專利名稱：駱駝刺提取物及其制備方法
技術領域：
本發明涉及駱駝刺技術領域，是一種駱駝刺提取物及其制備方法。
背景技術：
駱騎刺pseudalhagi (M. B. ) Desv為豆科駱騎刺屬植物,是新疆干旱沙漠地區特有的一種落葉灌木，具有很強的再生性和生態適應性，廣泛分布于新疆南疆和東疆，它不但是固沙植物、優質牧草，也是改良鹽堿土壤的先鋒植物，同時還是維吾爾醫用傳統藥材。駱駝刺全草具有清熱解毒的功效，在臨床以單方或復方組成用于治療感冒發燒，胃腹濕熱和腸炎痢疾等；民間還用于治療風濕和癌癥。國內外學者對于駱駝刺的化學成分進行了研究，文獻報道駱駝刺的全草多含黃酮類、生物堿類、脂肪族類、留醇類、氨基酸類、多糖類等成分。現代臨床藥理學試驗表明駱駝刺提取物對豚鼠離體腸管收縮運動有顯著的抑制作 用。黃酮類化合物(flavonoids)為駱駝刺中主要的一類活性物質，廣泛存在植物中，是駱駝刺代謝過程中產生的一類重要的次生成分，也是天然產物中研究得比較早和較多的一類化合物。黃酮類化合物是藥用植物中主要活性成分之一，其結構類型的多樣性決定了其生物活性的多樣化。研究已經表明，黃酮類化合物具有抗氧化、抗病毒、抗過敏、抗菌、抗突變、抗腫瘤、保肝、免疫調節、抗炎、鎮痛、瀉下、保護心腦血管系統以及殺蟲等多種生物活性，且毒副作用較低。公開號為CN101862366A、名稱為《從駱駝刺植物中提取治療過敏性結腸炎藥物的方法及其藥物和用途》的專利文獻公開了如下方法“取干燥的駱駝刺地上部分通過回流提取、濃縮、有機溶劑萃取、濃縮等步驟制取”，該方法采用的有機溶劑萃取法所用的試劑操作中對人體傷害大，且萃取率低，實際工業化生產無法復制。
發明內容
本發明提供了一種駱駝刺提取物及其制備方法，克服了上述現有技術之不足，其能有效解決駱駝刺采用有機溶劑萃取對人體傷害大和萃取率低的問題。本發明的技術方案之一是通過以下措施來實現的一種駱駝刺提取物按下述步驟得到第一步，樹脂的處理在待處理樹脂中加入5倍待處理樹脂重量的溫水浸泡，溫水溫度控制在50°C至60°C下浸泡I小時至2小時，溫水浸泡后排出樹脂中的溫水，在溫水浸泡后的樹脂中重新加入5倍待處理樹脂重量的溫水浸泡，溫水溫度控制在50°C至60°C下浸泡I小時至2小時，溫水浸泡后排出樹脂中的溫水，如此溫水浸泡3次至5次后在溫水浸泡后的樹脂中加入I倍至2倍待處理樹脂體積的鹽酸浸泡10小時至12小時，鹽酸的濃度為lmol/L，浸泡后排出樹脂中的鹽酸浸泡液；在鹽酸浸泡后的樹脂中加入自來水沖洗樹脂，直至從樹脂中排出的自來水的PH為3至4時排出樹脂中的自來水；在自來水沖洗后的樹脂中加入蒸餾水沖洗樹脂，直至從樹脂中排出的蒸餾水為中性時排出樹脂中的蒸餾水；在蒸餾水沖洗后的樹脂中加入I倍至2倍待處理樹脂體積的氫氧化鈉溶液浸泡10小時至12小時，氫氧化鈉溶液的濃度為lmol/L,浸泡后排出樹脂中的氫氧化鈉浸泡液；在氫氧化鈉浸泡后的樹脂中加入自來水沖洗樹脂，直至從樹脂中排出的自來水的PH為8至10時排出樹脂中的自來水；在自來水沖洗后的樹脂中加入蒸餾水沖洗樹脂，直至從樹脂中排出的蒸餾水為中性時排出樹脂中的蒸餾水，得到處理后的樹脂；
第二步，樹脂柱的填充在樹脂柱的底部鋪上一層脫脂棉，用蒸餾水將處理后的樹脂懸浮起來一起加入樹脂柱中，當蒸餾水和處理后的樹 脂加到樹脂柱體積的一半時，打開樹脂柱底部的出液口開關使蒸餾水流出，在樹脂柱中繼續加入蒸餾水和處理后的樹脂，使處理后的樹脂面下沉至距樹脂柱上部口 5cm至IOcm為止，用2倍至3倍樹脂柱中樹脂體積的體積百分比為95%的乙醇對樹脂柱中的樹脂進行洗脫，乙醇洗脫后排出樹脂柱中的乙醇洗脫液，得到填充后的樹脂柱；
第三步，取干燥駱駝刺藥材粉碎后得到駱駝刺粉末；第四步，在駱駝刺粉末中加入駱駝刺粉末重量的10倍至15倍的乙醇進行一次回流提取，一次回流提取的乙醇為體積百分比為35%至45%的乙醇，一次回流提取溫度為80°C至90°C，一次回流提取時間為2小時至3小時，一次回流提取后過濾得到一次提取液和一次濾渣；第五步，在一次濾渣中加入駱駝刺粉末重量的10倍至15倍的乙醇進行二次回流提取，二次回流提取的乙醇為體積百分比為35%至45%的乙醇，二次回流提取溫度為80°C至90°C，二次回流提取時間為2小時至3小時，二次回流提取后過濾得到二次提取液和二次濾渣；第六步，將一次提取液和二次提取液混合后在壓力為-O. 07MPa、溫度為60°C下進行減壓濃縮，減壓濃縮至溶液中含生藥為O.1克每毫升至O. 5克每毫升的濃縮液；第七步，用4倍至6倍樹脂柱中樹脂體積的濃縮液對樹脂柱中的樹脂進行純化，濃縮液的上樣流速為每小時2倍至3倍的樹脂柱中樹脂體積，上樣完成后在樹脂柱中預留I倍樹脂柱中樹脂體積的濃縮液靜置20min至30min后排出；第八步，然后用5倍至7倍樹脂柱中樹脂體積的蒸餾水對樹脂柱中樹脂進行蒸餾水洗脫，蒸餾水的上樣流速為每小時2倍至3倍的樹脂柱中樹脂體積，第九步，蒸餾水洗脫后用6倍至8倍樹脂柱中樹脂體積的乙醇對樹脂柱中樹脂進行乙醇洗脫，乙醇洗脫的乙醇為體積百分比為35%至45%的乙醇，乙醇的上樣流速為每小時2倍至3倍的樹脂柱中樹脂體積，乙醇洗脫至樹脂柱底部的出液口中流出的乙醇洗脫液呈黃褐色時收集乙醇洗脫液，將收集的乙醇洗脫液在壓力為_0.0810^、溫度為601下減壓干燥4 h至6h，粉碎后得駱駝刺提取物。下面是對上述發明技術方案之一的進一步優化或/和改進
上述干燥駱駝刺藥材中水份的質量百分含量小于10%。上述駱駝刺粉末的粒徑為20目。上述駱駝刺提取物的粒徑為80目。上述樹脂為HPD100大孔吸附樹脂；或/和，樹脂柱中樹脂的體積為100L至130L ；或/和，樹脂柱的內徑和高的比為1:6至1:10。本發明的技術方案之二是通過以下措施來實現的一種駱駝刺提取物的制備方法按下述步驟進行第一步，樹脂的處理在待處理樹脂中加入5倍待處理樹脂重量的溫水浸泡，溫水溫度控制在50°C至60°C下浸泡I小時至2小時，溫水浸泡后排出樹脂中的溫水，在溫水浸泡后的樹脂中重新加入5倍待處理樹脂重量的溫水浸泡，溫水溫度控制在50°C至60°C下浸泡I小時至2小時，溫水浸泡后排出樹脂中的溫水，如此溫水浸泡3次至5次后在溫水浸泡后的樹脂中加入I倍至2倍待處理樹脂體積的鹽酸浸泡10小時至12小時，鹽酸的濃度為lmol/L,浸泡后排出樹脂中的鹽酸浸泡液；在鹽酸浸泡后的樹脂中加入自來水沖洗樹脂，直至從樹脂中排出的自來水的PH為3至4時排出樹脂中的自來水；在自來水沖洗后的樹脂中加入蒸餾水沖洗樹脂，直至從樹脂中排出的蒸餾水為中性時排出樹脂中的蒸餾水；在蒸餾水沖洗后的樹脂中加入I倍至2倍待處理樹脂體積的氫氧化鈉溶液浸泡10小時至12小時,氫氧化鈉溶液的濃度為lmol/L,浸泡后排出樹脂中的氫氧化鈉浸泡液；在氫氧化鈉浸泡后的樹脂中加入自來水沖洗樹脂，直至從樹脂中排出的自來水的PH為8至10時排出樹脂中的自來水；在自來水沖洗后的樹脂中加入蒸懼水沖洗樹脂，直至從樹脂中排出的蒸餾水為中性時排出樹脂中的蒸餾水，得到處理后的樹脂；
第二步，樹脂柱的填充在樹脂柱的底部鋪上一層脫脂棉，用蒸餾水將處理后的樹脂懸浮起來一起加入樹脂柱中，當蒸餾水和處理后的樹脂加到樹脂柱體積的一半時，打開樹脂柱底部的出液口開關使蒸餾水流出，在樹脂柱中繼續加入蒸餾水和處理后的樹脂，使處理后的樹脂面下沉至距樹脂柱上部口 5cm至IOcm為止，用2倍至3倍樹脂柱中樹脂體積的體積百分比為95%的乙醇對樹脂柱中的樹脂進行洗脫，乙醇洗脫后排出樹脂柱中的乙醇洗脫液，得到填充后的樹脂柱； 第三步，取干燥駱駝刺藥材粉碎后得到駱駝刺粉末；第四步，在駱駝刺粉末中加入駱駝刺粉末重量的10倍至15倍的乙醇進行一次回流提取，一次回流提取的乙醇為體積百分比為35%至45%的乙醇，一次回流提取溫度為80°C至90°C，一次回流提取時間為2小時至3小時，一次回流提取后過濾得到一次提取液和一次濾渣；第五步，在一次濾渣中加入駱駝刺粉末重量的10倍至15倍的乙醇進行二次回流提取，二次回流提取的乙醇為體積百分比為35%至45%的乙醇，二次回流提取溫度為80°C至90°C，二次回流提取時間為2小時至3小時，二次回流提取后過濾得到二次提取液和二次濾渣；第六步，將一次提取液和二次提取液混合后在壓力為-O. 07MPa、溫度為60°C下進行減壓濃縮，減壓濃縮至溶液中含生藥為O.1克每毫升至O. 5克每毫升的濃縮液；第七步，用4倍至6倍樹脂柱中樹脂體積的濃縮液對樹脂柱中的樹脂進行純化，濃縮液的上樣流速為每小時2倍至3倍的樹脂柱中樹脂體積，上樣完成后在樹脂柱中預留I倍樹脂柱中樹脂體積的濃縮液靜置20min至30min后排出；第八步，然后用5倍至7倍樹脂柱中樹脂體積的蒸餾水對樹脂柱中樹脂進行蒸餾水洗脫，蒸餾水的上樣流速為每小時2倍至3倍的樹脂柱中樹脂體積，第九步，蒸餾水洗脫后用6倍至8倍樹脂柱中樹脂體積的乙醇對樹脂柱中樹脂進行乙醇洗脫，乙醇洗脫的乙醇為體積百分比為35%至45%的乙醇，乙醇的上樣流速為每小時2倍至3倍的樹脂柱中樹脂體積，乙醇洗脫至樹脂柱底部的出液口中流出的乙醇洗脫液呈黃褐色時收集乙醇洗脫液，將收集的乙醇洗脫液在壓力為_0.0810^、溫度為601下減壓干燥4 h至6h，粉碎后得駱駝刺提取物。下面是對上述發明技術方案之二的進一步優化或/和改進
上述干燥駱駝刺藥材中水份的質量百分含量小于10%。上述駱駝刺粉末的粒徑為20目。上述駱駝刺提取物的粒徑為80目。上述樹脂為HPD100大孔吸附樹脂；或/和，樹脂柱中樹脂的體積為100L至130L ；或/和，樹脂柱的內徑和高的比為1:6至1:10。本發明通過乙醇回流提取的方法將干燥駱駝刺藥材粉碎后和乙醇回流提取，提取液經減壓濃縮、在填充后的大孔樹脂柱中經蒸餾水洗脫和乙醇洗脫方法進行純化，收集乙醇洗脫后的乙醇洗脫液減壓干燥、粉碎后得駱駝刺提取物，本發明具有工藝穩定、可操作性強、重復性好和環保的特點，提高了提取效率，降低了生產成本和安全隱患。
附圖1為不同濃度下的蘆丁標準液吸光度圖。
具體實施例方式本發明不受下述實施例的限制，可根據本發明的技術方案與實際情況來確定具體的實施方式。實施例1，該駱駝刺提取物按下述步驟得到第一步，樹脂的處理在待處理樹脂中加入5倍待處理樹脂重量的溫水浸泡，溫水溫度控制在50°C至60°C下浸泡I小時至2小時，溫水浸泡后排出樹脂中的溫水，在溫水浸泡后的樹脂中重新加入5倍待處理樹脂重量的溫水浸泡，溫水溫度控制在50°C至60°C下浸泡I小時至2小時，溫水浸泡后排出樹脂中的溫水，如此溫水浸泡3次至5次后在溫水浸泡后的樹脂中加入I倍至2倍待處理樹脂體 積的鹽酸浸泡10小時至12小時,鹽酸的濃度為lmol/L,浸泡后排出樹脂中的鹽酸浸泡液；在鹽酸浸泡后的樹脂中加入自來水沖洗樹脂，直至從樹脂中排出的自來水的PH為3至4時排出樹脂中的自來水；在自來水沖洗后的樹脂中加入蒸懼水沖洗樹脂，直至從樹脂中排出的蒸餾水為中性時排出樹脂中的蒸餾水；在蒸餾水沖洗后的樹脂中加入I倍至2倍待處理樹脂體積的氫氧化鈉溶液浸泡10小時至12小時,氫氧化鈉溶液的濃度為lmol/L,浸泡后排出樹脂中的氫氧化鈉浸泡液；在氫氧化鈉浸泡后的樹脂中加入自來水沖洗樹脂，直至從樹脂中排出的自來水的PH為8至10時排出樹脂中的自來水；在自來水沖洗后的樹脂中加入蒸餾水沖洗樹脂，直至從樹脂中排出的蒸餾水為中性時排出樹脂中的蒸餾水，得到處理后的樹脂；
第二步，樹脂柱的填充在樹脂柱的底部鋪上一層脫脂棉，用蒸餾水將處理后的樹脂懸浮起來一起加入樹脂柱中，當蒸餾水和處理后的樹脂加到樹脂柱體積的一半時，打開樹脂柱底部的出液口開關使蒸餾水流出，在樹脂柱中繼續加入蒸餾水和處理后的樹脂，使處理后的樹脂面下沉至距樹脂柱上部口 5cm至IOcm為止，用2倍至3倍樹脂柱中樹脂體積的體積百分比為95%的乙醇對樹脂柱中的樹脂進行洗脫，乙醇洗脫后排出樹脂柱中的乙醇洗脫液，得到填充后的樹脂柱；
第三步，取干燥駱駝刺藥材粉碎后得到駱駝刺粉末；第四步，在駱駝刺粉末中加入駱駝刺粉末重量的10倍至15倍的乙醇進行一次回流提取，一次回流提取的乙醇為體積百分比為35%至45%的乙醇，一次回流提取溫度為80°C至90°C，一次回流提取時間為2小時至3小時，一次回流提取后過濾得到一次提取液和一次濾渣；第五步，在一次濾渣中加入駱駝刺粉末重量的10倍至15倍的乙醇進行二次回流提取，二次回流提取的乙醇為體積百分比為35%至45%的乙醇，二次回流提取溫度為80°C至90°C，二次回流提取時間為2小時至3小時，二次回流提取后過濾得到二次提取液和二次濾渣；第六步，將一次提取液和二次提取液混合后在壓力為-O. 07MPa、溫度為60°C下進行減壓濃縮，減壓濃縮至溶液中含生藥為O.1克每毫升至O. 5克每毫升的濃縮液；第七步，用4倍至6倍樹脂柱中樹脂體積的濃縮液對樹脂柱中的樹脂進行純化，濃縮液的上樣流速為每小時2倍至3倍的樹脂柱中樹脂體積，上樣完成后在樹脂柱中預留I倍樹脂柱中樹脂體積的濃縮液靜置20min至30min后排出；第八步，然后用5倍至7倍樹脂柱中樹脂體積的蒸餾水對樹脂柱中樹脂進行蒸餾水洗脫，蒸餾水的上樣流速為每小時2倍至3倍的樹脂柱中樹脂體積，第九步，蒸餾水洗脫后用6倍至8倍樹脂柱中樹脂體積的乙醇對樹脂柱中樹脂進行乙醇洗脫，乙醇洗脫的乙醇為體積百分比為35%至45%的乙醇，乙醇的上樣流速為每小時2倍至3倍的樹脂柱中樹脂體積，乙醇洗脫至樹脂柱底部的出液口中流出的乙醇洗脫液呈黃褐色時收集乙醇洗脫液，將收集的乙醇洗脫液在壓力為_0.0810^、溫度為601下減壓干燥4 h至6h，粉碎后得駱駝刺提取物。實施例2，該駱駝刺提取物按下述步驟得到第一步，樹脂的處理在待處理樹脂中加入5倍待處理樹脂重量的溫水浸泡，溫水溫度控制在50°C或60°C下浸泡I小時或2小時，溫水浸泡后排出樹脂中的溫水，在溫水浸泡后的樹脂中重新加入5倍待處理樹脂重量的溫水浸泡，溫水溫度控制在50°C或60°C下浸泡I小時或2小時，溫水浸泡后排出樹脂中的溫水，如此溫水浸泡3次或5次后在溫水浸泡后的樹脂中加入I倍或2倍待處理樹脂體積的鹽酸浸泡10小時或12小時，鹽酸的濃度為lmol/L，浸泡后排出樹脂中的鹽酸浸泡液；在鹽酸浸泡后的樹脂中加入自來水沖洗樹脂，直至從樹脂中排出的自來水的PH為3或4時 排出樹脂中的自來水；在自來水沖洗后的樹脂中加入蒸懼水沖洗樹脂，直至從樹脂中排出的蒸餾水為中性時排出樹脂中的蒸餾水；在蒸餾水沖洗后的樹脂中加入I倍或2倍待處理樹脂體積的氫氧化鈉溶液浸泡10小時或12小時,氫氧化鈉溶液的濃度為lmol/L,浸泡后排出樹脂中的氫氧化鈉浸泡液；在氫氧化鈉浸泡后的樹脂中加入自來水沖洗樹脂，直至從樹脂中排出的自來水的PH為8或10時排出樹脂中的自來水；在自來水沖洗后的樹脂中加入蒸餾水沖洗樹脂，直至從樹脂中排出的蒸餾水為中性時排出樹脂中的蒸餾水，得到處理后的樹脂；
第二步，樹脂柱的填充在樹脂柱的底部鋪上一層脫脂棉，用蒸餾水將處理后的樹脂懸浮起來一起加入樹脂柱中，當蒸餾水和處理后的樹脂加到樹脂柱體積的一半時，打開樹脂柱底部的出液口開關使蒸餾水流出，在樹脂柱中繼續加入蒸餾水和處理后的樹脂，使處理后的樹脂面下沉至距樹脂柱上部口 5cm或IOcm為止，用2倍或3倍樹脂柱中樹脂體積的體積百分比為95%的乙醇對樹脂柱中的樹脂進行洗脫，乙醇洗脫后排出樹脂柱中的乙醇洗脫液，得到填充后的樹脂柱；
第三步，取干燥駱駝刺藥材粉碎后得到駱駝刺粉末；第四步，在駱駝刺粉末中加入駱駝刺粉末重量的10倍或15倍的乙醇進行一次回流提取，一次回流提取的乙醇為體積百分比為35%或45%的乙醇，一次回流提取溫度為80°C或90°C，一次回流提取時間為2小時或3小時，一次回流提取后過濾得到一次提取液和一次濾渣；第五步，在一次濾渣中加入駱駝刺粉末重量的10倍或15倍的乙醇進行二次回流提取，二次回流提取的乙醇為體積百分比為35%或45%的乙醇，二次回流提取溫度為80°C或90°C，二次回流提取時間為2小時或3小時，二次回流提取后過濾得到二次提取液和二次濾渣；第六步，將一次提取液和二次提取液混合后在壓力為-O. 07MPa、溫度為60°C下進行減壓濃縮，減壓濃縮至溶液中含生藥為O.1克每暈升或O. 5克每暈升的濃縮液；第七步，用4倍或6倍樹脂柱中樹脂體積的濃縮液對樹脂柱中的樹脂進行純化，濃縮液的上樣流速為每小時2倍或3倍的樹脂柱中樹脂體積，上樣完成后在樹脂柱中預留I倍樹脂柱中樹脂體積的濃縮液靜置20min或30min后排出；第八步，然后用5倍或7倍樹脂柱中樹脂體積的蒸餾水對樹脂柱中樹脂進行蒸餾水洗脫，蒸餾水的上樣流速為每小時2倍或3倍的樹脂柱中樹脂體積，第九步，蒸餾水洗脫后用6倍或8倍樹脂柱中樹脂體積的乙醇對樹脂柱中樹脂進行乙醇洗脫，乙醇洗脫的乙醇為體積百分比為35%或45%的乙醇，乙醇的上樣流速為每小時2倍或3倍的樹脂柱中樹脂體積，乙醇洗脫至樹脂柱底部的出液口中流出的乙醇洗脫液呈黃褐色時收集乙醇洗脫液，將收集的乙醇洗脫液在壓力為_0.0810^、溫度為601下減壓干燥4 h或6h，粉碎后得駱駝刺提取物。實施例3，作為上述實施例的優化，實施例3的干燥駱駝刺藥材中水份的質量百分含量小于10%。 實施例4，作為上述實施例的優化，實施例4的駱駝刺粉末的粒徑為20目。實施例5，作為上述實施例的優化，實施例5的駱駝刺提取物的粒徑為80目。實施例6，作為上述實施例的優化，實施例6的樹脂為HPD100大孔吸附樹脂；樹脂柱中樹脂的體積為100L至130L ;樹脂柱的內徑和高的比為1:6至1:10。HPD100大孔吸附 樹脂作為色譜填料具有選擇性好、機械強度高、再生處理方便、吸附速度快、可大規模使用等優點被廣泛用于中草藥中皂苷和黃酮類成分的分離。上述實施例中工藝參數的優選及優選方法按下述進行1.試驗儀器與材料
1.1儀器
紫外可見分光光度計，型旋轉蒸發儀(上海預康科技有限公司)，精密電子天平(常熟雙杰測試儀器廠)，中藥粉碎機。材料
駱駝刺采自烏魯木齊縣安寧區，經王國平鑒定為豆科駱駝刺屬植物駱駝刺Alhagi pseudalhagi (M. B. )Desv.。將駱5它刺陰干粉碎,在真空干燥器中以60°C干燥至恒重，備用。蘆丁標準品(中國藥品生物制品檢定所)，無水乙醇、石油醚、氫氧化鈉、亞硝酸鈉和硝酸鋁均為分析純。方法
2.1總黃酮的測定 2.1.1標準液的配制
精密稱取120°C干燥恒重的蘆丁標準品7.23 mg，置50 mL容量瓶中，用體積百分比為60%的乙醇溶解并定容得到濃度為O. 1338mg/mL的蘆丁標準溶液。選取蘆丁作為駱駝刺提取物總黃酮含量測定的對照物質，該方法穩定可行，可操作性強、重復性好。標準曲線的繪制
精密量取蘆丁標準溶液各 0、0· 5、1· 0、2· 0、3· O、4· 0、5· 0、6· 0、7· 0、8· OmL 置于 25 mL容量瓶中，分別加入體積百分比為60%的乙醇溶液至10 mL，再依次加入ImL質量百分比為5%的亞硝酸鈉溶液,搖勻,放置6 min后,再依次加入I mL質量百分比為10%的硝酸招溶液，搖勻，放置6 min后,再依次加入質量百分比為4%的氫氧化鈉溶液4 mL,再依次加入體積百分比為60%的乙醇并定容至25 mL,搖勻,放置15min后在510 nm處測定吸光度值。以吸光度值為縱坐標，蘆丁濃度(mg/mL )為橫坐標，制作標準曲線，得到回歸方程Y =12. 374X - O. 0036，其線性范圍為 O. 27 mg/L 至 42. 81mg/L，R2=O. 9997，如附圖1 所示。樣品溶液的制備和黃酮含量的測定
準確稱取陰干粉碎的駱駝刺藥材10 g，用IOOmL石油醚脫脂去雜質，藥渣再用IOOml不同濃度的乙醇提取，提取液再用IOOml體積百分比為60%的乙醇潤洗并定容至250ml容量瓶中，依照“2.1. 2標準曲線的繪制”項下方法測定吸光度，代入回歸方程中計算總黃酮的含量，并計算總黃酮的得率
總黃酮含量(％) =CVD/WX 100%
式中=C為總黃酮顯色稀釋后的濃度(mg/ml)
V為稀釋后的體積，D為樣品的稀釋倍數 W為樣品的質量
總黃酮的得率(%)=(提取液中總黃酮濃度X提取液體積)/對應的原料重量 X 100%O在此過程中分別考察不同乙醇濃度、不同料液比、不同提取時間和溫度對總黃酮提取的影響。然后結合正交試驗確定最佳提取工藝。 單因素實驗
2.2.1提取溫度對總黃酮得率的影響分別取駱駝刺粉末4份，每份10克，加入體積百分比為60%的乙醇100ml，加熱回流提取I 11，提取溫度依次為601、701、801、901，提取1次，測定。不同回流溫度下提取液中總黃酮的平均含量見表I。表I
溫度|60°C 170 °C 180 °C |90Γ~
總黃酮含量 mg/g |θ. 671 |θ. 755 |θ. 756 |θ. 784
從表I可以看出隨著回流溫度的升高，提取液中總黃酮含量逐漸增加。乙醇濃度對總黃酮得率的影響
分別取駱駝刺粉末8份，每份10克，分別加入體積百分比為20%、30%、40%、50% ,60%,70%、80%、90%的乙醇100 ml，90°C加熱回流提取I h，提取I次、測定。不同乙醇濃度下提取液中總黃酮的平均含量見表2。表2
乙醇濃度(％) |20% 130% 140% 150% |60% 170% 180% |95%
總黃酮含量 mg/g |θ· 825 |θ· 851 |θ· 988 |θ· 961 |θ· 854 |θ· 752 |θ· 778 |θ· 882
從表2可以看出隨著乙醇濃度的增加，提取液中總黃酮含量先增加后降低。提取時間對總黃酮得率的影響
分別取駱駝刺粉末4份，每份10克，加入體積百分比為60%的乙醇100 ml，90°C加熱回流提取I h、2h、3h、4h，提取I次，測定。不同提取時間提取液中總黃酮的平均含量見表3。表3
時間(h)Ilh |2h |3h |4h
總黃酮含量 mg/g |θ. 756 |θ. 884 |θ. 930 |θ. 841
從表3可以看出隨著提取時間的延長，提取液中總黃酮含量先增加后降低。料液比對總黃酮得率的影響
分別取駱駝刺粉末6份，每份10克，90°C分別加入50ml、100 ml、150 ml,200 ml,250ml,300ml體積百分比為60%的乙醇，90°C加熱回流提取I h，提取I次，測定。不同料液比提取液中總黃酮的平均含量見表4。表權利要求
1.一種駱駝刺提取物，其特征在于按下述步驟得到第一步，樹脂的處理在待處理樹脂中加入5倍待處理樹脂重量的溫水浸泡，溫水溫度控制在50°C至60°C下浸泡I小時至2小時，溫水浸泡后排出樹脂中的溫水，在溫水浸泡后的樹脂中重新加入5倍待處理樹脂重量的溫水浸泡，溫水溫度控制在50°C至60°C下浸泡I小時至2小時，溫水浸泡后排出樹脂中的溫水，如此溫水浸泡3次至5次后在溫水浸泡后的樹脂中加入I倍至2倍待處理樹脂體積的鹽酸浸泡10小時至12小時,鹽酸的濃度為lmol/L,浸泡后排出樹脂中的鹽酸浸泡液；在鹽酸浸泡后的樹脂中加入自來水沖洗樹脂，直至從樹脂中排出的自來水的PH為3至4時排出樹脂中的自來水；在自來水沖洗后的樹脂中加入蒸懼水沖洗樹脂，直至從樹脂中排出的蒸餾水為中性時排出樹脂中的蒸餾水；在蒸餾水沖洗后的樹脂中加入I倍至2倍待處理樹脂體積的氫氧化鈉溶液浸泡10小時至12小時,氫氧化鈉溶液的濃度為lmol/L,浸泡后排出樹脂中的氫氧化鈉浸泡液；在氫氧化鈉浸泡后的樹脂中加入自來水沖洗樹脂，直至從樹脂中排出的自來水的PH為8至10時排出樹脂中的自來水；在自來水沖洗后的樹脂中加入蒸餾水沖洗樹脂，直至從樹脂中排出的蒸餾水為中性時排出樹脂中的蒸餾水，得到處理后的樹脂； 第二步，樹脂柱的填充在樹脂柱的底部鋪上一層脫脂棉，用蒸餾水將處理后的樹脂懸浮起來一起加入樹脂柱中，當蒸餾水和處理后的樹脂加到樹脂柱體積的一半時，打開樹脂柱底部出液口開關使蒸餾水流出，在樹脂柱中繼續加入蒸餾水和處理后的樹脂，使處理后的樹脂面下沉至距樹脂柱上部口 5cm至IOcm為止，用2倍至3倍樹脂柱中樹脂體積的體積百分比為95%的乙醇對樹脂柱中的樹脂進行洗脫，乙醇洗脫后排出樹脂柱中的乙醇洗脫液，得到填充后的樹脂柱； 第三步，取干燥駱駝刺藥材粉碎后得到駱駝刺粉末；第四步，在駱駝刺粉末中加入駱駝刺粉末重量的10倍至15倍的乙醇進行一次回流提取，一次回流提取的乙醇為體積百分比為35%至45%的乙醇，一次回流提取溫度為80°C至90°C，一次回流提取時間為2小時至3小時，一次回流提取后過濾得到一次提取液和一次濾渣；第五步，在一次濾渣中加入駱駝刺粉末重量的10倍至15倍的乙醇進行二次回流提取，二次回流提取的乙醇為體積百分比為35%至45%的乙醇，二次回流提取溫度為80°C至90°C，二次回流提取時間為2小時至3小時，二次回流提取后過濾得到二次提取液和二次濾渣；第六步，將一次提取液和二次提取液混合后在壓力為-O. 07MPa、溫度為60°C下進行減壓濃縮，減壓濃縮至溶液中含生藥為O.1克每毫升至O. 5克每毫升的濃縮液；第七步，用4倍至6倍樹脂柱中樹脂體積的濃縮液對樹脂柱中的樹脂進行純化，濃縮液的上樣流速為每小時2倍至3倍的樹脂柱中樹脂體積，上樣完成后在樹脂柱中預留I倍樹脂柱中樹脂體積的濃縮液靜置20min至30min后排出；第八步，然后用5倍至7倍樹脂柱中樹脂體積的蒸餾水對樹脂柱中樹脂進行蒸餾水洗脫，蒸餾水的上樣流速為每小時2倍至3倍的樹脂柱中樹脂體積，第九步，蒸餾水洗脫后用6倍至8倍樹脂柱中樹脂體積的乙醇對樹脂柱中樹脂進行乙醇洗脫，乙醇洗脫的乙醇為體積百分比為35%至45%的乙醇，乙醇的上樣流速為每小時2倍至3倍的樹脂柱中樹脂體積，乙醇洗脫至樹脂柱底部的出液口中流出的乙醇洗脫液呈黃褐色時收集乙醇洗脫液，將收集的乙醇洗脫液在壓力為_0.0810^、溫度為601下減壓干燥4 h至6h，粉碎后得駱駝刺提取物。
2.根據權利要求1所述的駱駝刺提取物，其特征在于干燥駱駝刺藥材中水份的質量百分含量小于10%。
3.根據權利要求1或2所述的駱駝刺提取物，其特征在于駱駝刺粉末的粒徑為20目。
4.根據權利要求1或2或3所述的駱駝刺提取物，其特征在于駱駝刺提取物的粒徑為80目。
5.根據權利要求1或2或3或4所述的駱駝刺提取物，其特征在于樹脂為HPD100大孔吸附樹脂；或/和，樹脂柱中樹脂的體積為100L至130L ;或/和，樹脂柱的內徑和高的比為1:6 至 1:10。
6.一種根據權利要求1或2或3或4或5所述的駱駝刺提取物的制備方法，其特征在于按下述步驟進行第一步，樹脂的處理在待處理樹脂中加入5倍待處理樹脂重量的溫水浸泡，溫水溫度控制在50°C至60°C下浸泡I小時至2小時，溫水浸泡后排出樹脂中的溫水，在溫水浸泡后的樹脂中重新加入5倍待處理樹脂重量的溫水浸泡，溫水溫度控制在50°C至60°C下浸泡I小時至2小時，溫水浸泡后排出樹脂中的溫水，如此溫水浸泡3次至5次后在溫水浸泡后的樹脂中加入I倍至2倍待處理樹脂體積的鹽酸浸泡10小時至12小時，鹽酸的濃度為lmol/L,浸泡后排出樹脂中的鹽酸浸泡液；在鹽酸浸泡后的樹脂中加入自來水沖洗樹脂，直至從樹脂中排出的自來水的PH為3至4時排出樹脂中的自來水；在自來水沖洗后的樹脂中加入蒸餾水沖洗樹脂，直至從樹脂中排出的蒸餾水為中性時排出樹脂中的蒸餾水；在蒸餾水沖洗后的樹脂中加入I倍至2倍待處理樹脂體積的氫氧化鈉溶液浸泡10小時至12小時,氫氧化鈉溶液的濃度為lmol/L,浸泡后排出樹脂中的氫氧化鈉浸泡液；在氫氧化鈉浸泡后的樹脂中加入自來水沖洗樹脂，直至從樹脂中排出的自來水的PH為8至10時排出樹脂中的自來水；在自來水沖洗后的樹脂中加入蒸懼水沖洗樹脂，直至從樹脂中排出的蒸餾水為中性時排出樹脂中的蒸餾水，得到處理后的樹脂； 第二步，樹脂柱的填充在樹脂柱的底部鋪上一層脫脂棉，用蒸餾水將處理后的樹脂懸浮起來一起加入樹脂柱中，當蒸餾水和處理后的樹脂加到樹脂柱體積的一半時，打開樹脂柱底部的出液口開關使蒸餾水流出，在樹脂柱中繼續加入蒸餾水和處理后的樹脂，使處理后的樹脂面下沉至距樹脂柱上部口 5cm至IOcm為止，用2倍至3倍樹脂柱中樹脂體積的體積百分比為95%的乙醇對樹脂柱中的樹脂進行洗脫，乙醇洗脫后排出樹脂柱中的乙醇洗脫液，得到填充后的樹脂柱； 第三步，取干燥駱駝刺藥材粉碎后得到駱駝刺粉末；第四步，在駱駝刺粉末中加入駱駝刺粉末重量的10倍至15倍的乙醇進行一次回流提取，一次回流提取的乙醇為體積百分比為35%至45%的乙醇，一次回流提取溫度為80°C至90°C，一次回流提取時間為2小時至3小時，一次回流提取后過濾得到一次提取液和一次濾渣；第五步，在一次濾渣中加入駱駝刺粉末重量的10倍至15倍的乙醇進行二次回流提取，二次回流提取的乙醇為體積百分比為35%至45%的乙醇，二次回流提取溫度為80°C至90°C，二次回流提取時間為2小時至3小時，二次回流提取后過濾得到二次提取液和二次濾渣；第六步，將一次提取液和二次提取液混合后在壓力為-O. 07MPa、溫度為60°C下進行減壓濃縮，減壓濃縮至溶液中含生藥為O.1克每毫升至O. 5克每毫升的濃縮液；第七步，用4倍至6倍樹脂柱中樹脂體積的濃縮液對樹脂柱中的樹脂進行純化，濃縮液的上樣流速為每小時2倍至3倍的樹脂柱中樹脂體積，上樣完成后在樹脂柱中預留I倍樹脂柱中樹脂體積的濃縮液靜置20min至30min后排出；第八步，然后用5倍至7倍樹脂柱中樹脂體積的蒸餾水對樹脂柱中樹脂進行蒸餾水洗脫，蒸餾水的上樣流速為每小時2倍至3倍的樹脂柱中樹脂體積，第九步，蒸餾水洗脫后用6倍至8倍樹脂柱中樹脂體積的乙醇對樹脂柱中樹脂進行乙醇洗脫，乙醇洗脫的乙醇為體積百分比為35%至45%的乙醇，乙醇的上樣流速為每小時2倍至3倍的樹脂柱中樹脂體積，乙醇洗脫至樹脂柱底部的出液口中流出的乙醇洗脫液呈黃褐色時收集乙醇洗脫液，將收集的乙醇洗脫液在壓力為_0.0810^、溫度為601下減壓干燥4 h至6h，粉碎后得駱駝刺提取物。
7.根據權利要求6所述的駱駝刺提取物的制備方法，其特征在于干燥駱駝刺藥材中水份的質量百分含量小于10%。
8.根據權利要求6或7所述的駱駝刺提取物的制備方法，其特征在于駱駝刺粉末的粒徑為20目。
9.根據權利要求6或7或8所述的駱駝刺提取物的制備方法，其特征在于駱駝刺提取物的粒徑為80目。
10.根據權利要求6或7或8或9所述的駱駝刺提取物的制備方法，其特征在于樹脂為HPD100大孔吸附樹脂；或/和，樹脂柱中樹脂的體積為100L至130L ;或/和，樹脂柱的內徑和高的比為1:6至1:10。
全文摘要
本發明涉及駱駝刺技術領域，是一種駱駝刺提取物及其制備方法。該駱駝刺提取物按下述步驟得到第一步，樹脂的處理；第二步，樹脂柱的填充；第三步，取干燥駱駝刺藥材粉碎后得到駱駝刺粉末；第四步，在駱駝刺粉末中加入駱駝刺粉末重量的10倍至15倍的乙醇進行一次回流提取。本發明通過乙醇回流提取的方法將干燥駱駝刺藥材粉碎后和乙醇回流提取，提取液經減壓濃縮、在填充后的大孔樹脂柱中經蒸餾水洗脫和乙醇洗脫方法進行純化，收集乙醇洗脫后的乙醇洗脫液減壓干燥、粉碎后得駱駝刺提取物，本發明具有工藝穩定、可操作性強、重復性好和環保的特點，提高了提取效率，降低了生產成本和安全隱患。
文檔編號A61K36/48GK103006754SQ20121058270
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月28日 優先權日2012年12月28日
發明者賈曉光, 魏鴻雁, 石磊嶺, 徐曉琴, 夏提古麗·阿不利孜 申請人:新疆維吾爾自治區中藥民族藥研究所