專利名稱：螞蟥提取物及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥提取物，特別是涉及一種螞蟥提取物及其制備方法和應用。
技術背景
心腦血管疾病是一種嚴重威脅人類，特別是50歲以上中老年人健康的常見病，并已成為人類死亡病因最高的頭號殺手。目前，我國正逐步步入老齡化社會，抗凝藥物的需求越來越大，但傳統的脲激酶和肝素均有給藥后出血的弊端，限制了其臨床應用。
螞蟥(Whitmania pigra)干燥體,是《中華人民共和國藥典》2010版一部收載的水蛭藥材的品種之一，其性平、味咸苦，具有破血、逐瘀、通經之功效，在我國有著悠久的藥用歷史,是經典的中藥理血之藥。
隨著現代對螞蟥活性成分的深入研究，相繼發現了螞蟥中含有許多具有抗凝活性的蛋白質多肽類，但由于蛋白質多肽類結構的特殊性和復雜性，為這類活性物質的發現帶來了很多挑戰和困難，除了對從日本醫蛭中提取到的水蛭素有非常豐富地研究，文獻少有其他活性蛋白質多肽類的深入研究和應用。公開號為101332211A的中國專利公開的一種水蛭提取物及其制備方法與運用，以水作為提取溶劑，也是對水蛭中的蛋白質及多肽類化合物的運用。發明內容
基于此，本發明的目的在于克服現有技術的缺陷，提供一種螞蟥提取物的制備方法。
為實現上述目的，本發明采取以下技術方案
在螞蟥藥材中加入螞蟥藥材4-8倍體積量的石油醚，回流提取6_16h，得到提取液；回收上述提取液中的石油醚，得到螞蟥提取物。
一般來說，石油醚的量 少于4倍無法充分浸泡藥材，使提取不充分；而多余8倍，一方面對于索氏提取器來說可行性低，另一方面也增加了溶劑回收量。而提取時間小于6小時提取不充分，但結合實際操作需求，應在16小時內較為合適。
在其中一個實施例中，加入螞蟥藥材6倍體積量的石油醚。
在其中一個實施例中，所述回流提取的時間為12h。
在其中一個實施例中,所述回流提取的速度為每秒1-3滴。
在其中一個實施例中，包括對螞蟥藥材的前處理，所述前處理方法為，先在 35-45°C下干燥螞蟥藥材12-36h，進行粉碎，再過60 100目篩。
在其中一個實施例中，所述石油醚為60°C 90°C段石油醚。采用該段沸程的石油醚，可以節約提取時間。
在其中一個實施例中，所述回流提取采用索式回流提取方式。
在其中一個實施例中，回收石油醚時采用減壓蒸餾方式。
本發明還提供一種采用上述的制備方法制備而得的螞蟥提取物。
本發明還提供上述的螞蟥提取物在制備抗凝血藥物中的應用。
與現有技術相比，本發明具有以下有益效果
本發明提供的螞蟥提取物的制備方法，是采用與現有技術中所用的水不同極性的溶劑石油醚進行回流提取而獲得的，由于石油醚的極性遠小于水的極性，因此提取出來的提取物類別也大不相同，經衍生化后進行氣相-質譜聯用分析其組成，發現該螞蟥提取物多為脂肪酸類成分。且所得的螞蟥提取物經過血漿復鈣試驗后表明，不同質量濃度的螞蟥提取物均能顯著延長家兔血漿復鈣時間，與生理鹽水對照組相比，具有統計學意義上的顯著性差異，并且各質量濃度呈顯著量效關系，證明螞蟥藥材石油醚提取物具有體外抗凝血作用。本發明從中藥現代化的活性要求出發，得到不同于傳統的螞蟥活性蛋白質多肽類的具有抗凝活性的脂肪酸類提取物，為螞蟥藥材的活性研究提供了比蛋白質多肽類更穩定， 更簡單的活性成分方向，也大大提高了螞蟥藥材的研究深度。
圖1為采用氣相質譜聯用儀分析本發明實施例1的螞蟥提取物得到的總離子流-1'Tfe P曰。
具體實施方式
以下結合附圖和具體實施例來詳細說明本發明。
實施例1螞蟥提取物的制備方法
取在40°C下干燥18h后的螞蟥干燥藥材，粉碎(過60目篩)，取IOg藥材粉末，加入濾紙筒內，連接索式提取器，燒瓶，傾入60ml石油醚(60°C、0°C )，至虹吸管高度2/3處，連接冷凝管并在頂端加塞少許脫脂棉，打開冷卻水，并開啟97°C水浴加熱，使抽提管內石油醚處于微沸狀態，控制回流速度為每秒3滴，提取12h，提取液真空旋干回收石油醚，最終得到螞蟥提取物3. 12g。
實施例2螞蟥提取物的制備方法
取在35°C下干燥36h后的螞蟥干燥藥材，粉碎(過100目篩)，取IOg藥材粉末，加入濾紙筒內，連接索式提取器，燒瓶，傾入40ml石油醚(30°C飛(TC )，至虹吸管高度2/3處， 連接冷凝管并在頂端加塞少許脫脂棉，打開冷卻水，并開啟97°C水浴加熱，使抽提管內石油醚處于微沸狀態，控制回流速度為每秒I滴，提取16h，提取液真空旋干回收石油醚，最終得到螞蟥提取物2. 9g。
實施例3螞蟥提取物的制備方法
取在45°C下干燥12h后的螞蟥干燥藥材，粉碎(過80目篩)，取IOg藥材粉末，加入濾紙筒內，連接索式提取器，燒瓶，傾入80ml石油醚(60°C、0°C )，至虹吸管高度2/3處，連接冷凝管并在頂端加塞少許脫脂棉，打開冷卻水，并開啟97°C水浴加熱，使抽提管內石油醚處于微沸狀態，控制回流速度為每秒2滴，提取6h，提取液真空旋干回收石油醚，最終得到螞蟥提取物2. 8g。
實施例4對實施例1的螞蟥提取物進行氣相-質譜聯用分析及成分鑒定
1.1 試劑
石油醚(60°C 90°C)，天津百世化工；甲醇，天津百世化工；正己烷，天津市富產精細化工有限公司。氫氧化鉀，廣州化學試劑廠；乙醚，廣州化學試劑廠。
1. 2 儀器
美國熱電公司TRACE DSQ氣相色譜質譜聯用儀。
1. 3方法與結果
1. 3.1 方法
精密稱取實施例1制備的螞蟥提取物O. 2g于IOml容量瓶中，加入Iml乙醚正己烷(2:1)混合溶劑溶解，再依次加入Iml甲醇、2%(w/v)K0H-甲醇溶液2ml，搖勻，于60°C 水浴lOmin，取出，冷卻至室溫，加入正己烷至刻度萃取，震蕩混勻，靜置分層，取上清液進行 GC-MS測定。
GC-MS條件DB-5 (25mmX0. 25mm)石英毛細管柱，初始溫度100°C，保持2min，再以2°C /min程序升溫至200°C,保持30min,流速1. Oml/min,檢測器FID,載氣氮氣,進樣量2μ 1，去溶劑峰8min。離子源溫度210°C;氣化室溫度130°C;電離方式EI ;電子能量 70eV ;掃描范圍10-650質量單位；發射電流300uA。
1. 3. 2 結果
通過氣相質譜聯用儀分析得螞蟥提取物總離子流譜，見圖1，其中橫坐標表示出峰時間，縱坐標表示相對豐度；對各峰經質譜圖，通過Xcalibur工作站NIST標準質譜圖庫進行檢索，確認各化合物，共鑒定出15個脂肪酸成分；通過Xcalibur工作站數據處理系統， 按面積歸一化法計算各化合物相對的量，結果見下表I。
表I螞蟥提取物的成分分析
權利要求
1.一種螞蟥提取物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟在螞蟥藥材中加入螞蟥藥材4-8倍體積量的石油醚，回流提取6-16h，得到提取液；回收上述提取液中的石油醚，得到螞蟥提取物。
2.根據權利要求1所述的螞蟥提取物的制備方法，其特征在于，加入螞蟥藥材6倍體積量的石油醚。
3.根據權利要求1所述的螞蟥提取物的制備方法，其特征在于，所述回流提取的時間為 12h。
4.根據權利要求1所述的螞蟥提取物的制備方法，其特征在于，所述回流提取的速度為每秒1-3滴。
5.根據權利要求1-4任一項所述的螞蟥提取物的制備方法，其特征在于，還包括對螞蟥藥材的前處理，所述前處理方法為，35-45°C下干燥螞蟥藥材12-36h后，粉碎，再過 60 100目篩。
6.根據權利要求1所述的螞蟥提取物的制備方法，其特征在于，所述石油醚為 600C 90°C段石油醚。
7.根據權利要求1所述的螞蟥提取物的制備方法，其特征在于，所述回流提取采用索式回流提取方式。
8.根據權利要求1所述的螞蟥提取物的制備方法，其特征在于，采用減壓蒸餾回收石油醚。
9.權利要求1-8任一項所述的制備方法制備而得的螞蟥提取物。
10.權利要求9所述的螞蟥提取物在制備抗凝血藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種螞蟥提取物及其制備方法和應用。在螞蟥藥材中加入螞蟥藥材4-8倍體積量的石油醚，回流提取6-16h，得到提取液；回收上述提取液中的石油醚，得到螞蟥提取物。本發明采用石油醚進行回流提取，獲得了不同于傳統的螞蟥活性蛋白質多肽類的脂肪酸類的螞蟥提取物。所得的螞蟥提取物具有體外抗凝血作用。
文檔編號A61K35/62GK103054905SQ20121058388
公開日2013年4月24日 申請日期2012年12月27日 優先權日2012年12月27日
發明者鐘山, 尹玉華, 楊得坡 申請人:中山大學