專利名稱：一種具有透皮能力的抗氧化短肽的制作方法
技術領域：
本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種具有透皮能力的抗氧化短肽。
背景技術：
放射性皮膚損傷是腫瘤放射治療、骨髓移植預處理、放射性核事故之后常見的并發癥。放射線殺死細胞的機理有直接作用和間接作用兩種，直接作用是射線作用于細胞DNA，引起細胞DNA的斷裂后細胞死亡；間接作用是在射線的激發下，引起水的電離，產生自由基，活性的自由基攻擊DNA、蛋白質等生物大分子后，形成不可逆損傷，造成細胞死亡。射線通過皮膚時產生的自由基是放射性皮膚損傷發生的主要原因。在射線的激發下，形成的高能自由基會攻擊生物體內的重要分子，如核酸、蛋白質等，引起細胞功能的紊亂甚至細胞的凋亡。在電離輻射作用下，生物體細胞內的的自由基數量會由于能量的激發而大大增加。因而如能采用能清除自由基和抗氧化的透皮短肽進行透皮給藥，則能有效的預防或治療放 射性皮膚損傷。此外，皮膚燒傷后的氧自由基上調是引起燒傷潰瘍主要原因。因而如能找到一種更好的介導蛋白質透皮的肽段，并具有抗氧化、清除自由基等功能，則有望預防和治療多種皮膚相關損疾病。人的皮膚分為表皮、真皮和皮下組織。表皮外是由死細胞組成的角質層覆蓋。角質層的功能是對皮膚進行物理性、機械性、化學性以及生物性的保護，能夠阻擋絕大多數大分子物質的進入，使其免受有害物質的損傷，保持其功能的完整性。但是角質層這一屏障也阻止了表皮和真皮組織對通過表皮補給的外源營養物質和藥物的吸收。透皮促滲劑是一類是指可以加快外用藥物穿透皮膚的化合物，如吡咯酮類、氮酮、萜類、氨基酸脂類等等。然而迄今為止還沒有一種完全理想的透皮促滲劑。現有的透皮促滲化合物一方面持續時間短，易被代謝掉；另一方面，透皮效果不理想，高濃度時具有皮膚毒性。尤其對于蛋白質等生物大分子透皮幾乎沒有作用。正是由于大分子蛋白質和多肽類藥物均系親水性大分子，幾乎不能透過皮膚角質層的親脂性屏障。即使在透皮促滲劑的幫助下，分子量大于500Da的蛋白質分子也難以透過角質層，再加上表皮的不通透性，因此，長期以來，具有生物活性的大分子蛋白質的透皮給藥一直沒有解決。如何使得具有重要價值的生物大分子能夠通過表皮途徑給藥成為研究的難點與熱點。采用物理方法介導蛋白質透皮研究廣泛，包括超聲、電擊、微針等方法，但是由于對設備具有依賴性，難以得到大規模應用。近年來采用短肽介導的蛋白質透皮引起了廣泛的關注。譬如Chen Yongping等人采用噬菌體展示的方法篩選到了一段名為TD-I的肽段，該肽段序列為“ACSSSPSKHCG”，能介導蛋白質透過皮膚進入血液。(Chen, Y. , Shen, Y. , Guo, X. , Zhang, C. , Yang, ff. , Ma, M. , Liu,S. , Zhang, M. and Wen, L. P. (2006)Transdermal protein delivery by a coadministeredpeptide identified via phage display. Nat Biotechnol, 24，455-60. X 該短妝與膜島素混合后能攜帶胰島素穿過小鼠皮膚，進入血液，并發揮了治療糖尿病小鼠的降血糖作用。Lopes等人曾報道TAT和YARA結構域與P20結構域偶聯后能進入皮膚，但是進入皮膚的量很少(Lopes, L. B. , Brophy, C. M. , Furnish, E. , Flynn, C. R. , Sparks, 0. , Komalavilas, P. , Joshi, L. , Panitch, A. and Bentley, M. V. (2005) Comparative study of the skinpenetration of protein transduction domains and a conjugated peptide. PharmRes, 22, 750-7.)。因此，提供一種具有透皮能力的抗氧化短肽，具有重要的現實意義。
發明內容
有鑒于此，本發明提供一種具有透皮能力的抗氧化短肽。該具有透皮能力的抗氧化短肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示。該短肽一方面具有清除羥基自由基和超氧自由基的能力，另一方面具有透皮能力，能透過皮膚角質層，進入表皮和真皮層中的細胞中。該短肽具有人工合成方便、能夠通過表皮給藥等特點。為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案
本發明提供了一種具有透皮能力的抗氧化短肽，其氨基酸序列如SEQ IDN0:1所
/Jn o作為優選，本發明提供的一種具有透皮能力的抗氧化短肽經化學修飾。作為優選，本發明提供的一種具有透皮能力的抗氧化短肽所經的化學修飾為FITC修飾、羅丹明修飾或Fam修飾。本發明提供的一種具有透皮能力的抗氧化短肽的等電點為11.04。本發明提供的一種具有透皮能力的抗氧化短肽的分子量為2692. 44Da。本發明還提供了氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示的短肽作為透皮制劑的應用。作為優選，本發明提供的一種具有透皮能力的抗氧化短肽經化學修飾。作為優選，本發明提供的一種具有透皮能力的抗氧化短肽所經的化學修飾為FITC修飾、羅丹明修飾或Fam修飾。作為優選，該短肽的等電點為11.04。作為優選，該短妝的分子量為2692. 44Da。本發明還提供了氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示的短肽用于制備治療皮膚損傷藥物中的應用。作為優選，本發明提供的一種具有透皮能力的抗氧化短肽經化學修飾。作為優選，本發明提供的一種具有透皮能力的抗氧化短肽所經的化學修飾為FITC修飾、羅丹明修飾或Fam修飾。作為優選，皮膚損傷為放射性皮膚損傷。本發明還提供了一種治療皮膚損傷的藥物，其包括氨基酸序列如SEQ IDN0:1所示的短肽及藥學上可接受的輔料。作為優選，本發明提供的一種治療皮膚損傷的藥物中，短肽經化學修飾。作為優選，本發明提供的一種治療皮膚損傷的藥物中，短肽所經的化學修飾為FITC修飾、羅丹明修飾或FAM修飾。作為優選，該短肽的等電點為11.04。作為優選，該短妝的分子量為2692. 44Da。作為優選，該藥物為水浸劑、粉劑、洗劑、I!劑、油劑、乳劑、軟膏、硬膏或氣霧劑。
本發明提供一種具有透皮能力的抗氧化短肽。該具有透皮能力的抗氧化短肽，其氣基酸序列如SEQ ID NO: I所不。該短妝一方面具有清除輕基自由基和超氧自由基的能力，另一方面具有透皮能力，能透過皮膚角質層，進入表皮和真皮層中的細胞中。該短肽具有人工合成方便、能夠通過表皮給藥等特點，能夠有效治療皮膚損傷。
圖I示氨基酸序列如SEQ ID N0:1所示的短肽的HPLC譜圖；其中保留時間為10. 980min的峰為氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示的短肽，其峰面積百分數為93. 84% ；圖2示氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示的短肽經FITC標記后的進細胞作用；其中，圖2 (a)不對照組的白光圖，圖2 (b)不試驗組的白光圖；圖2 (C)不對照組的突光圖，圖
2(d)示試驗組的熒光圖；圖2 (e)示對照組的白光熒光重合圖，圖2 (f)示試驗組的白光熒光重合圖； 圖3示氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示的短肽的透皮作用；其中，圖3 (a)示對照組的白光圖，圖3 (b)示試驗組的白光圖，箭頭指示該短肽可進入真皮組織中；圖3 (c)示對照組的熒光圖，圖3 Cd)示試驗組的熒光圖，箭頭指示該短肽可進入真皮組織中；圖4示氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示的短肽經羅丹明標記后的進細胞作用；其中，圖4 (a)不對照組的白光圖，圖4 (b)不試驗組的白光圖；圖4 (C)不對照組的突光圖，圖4 (d)示試驗組的突光圖；圖4 (e)示對照組的白光突光重合圖，圖4 (f)示試驗組的白光熒光重合圖。
具體實施例方式本發明公開了一種具有透皮能力的抗氧化短肽，本領域技術人員可以借鑒本文內容，適當改進工藝參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明。本發明的方法及應用已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本發明內容、精神和范圍內對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本發明技術。本發明提供的一種具有透皮能力的抗氧化短肽中所用原料及試劑均可由市場購得。下面結合實施例，進一步闡述本發明實施例I短肽的清除羥自由基作用檢測采用fmoc法合成氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示的短肽(由上海默悉生物科技有限公司合成)。合成采用高效液相色譜(HPLC)鑒定，氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示的短肽的純度為93. 84% (圖I所示)。該短肽溶于磷酸緩沖液(PBS，pH=7.4)，中，配成濃度為150 u mol/L的多肽溶液。采用南京建成生物工程有限公司的羥自由基測定試劑盒檢測該短肽溶液抑制羥基自由基的能力。根據該試劑盒所述方法，3ml反應體系中加入200 UL多肽溶液。37攝氏度反應I小時，以抑制反應體系中H2O2濃度降低lmmol/L為一個抑制羥自由基的單位(U)。結果顯示本發明的短肽抑制羥基自由基的能力為40837. 9U/mmol。短肽的清除超氧自由基作用檢測
氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示的短肽溶于磷酸緩沖液(PBS，pH=7. 4)，中，配成濃度為150 ii mol/L的多肽溶液。采用南京建成生物工程有限公司的超氧自由基測定試劑盒檢測該短肽溶液抑制羥基自由基的能力。根據該試劑盒所述方法，3ml反應體系中加入200 ii L多肽溶液。37攝氏度反應40分鐘，以Img維生素C所抑制的超氧陰離子自由基變化值為一個活性單位(U)。結果顯示本發明的短肽抑制超氧陰離子自由基的能力為2364. 52U/mmol，顯著高于序列為GAADFASLPTGLFL的無關對照多肽(抑制超氧陰離子自由基的能力為55. 02U/mmol)。FITC修飾短肽的清除羥自由基作用檢測采用fmoc法合成N端采用FITC標記的氨基酸序列如SEQ ID N0:1所示的短肽(由上海默悉生物科技有限公司合成)。合成采用高效液相色譜(HPLC)鑒定，氨基酸序列如SEQID NO: I所示的短肽的純度為91. 75%。該短肽溶于磷酸緩沖液(PBS，pH=7. 4)，中，配成濃度為150 y mol/L的多肽溶液。采用南京建成生物工程有限公司的羥自由基測定試劑盒檢測該短肽溶液抑制羥基自由基的能力。根據該試劑盒所述方法，3ml反應體系中加入200 UL 多肽溶液。37攝氏度反應I小時，以抑制反應體系中H2O2濃度降低lmmol/L為一個抑制羥自由基的單位(U)。結果顯示本發明的短肽抑制羥基自由基的能力為46161. 3U/mmol。FITC修飾短肽的清除超氧自由基作用檢測FITC修飾的氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示的短肽溶于磷酸緩沖液(PBS，pH=7.4)，中，配成濃度為150 ii mol/L的多肽溶液。采用南京建成生物工程有限公司的超氧自由基測定試劑盒檢測該短肽溶液抑制羥基自由基的能力。根據該試劑盒所述方法，3ml反應體系中加入200 u L多肽溶液。37攝氏度反應40分鐘，以Img維生素C所抑制的超氧陰離子自由基變化值為一個活性單位(U)。結果顯示本發明的短肽抑制超氧陰離子自由基的能力為 2611. 45U/mmolo短肽的進細胞作用檢測采用fmoc法合成N端采用FITC標記的氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示的短肽(由上海默悉生物科技有限公司合成)。合成后的短肽溶于磷酸緩沖液(PBS，pH=7. 4)，中，配成濃度為500 u mol/L的溶液。體外培養的HaCaT細胞，生長到密度為用50%時，在培養基中加入20 ii L濃度為150 u mol/L的多肽溶液，4小時后棄掉培養液，用PBS漂洗三次，去除游離的熒光多肽置于共聚焦熒光顯微鏡下拍照。結果顯示加入本發明短肽的細胞內的細胞質和細胞核中均能能觀察到綠色熒光信號(圖2所示)，而在加入了無關對照(FITC標記的GAADFASLPTGLFL短肽)的細胞中沒有綠色熒光，這表明該短肽具有進入細胞的功能。短肽的透皮作用檢測將FITC標記的氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示的短肽溶于磷酸緩沖液(PBS，pH=7. 4)，中，配成濃度為500 u mol/L的溶液。10周齡的SD大鼠臀部剔去毛發后，在表皮上涂抹上述蛋白溶液。兩小時后處死動物，取涂抹處皮膚，進行冰凍切片后在熒光顯微鏡下觀察。試驗結果表明在涂抹了上述短肽的大鼠皮膚切片中，真皮區域的皮膚附屬器中能明顯觀察到熒光信號，表明該短肽可進入真皮組織中(圖3，箭頭所示)，顯著優于Lopes等人報道的TAT蛋白的透皮能力(熒光蛋白僅能滲透至表皮)；而在涂抹對照蛋白的皮膚切片中觀察不到熒光的存在(圖3所示)。短肽的透皮后清除自由基作用檢測
將FITC標記的氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示的短肽溶于磷酸緩沖液(PBS，pH=7. 4)，中，配成濃度為500 u mol/L的溶液。10周齡的SD大鼠臀部剔去毛發后，涂抹上述蛋白溶液。兩小時后處死動物，取涂抹處皮膚組織勻漿。勻漿后的蛋白進行蛋白質濃度定量。同時采用南京建成生物工程有限公司的羥自由基測定試劑盒檢測大鼠皮膚勻漿抑制羥基自由基的能力。根據該試劑盒所述方法，3ml反應體系中加入200 ii L大鼠皮膚勻漿溶液。37攝氏度反應I小時，以抑制反應體系中H2O2濃度降低lmmol/L為一個抑制羥自由基的單位(U)。結果顯示大鼠皮膚涂抹了 FITC標記的本發明的多肽后皮膚組織抑制羥基自由基的能力為12. 60U/mg皮膚組織，高于未涂抹該蛋白的皮膚組織(抑制羥自由基能力為9. 57U/mg皮膚組織)和涂抹了氨基酸序列為YGRKKRRQRRR的TAT蛋白的皮膚組織(抑制羥自由基能力為7. 71U/mg皮膚組織)，表明該短肽具有透皮后增加皮膚組織清除自由基能力的作用。實施例2羅丹明修飾的短肽的清除羥自由基作用檢測采用fmoc法合成N端采用羅丹明標記的氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示的短肽 (由上海默悉生物科技有限公司合成)。合成采用高效液相色譜(HPLC)鑒定，氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示的短肽的純度為92. 69%。該短肽溶于磷酸緩沖液(PBS，pH=7. 4)，中，配成濃度為150 u mol/L的多肽溶液。采用南京建成生物工程有限公司的羥自由基測定試劑盒檢測該短肽溶液抑制羥基自由基的能力。根據該試劑盒所述方法，3ml反應體系中加入200 u L多肽溶液。37攝氏度反應I小時，以抑制反應體系中H2O2濃度降低lmmol/L為一個抑制羥自由基的單位(U)。結果顯示本發明的短肽抑制羥基自由基的能力為39754. 6U/mmol o羅丹明修飾的短肽的清除超氧自由基作用檢測N端采用羅丹明標記的氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示的短肽溶于磷酸緩沖液(PBS，pH=7.4)，中，配成濃度為150 ii mol/L的多肽溶液。采用南京建成生物工程有限公司的超氧自由基測定試劑盒檢測該短肽溶液抑制羥基自由基的能力。根據該試劑盒所述方法，3ml反應體系中加入200 u L多肽溶液。37攝氏度反應40分鐘，以Img維生素C所抑制的超氧陰離子自由基變化值為一個活性單位(U)。結果顯示本發明的短肽抑制超氧陰離子自由基的能力為2063. 7U/mmolo短肽的進細胞作用檢測采用fmoc法合成N端采用羅丹明標記的氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示的短肽(由上海默悉生物科技有限公司合成)。合成后的短肽溶于磷酸緩沖液(PBS，pH=7. 4)，中，配成濃度為500 u mol/L的溶液。體外培養的HaCaT細胞，生長到密度為用50%時，在培養基中加入20 ii L濃度為150 u mol/L的多肽溶液，4小時后棄掉培養液，用PBS漂洗三次，去除游離的熒光多肽后置于共聚焦熒光顯微鏡下拍照。結果顯示加入本發明短肽的細胞內的細胞質和細胞核中均能能觀察到綠色熒光信號(圖4所示)，而在加入了無關對照(羅丹明標記的GAADFASLPTGLFL短肽)的細胞中沒有紅色熒光，這表明該短肽具有進入細胞的功能。短肽的透皮作用檢測將羅丹明標記的氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示的短肽溶于磷酸緩沖液(PBS，pH=7. 4)，中，配成濃度為500 u mol/L的溶液。10周齡的SD大鼠臀部剔去毛發后，涂抹上述蛋白溶液。兩小時后處死動物，取涂抹處皮膚，進行冰凍切片后在熒光顯微鏡下觀察。試驗結果表明在涂抹了上述短肽的大鼠皮膚切片中，真皮區域的皮膚附屬器中能明顯觀察到熒光信號，表明該短肽可進入真皮組織中，顯著優于Lopes等人報道的TAT蛋白的透皮能力；而在涂抹對照蛋白的皮膚切片中觀察不到熒光的存在。短肽的透皮后清除自由基作用檢測將羅丹明標記的氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示的短肽溶于磷酸緩沖液(PBS，pH=7. 4)，中，配成濃度為500 u mol/L的溶液。10周齡的SD大鼠臀部剔去毛發后，涂抹上述蛋白溶液。兩小時后處死動物，取涂抹處皮膚組織勻漿。勻漿后的蛋白進行蛋白質濃度定量。同時采用南京建成生物工程有限公司的羥自由基測定試劑盒檢測大鼠皮膚勻漿抑制羥基自由基的能力。根據該試劑盒所述方法，3ml反應體系中加入200 u L大鼠皮膚勻漿溶液。37攝氏度反應I小時，以抑制反應體系中H2O2濃度降低lmmol/L為一個抑制羥自由基的單位(U)。結果顯示大鼠皮膚涂抹了羅丹明標記的本發明的多肽后皮膚組織抑制羥基自由基的能力為11. 07U/mg皮膚組織，高于未涂抹該蛋白的皮膚組織(抑制羥自由基能力為9. 57U/mg皮膚組織)和涂抹了氨基酸序列為YGRKKRRQRRR的TAT蛋白的皮膚組織(抑制羥自由基能力為7. 71U/mg皮膚組織)，表明該短肽具有透皮后增加皮膚組織清除自由基能力 的作用。實施例3FAM修飾的短肽的清除羥自由基作用檢測采用fmoc法合成N端采用FAM修飾的氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示的短肽(由上海默悉生物科技有限公司合成)。合成采用高效液相色譜(HPLC)鑒定，氨基酸序列如SEQID NO: I所示的短肽的純度為93. 04%。該短肽溶于磷酸緩沖液(PBS，pH=7. 4)，中，配成濃度為150 y mol/L的多肽溶液。采用南京建成生物工程有限公司的羥自由基測定試劑盒檢測該短肽溶液抑制羥基自由基的能力。根據該試劑盒所述方法，3ml反應體系中加入200 y L多肽溶液。37攝氏度反應I小時，以抑制反應體系中H2O2濃度降低lmmol/L為一個抑制羥自由基的單位(U)。結果顯示本發明的短肽抑制羥基自由基的能力為42747. 6U/mmol。FAM修飾的短肽的清除超氧自由基作用檢測N端采用FAM修飾氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示的短肽溶于磷酸緩沖液(PBS，pH=7. 4)，中，配成濃度為150 ii mol/L的多肽溶液。采用南京建成生物工程有限公司的超氧自由基測定試劑盒檢測該短肽溶液抑制羥基自由基的能力。根據該試劑盒所述方法，3ml反應體系中加入200 u L多肽溶液。37攝氏度反應40分鐘，以Img維生素C所抑制的超氧陰離子自由基變化值為一個活性單位(U)。結果顯示本發明的短肽抑制超氧陰離子自由基的能力為 2OM. 2U/mmol0短肽的進細胞作用檢測采用fmoc法合成N端采用FAM標記的氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示的短肽(由上海默悉生物科技有限公司合成)。合成后的短肽溶于磷酸緩沖液(PBS，pH=7. 4)，中，配成濃度為500 u mol/L的溶液。體外培養的HaCaT細胞，生長到密度為用50%時，在培養基中加A 20 u L濃度為150 u mol/L的多肽溶液，4小時后棄掉培養液，用PBS漂洗三次，去除游離的熒光多肽置于共聚焦熒光顯微鏡下拍照。結果顯示加入本發明短肽的細胞內的細胞質和細胞核中均能能觀察到綠色熒光信號，而在加入了無關對照(FAM標記的GAADFASLPTGLFL短肽)的細胞中沒有綠色熒光，這表明該短肽具有進入細胞的功能。
短肽的透皮作用檢測將FAM標記的氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示的短肽溶于磷酸緩沖液(PBS，pH=7. 4)，中，配成濃度為500 ii mol/L的溶液。10周齡的SD大鼠臀部剔去毛發后，涂抹上述蛋白溶液。兩小時后處死動物，取涂抹處皮膚，進行冰凍切片后在熒光顯微鏡下觀察。試驗結果表明在涂抹了上述短肽的大鼠皮膚切片中，真皮區域的皮膚附屬器中能明顯觀察到熒光信號，表明該短肽可進入真皮組織中，顯著優于Lopes等人報道的TAT蛋白僅能進入表皮組織的透皮能力；而在涂抹對照蛋白的皮膚切片中在真皮組織內觀察不到綠色熒光的存在。短肽的透皮后清除自由基作用檢測將FAM標記的氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示的短肽溶于磷酸緩沖液(PBS，pH=7. 4)，中，配成濃度為500 u mol/L的溶液。10周齡的SD大鼠臀部剔去毛發后，涂抹上述蛋白溶液。兩小時后處死動物，取涂抹處皮膚組織勻漿。勻漿后的蛋白進行蛋白質濃度定量。同時采用南京建成生物工程有限公司的羥自由基測定試劑盒檢測大鼠皮膚勻漿抑制羥 基自由基的能力。根據該試劑盒所述方法，3ml反應體系中加入200 ii L大鼠皮膚勻漿溶液。37攝氏度反應I小時，以抑制反應體系中H2O2濃度降低lmmol/L為一個抑制羥自由基的單位(U)。結果顯示大鼠皮膚涂抹了 FAM標記的本發明的多肽后皮膚組織抑制羥基自由基的能力為11. 54U/mg皮膚組織，高于未涂抹該蛋白的皮膚組織(抑制羥自由基能力為9. 57U/mg皮膚組織)和涂抹了氨基酸序列為YGRKKRRQRRR的TAT蛋白的皮膚組織(抑制羥自由基能力為7. 71U/mg皮膚組織)，表明該短肽具有透皮后增加皮膚組織清除自由基能力的作用。實施例4從全國選取200例癌癥患者，均經活檢病理組織確診。男性患者108例，女性患者92例，年齡19 70歲，均采用直線加速器或電子速行根治性放療。將200例患者隨機分為試驗組和對照組。試驗組100例，其中男性患者54例，女性患者46例；對照組100例，其中男性患者54例，女性患者46例。試驗組和對照組患者的年齡、性別、營養狀況、皮膚照射次數及照射劑量等均無顯著差異。對照組從第I次放療后開始，按常規換藥程序，清洗放療局部，用慶大霉素加維生素B12濕敷30min后，局部涂擦潰瘍粉，每天2次，直至放療結束后2周。試驗組在第I次放療后將合成的氨基酸序列如SEQ ID NO: I所示的短肽與凡士林按照I :99 (質量分數)混合，均勻涂抹在照射皮膚上，范圍超出照射皮膚1cm，涂抹厚度為I 2mm，輕輕按摩促使皮膚吸收，每天2次，直至放療結束后2周。觀察記錄患者皮膚反應的時間、程度、深度、疼痛減輕時間及皮膚愈合時間。放射性皮膚損傷分級標準根據美國放射腫瘤學協作組(RTOG)急性放射性皮膚損傷分級標準。0級，無變化；I級，表現為皮膚濾泡樣暗紅色斑、脫皮、干性脫皮、出汗減少；II級，觸痛性或鮮紅色斑或片狀濕性脫皮或中毒水腫；III級，表現為皮膚褶皺以外的部位融合性濕性脫皮或凹陷性水腫；
IV級，潰瘍、出血、壞死。試驗結果見表I、表2。表I放射性皮膚損傷情況
權利要求
1.一種具有透皮能力的抗氧化短肽，其特征在于，其氨基酸序列如SEQID NO: I所示。
2.根據權利要求I所述的抗氧化短肽，其特征在于，所述抗氧化短肽經化學修飾。
3.氨基酸序列如SEQID NO: I所示的短肽作為透皮制劑的應用。
4.根據權利要求3所述的應用，所述短肽經化學修飾。
5.氨基酸序列如SEQID NO: I所示的短肽用于制備治療皮膚損傷藥物中的應用。
6.根據權利要求5所述的應用，所述短肽經化學修飾。
7.一種治療皮膚損傷的藥物，其特征在于，其包括氨基酸序列如SEQ IDN0:1所示的短肽及藥學上可接受的輔料。
8.根據權利要求7所述的藥物，所述短肽經化學修飾。
9.根據權利要求7或8所述的藥物，其特征在于，其為水浸劑、粉劑、洗劑、酊劑、油劑、乳劑、軟膏、硬膏或氣霧劑。
全文摘要
本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種具有透皮能力的抗氧化短肽。該具有透皮能力的抗氧化短肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。該短肽一方面具有清除羥基自由基和超氧自由基的能力，另一方面具有透皮能力，能透過皮膚角質層，進入表皮和真皮層中的細胞中。該短肽具有人工合成方便、能夠通過表皮給藥等特點，能夠有效治療皮膚損傷。
文檔編號A61K38/16GK102731630SQ20121025061
公開日2012年10月17日 申請日期2012年7月19日 優先權日2012年7月19日
發明者張舒羽, 曹建平 申請人:蘇州大學