TNFα相關疾病的治療的制作方法

專利名稱：TNF α相關疾病的治療的制作方法
TNF a相關疾病的治療本申請是申請日為2003年7月18日、申請號為03822455. O、發明名稱為“TNF a相關疾病的治療”的發明專利申請的分案申請。相關串請本申請要求了 2002年7月19日申請的在先申請的美國臨時申請登記號No. 60/397275的優先權。本申請還要求了 2002年9月16日申請的在先申請的美國臨時申請登記號No. 60/411081，和2002年10月10日申請的在先申請美國臨時申請登記號No. 60/417490的優先權。另外，本申請涉及美國專利Nos. 6090382，6258562和6509015。本申請還涉及2001年3月7日申請的美國專利申請登記號No. 09/801185 ;2002年11月22 日申請的美國專利申請登記號No. 10/302356 ;2002年6月2日申請的美國專利申請登記號No. 10/163657 ；2002年4月26日申請的美國專利申請登記號No. 10/133715。本申請涉及下面的美國實用新型申請標題為“使用TNFa抑制劑對TNFa-相關疾病的治療”(Attorney Docket No. BPI-187)，標題為“使用TNF a抑制劑對脊柱關節病的治療”(Attorney Docket No. BPI-188)，標題為“使用TNF a抑制劑對肺部疾病的治療”(Attorney Docket No. BPI-189)，標題為“使用TNF a抑制劑對冠狀疾病的治療” (Attorney Docket No. BPI-190)，標題為“使用TNF a抑制劑對代謝失調的治療” (Attorney Docket No. BPI-191)，標題為“使用TNFa抑制劑對貧血的治療” (AttorneyDocket No. BPI-192)，標題為“使用TNF a抑制劑對疼痛的治療”(Attorney DocketNo.BPI-193)，標題為“使用 TNFa 抑制劑對肝病的治療”(Attorney Docket No. BPI-194)，標題為“使用TNFa抑制劑對皮膚和甲疾病的治療”(Attorney Docket No. BPI-195)，標題為“使用TNFa抑制劑對脈管炎的治療”(Attorney Docket No. BPI-196)，和標題為“使用TNFa抑制劑對TNF a-相關疾病的治療”(Attorney Docket No. BPI-197)，所有這些申請都是在偶數日申請的。這些專利和專利申請的全部內容在這里引作參考。
背景技術：
細胞因子，例如白介素-I (IL-I)和腫瘤壞死因子(TNF)是各種細胞例如單核細胞和巨噬細胞產生的分子，鑒定它們是炎癥病變的介質。細胞因子，包括TNF，調節作為損傷或感染的結果而發生的炎癥反應的強度和持續時間。TNFa (也稱作TNF)在各種人疾病和病癥的病理生理學中涉及，包括膿毒癥，感染，自身免疫疾病，移植排斥和移植物-抗-宿主疾病(參見，例如，Moeller等(1990) Cytokine 2 :162 ;美國專利No. 5，231，024，專利權屬于Moeller 等；Moeller, A.等人的歐洲專利公開No. 260 610 BI ；Vasilli (1992) Annu. Rev.Immunol. 10 :411 ；Tracey 和 Cerami(1994)Annu. Rev. Med. 45 :491)。發明概沭有著以安全而有效的方式治療其中TNFa活性是有害的之TNFa-相關病癥的需求。本發明包括安全而有效的方式治療其中TNFa活性是有害的之TNF a-相關病癥的方法。本發明的一個方面描述了對患者治療TNF a-相關病癥的方法，包括對患者施用治療有效量的中和性高親和性TNFa抗體，以治療所述病癥。
在一個實施方案中，TNF a-相關病癥是脊柱關節病，與肺有關的病癥，冠心病，代謝病癥，貧血，疼痛，肝臟病癥，皮膚病癥，指甲病癥，或脈管炎。在另一個實施方案中，TNF a -相關病癥是與年齡有關的惡病質，早老性癡呆，腦水腫，炎性腦損傷，慢性疲勞綜合征，皮肌炎，藥物反應，脊髓之內和/或周圍的水腫，家族周期性發熱，Felty' s綜合征，纖維化，腎小球性腎病(例如鏈球菌感染后腎小球腎炎或IgA腎病)，假體松弛，顯微多脈管炎，混合型結締組織病癥，多發性骨髓瘤，癌癥和惡病質，多器官失調，脊髓發育不良綜合征，orchitism骨質溶解，胰腺炎，包括急性，慢性，和胰腺膿腫，牙周病多肌炎，進行性腎衰竭，假痛風，壞疽性膿皮病，復發性多軟骨炎，風濕性心臟病，肉樣瘤病，硬化膽管炎，中風，胸腹主動脈動脈瘤修補(TAAA)，TNF受體相關周期性綜合征(TRAPS)，與黃熱病疫苗接種相關的綜合征，與耳，慢性耳炎，或兒科耳炎相關的炎性疾病。在本發明的另一個實施方案中，TNFa -相關病癥是克隆氏病-相關病癥，少年關節炎/斯提耳氏病(JRA)，葡萄膜炎，坐骨神經痛，前列腺炎，子宮內膜異位，脈絡膜新血管生成，狼瘡，斯耶格倫氏綜合征，和濕黃斑變性。
在一個實施方案中，本發明的抗體是分離的人抗體，或者其抗原-結合部分，其以1x10_8M或更小的Kd和IxKT3s-1或更小的Ktjff速率常數從人TNF a上離解，這兩個常數都通過表面等離子共振來測定，并且中和人TNF a細胞毒性，在標準體外L929分析中IC5tl是IxKT7M或更小。在本發明的另一個實施方案中，抗體是分離的人抗體，或者其抗原-結合部分，根據表面等離子共振測定，其以lxlO、—1或更小的Ktjff速率常數從人TNF a上離解；有包括SEQ ID NO :3的氨基酸序列，或在1，4，5，7或8位通過一個丙氨酸取代或者在1，3，4，6，7，8和/或9位通過1-5個保守氨基酸取代而從SEQ ID NO 3修飾的氨基酸序列的輕鏈⑶R3結構域；并且有包括SEQ ID NO :4的氨基酸序列，或在2，3，4，5，6，8，9，10或11位通過一個丙氨酸取代或者在2，3，4，5，6，8，9，10，11和/或12位通過1_5個保守氨基酸取代而從SEQ ID NO 4修飾的氨基酸序列的重鏈⑶R3結構域。在本發明的另一個實施方案中，抗體是分離的人抗體，或者其抗原-結合部分，輕鏈可變區(LCVR)包括SEQ ID NO 1的氨基酸序列并且重鏈可變區(HCVR)包括SEQ ID NO 2的氨基酸序列。在本發明的另一個實施方案中，所述抗體是D2E7，也稱作HUMIRA 或adal imumab。本發明的另一方面包括治療TNF a-相關病癥患者的方法，包括對患者施用治療有效量的TNFa抗體，或者其抗原-結合片段，其中抗體以1x10_8M或更小的Kd和lxl0_3 s—1或更小的Ktjff速率常數從人TNF a上離解，這兩個常數都通過表面等離子共振來測定，并且中和人TNF a細胞毒性，在標準體外L929分析中IC5tl是1x10_7M或更小，如此TNF a -相關病癥得以治療。本發明的另一方面包括治療TNFa -相關病癥患者的方法，包括施用治療有效量的TNFa抗體，或者其抗原-結合部分，根據表面等離子共振測定，其以IxKT3s-1或更小的Koff速率常數從人TNF a上離解；有包括SEQ ID NO :3的氨基酸序列，或在1，4，5，7或8位通過一個丙氨酸取代或者在1，3，4，6，7，8和/或9位通過1-5個保守氨基酸取代而從SEQID NO 3修飾的氨基酸序列的輕鏈⑶R3結構域；并且有包括SEQ ID NO 4的氨基酸序列，或在2，3，4，5，6，8，9，10或11位通過一個丙氨酸取代或者在2，3，4，5，6，8，9，10，11和/或12位通過1-5個保守氨基酸取代而從SEQ ID NO :4修飾的氨基酸序列的重鏈⑶R3結構域，如此TNFa-相關病癥得以治療。本發明的另一方面包括治療TNF a -相關病癥患者的方法，包括施用治療有效量的TNFa抗體，或者其抗原-結合片段，其具有包括SEQ ID NO :I的氨基酸序列的輕鏈可變區(LCVR)和包括SEQ ID NO 2的氨基酸序列的重鏈可變區(HCVR)，如此TNF a -相關病癥得以治療。在一個實施方案中，所述TNF a抗體是D2E7。在另一個實施方案中，TNF a抗體與至少一種另外的治療藥物一起施用。本發明的另一方面的特征是對TNF a -相關病癥人患者抑制人TNF a活性的方法，包括對患者施用治療有效量的TNFa抗體，或者其抗原-結合片段，其中抗體以1x10_8M或更小的Kd和IxKT3s-1或更小的Ktjff速率常數從人TNF a上離解，這兩個常數都通過表面等離子共振來測定，并且中和人TNF a細胞毒性，在標準體外L929分析中IC5tl是1x10_7M或更 小，在一個實施方案中，所述TNFa抗體或者其抗原-結合片段是D2E7。本發明的另一方面包括治療TNF a-相關病癥患者的方法，包括對患者施用治療有效量的D2E7或者其抗原-結合片段，如此疾病得以治療。本發明的還有另一方面包括治療TNF a-相關病癥患者的方法，包括對患者施用治療有效量的D2E7或者其抗原-結合片段，如此疾病得以治療。在本發明的一個實施方案中，D2E7(也稱作HUMIRA 或adalimumab)與至少一種另外的治療藥物一起施用。本發明的另一方面是包括含有TNFa抗體，或者其抗原-結合片段，和藥學可接受載體的藥物組合物；和對患者施用用以治療TNF a-相關病癥患者的TNFa抗體藥物組合物的說明書的試劑盒。在一個實施方案中，TNFa抗體，或者其抗原-結合部分是D2E7(HUMERA )。本發明的詳細描述本發明涉及治療其中TNF a活性，例如人TNF a活性，是有害的之TNF a -相關病癥患者的方法。該方法包括對患者施用治療有效量的TNF a抑制劑，使得TNF a -相關病癥得以治療。本發明還涉及其中與另一種治療藥物一起施用TNFa抑制劑來治療TNFa-相關病癥的方法。本發明的其他方面涉及用抗體和抗體片段，和含有TNFa抑制劑和藥物可接受載體的藥物組合物治療TNF a -相關病癥的治療方法。定義為了使本發明更容易被理解，首先定義一些術語。這里使用的術語“人TNF a ”(這里縮寫為hTNF a，或簡稱hTNF)，意指以17kD分泌形式和26kD膜締合形式存在的人細胞因子，其生物活性形式由非共價結合的17kD分子的三聚體構成。例如 Pennica，D.，等，(1984) Nature 312 :724-729 ;Davis，J. M.，等，(1987)Biochemisty 26 :1322-1326 ;和 Jones, E. Y.，等，(1989)Nature 338 :225-228 中進一步描述了 hTNF a的結構。術語人TNF a意在包括重組人TNF a (rhTNF a )，其能通過標準重組方法來制備或者能商業購得(R&D Systems,Catalog No. 210-TA,Minneapolis,MN)。TNFa也稱作TNF。術語“TNF a抑制劑”包括抑制TNF a的物質。TNF a抑制劑的例子包括抑制TNF a的物質。TNFa抑制劑的例子包括etanercept (Enbrel , Amgen),英夫單抗(Remicade ,Johnson and Johnson),人抗-TNF 單克隆抗體(D2E7/HUMIRA , Abbott Laboratories),CDP 571 (Celltech)，和CDP870 (Celltech)，和其他抑制TNFa活性的化合物，這樣，當對患有其中TNFa活性是有害的病癥或者有患其中TNFa活性是有害的病癥危險的患者施用時，病癥得以治療。在一個實施方案中，TNFa抑制劑是抑制TNFa活性的不包括etanercept和英夫單抗的一種化合物。在另一個實施方案中，使用本發明的TNFa抑制劑治療TNFa-相關病癥，這在II章節更詳細地描述。在一個實施方案中，使用不包括社&1^1^印丨和英夫單抗的1即[1抑制劑治療TNF a-相關病癥。在另一個實施方案中，使用不包括的&1^代印丨和英夫單抗的1即0抑制劑治療類風濕性脊柱炎。該術語還包括這里描述的以及美國專利Nos. 6，090，382 ;6，258，562 ;6，509，015，和美國專利申請登記號Nos.09/801185和10/302356中描述的那些各種抗-TNFa人抗體和抗體部分。這里使用的術語“抗體”意指由四個多肽鏈，兩個重鏈(H)和兩個輕鏈(L)通過二硫鍵相互連接構成的免疫球蛋白分子。每條重鏈由一個重鏈可變區(這里縮寫為HCVR或 VH)和一個重鏈恒定區構成。重鏈恒定區由三個結構域CH1，CH2和CH3構成。每條輕鏈由一個輕鏈可變區(這里縮寫為LCVR或VL)和一個輕鏈恒定區構成。輕鏈恒定區由一個結構域CL構成。VH和VL區可以進一步再分為高變區，稱作互補決定區(CDR)，點綴著更保守的稱作構架區(FR)的區。各VH和VL由三個CDRs和四個FRs構成，從氨基末端至羧基末端以下面的順序排列FR1, CDRl, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4。在美國專利 Nos. 6，090，382 ；6，258，562 ;和6，509，015，和美國專利申請登記號Nos. 09/801185和10/302356中進一步詳細描述本發明的抗體，這些專利文獻全部在此弓I作參考。這里使用的術語抗體的“抗原-結合部分”(或簡稱“抗體部分”)，指保留與抗原(例如hTNF a)特異性結合能力的抗體的一個或幾個片段。已經證明抗體的抗原-結合功能能通過全長抗體的片段來實現。術語抗體的“抗原-結合部分”包括的結合片段的例子包括(1奸&13片段，由￥1^11，(^和011結構域構成的一價片段；出汗妯')片段，由在鉸鏈區通過二硫鍵連接的兩個Fab片段構成的二價片段；(iii)由VH和CHl結構域構成的Fd片段;(iv)由抗體的一個臂的VL和VH結構域構成的Fv片段，(V) dAb片段(Ward等，(1989)Nature 341 :544-546)，其由一個VH結構域構成；和(vi)分離的互補決定區(CDR)。此外，雖然Fv片段的兩個結構域，VL和VH，由不同的基因編碼，但是使用重組方法，通過合成的接頭能將它們連接，所述接頭使得它們成為一個蛋白質鏈，其中VL和VH區配對形成一價分子(已知為單鏈 Fv (scFv);參見，例如，Bird 等(1988) Science 242 :423-426 ;和 Huston等(1988)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883)。這樣的單鏈抗體也要包括在術語抗體的“抗原-結合部分”中。單鏈抗體的其他形式，例如二價抗體(diabody)也包括在內。二價抗體是二價的雙特異性抗體，其中VH和VL結構域在一個多肽鏈上表達，但是使用太短以至于不能在同一鏈上兩個結構域之間配對的接頭，從而使得結構域與另一個鏈的互補結構域配對并且產生兩個抗原結合位點(參見，例如，Holliger, P.,等,(1993)Proc. Natl.Acad. Sci. USA 90 :6444-6448 ；Poljak,R. J.，等，(1994) Structure 2 :1121-1123)。在美國專利 Nos. 6，090，382 ;6，258，562 ;和 6，509，015，和美國專利申請登記號 Nos. 09/801185 和10/302356中進一步詳細描述本發明的抗體部分，這些專利文獻全部在此引作參考。通過重組DNA技術，或者通過完整免疫球蛋白的酶促或化學裂解產生結合片段。結合片段包括Fab，Fab' , F(ab/ )2，Fabc，Fv，單鏈和單鏈抗體。除了 “雙特異性”或“雙功能”免疫球蛋白或抗體外，認為免疫球蛋白或抗體具有其各自相同的結合位點。“雙特異性”或“雙功能抗體”是人造雜合抗體，具有兩個不同的重鏈/輕鏈對和兩個不同的結合位點。雙特異性抗體能通過各種各樣的方法制備，包括雜交瘤的融合或Fab'片段的連接。參見，例如，Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Tmmuno1. 79 :315-321 (1990) ;Kostelny 等，J.Immunol. 148，1547-1553(1992)。這里使用的“保守的氨基酸取代”是其中一個氨基酸殘基被具有相似側鏈的另一個氨基酸殘基置換的取代作用。本領域已經確定具有相似側鏈的氨基酸殘基家族，包括堿性側鏈(例如賴氨酸，精氨酸，組氨酸)，酸性側鏈(例如天冬氨酸，谷氨酸)，不帶電荷的極性側鏈(例如甘氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺，絲氨酸，蘇氨酸，酪氨酸，半胱氨酸)，非極性側鏈(例如丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸，異亮氨酸，脯氨酸，苯丙氨酸，蛋氨酸，色氨酸)，3 -支化側鏈(例如蘇氨酸，纈氨酸，異亮氨酸)和芳香側鏈(例如酪氨酸，苯丙氨酸，色氨酸，組氨酸)。 這里使用的術語“人抗體”意在包括具有從人種系免疫球蛋白序列衍生的可變區和恒定區的抗體。本發明的人抗體可以包括例如CDRs并且特別是CDR3中不是人種系免疫球蛋白序列編碼的氨基酸殘基(例如通過體外隨機或點-特異性誘變導入的突變或者通過體內體細胞突變)。然而，這里使用的術語“人抗體”不是意在包括其中從另一個哺乳動物種系例如小鼠衍生的CDR序列移植到人構架序列中的抗體。這里使用的術語“重組人抗體”意在包括通過重組方法制備，表達，產生或分離的所有的人抗體，例如使用重組表達載體轉染到宿主中表達的抗體(下文進一步描述)，從重組體分離的抗體，組合人抗體庫(下文進一步描述)，從對于人免疫球蛋白基因是轉基因的動物(例如小鼠)分離的抗體(參見，例如，Taylor，L.D.等，(1992)Nucl. Acids Res. 20 6287)或者通過包括將人免疫球蛋白基因序列剪接成其他DNA序列的任何其他方法制備的，表達的，產生的或分離的抗體。這樣的重組人抗體具有從人種系免疫球蛋白序列衍生的可變區和恒定區。但是在一些實施方案中，讓這樣的人抗體體外誘變(或者，當使用對于人Ig序列是轉基因的動物時，體內體細胞誘變)，因此重組抗體的VH和VL區的氨基酸序列是當從人種系VH和VL序列衍生或者與之有關時，在體內人抗體種庫中天然不存在的序列。這里使用的“分離的抗體”意指基本上沒有具有不同的抗原特異性的其他抗體的抗體(例如，特異性結合hTNF a的分離的抗體基本上沒有與除了 hTNF a之外的抗原特異性結合的抗體)。但是特異性結合hTNF a的分離的抗體可能與其他抗原有交叉反應，例如來自其他物種的TNFa分子(下面進一步詳細討論)。然而，分離的抗體可以基本上沒有其他細胞材料和/或化學品。這里使用的“中和抗體”(或者"中和hTNFa活性的抗體)意指其與hTNFa的結合導致hTNF a的生物活性的抑制的抗體。通過測定hTNF a活性的一個或幾個指征，例如hTNF a -誘導的細胞毒性(體外或體內)，hTNF a -誘導的細胞激活和hTNF a與hTNF a受體的結合，能評價hTNF a的生物活性的抑制。通過本領域公知的體外或體內分析的幾種標準方法的一個或幾個能評價hTNF a生物活性的抑制劑(參見美國專利No. 6，090, 382)。優選地，通過L929細胞的hTNF a -誘導的細胞毒性的抑制作用評價抗體中和hTNF a活性的能力。作為hTNF a活性的附加的或可選的參數,能評價作為hTNF a -誘導的細胞激活的量度的抗體抑制HUVEC上hTNF a -誘導的ELAM-I表達的能力。
這里使用的術語“表面等離子共振”指通過例如使用BIAcore系統(PharmaciaBiosensor AB, Uppsala, Sweden and Piscataway, NJ),檢測生物傳感器基質中蛋白質濃度來分析實時生物特異性相互作用的光學現象。有關進一步描述，參見美國專利6, 258, 562 的實施例 I 和 Jonsson 等(1993)Ann. Biol. Clin. 51 :19 ; Jonsson等，(1991)Biotechniques 11 :620-627 ；Johnsson 等(1995)J. Mol. Recognit. 8 125 ;和 Johnnson 等
(1991)Anal. Biochem. 198 :268。這里使用的術語意指抗體從抗體/抗原復合體離解的速度常數。這里使用的術語“Kd”意指特定抗體-抗原的離解常數。這里使用的術語“IC5(I ”意指抑制感興趣的生物學終點，例如中和細胞毒性活性，所需的抑制劑的濃度。 這里使用的術語“核酸分子”意在包括DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是單鏈或雙鏈的，但是優選雙鏈DNA。這里針對結合hTNF a的抗體或抗體部分(例如，VH，VL,⑶R3)的編碼核酸所使用的術語“分離的核酸分子”意指核酸分子，其中編碼抗體或抗體部分的核苷酸序列沒有編碼與除了 hTNF a之外的抗原結合的抗體或抗體部分的其他核苷酸序列，其他序列天然地可以在人基因組DNA核酸的側翼。這樣，例如，本發明編碼抗-hTNF a抗體的VH區的分離的核酸不包含編碼與除了 hTNFa之外的抗原結合的其他VH區的其他序列。這里使用的術語“載體”意指能轉送它所連接的另一個核酸的核酸分子。載體的一個類型是“質粒”，其指其中可以連接另外的片段的環狀雙鏈DNA環。另一種類型的載體是病毒載體，其中另外的DNA片段可以被連接到病毒基因組中。一些載體在引入它們的宿主細胞中能自主復制(例如，具有細胞復制起點的細菌載體和附加型哺乳動物載體)。其他載體(例如，非附加型哺乳動物載體)在導入宿主細胞時能整合到宿主細胞的基因組中。此外，一些載體能指示它們所操作連接的基因表達。這樣的載體在這里稱作“重組表達載體”(或者簡單地，“表達載體”)。一般情況下，重組DNA技術中使用的表達載體經常是質粒形式。在本說明書中，“質粒”和“載體”可以互換使用，因為質粒是最常用的載體形式。但是，本發明意在包括表達載體的這樣的其他形式，例如病毒載體(例如，復制缺陷逆轉錄病毒，腺病毒和腺-相關病毒)，它們起著同等的功能。這里使用的術語“重組宿主細胞”(或者簡單地“宿主細胞”)，意指其中導入重組表達載體的細胞。應該理解這些術語意在不僅指特定的受者細胞，而且還指這樣的細胞的后代。因為由于突變或環境影響而在后續世代中可能發生一些修飾，事實上這樣的后代可能與親代細胞不同，但是仍然包括在這里使用的術語“宿主細胞”的范圍內。這里使用的術語“給藥”指施用一種物質(例如，一種抗-TNFa抗體)以實現治療目的(例如，治療TNF a -相關病癥)。這里使用的術語“兩周一次的給藥方案”，“兩周一次給藥”，和“兩周一次施用”，指對患者施用一種物質(例如，一種抗-TNF a抗體)以實現治療目的(例如，治療TNFa-相關病癥)的時間過程。兩周一次的給藥方案不是意在包括每周一次的給藥方案。優選地，每9-19天施用藥物,更優選地,每11-17天,甚至更優選地,每13-15天,最優選地每14天施用藥物。短語“與第二種藥物聯合的第一種藥物”中的術語“聯合”包括共同施用第一種藥物和第二種藥物，其例如可以溶解于相同的藥學可接受載體或者在其中相互混合，或者施用第一種藥物，接著施用第二種藥物，或者施用第二種藥物，接著施用第一種藥物。因此本發明包括聯合治療性處理和聯合藥物組合物。短語“伴行治療性療法”中的術語“伴行”包括在第二種藥物的存在下施用一種藥物。伴行治療性療法包括其中其中第一，第二，第三，或附加的藥物共同施用的方法。伴行治療性療法還包括其中在第二或附加的藥物的存在下施用第一或附加的藥物的方法，其中第二或附加的藥物，例如，可以預先施用。伴行治療性療法可以由不同的操作者分步實施。例如，可以對患者施用一種作用物和對患者施用第二種作用物，給藥步驟可以同時實施，或者幾乎同時實施，或者在不同的時間，只要是在第二種藥物(和附加的藥物)的存在下施用第一種藥物(和附加的藥物)。操作者和受試者可以是相同的個體(例如人)。這里使用的術語“聯合治療法”指施用兩種或幾種治療物質，例如，抗-TNFa抗體和另一種藥物，例如DMARD或NSAID。所述其他藥物可以與抗-TNF a抗體一起施用，在其之 前施用，或者在其之后施用。術語“TNF a -介導的癥狀”或“TNF a -相關病癥”指其中TNF a是導致病癥表現的主要介質的局部和/或全身性生理病癥。 在這里可互換使用的術語“炎癥病癥”或“炎癥疾病”指炎癥-介導的疾病，不管是不是還有免疫介導。炎癥病癥是其中過度的或不調整的炎癥反應導致過度炎癥癥狀，宿主組織損傷，或組織功能損失的病癥，例子包括類風濕性關節炎和脊柱關節病。在一個實施方案中，本發明的炎癥病癥指不包括骨關節炎和類風濕性脊柱病的炎癥-介導的疾病。這里使用的術語“肺疾病”指任何特發性間質性肺疾病和/或慢性阻塞性肺疾病。在本發明的一個實施方案中，術語肺疾病包括所有的肺疾病和/或慢性阻塞性肺疾病，不包括肺休克，慢性肺炎，肺肉樣瘤病，肺纖維化，和硅肺。在這里可互換使用的術語“特發性間質性肺疾病”或“特發性間質性肺疾病癥”指具有相似臨床特征的幾種未知病因學疾病中的任何一種，主要在小泡間間質組織中產生擴散性病理變化。特發性間質性肺疾病的例子包括但不限于，間質肺纖維化(IPF)。在一個實施方案中，特發性間質性肺疾病包括具有相似臨床特征的幾種未知病因學疾病中的任何一種，主要在小泡間間質組織中產生擴散性病理變化，但是不包括肺休克，慢性肺炎，肺肉樣瘤病，肺纖維化，和硅肺。這里使用的術語“慢性阻塞性肺疾病”指由于生理確定的慢性氣流阻礙的肺疾病，不考慮病因學。慢性阻塞性肺疾病的例子包括但不限于，哮喘和慢性阻塞性肺疾病(COPD)。在一個實施方案中，術語慢性阻塞性肺疾病包括由于生理確定的慢性氣流阻礙的肺疾病，但是不包括肺休克，慢性肺炎，肺肉樣瘤病，肺纖維化，和硅肺。術語“氣道阻塞”指特征呼吸量測定器結果展示的對氣流的增加的阻力。在這里可互換使用的術語“心血管病”或“冠心病”指涉及心血管系統例如心臟，血管和/或血液的任何疾病，病癥，或狀態。一種冠心病的特征一般是向心臟供應血液和氧氣的血管(冠狀動脈)狹窄。冠心病通常是脂肪材料和血小板堆積的結果。作為冠狀動脈狹窄，血液向心臟的流動能減慢或停止。本發明的冠心病能適用任何動脈異常，不管結構，組織學，生物化學或任何其他異常。冠狀心臟病的例子是再狹窄。在一個實施方案中，冠心病指涉及心血管系統的任何疾病，病癥，或狀態，不包括心臟局部缺血和心臟機能不全。
這里使用的術語“再狹窄”指狹窄復發，其是動脈縮窄或狹窄。再狹窄經常是作為病態血管再建手術之后發生的閉合之前的損傷而發生。術語不僅適用于先前存在的狹窄的復發，而且還適用于血管旁路之后變得部分閉塞的先前正常的血管。在另一個實施方案中，本發明提供一種治療再狹窄的方法，包括對有進行性再狹窄或者有進行性再狹窄危險的患者施用本發明的抗體，或其抗原結合部分。這里使用的術語“支架”指插入到解剖學管腔例如動脈中，特別是保持從前封閉的通道暢通的結構。使用支架來保持液體(例如血液)從血管的一個部分流向另一個部分，和血管內支架或支架保持身體通道通暢和/或支持移植物或包裹物。經常在氣脹術血管成形術之后使用支架，但是它們也能用作治療再狹窄的直接療法。在本發明的一個實施方案中，支架是藥物-洗脫物。術語“藥物-洗脫物”指緩慢-調節釋放藥物制劑包被的支架。術語“藥物-洗脫物”或“藥物-釋放物”或“藥物-包 被物”在這里互換使用。可以用治療冠狀心臟病的任何藥物，例如本發明的抗體或者其抗原-結合片段，來包被支架。在另一個實施方案中，支架遞送D2E7。在另一個實施方案中，支架遞送與用來治療冠心病的另一種藥物聯合的D2E7，包括地塞米松，左旋溶肉瘤素，環磷酰胺，瘤可寧，順鉬，BiCNU,亞德里亞霉素，阿霉素，鹽酸柔紅霉素，去甲氧柔紅霉素，光神霉素，突變霉素，氟尿喃唳，甲氨喋呤，thoguanine, toxotere,依托泊苷,長春新堿,伊立替康，鹽酸拓撲替康，鹽酸甲基芐肼，替尼泊苷，六甲蜜胺，羥基脲，吉西他賓，硫酸長春新堿，etophophos，藤霉素(FK506)，和下面的瑞帕霉素類似物SDZ_RAD，CCI-779,7-表-瑞帕霉素，7-硫甲基-瑞帕霉素,7-表-三甲氧基苯基-瑞帕霉素,7-表-硫甲基-瑞帕霉素，
7-去甲氧基-瑞帕霉素，32-去甲氧基-2-去甲和腦氨酸。這里使用的術語“代謝病癥”指影響身體怎樣處理需要進行生理功能的物質的疾病或病癥。代謝病癥的例子包括但不限于糖尿病和肥胖。在本發明的一個實施方案中，使用的術語代謝病癥指影響身體怎樣處理需要進行生理功能的物質的疾病或病癥，不包括自身免疫糖尿病。在這里可互換使用的術語“多尿癥”或“糖尿病癥”或“糖尿病”指血液中糖(葡萄糖)的含量高為標識的疾病。胰島素(胰腺產生的調節血液糖的化合物)太少，對胰島素有抗性，或者這兩個原因能引發糖尿病。這里使用的短語“與糖尿病相關的病癥”指通常與糖尿病有關或涉及糖尿病的病癥和其他疾病。與糖尿病有關的病癥的例子包括例如高血糖，血胰島素過多，血脂過多，胰島素抗性，減少的葡萄糖新陳代謝，肥胖，糖尿病患者視網膜病，斑變性，白內障，糖尿病患者腎病，腎小球硬化癥，糖尿病患者神經病，勃起機能障礙，月經前綜合征，血管再狹窄，潰瘍性結腸炎，冠心病，高血壓，心絞痛，心肌梗塞，中風，皮膚和結締組織病癥，足潰瘍，代謝酸中毒，關節炎，和骨質疏松。這里使用的術語“肥胖”指其中患者相對于體重來說有過量的身體脂肪的癥狀。在一個實施方案中，肥胖指個體體重比它們體重的最大期望值高至少大約20 %或更多的癥狀。當一個成年人超重100磅以上，則認為他或她是“病態肥胖”。在另一個實施方案中，月巴胖定義為BMI (體重指數)超過30kg/m2。這里使用的術語“貧血”指循環中的紅細胞數目異常地低或者血液中血紅蛋白的濃度低。這里使用的術語“疼痛”指所有類型的疼痛。該術語指急性和慢性疼痛，例如神經病性疼痛和術后疼痛，慢性背部下部疼痛，聚集性頭痛，皰疹神經痛，幻覺手足疼痛，中樞疼痛，牙齒疼痛，阿片樣物質-抗性疼痛，內臟疼痛，手術疼痛，骨傷疼痛，生產和分娩中的疼痛，燙傷疼痛，包括太陽灼傷，分娩后疼痛，偏頭痛，咽痛，和泌尿生殖道疼痛包括膀胱炎。該術語還包括傷害性疼痛或痛覺。這里使用的術語“肝病”指與肝細胞損傷或膽道失調相關的哺乳動物優選人肝病。在一個實施方案中，肝病指與肝細胞損傷或膽道失調相關的哺乳動物優選人肝病，不包括肝炎，酒精性肝炎，和病毒性肝炎。這里可互換使用的術語“皮膚病癥”或“皮膚病”指引發炎癥狀態的除了外傷之外的皮膚異常。在一個實施方案中，本發明的皮膚病是炎性皮膚病，其中皮膚的特征是毛細管 擴張，白細胞浸潤，紅，熱，和/或疼痛。皮膚病的例子包括但不限于，牛皮癬，尋常天皰瘡，硬皮病，特應性皮炎，肉樣瘤病，紅斑節，汗腺炎化膿，扁平苔癬，Sweet/ s綜合征，和白癜風。這里使用的術語“牛皮癬”指表皮增生有關的皮膚病。牛皮癬包括但不限于慢性斑牛皮癬，有斑點的牛皮癬，反白牛皮癬，膿包牛皮癬，普通牛皮癬，和牛皮癬紅皮病。牛皮癬還與其他炎癥有關，包括腸炎(IBD)和類風濕性關節炎(RA)。屬于“健康皮膚”或“正常皮膚”指非損傷性皮膚，S卩，沒有看得見的明顯的紅斑，水腫，色素沉著過高，過低，或不均勻，結垢，干燥病，或水皰形成。組織學健康或正常皮膚指具有包括良好的組織基礎，棘狀和顆粒狀層，和粘合在一起的多層角質層的形態外觀的皮膚組織。這里使用的術語“指甲病癥”或“指甲病”指手指甲或腳趾甲異常的顏色，形狀，紋
理，或厚度。這里可互換使用的術語“脈管炎”或“血管炎”指一組病癥，其特征在于血管炎癥。所有大小的血管可能受到影響，從體內最大的血管(主動脈)到皮膚中最小的血管(毛細血管)。受到影響的血管的大小根據脈管炎的特定類型而不同。這里使用的術語“試劑盒”指含有施用用于治療TNFa-相關病癥的本發明的TNFa抗體的成分的包裝產品。試劑盒優選包括盛有試劑盒成分的盒子或容器。盒子或容器中附加有標簽或食品和藥物管理部批準協議。盒子或容器裝有本發明的成分，優選裝在塑料，聚乙烯，聚丙烯，乙烯，或丙烯容器中。容器可以是帶蓋子的管或瓶。試劑盒還可以包括施用本發明的TNFa抗體的說明書。這里進一步描述本發明的各個方面。I.本發明的TNFa抑制劑本發明提供一種治療TNFa -相關病癥的方法，其中施用TNFa抑制劑是有益的。在一個實施方案中，這些方法包括施用以高親和性和低解離速度與人TNFa結合并且具有高中和能力的分離的人抗體，或者其抗原-結合部分。優選地，本發明的人抗體是重組的中和人抗-hTNF a抗體。最優選的本發明的重組中和抗體在這里指D2E7，還指HUMIRA 和adalimumab (SEQ ID勵1所示02￡7 VL區的氨基酸序列；SEQ ID N0:2所示D2E7 VH區的氨基酸序列)。D2E7 (HUMIRA )的性質描述于Salfeld等，美國專利No. 6，090，382，其在這里引作參考。在一個實施方案中，本發明的治療方法包括施用D2E7抗體和抗體部分，D2E7-相關抗體和抗體部分，和具有和D2E7相當的性質的其他人抗體和抗體部分，例如以低離解動力學與hTNFa的高親和性結合。在一個實施方案中，本發明提供用分離的人抗體，或者其抗原-結合部分的治療方法，所述人抗體，或者其抗原-結合部分以1x10_8M或更小的Kd和IxlO-3S-1或更小的Ktjff速率常數從人TNF a上離解，這兩個常數都通過表面等離子共振來測定，并且中和人TNF a細胞毒性，在標準體外L929分析中IC5tl是Ix 10_7M或更小。更優選地，分離的人抗體以SxKT4s-1或更小的Ktjff,甚至更優選地以IxKT4s-1或更小的Ktjff從人TNFa上離解。更優選地，分離的人抗體，或者其抗原-結合部分中和人TNF a細胞毒性，在標準體外L929分析中IC5tl是1x10_8M或更小，甚至更優選地，IC50是1x10_9M或更小，甚至更優選地IC5tl是IxIO-kiM或更小。在優選的實施方案中，所述抗體是分離的人重組抗體，或者其抗原-結合部分。 本領域公知抗體重鏈和輕鏈CDR3結構域在抗體對抗原的結合特異性/親和性中起著重要的作用。因此，另一方面，本發明提供一種其中TNFa活性是有害的之TNFa-相關病癥的方法，包括施用具有與hTNFa締合作用慢的解離動力學并且具有結構上與D2E7的那些相同或相關的輕鏈和重鏈⑶R3結構域。D2E7 VL⑶R3的9位可能由Ala或Thr占據，基本上不影響1(。 。因此，D2E7 VL⑶R3的共有基序由下面的氨基酸序列構成Q-R-Y-N-R-A-P-Y-(T/A) (SEQ ID NO 3)。因此，D2E7 VH CDR3 的 12 位由 Tyr 或Asn占據，基本上不影響Ktjfft5因此，D2E7 VH⑶R3的共有基序由下面的氨基酸序列構成V-S-Y-L-S-T-A-S-S-L-D- (Y/N) (SEQ ID NO :4)。此外，根據美國專利 No. 6，090, 382 的實施例2所證明的，D2E7重鏈和輕鏈的⑶R3結構域能被一個丙氨酸殘基取代(在VL⑶R3中的位置1，4，5，7或8，或者在VH CDR3中的位置2，3，4，5，6，8，9，10或11)，基本上不影響K0ff。進一步地，技術人員明白，有著D2E7 VL和VH⑶R3結構域被丙氨酸取代的能力，仍然保持抗體的低離解速度常數的CDR3結構域中其他氨基酸的取代也是可能的，特別是保守氨基酸的取代。優選地，在D2E7 VL和/或VH CDR3結構域中進行不多于1_5個保守氨基酸的取代。更優選地，在D2E7 VL和/或VH CDR3結構域中進行不多于1_3個保守氨基酸的取代。另外，不應該在對于與hTNF a結合是決定性的之氨基酸位置上進行保守的氨基酸取代。D2E7 VL⑶R3的2和5位以及D2E7 VH⑶R3的I和7位表現出對于與hTNF a的相互作用是決定性的，因此，保守的氨基酸取代優選不在這些位置上進行(但是如上所述，D2E7VL CDR3的5位的丙氨酸取代是可接受的)(參見美國專利No. 6，090, 382)。因此，在另一個實施方案中，本發明提供一種治療TNFa -相關病癥的方法，包括施用一種分離的人抗體，或者其抗原-結合部分。所述抗體，或者其抗原-結合部分優選具有下面的特征a)根據表面等離子共振測定，其以IxKT3s-1或更小的Ktjff速率常數從人TNF a上離解；b)有包括SEQ ID NO 3的氨基酸序列，或在I，4，5，7或8位通過一個丙氨酸取代或者在I，3，4，6，7，8和/或9位通過1-5個保守氨基酸取代而從SEQ ID NO :3修飾的氨基酸序列的輕鏈CDR3結構域；
有包括SEQ ID NO :4的氨基酸序列，或在2，3，4，5，6，8，9，10或11位通過一個丙氨酸取代或者在2，3，4，5，6，8，9，10，11和/或12位通過1_5個保守氨基酸取代而從SEQID NO 4修飾的氨基酸序列的重鏈⑶R3結構域。更優選地，所述抗體，或者其抗原-結合部分以SxlO、—1或更小的Ktjff從人TNF a上離解，甚至更優選地，所述抗體，或者其抗原-結合部分以IxlO-4S-1或更小的Ktjff從人TNF a上離解。在另一個實施方案中，本發明提供一種治療TNF a -相關病癥的方法,包括施用一種分離的人抗體，或者其抗原-結合部分。所述抗體，或者其抗原-結合部分優選包含包括SEQ ID NO :3的氨基酸序列，或在I，4，5，7或8位通過一個丙氨酸取代而從SEQ ID NO 3修飾的氨基酸序列的CDR3結構域的輕鏈可變區(LCVR)，和有包括SEQ IDNO :4的氨基酸序列，或在2，3，4，5，6，8，9，10或11位通過一個丙氨酸取代而從SEQ ID NO :4修飾的氨基酸序列的⑶R3結構域的重鏈可變區(HCVR)。優選地，所述LCVR進一步具有包括SEQ ID NO: 5的氨基酸序列的⑶R2結構域(S卩，D2E7VL⑶R2)，并且HCVR進一步具有包括SEQID NO 6的氨基酸序列的⑶R2結構域(S卩，D2E7 VH⑶R2)。更優選地，所述LCVR進一步具有包括SEQID NO 7的氨基酸序列的⑶Rl結構域(即，D2E7 VL⑶Rl)，并且HCVR具有包括SEQID NO 8的氨基酸序列的CDRl結構域(即，D2E7 VH CDR1)。VL的構架區優選是來自Vk I人種系家族，更優選來自A20人種系Vk基因，并且最優選地來自美國專利No. 6，090, 382的圖IA和IB所示的D2E7 VL構架序列。VH的構架區優選是來自VH3人種系家族，更優選來自DP-31人種系VH基因，并且最優選地來自美國專利No. 6, 090, 382的圖2A和2B所示的D2E7 VH構架序列。因此，在另一個實施方案中，本發明提供一種治療TNFa -相關病癥的方法，包括施用一種分離的人抗體，或者其抗原-結合部分。所述抗體，或者其抗原-結合部分優選包含包括SEQ ID NO: I的氨基酸序列(即，D2E7 VL)的輕鏈可變區(LCVR)和包括SEQ IDNO :2的氨基酸序列(即，D2E7 VH)的重鏈可變區。在一些實施方案中，所述抗體包括重鏈恒定區，例如IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM或IgD恒定區。優選地,重鏈恒定區是IgGl重鏈恒定區或IgG4重鏈恒定區。此外，所述抗體包括輕鏈恒定區，K輕鏈恒定區或入輕鏈恒定區。優選地，所述抗體包括輕鏈恒定區。或者，所述抗體部分可以是例如Fab片段或單鏈Fv片段。在其他實施方案中，本發明提供一種治療TNFa -相關病癥的方法，其中施用一種抗-TNFa抗體是有益地施用一種分離的抗體或者其抗原-結合部分。所述抗體或者其抗原-結合部分優選包含D2E7-相關VL和VH⑶R3結構域，例如，具有有包括選自下面的氨基酸序列的CDR3結構域的輕鏈可變區(LCVR) SEQ ID NO :3，SEQ ID NO :11，SEQ ID NO:12，SEQ ID NO 13, SEQ ID NO :14，SEQ ID NO :15，SEQ ID NO :16，SEQ ID NO :17，SEQ IDNO 18, SEQ ID NO :19，SEQ ID NO :20，SEQ ID NO :21，SEQ ID NO :22，SEQ ID NO :23，SEQID NO 24, SEQ ID N0:25和SEQ ID NO :26，或者具有有包括選自下面的氨基酸序列的CDR3結構域的重鏈可變區(HCVR) SEQ ID NO 4,SEQ ID NO 27, SEQ ID NO 28, SEQ ID NO 29,SEQ ID NO 30, SEQ ID NO :31，SEQ ID NO 32, SEQ ID NO 33, SEQ ID NO :34 and SEQ IDNO 35o在另一個實施方案中，本發明的TNF a抑制劑是etanerc印t (描述于WO 91/03553和TO 09/406476)，英夫單抗(描述于美國專利No. 5，656，272)，CDP571 (—種人源化單克隆抗-TNF- a IgG4抗體)，CDP870 ( 一種人源化單克隆抗-TNF- a抗體片段)，D2E7 (人抗-TNFmAb)，可溶性TNF受體L型或PEG化可溶性TNF受體I型(PEGsTNF-Rl)。本發明的TNFa抗體能被修飾。在一些實施方案中，TNFa抗體或者其抗原結合片段被化學修飾，以提供期望的效果。例如，本發明的抗體或抗體片段的PEG化可以通過本領域公知的任何聚乙烯醇化反應來進行，描述于，例如，下面的參考文獻Focus on GrowthFactors 3:4-10(1992) ；EP 0 154 316 ;和 EP 0401 384(每篇文獻在此全文引作參考)。優選地，通過與反應性聚乙二醇分子(或者類似的反應性水溶性聚合物)的酰化反應或烷基化反應進行聚乙烯醇化反應。用于本發明的抗體和抗體片段的聚乙烯醇化的優選的水溶性聚合物是聚乙二醇(PEG)。如這里使用的，“聚乙二醇”意思是包括用來將其他蛋白質衍生化的所有形式的PEG，例如一(Cl-ClO)烷氧基-或芳氧基-聚乙二醇。本發明的PEG化抗體和抗體片段的制備方法一般包括下面的步驟(a)在所述抗 體或抗體片段能與一個或幾個PEG基團連接的條件下，使本發明的抗體或抗體片段與聚乙二醇反應，例如PEG的反應性酯或醛衍生物，和(b)獲得反應產物。以已知的參數和期望的結果為基礎選擇最佳反應條件或酰化反應對于本領域技術人員是顯而易見的。聚乙烯醇化抗體和抗體片段一般可以用來治療本發明的TNFa -相關疾病，通過施用這里描述的TNFa抗體和抗體片段。一般地，聚乙烯醇化抗體和抗體片段與非聚乙烯醇化抗體和抗體片段相比，具有延長的半壽期。聚乙烯醇化抗體和抗體片段可以單獨使用，與其他藥物組合物一起，或者與其他藥物組合物聯合施用。在本發明的另一個實施方案中，TNFa抗體或抗體片段能被改變，其中修飾抗體的恒定區，相對于沒有修飾的抗體減少至少一個恒定區-介導的生物效應物功能。為了修飾本發明的抗體使得其具有降低的與Fe受體的結合，在Fe受體(FcR)相互作用所必需的特定區能使抗體的免疫球蛋白恒定區片段突變(參見，例如，Canfield, S. M.和S. L. Morrison (1991) J. Exp. Med. 173 1483-1491 jPILund’J.等(1991) J. of Immunol. 147 2657-2662)。抗體FcR結合能力的減弱也能減小依賴FcR相互作用的其他效應子功能，例如調理作用和吞噬作用和抗原-依賴性細胞的細胞毒性。本發明的抗體或抗體部分可以被衍生化或者與另一個功能分子連接(例如另一個肽或蛋白質)。因此，本發明的抗體或抗體部分意在包括這里描述的人抗-hTNFa抗體的衍生化和其他修飾形式，包括免疫粘附分子。例如，本發明的抗體或抗體部分能功能性地連接于(通過化學偶聯，基因融合，非共價締合或者其他)一個或多個其他分子實體(例如，雙特異性抗體或二價抗體)，檢測試劑，細胞毒性試劑，藥物物質，和/或能介導抗體或抗體部分與另一個分子締合的蛋白質和/或肽(例如鏈霉抗生物素蛋白核心區或多組氨酸標記)。通過使兩個或多個抗體(相同或不同類型，例如，產生多特異性抗體)制備衍生化的抗體的一種類型。合適的交聯劑包括具有由合適的間隔基團分開的具有兩個不同的反應團的異雙功能的(例如間-馬來酰亞胺苯甲酰-N-羥基琥珀酰亞胺酯)或同雙功能的(例如二琥拍酰亞胺辛二酸酯)那些交聯劑。這樣的交聯劑從Pierce Chemical Company,Rockford, IL 可獲得。本發明的抗體或抗體部分可以被衍生化的有用的可檢測試劑包括熒光化合物。熒光可檢測試劑包括熒光素，熒光素異硫代氰酸酯，若丹明，5- 二甲基胺-I-萘磺酰氯，藻紅蛋白等等。抗體還可以用可檢測酶衍生化，例如堿性磷酸酶，辣根過氧化物酶，葡萄糖氧化酶等等。當用一種可檢測酶將抗體衍生化時，通過加入用來產生可檢測反應產物的酶的另外的試劑進行檢測。例如，當存在可檢測試劑辣根過氧化物酶時，加入過氧化氫和二氨基聯苯胺產生可檢測的有色反應產物。抗體還可以用生物素衍生化，并且通過抗生物素蛋白或鏈霉抗生物素蛋白結合的間接量度來測定。通過在宿主細胞中重組表達免疫球蛋白輕鏈和重鏈能制備本發明的抗體或抗體部分。為了表達重組抗體，用攜帶編碼抗體的免疫球蛋白輕鏈和重鏈的的DNA片段的一種或多種重組表達載體轉染宿主細胞，使得輕鏈和重鏈在宿主細胞中表達并且，優選地，分泌到培養宿主細胞的培養基中，從培養基回收抗體。應用標準重組DNA方法來獲得抗體重鏈和輕鏈基因，將這些基因插入到重組表達載體中并且將載體導入宿主細胞，例如在Sambrook, Fritsch 和 Maniatis (編著),Molecular Cloning ；A Laboratory Manual,第二版，Cold Spring Harbor, N. Y. , (1989), Ausubel, F. M.等(編著)Current Protocolsin Molecular Biology,Greene Publishing Associates, (1989)和 Boss 等人的美國專利 No. 4，816，397中描述的那些。為了表達D2E7或D2E7-相關抗體，首先獲得編碼輕鏈和重鏈可變區的DNA片段。利用聚合酶鏈式反應(PCR)通過擴增和修飾種系輕鏈和重鏈可變序列能獲得這些DNAs。任重鏈和輕鏈可變區基因的種系DNA序列是本領域公知的(參見，例如，“Vbase” 人種系序列數據庫；還參見 Kabat, E. A ,等(1991) Sequences of Proteins ofImmunological Interest,第五版，U. S. Department of Health and Human Services,NIH Publication No. 91-3242 ;Tomlinson, I. M ,等(1992) “The Repertoire of HumanGerline VH Sequences Reveals about Fifty Groups of VH Segments with DifferentHypervariable Loops”，J. Mol. Biol. 227 :776-798 j[ICox,J.P.L.等(1994)“A Directoryof Human Germ-line V78 Segments Reveals a Strong Bias in their Usage”，Eur.J. Immunol. 24 :827-836 ;這些文獻全文在此弓I作參考)。為了獲得D2E7或D2E7-相關抗體重鏈可變區的編碼DNA片段，通過標準PCR擴增人種系VH基因VH3家族成員。最優選地，擴增DP-31VH種系序列。為了獲得D2E7或D2E7-相關抗體輕鏈可變區的編碼DNA片段，通過標準PCR擴增人種系VL基因Vk I家族成員。最優選地，擴增DP-31VH種系序列。以上述參考文獻中公開的核苷酸序列為基礎，應用標準方法，能設計適合在擴增DP-31種系VH和A20種系VL序列中使用的PCR引物。一旦獲得種系VH和VL片段，這些序列可以被誘變來編碼這里公開的D2E7或D2E7-相關的氨基酸序列。種系VH和VL DNA序列編碼的氨基酸序列首先與D2E7或D2E7-相關的氨基酸序列相比較，以鑒定D2E7或D2E7-相關序列中與種系不同的氨基酸殘基。然后，誘變種系DNA序列的合適的核苷酸，使得突變的種系序列編碼D2E7或D2E7-相關的氨基酸序列。通過標準方法進行種系序列誘變，例如PCR-介導的誘變(其中誘變的核苷酸被插入到PCR引物中，使得PCR產物包含突變)或點-定向誘變。一旦獲得編碼D2E7或D2E7-相關VH和VL片段的DNA片段(如上所述，通過上述種系VH和VL基因的擴增和誘變)，這些DNA片段能進一步通過標準DNA技術操作，例如轉化為全長抗體鏈基因的可變區基因，轉化為Fab片段基因或者轉變為scFv基因。在這些操作中，VL-或VH-編碼DNA片段操作連接于編碼另一種蛋白質的另一個DNA片段，例如抗體恒定區或靈活的接頭。這里使用的術語“操作連接”意思是兩個DNA片段連接，使得這兩個DNA片段編碼的氨基酸序列保留在讀框中。通過使VH-編碼DNA與編碼重鏈恒定區(CH 1，CH2和CH3)的另一個DNA分子操作連接，能將編碼VH區的分離的DNA轉化為全長重鏈基因。這些人重鏈恒定區基因的序列是本領域公知的(參見，例如，Kabat, E. A.,等(1991) Sequences of Proteins oflmmufaological Interest,第五版，U. S. Department of Health and Human Services,NIHPublication No. 91-3242)，并且通過標準PCR擴增能獲得包括這些區的DNA片段。重鏈恒定區可以是IgGl, IgG2，IgG3，IgG4，IgA, IgE, IgM或IgD恒定區，但是最優選是IgGl或IgG4恒定區。對于Fab片段重鏈基因，VH-編碼DNA能與只編碼重鏈CHl恒定區的另一個DNA分子操作連接。 通過使VL-編碼DNA與編碼輕鏈恒定區CL的另一個DNA分子操作連接，能將編碼VL區的分離的DNA轉化為全長輕鏈基因(以及Fab輕鏈基因)。這些人輕鏈恒定區基因的序列是本領域公知的(參見，例如，Kabat,E. A ,等(1991) Sequences of Proteins oflmmufaological Interest,第五版，U. S. Department of Health and Human Services,NIHPublication No. 91-3242)，并且通過標準PCR擴增能獲得包括這些區的DNA片段。輕鏈恒定區可以是K或\恒定區，但是最優選是K恒定區。為了獲得scFv基因，VH-和VL-編碼DNA片段操作連接于編碼柔順接頭的另一個片段，例如編碼氨基酸序列(Gly4-Ser) 3，使得VH和VL序列能被表達為連續的單鏈蛋白質，VL和VH區由柔順接頭連接(參見，例如，Bird等(1988) Science 242 :423-426 ；Huston等(1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85 :5879-5883 ；McCafferty 等，Nature (1990) 348 552-554)。為了表達本發明的抗體或抗體片段，將如上所述獲得的編碼部分或全長輕鏈和重鏈的DNAs插入到表達載體中，使得基因與轉錄和翻譯調控序列操作連接。在本說明書中，術語“操作連接”意思是抗體基因連接到載體中，使得載體中的轉錄和翻譯調控序列發揮它們想要的調節和轉錄和翻譯抗體基因的功能。選擇表達載體和表達調控序列與使用的表達宿主細胞相匹配。將抗體輕鏈基因和抗體重鏈基因插入到不同的載體中，更典型地，兩個基因插入到相同的表達載體中。通過標準方法將抗體基因插入到表達載體中(例如,連接抗體基因片段上互補限制位點和載體，或者如果不存在限制位點，則進行平端連接)。在插入D2E7或D2E7-相關輕鏈或重鏈序列之前，表達載體可以是已經攜帶抗體恒定區序列。例如，一種方法是將D2E7或D2E7-相關VH和VL序列轉化為全長抗體基因并且將它們分別插入到已經編碼重鏈恒定區和輕鏈恒定區的表達載體中，使得VH部分與載體中的CH部分操作連接，并且VL部分與載體中的CL部分操作連接。另外，或者，重組表達載體能編碼有利于抗體鏈從宿主細胞分泌出來的信號肽。可以將抗體鏈基因克隆到載體中，使得信號肽符合讀框與抗體鏈基因的氨基末端連接。信號肽可以是免疫球蛋白信號肽或異源信號肽(即，來自非免疫球蛋白的信號肽)。除了抗體鏈基因之外，本發明的重組表達載體攜帶調控序列，它調控抗體鏈基因在宿主細胞中表達。術語“調控序列”意在包括啟動子和控制抗體鏈基因轉錄或翻譯的其他表達調控兀件(例如，多腺苷酸化信號)。這樣的調控信號描述于，例如，Goeddel ；GeneExpression Technology !Methods in Enzomology 185，Academic Press，San Diego,CA(1990)。本領域技術人員明白表達載體的設計，包括調控序列的選擇，取決于象要轉化的宿主細胞的選擇，期望的蛋白質表達水平等這樣的因素。用于哺乳動物宿主細胞表達的優選的調控序列包括指導哺乳動物細胞蛋白質聞水品表達的病毒兀件，例如從巨細胞病毒(CMV)(例如CMV啟動子/增強子)，猿猴病毒40 (SV40)(例如SV40啟動子/增強子)，腺病毒(例如，腺病毒主要晚期啟動子(AdMLP))和多形瘤衍生的啟動子和/或增強子。有關病毒調控元件，和其序列的進一步描述參見，例如Stinski的美國專利No. 5，168，062,Bell等人的美國專利No. 4，510，245和Schaffner等人的美國專利No. 4，968，615。除了抗體鏈基因和調控序列之外，本發明的重組表達載體可以攜帶附加的序列，例如調節載體在宿主細胞中復制的序列(例如復制起點)和選擇標記基因。選擇標記基因有利于其中導入載體的宿主細胞的選擇(參見，例如，美國專利Nos. 4，399，216，4，634，665和5，179，017，都是Axel等人的)。例如，選擇標記基因在導入載體的宿主細胞上帶來對藥物的抗性，例如G418，潮霉素或甲氨喋呤。優選的選擇標記基因包括二氫葉酸還原酶 (DHFR)基因(在dhfr-宿主細胞中使用，由甲氨喋呤篩選/擴增)和neo基因(用于G418篩選)。為了表達重鏈和輕鏈。通過標準技術將編碼重鏈和輕鏈的表達載體轉染到宿主細胞中。各種形式的術語“轉染”意在包括通常用于將外源DNA導入原核或真核宿主細胞中的各種各樣的技術，例如，電穿孔，磷酸鈣沉淀，DEAE-葡聚糖轉染等。雖然在原核或真核宿主細胞中表達本發明的抗體理論上是可行的，但是在癌真核細胞中表達是最優選的，最優選在哺乳動物宿主細胞中表達，因為這樣的真核細胞，特別是哺乳動物細胞，比原核細胞更可能裝配和分泌正確折疊的和免疫活性的抗體。據報道抗體基因的原核細胞表達對于高產率制備活性抗體是無效的(Boss,M.A.和 Wood,C.R. (1985) Immunology Today 6:12-13)。用于表達本發明重組抗體的優選的哺乳動物宿主細胞包括中國倉鼠卵巢細胞(CH0 細胞)(包括 dhfr-CHO 細胞，描述于 Urlaub 和 Chasin，(1980) Proc. Natl.Acad. Sci. USA 77 :4216-4220,與 DHFR 選擇標記一起使用，例如，根據 R. J. Kaufman 和P.A. Sharp (1982) Mol. Biol. 159 :601-621 中的描述)，NSO 骨髓瘤細胞，COS 細胞和 SP2 細胞。當將編碼抗體基因的重組表達載體導入哺乳動物是主細胞中時，將宿主細胞培養一段時間，這段時間足以使得抗體在宿主細胞中表達，優選地足以使得抗體分泌到宿主細胞生長在其中的培養基中。利用標準蛋白質純化方法從培養基中回收抗體。還能使用宿主細胞來制備完整抗體的部分，例如Fab片段或scFv分子。要理解上述方法的各種變化在本發明的范圍之內。例如，可能期望用編碼本發明抗體的輕鏈或重鏈(但是不是兩者)的DNA轉染宿主細胞。重組DNA技術還可以用來去除對于結合hTNF a不是必需的編碼輕鏈或重鏈之一或兩者的一些或全部DNA。本發明的抗體也包括這樣的截短的DNA分子表達的分子。另外，通過標準化學交聯技術，通過本發明的抗體與第二抗體交聯，可以制備雙功能抗體，其中一條重鏈和一條輕鏈是本發明的抗體，而另一條重鏈和輕鏈是對于除了 hTNFa之外的抗原是特異性的。在用于本發明的抗體或者其抗原-結合部分的重組表達的優選系統中，通過磷酸鈣介導轉染向dhfr-CHO細胞中導入編碼抗體重鏈和抗體輕鏈的重組表達載體。在重組表達載體中，抗體重鏈和輕鏈基因分別操作連接于CMV增強子/AdMLP啟動子調控元件，高水平的基因轉錄。重組表達載體還攜帶DHFR基因，它使得用甲氨喋呤篩選/擴增篩選轉染有載體的CHO細胞。培養選擇的轉化體宿主細胞，使得表達抗體重鏈和輕鏈，并且從培養基回收完整抗體。利用標準分子生物學技術來制備重組表達載體，轉染宿主細胞，選擇轉化體，培養宿主細胞并且從培養基回收抗體。通過篩選使用從人淋巴細胞衍生的mRNA制備的人VL和VHcDNAs制備的重組組合抗體庫，優選scFv噬菌體展示庫，能分離除了這里公開的D2E7或者其抗原結合部分或D2E7-相關抗體之外的本發明的重組人抗體。制備和篩選這樣的文庫的方法是本領域公知的。除了制備卩遼菌體展示文庫的商售試劑盒(例如，the Pharmacia Recombinant PhageAntibody System,目錄號27-9400-01 ;和Stratagene SurfZAP 卩遼菌體展不試劑盒，目錄號240612)之外，特別適合在抗體展示文庫制備和篩選中使用的方法和試劑的例子參見，例如，Ladner 等的美國專利 No. 5，223f409, Kang 等人的 PCT 公開 No. WO 92/18619 ；Dower等人的 PCT 公開 No. WO 91/17271 ；ffinter 等人的 PCT 公開 No. WO 92/20791 ；Markland 等人的 PCT 公開 No. WO 92/15679 ;Breitling 等人的 PCT 公開 No. WO 93/01288 ；Mc Cafferty 等人的 PCT 公開 No. WO 92/01047 ；Garrard 等人的 PCT 公開 No. WO 92/09690 ；Fuchs 等人的(1991) Biol/Technology 9 :1370-1372 ;Hay 等人的(1992) Hum Antibody Hybridomas 3:81-85 ;Huse 等人的(1989) Science 246 :1275-1281 ；Mc Cafferty 等人，Nature (1990) 348 552-554 !Griffiths 等人(1993)EMBO J 12 :725-734 ;Hawkins 等人(1992) J Mol Biol226:889-896 ；Clackson 等人(1991)Nature 352 :624-628 ；Gram 等人(1992)PNAS 89 3576-3580 ;Garrard 等人(1991) Bio/Technology 9 1373-1377 ;Hoogenboom 等人(1991)Nuc Acid Res 19 :4133-4137 ;和 Barbas 等人的(1991)PNAS 88:7978-7982。分離對于hTNFa有高親和性和低離解速率常數的人抗體的方法描述于美國專利Nos. 6，090，382，6，258，562，和6，509，015，這些專利文獻在此引作參考。II.本發明的TNFa抑制劑的應用在一個實施方案中，本發明提供對患有其中TNFa活性是有害的之TNF a -相關疾病患者抑制TNFa活性的方法。在一個實施方案中，TNFa抑制劑是D2E7，也稱作HUMIRA (adalimumab)。在包括膿毒癥，感染，自身免疫疾病，移植物排異和移植物-抗-宿主疾病的各種TNFa-相關疾病的病理生理學中涉及TNFa (參見，例如，Moeller, A ，等(1990)Cytokine 2 :162-169 ；Moeller 等人的美國專利 No. 5, 231, 024 ；Moeller, A.等人的歐洲專利公開 No. 260610 BI, Vasilli,P. (1992)Annu. Rev. Immunol. 10 :411-452 ；Tracey,K. J.和Cerami, A. (1994) Annu. Rev. Med. 45 :491-503)。本發明提供對患有 TNFa-相關疾病患者抑制TNF a活性的方法，該方法包括對患者施用抗體，抗體部分，或其他TNF a抑制劑，使得患有TNF a -相關疾病患者的TNF a活性被抑制。本發明還提供對脈管炎患者抑制或降低TNF a活性的方法，包括對患者施用本發明的抗體，或抗體部分，或其他TNF a抑制劑，使得患者的TNF a活性被抑制或降低。優選地,TNF a是人TNF a，并且患者是人患者。或者患者可以是表達與本發明的抗體起交叉反應的TNFa的哺乳動物，患者還可以是導入了 hTNFa的哺乳動物(例如，通過施用hTNFa或者通過表達hTNFa轉基因)。為了治療目的可以對人患者施用本發明的抗體(下面進一步討論)。此外，可以對表達與本發明的抗體起交叉反應的TNFa的非人哺乳動物施用本發明的抗體(例如，靈長類，豬或小鼠)，為了獸醫目的或者作為人類疾病的動物模型。關于后者，這樣的動物模型可以用來評價本發明的抗體的治療效果(例如試驗給藥劑量和時間進程)。用來研究脊柱關節病的動物模型的例子包括ank/ank轉基因小鼠，HLA-B27轉基因大鼠(參見 Taurog 等(1998) The Spondylarthritides. Oxford Oxford UniversityPress)。用來評價藥物治療肝病的治療效果的動物模型的例子包括黑猩猩丙型肝炎病毒模型(參見 Shimizu 等(1990)Proc Natl Acad Sci. USA 87:6441)。用來研究皮膚病和指甲病的動物模型的例子包括，例如，嚴重合并免疫缺陷(SCID)小鼠模型(牛皮癬)和Smith 品系(SL)雞和脫色素小鼠(白癜風)(參見 Nickoloff (2000) Investig DermatolSymp Proc. 5 67 ；Austin 等(1995)Am J Pathol. 146 1529 ；Lerner 等(1986)J InvestDermatol. 87 :299)。

用來評價TNFa抗體治療代謝病的效果的動物模型的例子包括NOD轉基因小鼠，Akita 小鼠,NSY 轉基因小鼠和 ob/ob 小鼠(參見 Baeder 等(1992) Clin Exp Tmmuno1. 89 174 ；Haseyama 等(2002) Tohoku. J Exp Med. 198 233 ；Makino 等(1980) Exp. Anim. 29 I ；Kolb(1987)Diabetes/Metabolism Reviews 3 :751 ;Hamada 等(2001)Metabolism. 50 1282 ；Coleman, (1978)Diabetologia, 14 :141 ;Bailey 等(1982) Int. J. Obesity 6:11)。用來研究脈管炎的動物模型的例子包括小鼠HSV模型(貝切特氏病)，小鼠L. casei模型(Kawasaki ' s病)，和小鼠ANCA模型(Kawasaki ' s病)。脈管炎的其他模型包括 McH5-lpr/lpr 品系(Nose, M.，等(1996)Am. J. Path. 149 :1763)和 SCG/Kj 小鼠品系(Kinjoh，等(1993)Proc. Natl. Acad. Sci. , USA 90:3413)。這些小鼠品系特發發新月形腎小球性腎炎和引起壞死的脾，胃，心臟，子宮和卵巢小動脈的脈管炎。這些動物發生血病球蛋白過多和與脊髓過氧化物酶(MPO)反應的ANCA自身抗體。另外，用人MPO免疫大鼠導致ANCA-相關引起壞死的新月形腎小球性腎炎(Brouwer，E.，等(1993) J. Exp. Med. 177 :905)。用來研究特發性間質性肺疾病和慢性阻礙性呼吸道疾病的動物模型的例子包括卵白蛋白(OVA)誘導的變應性哮喘小鼠和雪茄煙誘導的慢性阻塞性肺疾病小鼠(參見 Hessel，EM.，等(1995) Eur J Pharmacol. 293 :401 ；Keast D，等(1981) J. Pathol. 135 249)。通常用于研究冠心病，包括再狹窄的動物模型包括大鼠或小鼠頸動脈結扎模型和頸動脈損傷模型(Ferns 等(1991) Science 253 :1129 ;Clowes 等(1983) Lab. Invest. 49 208 ;Lindner等(1993)Circ Res. 73 :792)。在頸動脈結扎模型中，通過結扎遠離分枝附近的血管而中斷動脈血流。根據Clowes等所述，創建頸動脈損傷模型，使得通過插入到外側頸動脈的氣導管管腔插入使得共同的頸動脈內皮脫落。第二周，由于平滑肌細胞收縮，頸動脈顯著變窄，但是在第2和12周之間，內膜厚度加倍，導致管腔大小減小。使用這些模型的任一個來測定本發明的TNFa抗體在預防和治療人再狹窄中的有效治療作用。用來研究貧血的動物模型的例子包括用肽基聚糖-多糖聚合物接種的大鼠(參見Coccia等，(2001)Exp Hematology. 29 :1201-1209)。用來研究疼痛的動物模型的例子是本領域公知的，并且包括大鼠坐骨神經結扎模型，和大鼠分節脊柱神經結扎模型(參見Bennett 和 Zie, (1988)Pain. 33 :87-107 ；Kim 和 Chung, (1992)Pain 50 :355-363)。
這里使用的術語“其中TNF a活性有害的TNF a -相關疾病”意思是包括TNF a -相關疾病或其他疾病，其中已經證明患有該病癥的患者體內存在的TNFa是或者懷疑是引起病癥惡化的病癥或因素的病理學原因，例如，少年類風濕性關節炎。因此，其中TNFa活性有害的TNF a -相關疾病是其中預計TNFa活性的抑制減輕病癥的癥狀和/或發展。例如，通過患有該病癥的患者生物液體中TNFa濃度的升高可以印證這樣的病癥(例如，患者血清，血漿，關節液中TNF a濃度的升高)，使用如上所述的抗-TNF a抗體能夠檢測。下面進一步討論本發明的抗體，抗體部分，和其他TNF a抑制劑在其中TNFa活性有害的特定TNF a-相關疾病的治療中的應用。在一些實施方案中，根據下面的III章節所述，與另一種治療藥物聯合，對患者施用本發明的抗體，抗體部分，和其他TNF a抑制劑。A.脊柱關節病很多疾病，包括炎癥疾病例如脊柱關節病的病理生理學中涉及TNFa (參見，例 如，Moeller, A.，等(1990)Cytokine 2 :162-169 ；Moeller 等人的美國專利 No. 5，231，024 ；Moeller，A的歐洲專利公開No. 260 610B I)。本發明提供一種對患有這樣的疾病的患者抑制TNF a活性的方法，該方法包括對患者施用抗體，抗體部分，或其他TNF a抑制劑，使得患有脊柱關節病的患者的TNFa活性被抑制。在一個實施方案中，本發明提供一種治療脊柱關節病的方法。這里使用的術語“脊柱關節病”用來指影響脊柱關節的幾種疾病的任一種，其中這樣的疾病有共同的臨床學，放射學，和組織學特征。很多脊柱關節病都有遺傳特征，即它們都與HLA-B27等位基因相關。在一個實施方案中，術語脊柱關節炎用來指影響脊柱關節的幾種疾病的任一種，不包括強直性脊柱炎，牛皮癬關節炎/脊柱炎，腸關節炎，反應性關節炎或Reiter' s綜合征,和沒有分化的脊柱關節病。本發明的TNFa抗體還可以用來治療有發生脊柱關節病危險的患者。有發生脊柱關節病危險的患者的例子包括患有關節炎的人。脊柱關節炎與其他形式的關節炎有關，包括類風濕性關節炎。在一個實施方案中，本發明的抗體用來治療患有與類風濕性關節炎相關的脊柱關節病的患者。能用本發明的TNFa抗體治療的脊柱關節病的例子在下面描述I.強直性脊柱炎(AS)腫瘤壞死因子在強直性脊柱炎的病理生理學中涉及(參見Verjans等(1991)Arthritis Rheum. 34(4) :486 ;Verjans 等(1994)Clin Exp Immunol. 97(I) :45 ;Kaijtzel等(1999)Hum Immunol. 60 (2) :140)。強直性脊柱炎(AS)是涉及一個或幾個脊椎骨發炎的炎癥病癥。AS是影響中軸骨胳和/或外周關節的慢性病，包括脊柱椎骨和骶髂關節之間的關節和脊柱和骨盆之間的關節。AS最后能引起受影響的脊椎融合或者生長在一起。脊柱關節病，包括AS，與牛皮癬關節炎(PsA)和/或腸炎(IBD)相關，包括潰瘍性結腸炎和克隆氏病。通過放射照相化驗能確定AS的早期表現，包括CT掃描和MRI掃描。AS的早期表現通常包括scroiliitis和骶髂關節中的變化，通過脈絡膜下骨胳的皮層緣模糊，接著發生侵蝕和硬化來確診。注意疲勞是AS的共同癥狀(Duffy等(2002) ACR 66th AnnualScientific Meeting Abstract)。因此,本發明的抗體,其抗原-結合片段能被用來治療AS。在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體，或者其抗原-結合片段被用來治療與IBD相關的脊柱關節病，包括AS。經常用非甾體類抗炎藥治療AS(NSAIDs)，例如阿司匹林或消炎痛。因此，本發明的TNFa還可以與通常用來減少炎癥和通常與強直性脊柱炎相關的疼痛的藥物聯合施用。2.牛皮癬關節炎牛皮癖關節炎的生理病理學中涉及腫瘤壞死因子(Partsch等(1998) Ann RheumDis. 57 :691 ;Ritchlin 等(1998) J Rheumatol. 25 :1544)。根據這里所指的，牛皮癬關節炎(PsA)或者與皮膚相關的牛皮癬，指與牛皮癬相關的慢性炎癥關節炎。牛皮癬是一種普通的慢性皮膚病，其在身體上引起紅斑。20名牛皮癬患者中有大約I名會伴隨皮膚癥狀發生關節炎，并且大約75%的病例中，牛皮癬在關節炎之前。PsA其本身有各種各樣的表現形式，范圍包括中等程度至嚴重的關節炎，其中關節炎通常影響手指和脊柱。當脊柱受到影響時， 如上所述，癥狀與強直性脊柱炎相似。本發明的TNF a抗體，或者其抗原-結合片段能被用來治療PsA。PsA有時與關節炎毀形有關。關節炎毀形指特征在于使關節殘廢的廣泛的侵蝕性畸形的過度骨侵蝕的病癥。在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體，或者其抗原-結合片段能被用來治療關節炎毀形。3.反應性關節炎/萊特爾氏綜合征反應性關節炎，也稱作萊特爾氏綜合征，的病理生理學中涉及腫瘤壞死因子(Braun 等(1999) Arthritis Rheum. 42 (10) :2039)。反應性關節炎(ReA)指使身體別處炎癥惡化的關節炎，經常腸或泌尿系統感染之后。ReA經常特征是一些臨床癥狀，包括關節的炎癥(關節炎)，尿道炎，結膜炎，和皮膚和粘膜損傷。另外，在性傳播疾病或痢疾感染傳染之后能發生ReA，痢疾感染包括衣原體，彎曲菌，沙門氏菌，或耶爾森氏菌。因此，本發明的TNF a抗體，或者其抗原-結合片段能被用來治療ReA。4.沒有分化的脊柱關節病在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體用來治療沒有分化的脊柱關節病患者(參見Zeidler等(1992)Rheum Dis Clin North Am. IS :187)。用來描述沒有分化的脊柱關節病的其他術語包括血清反應陰性少關節炎和沒有分化的少關節炎。這里使用的沒有分化的脊柱關節病指其中證實患者僅有一些與脊柱關節病相關的癥狀的病癥。這些癥狀通常在沒有IBD，牛皮癬，或AS或萊特爾氏綜合征常規癥狀的年輕成年人身上發現。在一些例子中，沒有分化的脊柱關節病可能是AS的早期指征。在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體，或者其抗原-結合片段能被用來治療沒有分化的脊柱關節病。B.肺疾病很多種肺疾病的病理生理學中涉及TNF a，包括象原發性間質性肺疾病和慢性阻塞性呼吸道疾病這樣的肺疾病(參見，例如，Piquet PF等(1989) J Exp Med. 170 =655-63 ；Whyte M,等(2000) Am J Respir Crit Care Med. 162 :755-8 ；Anticevich SZ,等(1995) EurJ Pharmacol. 284 :221-5)。本發明提供對患有這樣的肺疾病的患者抑制TNF a活性的方法，該方法包括對患者施用一種抗體，抗體部分，或其他TNF a抑制劑，使得患有原發性間質性肺疾病或慢性阻塞性呼吸道疾病患者的TNF a活性被抑制。下面討論其中TNFa活性有害的原發性間質性肺疾病和慢性阻塞性呼吸道疾病的例子。I.原發性間質性肺疾病
在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體被用來治療患有原發性間質性肺疾病的患者。原發性間質性肺疾病以三種方式影響肺首先，肺組織以一些已知的或未知的途徑受到損傷；其次，肺中氣囊壁開始發炎；最后，間質(或者氣囊之間的組織)中開始形成瘢痕(或纖維化)，并且肺開始變得強直。下面描述原發性間質性肺疾病的例子。a.特發性肺纖維化(IPF)特發性肺纖維化(IPF)的病理生理學中涉及腫瘤壞死因子(參見Piquet PF,等(1989)J Exp Med. 170 :655-63 ；Whyte M，等(2000)Am J Respir Crit Care Med 162755-8 ；Corbett EL，等(2002) Am J Respir Crit Care Med. 165 :690-3)。例如，發現 IPF 患者的巨噬細胞和II型上皮細胞中THF表達水平增大(Piquet等(1993) Am J Pathol 143 651 ;Nash 等(1993) Histopathology 22 :343 ;Zhang 等(1993) J TmmunoI 150:4188)。一些遺傳多態性也與增多的TNF表達有關，并且在IPF和矽肺中起著作用(Whyte等，上文；Corbett EL,等，上文)。 術語“特發性肺纖維化”或“IPF”指特征在于導致呼吸急促的深度肺組織炎癥和甚至是瘢痕形成的一組病癥。IPF中肺泡(氣囊)和它們的支持結構(間質)的瘢痕形成最后導致功能肺泡單位的損失以及氧從空氣向血液轉移的減少。IPF還稱作彌漫性軟組織肺疾病；小泡炎；原因不明的纖維組織形成小泡炎(CFA);原發性肺局限性肺炎(IPP);和通常的間質局限性肺炎(UIP)。IPF經常與UIP作同義詞使用(“IPF/nP”)，因為UIP是IPF病理診斷學中最常見的細胞模型。IPF患者經常表現出一些癥狀，包括干咳，胸部疼痛，和/或呼吸短促。治療IPF通常使用的藥物是強的松和環磷酰胺，但是只有一部分患者通過持續使用這些藥物而得到改善(American Thoracic Society (2000) Am. J. Respir. Crit. Care Med. 161 :646)。給氧和肺移植是治療的另一種選擇。在一個實施方案中，聯合另一種治療物質，例如氧，對患者施用本發明的TNFa抗體，用于治療特發性肺纖維化。2.慢性阻塞性呼吸道病癥在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體用來治療慢性阻塞性呼吸道病癥患者。在這些疾病中，氣道阻塞可以是慢性的并且是持續的或間斷性的并且復發。通常通過強迫呼氣肺量測定法測定氣流障礙，它是最大呼氣時呼出量對時間的記錄。對于沒有受阻氣流的受試者，完全用力呼氣通常持續3至4秒。對于慢性氣流受阻病癥的患者，氣流受阻，通常需要15至20秒，并且可能受到呼吸持續時間受限。容易測量第一第二次呼氣的正常用力呼氣量(FEVI)，并且容易根據年齡，性別，身高來精確預測。FEVI與用力肺活量(FEVI/FVC)正常下超過0. 75。在用力呼氣和接著的用力吸氣期間記錄氣流對容量是有用的，主要區分上下呼吸道變窄。下面描述慢性阻塞性肺疾病。a.哮喘哮喘生理病理學中涉及腫瘤壞死因子(Anticevich SZ,等(1995) Eur JPharmacol. 284:221-5 ；Thomas PS,等 1995. Am J Respir Crit Care Med. 152 :76-80 ；Thomas PS, Heywood G. (2002)Thorax. 57 :774-8)。例如，發現急性哮喘發作與肺中性白細胞增多癥和升高的 BAL TNF水平有關(Ordonez CL.等(2000)Am J Respir Crit Care Med161:1185)。發現哮喘癥狀的嚴重度與房間灰塵中內毒素水平有關。對于大鼠，抗-TNF抗體減小內毒素-誘導的氣道變化(Kips等(1992)Am Rev Respir Dis 145:332)。
這里使用的術語“哮喘”指其中氣道炎癥引起氣流進出肺部受限的病癥。哮喘還稱作支氣管哮喘，運動引起的哮喘-支氣管，和反應性氣道病(RAD)。在一些例子中，哮喘與變應性有關和/或是家族性的。哮喘包括特征在于在短時間之內支氣管氣道直徑或管徑大幅度變化，導致肺功能變化的癥狀。受影響患者對氣流的得到的提高的抗性產生癥狀，包括呼吸困難，胸部有壓迫感或“緊張感”和喘鳴。根據NIH準則表征哮喘患者，描述為輕度間歇性的，輕度持續性的，中度持續性的，和嚴重持續性的(參見 NAEPP Expert Panel Report Guidelines for theDiagnosis and Management of AsthmaUpdate on Selected Topics 2002.JACI 2002 ；110 :S141_S209 !Guidelines for the Diagnosis and Management of Asthma. NIHPublication 97-4051,1997年7月)。經常用吸入的皮質類固醇治療診斷有中度 持續性哮喘的患者。經常用高劑量吸入的皮質類固醇和P.o.皮質類固醇治療診斷有嚴重持續性哮喘的患者。b.慢性阻塞肺疾病(COPD)慢性阻塞肺疾病的病理生理學中涉及腫瘤壞死因子(Keatings VM. (2000)Chest. 118:971-5 ；Sakao S，等(2001)Am J Respir Crit Care Med. 163:420-22 ；SakaoS，等(2002)Chest. 122 :416-20)。術語“慢性阻塞肺疾病”或“C0PD”在這里互換使用，指特征在于有不同程度氣囊膨大和肺組織破壞的有限氣流的一組肺疾病。術語COPD包括慢性支氣管炎(糜爛細胞粘膜下腺增生的粘液分泌過多)，慢性阻塞支氣管炎，或肺氣腫(氣道軟組織受傷)，或者這些癥狀的組合。肺氣腫和慢性支氣管炎是最常見的慢性阻塞肺疾病形式。不可逆氣流不通確定C0PD。在CCffD中，慢性炎癥導致小氣道和肺軟組織的不變狹窄和肺泡壁破壞(肺氣腫)。這種病特征在于肺泡巨噬細胞，中性白細胞，和細胞毒性T淋巴細胞數目增加，和多炎癥介質(脂質，趨化因子，細胞因子，生長因子)的釋放。這種炎癥導致小氣道變窄和肺軟組織破壞的纖維化。還有高水平的氧化應激，其可以使這種炎癥擴大。C.冠心病各種冠心病的生理病理學中涉及TNFa，包括再狹窄(參見，例如，Clausell等
(1994)，上文；Medall等(1997) Heart 78(3) :273)。這里使用的術語“其中TNF a活性有害的冠心病”為了包括冠心病和心血管病，其中證明有病的患者體內存在的TNFa是或者懷疑是引起疾病惡化的病癥或因素病理學的原因，包括心血管病，例如再狹窄。其中TNFa活性有害的冠心病經常是由動脈閉塞導致的。血凝引起這樣的閉塞，其通常在冠狀動脈中形成，其事先從通常與動脈硬化相關的變化變窄。例如，如果動脈壁中的動脈粥樣硬化斑破裂，它能觸發血栓或凝塊的形成。通過例如患病患者生物學液體濃度增加(例如,患者血清，血漿，關節液等中TNFa濃度升高)可以證實這樣的病癥，它是可以檢測的，例如，如上所述使用抗-TNFa抗體。動脈壓失調，心臟機能障礙，或者血管閉塞，例如血栓也可以引起冠心病。冠心病包括冠狀動脈病和外周血管病。有其中TNFa活性有害的很多冠心病例子，包括再狹窄。下面進一步討論本發明的抗體，抗體部分，和其他TNF a抑制劑在治療特定冠心病中的用途。在一些實施方案中，如下所述，與其他治療物質聯合對患者施用本發明的抗體，抗體部分，和其他TNF a抑制劑。
本發明提供一種對冠心病患者抑制TNF a活性的方法。本發明提供一種對冠心病患者抑制或降低TNFa活性的方法，包括對患者施用本發明的抗體，抗體部分，和其他TNF a抑制劑，使得患者的TNF a活性被抑制或降低。優選地，TNF a是人TNF a，患者是人患者。或者患者可以是表達與本發明的抗體交叉反應的TNFa的哺乳動物。患者還可以是其中導入hTNFa的哺乳動物(例如，通過施用hTNFa或者表達hTNF a轉基因)。為了治療目的可以對人患者施用本發明的抗體(下面進一步討論)。此外，可以對表達與本發明的抗體起交叉反應的TNFa的非人哺乳動物施用本發明的抗體(例如，靈長類，豬或小鼠)，為了獸醫目的或者作為人類疾病的動物模型。關于后者，這樣的動物模型可以用來評價本發明的抗體的治療效果(例如試驗給藥劑量和時間進程)。通常使用的用于研究冠心病，包括再狹窄的動物模型包括大鼠或小鼠頸動脈結 扎模型和頸動脈損傷模型(Ferns 等(1991) Science 253 :1129 ;Clowes 等(1983) Lab.Invest. 49 :208 ；Lindner等(1993) Cire Res. 73 :792)。在頸動脈結扎模型中，通過結扎遠離分枝附近的血管而中斷動脈血流。根據Clowes等所述，創建頸動脈損傷模型，使得通過插入到外側頸動脈的球囊導管的腔內插入使得共同的頸動脈內皮脫落。第二周，由于平滑肌細胞收縮，頸動脈顯著變窄，但是在第2和12周之間，內膜厚度加倍，導致管腔大小減小。使用這些模型的任一個來測定本發明的TNFa抗體在預防和治療人再狹窄中的有效治療作用。本發明的抗體能用來治療其中TNFa活性有害的心血管病，其中預計TNF a活性的抑制減輕冠心病的癥狀和/或進行或者防止冠心病。通過臨床癥狀能鑒定患有或有發生冠心病危險的患者。冠心病的臨床癥狀經常包括胸痛，呼吸短促，乏力，昏暈發作，意識變更，肢疼痛，陣發性夜間呼吸困難，短暫局部缺血發作和患者所出現的其他這樣的現象。冠心病的臨床信號還包括EKG異常，改變的外周脈搏，動脈雜音，異常心臟聲音，速率和喘鳴，頸靜脈膨脹，神經病學變更和醫生看到的其他這樣的發現。例如通過患有該病癥的患者生物液體中TNFa濃度的升高也可以印證冠心病(例如，患者血清，血漿，關節液等中TNFa濃度的升高)。心血管病的例子包括但不限于冠狀動脈病，心絞痛，心肌梗塞，心跳驟停引起的心血管組織損傷，心原性休克，和高血壓，動脈粥樣硬化，冠狀動脈痙攣，冠狀動脈病，心臟瓣膜病，和心肌病。下面進一步討論本發明的抗體，抗體部分和其他TNFa抑制劑在治療特定心血管病中的用途。在一些實施方案中，如在下文III章節所述，與另一種治療物質聯合對患者施用本發明的抗體，抗體部分或其他TNF a抑制劑。I.再狹窄再狹窄的病理生理學中涉及TNF a (參見Zhou等(2002) Atherosclerosis. 161 153 ;Javed等(2002)Exp and Mol Pathol 73:104)。例如，在鼠金屬絲頸動脈模型中，TNF-/-小鼠證明與野生型小鼠相比開始增生減小7倍(Zimmerman等(2002) Am J PhsiolRegul Integr Comp Physiol 283 :R505)。作為血管再造任何類型的結果能發生再狹窄，不管是在冠狀脈管系統中還是在外周中(Colburn和Moore (1998)Myointimal Hyperplasiapp.690-709 in Vascular Surgery A Comprehensive Review Philadelphia Saunders)。例如，研究報道冠狀血管成形術置換有再狹窄癥狀的比例是30-50 % (參見Berk和Harris (1995) Adv. Intern. Med. 40 :455-501)。作為又一個例子，頸動脈動脈內膜切除術之后，研究的患者中20%腔縮小不大于50% (Clagett等(1986) J. Vase. Surg. 3 :10-23)。不同程度癥狀學證明再狹窄，伴隨不同解剖學部位閉塞前損害，由于一些因素的組合，包括涉及的血管的性質，剩下的疾病的程度，和局部血液動力學。這里使用的“狹窄”指在閉塞病癥或再狹窄中見到的變窄。狹窄伴隨反映血流通過變窄的動脈部分減少的那些癥狀，狹窄增加的病癥稱為一種疾病(即，閉塞病或再狹窄病)。血管無癥狀存在狹窄，只有通過診斷介入，例如血管造影術或血管凝乳酶研究才檢查到。本發明的抗體能被用來治療有或有發生再狹窄危險的患者。有發生再狹窄危險的 患者包括有PTCA的患者。患者可能還已經有插入防止再狹窄的支架。本發明的TNFa抗體可以單獨使用或者與支架結合使用，來防止心血管病患者狹窄復發。

2.充血性心臟衰竭充血性心臟衰竭的病理生理學中涉及TNFa (參見Zhou等(2002)Atherosclerosis 161:153)。充血性心臟衰竭患者TNF a血清水平升高，與疾病的嚴重程度直接成正比(Levine 等(1990)N Engl J Med 323 :236 ;Torre-Amione 等(1996) J AmColl Cardiol 27:1201)。另外，還已經證明TNFa的抑制劑改善充血性心臟衰竭癥狀(Chung 等(2003)Circulation 107 :3133)。這里使用的術語“充血性心臟衰竭”包括特征在于減小心臟向身體供氧能力的癥狀。充血性心臟衰竭的癥狀和征兆包括血流向身體的各種組織的減少，各種器官中過量血液的蓄積，例如，當心臟不能通過大靜脈將返回心臟的血液泵出，勞力性呼吸困難，疲勞，和/或周圍水腫，例如，左心室機能障礙導致的周圍水腫。充血性心臟衰竭可以是急性或慢性。充血性心臟衰竭表現通常發生在都有心臟功能暫時的或持久性損傷的各種心臟或全身病癥之后。這樣的病癥的例子包括高血壓，冠狀動脈病，心臟瓣膜疾病，和心肌病，例如，心肌肥大，擴張，或限制性心肌病。“具有或患有充血性心臟衰竭的患者”是具有涉及損害心臟壓出共同特征鏈接的不同病因學臨床癥狀的病癥，其中心臟不能同等泵出代謝組織需要的血液，或者只有從升高的充入壓才能做到這一點。“有發生充血性心臟衰竭危險的患者”是因為影響患者的心血管系統的一些因素而發生充血性心臟衰竭傾向的患者。期望減小這些患者發生充血性心臟衰竭的危險或者防止發生充血性心臟衰竭。短語“具有充血性心臟衰竭”包括相對于普通人群來說有患有該病癥危險的患者，即使他們可能不會患病，但是有危險因素。例如，有沒有治療的高血壓的患者可能沒有充血性心臟衰竭，但是由于他的或她的高血壓狀況而有危險。在本發明的一個實施方案中，使用抗體D2E7來治療有發生充血性心臟衰竭危險的患者。3.急性冠狀動脈綜合征急性冠狀動脈綜合征的病理生理學中涉及TNF a (參見Libby (1995) Circulation91 :2844)。急性冠狀動脈綜合征包括患者由于血流受限而不能使足夠的氧達到心臟而疼痛。研究發現TNFa在急性冠狀動脈綜合征中起作用。例如，不存在下游血液動力學作用下能誘導心肌梗塞的新的大鼠異促心臟移植-冠狀結扎模型中，施用嵌合可溶性TNF受體(sTNFR)破壞暫時LV改變和機能障礙(Nakamura，等(2003) J. Cardiol. 41 :41)。還發現對心肌層直接注射sTNFR表達質粒，導致急性心肌梗塞(AMI)試驗大鼠梗塞形成大小的減小(Sugano 等(2002) FASEB J 16:1421)。在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體用來對患者治療或防止急性冠狀動脈綜合征，其中急性冠狀動脈綜合征是心肌梗塞或心絞痛。這里使用的術語“心肌梗塞”或“MI”指心臟發作。心肌梗塞涉及由于對那個區域的氧供應不足的心臟區的壞死或永久性損傷。這種壞死一般是由于動脈粥樣硬化或栓子的冠狀動脈中的梗阻引起的。本發明的TNFa抗體治療的MIs包括Q-波和非-Q-波心肌梗塞。大多數心臟發作是由阻塞冠狀動脈中的一個的凝血引起的(給心肌帶來血液和氧的血管)。例如，冠狀動脈中的凝血中斷血液和氧向心肌流動，導致那個區域的心臟細胞死亡。受損傷心肌永久性喪失其收縮能力，并且保留心肌補償它的需要。個體無法抵抗的應激反應也能引起MI。 術語“絞痛”指痙攣，窒息，令人窒息的疼痛，特別是表示心絞痛，其是最常是由于心肌層缺氧癥的發作性胸痛。心絞痛包括變異性心絞痛和勞力性心絞痛。有心絞痛的患者有局部缺血性心臟病，其表現為突然的，嚴重的壓迫性胸骨下疼痛，其經常放射狀涉及左肩并且沿著左臂。心絞痛中涉及TNF a，因為患有MI和穩定心絞痛患者的TNF a水平向上調節(Balbay 等(2001)Angiology 52109)。4.動脈粥樣硬化這里使用的“動脈粥樣硬化”脂肪物質沿著動脈壁沉積的癥狀。這種脂肪物質變厚，變硬，并且可以阻塞動脈。動脈粥樣硬化也稱作動脈硬化，動脈變硬，和動脈斑形成。已經證明抗TNF a多克隆抗體對于中和導致兔動脈硬化模型炎癥和再狹窄的TNF a活性是有效的(Zhou等，上文)。因此，本發明的TNFa抗體能被用來治療和預防患者患動脈粥樣硬化或者有動脈粥樣硬化危險。5.心肌病這里使用的術語“心肌病”用來定義其中心臟肌肉或心肌層變弱，通常導致心臟泵出不適當的疾病。病毒感染，心臟發作，酒精中毒，長期嚴重的高血壓(或血壓高)，或者自身免疫能引起心肌病。在大約75-80%的心臟衰竭患者中，冠狀動脈病是引起心肌病的基礎并且指定為“局部缺血心肌病”。局部缺血心肌病由心臟發作引起，其給心臟肌肉或心肌層帶來瘢痕。受影響的心肌然后不能揮發心臟泵出功能。瘢痕越多或心臟發作次數越多，發生局部缺血心肌病的幾率越大。心肌病不歸于冠狀動脈病基礎，并且指定為“非-局部缺血心肌病”。非-局部缺血心肌病包括但不限于特發性心肌病，肥厚性心肌病，酒精中毒心肌病，擴張性心肌病，圍產期心肌病，和限制性心肌病。D.代謝失調各種各樣的失調，包括代謝失調，例如糖尿病和肥胖的病理生理學中涉及TNFa (Spiegelman 和 Hotanisligil (1993) Cell 73 :625 ;Chu 等(2000) Int J Obes RelatMetab Disord. 24 :1085 ;Ishii 等(2000)Metabolism. 49 :1616)。本發明提供對患者有這樣的代謝失調的患者抑制TNFa活性的方法，該方法包括對患者施用本發明的抗體，抗體部分，或其他TNF a抑制劑，使得患有代謝失調的患者的TNF a活性被抑制。本發明的TNF a抗體還可以用來治療有發生代謝失調危險的患者。代謝失調經常與關節炎相關，包括類風濕性關節炎。在一個實施方案中，本發明的抗體用來治療患有與類風濕性關節炎相關的患者。在另一個實施方案中，本發明的TNFa抗體用來治療與糖尿病或肥胖相關的失調。代謝失調影響身體怎樣處理進行生理功能所需要的物質。很多本發明的代謝失調都共有一些特征，即它們與胰島素抗性關聯，喪失調節血糖的能力，體重增加，并且身體質量指數增加代謝失調的例子包括糖尿病和肥胖。糖尿病的例子包括I型糖尿病，2型糖尿病，糖尿病神經病，外周神經病，糖尿病視網膜病，糖尿病潰瘍，視網膜潰瘍，糖尿病大血管病變，和肥胖。下面更詳細地描述能用本發明的TNFa抗體治療的代謝失調的例子I.糖尿病糖尿病的病理生理學中涉及腫瘤壞死因子。(參見,流如，Navarro J. F. , MoraC. , Maca, Am J Kidney Dis. 2003 Jul ；42 (I) :53-61 ；Daimon M 等，Diabetes Care. 200 3Jul ；26(7) :2015-20 ；Zhang M 等，J Tongji Med Univ. 1999 ; 19 (3) :203-5, Barbieri M等，Am J Hypertens. 2003年7月；16(7) :537-43.)。例如，胰島素抗性生理病理學中涉及TNFa。發現胃腸癌患者的血清TNF水平與胰島素抗性有關(參見，例如，McCall，J.等Br. J. Surg. 1992 ；79 :1361-3)。糖尿病包括兩種最常見類型，即I型糖尿病和II型糖尿病，兩種都是身體不能調節胰島素的結果。胰島素是胰腺反應血液中血糖(葡萄糖)水平升高而釋放的激素。這里使用的術語“I型糖尿病”指當胰腺產生太少的胰島素不能適當地調節血糖水平時而發生的慢性病。I型糖尿病還稱作胰島素依賴型糖尿病，IDMM，少年開始的糖尿病，和I型糖尿病。I型糖尿病代表胰腺P-細胞漸進性自身免疫破壞繼發胰島素不足的結果。術語“2型糖尿病”指當胰腺不能制備足夠的胰島素來保持血液葡萄糖水平正常時發生的慢性病，經常因為身體不能很好地反應胰島素。I型糖尿病還稱作非胰島素依賴型糖尿病，NDDMJP II型糖尿病。給與葡萄糖耐量分析能診斷糖尿病。臨床上，糖尿病經常分成幾個基本種類。這些種類的最主要的例子包括，自身免疫糖尿病，非胰島素依賴型糖尿病(I型NDDM)，胰島素依賴型糖尿病(2型IDDM)，非自身免疫糖尿病，非胰島素依賴型糖尿病(2型NIDDM)，和少年發生糖尿病(MODY)。其他種類，經常稱作第二類，指一些引起或允許糖尿病綜合征發生的可確定癥狀帶來的糖尿病。第二類的例子包括胰腺病引起的糖尿病，激素異常，藥物-或化學品-誘導的糖尿病，胰島素受體異常引起的糖尿病，與遺傳綜合征相關的糖尿病，和其他原因的糖尿病(參見，例如，Harrison' s (1996)第 14 版，New York, McGraw-Hill)。糖尿病表現上述目錄本身并且能引起下面章節中討論的幾種并發癥。因此，本發明的抗體，其抗原結合片段能用來治療糖尿病。在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體，或其抗原結合片段能用來治療與上面鑒定的種類相關的糖尿病。經常用飲食，胰島素配藥，和各種這里描述的藥物來治療糖尿病。因此，本發明的TNFa抗體還可以與通常用來治療代謝失調和通常與糖尿病有關的疼痛的藥物聯合給藥。在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體還可以用來治療與糖尿病相關的基本。糖尿病本身表現很多與糖尿病有關的并發癥和癥狀，包括下面的類別a.糖尿病神經病和外周神經病糖尿病神經病和外周神經病的病理生理學中涉及腫瘤壞死因子(參見Benjafieldet al. (2001)Diabetes Care. 24 :753 ；Qiang, X.等(1998)Diabetologia. 41 1321-6 ；Pfeffer 等(1997)Horm Metab Res. 29 :111)。這里使用的術語“神經病”也稱作神經損害-糖尿病，指其中作為高血糖(高血液糖水平)的結果神經受到損害的糖尿病普通并發癥。確認很多種糖尿病神經病，例如末梢感覺運動多神經病，局灶性運動神經病，和自主神經病。術語“外周神經病”也已知為末梢神經炎和糖尿病神經病，根據這里使用的，指神經衰竭，不能將信息帶給大腦和脊髓或者從大腦和脊髓帶來信息。外周神經病產生綜合征，例如疼痛，喪失感覺，和不能控制肌肉。在一些情況下，神經不能控制血管，腸功能，和導致異常血壓的其他器官，消化，和喪失其他基礎不隨意過程。外周神經病包括對單一神經或神經團(單神經病)的損傷或者可能影響多神經(多神經病)。 影響交感神經和副交感神經的小的有髓鞘的和沒有髓鞘纖維的神經病已知是“外周神經病”。此外，外周神經病的相關疾病，也已知為末梢神經炎和糖尿病神經病，指神經不能將信息帶給大腦和脊髓或者從大腦和脊髓帶來信息。這產生綜合征，例如疼痛，喪失感覺，和不能控制肌肉。在一些情況下，神經不能控制血管，腸功能，和導致異常血壓的其他器官，消化，和喪失其他基礎不隨意過程。外周神經病包括對單一神經或神經團(單神經病)的損傷或者可能影響多神經(多神經病)。術語“糖尿病神經病”指其中作為高血糖(高血液糖水平)的結果神經受到損傷的糖尿病常見并發癥。糖尿病神經病也稱作神經病和神經損傷糖尿病。認知很多種糖尿病神經病，例如末梢感覺運動多神經病，病灶運動原神經病，和自主神經病。b.糖尿病視網膜病糖尿病視網膜病的生理病理學中涉及腫瘤壞死因子(Scholz等(2003)TrendsMicrobiol. 11 :171)。這里使用的術語“糖尿病視網膜病”指對長期糖尿病引起的眼睛視網膜進行性傷害。糖尿病視網膜病包括增生性視網膜病。增生性視網膜病又包括新血管形成，視網膜出血和視網膜脫離。在發展的視網膜病中，視網膜表面上小血管增生。這些血管是脆弱的，有出血傾向并且能引起視網膜出血。出血能隱藏視覺，出血被再吸收時，纖維組織形成視網膜脫離和視覺喪失的造成因素。另外，糖尿病視網膜病包括增生性視網膜病，包括新血管生成，視網膜出血和視網膜脫離。糖尿病視網膜病包括“背景視網膜病”，其包括視網膜層發生變化。c.糖尿病潰瘍和視網膜病潰瘍糖尿病潰瘍的病理生理學中涉及腫瘤壞死因子(參見Lee等(2003)HumTmmun01. 64 614 ；Navarro 等(2003) Am J Kidney Dis. 42 53 ；Daimon 等(2003) DiabetesCare. 26 :2015 ；Zhang 等(1999)J Tongi Med Univ. 19 203 ；Barbieri 等(2003)Am JHypertens. 16:537 ；Venn 等(1993)Arthritis Rheum. 36 :819 ；ffestacott 等(1994)JRheumatol. 21 :1710)。這里使用的術語“糖尿病潰瘍”指作為糖尿病并發癥產生的潰瘍。潰瘍是炎癥，感染惡性狀況，或代謝失調引起的皮膚或粘膜上噴火口樣損傷。典型地，四肢和肢端可發現糖尿病潰瘍，更典型地在腳上。這些糖尿病癥狀引起的潰瘍，例如neurapthy和供血不足,能引起局部缺血和傷口愈合不好。更多的潰瘍可以發展成骨髓炎。一旦發生骨髓炎，單獨用抗生素難以消除并且切斷術可能是必需的。這里使用的術語“視網膜病潰瘍”指引起或導致對眼睛和眼睛視網膜傷害的潰瘍。視網膜病潰瘍包括視網膜出血這樣的癥狀。d.糖尿病大血管病變糖尿病大血管病變的生理病理學中涉及腫瘤壞死因子(Devaraj等(2000)Circulation. 102 191 ；Hattori Y 等(2000)Cardiovasc Res. 46 :188 ;ClauselIN 等(1999) Cardiovasc Pathol. 8 :145)。術語“糖尿病大血管病變”也稱作“大血管病”，在這里使用時，指由糖尿病產生的血管病變。例如，當大的血管中堵塞有脂肪和血凝塊并且粘在血管壁上時,發生糖尿病大血管病變并發癥。糖尿病大血管病變包括例如冠心病，腦血管病，和外周血管病，高血糖和心血管病，和中風這樣的疾病。2.肥胖

肥胖的生理病理學中涉及腫瘤壞死因子(參見,例如，Pihlajamaki J等(2003)Obes Res. 11 912 ；Barbieri 等(2003)Am J Hypertens. 16 537 ；Tsuda 等(2003)JNutr. 133 :2125)。肥胖增加了由于糖尿病，中風，冠狀動脈病，高血壓，高膽固醇，和腎病和膽囊病的惡化和死亡的個人危險。肥胖還可能增加一些類型癌癥的危險，并且可能是發生骨關節炎和睡眠窒息的危險因素。本發明的抗體可以單獨治療肥胖或者聯合治療其他代謝失調,包括糖尿病。E.貧血貧血的生理病理學中涉及TNF a (參見，例如，Jongen-Lavrencic M.,等(1997)J. Rheumatol 24(8) :1504-9 ;Demeter J.,等(2002)Ann Hemato. 81(10) :566-9 ;DiCatoM. , (2003)The Oncologist 8(增刊I) : 19-21)。本發明提供對患有這樣的疾病的患者抑制TNF a活性的方法，該方法包括對患者施用本發明的抗體，抗體部分，或其他TNF a抑制劑，使得患有貧血的患者的TNFa活性被抑制。在一個實施方案中，貧血與類風濕性關節炎有關。這里使用的術語“貧血”指循環紅細胞數目異常地低或者血液中血紅蛋白濃度降低。與類風濕性關節炎有關的貧血的例子包括，例如，慢性病貧血，鐵缺乏貧血，和自身免疫溶血貧血。在一個實施方案中，本發明提供治療貧血的方法，所述貧血是，例如，與類風濕性關節炎有關的貧血，感染和慢性炎癥貧血，鐵缺乏貧血，自身免疫溶血貧血，骨髓癆性貧血，再生障礙貧血，發育不全貧血，純紅細胞貧血和與腎衰竭或內分泌失調相關的貧血，巨紅細胞性貧血，血紅素和珠細胞合成不足，血紅細胞結構缺陷引起的貧血，例如，鐮刀形細胞貧血，和未知起源的貧血，例如鐵粒幼紅細貧血，與慢性感染，例如瘧疾，錐蟲病，HIV，肝炎病毒或其他病毒有關的貧血，和骨髓缺乏引起的骨髓性貧血。F.疼痛很多種疼痛綜合征的生理病理學中涉及TNFa (參見，例如，Sorkin, LS.等，(1997)Neuroscience. 81(I) :255-62 ;Huygen FJ.,等(2002)Mediators Inflamm. 11(I)47-51 ；Parada CA ，等(2003)Eur J Neurosci. 17(9) :1847-52)。本發明提供對患有這樣的疼痛的患者抑制TNFa活性的方法，該方法包括對患者施用本發明的抗體，抗體部分，或其他TNF a抑制劑，使得患有疼痛的患者的TNF a活性被抑制。疼痛定義為很多種，包括受傷害疼痛和神經痛。最常見的疼痛形式可以定義為對神經末梢刺激的影響，它導致向大腦的搏動傳播。疼痛通常還與炎癥病癥有關，包括，例如，類風濕性關節炎。在一個實施方案中，本發明的抗體用來治療患有與類風濕性關節炎有關的疼痛的患者。下面討論其中TNF a活性有害的疼痛病癥的例子。I.神經痛神經痛的生理病理學中涉及腫瘤壞死因子(參見Sommer C.，(1999)Schmerz. 13 (5) :315-23 ;Empl M 等，(2001) Neurology. 56 (10) :1371-7 ；Schafers M 等，(2003) J Neurosci. 23 (7) :3028-38)。這里使用的術語“神經痛”指對神經，脊髓，或大腦損傷導致的疼痛，并且經常涉及神經過敏。神經痛的例子包括慢性后背下部疼痛，與關節炎相關的疼痛，與癌癥相關的疼痛，皰疹神經痛，幻象肢痛，中樞痛，阿片樣物質抗性神經病性疼痛，骨傷疼痛，和圍生產期和分娩期疼痛。神經病性疼痛的其他例子包括手術后疼痛，簇頭痛，牙疼，手術疼痛，嚴重程度，例如三級燒傷產生的疼痛，產后疼痛，咽痛，與泌尿生殖道有 關的疼痛，包括膀胱炎。神經病性疼痛與受傷痛不同。涉及受傷機理的疼痛通常限于組織修復期期間，并且一般通過可購得的止痛藥或阿片樣物質能減輕(Myers, Regional Anesthesia 20 173-184(1995))。神經病性疼痛典型地是時間長或慢性的，并且經常在最初的急性組織傷害之后發生數天或數月。神經病性疼痛包括持久性的，特發疼痛以及異常性疼痛，它是對正常下沒有疼痛的刺激反應的疼痛。神經病性疼痛的特征還在于痛覺過敏，其對通常輕微的疼痛例如針刺刺激有加重反應。和傷害感受性疼痛不一樣。神經病性疼痛一般對阿片樣物質治療有抗藥性(Myers，上文，1995)。因此，本發明的抗體，或者其抗原結合片段用來治療神經病性疼痛。2.傷害感受性疼痛這里使用的術語“傷害感受性疼痛”指通過完整神經途徑傳遞的疼痛，即對身體的傷害引起的疼痛。傷害感受性疼痛包括身體感覺和正常機能疼痛，和對即將發生組織損傷的患者預警性疼痛。為保護患者存在受傷途徑，例如對燒傷反應的疼痛。傷害感受性疼痛包括骨痛，內臟痛，和與軟組織相關的疼痛。內臟疼痛的生理病理學中涉及腫瘤壞死因子(參見Coelho A.，等(2000)Am JPhysiol Gastrointest Liver Physiol. 279 G781-G790 ；Coelho A，等(2000)Brain ResBull. 52(3) :223-8)。內臟疼痛用來指A-S和C神經纖維上的受體介導的傷害感受性疼痛。A-S和C神經纖維位于皮膚，骨胳，結締組織，肌肉和內臟中。內臟痛在分布上模糊，突發性的，并且經常描述為性質是深度，疼痛，推擠和絞痛。內臟痛的例子包括與心臟發作有關的疼痛，其中在臂，頸和/或背部能感覺內臟疼痛，和肝囊疼痛，其中在背部和/或肩部能感覺內臟疼痛。因此，本發明的TNFa抗體，或者其抗原結合片段能用來治療內臟痛。G.肝病很多種肝病的病理生理學中涉及TNFa (參見，例如，Colletti LM ，等(1990) JClin Invest. 85 (6) :1936-43 ;Tiegs G. (1997) Acta Gastroellterol Belg. 60 (2) :176-9;Fernandez ED ,等(2000) J Endotoxin Res. 6 (4) :321-8)。本發明提供對患有這樣的肝病的患者抑制TNFa活性的方法，該方法包括對患者施用本發明的抗體，抗體部分，或其他TNFa抑制劑，使得患有肝病的患者的TNFa活性被抑制。這里使用的術語“其中TNFa活性有害的肝病”意在包括肝臟疾病或其他疾病，其中已經證明患有該病癥的患者體內存在的TNFa是或者懷疑是引起病癥惡化的病癥或因素的病理學原因。因此，其中TNFa活性有害的肝病是其中預期TNF a活性抑制減輕肝病癥狀和/或發展的病癥。肝病包括其中肝功能不適或停止的很多疾病和病癥。肝細胞損傷包括嗜酒肝硬化，a I-抗胰蛋白酶不足，自身免疫肝硬化，起因不明肝硬化，暴發性肝炎，乙型肝炎和丙型肝炎，和脂肪肝。膽道病癥的例子包括膽囊纖維化，原發性膽硬變，硬化膽管炎和膽梗阻(ffiesner, R. H, Current Indications, Contra Indications and Timing for LiverTransplantation (1996), Transplantation of the Liver, Saunders (pubI.) ；Busuttil,R. ff.和 Klintmalm, G. B.(編著)第六章，例如表 6-3 和 6-5 以及圖 6-11 ；Klein, A. ff.，(1998)Partial Hypertension The Role of Liver Transplantation, Musby(publ.),Current Surgical Therapy 6.sup. th Ed. Cameron, J. (ed) 術語“肝炎”指肝的炎癥。各種生物體感染能引起肝炎，包括細菌，病毒(甲肝，乙型肝炎，丙型肝炎等)或寄生物。化學毒素例如醇，藥物，或有毒蘑菇也能損傷肝臟并且引 起它發炎。極少但是極其危險的肝炎原因是撲熱息痛(Tylenol)配藥過量，其可以致死。另外，體內免疫細胞可以攻擊肝臟并且引起自身免疫肝炎。肝炎可以很快地被解決(急性肝炎)，或者引起長期疾病(慢性肝炎)。在一些情況下，可能產生行進性肝損傷或肝衰竭。肝炎的發生率和嚴重程度根據很多因素而不同，包括肝炎損傷的原因和患者所患疾病。在一個實施方案中，本發明的特征在于治療其中TNFa活性有害的肝病的方法，包括對患者施用治療有效量的TNF a抑制劑，使得所述疾病得以治療。在一個實施方案中，肝病選自丙型肝炎病毒，自身免疫肝炎，脂肪肝，乙型肝炎病毒，肝細胞中毒，和非酒精中毒肝炎，包括非酒精中毒脂肪肝(NASH)。下面進一步描述肝病的例子。I.丙型肝炎病毒(HCV)丙型肝炎病毒的生理病理學中涉及腫瘤壞死因子(參見Gonzalez-Amaro. (1994)J Exp Med. 179 841-8 ；Nelson DR，等(1997)Dig Dis Sci 42 :2487-94 ；Kallinowski B，等(1998)Clin Exp Immunol. Ill :269-77)。術語“丙型肝炎病毒”或“HCV”用來描述非甲，非乙型肝炎炎的致病物質。丙型肝炎病毒引起肝部感染。HCV感染引起丙型肝炎。一般情況下，在急性階段，丙型肝炎比乙型肝炎溫和，但是這樣的感染的較大比例變為慢性。HCV是急性肝炎和慢性肝病，包括肝硬化和肝癌，的主要原因。HCV是病毒中的一種(A，B，C，D，和E)，它們共同是病毒肝炎病例的絕大多數的原因。它是黃病毒家族包膜RNA病毒,其表現出具有窄的宿主范圍。病毒的一個重要的特征是其基因組相對易變性，其接著可能與誘發慢性感染的高傾向性(80%)有關。HCV分為幾種不同的基因型，其對測定疾病的嚴重程度和對治療的反應是重要的。在一個實施方案中，能使用本發明的抗體，或者其抗原結合片段治療HCV。在一個實施方案中，用本發明的TNFa抗體治療感染HCV的患者。HCV感染的癥狀(丙型肝炎)包括下面的至少一個黃疸，腹痛(特別是在腹部右上側)，疲勞，食欲衰退，惡心和嘔吐，低度發熱，糞便色淡或土色，尿液暗淡，和全身瘙癢。但是，應該注意到很多感染丙型肝炎的人沒有癥狀，因為經常在常規身體檢查或其他醫學操作的驗血中檢查到丙型肝炎。2.自身免疫肝炎(AIH)自身免疫肝炎的病理生理學中涉及腫瘤壞死因子(參見Cookson S.等，(1999)Hepatology 30(4) :851-6 ; Jazrawi S.等，(2003) Liver Transpl. 9 (4) :377-82)。這里使用的術語“自身免疫肝炎”指特征在于錯把肝臟正常細胞作為外來組織或病原體(引起疾病的物質)的閑游免疫細胞引起的肝臟炎癥的病癥。自身免疫肝炎經常是肝臟軟組織行進性破壞的原因，如果不治療的死亡率很高(Johnson P. J.等，(1993)Hepatology,18 998-1005)。自身免疫肝炎特征中的一個是患者血清的幾乎90%中存在循環自身抗體。這樣的抗體能用來鑒定有自身免疫肝炎的患者。患者之間臨床和血清差異導致AIH分為兩類。I型特征在于患者血清中存在抗-平滑肌(SMA)和/或抗-核抗體(ANA),而II型患者表現抗-肝腎liver kidney微粒體抗體 I 型(LKMl) (HombergJ. C.等，(1987) Hepatology, 7 :1333-1339 ；Maggiore G.等，(1993)R Pediatr. Gastroenterol Nutr. , 17 :376-381)。有 II 型 AIH 的患者中 30%鑒定了血清學標記，抗-肝細胞溶膠I型抗體(LC1)。另外，在檢測的患者中只有10%證實LCl是血清學標記(Martini E.等，(1988)Hepatology,8 :1662-1666)。在一個實施方案中，本發明的 TNFa抗體，或者其抗原結合片段能用來治療AM。3.脂肪肝病脂肪肝病的病理生理學中涉及腫瘤壞死因子(參見Valenti L.等，(2002)Gastroenerology 122(2) :274-80 ；Li Z.等，(2003)Hepatology 37(2) :343-50)。脂肪肝病指其中脂肪(肝細胞)在肝臟中過量積累的疾病。確信脂肪肝病由營養超高，攝食過度，糖尿病和由于給藥的副作用引起。脂肪肝引起嚴重疾病，例如慢性肝炎和肝硬化。患有脂肪肝的患者，脂質，特別是營養脂肪，在肝細胞中積累到其量超過生理允許范圍的程度。從生物化學的觀點看，脂肪肝的判斷標準是營養脂肪的重量是肝組織濕重的大約10% (100毫克/克濕重)或更多。在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體，或者其抗原結合片段能用來治療脂肪肝病。4.乙型肝炎病毒(HBV)乙型肝炎病毒的病理生理學中涉及腫瘤壞死因子(參見Kasahara S.等，(2003) JVirol. 77 (4) :2469-76 ；ffang F. S. , (2003) World J Gastroenterol. 9(4) :641-4 ；BiermerM.等，(2003) J Virol. 77(7) :4033-42)。術語“乙型肝炎病毒”(HBV)用來描述人發生乙型病毒性肝炎的病毒(血清肝炎病毒)。與具有短潛伏期的甲肝病毒(傳染性肝病毒)相反，這是一種潛伏期長的病毒性疾病(大約50至160天)。乙型肝炎病毒通常由注射感染的血液或血制品或者只是通過使用受污染針頭，柳葉刀或其他器械來傳播。臨床上和病理上，該疾病類似于甲肝病毒；但是，沒有交叉保護免疫性。注射之后在血清中發現病毒抗原(HBAg)。乙型肝炎病毒在人群中的比例非常高。大多數感染乙型肝炎的人在6個月內擺脫病毒，其中短期感染已知是“急性”乙型肝炎病例。估計至少大約3億人口是慢性HBV攜帶者。病毒感染導致較小的流感樣癥狀至死亡這樣的臨床癥狀范圍。在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體，或者其抗原結合片段能用來治療HBV感染。5.肝毒性肝毒性的病理生理學中涉及腫瘤壞死因子(參見Bruccoleri A.等，(1997)Hepatology 25 (I) : 133-41 ;Luster M. I.等，(2000)Ann NY_4cad Sci. 919 :214-20 ；Simeonova P.等，(2001) Toxicol Appl Pharmacol. 177 (2) :112-20)。術語肝毒性指藥物治療和其他化學品或藥物引起的肝損傷。對患者鑒定肝毒性的一個最佳指征是血液中一些酶的量升高，例如AST (天冬氨酸氨基轉移酶)，ALT (丙氨酸氨基轉移酶)，和GOT (谷氨酸草酰乙酸轉移酶)。肝毒性能引起永久性傷害和死亡。肝毒性的最初癥狀包括急性胃腸癥狀，例如，嚴重腹瀉。第二階段的肝毒性特征在于癥狀減輕。在這明顯減輕階段，出現肝損傷的生化證據。第二階段通常尿少(尿出減少)。第三階段，在化學品攝入3-5天之后，明顯出現明顯肝損傷，伴隨黃疸出現，還可能發生腎衰竭。化學誘導的(藥物誘導的)肝炎的癥狀類似于傳染性肝炎。在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體，或者其抗原結合片段能用來治療肝毒性。6.肝臟衰竭(例如慢性肝衰竭)肝臟衰竭(例如慢性肝衰竭)的病理生理學中涉及腫瘤壞死因子(參見Takenaka K.等，(1998)Dig Dis Sci. 43(4) :887-92 ;Nagaki M.等，(1999) J Hepatol. 31 (6)997-1005 ；Streetz K.等，(2000)Gastroenterology. 119(2) :446-60)。肝臟衰竭包括慢性肝衰竭，通常歷經數年并且由對肝臟的反復發作引起的(例如醇濫用或肝炎病毒感染)，其緩慢損害器官。較不常見的，肝衰竭是急性的，發生數天或數周。急性肝衰竭的原因包括肝炎病毒感染，藥物，懷孕，自身免疫疾病，和對肝臟的供血突然減少。在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體，或者其抗原結合片段能用來治療肝衰竭。7.非酒精中毒性肝炎，包括NASH非酒精中毒性肝炎，包括非酒精中毒性脂肪肝的病理生理學中涉及腫瘤壞死因子(參見 Crespo J.等，(2001) Ifepatology. 34(6) :1158-63 ；Pessayre D.等，(2002) 282 (2)G193-9)。術語“非酒精中毒性脂肪肝”或“NASH”指比得上過量酒精攝入引起的那些的肝臟中組織學變化啊的發生，但是不存在酒精濫用。NASH特征在于巨囊和/或小囊脂肪變性，小葉和肝門感染，偶爾馬洛里小體纖維化和肝硬化。NASH通常還與高血脂，肥胖和II型糖尿病有關。表征肝脂肪病變和炎癥的附加臨床癥狀包括過度禁食，空腸回腸旁路，總的雙親營養，慢性丙型肝炎，Wilson' s病，和藥物副作用，例如來自皮質類固醇，鈣通道阻滯劑，高劑量合成雌激素，甲氨喋呤和胺碘酮。因此，術語“非酒精中毒性脂肪肝”能用來描述表現出這些活組織檢查結果，并且不存在(a)明顯乙醇消耗，(b)先前為了減少體重的手術，(C)與肝硬化有關的用藥史，(d)遺傳性肝病證據或(e)慢性丙型肝炎病毒感染的那些肝病(參見，Ludwig, J. R.等，(1980)MayoClin. Proc. ,55 434 ；PowellE.等，(1990)Hepatol.,
11:74)。在一個實施方案中，本發明的TNF a抗體，或者其抗原結合片段能用來治療NASH。H.皮膚和指甲病在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體用來治療皮膚和指甲病。這里使用的術語“TNF a活性有害的皮膚和指甲病”意在包括皮膚和/或指甲病和其中患有這種疾病的患者體內TNFa的存在證明是或者懷疑是對病癥惡化有貢獻的病癥或因素的生理病理學原因的皮膚和/或指甲病。因此，TNFa活性有害的皮膚和指甲病是其中預計TNFa活性的抑制減輕病癥的癥狀和/或進程。下面進一步討論本發明的抗體，抗體部分，和其他TNFa抑制劑在特定皮膚和指甲病的治療中的用途。根據下面第III章節中的描述，在一些實施方案中，本發明的抗體，抗體部分，或其他TNFa抑制劑與另一種藥物聯合對患者施用。在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體與用于治療牛皮癬和治療與關節炎相關的牛皮癬的另一種治療物質聯合對患者施用。I.牛皮癬牛皮癖的病理生理學中涉及腫瘤壞死因子(Takematsu等(1989) Arch DermatolRes. 281 398 ;Victor 和 Gottlieb (2002) J Drugs Dermatol. I (3) :264)。牛皮癬被描述為一種皮膚炎癥(刺激和發紅)，特征在于皮膚上紅，癢，腫，干，銀鱗屑頻繁發作。特別地，形成損傷，其包括表皮增生，皮膚的炎癥反應，調節分子例如淋巴因子和炎癥因子的表達的原發和繼發改變。牛皮癬皮膚形態學特征在于表皮細胞更新快，表皮增厚，角質化異常，炎性細胞浸潤到表皮中，和多形核白細胞和淋巴細胞浸潤到表皮層中，導致基礎細胞周期增大。牛皮癬 經常涉及指甲，常常表現為指甲凹陷，增厚，和變色。牛皮癬經常與其他炎癥有關，例如關節炎，包括類風濕性關節炎，腸炎(IBD)，和克隆氏病。牛皮癬的證據最常見在軀干，肘，膝，頭皮，皮膚褶，或手指甲上，但是它可以影響皮膚的任何或全部。正常情況下，新的皮膚細胞需要一個月從下層移至表面。在牛皮癬中，該過程只需要幾天，導致死亡的細胞積累并且形成厚的鱗屑。牛皮癬癥狀包括干燥而發紅的覆蓋有銀鱗屑的皮膚斑，皮膚斑隆起，并且伴隨紅色邊緣，可能開裂并且變得疼痛，通常位于肘，膝，軀干，頭皮，和手上；皮膚損傷，包括膿皰，皮膚裂紋，和皮膚發紅；可能與關節炎例如牛皮癬關節炎相關的關節痛或疼痛。對牛皮癬的治療經常包括局部皮質類固醇，維生素D類似物，和局部或口服視黃醛衍生物，或者它們的組合。在一個實施方案中，本發明的TNFa抑制劑與這些常見治療法聯合施用。在III.B.章節更詳細地描述也能與本發明的TNFa抑制劑聯合治療牛皮癬的另外的治療藥物。牛皮癬的診斷通常以皮膚外觀為基礎，另外可能需要皮膚活組織檢查，或刮除術和皮膚斑培養來排除其他皮膚病。可以利用X-射線來對牛皮癬關節炎檢查關節疼痛是否存在和持久性的。在本發明的一個實施方案中，本發明的TNFa抑制劑用來治療牛皮癬，包括慢性斑牛皮癬滴狀牛皮癬，反白牛皮癬，膿皰牛皮癬，尋常天皰瘡，牛皮癬紅皮病，與腸炎(IBD)相關的牛皮癬，和與類風濕性關節炎(RA)相關的牛皮癬。下面描述本發明的治療方法中包括的特定類型的牛皮癬a.慢性斑牛皮癬慢性斑牛皮癖的病理生理學中涉及腫瘤壞死因子(Asadullah等(1999)Br JDermatol. 141 :94)。慢性斑牛皮癬(也稱作普通牛皮癬)是最常見的牛皮癬形式。慢性斑牛皮癬的特征在于皮膚上隆起變紅的斑，從硬幣大小至大得多。在慢性斑牛皮癬中，斑可以是一塊或多塊，它們大小從幾毫米至幾厘米不等。斑通常是磷狀表面紅色的，并且當輕輕抓撓時有反光，產生“銀色”效果。由慢性斑牛皮癬產生的損傷(經常是對稱的)發生在全身，但是偏愛伸肌表面，包括膝，肘，腰骶區，頭皮和指甲。偶爾慢性斑牛皮癬發生在陰莖，外陰和彎曲部分上，但是通常沒有脫落。慢性斑牛皮癬患者的診斷通常以上述臨床特征為基礎。特定地，慢性斑牛皮癬中損傷的分布，顏色和典型銀色是慢性斑牛皮癬的特征。b.滴狀牛皮癬滴狀牛皮癬指特定的水滴形磷狀斑的牛皮癬形式。滴狀牛皮癬突發經常在感染之后，最可注意的是鏈球菌喉嚨感染。滴狀牛皮癬的診斷通常以皮膚外觀為基礎，事實上經常有近期喉嚨痛病史。c.反白牛皮癬反白牛皮癬是其中患者具有又紅又有炎癥的平滑的通常是濕潤區的牛皮癬形式，和與斑牛皮癬相關的脫落不一樣。反白牛皮癬也稱作擦爛的牛皮癬或曲牛皮癬。反白牛皮癬最常發生在腋窩，腹股溝中，乳房下和生殖器和臀部周圍的其他皮膚皺褶中，并且，作為先露位置的結果，摩擦和出汗會刺激病灶區。d.膿皰牛皮癬 膿皰牛皮癬是引起大小和位置不同的充滿膿的皰的牛皮癬的一種形式，經常發生在手和腳上。皰可能在身體的一定部位，或者在身體上擴散到大的區域。膿皰牛皮癬可以是觸痛或痛的，能引起發熱。e.其他牛皮癬病用本發明的INFa抗體能治療的牛皮癬的其他例子包括紅皮牛皮癬，普通牛皮癬，與IBD相關的牛皮癬，和與關節炎相關的牛皮癬，包括類風濕性關節炎。2.尋常天皰瘡尋常天皰瘡是一種嚴重的自身免疫皮膚病，經常影響口腔粘膜和皮膚。認為尋常天皰瘡的生理病理學是指導皮膚和口腔粘膜橋粒的自身免疫系統。結果細胞彼此不相附著。病癥擴大到填充大量液體，有破裂傾向的大皰，并且具有不同的組織學外觀。這種病死亡率高，對于這種病，抗炎藥是唯一有效治療。患有尋常天皰瘡患者發生的并發癥是難以治愈的疼痛，伴有營養和液體損失和感染。3.特應性皮炎/濕疹特應性皮炎(也稱作濕疹)是歸類于磷狀瘙癢斑的慢性皮膚病。有濕疹的人經常有變應性癥狀象哮喘，發熱，或濕疹的家族史。特應性皮炎是過敏反應(類似于變應性變態反應)，發生在皮膚中，引起慢性炎癥。炎癥引起皮膚瘙癢和磷狀。慢性刺激和抓撓能引起皮膚增厚并且變得皮般堅硬質地。暴露于環境刺激物能使癥狀惡化，這能使皮膚干燥，暴露于水，溫度改變，和緊張狀態。一些癥狀能鑒定特應性皮炎患者，這經常包括強烈瘙癢，水皰滲出和結硬皮，紅皮或水皰周圍的炎癥，皮疹，干燥，皮似的皮膚區，抓撓產生的皮膚擦傷區，和耳溢液/出血。4.肉樣瘤病肉樣瘤病是其中淋巴結，肺，肝，眼，皮膚，和/或其他組織中發生肉芽腫炎癥的疾病。肉樣瘤病包括皮膚肉樣瘤病(皮膚的類肉瘤病)和結節肉樣瘤病(淋巴結的類肉瘤病)。一些癥狀能鑒別肉樣瘤病患者，這經常包括一般的不舒服，不舒適，或有病感覺；發熱，皮膚損傷。5.結節性紅斑結節性紅斑指特征在于典型地在前下腿上的皮膚下有觸痛感的紅色結節的炎癥。與結節性紅斑有關的損傷經常開始是平的但是堅硬的熱紅疼痛的腫塊(大約I英寸大小)。幾天之內損傷可以變得略帶紫色，然后歷經幾褪色至褐色平斑。在一些情況下，結節性紅斑可能與感染有關，包括鏈球菌，球孢子菌，肺結核，乙型肝炎，梅毒，貓抓撓病，兔熱病，耶爾森菌，鉤端螺旋體鸚鵡病，組織胞漿菌，單核細胞增多癥(EBV)。在其他情況下，結節性紅斑可能與對一些藥物的靈敏性有關，包括口服避孕藥，青霉素，磺酰胺類，砜類，巴比妥類，乙內酰脲，非那西汀，水楊酸類，碘化物類，和孕激素。結節性紅斑經常與其他病癥有關,包括白血病，肉樣瘤病，風濕性發熱，和潰瘍性結腸炎。結節性紅斑癥狀本身通常存在于脛部，但是損傷也可以發生在身體的其他部位，包括臀部，小腿，踝關節，大腿和上肢端。結節性紅斑患者的其他癥狀包括發熱和不舒服。6.化膿性汗腺炎化膿性汗腺炎指腹股溝中有時在臂下和乳房下發生的腫大疼痛發炎損害或腫塊。當分泌腺出口由于出汗而阻塞或正常地因為汗腺發育不完全而不能排汗時發生化膿性汗腺炎。腺體中收集的分泌物推動出汗，細菌進入周圍組織，引起皮下硬結，炎癥，和感染。化 膿性汗腺炎局限于含有分泌腺體的身體部分。這些區域是腋下，腹股溝，會陰，肛門周圍，和臍周區。7.扁平苔蘚病扁平苔蘚病的生理病理學中涉及腫瘤壞死因子(Sklavounou等(2000) J OralPathol Med. 29 :370)。扁平苔蘚病指炎癥，瘙癢，和特別的皮膚傷害引起的皮膚和粘膜的病癥。扁平苔蘚病可能與丙型肝炎或某些藥物有關。8. Sweet' s 綜合征Sweet / s綜合征的生理病理學中涉及炎性細胞因子，包括腫瘤壞死因子(Reuss-Borst 等(1993) Br J Haematol. 84 :356)。1964 年 R. D. Sweet 描述的 Sweet' s 綜合征特征在于突發發熱，白細胞增多，和皮膚出疹。出疹由有觸痛感的紅斑的邊界明顯的丘疹和斑組成，顯微鏡檢查可見密集的嗜中性滲出物。損傷可以發生在任何部位，但是偏好身體上部包括臉。各種損傷經常描述為假性皰狀或假性膿皰，但是可以是僅有膿皰，大皰，或潰瘍。對Sweet' s患者經常有口和眼不舒適(結膜炎或鞏膜外層炎)報告。白血病也與Sweet' s綜合征有關。9.白癜風白癜風指皮膚區色素減少導致正常皮膚紋理中不規則白斑的一種皮膚病。白癜風的損傷特征表現為平坦脫色素區。損傷程度確定嚴謹但是不規則。白癜風患者經常受影響的區域包括臉，肘和膝，手和腳，和外陰部。10.硬皮病硬皮病的生理病理學中涉及腫瘤壞死因子(Tutuncu Z等(2002) Cl in ExpRheumatol. 20 (6增刊 28) S 146-51 ；Mackiewicz Z等(2003)Clin Exp RheumatoL 21(1)41-8 ；Murota H 等(2003)Arthritis Rheum. 48 (4) :1117-25)。硬皮病指特征在于皮膚，血管，骨骼肌，和內臟器官變化的彌漫性結締組織疾病。硬皮病也稱作CREST綜合征或進行性全身硬化，通常影響30-50年齡的人群，婦女受到的影響比男性大。硬皮病的原因是未知的。該疾病可以產生局部或全身癥狀。這種病的過程和嚴重程度根據受影響的人而大有不同。皮膚和其他器官中過量的膠原沉積產生這些癥狀。也發生對皮膚和受影響器官中小血管的傷害。在皮膚中，可能發生潰瘍，鈣化，和色素沉著改變。全身特征包括心臟，肺，腎和胃腸道的纖維化和變性。硬皮病患者表現出一些臨床特征，包括，手指和腳趾對熱和冷反應變白，變藍，或變紅(雷諾氏現象)，手指和關節疼痛，強直，和腫脹，皮膚增厚和手和前臂光亮，食管回流或胃灼熱，吞咽困難，和呼吸短促。用來診斷硬皮病的其他臨床癥狀包括，紅細胞沉積率升高(ESR)，類風濕病樣因素提高(RF)，陽性抗細胞核試驗，尿蛋白質分析和血液顯微鏡檢查，可以檢查纖維化的胸部X-射線檢查，和能顯現肺疾病的肺功能研究。11.指甲病指甲病包括所有的指甲異常。具體的指甲異常包括但不限于，凹陷，凹甲，博氏線，匙甲，甲脫離，黃甲，翼狀胬肉(在扁平苔蘚病中可見)，和白甲病。凹陷特征在于甲表面上存在小的凹窩。沿著指甲“橫向”或“縱向”產生棱線或線形突起。博氏線是手指甲中“交叉”(橫向)發生的線形凹窩。白甲病描述為指甲上白色紋或斑。凹甲是指甲形狀異形，其中指甲有隆起的棱線并且薄，并且凹面凹甲經常與缺鐵有關。

用本發明的TNFa抗體能治療的指甲病還包括牛皮癬患者指甲病。牛皮癬患者指甲病包括歸因于牛皮癬的指甲的變化。在某些情況下，只在指甲中而不在身體的其他部位發生牛皮癬。指甲中牛皮癬病改變從輕度至嚴重程度，一般反映指甲板，指甲基質，即指甲生長的組織，指甲床，即甲下組織，和指甲基底處的皮膚涉及牛皮癬病的程度。膿皰型牛皮癬對指甲床的傷害能導致甲損失。牛皮癬中的甲變化落在可以單獨發生或一起發生的一般種類中。在牛皮癬指甲病的一個種類中，指甲板深度凹陷，可能由于牛皮癬引起的甲生長缺陷。另一個種類中，指甲有黃色至黃粉色變色，可能由于牛皮癬對指甲床造成的不適。牛皮癬指甲病的第三小類特征在于指甲板下顯現的白色區域。白色區域實際上是空氣泡斑紋點，在那里指甲板變得與指甲床脫離。指甲周圍還可能有變紅的皮膚。第四類證據是淡黃色斑中指甲板碎裂，即，甲變形，可能由于牛皮癬給指甲基質帶來不適。第五類的特征是由于牛皮癬給指甲基質和甲床帶來不適的指甲總體的損失。本發明的TNFa抗體能用來治療經常與苔蘚病斑有關的指甲病。有苔蘚病斑的患者的指甲經常表現為薄，而且指甲板表面粗糙不平，有縱向棱線或翼狀胬肉。本發明的TNFa抗體能用來治療指甲病，例如這里描述的那些。指甲病經常與皮膚病有關。在一個實施方案中，本發明包括用TNFa抗體治療指甲病的方法。在另一個實施方案中，指甲病與另一種疾病有關，包括皮膚病，例如牛皮癬。在另一個實施方案中，與指甲病有關的疾病是關節炎，包括牛皮癬關節炎。12.其他皮膚和指甲病本發明的TNFa抗體能用來治療其他皮膚和指甲病，例如慢性光化性皮炎，天瘡皰樣大皰，和簇狀脫發。慢性光化性皮炎(CAD)也稱作光敏性皮炎/光化性視黃酸衍生物綜合征(H)/AR)。CAD是特別是在暴露于陽光或人造光下的區域中皮膚變得紅腫的癥狀。一般來說，CAD患者對接觸他們皮膚的某些物質有變應性，特別是各種花，木，香水，光曬和橡膠化合物。天皰瘡樣大皰指特征在于在軀干和肢端上生成大的水皰的一種皮膚病。簇狀脫發指特征在于頭皮或胡須中完全脫發的圓形斑的發遺失。I.脈管炎各種脈管炎的病理生理學中涉及TNF a (參見，例如，Deguchi等(1989) Lancet. 2 745)。在一個實施方案中，本發明提供對患有其中TNFa活性有害的脈管炎的患者抑制TNFa活性的方法。這里使用的術語“其中TNFa活性有害的脈管炎”意在包括經證明患有該疾病的患者體內TNFa的存在是或懷疑是對疾病的惡化有貢獻的病癥或因素的病理生理學原因。例如，通過患有該病癥的患者生物液體中TNFa濃度的升高可以印證這樣的病癥(例如，患者血清，血漿，關節液中TNF a濃度的升高)，使用如上所述的抗-TNF a抗體能夠檢測。其中TNFa活性有害的脈管炎有很多例子，包括貝切特氏病。下面進一步討論本發明的抗體，抗體部分，和其他TNF a抑制劑在治療特定脈管炎中的用途。在一些實施方案中，如下所述，本發明的抗體，抗體部分，或其他TNFa抑制劑與另一種治療藥物聯合給藥。本發明的抗體能用來治療TNFa活性有害的脈管炎，其中預期TNF a活性的抑制減輕脈管炎的癥狀和/或進程或者防止脈管炎。通過臨床癥狀和化驗能鑒定患有或者有發生脈管炎危險的患者。例如，有脈管炎的患者經常產生抗嗜中性白細胞的胞質中的某些蛋白質的抗體，抗嗜中性白細胞胞質抗體(ANCA)。因此，在某些情況下，通過測定ANCA存在的 試驗可以證明脈管炎。脈管炎及其結果可以是疾病的唯一表現或者可以是另一種原發病的第二病征。脈管炎可以局限于一個器官或者它可以影響幾個器官，取決于并發癥，所有規格的動脈和靜脈能受到影響。脈管炎能影響身體內的任何器官。在脈管炎中，管腔通常是受到危害的，這與涉及的血管供應的組織局部缺血有關。由該進程可以導致病癥范圍寬，是由于能涉及任何類型，大小和部位的血管的事實(例如，動脈，靜脈，小動脈，小靜脈，毛細血管)。如下所述，一般根據受影響血管的規格將脈管炎分類。應該注意，一些小的或大的脈管炎可能涉及中等大小的血管；但是大的和中等大小的血管脈管炎不涉及比動脈小的血管。大的血管疾病包括，巨細胞動脈炎，也已知為顳動脈炎或顱側動脈炎，風濕性多肌痛，和高安氏病或動脈炎，其也已知為主動脈綜合征，年輕女性動脈炎和無脈病。中等血管病包括但不限于，典型結節性多動脈炎和Kawasaki' s病，也已知為粘膜皮膚淋巴結綜合征。小血管病的非限制性例子是貝切特氏綜合征韋格內氏肉芽腫，微管多脈管炎，過敏性脈管炎，小血管脈管炎，Henoch-Schonlein紫癲，變應性granulamotosis和脈管炎,也已知為Churg Strauss綜合征。其他脈管炎包括但不限于,分離的中樞神經系統脈管炎，和血栓閉塞性脈管炎，也已知為伯格氏病。典型結節性多動脈炎(PAN)，微管PAN，和變應性granulomatosis經常分為一組，并且稱作全身引起壞死的脈管炎。下面進一步描述脈管炎I.大血管脈管炎在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體用來治療有大血管脈管炎的患者。這里使用的術語“大血管”指主動脈和朝向身體大部分區域的最大的旁支。大血管包括，例如，主動脈，及其旁支和相應的靜脈，例如鎖骨下動脈；頭臂動脈；共有頸動脈；無名靜脈；內和外頸靜脈；肺動脈和靜脈；靜脈腔；腎動脈和靜脈；股動脈和靜脈；和頸動脈。下面描述大血管脈管炎的例子。a.巨細胞動脈炎(GCA)巨細胞動脈炎的病理生理學中涉及腫瘤壞死因子(Sneller，M. C. (2002)Cleve.Clin. J. Med. 69 SII40-3 ；Schett, G.，等(2002) Ann. Rheum. Dis. 61 :463)。巨細胞動脈炎(GCA)，指涉及炎癥并且對血管損傷的脈管炎，特別是頸的外頸動脈旁支的大的或中等的動脈。GCA也稱作暫時脈管炎或顱側脈管炎，并且是老年最常見的原發性脈管炎。它幾乎只是影響50歲以上的個體。但是關于40歲或更年輕的患者也有不少文獻報道。GCA通常影響顱外動脈。GCA能影響頸動脈分支，包括顳動脈。GCA還是一種涉及多個部位動脈的全身性疾病。病理組織學上，GCA是一種全身動脈炎，炎性單核細胞滲入血管壁，常常形成朗罕氏巨細胞。存在內膜增生，肉芽腫炎癥和內部彈性層的破裂。器官的病理學發現是與涉及的血管相關的局部缺血的結果。GCA患者表現出一些臨床癥狀，包括發熱，頭痛，貧血和高的紅細胞沉積速度(ESR)。GCA的其他典型指征包括頜骨或舌不暢，頭皮易觸痛，全身癥狀，淡色視神經盤水腫(特別是'粉筆白'視神經盤水腫)，和視覺障礙。通過顳動脈活組織檢查證實診斷。

b.風濕性多肌痛風濕性多肌痛的病理生理學中涉及腫瘤壞死因子(Straub，R. H.，等(2002)Rheumatology (Oxford) 41 :423 ；Uddhammar, A.,等(1998) Br. J Rheumatol. 37 :766)。風濕性多肌痛指與中等或嚴重程度的頸部，肩部，和髖部的肌疼痛和強直相關的風濕性病癥，在早晨最明顯。在風濕性多肌痛患者的大多數循環單核細胞中也檢查出IL6和IL-I表達。風濕性多肌痛可能獨立發生，或者它可以與GCA共同存在或者在GCA之前，它是一種血管炎癥。c. Takayasu' s 動脈炎Takayasu ' s動脈炎的病理生理學中涉及腫瘤壞死因子(Kobayashi, Y.和Numano, F. (2002)Intern. Med. 41 :44 ；Fraga, A.和 Medina F. (2002)Curr.RheumatolRep. 4 :30)。Takayasu ' s動脈炎指以主動脈及其主要分支的炎癥為特征的脈管炎。Takayasu' s動脈炎(也已知是主動脈綜合征,年輕女性動脈炎和無脈病)影響胸部和腹部主動脈及其主要分支或肺動脈。主動脈壁及其分支(例如，頸動脈，inominate，和鎖骨下動脈)纖維化增厚能導致主動脈產生的血管腔大小的減小。這種狀況典型地影響腎動脈。Takayasu' s動脈炎主要影響年輕女性,通常是20_40歲的,特別是亞裔,并且可能表現出不舒服，關節痛和逐漸開始肢體跛行。大多數患者有不對稱減少的脈搏，通常伴隨兩臂之間血壓不同。可能發生冠狀動脈和/或腎動脈狹窄。Takayasu / s動脈炎的臨床特征可以分為早期炎癥特征和晚期炎癥特征。Takayasu' s動脈炎早期炎癥期的臨床特征是不舒服，低燒，體重減輕，肌痛，關節痛，和出現紅斑。Takayasu' s動脈炎的晚期特征是動脈的纖維化狹窄和血栓形成。主要結果臨床特征是局部缺血現象，例如弱的和不對稱的動脈脈搏，兩臂之間血壓差異，視覺障礙，例如盲點和偏盲，其他神經學特征包括眩暈和暈厥，輕偏癱或中風。由于動脈狹窄和血栓形成的局部缺血產生臨床特征。2.中等血管病在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體用來治療中等血管脈管炎患者。術語“中等血管脈管炎”用來指是主內臟動脈的那些血管。中等血管的例子包括腸系膜動脈和靜脈，髖動脈和靜脈，和頜動脈和靜脈。下面描述中等血管脈管炎的例子。a.結節性多動脈炎結節性多動脈炎的病理生理學中涉及腫瘤壞死因子(DiGirolamo, N.,等(1997)J. Leukoc. Biol. 61 :667)。結節性多動脈炎或結節性動脈外膜炎指其中小的或中等大小的動脈由于受到免疫細胞的攻擊而變得腫大和受損的嚴重血管病。結節性與兒童相比，多動脈炎通常更常影響成年人。它損害受影響動脈供血的組織，因為它們沒有適當的血液供應就接受不到足夠的氧和營養。結節性多動脈炎患者表現出的癥狀一般是由對受影響器官的損傷而引起的，經常是皮膚，心臟，腎，和神經系統。結節性多動脈炎的一般癥狀包括發熱，疲勞，虛弱，無食欲，體重減輕。肌肉痛(肌痛)和關節痛(關節疼痛)是常見的。結節性多動脈炎患者的皮膚還可能表現出皮疹，腫漲，潰瘍，和腫塊(結節損害)。典型的PAN(結節性多動脈炎)是小的至中等肌肉動脈的全身性動脈炎，其中涉及腎動脈和內臟動脈的最常見。50%的PAN患者腹部血管有動脈瘤或閉塞。典型的PAN不涉及肺動脈，但是涉及支氣管血管。風濕性肉芽腫，明顯的嗜酸性細胞增多和變應性素質不是癥狀部分。雖然可能涉及任何器官，但是最常見的表現包括外周神經病，多路單神經炎，腸局部缺血，腎局部缺血，睪丸痛和網狀青斑。 b. Kawasaki 1 s 病Kawasaki ' s病的病理生理學中涉及腫瘤壞死因子(Sundel, R. P. (2002)Curr.Rheumatol. Rep. 4 :474 ；Gedalia,A. (2002)Curr. Rheumatol. Rep. 4 :25)。雖然Kawasaki' s病的原因是未知的，但是它與冠狀動脈急性炎癥有關，提示與這種疾病有關的組織損傷可以由發炎原物質例如TNFa介導。Kawasaki' s病指影響粘液膜，淋巴結，血管內層，和心臟的脈管炎。Kawasaki / s病還經常被稱作粘膜皮膚淋巴結綜合征，粘膜皮膚淋巴結病，和嬰兒多動脈炎。患有Kawasaki' s病的患者發生脈管炎，經常涉及冠狀動脈，能導致心肌炎和心包炎。經常地，隨著急性炎癥減輕，冠狀動脈可能會發生動脈瘤，血栓形成，并且導致心肌梗塞。Kawasaki / s病是與手掌和足底水腫相關的發熱性全身脈管炎，伴有頸部淋巴結腫大，嘴唇干裂和“草莓舌”。雖然在全身血管中發現炎癥，但是最常見的最終器官損傷部位是冠狀動脈。Kawasaki' s病主要影響5歲以下的兒童。日本發生率最高，但是西方變得逐漸增長，現在是美國兒童后天心臟病的主要原因。Kawasaki' s病最嚴重的并發癥是冠狀動脈和動脈瘤形成，發生在沒有接受治療的第三種患者身上。3.小血管疾病在一個實施方案中，本發明的TNFa用來治療具有小血管脈管炎的患者。術語“小血管”用來指小動脈，小靜脈和毛細血管。小動脈是僅具有I或2層平滑肌細胞并且是毛細血管網的末端和毛細血管網持續不斷的動脈。小靜脈將血液從毛細血管網送至靜脈和毛細血管連接小動脈和小靜脈。下面描述小血管脈管炎的例子。a.貝切特氏病貝切特氏病的病理生理學中涉及腫瘤壞死因子(Sfikaki s，P.P. (2002) Ann.Rheum. Dis. 61 :ii51_3 ；Dogan, D.和 Farah, C. (2002)Oftalmologia. 52 :23)。貝切特氏病是涉及全身血管炎癥的一種慢性病。貝切特氏病還可以引起各種類型的皮膚損傷，關節炎，腸炎，和腦膜炎(大腦和脊髓膜炎癥)。作為貝切特氏病的結果，該病癥的患者遍布全身的組織和器官中有炎癥，包括胃腸道，中樞神經系統，血管系統，肺，和腎。貝切特氏病在男性比女性更常見三倍，并且在東地中海和日本最常見。貝切特氏病患者表現的臨床癥狀包括經常發生的口腔潰瘍(與潰瘍瘡類似)，經常發生的生殖器潰瘍，和眼部炎癥。貝切特氏病患者的TNFa，IL-8，IL-1，IL-6，INF-y和IL 12的血清水平升高，并且證明這些因子的產生在貝切特氏病患者的單核細胞中升高(參見，例如，Inflammatory Disease of Blood Vessels (2001)Marcel Dekker, Inc.,編著G. S. Hoffman 和 C. M. ffeyand, p. 473)。b.韋格內氏肉芽腫病韋格內氏肉芽腫病的病理生理學中涉及腫瘤壞死因子(Marquez，J.，等(2003)Curr. Rheumatol. Rep. 5 128 ；Harman, L. E.和 Margo, C. E. (1998) Surv. Ophthalrraol. 42 458)。韋格內氏肉芽腫病指引起上呼吸道(鼻，竇，耳)，肺，和腎中血管炎癥的脈管炎。韋格內氏肉芽腫病還稱作中線肉芽腫。韋格內氏肉芽腫病包括涉及呼吸道，和影響小的至中等大小血管的引起壞死的脈管炎的肉芽腫炎癥。韋格內氏肉芽腫病患者經常有關節炎(關節炎癥)。受影響患者也可能發生腎小球性腎炎，但是事實上可能涉及所有的器官。韋格內氏肉芽腫病患者典型地表現出臨床癥狀，包括經常發生的竇炎或或鼻出 血，粘膜潰瘍，中耳炎，咳嗽，咳血和呼吸困難。韋格內氏肉芽腫病的第一癥狀常常包括上呼吸道癥狀，關節疼痛，虛弱，和疲勞。c. Claurg-Strauss 綜合征Claurg-Strauss綜合征的病理生理學中涉及腫瘤壞死因子(Gross, W. L(2002)Curr. Opin. Rheumatol. 14 :11 ；Churg, ff. A. (2001)Mod. Pathol. 14 :1284)。Churg-Strauss綜合征指全身性的并且早期表現信號是氣喘和嗜酸性細胞增多癥。Churg-Strauss綜合征還被稱作變應性肉芽腫病和脈管炎，并且在變應性鼻炎，哮喘和嗜酸性細胞增多癥背景下發生。Churg-Strauss綜合征還發生竇炎和肺滲出物，主要影響肺和心臟。外周神經病，冠狀動脈炎和涉及胃腸是常見的。根據American College of Rheumatology (ACR)建立的標準能診斷患有Churg-Strauss綜合征的患者。這些標準是為了將CSS與其他形式的脈管炎區分開來。不是所有的患者符合每一項標準。事實上，一些病例可能只符合2或3項標準，但是仍然將他們歸類為Churg-Strauss綜合征。選擇的六項ACR病征(標準)是最好地將Churg-Strauss綜合征與其他脈管炎區別開來的那些。這些標準包括1)氣喘；2)嗜酸性細胞增多[以不同WBC量為基礎> 10% ] ；3)單神經病；4)胸部X-射線檢查出暫時肺滲出液；5)副鼻竇異常；和6)包含血管外嗜酸性細胞血管的活組織檢查。J.其他TNF a -相關疾病在一個實施方案中，本發明特征是其中TNFa活性有害的TNF a -相關疾病的治療方法，包括對患者施用治療有效量的TNF a抑制劑，使得所述TNF a -相關疾病得以治療。下面進一步討論其中TNF a活性有害的TNF a -相關疾病。I.克隆氏病-相關病癥腸炎(IBD)，包括克隆氏病的生理病理學中涉及腫瘤壞死因子(參見，例如，Tracy, K. J.，等(1986)Science 234 :470-474 ；Sun, X-M.，等(1988)J. Clin. Invest. 81 1328-1331 ；MacDonald, T. T ，等(1990)Clin. Exp. Immunol. 81 :301-305)。在一個實施方案中，本發明的TNFa抑制劑用來治療經常與IBD和克隆氏病有關的病癥。術語“腸炎(IBD)-相關病癥”或“克隆氏病相關病癥”在這里可互換使用，用來描述通常與IBD和克隆氏病有關的病癥和并發癥。克隆氏病相關病癥的例子包括膀胱，陰道，和皮膚瘺管；腸梗阻；膿腫；營養不足；皮質類固醇使用帶來的并發癥；關節炎癥；結節紅斑；壞疽性膿皮病；和眼損傷。通常與克隆氏病有關的其他病癥包括克隆氏病-相關的關節痛，成瘺克隆氏病，不確定結腸炎，和囊炎。2.少年關節炎少年關節炎，包括少年類風濕性關節炎的生理病理學中涉及腫瘤壞死因子(Grom等(1996) Arthritis Rheum. 39 :1703 ;Mangge 等(1995) Arthritis Rheum. 8 :211)。在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體用來治療少年類風濕性關節炎。這里使用的術語“類風濕性關節炎”或“JRA”指16歲之前發生的可以引起關節或結締組織損傷的慢性炎癥疾病。JRA也稱作少年慢性多關節炎和斯提爾氏病。JRA引起16歲或更小孩子6周以上的關節炎癥和強直。炎癥引起關節發紅，腫脹，發熱，和痛苦。任何關節都能受到影響并且炎癥可以限制受影響關節的活動。JRA的一個類 型還能影響內部器官。根據涉及的關節數目，癥狀，以及血液化驗發現的某些抗體的存在或不存在，經常將JRA分為三種類型。這些分類有助于醫生確定疾病怎樣發展以及內部器官或皮膚是否受到影響。JRA的分類包括如下a.少數關節JRA，其中患者的四個或更少的關節受到影響。少數關節是JRA最常見的形式，并且典型地影響大關節，例如膝蓋。多關節HRA，其中五個或多個關節受到影響。最常涉及小關節，例如手足關節，但是該疾病也可以影響大關節。c.全身性JRA，特征在于關節腫脹，發熱，光皮膚疹，并且可能影響內臟器官，例如心臟，肝臟，脾，和淋巴結。全身性JRA還稱作斯提爾氏病。這些孩子中小比例會在很多關節發生關節炎，并且能有持續到成年期的嚴重關節炎。3.子宮內膜異位子宮內膜異位的生理病理學中涉及腫瘤壞死因子，因為子宮內膜異位婦女TNF的腹膜水平升高(Eisermann J,等(1988)Fertil Steril 50 573 ；Halme J. (1989) Am JObstet Gynecol 161 :1718 ；Mori H,等(1991)Am J Reprod Immunol 26:62 ; TaketaniY,等(1992)Am J ObstetGynecol 167 :265 ；Overton C,等(1996)Hum Reprod 1996 ；11 380)。在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體用來治療子宮內膜異位。這里使用的術語“子宮內膜異位”指一種癥狀，其中正常規范子宮(子宮內膜)的組織在身體的其他部位生長，引起疼痛，出血不規律，并且常常不孕。4.前列腺炎前列腺炎的生理病理學中涉及腫瘤壞死因子，因為與對照相比較，慢性前列腺炎和慢性骨盆痛的男性精液中TNF和IL-I水平顯著升高(Alexander RB，等(1998) Urology52 744 ；Nadler RB，等(2000) J Urol 164 :214 ;0rhan 等(2001) Int J Urol 8:495)。此夕卜，大鼠前列腺炎模型中，TNF水平與對照物相比也升高(Asakawa K，等(2001)HinyokikaKiyo 47 :459 ;Harris 等(2000) Prostate 44:25)。在一個實施方案中，本發明的 TNF a 抗體用來治療前列腺炎。這里使用的術語“前列腺炎”指一種前列腺炎癥。前列腺炎也稱作骨盆痛綜合征。前列腺炎本身有多種表現形式，包括非細菌前列腺炎，急性前列腺炎，細菌前列腺炎，和急性前列腺炎。急性前列腺炎指突然發生的前列腺炎癥。急性前列腺炎通常由前列腺的細菌感染引起。慢性前列腺炎是逐漸發生的，持續長時間的前列腺炎癥，并且典型地有銳敏綜合征。慢性前列腺炎通常也是由細菌感染引起。5.自身免疫病很多自身免疫病，包括狼瘡的生理病理學中涉及腫瘤壞死因子(Shvidel等(2002)Hematol J. 3 32 ；Studnicka-Benke 等(1996)Br J Rheumatol. 35 :1067)。在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體用來治療自身免疫病，例如狼瘡，多系統自身免疫疾病，和自身免疫聽覺喪失。這里使用的術語“狼瘡”指稱作紅斑狼瘡的慢性炎癥自身免疫疾病，其可以影響很多器官系統，包括皮膚，關節和內臟器官。狼瘡是一般性術語，其包括很多特定類型的狼瘡，包括全身性狼瘡，狼瘡腎炎，和狼瘡腦炎。全身狼瘡(SLE)中，身體自然防御轉向抵抗身體，并且游閑免疫細胞攻擊身體的組織。可以產生抗體，抗體能與身體的血細胞，器官，和組織 反應。這種反應導致免疫細胞進攻受影響系統，產生慢性疾病。狼瘡腎炎，也稱作狼瘡血管小球病，是一種腎病，通常是SLE的并發癥，并且特征是對腎小球損傷并且腎功能進行性損失。狼瘡腦炎指SLE的另一種并發癥，它是大腦和/或中樞神經系統炎癥。6.脈絡膜新血管形成脈絡膜新血管形成的生理病理學中涉及腫瘤壞死因子。例如，在手術切除的脈絡膜新血管膜中，新血管染色對于TNF和IL-I成陽性(Oh H等(1999) Invest OphthalnaolVis Sci 40 :1891)。在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體用來治療脈絡膜新血管形成。這里使用的術語“脈絡膜新血管形成”指從脈絡膜開始通過脈絡膜基底膜破碎進入視網膜下色素上皮(sub-RPE)或視網膜下腔的新血管生長。脈絡膜新血管形成(CNV)是該病癥患者視覺喪失的主要原因。7.坐骨神經痛坐骨神經痛的生理病理學中涉及腫瘤壞死因子(Ozaktay等(2002)Eur SpineJ. 11 :467 Jrisby 等(2002) Eur Spine J. 11:62)。在一個實施方案中，本發明的 TNF a抗體用來治療坐骨神經痛。這里使用的術語“坐骨神經痛”指一種癥狀，涉及對坐骨神經傷害引起的腿的受傷活動和/或感覺。坐骨神經痛通常還稱作坐骨神經神經病和坐骨神經機能障礙。坐骨神經痛是外周神經病的一種形式。當對于位于腿的背部的坐骨神經有損傷時發生坐骨神經痛。坐骨神經控制膝和小腿背部的肌肉并且提供對小腿和腳掌的感覺。坐骨神經痛是另一種病癥的指征，包括腰椎盤突出，脊柱狹窄，椎間盤退化病，isthmicspondyloisthesis和圓維形綜合征。8.斯耶格倫氏綜合征斯耶格倫氏綜合征的生理病理學中涉及腫瘤壞死因子(Koski等(2001)Clin ExpRheumatol. 19 :131)。在一個實施方案中，本發明的TNF a抗體用來治療斯耶格倫氏綜合征。這里使用的術語“Sjogren' s syndrome”指一種全身性炎癥病癥,特征在于口干燥,較少的撕裂，和其他干燥粘膜，并且經常與自身免疫風濕病例如類風濕性關節炎有關。眼口干燥是這種疾病最常見的癥狀。這些癥狀可以單獨發生，或者伴有與類風濕性關節炎或其他結締組織疾病有關的癥狀。唾液腺可能相關地增大。其他器官可能受到影響。該綜合征可能與類風濕性關節炎，全身紅斑狼瘡，硬皮病，多肌炎，和其他疾病有關。9.眼色素層炎
眼色素層炎的生理病理學中涉及腫瘤壞死因子(Wakefield和Lloyd(1992)Cytokine 4 :1 ;Woon 等(1998)Curr Eye Res. 17 :955)。在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體用來治療眼色素層炎。這里使用的術語“眼色素層炎”指眼色素層炎癥，眼色素層是鞏膜和視網膜之間的層，包括虹膜，睫狀體和脈絡膜。眼色素層炎也一般稱作虹膜炎，扁平部睫狀體炎，chroiditis，脈絡膜視網膜炎，前眼色素層炎，和后眼色素層炎。眼色素層炎最常見形式是前眼色素層炎，它涉及眼前部的炎癥。這種癥狀經常稱作虹膜炎。在一個實施方案中，術語眼色素層炎指不包括與自身免疫疾病相關的炎癥的眼色素層炎癥，即，不包括自身免疫眼色素層炎.10.濕黃斑變性濕黃斑變性的生理病理學中涉及腫瘤壞死因子。在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體用來治療濕黃斑變性。這里使用的術語“濕黃斑變性”指影響黃斑(眼視網膜的中心部分)并且引起視覺敏度降低并且可能喪失中樞視力的一種病癥。濕黃斑變性患者在視網膜下生成新的血管，這引起出血，腫脹，和斑痕組織。 11.骨質疏松骨質疏松的生理病理學中涉及腫瘤壞死因子(Tsutsumimoto等(1999) J BoneMiner Res. 14 :1751)。骨質疏松用來指特征在于骨密度進行性減少并且骨組織變薄的一種病癥。當身體不能形成足夠的新的骨，或者當身體重吸收太多的以前的骨時，或者兩種情況時，發生骨質疏松。本發明的TNFa抗體或者其抗原結合片段用來治療濕黃斑變性。12.骨關節炎骨關節炎的生理病理學中涉及腫瘤壞死因子(Venn等(1993) ArthritisRheum. 36 :819 ;Westacott 等(1994) J Rheumatol. 21 :1710)。骨關節炎(OA)也稱作肥大骨關節炎，關節病，和變質關節病。OA是一種骨關節慢性退化病，它影響所有年齡段的成年人的特定關節，通常是膝，髖，掌關節和脊柱。OA表現下面的一些特征，包括與發生“潰瘍”或噴火口相關的關節軟骨變性和變薄，骨贅形成，邊界骨肥大，和snyovial膜變化以及受影響關節增大。此外，骨關節炎伴隨疼痛和強直，特別是在長時間活動之后。本發明的抗體，或者其抗原結合片段能用來治療骨關節炎。骨關節炎放射學特征包括關節腔縮小，軟骨下硬化，骨贅病，軟骨下囊腫形成，骨質疏松體質(或“關節游動小體”)。用來治療骨關節炎的藥物包括各種非留族化合物抗炎藥(NSAIDs)。另外，C0X2抑制劑，包括 Celebrex, Vioxx, and Bextra, aand Etoricoxib,也被用來治療 0A。可直接注射到關節中的留族化合物也可以用來減輕炎癥和疼痛。在本發明的一個實施方案中，本發明的TNF a抗體與NSAIDS，C0X2抑制劑，和/或留族化合物聯合給藥。13.其他本發明的抗體，和抗體部分，也能用來治療其中TNFa活性有害的各種其他病癥。生理病理中涉及TNFa活性從而能用本發明的抗體或抗體部分治療的其他疾病和病癥的例子包括與年齡有關的惡病質，早老性癡呆，腦水腫，炎性腦損傷，癌癥，癌癥和惡病質，慢性疲勞綜合征，皮肌炎，藥物反應，例如Stevens-Johnson綜合征和Jarisch-Herxheimer反應，脊髓之內和/或周圍的水腫，家族周期性發熱，Felty' s綜合征，纖維化，腎小球性腎病(例如鏈球菌感染后腎小球腎炎或IgA腎病)，假體松弛，顯微多脈管炎，混合型結締組織病癥，多發性骨髓瘤，癌癥和惡病質，多器官失調，脊髓發育不良綜合征，睪丸炎骨質溶解，胰腺炎，包括急性，慢性，和胰腺膿腫，牙周病多肌炎，進行性腎衰竭，假痛風，壞疽性膿皮病，復發性多軟骨炎，風濕性心臟病，肉樣瘤病,硬化膽管炎，中風,胸腹主動脈動脈瘤修補(TAAA)，TNF受體相關周期性綜合征(TRAPS)，與黃熱病疫苗接種相關的綜合征，與耳，慢性耳炎，或兒科耳炎相關的炎性疾病，有或沒有膽脂瘤的慢性中耳炎，兒科耳炎，myotosis,卵巢癌，結腸直腸癌，與移植相關的病癥，與誘發炎癥綜合征相關的治療(例如，施用IL-9之后的綜合征)，與再灌注損傷有關的病癥。要明白上面提到的所有TNFa-相關病癥包括成年和未成年疾病形式。還要明白上面提到的所有病癥包括疾病的慢性和急性形式。另外，本發明的TNFa抗體能單獨或者與另一種藥物聯合用來治療上面提到的TNF a -相關病癥，例如，針對患有眼色素層炎和狼瘡的患者。III.藥物組合物和藥物施用

A.組合物和給藥本發明的抗體，抗體部分，和其他TNF a抑制劑能被摻入到適合對患者給藥的藥物組合物中。典型地，所述藥物組合物含有本發明的抗體，抗體部分，和其他TNF a抑制劑和藥學可接受載體。這里使用的術語“藥學可接受載體”包括任何和所有的溶劑，分散介質，包衣，抗細菌劑和抗真菌劑，等滲劑和延遲吸收劑，等等，它們是生理學可配伍的。藥學可接受載體的例子包括下面的一種或幾種水，鹽水，磷酸鹽緩沖鹽水，葡萄糖，甘油，乙醇等等，以及它們的組合。在很多情況下，組合物中優選含有等滲劑，例如，糖，多元醇，例如甘露糖醇，山梨糖醇，或氯化鈉。藥學可接受載體可以進一步包括少量輔助物質，例如濕潤劑或乳化劑，防腐劑或緩沖劑，它們提高本發明的抗體，抗體部分，或其他TNF a抑制劑的貯存期或功效。本發明的組合物可以是各種各樣的形式。這些包括，例如，液體，半固體和固體劑量形式，例如液體溶液(例如，可注射和可灌注溶液)，分散劑或混懸劑，片劑，丸劑，粉末齊U，脂質體和栓劑。優選形式取決于想要的給藥方式和治療應用。典型的優選的組合物是可注射或可灌注溶液，例如與用其他抗體或其他TNF a抑制劑對人被動免疫使用的那些類似的組合物。優選的給藥方式是腸胃外(例如，靜脈內，皮下，腹膜內，肌內)。在優選的實施方案中，通過靜脈內灌注或注射施用抗體或其他TNFa抑制劑。在另一個優選的實施方案中，通過肌內或皮下注射施用抗體或其他TNFa抑制劑。典型地，治療組合物必須滅菌并且在制備和貯存條件下必須是穩定的。組合物能配制成溶液，微乳液，分散體，脂質體，或者適合高藥物濃度的其他有序結構。滅菌可注射溶液可以通過在合適的溶劑中摻入需要量的活性化合物(即，抗體，抗體部分，或其他TNF a抑制劑)，根據需要，與上面列舉的成分中的一種或組合混合，接著過濾滅菌。一般情況下，通過向含有基礎分散基質和選自上面列舉的那些中的必需的其他成分的滅菌賦形劑中摻入活性化合物來制備分散體。在用于制備無菌可注射溶液的無菌粉末劑的情況下，優選的制備方法是真空干燥和冷凍干燥，得到活性成分的粉末加選自先前滅菌過濾的溶液的任何賦家的期望的成分。例如通過使用包衣，例如卵磷脂，在分散體情況下通過保持必需的顆粒度和通過使用表面活性劑，能保持溶液合適的流動性。通過在組合物中含有一種延遲吸收的物質，例如單硬脂酸鹽和明膠，能帶來可注射組合物的長時間吸收。組合物中還可以摻入補充活性化合物。在一些實施方案中，本發明的抗體或抗體部分與一種或幾種附加治療藥物共同配制和/或共同給藥。例如，本發明的抗-hTNF a抗體或抗體部分可以與一種或幾種下面的物質共同配制和/或共同給藥一種或幾種DMARD或一種或幾種NSAID或者一種或幾種與其他靶物結合的另外的抗體(例如，與其他細胞因子結合或者與細胞表面分子結合的抗體)，一種或幾種細胞因子，可溶性TNF a受體(參見，例如，PCT公開No. WO 94/06476)，和/或抑制hTNF a產生或活性的一種或幾種化學物質(例如PCT公開No. WO 93/19751中描述的環己烷-亞基衍生物)或者它們的任何組合。此外，本發明的一種或幾種抗體可以與上述兩種或幾種治療物質聯合使用。這樣的聯合治療可以有利地使用低劑量的施用的治療藥物，這樣避免可能的副作用，并發癥或與各種單一治療有關的患者的低水平反應。在一個實施方案中，本發明包括含有有效量的hTNFa抑制劑和藥學可接受載體的藥物組合物，其中hTNF a抑制劑的有效量可以有效治療TNFa -相關病癥，包括，例如，坐骨神經痛，子宮內膜異位，和前列腺炎。 本發明的抗體，抗體部分，和其他TNF a抑制劑能通過各種各樣的本領域公知的方法給藥，但是對于很多治療性應用來說，優選的給藥途徑/方式是靜脈內注射或灌注。技術人員理解，根據期望的結果而不同。在一些實施方案中，用保護化合物不快速釋放的載體可以將活性化合物制成制劑，例如控制釋放制劑，包括植入物，透皮貼，和微膠囊送遞系統。能使用可生物降解，生物配伍聚合物，例如乙酸乙烯酯，聚酐類，聚羥基乙酸，膠原，聚原酸酯，和聚乳酸。制備這樣的制劑的很多方法是有專利的或者一般為本領域技術人員公知的。參見，例如，Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, JR. Robinson,編著，Marcel Dekker, Inc.，New York, 1978。本發明的TNFa抗體可以以蛋白質晶體制劑形式給藥，包括在聚合物載體中制成膠囊形成包衣顆粒的蛋白質結晶組合。蛋白質結晶制劑的包衣顆粒可以具有球形形狀并且微球體直徑最大500微米，或者它們可以具有一些其他形狀并且可以是微顆粒。提高的蛋白質結晶的濃度使得本發明的抗體可皮下送遞。在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體通過蛋白質送遞系統送遞，其中對TNFa-相關病癥患者施用蛋白質結晶制劑或組合物的一種或幾種。WO 02/072636中還描述了制備全抗體晶體或抗體片段晶體的穩定制劑的組合物和方法，該專利文獻在此引作參考。在一個實施方案中，使用實施例37和38中描述的結晶抗體片段的制劑來治療TNF a -相關病癥。在一些實施方案中，本發明的抗體，抗體部分，或者其他TNFa抑制劑可以口服給藥，例如用惰性稀釋劑或可同化可食用載體。化合物(如果期望，和其他的成分)還可以密封在硬或軟殼體明膠膠囊中，壓成片劑，或直接摻入到患者飲食中。對于口服治療給藥，化合物可以與賦形劑一起摻入并且以可攝取的片劑，口腔片劑，糖錠，膠囊，酏劑，懸浮劑，糖漿，糯米紙囊劑等形式使用。為了通過腸胃外給藥之外的方法施用本發明的化合物，必需用一種防止其失活的材料將化合物包衣，或者與之共同施用。本發明的藥物組合物可以包括“治療有效量”或“預防有效量”的本發明的抗體或抗體部分。“治療有效量”指以劑量和必需的時間內有效實現期望的治療結果的量。抗體，抗體部分，或者其他TNF a抑制劑的治療有效量可以根據象個體的疾病狀態，年齡，性別，和體重這樣的因素，以及抗體，抗體部分，或者其他TNFa抑制劑對個體引起期望的反應的能力而不同。治療有效量也是治療有益效果比抗體，抗體部分，或者其他TNF a抑制劑的任何毒性或有害效果重要的量。“預防有效量”指以劑量和必需的時間內有效實現期望的預防結果的量。典型地，因為在疾病之前或早期對患者使用預防劑量，預防有效量要小于治療有效量。可以調節劑量方案，提供最優期望的反應(例如治療或預防反應)。例如，可以施用一次大丸劑，可以隨時間幾次施用，或者根據治療情況的緊急狀態所指示的按比例減少或增加劑量。特別有利的是配制單位劑量形式的腸胃外用組合物，使容易給藥并且劑量均勻。這里使用的單位劑量形式指作為對于要治療的哺乳動物患者單元劑量的物理不連續的單位；每個單位含有經計算產生期望的治療作用的預計量的活性化合物和必需的藥學載體。本發明的單位劑量形式的說明書由下面說明和直接取決于(a)活性化合物的獨特特性和要實現的特定治療或預防效果，和(b)制備用于治療個體敏感性的活性化合物在本領域固有的局限性。

本發明的抗體或抗體部分的舉例的非限制性治療或預防有效量范圍是10_150mg，更優選20-80mg，最優選大約40mg。注意劑量值可以隨著要減輕的狀況的類型和嚴重程度而不同。進一步明白，對于任何特定患者，具體給藥劑量方案應該根據個體需要和給藥或管理組合物給藥的專業人員判斷而隨時間調節，這里提出的劑量范圍只是舉例而不是要限制要求的組合物的范圍或實行。以上述濃度為中間值的范圍，例如大約6-144mg/ml，也是本發明的部分。例如，包括使用上述值的任何一的組合為上限和/或下限的值的范圍。如上所述，本發明還涉及包裝的藥物組合物，其包括本發明的TNFa抑制劑和使用該抑制劑治療TNF a -相關疾病的說明書。本發明的另一方面涉及包含含有抗-TNF a抗體和藥學可接受載體的藥物組合物和各自含有用于治療TNF a -相關疾病和藥學可接受載體的一種或幾種藥物組合物的試劑盒。或者，試劑盒包含含有抗-TNF a抗體，用于治療TNF a -相關疾病的一種或幾種藥物和藥學可接受載體的單一的藥物組合物。試劑盒包含用于治療施用抗-TNF a抗體是有益的TNF a -相關疾病例如狼瘡的藥物組合物的用藥說明書。本發明還涉及包裝的藥物組合物或試劑盒，其包括本發明的TNFa抑制劑和使用該抑制劑來治療如上所述其中TNFa活性有害的特定病癥的說明書。或者包裝或試劑盒可以含有TNF a抑制劑，并且它能促進應用，或者在包裝中或者通過附加的信息，用于對這里描述的病癥的施用或治療。包裝藥物或試劑盒能進一步包括包裝的或者用說明書共同促進的第二種藥物(如這里描述的)，說明書說明與第一種藥物(如這里描述的)共同使用第二種藥物。B.另外的治療藥物本發明涉及藥物組合物和其用于治療TNF a -相關疾病的使用方法。藥物組合物含有防止或抑制TNF a-相關疾病的第一種藥物。藥物組合物還可以含有是活性藥物成分的第二種藥物；即，所述第二種藥物是治療性的并且其功能超過沒有活性的成分，例如藥物載體，防腐劑，稀釋劑，或緩沖劑。所述第二種藥物可以是在治療或防止TNF a -相關疾病是有用的。第二種藥物可以減輕或治療至少一種與目標疾病有關的癥狀。第一種藥物和第二種藥物可以通過相似或不相關的作用機理發揮它們的生物學作用；或者第一種藥物和第二種藥物的一種或兩者可以通過多種作用機理發揮它們的生物學作用。藥物組合物還可以含有第三種藥物，甚至更多，其中第三種(和第四種等)化合物具有第二種藥物相同的特征。
應該明白這里描述的組合物對于每一種描述的實施方案可以在相同的藥學載體或不同的藥學載體中含有第一和第二，第三，或另外藥物。還應該明白在描述的實施方案中，所述第一和第二，第三，和另外的藥物可以同時或順序施用。或者，可以同時施用第一和第二種藥物，并且在頭兩種藥物施用之前或之后施用第三種或另外的藥物。這里描述的方法和藥物組合物中使用的藥物的組合對治療所針對的癥狀或疾病可以具有治療加合或協同作用。這里描述的方法和藥物組合物中使用的藥物的組合還可以減小當單獨或沒有特定藥物組合物的其他藥物施用時與至少一種藥物相關的毒副作用。例如，組合物的另一種藥物可以減弱一種藥物的副作用的毒性，這樣允許更高的劑量，改善患者的順應性，并且改善治療結果。組合物的加合或協同作用，利益，和好處適用治療藥物種類，不管是結構或功能種類，或者適用各種化合物本身。組合物中還可以摻入補充活性化合物。在一些實施方案中，本發明的抗體或抗體部分與用于治療其中TNFa活性有害的TNFa-相關病癥的一種或幾種另外的治療藥物共 同配制和/或共同施用。例如，本發明的抗-hTNFa抗體，抗體部分，或其他TNF a抑制劑可以與下面的物質共同配制和/或共同施用結合其他靶物的一種或幾種另外的抗體(例如與其他細胞因子結合的抗體，或者與細胞表面分子結合的抗體)，一種或幾種細胞因子，可溶性TNF a受體(參見，例如，PCT公開No. W094/06476)和/或抑制hTNF a產生或活性的一種或幾種化學物質(例如PCT公開No. WO 93/19751中描述的環己烷-亞基衍生物)。此外，本發明的一種或幾種抗體或其他TNFa抑制劑可以與上述治療藥物的兩種或幾種聯合使用。這樣的聯合治療可以有利地使用施用的治療藥物的較低劑量，從而避免與各種單一治療有關的可能的毒性或并發癥。如下面討論的，一般根據特定的TNFa -相關病癥選擇具體的治療藥物。本發明的抗體，抗體部分，或其他TNFa抑制劑可以與之聯合使用的治療藥物的非限制性例子包括如下非留族化合物抗炎藥(NSAIDs);細胞因子抑制性抗炎藥(CSAIDs) ;CDP-571/BAY-10-3356(人源化抗-TNFa 抗體；Celltech/Bayer) ；cA2/ 英夫單抗(嵌合抗-TNFa 抗體；Centocor) ；75kd TNFR-IgG/etanercept (75kD TNF 受體-IgG 融合蛋白；Immunex ;參見，例如，Arthritis & Rheumatism(1994)Vol. 37, S295 ；J Invest. Med. (1996)Vol. 44，235A) ；55kd TNF-IgG(55kD TNF 受體-IgG 融合蛋白；Hoffmann-LaRoche) ；IDEC-CE 9.1/SB 210396 (非耗盡型靈長類化抗-CD4 抗體；IDEC/SmithKline ;參見，例如，Arthritis & Rheumatism(1995) Vol. 38, S 185) ；DAB 486-IL-2和/ 或 DAB 389-IL-2 (IL-2 融合蛋白；Seragen ;參見，例如，Arthritis & Rheumatism(1993)Vol. 36,1223) ;Anti_Tac (人源化抗-IL-2R a ；Protein Design Labs/Roche) ;IL_4(抗炎細胞因子；DNAX/Schering) ； IL-IO (SCH 52000 ；重組 IL-10，抗炎細胞因子；DNAX/Schering) ;IL_4 ;IL_10 和 / 或 IL-4 激動劑(例如，激動劑抗體)；IL-1RA(IL-1 受體拮抗劑；Synergen/Amgen) ；TNF-bp/s-TNF(可溶性TNF結合蛋白質；參見，例如，Arthritis & Rheumatism(1996) Vol. 39, No. 9 (增刊)，S284 ;Amer. J. Physiol.-Heart andCirculatory Physiology (1995) Vol. 268，pp. 37-42 ;R973401 (磷酸二酯酶 IV 型抑制劑，參見，例如 Arthritis & Rheumatism(1996) Vol. 39，No. 9 (增刊)，S282) ;MK_966 (C0X-2抑制劑，參見，例如 Arthritis & Rheumatism(1996) Vol. 39，No. 9 (增刊)，S81);伊洛前列(參見，例如，Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39，No. 9 (增刊)，S82);甲氨喋呤；薩利多胺(參見，例如，Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (增刊)，S282)和薩利多胺-相關藥物(例如，Celgen);來氟洛米(抗炎劑和細胞因子抑制劑；參見，例如，Arthritis & Rheumatism(1996) Vol. 39, No. 9 (增刊)，S 131 ；InflammationResearch(1996) Vol. 45，pp. 103-107);凝血酸(纖溶酶原激活的抑制劑；參見，例如，Arthritis & Rheumatism(1996) Vol. 39，No. 9 (增刊)，S284) ;T_614 (細胞因子抑制劑；參見，例如，Arthritis & Rheumatism(1996) Vol. 39，No. 9 (增刊)，S282);前列腺素 El (參見，例如，ArtAlritis & Rheumatism(1996)Vol. 39, No. 9(增刊),S282);替尼達普(非留族抗炎藥；參見，例如，Arthritis & Rheumatism(1996) Vol. 39，No. 9 (增刊)，S280);萘普生(非甾族抗炎藥;參見，例如，Neuro Report (1996) Vol. 7, pp. 1209-1213);莫比可(非甾族抗炎藥)；布洛芬(非留族抗炎藥)；吡羅昔康(非留族抗炎藥)；雙氯酚酸鈉(非甾族抗炎藥)；消炎痛(非甾族抗炎藥)；水楊酸偶氮磺胺卩比唳(參見,例如，Arthritis& Rheumatism(1996) Vol. 39, No. 9(增刊),S281);硫唑嘌呤(參見，例如，Arthritis & Rheumatism(1996)Vol. 39, No. 9(增刊)，S281) ;ICE 抑制劑(酶白介素 _13 轉化酶的抑制劑)；zap-70和/或Ick抑制劑(酪蛋白激酶的抑制劑zap-70或lck) ;VEGF抑制劑和/或VEGF-R抑制劑(血管內皮細胞生長因子或血管內皮細胞生長因子受體；血管生成的抑制劑)；皮質類固醇抗炎藥(例如，SB203580) ;TNF-轉化酶抑制劑；抗-IL-12抗體；抗-IL-18 抗體；白介素-11(參見,例如,Arthritis & Rheumatism(1996) Vol. 39,No. 9 (增刊)，S296);白介素-13(參見，例如，Arthritis & Rheumatism(1996) Vol. 39，No. 9 (增刊)，S308);白介素-17 抑制劑(參見，例如，Arthr i t i s&Rheumat i sm (1996) Vo 1. 39, No. 9 (增刊)，S 120);金；青霉素；氯喹；輕氯喹；苯丁酸氮芥；環磷酰胺；環孢菌素；總的淋巴細胞照射法；抗胸腺細胞球蛋白；抗^04抗體；CD5-毒素；口服給藥的肽和膠原；羥苯基氯氨茴酸二鈉；細胞因子調節劑(CRAs) HP 228 和 HP 466 (Houghten Pharmaceuticals, Inc.)；ICAM-I抗敏硫代磷酸酯寡脫氧核苷酸(ISIS 2302 ；Isis Pharmaceuticals, Inc.);可溶性補體受體1(TP10;T Cell Sciences, Inc.);潑尼松；奧古蛋白；糖胺聚糖多硫酸鹽；二甲胺四環素；抗-IL2R抗體；海產品和植物脂質(fish and plant seed fatty acids;參見,例如，DeLuca 等(1995) Rheuna. Dis. Clin. Nortla Arra. 21 :759-777);金諾芬；保泰松；抗炎酸；氟滅酸；靜脈內免疫球蛋白pileuton;霉酚酸(RS-61443);他克莫司(FK-506);西羅莫司(瑞帕霉素)；阿普勞斯amiprilose (阿普勞斯therafectin);克拉屈濱(2_氯脫氧腺苷)；氮尿苷；甲氨喋呤；抗病毒劑；和免疫調節劑。上面提到的藥物的任一種可以與本發明的TNF a抗體聯合用藥治療TNF a -相關疾病。 在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體與下面一種藥物聯合用藥治療類風濕性關節炎小分子抑制劑KDR(ABT-123)，Tie-2的小分子抑制劑；甲氨喋呤；潑尼松；塞來昔布；葉酸；輕氯喹硫酸鹽；羅非克西；etanercept ;英夫單抗；來氟洛米；萘普生；valdecoxib ;磺胺吡啶；甲基氫化潑尼松；布洛芬；美洛昔康；甲基氫化潑尼松乙酸鹽；硫羥蘋果酸金鈉；阿司匹林；氮雜硫代嘌呤；醋酸去炎松；萘磺酸丙氧芬/撲熱息痛；葉酸鹽；萘丁美酮；雙氯酚酸鈉；吡羅昔康；依托度酸；雙氯酚酸鈉；奧沙普嗪；羥可待酮鹽酸鹽；氫可酮二酒石酸鹽/撲熱息痛；雙氯酚酸鈉/米索普特；芬太尼；anakinra，人重組體；鹽酸曲馬多；雙水楊酯；舒林酸；維生素B12/fa/維生素B6 ;對乙酰氨基酚；阿倉膦酸鈉；氫化潑尼松；硫酸嗎啡；鹽酸利多卡因；消炎痛；氨基葡萄糖硫酸鹽/軟骨素；環孢素；鹽酸阿米替林；磺胺嘧啶；羥可待酮鹽酸鹽/對乙酰氨基酚；鹽酸奧洛帕定；米索普特；甲氧萘丙酸鈉；奧美拉唑；霉酚酸酯；環磷酰胺；利妥希瑪；IL-1 TRAP ；MRA ;CTLA4_IG ;IL_8BP ；ABT-874 ；ABT-324(抗-IL18)；抗-IL15 ;BIRB_796 ;SCI0_469 ；VX-702 ;AMG_548 ；VX-740 ；Roflumilast ;IC_485 ;Q)C-801 ;和mesopram。在另一個實施方案中，本發明的TNF a抗體與上面提到的用于治療類風濕性關節炎的藥物的一種聯合用藥，用于治療TNFa相關疾病。在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體與下面一種藥物聯合用藥治療其中TNFa活性有害的TNF a相關疾病抗-IL12抗體(ABT874);抗-1118抗體(ABT 325) ；LCK的小分子抑制劑；C0T的小分子抑制劑；抗-Ill抗體；MK2的小分子抑制劑；抗-CD 19抗體；CXCR3的小分子抑制劑；CCR5的小分子抑制劑；CCR11的小分子抑制劑；抗-E/L選擇蛋白抗體；P2X7的小分子抑制劑；IRAK-4的小分子抑制劑；糖皮質激素受體的小分子激動劑；抗_C5a受體抗體；C5a受體的小分子抑制劑；抗-CD32抗體；和CD32作為治療性蛋白質。 在另一個實施方案中，本發明的TNFa抗體與抗生素和抗感染藥聯合用藥。抗感染藥包括本領域公知的用來治療病毒，真菌，寄生蟲或細菌感染。這里使用的術語“抗生素”指抑制微生物生長或者處死微生物的化學物質。該術語包括本領域公知的微生物產生的抗生素，以及合成的抗生素(例如，類似物)。抗生素包括但不限于，克拉霉素(Biaxin )，環丙沙星(Cipro ),和滅滴靈(Flagyl )。在另一個實施方案中，本發明的TNFa抗體與治療坐骨神經痛或疼痛的另外的治療藥物聯合用藥。能用來減輕或抑制坐骨神經痛或疼痛癥狀的藥物的例子包括氫可酮二酒石酸鹽/撲熱息痛，羅非克西，鹽酸環苯扎林，甲基潑尼松，萘普生，布洛芬，羥可待酮鹽酸鹽/對乙酰氨基酚，塞來昔布，valdecoxib，乙酸甲基潑尼松，潑尼松，磷酸可卡因/撲熱息痛，鹽酸曲馬多/對乙酰氨基酚，美他沙酮，美洛昔康，美索巴莫，鹽酸利多卡因，雙氯芬酸鈉，加巴噴丁，地塞米松，卡利普多，酮咯酸，消炎痛，對乙酰氨基酚，安定，萘丁美酮，鹽酸氧可酮，鹽酸替扎尼定，雙氯酚酸鈉/米索前列醇，丙氧芬萘磺酸鹽/撲熱息痛，asa/oxycod/羥可酮ter，布洛芬/氫可酮少量；鹽酸曲馬多，依托度酸；鹽酸丙氧芬，鹽酸阿米替林，卡利普多/磷酸可待因/asa，硫酸嗎啡，多種維生素，甲氧萘丙酸鈉，檸檬酸鄰甲苯海拉明，和替馬西泮。在另一個實施方案中，與血液透析聯合使用本發明的TNF a抗體制備TNFa-相關疾病。在另一個實施方案中，本發明的TNFa抗體與用來治療克隆氏病或克隆氏病相關病癥的藥物聯合使用。能用來治療克隆氏病的治療性藥物包括美沙拉秦，潑尼松，硫唑嘌呤，巰基嘌呤，英夫單抗，布地奈德，水楊酸偶氮磺胺卩比唳，甲基潑尼龍sod succ,苯乙哌唳/atrop sulf,鹽酸洛派丁胺，甲氨喋呤，，葉酸鹽，環丙沙星/葡萄糖-水，氫可酮二酒石酸鹽/apap，鹽酸四環素，氟輕松醋酸酯，滅滴靈，硫汞撒/硼酸，考來烯胺/蔗糖，鹽酸環丙沙星，硫酸天仙子胺，鹽酸度冷丁，鹽酸咪達唑侖，羥可待酮鹽酸鹽/對乙酰氨基酚，鹽酸普魯米近，磷酸鈉，新諾明/甲氧芐定，塞來昔布，聚丙烯酸樹脂，丙氧芬萘磺酸鹽，氫化可的松，多種維生素，巴柳氮二鈉，磷酸可卡因/撲熱息痛，colesevelan鹽酸鹽，維生素B12，葉酸，左氟沙星，甲基氫化潑尼松，natalizumab,和Y _干擾素。在另一個實施方案中，本發明的TNFa抗體與用來治療哮喘的另外的治療藥物聯合用藥。能用來減輕或抑制哮喘癥狀的藥物的例子包括如下沙丁醇胺；沙美特羅/氟地松；鈉；丙酸氟地松；布地縮松；潑尼松；沙美特羅xinafoate ;鹽酸Ievalbuterol ;硫酸鹽/異丙托品；磷酸潑尼松鈉；曲安奈德；倍氯美松雙丙酸酯；異丙托品溴化物；阿齊霉素；醋酸吡布特羅，潑尼松，無水茶堿，甲基潑尼龍sod succ，克拉霉素，扎魯斯特，富馬酸福莫特羅，流感病毒疫苗，甲基潑尼龍三水合物，氟尼縮松，變應性變態反應注射，色甘酸鈉，鹽酸甲美芳銨，氟尼縮松/薄荷醇，阿莫西林/克拉維酸鉀，左氟沙星，吸入輔助裝置，愈創甘油醚，地塞米松磷酸鈉；鹽酸莫西沙星；hyclate ;愈創木酹甘油醚/d-甲嗎喃；pephedrine/cod/撲爾敏；加替沙星；鹽酸西替利嗪；糠酸毛他松；沙美特羅xinafoate ;退咳露；頭孢氨芐；pe/氫可酮/撲爾敏；鹽酸西替利嗪/偽麻黃堿；苯基麻黃堿/cod/異丙嗪；可待因/異丙嗪；頭孢羅齊；地塞米松；愈創木酚甘油醚/偽麻黃堿；撲爾敏/氫可酮，奈多米羅納，硫酸特布他林，腎上腺素和甲基潑尼松，硫酸奧西那林。

在另一個實施方案中，本發明的TNF a抗體與用來治療CCffD的另外的治療藥物聯合用藥。能用來減輕或抑制CCffD癥狀的藥物的例子包括硫酸沙丁胺醇/異丙托品；異丙托溴胺；沙美特羅/氟地松；沙丁胺醇；沙美特羅；Xinafoate ;丙酸氟地松；潑尼松；無水茶葉堿；甲基氫化潑尼松sod succ ;孟魯司特鈉；布地奈德；富馬酸福莫特羅；曲安奈德；左氟沙星；愈創甘油醚；阿齊霉素；倍氯米松；二丙酸；鹽酸levalbuterol ;氟尼縮松；鈉；三水合物；加替沙星；扎魯司特；阿莫西林/克拉維酸鉀；氟尼縮松/薄荷醇；氯苯吡胺/氫可酮；硫酸奧西那林；甲潑尼龍；糠酸鹽；_麻黃堿/cod/撲爾敏；鹽酸吡布特羅；_麻黃堿/氯雷他定；硫酸特布他林；tiotropium bromide ； (R, R)-福莫特羅；TgAAT ;Cilomilast和Roflumilast0在另一個實施方案中，本發明的TNFa抗體與用來治療IPF的另外的治療藥物聯合用藥。能用來減輕或抑制IPF癥狀的藥物的例子包括潑尼松；硫唑嘌呤；沙丁醇胺；秋水仙堿；硫酸鹽；地高辛；Y干擾素；甲潑尼龍sod succ ;呋塞米；賴諾普利；硝酸甘油；螺內酯；環磷酰胺；溴化異丙托品；放線菌素d ;阿替普酶；丙酸氟地松；左氟沙星；硫酸奧西那林；硫酸嗎啡；鹽酸羥可酮；氯化鉀；曲安奈德；無水藤霉素；鈣；a -干擾素；甲氨喋呤；霉酌 酸 mofetil。在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體與一般用來治療脊柱關節病的另外的治療藥物聯合用藥。這樣的藥物的例子包括非留族抗炎藥(NSAIDs)，COX 2抑制劑，包括Celebrex , Vioxx ；,和Bextra ,和etoricoxib。還通常用物理療法來治療脊柱關節病，通常與非甾族抗炎藥聯合使用。在另一個實施方案中，本發明的TNFa抗體與用來治療強直性脊柱炎的另外的治療藥物聯合用藥。能用來減輕或抑制強直性脊柱炎癥狀的藥物的例子包括布洛芬，雙氯芬酸和米索前列醇，萘普生，美洛昔康，消炎痛，雙氯芬酸，塞來昔布，羅非克西，水楊酸偶氮磺胺吡啶，潑尼松，甲氨喋呤，硫唑嘌呤，二甲胺四環素，潑尼松，etanerc印t，和英夫單抗。在另一個實施方案中，本發明的TNFa抗體與用來治療牛皮癬患者關節炎的另外的治療藥物聯合用藥。能用來減輕或抑制牛皮癬患者關節炎癥狀的藥物的例子包括甲氨喋呤；etanercept ;羅非克西；塞來昔布；葉酸；水楊酸偶氮磺胺批唳；萘普生；來氟洛米；醋酸甲潑尼龍；消炎痛；硫酸羥氯喹；舒林酸；潑尼松；倍他米松diprop增量；英夫單抗；甲氨喋呤；葉酸；曲安奈德；雙氯芬酸；二甲亞砜；吡羅昔康；雙氯芬酸鈉；酮洛芬；美洛昔康；潑尼松；甲潑尼龍；萘丁美酮；四苯酰吡咯乙酸鈉；鈣泊三烯；環孢菌素；雙氯芬酸；鈉/米索前列醇；氟輕松醋酸酯；硫酸氨基葡萄糖；硫羥蘋果酸金鈉；氫可酮；二酒石酸鹽/撲熱息痛；布洛芬；利塞膦酸鈉；磺胺卩密唳；硫代鳥嘌呤；valdecoxib ；alefacept ;和efalizumab。在一個實施方案中，在治療冠心病的初期操作之后施用本發明的TNFa抑制劑。這樣的操作的例子包括但不限于冠狀動脈旁路移植法(CABG)和經皮透明冠狀囊成血管術(PTCA)或血管成形術。在一個實施方案中，為了防止狹窄復發而施用TNFa抑制劑。在本發明的另一個實施方案中，為了防止或治療雜狹窄而施用TNFa抑制劑。本發明還提供一種治療方法，其中在對接受冠心病治療操作的患者的動脈中插入支架之前，聯合，或之后施用TNF a抑制劑。在一個實施方案中，在CABG或PTCA之后施用支架。在本發明的上下文中可以使用各種各樣的支架移植物，取決于期望的治療部位和 性質。支架移植物可以是，例如，分叉的或管移植物，圓柱形或錐形的自主膨脹或氣囊膨脹的，單個產品，或組件產品。此外，支架移植物可以適合只在遠側一端釋放藥物，或者沿著支架移植物整體釋放。本發明的TNFa抑制劑還可以在支架上。在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體，包括，例如，D2E7/HUMIRA 通過藥物洗脫支架給藥。本發明的TNFa抗體能與用來治療再狹窄的另外的治療藥物聯合用藥。能用來減輕或抑制再狹窄的藥物的例子包括瑞帕霉素，紫杉醇，everolimus，藤霉素，ABT-578，和對乙酰氨基酚。本發明的TNFa抗體能與用來治療心肌梗塞的另外的治療藥物聯合用藥。能用來減輕或抑制心肌梗塞的藥物的例子包括阿司匹林，硝酸甘油，酒石酸美托洛爾，依諾肝素鈉，肝素鈉，氯吡格雷硫酸氫鹽，卡維地洛，阿替洛爾，硫酸嗎啡，琥珀酸美托洛爾，華法令鈉，賴諾普利，異山梨醇一硝酸鹽，地高辛，呋塞米，辛伐他汀，雷米普利，替尼普酶，馬來酸依那普利，torsemide,瑞替普酶,氯沙坦鉀,鹽酸喹那普利/mag carb,布美他尼，阿替普酶，依那普里拉，鹽酸胺碘酮，鹽酸替羅非班m-水合物，鹽酸地爾硫翁，卡托普利，吉加，纈沙坦，鹽酸普萘洛爾，福辛普利鈉，鹽酸利多卡因，表非替得，頭孢唑啉鈉，硫酸阿托品，亮氨酸，螺內酯，干擾素，鹽酸索他洛爾，氯化鉀，琥珀新酯鈉，鹽酸多巴酚丁胺，阿普唑侖，普伐他丁鈉，立普妥，鹽酸咪達唑侖，鹽酸度冷丁，異山梨醇二硝酸酯，腎上腺素，鹽酸多巴胺，比伐盧定，rosuvastatin, ezetimibe/ 辛伐他汀，avasimibe,阿昔單抗，和 cariporide。本發明的TNFa抗體能與用來治療心絞痛的另外的治療藥物聯合用藥。能用來減輕或抑制心絞痛的藥物的例子包括阿司匹林；硝酸甘油；異山梨醇一硝酸酯；琥珀酸美托洛爾；阿替洛爾；酒石酸美托洛爾；阿羅地平磺酸鹽，dilitiazem hydropchloride,異山梨醇二硝酸酯，氯吡格雷硫酸氫鹽；硝苯地平；立普妥；氯化鉀；呋塞米；辛伐他汀；鹽酸維拉帕米；地高辛；鹽酸普萘洛爾；卡維地洛；賴諾普利；sprionolactone ;二氫氯噻；馬來酸依那普利nadolol ;雷米普利；依諾肝素鈉；肝素鈉；纈沙坦；鹽酸索他洛爾；非諾貝特；ezetimibe ;布美他尼；氯沙坦鉀賴諾普利/氫氯噻嗪；非洛地平；卡托普利；和富馬酸比索洛爾。在本發明的一個實施方案中，本發明的TNFa抗體與通常用來治療丙型肝炎病毒的藥物聯合施藥。這樣的藥物的例子包括干擾素- a -2a，干擾素- a _2b，干擾素- a conl，干擾素-a _n I, PEG化干擾素-a _2a, PEG化干擾素-a _2b,利巴韋林,PEG化干擾素-a -2b和利巴韋林，雄去氧膽酸，甘草酸，胸腺法新，Maxamine，和VX-497。
本發明的TNFa抗體與皮質類固醇，維生素D類似物，和局部或口服視黃酸，或者它們的組合，聯合用藥，用于治療牛皮癬。另外，本發明的TNFa抗體與用于治療牛皮癬的下面的藥物中的一種聯合用藥=KDR的小分子抑制劑(ABT-123)，Tie-2的小分子抑制齊U，鈣泊三烯，丙酸氯倍他索，曲安奈德，鹵倍他索丙酸酯，他佐羅汀，甲氨喋呤，氟輕松醋酸酯，倍他米松diprop增量,氟輕松,阿維A,焦油香波,戍酸倍他米松,糠酸毛他松，酮康唑，普拉莫星/氟輕松，戊酸氫化可的松，氟氫縮松，脲，倍他米松，丙酸氯倍他索/emoll，丙酸氟地松，阿齊霉素，氫化可的松，增加水份的處方，葉酸，地奈德，煤焦油，醋酸二氟拉松，etanercept,葉酸鹽,乳酸，甲氧沙林，hc/次沒食子酸秘/znox/resor,醋酸甲潑尼龍,潑尼松，防曬物質，水楊酸，哈西奈德，地蒽酚，新戊酸氯可托龍，煤提取物，煤焦油/水楊酸，煤焦油/水楊酸/硫，去羥米松，安定，潤滑藥，pimecrolimus潤滑藥，氟輕松醋酸酯/潤滑藥，礦物油/蓖麻油/na lact，礦物油/花生油，石油十四酸異丙基酯，補骨脂素，水楊酸，肥阜/三溴沙侖，硫萊撒/硼酸，塞來昔布，英夫單抗，alefacept, efalizumab,藤霉素，pimecrolimus, PUVA, UVB,和水楊酸偶氮磺胺卩比唳。

本發明的抗體，抗體部分，或其他TNF a抑制劑能與治療皮膚病的其他藥物聯合使用。例如，本發明的抗體，抗體部分，或其他TNF a抑制劑與PUVA療法聯合。PUVA是補骨脂素(P)和長波紫外射線的聯合，用來治療很多不同的皮膚病。本發明的抗體，抗體部分，或其他TNFa抑制劑還能和pimecrolimus聯合。在另一個實施方案中,本發明的抗體被用來治療牛皮癬，其中抗體與藤霉素聯合用藥。在另一個實施方案中，藤霉素和TNF a抑制劑與甲氨喋呤和/或環孢菌素聯合給藥。在另一個實施方案中，本發明的TNFa抑制劑與治療牛皮癬的受激準分子激光治療聯合施用。TNFa抑制劑可以與之聯合來治療皮膚病或指甲病的其他治療性藥物的非限制性例子包括UVA和UVB光線療法。能與TNF a抑制劑聯合使用的其他非限制性例子包括抗-IL-12和抗-IL-18治療藥物，包括抗體。在一個實施方案中，本發明的TNFa抗體與治療貝切特氏病的另外的治療藥物聯合用藥。能用來治療貝切特氏病的另外的治療藥物包括但不限于，潑尼松，環磷酰胺(Cytoxan),硫唑嘌呤(也稱作硫唑嘌呤imuran),甲氨喋呤,timethoprim/新諾明(也稱作復方新諾明片或增效磺胺甲基異P惡唑)和葉酸。上面提到的治療藥物中的任何一種，單獨地或者聯合地，與本發明的TNFa抗體聯合，能對患有其中TNFa活性有害的TNF a-相關疾病的患者。在一個實施方案中，除了TNF a抗體之外，上面提到的治療藥物中的任何一種，單獨地或者聯合地，能對類風濕性關節炎患者施用，來治療TNF a -相關疾病。通過下面的實施例進一步詳細說明本發明，實施例不應該認為是限制性的。本申請自始至終引用的所有的參考文獻，專利和公開的專利申請在此引作參考。
實施例實施例I :強直性脊柱炎大鼠模型中的TNF a抑制劑對人白細胞抗原-B27 (HLA-B27)大鼠施用TNF抗體，試驗進行性關節強硬的抑制作用對Fisher 344大鼠進行基因工程處理，使其攜帶多拷貝數的I類人主要組織相容性復合體等位基因B27，并且3 2_微球蛋白基因表現出與人脊柱關節病特別是強直性脊柱炎(AS)類似的癥狀(Zhang等，Curr Rheumatol Rep. 2002 :4 :507)。獲得10周齡雄性轉基因人白細胞抗原-B27(HLA-B27)大鼠，并且在動物籠中圈養，直到它們40周齡。獲得一組Fisher 344大鼠并且作為沒有轉基因的對照物。購買36周的對照大鼠并且在相同條件下在動物籠中又圈養3-4周。實驗處理之前，對HLA-B27轉基因大鼠和對照大鼠測量體重，以確定兩者之間沒有顯著差別。然后對大鼠腹膜內施用(i.P.)安慰劑劑量或已知結合并中和大鼠TNFa的單克隆抗-TNF a抗體劑量，例如抗體TN3(TN3-19. 12)(參見Marzi等(1995) Shock 3 :27 ；Williams等(1992)Proc Natl Acad Sci US A. 89 :9784 ;BD Biosciences Pharmingen)。在大約36周齡開始以及在持續的研究中利用下面的試驗對大鼠評價AS癥狀體重，絲網的前爪抓握，反轉絲網時的抓緊能力，步態，胸廓屈曲性，脊柱移動性，和眼，皮膚，指甲，生殖器，和外周和中軸骨關節的外觀，注意變紅和腫脹，關節變形，和移動性。還對大鼠檢查關節炎的證據，特別是接受治療的大鼠AS癥狀的減輕，并且緊密觀察生長特征和皮膚及指甲的變化。在第4,6,8,10,12,16,和20周,將大鼠處死用于放射照相和顯微鏡分析。 實施例2 =TNF抑制劑對AS癥狀強直性脊柱炎的作用-臨床思考對表現出一般與AS相關的癥狀的患者檢查和分析以確定他們是否患有AS，從而進行研究。一般與AS相關的癥狀是背部下方疼痛，不活動之后更不好，背部下方運動受限，髖部疼痛和強直，胸部擴張受限，運動范圍受限(特別是涉及脊柱和髖部)，肩，膝，踝關節疼痛并且關節腫脹，頸部疼痛，足跟疼痛，緩慢彎腰減輕癥狀，疲勞，低度發熱，食欲減退，體重減輕，和/或眼睛發炎。對患者進行內科檢查，確定他們是否表現出與AS相關的有限脊柱運動或胸部擴張的特征性癥狀。指示AS的試驗的例子包括顯示與AS相關的特征性發現的骶髂關節和脊柱的X-射線。使用修改的紐約標準診斷強直性脊柱炎(Moll等(1973)Ann Rheum Dis 32 :354 ；Van der Linden等(1984) Arthritis Rheum 27:361)。強直性脊柱炎的紐約標準是根據1966年紐約舉行的CIOMS研討會提出的羅馬標準修正版。它是骶髂關節的臨床標準和放射照相結果的組合。紐約標準的臨床標準是(a)所有三個位面上腰椎運動受限(前驅側驅范圍)。上文Moll的文獻中給出有助于檢查的皮膚斑紋；(b)背腰接合處或腰椎有疼痛史或者疼痛；和(c)在第四肋間間隙測量時，胸部擴張局限到I英寸(2. 5cm)或更小。紐約標準的計分指數骶髂關節放射照相變化等級 正常 O 懷疑 I 最小程度的骶髂關節炎 2 中等程度的胝髂關節炎 3 關節強直 4利用評價各種AS指征的各種儀器測量AS的臨床病程。一些通常使用的量度包括評定關節強直性脊柱炎(ASAS)，Bath強直性脊柱炎疾病活動度指數(BASDAT) (Garrett等(1994) J Rheumatol 21 :2286)，Bath 強直性脊柱炎測量學指數(BASMI) (Jenkinson 等(1994) J Rheumatol 21 :1694)，和 Bath 強直性脊柱炎功能指數(BASFI) (Calin 等(1994) JRheumatol 21 :2281)。這些指標可以用來隨時間對患者監測并且確定改善情況。下面進一步描述這些標度的每一個 用于測定AS的臨床病程的標準評定關節強直性脊柱炎(ASAS20)是關鍵期3AS研究的關鍵點。四個區中彡3個中，> 20%改善和絕對改善> 10單位(0-100標度)患者綜合評定，疼痛，機能，和炎癥。在潛在的剩余區域中一定不存在變壞(變壞定義為> 20%更不好和最終惡化> 10單位(0-100 標度)o2. Bath強直性脊柱炎疾病活動度指數(BASDAT)能用來評定AS患者疾病活動水平。BASDAI焦點在于AS炎癥方面的指征和癥狀，夜間和總的疼痛，患者綜合評定和脊柱可動性的實際物理測量，例如Schober' s試驗，胸部擴張得分和枕骨壁測量。BASDAI以與疲勞，脊柱疼痛，外周關節炎，外因病(腱/韌帶/關節囊進入骨中的點處的炎癥)，和初期強直相關的六個問題為基礎測定疾病活動度。在疲勞，脊柱和外周關節疼痛，局部觸痛，和初期強直的10厘米水平視覺模擬標度測量嚴重程度回答這些問題(定性和定量)。最后的BASDAI得分范圍是0-10。3. Bath強直性脊柱炎功能指數(BASFI)測量AS引起的身體功能減退，是關于AS8個具體問題組成的自身評定儀器，兩個問題反映患者應付每天生活的能力。每個問題都在10-cm水平目測模擬標度上回答，其平均值給出BASFI得分(0_10)。4. Bath強直性脊柱炎測量學指數(BASMI)有5項簡單的臨床量度組成，提供復合指數并且確定AS疾病情況。測量學(20項量度)分析鑒定最精確反映中間狀態的這5項量度頸部轉動，耳屏到壁的距離，外側屈曲，改進的Schober' s試驗，和踝間距。BASMI快速(7分鐘)，可重復，并且對整個疾病時期中的變化靈敏。BASMI指數包括AS髖部和脊柱運動的5項量度。這5項BASMI量度分值是0 (輕的)至10 (嚴重的)，包括耳屏到壁的距離，頸部轉動，腰部屈曲，腰側屈曲，和踝間距離。綜合上面提到的標準，用來評定患者。另外，放射照相術，MRI,以及骨和軟骨退化標志能用來確定AS患者的疾病活動度。對活動的AS人患者檢查D2E7的臨床研究在持續數周的安慰劑-對照臨床試驗中對患者s. c施用一定劑量的D2E7，并且第二年每2-6周復查，以確定AS癥狀是否減輕或治愈。研究中使用在治療類風濕性關節炎中有效而安全的每間隔一周施用40mg的劑量。該項研究只選擇具有確診的活性AS患者，即有下面3項標準-BASDAI指數中的2項，對于疼痛的視覺模擬得分(VAS)和存在初期強直。上面更詳細地描述量BASDAI指數。為了在該項研究中登記，患者在篩分和基礎情況下必須具有明顯的疼痛，10-cm VAS下疼痛得分> 4并且BASDAI得分彡4。在研究中允許使用改變疾病狀況的抗風濕藥(DARDS)或其他免疫抑制劑。如果患者每天潑尼松等價劑量< 10mg，則讓患者登記。為了記錄每位患者醫療史和當前的結果，在研究登記之前進行篩分檢查。從各位患者獲得下面的信息初期強直(持續時間和嚴重程度)，前眼色素層炎發生(發作次數和持續時間)，紅腫的外周關節的數目。對于每一位患者，獲得椎骨柱和骶髂關節的放射照片。也利用核磁共振成像記錄登記的患者的脊柱。

將患者隨機分成試驗組和安慰劑組，以患者不知情的方式每兩周施用D2E7或安慰劑，直到12周或24周。以治療類風濕性關節炎有效使用的20至80mg的劑量施用D2E7 ；測得40mg劑量有效。治療脊柱炎可能需要更高劑量，因此在該項研究中使用更高劑量(對沒有反應的患者和沒有用甲氨喋呤的患者每周施用40mg)。計算實現ASAS20的患者的百分比。實施例3 :對牛皮癬患者關節炎的臨床研究中的TNF抑制劑牛皮癬患者關節炎人患者中的D2E7對于該項研究選擇任何亞型的中等程度至嚴重程度牛皮癬患者關節炎患者(末梢指節間關節關節炎，關節炎毀形，對稱多關節炎，不對稱少關節炎和/或脊柱關節病)。患者對非留體抗炎藥(NSAIDs)或改變疾病的抗風濕藥(DMARDs)或者失敗或者不耐受。單獨進行治療和/或與NSAIDs和DMARDs聯合。評定的劑量范圍包括每隔一周40mg，這是發現的對患者治療類風濕性關節炎最有效的D2E7劑量。也研究較高劑量(每周40mg)。研究與安慰劑同時進行12至24周，接著進行開放標記治療以確定長期安全性和有效性。在篩分，基線，以及治療期間經常對患者臨床檢查。通過American College ofRheumatology對于12周改善的初步標準(ACR20)測定指征或癥狀的最初效果。另外的初期終點包括評定6-12個月的放射學改變，以評定結構損傷的變化。在治療期間進行多個其他評定，包括牛皮癬關節炎反應標準(PsARC)，生活質量量度，和皮膚評價，以確定對牛皮癬損傷(牛皮癬面積嚴重程度指數(PASI)和目標損害評定)的功效。實施例4 :哮喘小鼠模型中的TNF a抑制劑使用卵白蛋白(OVA)-誘導的變應性哮喘小鼠的TNF抗體研究在下面治療變應性哮喘的研究中使用變應性哮喘小鼠OVA模型(Hessel，E. M.，等(1995)Eur. J. Pharmacol. 293 401 ；Daphne, T.,等(2001)Am. J. Respir. Cell Mol.Biol. 25 :751。所有的小鼠對OVA致敏(雞蛋白蛋白，粗制級V ；Sigma,St. Louis,MO)。通過間隔一天(每天一次)腹膜內注射七次在0. 5ml無熱原鹽水中的10微克0VA，沒有輔藥，進行活性致敏。最后一次致敏之后三周，對小鼠進行16次OVA攻擊(2mg/ml，在無熱原鹽水中)或16次鹽水氣霧劑攻擊5分鐘，在連續的幾天內(每天一次氣霧劑)。另外一組小鼠首先接受8次OVA氣霧劑，接著8次鹽水氣霧劑(0VA/鹽水，自主消退組)。對于針對變應性哮喘更嚴重進行的模型的試驗，通過兩次腹膜內注射(分別7天)0. I毫升明礬-沉淀的抗原的活性致敏使所有的小鼠致敏，包括吸附到2. 25mg明礬(Alumlmject ；Pierce, Rockford, IL)中的10微克OVA。第二次致敏之后兩周,對小鼠進行六次OVA攻擊(10mg/ml，在無熱原鹽水中)或每第三天六次鹽水氣霧劑攻擊20分鐘(第三天一次氣霧劑)。另外一組小鼠首先接受3次OVA氣霧劑，接著3次鹽水氣霧劑(0VA/鹽水，自主消退組)。在連接Pari LC Star 噴灑器(PARI Respiratory Equipment, Richmond, VA ;粒度2. 5-3. I微米)的有機玻璃暴露箱(5升)中進行氣霧劑處理，噴灑器由6升/分鐘流速的壓縮空氣驅動。對不多于8只動物的組給與氣霧劑。根據本領域公知的標準方案，在第二次致敏之后，以一定范圍劑量，對OVA致敏 小鼠施用已知結合并中和小鼠TNFa的單克隆抗-TNF a抗體，例如，抗體TN3 (TN3-19. 12)(參見 Marzi 等(1995) Shock 3 :27 !Williams 等(1992) Proc Natl Acad Sci US A. 89 9784 ；BD Biosciences Pharmingen)。還施用合適的安慰劑對照物。應用氣壓全身體積描記法通過記錄反應吸入的乙酰甲膽堿(乙酰-甲基膽堿氯化物；Sigma)的呼吸壓力曲線，對有意識的無限制的小鼠測量氣道反應能力。簡要地說，將小鼠放在全身小室中，獲得基礎讀數并且三分鐘平均。霧化鹽水，接著將乙酰甲膽堿濃度加倍(范圍是I. 6-50mg/ml鹽水)，噴霧三分鐘，并且每次噴霧之后讀取讀數，3分鐘平均。通過反復測量的一般線性模型統計學分析對乙酰甲膽堿的劑量-反應曲線(DRCs)，接著在各組之間進行post-hoc比較。在對所有的補償差異分析之前將數據進行LOG轉換。體內氣道反應能力測量之后，通過腹膜內注射I毫升的10%氨基甲酸乙酯無熱原鹽水溶液(Sigma)處死小鼠。接著，用心臟穿刺術對小鼠取血，通過ELISA測定OVA-特異性IgE。簡要地說，在4°C下用在磷酸緩沖鹽水(PBS)中稀釋的2微克/毫升大鼠抗-小鼠IgE(克隆EM95)包被微量滴定板(Nunc A/S,Roskilde,Denmark)過夜。第二天,在室溫下進行 ELISA。用 ELISA 緩沖液(PBS，含有 0. 5%牛血清白蛋白[Sigma], 2mM EDTA, 136. 9mMNaCl, 50mM Tris, 0. 05% Tween-20 [Merck, Whitehouse Station,NJ]pH 7. 2)封閉 I 小時之后，加入在ELISA緩沖液中稀釋的血清樣品2小時并且復制標準曲線(I 10開始)。通過用OVA腹膜內免疫獲得OVA-特異性IgE參考標準并且人為設定10，000實驗單位/ml (EU/ml)。接種之后，經5小時加入I微克/毫升與地高辛配基(DIG)偶聯的0VA，從在ELISA緩沖液中含有DIG-3-o-甲基羰基-5-氨基己酸-N-輕基-琥拍酰亞胺-酯(Roche Diagnostics,Basel, Switzerland)的試劑盒制備,接著用在ELISA緩沖液中以I : 500稀釋的與辣根過氧化物酶(Roche Diagnostics)偶聯的抗-DIG-Fab片段溫育I小時。用o_苯二胺-二氯化物底物(0. 4mg/ml, Sigma)和4mM H2O2的PBS溶液顯示顏色并且通過加入4M H2SO4終止。使用 Benchmark 微量滴定板(Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA)讀取 492nm 的光密度。ELISA的測定限制是0. 5EU/ml IgE。對小鼠取血之后立即進行支氣管肺泡灌洗(BAL)。簡要地說，用溫熱至37°C的I毫升等份的無熱原鹽水通過氣管插管將氣道灌洗5次。集中灌洗出的液體，將細胞沉積(32x g, 4°C, 5分鐘)并且重新懸浮于150微升冷的PBS中。使用Biirker-Tiirk計數室(KarlHecht Assistent KG, Sondheim/R6hm,德國)測定BALF中的細胞總數。對于不同的BALF 細胞計數，制備 cytospin 制劑并且用 Diff-Quick (Dade AG, Dudingen,瑞士)染色。對于每個cytospin,計數400個細胞,并且通過標準形態學方法分為單核細胞(單核細胞，巨噬細胞，和淋巴細胞)，嗜酸性細胞，和嗜中性白細胞。利用非參數Mann-Whitney Utest進行統計學分析。根據先前的描述測定抗原反復刺激肺組織中的T細胞而產生細胞因子(Hofstra，C. L.，等(1999) Inflamm. Res. 48 :602)。簡要地說，如上所述對肺灌洗，并且通過右室灌注4毫升含有100U/ml肝素的鹽水，去除所有的血和血管內白細胞。取出全部肺組織并且轉移到冷的無菌PBS中。然后將肺切碎并且在37°C下在含有2. 4mg/ml膠原酶A和DNA酶I (II級)(都購自Roche Diagnostics)的3ml RPMI 1640中消化30分鐘。通過加入胎牛血清(FCS)終止膠原酶活性。用10ml RPMI 1640將肺組織消化物通過70-微米尼龍細胞過濾器(Becton Dickinson Labware, Franklin Lakes, NJ)過濾，獲得單細胞懸浮液。將肺細胞懸浮液洗滌，重新懸浮于培養基(RPMI 1640，含有10% FCS，1% glutamax I，和慶大霉素[都來自 Life Technologies, Gaithersburg, MD]),和 5OmM 疏基乙醇(Sigma) 中，并且使用Biirker-Tiirk計數室測定肺細胞總數。在圓底96-孔板(Greiner Bio-OneGmbH, Kremsmuenster，奧地利)中，在OVA (10微克/ml)或者僅有培養基存在下，培養肺細胞(8xl05肺細胞/孔)。作為正對照，在與板結合的大鼠抗-小鼠CD3(克隆17A2，50微克/ml，4°C下包被過夜)存在下培養細胞。每一次體外刺激都進行三次。37°C下培養5天之后，收集上清液，集中每一次粗集收集的上清液，并且在_20°C下保存，直到通過ELISA測定細胞因子水平。根據生產商說明書(PharMingen,San Diego, CA)進行 IFN-Y , IL-4, IL-5, IL-10,和 IL-13ELISAs。ELISAs 的檢測限度對于 IFN-Y 是 160pg/ml，對于 IL-4 是 16pg/ml，對于IL-5 是 32pg/ml，和對于 IL-10 和 IL-13 是 100pg/ml。在所有的實驗中，對每一只小鼠最后攻擊之后24小時測定氣道對乙酰甲膽堿的反應能力，血清OVA-特異性IgE水平，BALF中細胞浸潤，和肺組織中T-細胞反應。BALF中單核細胞(單核細胞，巨噬細胞，和淋巴細胞)，嗜酸性細胞，和嗜中性白細胞數目減少，氣道超反應能力減退，肺組織中抗原反復刺激T細胞的細胞因子生產減少,標記試驗小鼠哮喘改善。實施例5 :呼吸病(COPD)小鼠模型中的TNFa抑制劑對肺泡擴張和炎癥的檢查治療研究使用吸煙誘導的COPD小鼠模型進行下面的研究(Keast，D.等(1981)J. Pathol. 135 249 ；Hautmaki,R. D.，等(1997) Science 277 :2002)。在對吸煙的反應中，炎性細胞聚集在肺中，接著觀察到肺氣腫生理學變化特征。以前的研究表明吸煙的第一個月內開始進行性炎癥細胞聚集，接著吸煙之后3-4個月氣腔擴大(Hautmaki等(1997) Science277 2002)。使用適合小鼠的吸煙裝置，讓小鼠每天，每周6天，6個月吸入沒有過濾嘴的香煙。沒有吸煙的年齡匹配的動物用作對照物。如上所述吸煙6個月后，根據本領域公知的標準方案，以一定范圍劑量，施用已知結合并中和小鼠TNFa的單克隆抗-TNF a抗體，例如，抗體 TN3(TN3-19. 12)(參見 Marzi 等(1995) Shock 3 :27 !Williams 等(1992) Proc Natl AcadSci US A. 89 :9784 ；BD Biosciences Pharmingen)。還施用合適的安慰劑對照物。對小鼠施用抗體治療21天的時間。處死小鼠，接著檢查肺容量和順應性，細胞因子量度，組織學粘液指數量度，肺泡管擴張，氣腔量度，肺泡和間質巨噬細胞計數和肺泡大小，如下所述。抗體治療之后，對狀態好的動物進行支氣管灌洗；鈍器解剖法分開氣管，插入小管徑導管并且固定在氣道中。滴注兩體積的I. Oml的PBS和0. 1% BSA，小心抽吸，并集中。將每個BAL液體樣品離心，并且在使用之前將上清液在_70°C下保存。細胞因子測定如實施例5所述。為了測定肺容量和順應性，將動物麻醉，對氣管插套管，通過“T”部接合向肺通入100% 02。然后夾住氣管，氧被吸收到進行的肺灌注表面。在除氣之后，整塊取出肺和心，并且在逐漸增加的壓力下用PBS膨脹，從0至30cm。每5-cm間隔，通過容量置換評價肺的大小。接受治療的動物的肺容積相對安慰劑治療的對照動物有所增加表明CCffD改善。對于組織學分析，處死小鼠并且進行中胸骨切開術，用沒有鈣和鎂的PBS進行右心室灌注，洗清肺血管內空間。然后將肺固定于一定壓力(25cm)，用中性緩沖10%福爾馬 林，在10%福爾馬林中過夜，包埋在石蠟中切成5微米并且用蘇木子和曙紅(H&E)和有淀粉酶的高碘酸-Schiff (D-PAS)染色。組織學粘液指數(HMI)提供每單位氣道基膜D-PAS+上皮細胞百分比量度。從D-PAS-染色切片計算(Cohn，L.，等(1997) J. Exp. Med. 186 :1737)。與安慰劑治療的對照動物相比，接受治療的動物的HMI減小，表明COPD改善。利用50-線計數網(10-mm總長)以x200倍對來自15個隨機場地的每一只小鼠計算Lm，氣腔大小的指標。結果是倆個獨立觀察員的量度的平均值。與安慰劑治療的對照動物相比，接受治療的動物的氣腔大小增大，表明COPD改善。為了測定肺泡管擴大，使用Optimus 5. 2影像分析軟件(Optimus, Bothell, WA),測量從末端細支氣管肺泡管擴充250微米至導管中的近接表面面積。與安慰劑治療的對照動物相比，接受治療的動物的肺泡管大小減小，表明COPD改善。通過計數鼠Mac-3 (抗小鼠的大鼠抗體(0. 5mg/ml)鑒定的巨噬細胞來定量測定肺泡和間質巨噬細胞，鼠Mac-3以I : 4000稀釋度使用；PharMingen，San Diego，CA0免疫染色，使用抗生物素蛋白-生物素堿。與安慰劑治療的對照動物相比，接受治療的動物的肺泡和間質巨噬細胞數目減少，表明COPD改善。從氣道平均帶長估計肺泡大小(Ray,P.,等(1997) J. Clin. Invest. 100 :2501)。這個量度類似于平均線性截距，一種氣腔大小的標準量度，但是有著不依賴于肺泡間隔厚度的好處。如上所述制備切片。為了獲得隨機分析的影像，將每一個載玻片放在印刷成直角的網格中，并且一系列點放在網線交叉點的蓋玻片上，即以大約I毫米的間隔。通過系統掃描2-_間隔獲得盡可能接近每一個點的區域。放棄含有可鑒定的人工產物或非肺泡結構例如支氣管血管束或胸膜的區域。通過框架鉤板將每只小鼠肺的最少10個區域獲取到Macintosh G3計算機(Apple Computer Inc. , Cupertino, California, USA)中。每微米 I. 5 象素最終放大率以
8-bit灰色-等級獲得成像。使用NIH的Wayne Rasband寫的公共區域NIH成像程序,使用從網點(http://rsb. info.nih.gov/nih_image)可獲得的商業協議,在Macintosh計算機上分析成像。對成像手工界定閾值，然后使平整并反轉。然后對成像進行有序邏輯成像匹配“和”用水平的然后用垂直的網格操作。對于每一只動物進行每一個區域的至少300次測量。將氣腔之上的空氣平均為平均帶長度。帶長度隨著肺泡擴張而增大。與安慰劑治療的對照動物相比，接受治療的動物的肺泡大小增大，表明COPD改善。實施例6 :特發性肺纖維化(IPF)小鼠模型中的TNFa抑制劑使用博萊霉素誘導的肺纖維化小鼠模型對IPF治療的研究使用博萊霉素誘導的肺纖維化小鼠模型進行下面的研究(Bowden，D. H.的綜述文章(1984) Lab. Invest. 50 :487 ；Tokuda, A.，等(2000) J. Immunol. 164 :2745)。對8-10周齡的C57BL/6J雌性小鼠施用硫酸博萊霉素。簡要地說，i. p.注射200微升5mg/ml戊巴比妥麻醉C57BL/6J小鼠，接著氣管內滴注50微升無菌水中3mg/kg硫酸博萊霉素。如上所述，氣管內滴注博萊霉素之后，對博萊霉素誘導的肺纖維化小鼠施 用一定劑量范圍的已知結合并中和小鼠TNFa的單克隆抗-TNFa抗體，例如，抗體TN3(TN3-19. 12)(參見 Marzi 等(1995) Shock 3 :27 !Williams 等(1992) Proc Natl AcadSci U S A. 89 :9784 ；BD Biosciences Pharmingen)。也給與合適的安慰劑對照物。每天處理小鼠兩次，持續14天。博萊霉素處理之后20和60天處死小鼠。組織在10%緩沖的福爾馬林中固定并且包埋在石蠟中。用蘇木紫和曙紅對切片染色并且通過光學顯微鏡檢查。如下所述測定肺-浸潤白細胞計數，細胞因子量度，和總的肺膠原含量。根據Smith等(1994) J. Immunol. 153 :4704所述制備BAL細胞和肺-浸潤白細胞。簡要地說,麻醉之后,通過氣管內插管在肺中滴注ImlPBS并且抽取5次。收集BAL液體并且在RBC溶解之后測定全部白細胞計數。Cytospin離心之后測定細胞差別。用Diff-Quik產品(Baxter, Miami, FL)對樣品染色。為了分離肺-浸潤白細胞，用鹽水對肺灌注，從胸腔剝離，然后用剪刀剪碎。每個樣品在37°C下在搖床中在15ml消化緩沖液(10%FCS，在RPMI 1640中，有1%膠原酶；WakoPure Chemical,Osaka,日本)中溫育30分鐘。接著,將樣品壓過尼龍網并且在淋洗之后懸浮于 10% FCS-RPMI 1640 中。細胞懸浮液用 Histopaque-1119 (Sigma, St. Louis,MO)處理并且以2000rpm離心20分鐘，去除肺薄壁組織細胞和RBC。將沉積物在淋洗之后重新懸浮于2. 5% FCS-PBS。進行細胞計數之后,進行流式血細胞計數免疫熒光分析。根據先前描述的(Yoneyama等(1998) J. Clin. Invest. 102 1933 ；Murai 等(1999)J. Clin. Invest. 104 :49),使用 Epics Elite 細胞分類裝置(Coulter Electronics,Hialeah,FL)對外周血白細胞和肺-浸潤白細胞進行免疫熒光分析。用RBC溶解緩沖液從正常小鼠制備外周血白細胞。和Fe Block(抗-0)16/32 ;PharMingen, San Diego, CA)溫育 10 分鐘之后，用抗 CD3, CD4, CD8, CDllb, CDllc，和 Gr-I (PharMingen)的 PE-偶聯的 mAb對細胞染色，并且還用20微克/ml的兔抗-CCRl多克隆Ab染色，接著用FITC-偶聯的山羊抗兔 IgG(Leincc) Technologies, St. Louis, MO)染色。分析之前,進行 propidium 碘化物(Sigma)染色，去除死亡的細胞。與安慰劑治療的對照動物相比，接受治療的動物的肺浸潤白細胞數目減少，表明IPF改善。如下進行肺樣品的免疫組織化學根據現有技術描述(Yoneyama等(1998)J. Clin. Invest. 102 :1933 ；Murai 等(1999) J. Clin. Invest. 104 :49)制備肺樣品。簡要地說，肺樣品固定在高碘酸鹽-賴氨酸-多聚甲醛中，用含有蔗糖的PBS洗滌，包埋在Tissue-Tek OCT化合物(Miles，Elkhart, IN)中，在液氮中冷凍，并且用低溫控制器切成7-微米-厚切片。內源過氧化物酶活性抑制之后，切片與第一種Ab溫育。使用的Abs是兔抗-CCRl Ab,大鼠抗-F4/80 (BMA Biomedicals,Geneva,瑞士)，大鼠抗-0)4,大鼠抗-0)8,大鼠抗-Gr-I (PharMingen)，大鼠抗-非淋巴樣樹突狀細胞(NLDC) -145，和大鼠抗-II類MHC(BMA Biomedicals)。作為負對照，分別使用兔IgG或大鼠IgG。它們依次用HRP-偶聯山羊抗-兔 IgG(Cedarlane Laboratories, Hornby, Ontario,加拿大)或 HRP-偶聯山羊抗-大鼠 IgG(BioSource International, Camarillo, CA)處理。用 3,3' _ 二氨基聯苯胺(Wako Pure Chemical)或 3_ 氨基 _9_ 乙基咔唑底物試劑盒(Vector Laboratories,Burlingame, CA)染色之后,樣品用Mayer' s蘇木紫計數染色。與安慰劑治療的對照動物相比，接受治療的動物的CCRl減小，⑶4+T細胞，⑶8+T細胞，非淋巴樣樹突細胞(NLDC)，和攜帶II類MHC的細胞數目減少，表明IPF改善。根據生產商說明書,使用Sircol膠原分析試劑盒(Biocolor,北愛爾蘭)，通過分析總的可溶性膠原，測定總的肺膠原含量。簡要地說，在施用博萊霉素之后第14天收集肺， 并且在含有大約I毫克胃蛋白酶/10毫克組織殘留物的IOml 0.5M乙酸中勻漿。攪拌下每個樣品在4°C下溫育24小時。離心之后，測定200微升的各種上清液。向各樣品加入與膠原結合的I毫升Sircol染料試劑，然后混合30分鐘。離心之后，將沉積物懸浮于試劑盒中包括的I毫升堿性試劑中并且在540nm用分光光度計讀數。使用膠原標準溶液構建標準曲線。膠原含有大約14%重量比的羥基脯氨酸，根據生產商的數據用羥基脯氨酸含量校正該方法獲得的膠原含量。與安慰劑治療的對照動物相比，接受治療的動物的肺膠原含量減小，表明IPF改善。使用博萊霉素誘導的肺纖維化小鼠模型，對小鼠檢查BAL細胞數量的減少，外周血白細胞減少和肺浸潤白細胞減少。還對小鼠檢查與安慰劑治療小鼠相比的D2E7治療小鼠總的肺膠原含量減少。實施例7 :哮喘治療中的TNF a抑制劑患有哮喘的人患者D2E7的臨床研究如果12至65歲患者具有至少兩年哮喘的診斷病歷并且還具有證實的可逆支氣管痙攣，在頭6個月中施用舒喘寧之后FEVl增加15%或更多，則是合格的。附加包含標準包，基礎FEVl在預知正常值的50 %和80 %之間，除了哮喘之外沒有任何臨床明顯的疾病，有每天使用吸入的皮質類固醇歷史，并且在開始研究之前終止所有的P 2-激動劑30天。在篩分觀察之后7天內進行基礎觀察。所有的患者接受FEVl評定并且進行完全身體檢查。進行肺部聽診和咽喉檢查，并且評定哮喘癥狀。將合格的患者隨機分為處理組，包括安慰劑組。基礎測量之后，患者開始接受治療。他們是隨機化的，并且以患者不知情的方式用D2E7或安慰劑治療。在第15和29天，重復在基礎觀察時進行的所有的實驗。還進行12-lead ECG。回顧日記簿，對患者確認其他藥療法的使用以及任何不利的事件。每一次探視以呼吸量測定法測試確定改善狀況。這些包括FEVl，最高呼氣流速(PEFR)，用力肺活量(FCV)，和25%至75%的FVC下的用力呼氣流。最后探視的FEVl認為是功效的初級量度。比較患者進行的每天兩次的PEFR試驗并且計算解救藥療法吸入數量。嚴格表征患者/醫生對哮喘癥狀的評定(喘鳴，胸緊，呼氣短促和咳嗽)。通過回顧患者日記卡和通過收集沒有使用的研究藥療法評定順應性。實施例8 =COPD治療中的TNF a抑制劑對患有COPD的人患者檢查D2E7的臨床研究研究人群是診斷有COPD的年齡40-80歲的男性和女性患者。患者必須具有最好的FEVI/FVC比彡0. 70升，固定的氣道梗阻，施用舒喘寧之后FEVl增加彡15%或彡200ml (或者兩者)來確定，或者施用舒喘寧之后預計FEVl在30和70%之間。患者還必須是目前或以前的吸煙者，吸煙史> 10包年。基礎測量之后，患者開始接受治療。他們是隨機化的，并且以患者不知情的方式用 D2E7或安慰劑治療。預支氣管擴張藥FEVl 研究藥療法和 St. George' s Respiratory Questionnaire總得分基線變化之后(Jones, P. W.，等(1991) Resp. Med. 85 (增刊):25)，預劑量基線增加標示改善，所述總得分指示患者生活質量的改善。根據低潮自基線FVC的增加，至第一次COPD惡化的時間的延長，以及運動后喘息程度自基線的降低，可見到改善(改進的Borg Scale ；Stulbarg, M. , Adams, L. Dyspnea.于Murray J, Nadel J,編著，Textbook of RespiratoryMedicine. Philadelphia, PA WB Saunders, 2000 ;541_552)。安全性的量度是可逆事件，致命號，所有雙盲探視的心電圖，和實驗室評定。 實施例9 IPF治療中的TNF a抑制劑對IPF人患者的D2E7臨床研究將D2E7治療對安慰劑治療進行比較，進行多中心，雙盲，安慰劑對照研究。如果患者組織學證實IPF并且在開始研究之前12個月時間內肺功能下降至少10%，則患者對于該項研究是合格的，不管用糖皮質激素或其他免疫抑制劑或者兩者連續或反復治療至少6個月。用來鑒定IPF的主要組織學特征是存在胸膜下和腺泡周纖維化損傷，只有較少細胞浸潤。在高分辨計算機X線斷層攝影術上不存在兩側不完全滲出物和證實損傷主要在外周分布是鑒定該疾病的放射學標準。有著接觸已知引起肺纖維化的有機或無機灰塵史的患者以及有結締組織疾病或者其他慢性肺疾病的那些患者除外。以總的肺容量為基礎鑒定的最后階段IPF小于預測正常值的45%的患者也排除在外。獲得重復肺功能試驗，FVC，總的肺容量(TLC)，和氧飽和度的基線值。基礎測量之后，患者開始接受治療。他們是隨機化的，并且以患者不知情的方式用D2E7或安慰劑治療。IPF患者改善包括研究的患者總成活率增加，FVC,總肺容量(TLC)和氧飽和度改善。肺功能改善定義為FVC或TLC預定值增加10%或更大，或者呼出空氣，靜止或呼吸困難相同部分氧飽和度增加3%或更大。每一次相同方式測量減小認為是惡化。沒有證實改善或惡化的患者認為是穩定的。實施例10 :減小炎癥或再狹窄中的TNF a抑制劑使用小鼠冠狀動脈模型的再狹窄研究使用小鼠冠狀動脈模型進行下面的再狹窄研究(Kumar和Lindner (1997)Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 17 :2238 ；de Waard 等(2002)Arterioscler. Thromb.Vase. Biol. 22 :1978)。通過腹膜內(i. p.)注射塞拉嗪溶液使2_4月大的小鼠麻醉。切割左側共有頸動脈并且在接近頸動脈分叉的地方結扎。然后讓小鼠恢復。
對試驗組施用已知結合并中和小鼠TNFa的單克隆抗-TNFa抗體，例如，抗體ΤΝ3(ΤΝ3-19· 12)(參見 Marzi 等(1995) Shock 3 :27 !Williams 等(1992) Proc Natl AcadSci US A. 89 :9784 ；BD Biosciences Pharmingen)。每周每天對小鼠皮下注射抗-TNF 抗體或安慰劑。結扎頸動脈之后2. 5或4周，處死小鼠，接著通過用4%低聚甲醛的PBS溶液灌注固定。切除頸動脈，浸在70% (v/v)乙醇中，并且包埋在石蠟中。沒有結扎的右頸動脈作為D2E7注射和安慰劑注射小鼠的內部對照物。根據上文Waard等所述，切除一連串切片用于形態學分析。形態學分析提供處理的和沒有處理的結扎的頸動脈在自一般醫生的參考點的一定設置距離的總的血管面積的量度。先前已經證明結扎導致動脈變窄(構成改型MKumar和Lindner,上文；Kumar等(1997) Circulation 96 :4333)。頸動脈交叉切片安裝在顯微鏡的載玻片上并且用蘇木紫和曙紅染色。使用顯微數字照相術獲得頸動脈成像并且對內膜和血管中層的交叉橫截面面積測量與安慰劑注射小鼠相比動脈狹窄的減小(即，更大的血 管直徑)。 實施例11 :動脈粥樣硬化猴模型中的TNF α抑制劑動脈粥樣硬化猴模型中D2E7的作用使用飲食誘導的動脈粥樣硬化猴模型進行下面的研究(Lentz SR等(2002)Circulation 106(7) :842-6 ;Sundell CL 等(2003)305(3) :1116-23)。對成年cynomolgus猴子(Macacafascicularis)喂以含有0. 7%膽固醇和43%總卡路里作為脂肪的致動脈粥樣硬化食品。喂以致動脈粥樣硬化食品44±1個月之后，對動物服以鎮靜劑氯胺酮(20mg/kb IM)并且戊巴比妥鈉麻醉(20mg/kg IV)。將非阻塞性導管插入腋動脈獲得血液樣品，并且對腋靜脈插入套管施用D2E7或安慰劑和補充的麻醉劑(每小時戊巴比妥鈉5mg/kg)。D2E7表現出對各種物種，包括cynomolgus猴子，有效抑制TNF α活性(參見美國專利6，258，562)。灌注D2E7或安慰劑之前，從腋動脈導管取血直接放到1/10體積的3. 8%檸檬酸鈉中用于止血分析。收集之后，立刻將血液樣品放到冰上，并且通過在4°C下以2500g離心分離血漿。將另外的血液樣品收集到血清分離器試管中用于膽固醇檢測或者放入到用3. 4毫摩爾/L EDTA制備的血清分離器試管中用于檢測總的血漿高半胱氨酸(tHCY)。通過腋靜脈導管經10分鐘灌注10毫升生理鹽水中的D2E7或安慰劑。灌注之后，有規則地收集血液樣品。以各種方式評定治療之后動物所患有的動脈粥樣硬化的程度。從猴子有規律地獲得血清樣品并且分析總的膽固醇，HDL膽固醇，LDL膽固醇，tHCY和甘油三酸酯。對接受治療的猴子檢查與安慰劑治療的猴子相比，總的膽固醇，LDL膽固醇，和tHCYT水平是否降低，HDL水平是否升高。實施例12 :TNFa治療患者再狹窄再狹窄人患者的DSE7研究選擇接受囊血管成形術的患者進行研究，因為他們有血管成形術之后頭6個月內發生再狹窄的增大的機會。治療之前，關于引導導管作出血管和損傷參數估計。估計包括引用血管直徑(RVD)，預處理最小腔直徑(MLD，(RVD X[l_預操作百分比直徑再狹窄])，操作后MLD (由(RVD X[I-操作后百分比直徑再狹窄])測定)，急速增大(操作后MLD-操作前MLD)，病變血管數目和交換的血管的數目。對試驗組患者施用兩周或周劑量40毫克的D2E7或安慰劑。普通技術人員根據再狹窄知識可以確定劑量。血管成形術之后6個月對患者評估以確定再狹窄是否發生。對患者評估9個月和長時間，以確定由于治療防止或減輕再狹窄的那些組中延遲的再狹窄效果。D2E7治療之后記錄血管和損傷參數估計。進行統計學分析來比較患者再狹窄程度(Jackson 等(2003) Am Heart J 145:875)。實施例13 :TNF a抑制劑治療心衰對心衰人患者D2E7的臨床研究

對于該項研究選擇患有穩定的紐約協會(NYHA) II或IV類心衰并且左心室排出量小于35%的患者。以NYHA標準，III類患者確定為活性明顯受限的那些，即，他們只有在休息時感到舒服，IV患者定義為應該完全休息的那些，即，應該在床上或椅子上，或者任何身體活動帶來不舒適和休息時發生的癥狀。根據Burns等描述，左心室排出量與6個月死亡率有關(Burns 等(2002) JAm Coll Cardio. 39 30)。患者兩周接受P40mg劑量的D2E7,或者劑量由普通技術人員對心衰的知識調節。對照組接受安慰劑。患者在1，2，6，10，14，20，和18周接受檢查。每一次探視，對每一位患者檢查并且給出他們相對于研究開始時狀態的總的心衰狀態的評定，即，評價他們的NYHA類別。心衰研究結束時，將患者最后的NYHA類與最初的NHYA類相比較。實施例14 :糖尿病小鼠模型中的TNF a抑制劑NOD小鼠模型中TNF抗體的研究使用I型糖尿病非肥胖糖尿病(NOD)小鼠模型進行下面的研究。在研究開始時，通過檢測NOD小鼠血液中葡萄糖水平確定胰島素水平。通過讓小鼠禁食過夜(17小時)確定基礎胰島素水平。檢查血液葡萄糖水平，并且在施用葡萄糖之后4分鐘再次檢查。用反射計量器測定血液葡萄糖。將I毫升注射器中的葡萄糖(200mg/mL，在0. 85%氯化鈉中)溫熱至40°C，并且以3g/kg體重劑量對小鼠ip注射。施用葡萄糖之后4分鐘測定第二次血葡萄糖量度。使用Glucometer Elite，用第二次血液測量樣品來測定血液葡萄糖水平。將殘余的血液樣品收集到微量試管中并且用于對血清分離胰島素或C-肽測定。使用嚙齒動物放射免疫分析試劑盒(RIA)根據生產商的說明或者使用酶聯免疫測試(ELISA)測定胰島素水平。根據血液葡萄糖讀數大于300mg/dL的標準選擇糖尿病小鼠。選擇非糖尿病小鼠使得他們的葡萄糖量器的葡萄糖讀數200mg/dL之下。讓NOD小鼠(顯示如上所述葡萄糖讀數的那些)發展糖尿病，并且給與安慰劑或已知結合并中和小鼠TNFa的單克隆抗-TNFa抗體劑量，例如抗體 TN3 (TN3-19. 12)(參見 Marzi 等(1995) Shock 3 :27 !Williams 等
(1992)Proc Natl Acad Sci US A. 89 :9784 ;BD Biosciences Pharmingen)。小鼠每天接受皮下注射的TNF抗體或安慰劑。每周增加測量胰島素和葡萄糖水平來確定血液葡萄糖水平是否降低。實施例15 :糖尿病小鼠模型中的TNFa抑制劑2型糖尿病小鼠模型中TNF抗體的研究使用NSY小鼠模型(2型糖尿病)進行下面的研究(Ueda等，Diabetes Vol. 48，May 1999，1168 :1174)。NSY小鼠接近模擬人2型糖尿病在于，發生是年齡依賴性的，動物沒有嚴重的肥胖，胰島素抗性和對葡萄糖的削弱的胰島素反應有助于疾病的發展。該項研究評定很多表型數據，包括小鼠的葡萄糖水平，胰島素水平，身高和體重。根據標準技術對NSY小鼠測定葡萄糖，包括通過靜脈內葡萄糖耐受分析。在開始研究之前12周之前測定基礎葡萄糖抗性，相應地對葡萄糖，胰島素，身高和體重作圖。對NSY小鼠施用一定劑量的安慰劑或已知結合并中和小鼠TNFa的單克隆抗-TNF α 抗體，例如，抗體 TN3(TN3-19. 12)(參見 Marzi 等(1995) Shock 3 :27 !Williams等(1992) Proc Natl Acad Sci U S A. 89 :9784 ;BD Biosciences Pharmingen)。小鼠每天接受皮下注射的TNF抗體或安慰劑。在開始研究之后第0，12，24，36，和48周腹膜內施用葡萄糖之后120分鐘進行葡萄糖水平測定，來檢查葡萄糖耐受性是否降低。 實施例16 :肥胖小鼠模型中的TNF α抑制劑肥胖小鼠模型中TNF抗體的研究使用肥胖小鼠(ob/ob)鼠模型進行下面的研究。對小鼠評價體重減輕和它們的身體質量指數的減小。肥胖小鼠的特征在于顯著肥胖，飲食過多，暫時高血糖和與朗格罕氏島的β細胞的數量和大小增加有關的顯著升高的血漿胰島素濃度(Coleman，上文)。以體重為基礎，在大約26天年齡，肥胖小鼠(ob/ob)表型上與它們的瘦同窩幼仔(ob/+和+/+)顯著區別。肥胖小鼠體重增長快并且在5周齡時顯著肥胖。肥胖小鼠在7-8月齡時達到60-70克最大體重，而瘦同窩幼仔在3-4個月時達到它們30-40克最大體重(Coleman，上文；ffestman(1968)Diabetologia 4 141 ；Bray & York(1971)Physiological reviews. 51 598)。稱量13周齡ob/ob小鼠和匹配的野生型對照小鼠，確定基線體重。對小鼠施用一定劑量的安慰劑或已知結合并中和小鼠TNFa的單克隆抗-TNF α抗體，例如，抗體TN3 (TN3-19. 12)(參見 Marzi 等(1995) Shock 3 :27 !Williams 等(1992) Proc Natl AcadSci U S A. 89 :9784 ；BD Biosciences Pharmingen)。小鼠每天接受皮下注射的 TNF 抗體或安慰劑。所有的小鼠喂以高脂肪飲食(58%脂肪，Research Diets D12330) 12周。每周記錄體重。12周之后，將小鼠安樂死，切割脂肪墊并且稱重，以及動物的最后體重，以測定最終身體質量指數(BMI)和肥胖的發生。或者，在出生時開始用D2E7治療ob/ob小鼠，并且喂給正常飲食，即，不是低脂肪，不是高脂肪飲食。每周對接受治療的和對照小鼠(ob/ob同窩幼仔)稱重。一般情況下，第五周時，ob/ob小鼠表現出指示它們是肥胖的BMI。第五周對小鼠檢查，確定它們是否具有比對照物低的BMI量度。實施例17 :治療人2型糖尿病中的TNF α抑制劑2型糖尿病人類患者的D2E7研究對于該項研究選擇診斷有2型糖尿病的患者。使用下面的包含標準年齡40-65歲，已知糖尿病史> 12個月，穩定BMI < 35kg/m2,仰臥血壓< 140/90mm/Hg,血清肌酸酐< 106微摩爾/升，第一次評定之前3個月期間以及15天安慰劑進行期間每周評價的樣品中m24-h UAE在20和200微克/分鐘，并且在研究開始之前沒有心血管病，肝病，或全身疾病。除了用于治療肥胖的那些藥物之外，患者不再攝取任何另外的藥物。在研究之前的三天以及在研究期間，患者攝取等熱飲食( O. 13mJ xkg-ix天-I ;50%碳水化合物,35%脂質，15%蛋白質)，對鈉的攝取沒有限制。每一次探訪檢查飲食建議的遵循程度。對患者施用兩周一次40mg的D2E7給藥方案，但是本領域技術人員根據HCV治療的知識能調節給藥劑量和給藥次數。至少每周對患者監視，監視12周，反復分析象開始D2E7治療之前進行的那些指標，如下所述。對于研究中每一項患者的評定，進行下面的基礎檢查仰臥血壓量度；BMI ;三個24小時尿樣的平均值；血葡萄糖水平；24小時尿葡萄糖；血清肌酸水平；肌酸酐清除率；和心電圖記錄。此外,每個患者保持每天日記,監測2型糖尿病癥狀，例如疲勞，過度口渴，尿頻，視覺模糊，感染率高，傷口愈合慢，情緒多變，和性欲問題。對患者檢查以確定D2E7中血葡萄糖水平是否降低，以及II型糖尿病典型癥狀是否減輕，例如疲勞，過度口渴，尿頻，視覺模糊，感染率高，傷口愈合慢，情緒多變。實施例18 :缺鐵性貧血中的TNFa抑制劑 缺鐵大鼠模型中TNF抗體的研究使用缺鐵性貧血大鼠動物模型進行下面的研究(Catani等(2003) Braz. J. Med.Biol. Res. 36 ；693)。對雄性 Wistar-EPM 大鼠(大約三周齡)喂以 AIN-93G (AmericanInstitute of Nutrition Rodent Diets)沒有鐵的飲食兩周的時間以誘發缺鐵性貧血。對大鼠施用一定劑量的安慰劑或已知結合并中和小鼠TNFa的單克隆抗-TNFa抗體，例如，抗體 TN3(TN3-19. 12)(參見 Marzi 等(1995) Shock 3 :27 !Williams 等(1992)Proc NatlAcad Sci U S A. 89 :9784 ;BD Biosciences Pharmingen)。治療之前和之后取血樣,測定血紅蛋白和血細胞比容值。為了分析血細胞比容和血紅蛋白濃度，收集血液并且與5毫升的0. 5M EDTA混合。通過在密封的肝素化毛細管中將血液離心來測定血細胞比容。由546nm下氰化正鐵血紅蛋白的吸收值計算血紅蛋白濃度。對大鼠檢查以確定是否有改善的血細胞比容量度。實施例19 :慢性病貧血的TNFa抑制劑研究與慢性炎癥疾病相關的貧血的TNF抗體研究使用慢性病貧血大鼠模型進行下面的研究(Coccia等，(2001)Exp. Hematology29 ;1201)。在第0天，對8-10周齡雌性Lewis大鼠腹膜內注射(i. p.)平衡至15微克鼠李糖/前款劑量的0. 85%鹽水中懸浮的肽基聚糖-多糖聚合物(PG-APS)進行接種。通過尾靜脈將血樣收集到EDTA-包被的微量容器試管中，并且在對大鼠血液校正過的ADVA 120血液學系統上進行完全血計數(CBC)。收集另外的血液樣品并且在微量血清分離器離心試管中分離，并且對血清分析鐵，膽紅素，和內源EPO濃度。對大鼠施用一定劑量的安慰劑或已知結合并中和小鼠TNFa的單克隆抗-TNFa抗體，例如，抗體TN3 (TN3-19. 12)(參見Marzi 等(1995) Shock 3 :27 !Williams 等(1992) Proc Natl Acad Sci U S A. 89 :9784 ；BDBiosciences Pharmingen),并且檢查改善的鐵,膽紅素,和EPO濃度量度。實施例20 :對貧血的TNF a抑制劑對貧血人患者的D2E7抗體的研究對表現出一般與貧血相關的癥狀的患者檢查并且分析以確定他們是否患有貧血。一般與貧血相關的癥狀是疲勞，胸痛，呼吸短促，面色蒼白，和心速快。指示哮喘的檢驗的例子是完全血計數(CBC)，網狀細胞計數，和鐵供應量度，包括血清鐵，總的鐵-結合能力，和血清鐵蛋白。有嚴重貧血和血紅細胞形態異常的患者，骨髓抽吸和活組織檢查是重要的診斷工具。對于該項研究選擇患有貧血的患者。在CBC檢驗中，自動細胞計數器測量很多參數作為CBC的部分，包括血紅蛋白，血紅細胞計數，血紅細胞容量分布，血小板計數，和白細胞計數。計數器還計算血細胞比容(以RBC計數和容量為基礎)，平均細胞容積(MCV)(以容積分布為基礎)，平均細胞血紅蛋白(MCH)(血紅蛋白除以血細胞比容)，和紅細胞分布寬度(RDW)。紅細胞指數和RDW與人工染色血液涂片的直接檢查一起使用來評定紅細胞形態學。象CBC分析，網狀細胞計數的精確測量是任何貧血的最初分類的關鍵。網狀細胞是新生的包含足夠殘留RNA的血紅細胞，它們可以用體外活體染料染色并且計數為循環血紅細胞種群的百分比。在基礎狀態，根據計數方法，正常網狀細胞計數范圍是1-2百分比。用正常的每天大約循環血紅細胞的I%置換校正。網狀細胞計數的增加提供對貧血相應的血紅細胞產生的可靠量度。為了使用網狀細胞作為產生量度，首先一定校正患者血細胞比容的變化以及紅細 胞生成素對骨髓網狀細胞早期釋放到循環中的作用。血細胞比容(HCT)校正將網狀細胞百分比轉化為絕對數
%網狀細胞X患者HCT=絕對％網狀細胞
45%每當對外周血液血涂片有顯著多染色性時，骨髓網狀細胞(“轉移”)校正涉及絕對百分比除以一個I. 5至2. 5的系數。轉移校正應該總是應用到貧血患者，和提供有效血紅細胞產生真實指數的非常高的網狀細胞計數。正常患者因血細胞比容小于30%而好轉，網狀細胞產生指數增加2至3倍。因此，這個量度獨自證實這樣的事實，即患者有合適的紅細胞生成素反應，正常的紅色脊髓，和供應以滿足要求的足夠的鐵。當網狀細胞指數小于2時，骨髓增殖或先質成熟中一定存在缺陷。鐵供應的標準量度包括血清鐵，轉運鐵-結合能力(TIBC)，和血清鐵蛋白水平。正常血清鐵范圍是9-27微摩爾/升(50-150微克/dL)，而正常TIBC是54-64微摩爾/升(300-360微克/dL)。因此，在基礎狀態，循環中只有30-50%的轉運是鐵飽和的。每一次測量和計算的百分飽和狀態提供重要信息。血清鐵蛋白用來評定身體鐵的儲存。成年男性血清鐵蛋白水平在50和150mg/L之間，相應于600_1000mg鐵儲存。成年女性有較低的血清鐵蛋白水平(15-50mg/L)和較小的鐵儲存(0-300mg)。觀察到較低血清鐵蛋白水平是鐵儲存有障礙的；水平低于15mg/L指示儲存枯竭和缺鐵。通過穿刺抽吸或活組織檢查容易獲得骨髓樣品。患有低增殖貧血或血紅細胞成熟患者有最大值，提供關于骨髓結構和細胞構成，以前質增殖和成熟的有價值信息。使用紅細胞類對粒細胞前體之比(E/G之比)評定紅細胞類前體的增殖能力。低增殖貧血和網狀細胞指數< 2的患者證實E/G比彡I : 3或I : 2。相反，生成指數彡5的溶血性貧血患者的E/G比> I : I。從E/G之比和網狀細胞產生指數之間的匹配鑒定紅細胞前體成熟缺陷。這些個體證明E/G之比大于I : I并且有低網狀細胞指數，典型成熟病癥無效紅細胞生成。基礎測量之后，患者開始接受治療。他們是隨機的并且以患者不知情的方式用D2E7或安慰劑治療。至少每兩周監測患者完全血計數(CBC)，網狀細胞計數，和鐵供應量度。實施例21 :神經病性疼痛動物模型中的TNF a抑制劑大鼠坐骨神經結扎模型中的TNF抗體使用神經病性疼痛大鼠坐骨神經結扎模型進行下面的研究(Bennett和Zie (1988) Pain 33:87)。在手術之前進行基礎行為測量(對機械異常疼痛和熱痛覺過敏的反應)。熱痛覺過敏指大鼠熱疼痛閾，機械異常疼痛指輕觸覺刺激的反應閾。將體重120-150克的雄性Sprague-Dawley大鼠麻醉,并且對每一只實施坐骨神經結扎手術。坐骨神經結扎手術包括暴露共同的坐骨神經，然后用4條結扎線松松系住，留有 I毫米間隙。讓大鼠恢復并且施用一定劑量的安慰劑或已知結合并中和小鼠TNFa的單克隆抗-TNFa抗體，例如，抗體 TN3(TN3-19. 12)(參見 Marzi 等(1995) Shock 3 :27 !Williams 等(1992)ProcNatl Acad Sci U S A. 89 :9784 ；BD Biosciences Pharmingen)。試驗組每天接受每周皮下注射的TNF抗體或安慰劑。 手術之后，以每周為基礎實施機械異常疼痛和熱痛覺過敏，持續10周。痛覺缺失試驗檢查對有害加熱的反應，并且通過將大鼠放在帶有清楚玻璃底面的小籠中，在底面之下影響腳的平面有放射性熱源。記錄抽取潛伏期和時間。加熱之后抽取后爪的延長的潛伏期證明止痛藥活性。通過將大鼠放在帶有篩網底面小籠中并且用通過彎曲它們所需要的力的克數校正過的有刻度的von Frey毛發刺激后爪平面,測定對正常無害機械刺激的反應(機械異常疼痛量度)。與沒有手術的大鼠相比，足反射退回，骨神經痛結扎小鼠反應低克數的機械刺激。這種對正常下無害的刺激的反應稱作異常疼痛。處理之后產生足退回所需要的機械力的克數的增加證實抗異常疼痛活性和神經病性疼痛減輕。實施例22 :神經病性疼痛動物模型中的TNF a抑制劑大鼠節段脊柱神經結扎模型中的TNF抗體研究使用神經病性疼痛的大鼠節段脊柱神經結扎模型進行下面的研究(Kim和Chung，Pain 50 (1992) 355-363.)。將體重120-150克的雄性Sprague-Dawley大鼠麻醉，并且放在仰臥體位。從L4-S2水平棘狀病變分離左側脊柱旁肌肉。暴露左L5和L6神經末梢并且緊緊結扎，6-0手術絲縫線遠離背側根神經結。讓大鼠恢復并且施用一定劑量的安慰劑或已知結合并中和小鼠TNFa的單克隆抗-TNFa抗體，例如，抗體TN3 (TN3-19. 12)(參見Marzi 等(1995) Shock 3 :27 !Williams 等(1992) Proc Natl Acad Sci U S A. 89 :9784 ；BDBiosciences Pharmingen)。試驗組每天接受每周皮下注射的TNF抗體或安慰劑。手術之前進行基礎行為測量(如上所述對機械異常疼痛和熱痛覺過敏試驗的反應)。手術之后，以每周為基礎實施機械異常疼痛和痛覺缺失試驗，持續10周。實施例23 :神經病性疼痛治療中的TNF a抑制劑神經病性疼痛人患者的D2E7檢查研究對于該項研究選擇診斷有神經病性疼痛的患者。以臨床理由為基礎確定臨床神經病性疼痛，包括病史，身體檢查和患者所表現的癥狀和征兆的適當的調查。應用International Association for the Study of Pain (IASP) Classification of ChronicPain中確定的診斷標準定義支持神經病性疼痛臨床診斷。以標準為基礎排除下面的患者，包括但不限于可能干擾神經病性疼痛評定的相同或更大嚴重程度的另一種疼痛問題；可能干擾神經病性疼痛評定的與神經病性疼痛原因無關的顯著神經病或精神病病癥；目前的藥物或乙醇濫用；和臨床明顯肝，腎或肺疾病。使用標準疼痛評定工具對患者進行神經病性疼痛評定,例如Short Form-McGillPain Questionnaire (SF-MPQ) ; 100-毫米垂直視覺模擬等級(VAS) (O =沒有疼痛，100 =無法忍受的疼痛)JPClinician Global Impression of Change (CGIC)。患者還可以利用每天日記記錄他們的神經病性疼痛。每個晚上，患者對前面24小時期間他們的疼痛平均強度分成等級。基礎測定一周之后，患者開始接受治療。他們是隨機的并且以患者不知情的方式用D2E7或安慰劑治療。每兩周對患者監測，根據他們每天日記制成圖表，檢查患者神經病性疼痛評定和疼痛平均輕度的減弱。 實施例24 :丙型肝炎病毒感染動物模型中TNF α抑制劑HCV黑猩猩模型中D2E7的研究使用黑猩猩丙型肝炎病毒(HCV)模型進行下面的研究(Shimizu等(1990) Proc.Natl. Acad Sci. USA 87:6441)。用來自急性非A非B肝炎輸血之后患者的沒有稀釋的血漿O. 5ml對黑猩猩靜脈內(i. V.)接種。接種物含有，例如，每毫升(CID5ciAiI) IO65黑猩猩50%感染劑量HCV。在接種之前和處理之后一周取得血清樣品和肝活組織檢查樣品。接種之后，對黑猩猩施用一定劑量的D2E7或安慰劑。以高親和性方式，D2E7有效結合TNF，參見美國專利No. 6，258，562。有很多方式監測接種之后的HCV水平。有規律地從黑猩猩獲得血清樣品并且分析丙氨酸氨基轉移酶(ALT)。ALT分析是已知是一組肝功能分析(或LFTs)中的一種，并且用來監測對肝臟的損傷。通過BCV抗體ELISA測試系統檢測抗HCV的循環抗體(抗-C100-3抗體)。另外，檢測血清樣品中的HCV,根據Weiner等，(1990)Lancet335 ;1所述進行cDNA/PCR 分析。根據 Shimizu 等(1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82 ;2138 描述的方法，通過用單克隆抗體48-1免疫熒光染色，也對冷凍的肝活組織檢查樣品分析胞質抗原。對接受治療的黑猩猩檢查以確定與安慰劑治療的黑猩猩相比ALT水平和HCV血清水平是否降低。實施例25 :人HCV感染中的TNF α抑制劑對人治療中的D2E7的研究選擇有償慢性HCV感染的18-70歲的男性和女性。為了獲得研究資格，通過逆轉錄-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)，患者對抗HCV (第二 -產生酶免疫測試)和HCV RNA必須是陽性的。在研究記錄的一年內患者必須有顯示慢性肝炎的肝活組織檢查，并且在開始治療之前至少6個月有升高的血清丙氨酸轉移酶(ALT)水平。記錄白細胞計數應該是至少2，500/微升；血小板計數應該大于70，000/微升。排除標準包括但不限于引起肝病或其他相關病癥的任何原因，包括人免疫缺陷或乙型肝炎病毒共同感染；臨床值得注意的心臟或心血管異常，器官移植，全身細菌或真菌感染；臨床值得注意的出血癥狀，前幾年藥物或乙醇濫用。通過標準RT-PCR分析定量分析治療之前和治療之后血清HCVRNA。通過對治療后獲得的血清樣品的RT-PCR進行HCV RNA的定性測定。通過逆向雜交分析確定HCV基因型。利用合適的與健康相關的生活質量等級測量情緒和生理狀態。
基礎測定一周之后，患者開始接受治療。他們是隨機的并且以患者不知情的方式用D2E7或安慰劑治療。對患者兩周施用40毫克的D2E7用藥方案，但是普通技術人員根據HCV治療知識能調節這個劑量和給藥次數。至少每四周檢測患者，反復測試，象在開始D2E7治療之前進行的那些。較弱的RT-PCR信號證實，相對于只接受安慰劑的那些患者，使用D2E7治療的患者HCV水平降低。實施例26 :牛皮癬小鼠模型中的TNF a抑制劑牛皮癬SCID小鼠模型中TNF抗體的研究選擇接受人牛皮癬斑移植的嚴重合并免疫缺陷(SCID)小鼠作為研究牛皮癬的動物模型，因為這些小鼠長時間保留有牛皮癬的典型臨床和組織學特征(Nickoloff等
(1995)Am J Pathol 146:580-8)。
從沒有病原體動物飼養工廠獲得2-3月齡雌性放養C. B 17 SCID小鼠。從慢性斑牛皮癬白種人男性患者獲得人皮膚樣品。局部麻醉下獲得1x3cm英寸包括臨床涉及皮膚的梭狀皮膚樣品，去除皮下脂肪，放到冷卻的磷酸緩沖鹽水中(PBS)，制成皮膚樣品。在1-2小時之內移植皮膚樣品。將全厚度皮膚樣品切成直徑8-lOmm的碎片，然后移植到小鼠的后背，每只小鼠帶著一塊移植物。關于手術操作，通過腹膜內注射(i.P.)咪達唑侖和芬太尼檸檬酸二氫鹽
I I的混合物將小鼠麻醉。將全厚度皮膚的梭狀切片移植到相應的剃刀剃出的中心背部切出的全厚度創傷上，并且用6-0無創傷單絲縫線固定。蓋上滅菌凡是林浸潤紗布之后，利用相鄰兩側皮膚在移植面上縫合皮膚囊以保護不受傷。縫合并朝上放置直到2-3周之后它們自行消散。SCID-人皮膚嵌合體表現出與人牛皮癬類似的癥狀。SCID小鼠上的移植斑表現出牛皮癬典型臨床特征，包括鱗屑，紅斑，和增厚。該模型還表現出牛皮癬組織學典型特征，包括角化不全，棘皮癥，延長的網嵴，超-乳頭狀變薄，和淋巴單核細胞浸潤到乳頭狀真皮中。用安慰劑或已知結合并中和小鼠TNFa的單克隆抗-TNF a抗體，例如，抗體TN3(TN3-19. 12)(參見 Marzi 等(1995) Shock 3 :27 !Williams 等(1992) Proc Natl AcadSci U S A. 89 :9784 ；BD Biosciences Pharmingen)在損傷部位對移植的 SCID 小鼠皮下注射。試驗組每天接受每周TNF抗體或安慰劑皮下注射。與牛皮癬斑相關癥狀的減輕證實TNF抗體治療的SCID小鼠的改善。實施例27 :牛皮癬臨床研究中的TNF a抑制劑牛皮癬人患者的D2E7對于該項研究選擇中等至嚴重程度慢性斑牛皮癬患者。在研究記錄之前，患者至少4周沒有接受任何牛皮癬治療或者至少2周沒有接受任何局部治療。每周40mg或者間隔一周40mg開始皮下注射施用D2E7劑量。每2-4周對患者進行臨床檢查。利用PsoriasisArea and Severity Index(PASI)(Fredriksson和Pettersson(1978)Dermatologica 157 :238-44)和Physician' s GlobalAssessment評定牛皮癬皮膚損傷的臨床活動，由相同的研究人員確保評定一致。12周時，測得與基線相比，患者初期終點比例實現至少75%減少。利用驗證等級評定瘙癢。利用驗證儀器測定生活質量，包括但不限于DLQI，SF-36，和EQ-5D。研究自始至終在預定探訪時照取不包括臉的全身照像。
在研究期間在預定的時間間隔獲得皮膚活組織檢查樣品，來校正接受治療的皮膚中的組織學和生物標記。在基線時獲得正常皮膚活組織檢查，用于與牛皮癬皮膚相比較。實施例28.貝切特氏病動物模型中的TNFa抑制劑貝切特氏綜合征小鼠模型中TNF抗體的研究使用貝切特氏病小鼠HSV模型進行下面的研究(Hirata，Y.，等(1993)Acta.Otolaryngol.增刊503 :79)。用針刺破表達人TNF α的小鼠的耳垂(參見EMBO J(1991)10 4025-4031的進一步描述)，然后接種I. 0x106斑-形成單位(pfu)/mL的I型單純性皰疫病毒(HSVl) (K0S菌株)溶液，引起炎癥細胞在血管內和周圍積累。結果，發生腸內，口，耳垂，和生殖器上皮損傷。有貝切特氏病樣癥狀的小鼠定義為有兩個或多個癥狀的小鼠，與人貝切特氏病可見的典型形態變化相類似。在接種之前或之后，或者在損傷發生這天起，對HSV-誘發貝切特氏綜合征小鼠 施用一定劑量范圍的已知結合并中和小鼠TNFa的單克隆抗-TNFa抗體，例如，抗體ΤΝ3(ΤΝ3-19· 12)(參見 Marzi 等(1995) Shock 3 :27 !Williams 等(1992) Proc Natl AcadSci U S A. 89 :9784 ；BD Biosciences Pharmingen)。也施用合適的安慰劑對照物。監測頭發減少，口腔和生殖器皮膚潰瘍，和眼部不舒適，并且從損傷處收集組織樣品。組織樣品用福爾馬林固定和石蠟包埋，用于切片分析。損傷切片用蘇木紫和曙紅染色，檢查炎癥細胞的外觀。作為對照物，用培養基在相同的部位對30只小鼠接種。四周之后，用相同的方法進行第二次接種，接著觀察16周。受治療小鼠與安慰劑治療小鼠相比，對小鼠檢查頭發再生和潰瘍的減輕。根據目測檢查和組織學分析，接受治療小鼠的損傷受到改善，注意潰瘍部位炎癥減輕并且潰瘍部位炎癥細胞例如T細胞數量減少,也是改善的進一步指征。實施例29.治療Kawasaki ' s病中的TNF α抑制劑使用干酪乳桿菌小鼠模型研究Kawasaki ' s病中TNF抗體的效果使用Kawasaki' s病的小鼠干酪乳桿菌(L. casei)模型(Lehman,T. J.,等(1985)Arthritis Rheum 28 :652 ；Duong, T. Τ. (2002) Int Tmmunol 15 :79 ；Brahn, Ε.,等(1999)Clin Immunol 90 :147)，進行下面的研究。一次腹膜內(ip)注射干酪乳桿菌細胞片段對表達人TNFa的小鼠誘導冠狀動脈炎(參見上文)。證明接受干酪乳桿菌處理的小鼠的心臟組織學切片類似于患有Kawasaki' s病的兒童的中等大小冠狀動脈中發現的脈管炎和動脈瘤(Lehman等(1985) Arthritis Rheum 28 :652 ；Duong (2002) Int Tmmunol 15 :79 ；Brahn等(1999)Clin Tmmunol 90:147)。通過標準方法對干酪乳桿菌注射過的小鼠腹膜內施用對照安慰劑或已知結合并中和小鼠TNFa的單克隆抗-TNFa抗體，例如，抗體TN3 (TN3-19. 12)(參見Marzi等(1995)Shock 3 :27 !Williams 等(1992)Proc Natl Acad Sci U S A. 89 :9784 ；BD BiosciencesPharmingen)。在第14天(疾病早期)或研究(確定的疾病)收獲接受注射小鼠的心臟。脈管炎患者不知道組織學切片得分。與安慰劑治療的動物相比，確定TNF抗體治療的小鼠的冠狀血管壁的炎癥損傷減少，評定冠狀動脈炎減輕。冠狀動脈炎減輕被評定為，與安慰劑治療的動物相比，伴隨內膜增生減少和血管腔變窄的冠狀血管壁炎癥單核細胞細胞滲出物減少。實施例30. Kawasaki ' s病的動物模型中的TNF α抑制劑
使用ANCA小鼠模型的Kawasaki ' s病中的TNF抗體使用Kawasaki ' s病小鼠抗-內皮細胞抗體(ANCA)模型進行下面的研究(Grunebaum 等(2002)Clin. Exp. Immunol. 130 :233 ;Blank 等(1995)Clin.Exp.Tmmun01. 102 120 ；Tomer 等(1995)Arthritis Rheum. 38 :1375 ；Damianovich 等(1996)J. Immunol. 156 :4946)。用含有來自韋格內氏肉芽腫病患者血漿的蛋白酶3-特異抗體的抗-內皮細胞抗體(ANCA)免疫小鼠。小鼠用純化的ANCA接種免疫，對照小鼠注射了正常IgG。對小鼠施用周劑量的安慰劑或已知結合并中和小鼠TNF a的單克隆抗-TNFa抗體，例如，抗體TN3(TN3-19. 12)(參見Marzi 等(1995) Shock 3 :27 !Williams 等(1992) Proc NatlAcad Sci U S A. 89 :9784 ;BD Biosciences Pharmingen),最多四個月。用人 ANCA 接種三個月之后，小鼠產生抗ANCA內源抗體。安樂死處死小鼠，對肺，腎，和心臟進行組織學檢查，檢查小動脈和小靜脈周圍淋巴樣細胞浸潤，以及血管壁外部Igs沉積，象對Kawasaki ' s病患者觀察的那樣(Grunebaum 等(2002)Clin. Exp. Tmmuno1. 130 233 ;Blank 等(1995)Clin.Exp. Imrnunol. 102 120 ；Tomer 等(i995)Arthritis Rheum. 38 :1375 ；Damianovich 等(1996) J. Immunol. 156 :4946)。淋巴樣細胞浸潤和血管壁中IgG沉積的減少，和ANCA抗體滴度的減小是Kawasaki 1 s病改善的指征。實施例31. Kawasaki , s病的動物模型治療中的TNF a抑制劑Kawasaki ' s病人患者中的D2E7的臨床研究Kawasaki / s病(KD)患者登記進行研究；所有的患者都發熱并且還鑒定了對于KD公開的5項臨床標準中的至少4項(Barron, K. S.，等(1999) J. Rheumatol. 26 :170)。也鑒定了對照例。通過心電圖測量冠狀動脈直徑并且對身體表面面積校正。心電圖篩選KD可能存在的典型變化，包括延長的PR或QT間期，異常Q波，ST-和T波改變，低壓或心律失常。對KD患者兩周施用D2E7，每周施用40mg劑量或安慰劑。普通技術人員根據KD治療知識可以調節劑量。對患者監測發熱退熱情況。如果需要，實施輔助治療，例如皮質類固醇。對患者監測并且跟蹤心電圖，用來確定是否發生冠狀動脈損傷或者冠狀動脈損傷是否改善，證明發生心電圖結果改善。實施例32.貝切特氏病治療中的TNFa抑制劑TNF a抑制劑貝切特氏病人患者的D2E7研究選擇滿足International Study Group標準的患者用于研究,要求存在口腔潰瘍加生殖器潰瘍，典型確定的眼部損傷，或陽性過應性試驗兩項(Lancet. (1990)335 :1078 ；Kaklamani, V. G.等(2001) Semin. Arthritis Rheum. 30 :299),是 6 年的平均值。對貝切特氏病患者兩周施用D2E7，每周施用40mg劑量或安慰劑。普通技術人員根據貝切特氏病治療知識可以調節劑量。對接受治療和安慰劑的患者全身檢查和詳細的眼科評定，包括視覺分辨能力，眼內壓量度，裂隙燈活組織顯微鏡檢查，和后部分間接檢眼鏡檢查，接著眼底照相術，在治療方案之前和之后都檢查。對患者檢查記錄的與貝切特氏病相關的癥狀的改善，例如，眼部炎癥的減輕，口腔潰瘍數目和嚴重程度的減輕。實施例33 :狼瘡動物模型中的TNF a抑制劑小鼠狼瘡模型中的TNF抗體研究選擇MRL/Ipr 小鼠模型研究狼瘡(Reilly 和 Gilkeson (2002) ImmunologicResearch. 25(2) :143-153 ;Mishra 等(2003)J Clin Invest. 111 (4) :539-552)。MRL/lpr小鼠表現出開始加速的自身免疫癥狀，在大約8周齡時開始多克隆B細胞激活和高Y球蛋白血。在12-16周齡MRL/lpr小鼠中，有自身抗體數組的血清學證據，包括抗_雙鏈DNA(抗-dsDNA)自身抗體和低補體血癥。16-24周齡MRL/lpr小鼠表現出關節炎，大塊淋巴結病，脾腫大，脈管炎，和腎小球性腎炎臨床癥狀。24周齡時 50 %的MRL/lpr小鼠死亡，主要由于腎衰竭。在該項研究中使用老齡雌性MRL/lpr小鼠。第14周。對MRL/lpr小鼠腹膜內注射(i. P.)各種濃度的安慰劑或者讓大鼠恢復并且施用一定劑量安慰劑或已知結合并中和小鼠TNFa的單克隆抗-TNFa抗體，例如，抗體TN3 (TN3-19. 12)(參見Marzi等(1995)Shock 3 :27 !Williams 等(1992)Proc Natl Acad Sci U S A. 89 :9784 ；BD BiosciencesPharmingen)。試驗組每天接受每周皮下注射的TNF抗體或安慰劑。一些狼瘡患者出現狼瘡患者腎炎，其定義為腎臟持久性炎癥(刺激和腫脹)。這些患者最后發展成腎衰竭，需要透析或腎移植。為了檢查腎病的進程，將MRL/lpr小鼠放在新 陳代謝籠子中，注射D2E7之后，24小時收集尿液。用D2E7治療之前和之后通過ELISA利用已知濃度小鼠白蛋白的標準曲線測定尿白蛋白分泌(Cappel Research products,Durham,North Carolina,USA,根據 Weinberg 等(1994) J Exp Med. 179 :651 中的描述)。治療之后平均白蛋白分泌減少證實早期疾病顯示和蛋白尿進程的改善。第19周，用異氟烷麻醉之后通過頸脫位處死小鼠并且取出腎臟。一個腎臟用緩沖的福爾馬林固定，包埋在石蠟中，切片，并且用H&E染色。檢查腎病理學并且通過針對血管小球炎癥，增殖，半月體形成，和壞死的標準方法定級。也注明間質變化和脈管炎。根據Watson等(1992) JExp Med. 176 :1645-1656描述，分成0_3得分或者評價各個特征，然后加合在一起得到一個最終腎得分。加合之前壞死和半月體形成的得分加倍。例如，血管小球炎癥按照下面分級0，正常；1，少量炎癥細胞；2，中等炎癥；和3，嚴重炎癥。當與安慰劑治療的小鼠相比時，來自D2E7治療小鼠腎切片中炎癥或細胞增殖(較低腎病理指數)的最小征兆證實狀況改善。還將脾稱重，以確定小鼠狼瘡活動度進程的延遲或防止。脾的大小是反映疾病免疫病理學狼瘡活動度的指征。MRL/lpr小鼠發生大塊脾大和隨著疾病進程的淋巴結病。為了測定脾的大小，在第19周，處死來自各組(治療和安慰劑)的小鼠并且測定平均體重。較低的平均體重指示狼瘡的改善。實施例34 :狼瘡的TNF α抑制劑治療對狼瘡人患者檢查D2E7的研究選擇診斷有狼瘡的患者用于研究的基礎。根據描述的一般與狼瘡相關的癥狀選擇患者，所述癥狀包括發熱，疲勞，全身不舒服，不安或有病的感覺(欠爽)，體重減輕，皮膚出皮疹，“翼形皮癬”皮疹，日光灼傷皮疹，對日光的敏感性，關節痛，腫脹，關節炎，腺體腫大，肌肉疼痛，惡心和嘔吐，胸膜炎胸痛，癲癇發作，和精神病。其他特征包括尿中帶血，咳血，鼻子出血，吞咽困難，皮膚顏色不調和，皮膚上有紅斑，壓迫或冷時手指顏色變化(雷諾氏現象)，麻木和麻刺感，口腔潰瘍，頭發減少，腹部疼痛和視覺障礙。對患者進行身體檢查以確定他們是否表現出任何狼瘡的特征癥狀。狼瘡的診斷以存在該疾病七項特征中的至少四項為基礎。確定這些疾病顯示存在的分析可以是不同的，包括下面的一些抗核抗體(ANA)組，包括抗-DNA和抗-Smith抗體，后兩項分析在單獨狼瘡情況下一般是陽性；特征性皮疹或損傷；X-射線胸片顯示胸膜炎或心包炎；聽診器對胸部聽診顯示胸膜炎或心包炎；尿分析出現血，脫落物，或者尿中有蛋白質；完全血細胞計數表明一些細胞類型減少；腎活組織檢查；和神經病學檢查。這種疾病可能還改變下面分析的結果WBC計數；血清球蛋白電泳；類風濕病因子；蛋白質，尿；蛋白質電泳-血清；單核細胞增多癥點分析；紅細胞沉降速度(ESR);冷球蛋白；直接Coombs'分析；補體成分3 (C3);補體；抗甲狀腺微粒體抗體；抗甲狀腺球蛋白抗體；抗線粒體抗體；和抗平滑肌抗體。患者隨機分成試驗組和對照組，施用D2E7或安慰劑。在該項研究中使用最有效治療狼瘡的劑量范圍。劑量應該自40mg開始，這是發現對患者治療類風濕性關節炎最有效的D2E7劑量。患者接受4-7次D2E7或安慰劑輸入。每隔一個星期對患者復查以確定狼瘡癥狀是否減輕或治愈，根據ESR和C-反應蛋白質(CRP)水平的減小來測定。實施例35 =TNFa抑制劑對斯耶格侖氏綜合征 對斯耶格侖氏綜合征人患者檢查D2E7的研究對于該項研究選擇符合針對原發性斯耶格侖氏病的European and the AmericanCollege of Rheumatology 分類的患者(參見 Vitali 等(1993)Arthritis Rheum 36:340-7 ；Fox 等(1986)Arthritis Rheum. 29 :577-85)。患者至少 18 歲。登記時，所有的患者都有活動的原發性斯耶格侖氏病，它被定義為篩選時至少存在升高的紅細胞沉降速度(ESR ；> 25/mm/hr)或者血內丙球蛋白過多(> I. 4毫克/升)。研究期間不允許改變疾病的抗風濕病藥物(DMARDs)和皮質類固醇并且在基礎之前至少4周就停止。排除的標準包括在前三個月嚴重感染，潛伏肺結核，有記錄的人免疫缺陷病毒或丙型肝炎病毒感染，生活脅迫脈管炎，已知的惡性腫瘤，伴發的嚴重或沒有控制的疾病，以及存在任何其他結締組織疾病。該項研究包括在第0，2，和6周三次輸入D2E7 (以 40mg的劑量)以及第10和14周的隨后探視。讓患者繼續人為干預，前提是在研究的自始至終劑量和用藥方案是穩定的。在基線和第2,4,6,10,和14周進行臨床,眼科,和生物學評定。臨床評定由相同的醫師進行。這些包括一般身體檢查，口干燥評定(使用0-2等級，其中0 =沒有干燥，I =輕微至中度干燥，和2 =嚴重干燥)，和言語分析(在2分鐘之內能重復“puttica”這個詞數次，這是 New Advances in Basic Science 研討會上 P. J. Shirlaw 提供的技術，Diagnosisand Treatmentof Sjogren's Syndrome，倫敦，1997年I月)。另外,根據已經確立的方法使用分散技術收集沒有刺激的全唾液5分鐘，樣品在分析天平上稱重以確定獲得的唾液的體積(I 毫克=I 毫升)(Navazesh (1993) Ann NYA cad Sci 694:72-7)。也進行眼睛干燥評定(使用0-2等級，其中0=沒有癥狀，I =人為干預(ATs)減輕的輕微至中度癥狀，和
2= ATs不能減輕的嚴重癥狀)，并且測定使用Ats的次數。對患者還進行疲勞評定(O-IOOmm視覺模擬等級(VAS))和回答疲勞調查卷(0 =沒有疲勞，I =不干擾日常活動度的輕微疲勞，2 =不干擾日常活動度的中度疲勞，和3 =嚴重減少活動度的疲勞)。臨床評定還可以包括有觸痛的關節數(最多64)，有觸痛的點的數(最多18處)，和患者疼痛評定(0-100-mm VAS)。使用O-IOOmm VAS進行患者和醫師的綜合評估。
所有的眼科評定由相同醫師進行，包括熒光素眼淚膜破裂時間(TBUT)試驗，席爾梅爾氏I試驗，并且通過麗絲安綠染色進行角膜評定(van Bijsterveld 0_9等級)。研究中測量生物學參數，并且包括ESR，C-反應性蛋白質水平(CRP)，全血細胞計數，腎肝功能試驗，產生磷酸激酶水平，血清IgA，IgM，IgG水平，抗核抗體(ANA)，和類風濕病因子(RF，和淋巴細胞分型(CD4 =和CD8 =細胞的數目)。與斯耶格侖氏病綜合征相關的癥狀變輕包括觸痛點和周圍關節疼痛減輕。實施例36 =TNFa抑制劑對少年類風濕性關節炎的作用對患有少年類風濕性關節炎的兒童檢查D2E7的研究對于該項研究選擇診斷有少年類風濕性關節炎的患者(JRA)。患者接受D2E716星期，然后隨機分為試驗組和安慰組。然后對患者施用D2E7或安慰劑。對患者施用的劑量范圍是 20mg/m2/BSA(身體表面面積)至最大每隔一周40mg之間。每隔一周對患者皮下 注射D2E7或安慰劑治療一段時間。每隔一周對患者復查以確定JRA癥狀是否減輕或治愈。疾病的臨床癥狀減輕測定JRA的改善。使用Giannini定義的標準(Giannini等(1997)Arthritis & Rheumatism 40 :1202)測定JRA改進。使用該項標準,改善的定義是評分體系中6個變量中3個比基礎至少改善30%，其余變量中不多于I個惡化> 30%。評分體系中的變量由醫師對疾病活動度的綜合評定，總的來說完好的父母/患者評定(每個根據10-cm視覺模擬等級評分)，機能能力，活動關節炎關節數目，活動范圍受限的關節的數目，和紅細胞沉降速度組成。實施例37 D2E7F(ab) ' 2片段的結晶D2E7F(abV 2片段的產生和純化根據下面的方法制備和純化D2E7F(ab) ' 2片段。用I升緩沖液A (20mM NaOAc，pH 4)將2毫升的D2E7IgG( 63mg/ml)透析過夜。透析之后，將蛋白質稀釋至20mg/ml的濃度。固定化胃蛋白酶(Pierce ；6. 7ml漿液)與27ml的緩沖液A混合，混合，并且離心(Beckman fIoor離心,5000rpm, 10分鐘)。去除上清液，并且將這個洗漆程序重復兩次。將洗滌過的固定化胃蛋白酶重新懸浮于13. 3ml of緩沖液A中。D2E7 (7. 275ml，20mg/ml，145. 5mg)與7. 725ml的緩沖液A和7. 5ml的洗滌過的固定化胃蛋白酶漿液混合。37°C下將D2E7/胃蛋白酶混合物搖動(300rpm)溫育4. 5小時。然后通過離心分離固定化胃蛋白酶。通過SDS-PAGE分析上清液，表明D2E7消化基本上完全( 115kDa沒有還原的帶， 30和 32kDa還原帶)。利用蛋白質A色譜法，從完整D2E7和Fe片段分離D2E7F(ab) ' 2片段。上述反應上清液的一半(IOml)用IOml緩沖液B (20mM磷酸鈉，pH 7)稀釋，通過O. 45微米Acrodisk過濾器過濾，并且加到5毫升Protein A Sepharose柱(PharmaciaHi-Trap ;事先用50毫升緩沖液B沖洗)上。收集級分。加載蛋白質混合物之后,用緩沖液B洗滌柱子，直到280nm下的吸收度再次確定一個基線。用5毫升緩沖液C(IOOmM檸檬酸，pH 3)洗脫結合的蛋白質；通過加入O. 2毫升的2MTrisHCl，pH 8. 9中和這些級分。通過SDS-PAGE分析級分；將含有D2E7F(abV 2片段的那些合并( 42ml)。通過在6M胍·HCl，pH 7中在280nm下的吸收度(計算的消光系數D2E7，I. 39(AU-ml)/mg ；F(ab) ' 2，I. 36 (AU-ml)/mg)確定蛋白質濃度。流過的集合液中含有 38. 2mg蛋白質(濃度，0.91mg/ml)，其代表79%F(ab) ' 2的產率(起始物理論產率的 2/3，除以2[只有一半純化]，即 48. 5mg)。
通過大小排阻色譜法進一步純化F (ab)' 2。將合并的流出的蛋白質A從 42毫升濃縮至 20毫升，然后在預先用緩沖液D (20mM HEPES, pH 7,150mM NaCl,0. ImM EDTA)平衡(和洗脫)過的Superdex 200柱子(26/60, Pharmacia)上對一部分(5ml, 7. 5mg)進行色譜分離。在280nm下有兩個峰峰1，在172_200ml時洗脫，由F(ab) ' 2組成(通過SDS-PAGE分析； 115kDa沒有還原的帶， 30和 32kDa還原的帶)；峰2，在236_248ml時洗脫，由低分子量片段構成( 15kDa，還原或沒有還原的)。將峰I濃縮至5. 3mg/ml,用于結晶實驗。D2E7F(ab) / 2 片段的結晶利用選擇滴定蒸汽擴散方法通過混合等體積的F(ab)，2和結晶緩沖液(大約各自 I 微升)使 F(ab)' 2片段結晶(5. 3mg/ml，于 20mM HEPES, pH 7,150mM NaCl，0. ImMEDTA)，并且使混合物在緩沖液Bt或18°C下保持平衡。使用的結晶緩沖液由HamptonResearch Crystal Screens I (溶液 1-48)和 II (溶液 1-48), Emerald Biostructures Wizard Screens I 和 II (各種溶液 1-48),和 Jena Biosciences 篩網 1-10 (各種溶液 1-24)組成。很多不同條件下獲得結晶，如表I中總結的。表I. D2E7F(ab) ' 2片段結晶條件一覽表
權利要求
1.一種治療患者TNFa -相關病癥的方法，其中所述TNFa -相關病癥選自脊柱關節病，肺疾病，冠心病，代謝失調，貧血，疼痛，肝病，皮膚病，指甲病，或脈管炎，包括對患者施用治療有效量的中和性高親和性TNF a抗體，使得所述TNF a -相關病癥得以治療。
2.一種治療患者TNFa -相關病癥的方法，其中所述TNFa -相關病癥選自貝特切氏病，強直性脊柱炎，哮喘，慢性阻塞性肺疾病(COPD)，特發性肺纖維化(IPF)，再狹窄，糖尿病，貧血，疼痛，克隆氏病-相關病癥，少年類風濕性關節炎(JRA)，丙型肝炎病毒感染，牛皮癬，牛皮癬關節炎，和慢性斑牛皮癬，使得所述TNF a -相關病癥得以治療。
3.一種治療患者TNF a -相關病癥的方法，其中所述TNF a -相關病癥選自與年齡有關的惡病質，早老性癡呆，腦水腫，炎性腦損傷，慢性疲勞綜合征，皮肌炎，藥物反應，脊髓之內和/或周圍的水腫，家族周期性發熱，Felty' s綜合征，纖維化，腎小球性腎病(例如鏈球菌感染后腎小球腎炎或IgA腎病)，假體松弛，顯微多脈管炎，混合型結締組織病癥，多發性骨髓瘤，癌癥和惡病質，多器官失調，脊髓發育不良綜合征，orchitism骨質溶解，胰腺炎，包括急性，慢性，和胰腺膿腫，牙周病多肌炎，進行性腎衰竭，假痛風，壞疽性膿皮病，復發性多軟骨炎，風濕性心臟病，肉樣瘤病，硬化膽管炎，中風，胸腹主動脈動脈瘤修補(TAAA)，TNF受體相關周期性綜合征(TRAPS)，與黃熱病疫苗接種相關的綜合征，與耳、慢性耳炎或兒科耳炎相關的炎性疾病，克隆氏病-相關病癥，少年關節炎/斯提耳氏病(JRA)，葡萄膜炎，坐骨神經痛，前列腺炎，子宮內膜異位，脈絡膜新血管生成，狼瘡，斯耶格倫氏綜合征，和濕黃斑變性，使得所述TNF a -相關病癥得以治療。
4.權利要求1，2，或3任一項的方法，其中所述抗體是一種分離的人抗體或者其抗原-結合部分，其以1x10_8M或更小的Kd和IxKT3iT1或更小的Ktjff速率常數從人TNF a上離解，這兩個常數都通過表面等離子共振來測定，并且所述抗體或者其抗原-結合部分中和人TNF a細胞毒性，在標準體外L929分析中IC5tl是1χ10_7Μ或更小。
5.權利要求1，2，或3任一項的方法，其中所述抗體是一種分離的人抗體或者其抗原-結合部分，其具有下面的特征 a)根據表面等離子共振測定，其以IxKT3iT1或更小的Ktjff速率常數從人TNFa上離解； b)有包括SEQID NO :3的氨基酸序列，或在I，4，5，7或8位通過一個丙氨酸取代或者在1，3，4，6，7，8和/或9位通過1-5個保守氨基酸取代而從SEQ ID NO :3修飾的氨基酸序列的輕鏈CDR3結構域； c)有包括SEQID NO :4的氨基酸序列，或在2，3，4，5，6，8，9，10或11位通過一個丙氨酸取代或者在2，3，4，5，6，8，9，10，11和/或12位通過1_5個保守氨基酸取代而從SEQ IDNO 4修飾的氨基酸序列的重鏈⑶R3結構域。
6.權利要求1，2，或3任一項的方法，其中所述抗體是一種分離的人抗體或者其抗原-結合部分，其輕鏈可變區(LCVR)包括SEQ ID NO :1的氨基酸序列并且重鏈可變區(HCVR)包括SEQ ID NO : 2的氨基酸序列。
7.權利要求1，2，或3任一項的方法，其中所述抗體是D2E7。
8.一種治療TNF α -相關病癥患者的方法，其中所述TNF α -相關病癥選自貝特切氏病，強直性脊柱炎，哮喘，慢性阻塞性肺疾病(COPD)，特發性肺纖維化(IPF)，再狹窄，糖尿病，貧血，疼痛，克隆氏病-相關病癥,少年類風濕性關節炎(JRA)，丙型肝炎病毒感染，牛皮癬，牛皮癬關節炎，和慢性斑牛皮癬，包括對患者施用治療有效量的TNFa抗體，或者其抗原-結合片段，其中抗體以1x10_8M或更小的Kd和IxKT3s-1或更小的Ktjff速率常數從人TNF a上離解，這兩個常數都通過表面等離子共振來測定，并且所述抗體或者其抗原-結合部分中和人TNFa細胞毒性，在標準體外L929分析中IC5tl是IxKT7M或更小，使得TNF a -相關病癥得以治療。
9.一種治療TNFa -相 關病癥患者的方法，其中所述TNFa -相關病癥選自貝特切氏病，強直性脊柱炎，哮喘，慢性阻塞性肺疾病(COPD)，特發性肺纖維化(IPF)，再狹窄，糖尿病，貧血，疼痛，克隆氏病-相關病癥，少年類風濕性關節炎(JRA)，丙型肝炎病毒感染，牛皮癬，牛皮癬關節炎，和慢性斑牛皮癬，包括施用治療有效量的具有下面特征的TNFa抗體或者其抗原-結合片段 a)根據表面等離子共振測定，其以IxKT3s-1或更小的Ktjff速率常數從人TNFa上離解； b)有包括SEQID NO :3的氨基酸序列，或在I，4，5，7或8位通過ー個丙氨酸取代或者在I，3，4，6，7，8和/或9位通過1-5個保守氨基酸取代而從SEQ ID NO : 3修飾的氨基酸序列的輕鏈CDR3結構域； c)有包括SEQID NO :4的氨基酸序列，或在2，3，4，5，6，8，9，10或11位通過ー個丙氨酸取代或者在2，3，4，5，6，8，9，10，11和/或12位通過1_5個保守氨基酸取代而從SEQ IDNO 4修飾的氨基酸序列的重鏈CDR3結構域，使得所述TNF a -相關病癥得以治療。
10.一種治療TNF a -相關病癥患者的方法，其中所述TNF a -相關病癥選自貝特切氏病，強直性脊柱炎，哮喘，慢性阻塞性肺疾病(COPD)，特發性肺纖維化(IPF)，再狹窄，糖尿病，貧血，疼痛，克隆氏病-相關病癥，少年類風濕性關節炎(JRA),丙型肝炎病毒感染,牛皮癬，牛皮癬關節炎，和慢性斑牛皮癬，包括施用治療有效量的TNF a抗體，或者其抗原-結合片段，其輕鏈可變區(LCVR)包括SEQ ID NO 1的氨基酸序列并且重鏈可變區(HCVR)包括SEQ ID NO :2的氨基酸序列，使得所述TNF a -相關病癥得以治療。
11.權利要求8，9或10任ー項的方法，其中所述TNFa抗體或者其抗原-結合部分是D2E7。
12.權利要求8，9或10任ー項的方法，其中所述TNFa抗體與至少ー種附加治療藥物一起給藥。
13.一種治療TNF a -相關病癥患者的方法，其中所述TNF a -相關病癥選自貝特切氏病，強直性脊柱炎，哮喘，慢性阻塞性肺疾病(COPD)，特發性肺纖維化(IPF)，再狹窄，糖尿病，貧血，疼痛，克隆氏病-相關病癥，少年類風濕性關節炎(JRA),丙型肝炎病毒感染,牛皮癬，牛皮癬關節炎，和慢性斑牛皮癬，如此所述TNF a -相關病癥得以治療。
14.權利要求13的方法，其中D2E7與至少ー種附加治療藥物一起給藥。
15.—種試劑盒,包括 a)包括TNFa抗體或者其抗原結合片段，和藥學可接受載體的藥物組合物；和 b)對患者施用用以治療患有TNFa -相關病癥的患者的TNF a抗體藥物組合物的說明書。
16.權利要求15的試劑盒，其中所述TNFa -相關病癥選自貝特切氏病，強直性脊柱炎，哮喘，慢性阻塞性肺疾病(COPD)，特發性肺纖維化(IPF)，再狹窄，糖尿病，貧血，疼痛，克隆氏病-相關病癥，少年類風濕性關節炎(JRA)，丙型肝炎病毒感染，牛皮癬，牛皮癬關節炎，和慢性斑牛皮癬。
17.根據權利要求16的試劑盒，其中所述TNF a抗體或者其抗原結合部分是D2E7。
全文摘要
本發明描述了一種治療TNFα-相關病癥的方法，包括施用TNFα抑制劑，包括TNFα抗體。
文檔編號A61KGK102764436SQ201210239280
公開日2012年11月7日 申請日期2003年7月18日 優先權日2002年7月19日
發明者A·穆爾塔扎, C·E·斯皮格勒, D·E·特雷西, E·K·查塔斯, J·G·薩爾費爾德, L·K·泰勒, P·顏, R·S·霍夫曼, S·班納吉, S·菲施科夫, W·T·巴楚克 申請人:艾博特生物技術有限公司