專利名稱：一種從紫花苜蓿中提取與分離總黃酮的方法
技術領域：
本發明屬于總黃 酮提取技術領域，尤其涉及一種從紫花苜蓿中提取與分離總黃酮的方法。
背景技術：
紫花苜蓿是一種多年生豆科植物，具有適應性和生物固氮能力強、產草量高、品質好、適口性好、營養豐富、易于家畜消化等特點，有“牧草之王”美譽。紫花苜蓿中含有多種生物活性成分，如苜蓿皂苷、苜蓿黃酮、苜蓿多糖等。研究表明，黃酮類有藥用價值的化合物很多，這些化合物可用于防治心腦血管疾病；許多黃酮類成分具有止咳、祛痰、平喘及抗菌的活性，同時具有護肝、解肝毒、抗真菌、治療急慢性肝炎、肝硬化及抗自由基和抗氧化作用。除此之外，黃酮類化合物還具有植物雌激素樣作用，畜牧業動物生產上，黃酮類化合物的應用能顯著提高動物生產性能，提高動物機體抗病力，改善動物機體免疫機能。目前，人們對大豆、銀杏葉等植物中的黃酮類化合物的提取和純化做了大量細致的研究，而對紫花苜蓿該類化合物的提取和純化的研究很少。據研究，適時收獲的苜蓿莖葉干物質中，黃酮含量約為O. 53%。可能由于苜蓿黃酮的種類、分子結構等與其他種類植物不同，故國內外對紫花苜蓿的提取與純化研究較少，而且沿用傳統的工藝提取苜蓿黃酮時，得率少，純化困難，研究報道所得紫花苜蓿提取物中黃酮含量僅為13. 69%，限制了苜蓿黃酮在生廣中的應用和其功能的進一步研究。
發明內容
本發明提供了一種從紫花苜蓿中提取與分離總黃酮的方法，旨在解決現有技術提供的提取苜蓿黃酮的方法，過程復雜，總黃酮產率低，純化困難，生產成本較高，原料利用率較低的問題。本發明的目的在于提供一種從紫花苜蓿中提取與分離總黃酮的方法，該方法包括以下步驟步驟一，將紫花苜蓿粉碎，按照固液比I : 25-35的比例加入去離子水，將水溶液加熱至90-100°C，然后冷卻至30-50°C以下，用堿溶液調節pH至8. 5-9. 5，沸水浴煮30-40min，并不斷攪拌，過濾水溶液得到濾渣，將濾渣按照I : 10-20加沸騰的去離子水，經攪拌、過濾處理后獲得濾液；步驟二，將濾液加鹽酸調節pH為2. 1-2. 3，靜置至濾液的上層完全澄清，除去上層清液，經過濾處理后獲得沉淀物，用去離子水將沉淀物沖洗至無色，得到酸性沉淀物；步驟三，用55-65 %乙醇溶解酸性沉淀物，經過濾處理后收集濾液，將濾液減壓濃縮為稠膏；步驟四，將大孔樹脂分別用90%乙醇浸泡48h，用去離子水沖洗至無醇味，用4%鹽酸溶液浸泡4h，用去離子水沖洗至中性，用4% NaOH浸泡4h，用去離子水沖洗至中性，在4°C的條件下密封保存；
步驟五，稠膏按照4g/150ml的比例溶于60%乙醇，再按照3 : I比例加入去離子水，分別將PH調至5. 1-5. 5，按照lg/10ml的比例將所得樣液加入到大孔樹脂中，靜態吸附12h,每隔2h輕微搖動一次；步驟六，將吸附樣液后的大孔樹脂用去離子水沖洗至無色，再用55-65%乙醇將大孔樹脂沖洗至沖洗液為無色，然后按照lg/10ml的比例加入89-92%乙醇溶液，密封后在25-35°C條件下，在搖床中以50轉/分的速度搖動12h，再將解吸液濃縮干燥得到棕黃色提取物。進一步，步驟一中的堿溶液為質量濃度為4%的NaOH溶液。進一步，吸附所用的大孔樹脂分別為海D101、DM130。本發明提供的從紫花苜蓿中提取及分離總黃酮的方法，將紫花苜蓿用粉碎機粉碎，加入去離子水，用NaOH溶液調節pH，90--10(TC溫度下提取數次獲得濾液；將濾液加鹽酸調節PH至2. 1-2. 3，靜止至沉淀完全下沉，過濾獲得沉淀，并用去離子水將沉淀沖洗至沖洗液為無色；將沉淀用55-65%的乙醇溶液充分溶解，過濾后收集濾液，將濾液減壓濃縮成·稠膏；將稠膏溶于60%乙醇，將此溶液加入去離子水，用稀NaOH溶液將pH調節至5. 1-5. 5，加入上樣液；將吸附后的大孔樹脂用去離子水沖洗至無色，再用55-65%乙醇將大孔樹脂進行沖洗，至沖洗液為無色，加入89-92%乙醇溶液解吸附，將解吸液濃縮干燥，得到黃酮含量在25-30%的棕黃色提取物；該方法成本低廉、操作簡單、實用性強，具有較強的推廣與應用價值。
圖I是本發明實施例提供的從紫花苜蓿中提取與分離總黃酮的方法的實現流程圖。
具體實施例方式為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合附圖及實施例，對本發明進行進一步的詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定發明。圖I示出了本發明實施例提供的從紫花苜蓿中提取與分離總黃酮的方法的實現流程。該方法包括以下步驟在步驟SlOl中，將紫花苜蓿粉碎，按照固液比I : 25-35的比例加入去離子水，將水溶液加熱至90-100°C，然后冷卻至30-50°C以下，用堿溶液調節pH至8. 5-9. 5，沸水浴煮30-40min，并不斷攪拌，過濾水溶液得到濾渣，將濾渣按照I : 10-20加沸騰的去離子水，經攪拌、過濾處理后獲得濾液；在步驟S102中，將濾液加鹽酸調節pH為2. 1-2. 3，靜置至濾液的上層完全澄清，除去上層清液，經過濾處理后獲得沉淀物，用去離子水將沉淀物沖洗至無色，得到酸性沉淀物；在步驟S103中，用55-65%乙醇溶解酸性沉淀物，經過濾處理后收集濾液，將濾液減壓濃縮為稠膏；
在步驟S104中，將大孔樹脂分別用90%乙醇浸泡48h，用去離子水沖洗至無醇味，用4%鹽酸溶液浸泡4h,用去離子水沖洗至中性,用4% NaOH浸泡4h,用去離子水沖洗至中性，在4°C的條件下密封保存；在步驟S105中，稠膏按照4g/150ml的比例溶于60%乙醇，再按照3 I比例加入去離子水，分別將PH調至5. 1-5. 5，按照lg/10ml的比例將所得樣液加入到大孔樹脂中，靜態吸附12h，每隔2h輕微搖動一次；在步驟S106中，將吸附樣液后的大孔樹脂用去離子水沖洗至無色，再用55-65%乙醇將大孔樹脂沖洗至沖洗液為無色，然后按照lg/10ml的比例加入89-92%乙醇溶液，密封后在25-35°C條件下，在搖床中以50轉/分的速度搖動12h，再將解吸液濃縮干燥得到棕黃色提取物。在本發明實施例中，步驟SlOl中的堿溶液為質量濃度為4%的NaOH溶液。在本發明實施例中，吸附所用的大孔樹脂分別為海D101、DM130。 下面結合附圖及具體實施例對本發明的應用原理作進一步描述。本發明實施例提供的從紫花苜蓿中提取與分離總黃酮的方法，該方法包括以下步驟將紫花苜蓿粉碎，按照固液比I : 25-35的比例加入去離子水，水溶液加熱至90-100°C，然后冷卻至30-50°C以下，分別用堿溶液調節pH至8. 5-9. 5，沸水浴煮30_40min，并不斷攪拌，然后過濾；將濾渣按照I : 10-20加沸騰的去離子水，然后攪拌、過濾，到得濾液；將所述濾液加鹽酸調節pH2. 1-2. 3，靜置至上清液完全澄清，棄上清，過濾沉淀物，用去離子水將沉淀物沖洗至無色，得到酸沉淀物；將沉淀物用55-65%乙醇溶解沉淀物；過濾，收集濾液，減壓濃縮為稠膏；將大孔樹脂分別用90%乙醇浸泡48h，用去離子水沖洗至無醇味，用4%鹽酸溶液浸泡4h，用去離子水沖洗至中性，用4% NaOH浸泡4h，用去離子水沖洗至中性，在4°C的條件下保存密封備用；將制備的稠膏按照4g/150ml的比例溶于60%乙醇，然后按照3 I比例加入去離子水，分別將PH調至5. 1-5. 5，按照lg/10ml的比例加入上樣液，吸附所用的大孔樹脂分別為 海D101、DM130。靜態吸附12h，每隔2h輕微搖動一次，使大孔樹脂充分吸附；將吸附后的大孔樹脂用去離子水沖洗至無色，然后用55-65%乙醇將大孔樹脂進行沖洗，至沖洗液為無色，最后按照lg/10ml的比例加入89-92%乙醇溶液，密封，25-35°C于搖床中50轉/min，12h，將解吸液濃縮干燥，得到棕黃色提取物。本發明實施例提供的從紫花苜蓿中提取及分離總黃酮的方法，將紫花苜蓿用粉碎機粉碎，加入去離子水，用NaOH溶液調節pH，90--10(TC溫度下提取數次獲得濾液；將濾液加鹽酸調節PH至2. 1-2. 3，靜止至沉淀完全下沉，過濾獲得沉淀，并用去離子水將沉淀沖洗至沖洗液為無色；將沉淀用55-65%的乙醇溶液充分溶解，過濾后收集濾液，將濾液減壓濃縮成稠膏；將稠膏溶于60 %乙醇，將此溶液加入去離子水，用稀NaOH溶液將pH調節至5. 1-5. 5，加入上樣液；將吸附后的大孔樹脂用去離子水沖洗至無色，再用55-65%乙醇將大孔樹脂進行沖洗，至沖洗液為無色，加入89-92%乙醇溶液解吸附，將解吸液濃縮干燥，得到黃酮含量在25-30%的棕黃色提取物；該方法成本低廉、操作簡單、實用性強，具有較強的推廣與應用價值。以上所述僅為本發明的較佳實施例而已，并不用以限制本發明，凡在本發明的精 神和原則之內所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。
權利要求
1.一種從紫花苜蓿中提取與分離總黃酮的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟 步驟一，將紫花苜蓿粉碎，按照固液比I : 25-35的比例加入去離子水，將水溶液加熱至90-100°C，然后冷卻至30-50°C以下，用堿溶液調節pH至8. 5-9. 5，沸水浴煮30_40min，并不斷攪拌，過濾水溶液得到濾渣，將濾渣按照I : 10-20加沸騰的去離子水，經攪拌、過濾處理后獲得濾液； 步驟二，將濾液加鹽酸調節PH為2. 1-2. 3，靜置至濾液的上層完全澄清，除去上層清液，經過濾處理后獲得沉淀物，用去離子水將沉淀物沖洗至無色，得到酸性沉淀物； 步驟三，用55-65 %乙醇溶解酸性沉淀物，經過濾處理后收集濾液，將濾液減壓濃縮為稠膏； 步驟四，將大孔樹脂分別用90%乙醇浸泡48h,用去離子水沖洗至無醇味,用4%鹽酸溶液浸泡4h,用去離子水沖洗至中性,用4% NaOH浸泡4h,用去離子水沖洗至中性,在4°C的條件下密封保存； 步驟五，稠膏按照4g/150ml的比例溶于60%乙醇，再按照3 I比例加入去離子水，分別將PH調至5. 1-5. 5，按照lg/10ml的比例將所得樣液加入到大孔樹脂中，靜態吸附12h，每隔2h輕微搖動一次； 步驟六，將吸附樣液后的大孔樹脂用去離子水沖洗至無色，再用55-65%乙醇將大孔樹脂沖洗至沖洗液為無色，然后按照lg/10ml的比例加入89-92%乙醇溶液，密封后在25-35°C條件下，在搖床中以50轉/分的速度搖動12h，再將解吸液濃縮干燥得到棕黃色提取物。
2.如權利要求I所述的方法，其特征在于，步驟一中的堿溶液為質量濃度為4%的NaOH溶液。
3.如權利要求I所述的方法，其特征在于，吸附所用的大孔樹脂分別為海D101、DM130。
全文摘要
本發明屬于總黃酮提取技術領域，提供了一種從紫花苜蓿中提取及分離總黃酮的方法，將紫花苜蓿用粉碎機粉碎，加入去離子水，用堿溶液調節pH，提取數次獲得濾液；將濾液加鹽酸調節pH，過濾獲得沉淀，用去離子水將沉淀沖洗至沖洗液為無色；將沉淀用55-65％乙醇溶液溶解，過濾后收集濾液，將濾液減壓濃縮成稠膏；將稠膏溶于60％乙醇，加入去離子水后，用稀NaOH溶液將pH調節，加入大孔樹脂吸附；將吸附后的大孔樹脂用去離子水沖洗至無色，再用55-65％乙醇將大孔樹脂沖洗至無色，加入89-92％乙醇溶液解吸附，將解吸液濃縮干燥，得到含黃酮的棕黃色提取物；該方法成本低廉、操作簡單，具有較強的推廣與應用價值。
文檔編號A61K36/48GK102697837SQ20121022312
公開日2012年10月3日 申請日期2012年7月2日 優先權日2012年7月2日
發明者嚴學兵, 史瑩華, 文開新, 杜紅旗, 樊文娜, 王成章 申請人:河南農業大學