(Promega公司)測定細胞存活率。測試方法為將細胞用無血清培養基洗一遍，按照100 μ 1/well的量加入預先配制好的MTS顯色溶液(IOml無血清培養基中加入2ml溶液1和100 μ 1溶液2，充分混勻)。 將一個沒有細胞的孔設為本底孔，用以校正溶液的背景光吸收。把細胞放入細胞培養箱中繼續培養2 4小時，然后用酶標儀讀取光吸收值(參考波長630-700nm，測定波長490nm)， 計算細胞存活率，以測定孔光吸收值/對照孔光吸收值作為細胞存活率的數值。根據細胞存活率，計算2 α -羥基原人參二醇對PANC-I細胞的IC50值。IC50是指被抑制一半時抑制劑的濃度。這里即為PANC-I細胞數量為對照的一半時2 α -羥基原人參二醇的濃度。IC50的計算一般需要測定5個以上的劑量效應，再通過曲線擬合得到函數計算而得。結果2 α-羥基原人參二醇對PANC-I細胞的IC50值為664 μ Μ。實施例2 2α-羥基原人參二醇對人白血病細胞的生長抑制作用利用cck-8試劑盒(日本同仁化學研究所)檢測。步驟1)將k562細胞(購自ATCC)均勻的種在96孔板里，每孔細胞數為10000個。2)待貼壁，過夜后加藥，加藥Qa -羥基原人參二醇濃度分別為50、16. 67,5. 56、1. 85,0. 62 μ Μ,每個濃度有3個復孔。3)培養48小時，將完全培養基替換成無血清培養基與CCK8的混合物(10 1)， 于37°C培養箱孵育2小時。4)以450nm為測量波長，以650nm為對照波長，于酶標儀上測出讀數。結果2 α -羥基原人參二醇對k562細胞的IC50值為4. 77 μ Μ。
權利要求
1.2α-羥基原人參二醇在制備抗腫瘤藥物中的應用.
2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的腫瘤包括胰腺癌或者白血病。
3.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的抗腫瘤藥物是抗胰腺癌藥物。
4.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的抗腫瘤藥物是抗白血病藥物。
5.如權利要求1所述的應用，其特征在于，該抗腫瘤藥物為針劑或者片劑。
6.一種抑制體外腫瘤細胞增殖的方法，其特征在于，將2 α -羥基原人參二醇加入腫瘤細胞的培養液中。
7.如權利要求5所述的方法，其特征在于，所述的腫瘤細胞是胰腺癌細胞或者白血病細胞。
8.如權利要求5所述的方法，其特征在于，加入2α_羥基原人參二醇的終濃度為 1-100 μ Mo
9.一種抗腫瘤藥物，其特征在于，所述的抗腫瘤藥物的活性成分是2 α -羥基原人參二
10.如權利要求9所述的抗腫瘤藥物，其特征在于，所述的腫瘤是胰腺癌或者白血病。
全文摘要
本發明屬于化工領域及醫藥領域，涉及2α-羥基原人參二醇在制備抗腫瘤藥物中的應用。本發明提供了2α-羥基原人參二醇在制備抗腫瘤藥物中的應用，所述的腫瘤細胞包括白血病或者胰腺癌。2α-羥基原人參二醇在屬于天然產物，具有一定的臨床使用價值。本發明的小分子化合物作為新的抗腫瘤藥物或者其輔助成分進行開發，抑瘤效果明顯，綠色環保，將為治療和治愈腫瘤提供了一種新的途徑和手段。
文檔編號A61P35/02GK102397280SQ20111036215
公開日2012年4月4日 申請日期2011年11月15日 優先權日2011年11月15日
發明者余龍, 劉祖龍, 唐麗莎, 胡立宏 申請人:復旦大學