能夠特異性識別轉鐵蛋白受體的抗體的制作方法

能夠特異性識別轉鐵蛋白受體的抗體的制作方法
【專利摘要】本發明的目的在于提供一種特異性識別人TfR，抑制TfR高表達的癌細胞的生存和增殖，且對人沒有免疫原性的完全人抗人TfR抗體。根據本發明，提供一種與人TfR進行特異性反應的抗體，作為重鏈第一互補決定區（VH?CDR1）、重鏈第二互補決定區（VH?CDR2）、重鏈第三互補決定區（VH?CDR3）分別包含序列號1～3、7～9、13～15、19～21、25～27、31～33、37～39、43～45、49～51、55～57、61～63、67～69、73～75、79～81、85～87、91～93、97～99、103～105、109～111、115～117中的任意的氨基酸序列。
【專利說明】能夠特異性識別轉鐵蛋白受體的抗體
【技術領域】
[0001]本發明涉及與人TfR抗原進行特異性反應的抗TfR抗體。本發明還涉及包含抗TfR抗體的醫藥組合物、特別是與惡性腫瘤的治療相關的醫藥組合物。
【背景技術】
[0002]癌癥占日本死亡原因的第一位，隨著著高齡化，患者的數量年年增加，強烈希望開發有效性和安全性高的藥劑和治療方法。目前的化學療法、放射線療法等，在殺死癌細胞的同時會對正常細胞造成損害，引起強烈的副作用。為了解決上述問題，將癌細胞中特異性表達的分子作為標的設計藥劑來進行治療的分子標的治療的研究開始盛行。由于這種分子標的癌治療藥具有抗體藥的半衰期長、副作用少等優點，因此受到很大的關注。作為開發的成功例，可以舉出以CD20為標的的嵌合抗體利妥昔單抗(非專利文獻I)、以Her2/neu為標的的人化抗體曲妥珠單抗(非專利文獻2)、以血管內皮生長因子(VEGF)為標的的人化抗體貝伐單抗等。這些抗體以癌作為對象病患被使用，認可了其治療效果。
[0003]作為治療藥的抗體的使用，分為非標記和標記抗體。非標記抗體的作用機理認為是:(I)涉及免疫系統細胞、分子的抗體依賴性細胞損傷活性(ADCC)(非專利文獻3)或補體依賴性細胞損傷活性(CDC)(非專利文獻4)、(2)標的分子引起的與細胞內生存或增殖相關的信號的阻礙、(3)細胞凋亡的誘導、(4)細胞因子的分泌調節等。通過各種機理的組合，使得腫瘤細胞死亡、停止增殖，從而發揮治療效果。對于標記抗體而言，將抗體與放射線物質、毒素、酶或藥劑等細胞損傷物質連接，利用抗體的特異性將這些物質送達至癌組織，從而實現治療效果的提高和副作用的降低。
[0004]轉鐵蛋白受體(TfR)作為與轉鐵蛋白(Tf)結合的鐵進入細胞內用的細胞膜結構，最初發現存在于網織紅細胞上(非專利文獻5)。后來知道在胎盤的滋養膜細胞(非專利文獻10到12)、活化的淋巴細胞(非專利文獻12)、各種腫瘤細胞等中表達。例如，報告了在乳腺癌(非專利文獻6)、前列腺癌(非專利文獻7)、肺癌(非專利文獻8)、胰腺癌(非專利文獻9)、大腸癌(非專利文獻30、31)、胃癌(非專利文獻31)、膀胱癌(非專利文獻32、33)、肝癌(非專利文獻34)、宮頸癌(非專利文獻35)、腦腫瘤(非專利文獻36)、慢性淋巴性白血病(非專利文獻37、38)、非霍奇金淋巴瘤(非專利文獻38、39)、成人T細胞白血病(非專利文獻40)中，轉鐵蛋白受體高表達。此外，由于TfR在各種癌細胞表面高表達，而在正常細胞中的表達低，因此，很久以前就被認作是癌治療的分子標的(非專利文獻13到16、專利文獻1、2)。但是，迄今為止所開發的抗人TfR抗體都是來自動物的抗體。通常，已知如果將人以外的動物的抗體，例如小鼠的抗體投給人，則會被識別為異物，因此在人體內誘導出針對小鼠抗體的人抗體(Human Anti Mouse Antibody:以下,記為HAMA)。已知HAMA與投與的小鼠抗體反應，引起副作用(非專利文獻17到20)，加速所投與的小鼠抗體從體內消失(非專利文獻18、21和22)，從而減弱小鼠抗體的治療效果(非專利文獻23和24)。用實際上存在的小鼠抗人TfR抗體進行臨床一期試驗，觀察到HAMA的產生，未能發現顯著的治療效果(非專利文獻25)。[0005]為了回避這樣的問題，開發了嵌合抗體(專利文獻3和4)。嵌合抗體包括來自2個或其以上的種的抗體的一部分(小鼠抗體的可變區和人抗體的恒定區等)。這樣的嵌合抗體的優點在于保持了小鼠抗體的特征，并且因具有人Fe而能夠刺激人補體或細胞損傷活性。但是，這樣的嵌合抗體依然會引起“人抗嵌合抗體”即HACA (Human Ant1-ChimeraAntibody)應答(非專利文獻26)。進而，開發了只有取代的抗體的一部分為互補決定域(即“⑶R”)的重組抗體(專利文獻5和6)。使用⑶R移植技術，產生由小鼠⑶R、人可變區骨架和恒定區構成的抗體，即“人化抗體”(非專利文獻27)。但是，這樣的人化抗體對人也具有免疫原性，會引起HAHA (Human ant1-Human Antibody)反應(非專利文獻28、29)。因此,在臨床應用中，期待更加安全有效的沒有免疫原性的抗體治療藥。
[0006]但是，在抗體新藥研發中，雖然獲取識別存在于細胞膜表面的“完整狀態的”標的癌抗原的抗體是必不可少的，但是由于標的癌抗原為膜蛋白，所以即使對于針對已知的癌抗原的抗體而言，其取得也是很困難的。為了消除這些問題點，本發明的發明人迄今為止制作了由1000億個獨立的克隆構成的巨大的人抗體文庫，利用該數據庫確立了針對癌細胞和組織的細胞膜表面存在的蛋白質(細胞表面抗原)的抗體的網羅式獲取法(專利文獻7~9)。
[0007]現有技術文獻
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【發明內容】

[0059]發明要解決的課題
[0060]本發明要解決的課題在于提供一種完全的人抗人TfR抗體，該抗體特異性識別人TfR,阻礙TfR高表達的癌細胞的生存和增殖，并且對人沒有免疫原性。本發明的目的還在于提供這些抗體的制造方法和使用這些抗體的癌等疾病的治療藥。
[0061]用于解決課題的方法
[0062]如上所述，雖然開發了以TfR為標的的抗體作為抗腫瘤劑，但是由于是來自動物的抗體，所以HAMA的產生和藥效不足等，導致開發不成功。為此，本發明的發明人對獨自的抗體制作方法進行了潛心研究，發現:通過人抗體文庫噬菌體展示，獲取了與癌細胞膜上的TfR反應的噬菌體抗體(scFv抗體)。通過對這些抗體基因序列進行分析，發現抗體的⑶R具有新型的氨基酸序列。進而，將這些scFv抗體IgG化,制作了完全的人IgG抗體。使用這些IgG抗體在體外(in vitro)、體內(in vivo)研究了抗腫瘤效果。其結果可知,抗體具有很強的抗腫瘤效果。由此，利用這些抗體在多種TfR高表達的癌治療中顯示有用性，從而完成了本發明。
[0063]即，根據本發明，提供一種與人TfR進行特異性反應的抗體，作為重鏈第一互補決定區(VH⑶R1)、重鏈第二互補決定區(VH CDR2)、重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)分別包含序列號 I ~3、7 ~9、13 ~15、19 ~21、25 ~27、31 ~33、37 ~39、43 ~45、49 ~51、55 ~
57.61~63、67 ~69、73 ~75、79 ~81、85 ~87、91 ~93、97 ~99、103 ~105、109 ~111、115~117中的任意的氨基酸序列。
[0064]根據本發明，提供一種與人TfR進行特異性反應的抗體，作為重鏈第一互補決定區(VH⑶Rl )、重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)分別包含序列號 I ~3、7 ~9、13 ~15、19 ~21、25 ~27、31 ~33、37 ~39、43 ~45、49 ~51、55 ~
57.61~63、67 ~69、73 ~75、79 ~81、85 ~87、91 ~93、97 ~99、103 ~105、109 ~111、115~117中的任意的氨基酸序列，作為輕鏈第一互補決定區(VL⑶Rl )、輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)分別包含序列號4~6、10~12、16~18、22 ~24、28 ~30、34 ~36、40 ~42、46 ~48、52 ~54、58 ~60、64 ~66、70 ~72、76 ~78、82 ~84、88 ~90、94 ~96、100 ~102、106 ~108、112 ~114、118 ~120 中的任意的氨基酸序列。
[0065]根據本發明，提供一種與人TfR進行特異性反應的抗體，其選自下述(I)到(20)的抗體。
[0066](I)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號I的重鏈第一互補決定區(VH⑶Rl )、序列號2的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號3的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號4的輕鏈第一互補決定區(VL⑶Rl )、序列號5的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號6的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ；
[0067](2)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號7的重鏈第一互補決定區(VH⑶Rl )、序列號8的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號9的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號10的輕鏈第一互補決定區(VL⑶R1)、序列號11的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號12的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ；
[0068](3)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號13的重鏈第一互補決定區(VH⑶R1)、序列號14的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號15的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號16的輕鏈第一互補決定區(VL⑶R1)、序列號17的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號18的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ；
[0069](4)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號19的重鏈第一互補決定區(VH⑶R1)、序列號20的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號21的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號22的輕鏈第一互補決定區(VL⑶R1)、序列號23的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號24的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ；
[0070](5)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號25的重鏈第一互補決定區(VH⑶R1)、序列號26的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號27的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號28的輕鏈第一互補決定區(VL⑶R1)、序列號29的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號30的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ；
[0071](6)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號31的重鏈第一互補決定區(VH⑶R1)、序列號32的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號33的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號34的輕鏈第一互補決定區(VL⑶R1)、序列號35的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號36的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ；
[0072](7)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號37的重鏈第一互補決定區(VH⑶R1)、序列號38的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號39的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號40的輕鏈第一互補決定區(VL⑶R1)、序列號41的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號42的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ；
[0073](8)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號43的重鏈第一互補決定區(VH⑶R1)、序列號44的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號45的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號46的輕鏈第一互 補決定區(VL⑶R1)、序列號47的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號48的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ；
[0074](9)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號49的重鏈第一互補決定區(VH⑶R1)、序列號50的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號51的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號52的輕鏈第一互補決定區(VL⑶R1)、序列號53的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號54的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ；
[0075](10)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號55的重鏈第一互補決定區(VH⑶R1)、序列號56的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號57的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號58的輕鏈第一互補決定區(VL⑶R1)、序列號59的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號60的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ；
[0076](11)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號61的重鏈第一互補決定區(VH⑶R1)、序列號62的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號63的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號64的輕鏈第一互補決定區(VL⑶R1)、序列號65的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號66的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ；
[0077](12)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號67的重鏈第一互補決定區(VH⑶R1)、序列號68的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號69的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號70的輕鏈第一互補決定區(VL⑶R1)、序列號71的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號72的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ；
[0078](13)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號73的重鏈第一互補決定區(VH⑶R1)、序列號74的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號75的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號76的輕鏈第一互補決定區(VL⑶R1)、序列號77的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號78的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ；
[0079](14)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號79的重鏈第一互補決定區(VH⑶R1)、序列號80的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號81的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號82的輕鏈第一互補決定區(VL⑶R1)、序列號83的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號84的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ；
[0080](15)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號85的重鏈第一互補決定區(VH⑶R1)、序列號86的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號87的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號88的輕鏈第一互補決定區(VL⑶R1)、序列號89的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號90的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ；
[0081](16)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號91的重鏈第一互補決定區(VH⑶R1)、序列號92的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號93的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號94的輕鏈第一互補決定區(VL⑶R1)、序列號95的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號96的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ；
[0082](17)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號97的重鏈第一互補決定區(VH⑶R1)、序列號98的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號99的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號100的輕鏈第一互補決定區(VL⑶Rl )、序列號101的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號102的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)構成的⑶R、或者與其實質上相同的CDR ；
[0083](18)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號103的重鏈第一互補決定區(VH⑶R1)、序列號104的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號105的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號106的輕鏈第一互補決定區(VL⑶Rl )、序列號107的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號108的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ；
[0084](19)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號109的重鏈第一互補決定區(VH⑶R1)、序列號110的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號111的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號112的輕鏈第一互補決定區(VL⑶Rl )、序列號113的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號114的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ；[0085](20)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號115的重鏈第一互補決定區(VH⑶R1)、序列號116的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號117的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號118的輕鏈第一互補決定區(VL⑶Rl )、序列號119的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號120的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R。
[0086]根據本發明，還提供一種與人TfR進行特異性反應的抗體，在序列號I~3、7~9、13 ~15、19 ~21、25 ~27、31 ~33、37 ~39、43 ~45、49 ~51、55 ~57、61 ~63、67 ~69,73 ~75、79 ~81、85 ~87、91 ~93、97 ~99、103 ~105、109 ~111、115 ~117、4 ~
6、10 ~12、16 ~18、22 ~24、28 ~30、34 ~36、40 ~42、46 ~48、52 ~54、58 ~60、64 ~66,70 ~72、76 ~78、82 ~84、88 ~90、94 ~96、100 ~102、106 ~108、112 ~114、118 ~120中的任意的氨基酸序列中，缺失、添加、取代和/或插入了 I個或者數個氨基酸，活性與權利要求1~3中任一項所述的抗體等同。
[0087]優選，本發明的抗體為人抗體或者人化抗體。
[0088]優選，本發明的抗體為選自Fab、Fab’、F(ab’)2、單鏈抗體(scFv)、二聚體化V區(Diabody)、二硫化物穩定化V區(dsFv)和包含⑶R的肽的抗體片段。
[0089]根據本發明，提供一種編碼上述本發明的抗體的DNA。
[0090]根據本發明，提供一種含有上述本發明的DNA的重組載體。
[0091]根據本發明，提供一種將上述本發明的重組載體導入宿主細胞得到的轉化株。
[0092]根據本發明，提 供一種本發明的抗體的制造方法，包括將上述本發明的轉化株在培養基中培養，在培養物中產生蓄積本發明的抗體，從培養物中收集抗體的工序。
[0093]根據本發明，提供一種具有上述本發明的抗體的醫藥組合物。
[0094]根據本發明，提供一種在抗體上結合有細胞損傷性物質的上述醫藥組合物。
[0095]優選，細胞損傷性物質為藥劑、毒素或者放射性物質。
[0096]優選，本發明的醫藥組合物作為抗癌劑使用。
[0097]優選，癌為實體癌或者血液癌。
[0098]優選，實體癌為肺癌、大腸癌、胃癌、膀胱癌、胰腺癌、前列腺癌、肝癌、宮頸癌、子宮癌、卵巢癌、乳腺癌、頭頸癌、皮膚癌。
[0099]優選，血液癌為白血病、淋巴瘤、骨髓瘤。
[0100]更優選，血液癌為成人T細胞白血病(ATL)。
[0101]根據本發明，還提供一種抑制或者治療癌的方法，包括向對象者投與上述本發明的抗體的步驟。
[0102]根據本發明，還提供上述本發明的抗體在醫藥組合物或者抗癌劑的制造中的使用。
[0103]發明的效果
[0104]本發明的抗體是特異性識別人TfR，阻礙表達TfR的癌細胞的生存或增殖的完全的人抗體。人抗體在投與人時，回避了抗體的抗原性，不會產生HAHA，因此，更能夠發揮副作用小的高抗腫瘤作用。即，本發明的抗人TfR抗體作為抗癌劑是有用的。
【專利附圖】

【附圖說明】[0105]圖1為用免疫沉降和蛋白質印跡法確認抗TfR噬菌體抗體的TfR結合性的結果。
[0106]圖2表示人抗體基因。人抗體基因輕鏈λ的J鏈(junction)基因和C鏈(constant)基因為5個J、C依次并列存在，J4-CL4和J5-CL5為假基因，沒有功能。
[0107]圖3表示TfRIgG抗體和癌細胞株的流式細胞分析結果。
[0108]圖4表示各個癌模型中TfRIgG抗體的抗腫瘤效果。
[0109]圖5表示ATL模型中TfR006IgG抗體的抗腫瘤效果。
[0110]圖6表示來自臨床的肺癌組織樣品與TfR006噬菌體抗體的反應性。
【具體實施方式】[0111]接著，對本發明進行更詳細說明。
[0112]定義和一般技術
[0113]本說明書中，除了另外定義，涉及本發明使用的科學技術用語包含本領域的技術人員通常理解的意義。通常，本說明書中記載的細胞和組織培養、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學、蛋白質和核酸化學以及雜交相關使用的命名法及其技術，為本【技術領域】公知的技術而通常使用。
[0114]本發明的方法和技術通常在沒有其他表示時，為該【技術領域】公知的現有方法，按照本說明書整體中引用的各種一般性參考文獻和更具體的參考文獻所記載的實施。
[0115]TfR
[0116]人轉鐵蛋白受體(TfR)為人第三號染色體編碼的760個氨基酸構成的一次跨膜蛋白(序列號125)。該蛋白質作為CD71抗原已知，涉及細胞對鐵的獲取，涉及細胞的增殖。本發明的TfR在結構上沒有特別限定，包括單體、多聚體、細胞膜上表達的intact form、細胞外區域構成的可溶化form、truncted form、基因的突變、缺失等引起的mutation form、磷酸化等引起的接受了翻譯后修飾的form等，全部表示人TfR。
[0117]講行反應和反應件
[0118]本說明書中，“進行反應”和“反應性”沒有特別限定，指相同的意思。即，抗體識別抗原。該抗原可以為在細胞膜上表達的intact TfR,也可以為truncted form或可溶化form。此外，也可以為保持立體結構的TfR、改性TfR。作為研究反應性的方法，可以舉出流式細胞分析方法(FACS)、酶聯免疫吸附測定法(ELISA)、western-blot、熒光微量測定技術(FMAT)表面等離子共振(BIAcore)、免疫染色、免疫沉降等。
[0119]流式細胞分析中使用的抗體，可以為用FITC等熒光物質、生物素等標記的抗體，也可以為未標記的抗體。根據使用的抗體有無標記、其種類不同，使用熒光標記抗生物素蛋白、熒光標記抗人免疫球蛋白抗體等。反應性通過下述方法進行評價:在檢體中加入充分量的抗TfR抗體(通常最終濃度為0.01~10 μ g/mL),進行陰性對照抗體、陽性對照抗體的反應性比較。
[0120]
[0121]本說明書中，根據需要，按照習慣使用以下的簡記(括號內)。
[0122]重鏈(H鏈)、輕鏈(L鏈)、重鏈可變區(VH)、輕鏈可變區(VL)、互補決定區(CDR)、第一互補決定區(⑶R1)、第二互補決定區(⑶R2)、第三互補決定區(⑶R3)、重鏈的第一互補決定區(VH⑶Rl )、重鏈的第二互補決定區(VH⑶R2)、重鏈的第三互補決定區(VH⑶R3)、輕鏈的第一互補決定區(VL⑶Rl )、輕鏈的第二互補決定區(VL⑶R2)、輕鏈的第三互補決定區(VL CDR3)。
[0123]本說明書中，“抗體”與免疫球蛋白同義，能夠按照在本【技術領域】中通常已知的那樣理解。具體來說，抗體這個用語不受制作抗體的任意特定方法的限定。例如，抗體可以為重組抗體、單克隆抗體和多克隆抗體。
[0124]本說明書中，“人抗體”是指可變區和恒定區的序列為人序列的任意的抗體。該用語包含具有來自人基因的序列，但是例如考慮到免疫原性的降低、親和性的增大，進行可能引起不希望的折疊的半胱氨酸的去除等變化的抗體。該用語還包含能夠實施人細胞非特有的糖基化、通過在非人細胞中重組而制作的那樣的抗體。這些抗體能夠以各種方式制備。
[0125]本說明書中，“人化抗體”的用語是指來自非人的抗體，非人種的抗體序列中特征性的氨基酸殘基取代與人抗體對應位置確認的殘基。該“人化”工序，其結果得到的抗體會降低人的免疫原性。可以理解為使用在本【技術領域】中公知的技術能夠將來自非人的抗體人化。例如可以參考Winter等，Immunol.Today 14:43-46 (1993)。作為對象的抗體，能夠通過與對應于CH1、CH2、CH3、鉸鏈區、和/或框架區的人序列取代的重組DNA技術工程制作。例如，參照W092/02190、以及美國專利第5530101號、第5585089號、第5693761號、第5693792號、第5714350號、和第5777085號。本說明書中，“人化抗體”在其意義范圍內，包括嵌合抗體和CDR移植抗體。
[0126]本發明的抗體 可變區中，框架區(FR)的序列，只要是相對于對應的抗原的特異性結合性沒有實質性影響，就沒有特別限定。優選使用人抗體的FR區域，但是，也能夠使用人以外的動物種(例如小鼠或大鼠)的FR區域。
[0127]本說明書中，“噬菌體抗體”的用語是指通過噬菌體產生的scFv抗體。即，包括VH和VL氨基酸序列的抗體片段。該片段除了作為Linker的氨基酸以外，還包括作為標簽的
氨基酸序列。
[0128]本發明的抗體的一個實施方式，包括可變區和恒定區(例如IgG型抗體)。恒定區的序列沒有特別限定。例如，能夠使用公知的人抗體的恒定區。作為人抗體的重鏈恒定區(CH)，只要屬于人免疫球蛋白(以下，記為hlg)就可以，適宜為hlgG類型，業能夠使用屬于hlgG類型的hlgGl、hIgG2、GhIgG3、hIgG4這樣的亞型的任意種類。此外，作為輕鏈恒定區(CL)，只要為屬于hlg的即可，能夠使用K簇或λ簇的物質。此外，也能夠使用人以外的動物種(例如小鼠或大鼠)的恒定區。
[0129]本發明的抗體中使用的FR或恒定區的氨基酸序列，可以原樣使用作為來源的原始的FR或者恒定區的氨基酸序列原型，也可以使用缺失、添加、取代和/或插入I或者數個(例如，I到8個、優選I到5個、更優選I到3個、特別優選I或2個)的氨基酸的不同氨基酸序列。
[0130]本發明中，“活性與權利要求所述的抗體等同”是指對人TfR的結合活性和/或抗腫瘤活性等同。作為結合活性，是指識別抗原。該抗原可以是細胞膜中表達的intact TfR,也可以是truncted form、可溶化form。另外,可以是保持立體結構的TfR,也可以是改性的TfR。例如，作為研究結合活性的方法，可以舉出流式細胞分析方法(FACS)、酶結合免疫吸附測定法(ELISA)、western-blot、熒光微量測定技術(FMAT)表面等離子共振(BLAcore)等。作為抗腫瘤活性，意味著阻礙腫瘤細胞的增殖或生存的活性。該腫瘤細胞的增殖或生存為in vitro或in vivo。例如，in vitro中,可以舉出使腫瘤細胞的數量減少的活性、阻礙腫瘤細胞的數量增加的活性、引 起腫瘤細胞的細胞死亡的活性、抗體依賴性細胞損傷活性(ADCC:Antibody-dependent cellular cytotoxicity)、補體依賴性細胞損傷活性(CDC:Complement-dependent cytotoxicity)等。In vivo中，可以舉出使腫瘤重量或者體積減少的活性、抑制腫瘤重量或者體積增加的活性、促進由其他藥劑引起的腫瘤重量或者體積的減少的活性、抑制腫瘤細胞引起的個體死亡的活性等。
[0131]作為In vivo的動物模型，可以舉出在裸鼠等免疫缺陷小鼠中移植來自人癌組織的培養細胞株的異種移植模型、將培養小鼠癌細胞株移植到具有正常的免疫系統的野生型小鼠中的同系移植模型等。
[0132]異種移植模型能夠通過將人癌細胞株移植到裸鼠等免疫缺陷小鼠的皮下、皮內、腹腔內、靜脈內等各種部位而制作。
[0133]本發明中，“等同”是指不是必須是同程度的活性，活性可以增強，或者，只要具有活性，活性減少也可以。作為活性減少的抗體，例如，可以舉出具有與原先的抗體比較30%以上的活性、優選50%以上的活性、更優選80%以上的活性、更優選90%以上的活性、特別優選95%以上的活性的抗體。
[0134]上述抗體，只要具有對TfR等同的結合活性，或者，只要具有等同的抗腫瘤活性，則也可以在可變區(⑶R序列和/或FR序列)的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入I或者數個氨基酸。在氨基酸序列中，缺失、添加、取代和/或插入I或者數個(例如，I到8個、優選I到5個、更優選I到3個、特別優選I或2個)的氨基酸，制備具有對TfR的結合活性和/或抗腫瘤活性的抗體的氨基酸序列的本領域技術人員熟知的方法，已知有向蛋白質導入突變的方法。例如，如果為本領域的技術人員，則能夠使用部位特異性突變誘導法(Hashimoto-Gotoh, T, Mizuno, T, Ogasahara, Y, an DNA kagawa, Μ.(1995)An oligodeoxyribonucIeotide-directed dual amber method for site-directed mutagenesis.Gene152,271-275、Zollerj MJj and Smith, M.(1983)Oligonucleotide-directed mutagenesisof DNA fragments cloned into M13 vectors.Methods Enzymol.100，468-500、Kramer，WjDrutsajV，Jansen, HWj Kramer, B，PflugfelderjM，and Fritz,HJ (1984)The gapped duplex DNA approach to oligonucleotide-directed mutationconstruction.Nucleic Acids Res.12，9441-9456、Kramer Wj and Fritz HJ(1987)Oligonucleotide-directed construction of mutations via gapped duplex DNAMethods.Enzymol.154，350-367、Kunkelj TA (1985) Rapid and efficient site-specificmutagenesis without phenotypic selection.Proc Natl Acad Sci U S A.82，488-492)等，在具有對TfR結合活性和/或抗腫瘤活性的抗體的氨基酸序列中導入適宜突變，由此能夠制備與具有對TfR結合活性和/或抗腫瘤活性的抗體功能等同的突變體。
[0135]這樣，在可變區，I或者多個氨基酸突變，具有對TfR結合活性和/或抗腫瘤活性的抗體也包含在本發明的抗體中。
[0136]本說明書中“與其實質上相同的CDR”的用語是指構成如上所述I或者多個氨基酸缺失、添加、取代和/或插入，具有對TfR的結合活性和/或抗腫瘤活性的抗體的CDR。
[0137]本發明的抗體不受其來源的限定，可以為人抗體、小鼠抗體、大鼠抗體等來自任意動物的抗體。或者，也可以為嵌合體化抗體、人化抗體等。本發明的抗體的優選實施方式為人抗體。
[0138]本發明的抗體根據后述的產生抗體的細胞或宿主或者通過精制方法不同，氨基酸序列、分子量、等電點或糖鏈的有無或形態等可以不同。所得到的抗體只要是具有與本發明的抗體等同的活性，就包含在本發明中。例如，本發明記載的氨基酸序列接受翻譯后修飾的情況也包含在本發明中。還有，對已知的翻譯后修飾以外的部分進行的翻譯后修飾，只要是具有與本發明的抗體等同的活性，則也包含在本發明中。此外，本發明的抗體在原核細胞例如大腸桿菌中表達的情況下，在本來的抗體的氨基酸序列的N末端添加甲硫氨酸殘基。本發明的抗體也包含這樣的抗體。對已知的翻譯后修飾以外的部位進行翻譯后修飾，只要是具有與本發明的抗體等同的活性，則也包含在本發明中。
[0139]抗體的制作
[0140](I)通過噬菌體展示文庫得到與抗原的反應的scFv
[0141]本發明的抗體的獲取能夠按照本【技術領域】已知的任意方法進行制備。例如，使用噬菌體展示技術，能夠提供包含對TfR的親和性各異的抗體的儲藏庫的文庫。接著，篩選這些文庫，能夠鑒定并分離針對TfR的抗體。優選噬菌體文庫為下述文庫，即，使用將從人B細胞分離的mRNA制備的人VL和VHcDNA產生的scFv噬菌體展示文庫。制備這樣的文庫并進行篩選的方法是本【技術領域】已知的。人TfR作為抗原，從顯示篩選反應性的噬菌體克隆回收遺傳物質。分析選擇的噬菌體的基因，就能夠決定編碼與抗原結合的人抗體的可變區的VH和VL的DNA序列。使用該scFv序列，將scFv進行IgG化，就能夠得到人抗體。
[0142](2) scFv的IgG化(人抗體的制作)
[0143]制作H鏈和L鏈的表達載體，使其在宿主細胞中表達，回收分泌的上清并進行精制，由此得到人抗體。也可以通過在同一載體上表達VH和VL(串聯型)而獲取人抗體。這些方法是公知的，能夠參考 W092/01047、W092/20791、W093/06213、W093/11236、W093/19172、W095/01438、TO95/15388、TO97/10354 等。
[0144]具體來說，將編碼VH的DNA與編碼重鏈恒定區(CH1、CH2和CH3)的其他的DNA分子連結，由此能夠取得完全長重鏈基因。人重鏈恒定區基因的序列為本【技術領域】已知的(例如，Kabat, E.A.(1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest,第五版，U.S.Department of Health and Human Services>NIH Publication N0.91-3242),包含這些區域的DNA片段通過標準的PCR擴增能夠得到。重鏈恒定區為IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD的恒定區即可,最優選為IgGl或IgG2的恒定區。IgGl的恒定區序列可以為Gm (I)、Gm (2)、Gm (3)、Gm (17)等已知在不同個體間產生的任意的各種等位基因或異型。這些異型相當于IgGl恒定區中天然存在的氨基酸取代。
[0145]將編碼VL的DNA與編碼輕鏈恒定區的其他的DNA分子連結，由此能夠取得完全長輕鏈基因(以及Fab輕鏈基因)。人輕鏈恒定區基因的序列為本【技術領域】已知的(例如，Kabat, E.A.(1991) Sequencesof Proteins of Immunological Interest,第五版，U.S.Department of Health and Human Services、NIH Publication N0.91-3242),包含這些區域的DNA片段通過標準的PCR擴增能夠得到。輕鏈恒定區可以為K或者λ的恒定區。K恒定區可以為Inv (I)、Inv (2)或Inv (3)等已知在不同個體間產生的任意的各種等位基因。λ恒定區可以為來自3個λ基因的任一個。
[0146]將上述那樣得到的編碼H鏈或L鏈的DNA插入表達載體中，由此制作表達載體，使其在宿主細胞中表達，回收并精制分泌上清，由此能夠得到人抗體。表達載體可以舉出質粒、逆轉錄酶病毒、腺病毒、腺相關病毒(AAV)、花椰菜花葉病毒、煙草花葉病毒等植物病毒、粘粒、YAC、來自EBV的附加體等。表達載體和表達調節序列，以與使用的表達用宿主細胞適合的方式選擇。抗體輕鏈基因和抗體重鏈基因能夠各自插入載體中，也能夠二者的基因插入相同的表達載體中。抗體基因通過標準的方法(例如，抗體基因片段上的互補的限制性內切酶部位和載體的連接、或者限制性內切酶部位不存在的情況下平滑末端連接)插入表達載體中。
[0147]適宜的載體，如上所述，是以能夠容易插入、表達任意的VH或VL序列的方式而工程學制作的具有適當的限制性內切酶部位的功能完全的編碼人CH或CL免疫球蛋白序列的載體。這樣的載體，通常，在插入的J區域中的剪接供給部位和人C區域中先行的剪接接受部位之間，或者存在于人CH外顯子內的剪接區域中引發剪接。多腺苷酸化和轉錄結束在編碼區域下游的天然染色體部位發生。重組表達載體也能夠編碼促進來自宿主細胞的抗體鏈的分泌的信號肽。抗體鏈基因能夠以使信號肽在框架內與免疫球蛋白鏈的氨基末端連結的方式在載體中被克隆。信號肽可以為免疫球蛋白信號肽，或者也可以為異種性信號肽(即，來自非免疫球蛋白的信號肽)。
[0148]本發明的抗體的表達載體，除了抗體基因和控制序列，還可以具有控制載體在宿主細胞中的復制的序列(例如，復制起點)、選擇標記基因等序列。選擇標記基因促進導入載體的宿主細胞的選擇。例如，通常，選擇標記基因賦予導入載體的宿主細胞對G418、潮霉素、甲氨蝶呤等藥物的抗性。優選的選擇標記基因例如有二氫葉酸還原酶(DHFR)基因(dhfr-宿主細胞中甲氨蝶呤選擇/擴增同時使用)、新霉素磷酸轉移酶基因(G418選擇用)和谷氨酸合成酶基因。
[0149]用以上方法制作的抗體基因表達載體對宿主細胞進行轉化。作為宿主細胞，可以為細菌、酵母、動物細胞、昆蟲細胞、植物細胞等、只要能夠產生本發明的抗體的細胞即可，優選為動物細胞。作為動物細胞，可以舉出中國倉鼠卵巢細胞CHO/dhfr (_)細胞 CH0/DG44 細胞、來自猴的細胞 COS 細胞(A.ffright&S.L.Morrison, J.1mmunol.160，3393-3402 (1998))、SP2/0 (小鼠骨髓瘤)(K.Motmans et al., Eur.J.CancerPrev.5,512-5199 (1996), R.P.Junghans et al.,Cancer Res.50,1495-1502(1990))等。此外，轉化能夠適宜地使用脂質體(R.W.Malone et al., Proc.Natl.Acad.Sci, USA86，6007 (1989)，P.L.Feigner et al.，Proc.Natl.Acad.Sci, USA 84，7413 (1987))、電穿孔法、憐酸 1丐法(F.L.Graham&A.J.van der Eb, Virology 52, 456-467 (1973) )、DEAE-Dextran法等。
[0150]培養轉化體之后，從轉化體的細胞內或培養液分離人抗體。抗體的分離、精制能夠適宜地組合利用離心分離、硫酸銨分級分離、鹽析、超濾、親和色譜法、離子交換色譜法、凝膠過濾色譜法等方法。
[0151]抗體片段
[0152]基于本發明的抗體或者基于編碼本發明的抗體的基因的序列信息，能夠制作抗體片段。作為抗體片段，可以舉出Fab> Fab，、F(ab，) 2、scFv、dsFv抗體。
[0153]Fab為在半胱氨酸存在下由木瓜蛋白酶消化IgG得到的由L鏈與H鏈片段構成的分子量約5萬的片段，其中，該H鏈片段由H鏈可變區以及CHl區域和鉸鏈部的一部分構成。本發明中，能夠通過木瓜蛋白酶消化上述抗體而得到。將編碼上述抗體的H鏈的一部分和L鏈的DNA重組到適當的載體中，使用該載體轉化而得到轉化體，使用該轉化體也能夠制備Fab0
[0154]Fab’為通過切斷后述的F(ab’)2的H鏈間的二硫鍵而得到的分子量約5萬的片段。本發明中，能夠通過用胃蛋白酶消化上述抗體，使用還原劑切斷二硫鍵而得到。此外，與Fab同樣，也能夠使用編碼Fab’的DNA以基因工程的方法制備。
[0155]F(ab’)2為通過胃蛋白酶消化IgG得到的由L鏈和H鏈片段構成的片段(Fab’)通過二硫鍵結合的分子量約10萬的片段，其中，該H鏈片段由H鏈可變區、CHl區域和鉸鏈的一部分構成。本發明中，能夠通過胃蛋白酶消化上述抗體而得到。此外，與Fab同樣，也能夠使用編碼F(ab’ )2的DNA以基因工程的方法制備。
[0156]scFv為將由H鏈可變區和L鏈可變區構成的Fv用肽接頭連接一個鏈的C末端和另一個鏈的N末端的單鏈化的抗體片段。作為肽接頭，例如能夠使用柔軟性高的(GGGGS) 3等。例如，使用編碼上述抗體的H鏈可變區和L鏈可變區的DNA和編碼肽接頭的DNA，構建編碼scFv抗體的DNA，將其重組入適當的載體中，使用該載體轉化得到轉化體，由該轉化體能夠制備scFv。
[0157]dsFv是在H鏈可變區和L鏈可變區的適當位置導入Cys殘基，通過二硫鍵將H鏈可變區和L鏈可變區結合，由此穩定化的Fv片段。各鏈中的Cys殘基的導入位置根據由分子模擬預測的立體結構來決定。本發明中，例如，預測由上述抗體的H鏈可變區和L鏈可變區的氨基酸序列構成的立體結構，構建基于這樣的預測而導入突變的分別編碼H鏈可變區和L鏈可變區的DNA，將其重組入適當的載體中，使用該載體轉化得到轉化體，由該轉化體能夠制備dsFvo
[0158]此外,通過使用適當的接頭連結scFv抗體、dcFv抗體等,或者融合鏈霉親和素,能夠將抗體片段多量化。
[0159]醫藥纟目合物
[0160]根據本發明，提供包含本發明的抗體的醫藥組合物。本發明的一個實施方式為癌的治療，但不限于此。由TfR高表達引起的癌以外的疾病也包括在本發明的范圍內。作為更優選的實施方式，癌為實體癌(例如，肺癌、大腸癌、胃癌、膀胱癌、胰腺癌、前列腺癌、肝癌、宮頸癌、子宮癌、卵巢癌、乳腺癌、頭頸癌、皮膚癌等)、或血液癌(例如，白血病、淋巴腫、骨髓瘤等)。本發明的其他的優選實施方式中，癌為成人T細胞白血病(ATL)。
[0161]作為本發明的醫藥組合物的一種實施方式，將本發明的抗體作為有效成分利用。這是利用抗體的細胞增殖抑制活性、細胞死亡誘導活性、ADCC活性、CDC活性等，發揮抗腫瘤效果。抗體可以僅具有一個上述的活性， 也可以同時具有多種活性。即，裸抗體為醫藥組合物的有效成分。
[0162]在另一各實施方式中，本發明的抗體作為癌治療藥，能夠用于對癌組織特異性打革巴的癌細胞定向破壞療法(missile therapy)。即，通過投與結合有對癌細胞損傷的物質的抗體，使其向癌部位特異性移動，達到治療效果和降低副作用的治療方法。
[0163]損傷癌細胞的物質可以舉出藥劑、毒素或放射性物質等細胞損傷性物質。細胞損傷性物質與抗體的結合能夠用本領域技術人員公知的方法進行(Clin Cancer Res.2004Jul I;10 (13):4538-49)。[0164]與抗體結合的藥劑能夠使用對癌細胞造成損傷的公知的物質。作為例子，例如，可以舉出Duocarmycin、Duocarmycin的類似物和誘導劑、CC-1065、CBI為主要成分的Duocarmycin模擬劑、MCBI為主要成分的Duocarmycin類似物、CCBI為主要成分的Duocarmycin類似物、多柔比星、多柔比星結合物、嗎啉代多柔比星、氰基嗎啉代多柔比星、多拉斯他汀、多拉斯他汀-10、考布他汀、卡奇霉素(calicheamicin)、美坦辛、美坦辛類似物、DM1、DM2、DM3、DM4、DM1、澳瑞他汀E (auristatin E)、澳瑞他汀 EB (AEB)、澳瑞他汀 EFP(AEFP)單甲基澳瑞他汀(MMAE)、單甲基澳瑞他汀F (MMAF)、5-苯甲酰戊酸AE酯(AEVB)、tubulysin、雙薩拉唑(Disorazole)、埃博霉素、紫杉醇、多西紫杉醇、SN-38、托泊替康、根霉素、棘霉素、秋水仙堿、長春堿、長春地辛、雌莫司汀、西馬多丁、艾榴塞洛素、甲氨蝶呤、甲基葉酸、二氯甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、6-巰嘌呤、阿糖胞苷、米爾法蘭、洛諾生、洛諾西丁、放線菌素、道諾霉素、道諾霉素結合物、絲裂霉素C、絲裂霉素A、洋紅霉素、氨基蝶呤、他利霉素、鬼臼毒素、鬼日毒素衍生物、依托泊苷、依托泊苷磷酸鹽、長春新堿、紫杉醇、紫衫酯維甲酸、酪酸、N8-乙酰亞精胺、喜樹堿等，但不限于這些。
[0165]抗體和藥劑的結合可以通過其自身具有的連接基等直接結合，也可以通過接頭或其他物質間接結合。
[0166]作為與藥劑直接結合時的連接基，例如可以例舉通過使用SH基的二硫鍵或馬來酰亞胺的結合。例如，還原抗體的Fe區域的分子內二硫鍵與藥劑的二硫鍵，將二者通過二硫鍵結合。此外，還有通過馬來酰亞胺的方法。此外，作為別的方法，還有以基因工程學的方法在抗體內導入半胱氨酸的方法。
[0167]抗體和藥劑通過其他物質(接頭)間接結合也可以。接頭優選具有I種或者2種以上的與抗體或藥劑或兩者反應的官能團。作為官能團的例子，可以舉出氨基、羧基、巰基、馬來酰亞胺基、吡啶基等。
[0168]作為接頭的例子，可以舉出N-琥珀酰亞胺4-(馬來酰亞胺甲基)環己烷羧酸酯(SMCC)、N-琥珀酰亞胺-4- (N-馬來酰亞胺甲基)-環己烷-1-羧基-(6-酰胺己酸酯)(LC-SMCC)、K -馬來酰亞胺^^一烷酸N-琥珀酰亞胺酯(KMUA)、Y -馬來酰亞胺丁酸N-琥珀酰亞胺酯(GMBS)、ε -馬來酰亞胺己酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(EMCS)、間馬來酰亞胺苯甲酰-N-羥基琥珀酰亞胺酯(MBS)、N- ( α-馬來酰亞胺乙酰氧基)-琥珀酰亞胺酯(AMAS)、琥珀酰亞胺基-6- ( β -馬來酰亞胺丙酰胺)己酸酯(SMPH)、N-琥珀酰亞胺基-4-(對馬來酰亞胺苯基)-丁酯(SMPB)、和N-(對馬來酰亞胺苯基)異氰酸酯(PMPI)、6-馬來酰亞胺己酰基(MC)、馬來酰亞胺丙酰基(MP)、對氨基苯氧基羧基(PAB)、N-琥珀酰亞胺基4- (2-吡啶基硫代)戊酸酯(SPP)和N-琥珀酰亞胺(4-碘-乙酰基)氨基安息香酸酯(SIAB)等，但不限于這些。此外，該接頭，例如，也可以為纈氨酸-瓜氨酸(Val-Cit)、丙氨酸-苯丙氨酸(ala-phe)這樣的肽接頭，也可以分別組合上述舉出的接頭使用。
[0169]關于藥劑和抗體的結合方法，例如，可以基于Cancer Research; 68 (22) 9280 (2008),Nature Biotechnology;26(8)925(2008) > Bio Conjugate Chemistry;19、1673 (2008)、Cancer Research ；68 (15)6300 (2008)或者特表2008-516896號公報等記載的方法進行。
[0170]作為毒素，能夠舉出以化學或者基因工程學方法與抗體結合的所謂的免疫毒素。作為毒素，例如可以舉出白喉桿菌毒素A鏈、假單胞桿菌毒素、蓖麻蛋白鏈、無糖鏈蓖麻蛋白 A 鏈 Gelonin Saporin 等。[0171]利用的放射性物質能夠使用本領域技術人員公知的物質。例如，釔90 (90Y)M186 (186Re)、錸 188 (188Re)、銅 67 (67Cu)'鐵 59 (59Fe)'鍶 89 (89Sr)、金 198 (198Au)、汞 203( 203Hg)'鉛 212 (212Pb)'鏑 165 (165Dy)'釕 103 (103Ru)'秘 212 (212Bi)'秘 213 (213Bi)'欽 166(166Ho)、釤 153 (153Sm)'镥 177 (177Lu)等。優選 90Y、153Sm、177Lu。
[0172]抗體和放射性物質的結合能夠通過本領域技術人員公知的方法進行(BioconjugChem.1994 Mar-Apr;5 (2):101-4.)
[0173]使用與含有放射性同位素的化合物結合的抗體的癌治療能夠通過本領域技術人員公知的方法進行(Bioconjug Chem.1998Nov_Dec;9 (6):773-82)。具體來說，最初向患者少量投與結合有含有放射性同位素的化合物的抗體，進行全身的閃爍照相術。確認與正常組織的細胞的抗體的結合少，與癌細胞的抗體的結合多，再大量投與結合有含有放射性同位素的化合物的抗體。
[0174]包含本發明的抗人TfR抗體的醫藥組合物的制劑也在本發明的范圍內。這樣的制劑，優選，除了包含抗體的醫藥組合物，還包含生理學上可接受的稀釋劑或載體，也可以為與其他的抗體或抗癌劑這樣的其他的藥劑的混合物。適宜的載體可以包括生理鹽水、磷酸緩沖生理鹽水、磷酸緩沖生理鹽水葡萄糖液、和緩沖生理鹽水，但是不限于此。或者，也可以將抗體冷凍干燥(freeze dry),需要時如上所述添加緩沖水溶液而再構成使用。作為給藥形態，可以舉出片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、糖漿劑等口服給藥、或者注射劑(皮下注釋、靜脈注射、肌肉注射、腹腔內注射等)、經皮、經粘膜、經鼻、經肺、栓劑等非經口給藥。本發明的醫藥組合物的制劑可以單獨給藥也可以與其他藥劑并用。
[0175]本發明的醫藥組合物的給藥量，根據癥狀、年齡、體重等而不同，但是通常，口服給藥時，作為抗體的量，相對于成人I日約0.01mg~1000mg, I次或者分數次給藥。非口服給藥時，I次約0.01mg~1000mg通過皮下注射、肌肉注射或者靜脈注射給藥。
[0176]通過以下的實施例更詳細的說明本發明，但是本發明不受實施例的限定。
[0177]實施例
[0178]實施例1:使用癌細胞株的噬菌體抗體篩選
[0179](I)與癌細胞結合的噬菌體抗體的篩選(肝癌細胞株H印G2)
[0180]在15cm 的培養皿中培養 HepG2 細胞，通過 2mg/mLcollagenasel/cellsissociation Buffer (Gibco BRL)從培養皿剝離。回收細胞,用冷卻的PBS清洗后，與IXlO13Cfu的人抗體噬菌體文庫(參照日本特開2005-185281號公報、W02008/007648號公報、W02006/090750號公報)，添加反應液(1%BSA、0.l%NaN3、MEM)使得最終容積為1.6mL，在4°C下緩慢旋轉4小時進行反應。反應結束后，將反應液分為兩份，分別添加0.6mL的有機溶劑(dibutyl phthalate cycloheximide 9:1),通過微離心機進行 2 分鐘離心(3000rpm)。除去上清液，用0.7mL的1%的BSA/MEM懸浮沉淀在管底的細胞，再添加0.7mL的有機溶劑。同樣通過離心除去上清液，在0.3mL的PBS中懸浮細胞，用液氮冷凍。
[0181]在37°C下解凍被冷凍的細胞，用I小時感染20mL的大腸桿菌DH12S (0D0.5)。將噬菌體感染的大腸桿菌放入600mL的2 X YTGA培養基(2 XXYT、200 μ g/mL ampicisulfate、l%Glucose)中，在30°C培養一晚。其后，取出10mL，放入200mL的2XYTA培養基(2XYT、200 μ g/mL ampicisulfate)中，在37°C培養1.5小時。放入I X IO11輔助噬菌體K07，再在37°C下培養 I 小時。添加 800mL 的 2X YTGAK 培養基(2X YT、200 μ g/mL ampicisulfate、0.05%Glucose、50 μ g/mLkanamycin)，在 30DC培養一晚。進行 10 分鐘離心(8000rpm)，由此回收上清液。在回收的上清液中加入200mL的PEG液(20%polyetyleneglycol 6000、2.5MNaCl )，充分攪拌，之后，進行10分鐘離心(SOOOrpm),由此沉淀噬菌體。將其在IOmL的PBS中懸浮，將其作為第一輪篩選的噬菌體。
[0182]接著，進行第二輪篩選。混合2X107培養細胞和IXlOici第一輪篩選的噬菌體，添加反應液(1%BSA、0.l%NaN3、MEM)，使得最終容積為0.8mL。其后，進行與上述第一輪篩選同樣的方法，取得第二輪篩選的噬菌體。
[0183]第三輪篩選使用I X IO9第二輪篩選的噬菌體，與上述同樣進行。
[0184](2)噬菌體抗體的分析
[0185]回收第三輪篩選得到的噬菌體，通過已知方法分析DNA序列，排出保持有缺陷區域的不完全抗體或序列重復的抗體，取得具有獨立的抗體序列的噬菌體抗體(參考專利第4870348)。
[0186]通過同樣的方法，使用下述表1所示的21種癌細胞，進行了與癌抗原反應的噬菌體抗體的篩選。其結果，如表1所示，獲取了具有獨立序列的噬菌體抗體1863個。
[0187][表1]
[0188]
【權利要求】
1.一種與人TfR進行特異性反應的抗體，其特征在于: 作為重鏈第一互補決定區(VH⑶R1)、重鏈第二互補決定區(VHCDR2)、重鏈第三互補決定區(VH CDR3)分別包含序列號I~3、7~9、13~15、19~21、25~27、31~33、37~39.43~45、49 ~51、55 ~57、61 ~63、67 ~69、73 ~75、79 ~81、85 ~87、91 ~93、97 ~99、103~105、109~111、115~117中的任意的氨基酸序列。
2.一種與人TfR進行特異性反應的抗體，其特征在于: 作為重鏈第一互補決定區(VH⑶R1)、重鏈第二互補決定區(VHCDR2)、重鏈第三互補決定區(VH CDR3)分別包含序列號I~3、7~9、13~15,19~21,25~27,31~33,37~39.43~45、49 ~51、55 ~57、61 ~63、67 ~69、73 ~75、79 ~81、85 ~87、91 ~93、97 ~99、103~105、109~111、115~117中的任意的氨基酸序列，作為輕鏈第一互補決定區(VL⑶R1)、輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)分別包含序列號4 ~6、10 ~12、16 ~18、22 ~24、28 ~30、34 ~36、40 ~42、46 ~48、52 ~54、58 ~60、64 ~66、70 ~72、76 ~78、82 ~84、88 ~90、94 ~96、100 ~102、106 ~108、112 ~114、118~120中的任意的氨基酸序列。
3.一種與人TfR進行特異性反應的抗體，其特征在于，選自下述(I)到(20)的抗體: (1)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號I的重鏈第一互補決定區(VH⑶Rl )、序列號2的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號3的重鏈第三互補決定區(VHCDR3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號4的輕鏈第一互補決定區(VL⑶R1)、序列號5的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號6的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ； (2)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號7的重鏈第一互補決定區(VH⑶R1)、序列號8的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號9的重鏈第三互補決定區(VHCDR3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號10的輕鏈第一互補決定區(VL⑶R1)、序列號11的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號12的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ； (3)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號13的重鏈第一互補決定區(VH⑶Rl )、序列號14的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號15的重鏈第三互補決定區(VHCDR3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號16的輕鏈第一互補決定區(VL⑶Rl )、序列號17的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號18的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ； (4)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號19的重鏈第一互補決定區(VH⑶Rl )、序列號20的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號21的重鏈第三互補決定區(VHCDR3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號22的輕鏈第一互補決定區(VL⑶Rl )、序列號23的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號24的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ； (5)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號25的重鏈第一互補決定區(VH⑶Rl )、序列號26的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號27的重鏈第三互補決定區(VHCDR3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號28的輕鏈第一互補決定區(VL⑶Rl )、序列號29的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號30的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ； (6)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號31的重鏈第一互補決定區(VH⑶Rl )、序列號32的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號33的重鏈第三互補決定區(VHCDR3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號34的輕鏈第一互補決定區(VL⑶Rl )、序列號35的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號36的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ； (7)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號37的重鏈第一互補決定區(VH⑶Rl )、序列號38的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號39的重鏈第三互補決定區(VHCDR3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號40的輕鏈第一互補決定區(VL⑶Rl )、序列號41的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號42的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ； (8)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號43的重鏈第一互補決定區(VH⑶Rl )、序列號44的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號45的重鏈第三互補決定區(VHCDR3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號46的輕鏈第一互補決定區(VL⑶Rl )、序列號47的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號48的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ； (9)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號49的重鏈第一互補決定區(VH⑶Rl )、序列號50的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號51的重鏈第三互補決定區(VHCDR3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號52的輕鏈第一互補決定區(VL⑶Rl )、序列號53的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號54的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ； (10)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號55的重鏈第一互補決定區(VH⑶Rl `)、序列號56的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號57的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號58的輕鏈第一互補決定區(VL⑶Rl )、序列號59的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號60的輕鏈第三互補決定區(VIXDR3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ； (11)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號61的重鏈第一互補決定區(VH⑶Rl )、序列號62的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號63的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號64的輕鏈第一互補決定區(VL⑶Rl )、序列號65的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號66的輕鏈第三互補決定區(VIXDR3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ； (12)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號67的重鏈第一互補決定區(VH⑶Rl )、序列號68的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號69的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號70的輕鏈第一互補決定區(VL⑶Rl )、序列號71的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號72的輕鏈第三互補決定區(VIXDR3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ； (13)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號73的重鏈第一互補決定區(VH⑶Rl )、序列號74的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號75的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號76的輕鏈第一互補決定區(VL⑶Rl )、序列號77的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號78的輕鏈第三互補決定區(VIXDR3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ； (14)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號79的重鏈第一互補決定區(VH⑶Rl )、序列號80的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號81的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號82的輕鏈第一互補決定區(VL⑶Rl )、序列號83的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號84的輕鏈第三互補決定區(VIXDR3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ； (15)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號85的重鏈第一互補決定區(VH⑶Rl )、序列號86的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號87的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號88的輕鏈第一互補決定區(VL⑶Rl )、序列號89的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號90的輕鏈第三互補決定區(VIXDR3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ； (16)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號91的重鏈第一互補決定區(VH⑶Rl )、序列號92的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號93的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號94的輕鏈第一互補決定區(VL⑶Rl )、序列號95的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號96的輕鏈第三互補決定區(VIXDR3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ； (17)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號97的重鏈第一互補決定區(VH⑶Rl )、序列號98的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號99的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號100的輕鏈第一互補決定區(VL⑶Rl )、序列號101的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號102的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)構成的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ； (18)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號103的重鏈第一互補決定區(VH⑶R1)、序列號104的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號105的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號106的輕鏈第一互補決定區(VL⑶R1)、序列號107的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號108的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ； (19)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號109的重鏈第一互補決定區(VH⑶R1)、序列號110的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號111的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號112的輕鏈第一互補決定區(VL⑶R1)、序列號113的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號114的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R ； (20)具有重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體，其中，重鏈可變區具有包含序列號115的重鏈第一互補決定區(VH⑶R1)、序列號116的重鏈第二互補決定區(VH⑶R2)、序列號117的重鏈第三互補決定區(VH⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R，輕鏈可變區具有包含序列號118的輕鏈第一互補決定區(VL⑶R1)、序列號119的輕鏈第二互補決定區(VL⑶R2)、序列號120的輕鏈第三互補決定區(VL⑶R3)的⑶R、或者與其實質上相同的⑶R。
4.一種與人TfR進行特異性反應的抗體，其特征在于: 在序列號I~3、7~9、13~15、19~21、25~27、31~33、37~39、43~45、49~`51,55 ~57、61 ~63、67 ~69、73 ~75、79 ~81、85 ~87、91 ~93、97 ~99、103 ~105、`109 ~111、115 ~117、4 ~6、10 ~12、16 ~18、22 ~24、28 ~30、34 ~36、40 ~42、46 ~`48,52 ~54、58 ~60、64 ~66、70 ~72、76 ~78、82 ~84、88 ~90、94 ~96、100 ~102、`106~108、112~114、118~120中的任意的氨基酸序列中，缺失、添加、取代和/或插入了I個或者數個氨基酸，活性與權利要求1~3中任一項所述的抗體等同。
5.如權利要求1~4中任一項所述的抗體,其特征在于: 抗體為人抗體或者人化抗體。
6.如權利要求1~5中任一項所述的抗體,其特征在于: 抗體為選自Fab、Fab’、F (ab，)2、單鏈抗體(scFv)、二聚體化V區(Diabody)、二硫化物穩定化V區(dsFv)和包含⑶R的肽的抗體片段。
7.編碼權利要求1~6中任一項所述的抗體的DNA。
8.含有權利要求7所述的DNA的重組載體。
9.將權利要求8所述的重組載體導入宿主細胞得到的轉化株。
10.一種抗體的制造方法，用于制造權利要求1~6中任一項所述的抗體,所述制造方法的特征在于: 包括將權利要求9所述的轉化株在培養基中培養，在培養物中產生蓄積權利要求1~6中任一項所述的抗體，從培養物中收集抗體的工序。
11.具有權利要求1~`6中任一項所述的抗體的醫藥組合物。
12.如權利要求11所述的醫藥組合物，其特征在于: 在抗體上結合有細胞損傷性物質。
13.如權利要求12所述的醫藥組合物，其特征在于: 細胞損傷性物質為藥劑、毒素或者放射性物質。
14.如權利要求11~13中任一項所述的醫藥組合物，其特征在于: 所述醫藥組合物作為抗癌劑使用。
15.如權利要求14所述的醫藥組合物，其特征在于: 癌為實體癌或者血液癌。
16.如權利要求14所述的醫藥組合物，其特征在于: 實體癌為肺癌、大腸癌、胃癌、膀胱癌、胰腺癌、前列腺癌、肝癌、宮頸癌、子宮癌、卵巢癌、乳腺癌、頭頸癌、皮膚癌。
17.如權利要求14所述的醫藥組合物，其特征在于: 血液癌為白血病、淋巴瘤、骨髓瘤。
18.如權利要求14所述的醫藥組合物，其特征在于: 血液癌為成人T細胞白血病(ATL)。
【文檔編號】A61K39/395GK103534272SQ201280022819
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2012年5月7日 優先權日:2011年5月9日
【發明者】黑澤良和, 森下和廣, 張黎臨, 黑澤仁, 見供克之, 須藤幸夫, 野村富美子, 鵜飼由范 申請人:株式會社英仙蛋白質科學, 國立大學法人宮崎大學