口服和注射雙功效的蛋白質或多肽類藥物緩釋囊泡及其制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種口服注射均具有效果的多肽類藥物控釋制劑及其制備工藝。此外，該胰島素控釋制劑可以再體內以穩定的方式長時間地連續顯示藥效。它是以具有超穩定性的無毒性的“硅質體”為載體，多肽類藥物分子通過包埋在載體的內部構成納米級微球，納米級多肽類藥物微球的平均粒徑在200nm左右。當在這種納米微球表面通過靜電吸附作用吸附一層粘附分子，使其能夠較容易的粘附于小腸壁上，增加滯留時間，從而使更多的多肽類藥物分子納米微球透過腸粘膜，經腸內細胞透過上皮屏障進入血液循環和淋巴系統，以這種載體的形式無論是腹腔注射還是口服給藥，都能起到很好的治療效果，從而顯示出較高的生物利用度和持續的藥效。
【專利說明】口服和注射雙功效的蛋白質或多肽類藥物緩釋囊泡及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬藥物制劑領域，涉及蛋白質或多肽類藥物載體的制備，具體涉及具有治療糖尿病作用的胰島素藥物載體及其制備方法和在口服及注射給藥中作為藥物載體的應用。
【背景技術】
[0002]隨著20世紀80年代人類基因重組技術的出現及基因重組技術的發展，越來越多的蛋白多肽類藥物實現了大規模的生產，而且由于蛋白多肽類藥物生理活性強、療效高，日益受到醫生和患者的歡迎， 從而引發了科學界對其研究和關注。但是蛋白多肽類藥物在給藥過程中存在很多的限制因素，比如相對分子量較大、不易透過生物膜、容易被體內的酶降解、容易受體內各種物理化學因素的影響，從而導致其變性失活，此外血液中存在多種不同類型的結合蛋白與其發生作用，而導致其“失活”，而且最重要的也是最致命的是容易引起機體的免疫反應，情況嚴重的話可能會導致死亡等等。因此，如何增加藥物穩定性，減少體內酶及各種物理化學因素的影響，提高其純度，在體內具有緩釋長效效果以及給藥方便等成為了當今科學家們的研究熱點。
[0003]在近幾十年的研究中，人們對蛋白多肽類藥物的表面修飾以及控制釋放進行了大量的研究。主要有①對蛋白多肽類藥物表面進行化學修飾，通常是將蛋白多肽類藥物與生物可降解的高分子水溶性聚合物(如右旋糖酐、白蛋白、聚乙二醇等)結合形成共軛體，可以增加蛋白多肽類藥物的溶劑性、穩定性以及其在血液循環中的滯留時間，顯著延長半衰期，從而使其生物利用度提高，最重要的是經過修飾之后的藥物其免疫原性和過敏反應降低甚至消失而其活性沒有明顯變化，大大改善蛋白多肽類藥物在體內的藥代動力學性質；②將蛋白多肽類藥物制成前體藥物以及親脂性更強的前體藥物，有利于抵抗蛋白酶的降解破壞以及增加親脂性，從而提高藥物的生物利用度用具有細胞膜類似結構的脂質體或可降解的高分子聚合物比如聚乳酸(PLA)、聚乙交酯丙交酯共聚物(PLGA)等等對蛋白多肽類藥物進行包埋，這種利用藥物載體改善藥物的性質的方法，是至今科學家們依然很推崇的，也是當今科學家們研究的熱點。此種被載體包裹的蛋白多肽類藥物表現出較長的半衰期，延緩釋放，提高藥效的特點。
[0004]脂質體作為藥物載體雖然能夠延長藥物在體內的循環時間，具有很好的生物相容性，而且具有一定的靶向性，然而由于制備脂質體的原料多為天然磷脂，其中存在不飽和酰基和酯鍵易發生氧化水解現象，導致制備的脂質體在儲存過程中不穩定，容易受各種物理化學因素的影響，從而發生聚集、氧化現象，導致所包裹藥物容易放生泄漏，從而導致藥效下降。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是為了制備一種具有口服降血糖效果的胰島素納米粒子，解決傳統糖尿病治療肌肉或靜脈注射胰島素的所帶來的不便以及對人體造成的傷害，只需定時口服吃藥，就可以治療疾病，從而減輕甚至避免在治療過程中給病人帶來的痛苦和用藥的不便。
[0006]為了達到上述目的，本發明采取了以下措施，制備了一種基于有機無機復合脂質的胰島素硅質體納米粒子，該制劑為雙層膜結構，內部核心為胰島素溶液，外部為類似脂質體雙層的結構，直徑約為50-200nm左右，其制備方法如下所述
[0007](I)采用薄膜水化法制備包裹胰島素分子的有機無機復合脂質納米粒子；
[0008](2)在步驟(1)中摻雜一定量的藥物輔料，從而改善納米粒子的功效；
[0009](3)在包裹胰島素分子的硅質體表面修飾一層或多層粘附分子。
[0010](4)采用4 °C避光干燥保存。
[0011]本發明中制備硅質體所用的有機無機復合脂質的分子結構式為:
[0012]
【權利要求】
1.一種口服注射雙功效的多肽類藥物納米囊泡，其特征是以有機無機復合脂質為主要成分，添加天然或人工的藥物輔料，按特定的原料比制成多肽類藥物載體，并通過一定的方式在納米粒子表面組裝一層細胞粘附分子。所述的特定的原料配比是:有機無機復合脂:多肽類藥物分子:藥物輔料為5~30:1:1~10。
2.口服及注射多肽類藥物緩釋微膠囊的制備方法，其特征在于它是這樣實現的: (1)配制多肽類藥物的酸性溶液(pH值為3-7之間):將多肽類藥物溶解的酸性溶液中，超聲溶解后加入一定量的PBS中，超聲振蕩，配制成特定濃度的多肽類藥物溶液。 (2)稱取一定量的有機無機復合脂質，溶解在有機溶劑中，在旋轉蒸發儀旋轉蒸發直至將有機溶劑旋干，之后放在真空干燥箱內，干燥過夜。 (3)加入一定量的多肽類藥物溶液和藥物輔料，恒溫水化30min。 (4)將上述溶液水浴超聲5min，振幅50%~100%。 (5)將上述溶液探頭超聲一定時間，超3s停3s。 (6)超聲得到的溶液，室溫放置過夜。 (7)將最終得到的蛋白質或多肽類藥物粒子，30，OOOrpm離心，30min，除去游離的蛋白質或多肽類藥物分子。 (8)離心后，棄上清，并加入一定量的粘附分子溶液，通過靜電作用或其他作用連接到納米粒子表面。之后重復步驟(7) (9)最后，將上述得到的蛋白質或多肽類藥物粒子的沉淀，溶解到PBS溶液中，即得所要的蛋白質或多肽類藥物粒子溶液。
3.根據權利要求2所述的口服及注射多肽類藥物緩釋微膠囊的制備方法，其特征在于所述的有機溶劑為乙醇、氯仿或其它小分子的極性有機溶劑。
4.根據權利要求2所述的口服及注射多肽類藥物緩釋微膠囊的制備方法，其特征在于所述的粘附分子為殼聚糖、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素、聚乙烯醇、聚丙烯酸、海藻酸鹽及其衍生物或其它粘附分子中的一種或幾種的混合物。
5.根據權利要求2所述的口服及注射多肽類藥物緩釋微膠囊的制備方法，其特征在于所述的多肽類藥物是胰島素、降鈣素、水蛭素、生長激素、白蛋白、表皮生長因子、白細胞介素-2、胃膜素、神經垂體素、促皮質激素、魚精蛋白、肝素、膠原蛋白、過氧化物歧化酶及其它酶和輔酶類藥物、組織生長因子、加壓素、加壓素的八肽拮抗劑、苯丙氨酸芥肽以及各種細胞因子類藥物和各種疫苗等。
6.根據權利要求2所述的口服及注射多肽類藥物緩釋微膠囊的制備方法，其特征在于所述藥物輔料為聚乙烯基吡咯烷酮、泊洛沙姆、谷胱甘肽、甲基纖維素、卵磷脂、木糖醇等藥物輔料中的一種或幾種。
7.根據權利要求2所述的口服及注射多肽類藥物緩釋微膠囊的制備方法， 其中所述的納米粒子粒徑在50-200nm左右。
8.根據權利要求2所述的口服及注射多肽類藥物緩釋微膠囊的制備方法，其中所述的水化溫度為40-60°C。
9.根據權利要求2所述的口服及注射多肽類藥物緩釋微膠囊的制備方法，其特征在于可以通過改變超聲功率和超聲時間來調節納米粒子的粒徑。
10.根據權利要求2所述的口服及注射多肽類藥物緩釋微膠囊的制備方法，其特征在于反應條件溫和，而且在加入蛋白或多肽類藥物分子后，未添加任何有機溶劑，在很大程度上保持了蛋白質或多肽 類藥物的生物活性。
【文檔編號】A61K47/42GK103720656SQ201210390598
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2012年10月15日 優先權日:2012年10月15日
【發明者】戴志飛, 靳玉慎, 梁曉龍 申請人:北京大學