專利名稱：一種冬蟲夏草菌絲體固體發酵水提液在調節免疫功能方面的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種蟲草菌絲體發酵提取物的應用，具體來說是涉及一種冬蟲夏草(Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc.)菌絲體固體發酵水提液在調節免疫功能方面的應用。
背景技術：
近年來，研究開發具有免疫調節作用的天然藥物已成為國內外的關注熱點。蟲草作為一種滋補中藥，具有保肺益腎、止咳化痰、治陽痿遺精及腰膝酸痛等功效。冬蟲夏草作為蟲草中最重要的一類真菌，具有補腎益肺、調節神經內分泌、加強代謝、調節人體免疫力等作用和極高的商業價值而成為最名貴的生物藥物種類之一。在對冬蟲夏草免疫調節作用的研究中，已報道蟲草一方面可以促進免疫細胞的功能，經喂食冬蟲夏草菌絲體提取物后，與對照組相比，喂食小鼠的白細胞介素-12 (IL-12)、干擾素(IFN-R)表達和巨噬細胞的巨噬活性均提高，小鼠的存活率達到100% (見文獻1:Kuo C F，Chen C C，Luo Y H，et al.Cordyceps sinensis mycelium protects mice from group A streptococcalinfection.Journal of Medical Microbiology, 2005, 54:795-802.),同時能消除嗜熱鏈球菌外毒素B (SPE B)的這種降低人單核細胞U937的噬菌作用，提高U937細胞的噬菌活性(見文獻 2:Kuo C F, Chen C C, Lin C F, et al.Abrogation of streptococcal pyrogenicexotoxin B—mediated suppression of phagocytosis in U937cells by Cordycepssinensis mycelium via production of cytokines.Food and Chemical Toxicology,2007,45:278-285.);另一方面冬蟲夏草可抑制某些免疫細胞的增殖，如可以抑制系統性紅斑狼瘡大鼠淋巴結增生( 見文獻3:傅庭煥，林敬明.冬蟲夏草對系統性紅斑狼瘡模型大鼠的治療作用.中藥材，2001,24(9):658-659.)。另外，蟲草對免疫因子的合成和分泌也有影響，例如，給接種了 H22腫瘤細胞的小鼠腹腔注射冬蟲夏草無性型菌株的發酵物，結果顯示能顯著增強巨噬細胞的腫瘤壞死因子(TNF-A)表達和脾淋巴細胞的TNF-A和IFN-R mRNA表達，從而提高免疫細胞活性，抑制腫瘤生長(見文獻4:Zhang W Y，Li J，QiuS Q, et al.Effects of the exopolysaccharide fraction EPSF from a cultivatedCordyceps sinensis on immunocytes of H22tumor bearing mice.Fitoterapia,2008,79:168-173.)。冬蟲夏草還能激活小鼠的巨噬細胞，加強造血因子(CSF)的分泌，從而調節免疫系統的功能(見文獻5:Koh J H, Yu K ff, Slh H J, et al.Activation ofmacrophages and the intestinal immun-system by an orally administered decortionfrom cultured mycelia of Cordyceps sinensis.Bioscience Biotechnology andBiochemistry, 2002,66 (2):407-411.)。y射線輻射損傷小鼠在服用一定劑量的戴氏蟲草和粉被蟲草的發酵液后，其血清中溶血素水平恢復(見文獻6:劉杰麟，童宜英.戴氏蟲草和粉被蟲草菌絲體發酵液對放射損傷小鼠體液免疫的影響.貴州醫學院院報，1999，24(4):323-325.)。目前，市場上有多種具有免疫調節功能的蟲草保健品，如蟲草腎寶、天獅蟲草菌絲體膠囊等，但大多都是以深層發酵的方法來獲得菌絲體的，但利用其固體發酵水提液來開發免疫調節作用的產品尚未見到。
發明內容
本發明的目的在于開發出一種冬蟲夏草菌絲體固體發酵水提液在制備具有免疫調節功能的產品方面的應用。本發明用一種由野生冬蟲夏草(Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc.)子實體通過菌種收集、保藏與復壯，母種、一級液體種和二級生產種的制作，固體發酵物的制備、水提取等步驟，得到的冬蟲夏草菌絲體固體發酵水提液，對小鼠進行免疫調節功效實驗，實驗結果表明該冬蟲夏草菌絲體固體發酵水提液顯著增強免疫功能低下小鼠巨噬細胞吞噬功能，具有免疫調節作用，可用于制備具有免疫調節功能的產品，從而實現了本發明的目的。本發明所用的冬蟲夏草菌絲體固體發酵水提液，由包括以下步驟的方法制備得到:(I)將野生冬蟲夏草(Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc.)子實體進行組織分離，于冬蟲夏草斜面培養基上培養，獲得純菌株，并進行復壯，所述的冬蟲夏草斜面培養基按其總質量分數100%計，由葡萄糖1% 2%，蛋白胨0.5% 1%，麥芽浸出粉0.3% 0.5%，酵母浸膏0.3% 0.5%，瓊脂2%和余量的水組成；(2)將步驟(I)的純菌株接入無菌的冬蟲夏草斜面培養基中，10 15°C下，暗培養30 35天后，光照4 6天，選取轉色較快且菌絲生長整齊的菌種，作為母種，所述的冬蟲夏草斜面培養基組成與步驟(I)相同；(3)將母種經復壯挑選后接至無菌冬蟲夏草液體培養基中，振蕩培養10 20天，選取菌絲球大小均勻一致、直徑為2 3mm的菌種作為一級液體菌種，所述的冬蟲夏草液體培養基PH6.0 6.5，按其總質量分數100%計，由葡萄糖1% 2%，蛋白胨0.5% 1%，麥芽浸出粉0.3% 0.5%，酵母浸膏0.3% 0.5%和余量的水組成；(4)將步驟(3)得到的一級液體菌種接入冬蟲夏草液體培養基中進行培養，一級液體菌種體積是冬蟲夏草液體培養基體積的3% 10%，選取菌絲球大小均勻一致、直徑為2 3mm的菌種作為二級生產種，所述的冬蟲夏草液體培養基及培養方法與步驟(3)相同；(5)在無菌的環境下，將二級生產種用無菌水按體積比1:1 1.3稀釋后接入無菌的固體發酵培養基中，進行避光培養9 14天至菌絲長滿培養基后，進行光照培養，光強400 ΙΟΟΟΙχ，空氣相對濕度80% 90%，18 25°C，經7 12天后得到冬蟲夏草菌絲體固體發酵物，所述的固體發酵培養基是按Ikg大米和I 1.5L營養液的比例配制而成，所述的營養液PH6.0 6.5，按總質量分數100%，由葡萄糖1% 2%，蛋白胨0.5% 1%，麥芽浸出粉0.3% 0.5%，酵母浸膏0.3% 0.5%和余量的水組成；(6)將步驟(5)得到的冬蟲夏草菌絲體固體發酵物在40 60°C的溫度下烘干，粉碎，再加入10 50倍體積的蒸餾水，通過80 90°C的熱水回流提取I 3次，趁熱抽濾，合并濾液，濃縮至濾液體積的30% 50%，得到冬蟲夏草菌絲體固體發酵水提液。上述所用的麥芽提取粉和酵母浸膏都是市售品。步驟(I)所述的組織分離可采用常規的方法進行，步驟(I)和步驟(3)所述的復壯是為了防止菌株退化，可以采 用常規方法進行。
本發明的冬蟲夏草菌絲體固體發酵水取液可用于制備具有免疫調節功能的產品。本發明制備的冬蟲夏草菌絲體固體發酵水提液對小鼠進行免疫調節功效實驗，取經檢疫后的SPF級KM雄性小鼠作為實驗動物，隨機分為四組，即正常對照組、模型對照組、陽性對照組及發酵水提液處理組，以每組11只/籠，群養，自由進食飲水為條件進行實驗。除正常對照組外，其他組小鼠分別在實驗的第8、11、15、18、22、25、29天進行給藥造模，每次按0.02mL.g-1.bw^1腹腔注射2.5mg.mL—1環磷酰胺藥液，正常對照組腹腔注射等量生理鹽水，共注射7次。實驗期間，各組小鼠按0.02mL.g-1.bw-1.cf1灌胃給予相應樣品液，模型對照組給予等量蒸餾水。陽性對照組樣品液中含人參烏雞口服液，劑量為5mL -kg-1.d-1 ；發酵水提液處理組樣品液中含冬蟲夏草固體發酵水提液，劑量為1.5g -kg^1 ^cT1 ;每天I次，連續給藥34天。在第34天灌胃給藥Ih后，所有動物稱重完后經頸椎脫白處死，然后給每只動物腹腔注射6mLRPM1-1640培養基，制備小鼠腹腔巨噬細胞。涌流式細胞儀檢測并分析吞噬不同熒光微球的巨噬細胞的比例，以計算吞噬百分率。實驗結果表明冬蟲夏草菌絲體固體發酵水提液具有增強免疫功能低下小鼠巨噬細胞吞噬功能的作用，與模型對照組吞噬率(42.3%)相比，發酵水提液處理組的吞噬率(56.8%)顯著提高，效果強于陽性藥物烏雞口服液(陽性對照組吞噬率為56.0%)，且能將免疫功能低下小鼠的吞噬率調節到接近正常水平(正常對照組的吞噬率為57.3%)，因此冬蟲夏草菌絲體固體發酵水提物具有免疫調節作用，可用于制備具有免疫調節功能的產品。
具體實施例方式以下實施例是對本發明的進一步 說明，不是對本發明的限制。實施例1:將收集到的野生冬蟲夏草(Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc.)子實體通過常規方法進行組織分離，按0.3cmX0.5cm大小的量接于冬蟲夏草斜面培養基(按其總質量分數100%計，由葡萄糖1%，蛋白胨0.5%，麥芽浸出粉0.3%，酵母浸膏0.3%，瓊脂2%和余量的水組成)上培養，獲得純菌株，為防止菌株退化，按照常規方法(選取新鮮子實體，在無菌條件下進行組織分離，接種至冬蟲夏草斜面培養基上，置于15° C下，遮光培養5 7d。以出發菌株為對照，比較所得菌株的生長能力，主要觀察菌絲的生長速度、轉色速度和原基形成數量等情況。最后，對斜面生長情況較好的菌株進行試驗。)對菌種進行復壯。將原始菌株按0.3cmX0.5cm大小的量接入無菌的冬蟲夏草斜面培養基(按其總質量分數100%計，由葡萄糖1%，蛋白胨0.5%，麥芽浸出粉0.3%，酵母浸膏0.3%，瓊脂2%和余量的水組成)中，10°C下，暗培養30天后，光照4天，選取轉色較快且菌絲生長整齊的菌種，作為母種。取葡萄糖10g，蛋白胨5g，麥芽浸出粉3g，酵母浸膏3g，溶解于無菌水979g，調整PH至6.0，得到冬蟲夏草液體培養基。將母種經復壯挑選(選取新鮮子實體，在無菌條件下進行組織分離，接種至冬蟲夏草斜面培養基上，置于15° C下,遮光培養5 7d。以出發菌株為對照，比較所得菌株的生長能力，主要觀察菌絲的生長速度、轉色速度和原基形成數量等情況。最后，對斜面生長情況較好的菌株進行試驗。)后接至無菌冬蟲夏草液體培養基中，振蕩培養10天，選取菌絲球大小均勻一致、直徑為2mm的作為一級菌種。
將一級液體菌種3mL接入IOOmL冬蟲夏草液體培養基中，選取菌絲球大小均勻一致、直徑為2毫米的作為二級生產種，用于蟲草的固體發酵生產。將葡萄糖IOg,蛋白胨5g,麥芽浸出粉3g,酵母浸膏3g,無菌水979g混合,調節pH至6.0，得到營養液。將大米Ikg和營養液IL配制成固體發酵培養基，經高壓滅菌，冷卻后即可用于接種。在無菌室內，將二級生產種用無菌水按體積比1:1稀釋后接入無菌的固體發酵培養基中，每瓶接入17mL。再進行避光培養9天，待菌絲長滿培養基后，進行光照培養，光強4001x，空氣相對濕度80%，18°C，7天后得到冬蟲夏草菌絲體固體發酵物。將冬蟲夏草菌絲體固體發酵物在40°C的烘箱內烘干,并將其粉碎,再加入10倍體積的蒸餾水，通過80°C的熱水回流提取I次，趁熱抽濾，濃縮至濾液體積的30%，得到冬蟲夏草固體發酵水提液。取經檢疫后的SPF級KM雄性小鼠作為實驗動物，隨機分為四組，即正常對照組、模型對照組、陽性對照組及發酵水提液處理組，以每組11只/籠，群養，自由進食飲水為條件進行實驗。除正常對照組外，其他組小鼠分別在實驗的第8、11、15、18、22、25、29天進行給藥造模，每次按0.02mL.g—1.bw—1腹腔注射2.5mg.mL—1環磷酰胺藥液,正常對照組腹腔注射等量生理鹽水，共注射7次。實驗期間，各組小鼠按0.02mL.g-1.bw^1.cf1灌胃給予相應樣品液，模型對照組給予等量蒸餾水。陽性對照組樣品液中含人參烏雞口服液，劑量為5mL.kg—1.cf1 ;發酵水提液處理組樣品液中含實施例1的冬蟲夏草固體發酵水提液，劑量為1.5g.kg-1.cf1 ;每天I次，連續給藥34天。在第34天灌胃給藥Ih后，所有動物稱重完后經頸椎脫白處死，然后給每只動物腹 腔注射6mL RPM1-1640培養基，制備小鼠腹腔巨噬細胞。涌流式細胞儀檢測并分析吞噬不同熒光微球的巨噬細胞的比例，以計算吞噬百分率。實驗結果表明冬蟲夏草固體發酵物具有增強免疫功能低下小鼠巨噬細胞吞噬功能的作用，與模型對照組吞噬率(42.3%)相比，發酵水提液處理組的吞噬率(56.8%)顯著提高，效果強于陽性藥物烏雞口服液(陽性對照組吞噬率為56.0%)，且能將免疫功能低下小鼠的吞噬率調節到接近正常水平(正常對照組的吞噬率為57.3%)，因此冬蟲夏草菌絲體固體發酵水提液具有免疫調節作用。實施例2:將收集到的野生冬蟲夏草(Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc.)子實體通過常規方法進行組織分離，按0.3cmX0.5cm大小的量接于冬蟲夏草斜面培養基(按其總質量分數100%計，由葡萄糖1.5%，蛋白胨0.8%，麥芽浸出粉0.4%，酵母浸膏0.4%，瓊脂2%和余量的水組成)上培養，獲得純菌株，為防止菌株退化，按照實施例1的常規方法對菌種進行復壯。將原始菌株按0.3cmX0.5cm大小的量接入無菌的冬蟲夏草斜面培養基(按其總質量分數100%計，由葡萄糖1.5%，蛋白胨0.8%，麥芽浸出粉0.4%，酵母浸膏0.4%，瓊脂2%和余量的水組成)中，13°C下，暗培養33天后，光照5天，選取轉色較快且菌絲生長整齊的菌種，作為母種。取葡萄糖15g，蛋白胨Sg，麥芽浸出粉4g，酵母浸膏4g，溶解于無菌水969g，調整PH至6.3，得到冬蟲夏草液體培養基。將母種按照實施例1的常規方法復壯挑選后接至無菌冬蟲夏草液體培養基中，振蕩培養15天,選取菌絲球大小均勻一致、直徑為2mm的作為一級菌種。
將一級液體菌種7mL接入IOOmL冬蟲夏草液體培養基中，選取菌絲球大小均勻一致、直徑為2_的作為二級生產種，用于蟲草的固體發酵生產。將葡萄糖19.5g，蛋白胨10.4g，麥芽浸出粉5.2g，酵母浸膏5.2g，無菌水1259.7g混合，調節pH至6.3，得到營養液。將大米Ikg和營養液1.3L配制成固體發酵培養基，經高壓滅菌，冷卻后即可用于接種。在無菌室內，將二級生產種用無菌水按體積比1:1.2稀釋后接入無菌的固體發酵培養基中，每瓶接入19mL。再進行避光培養12天，待菌絲長滿培養基后，進行光照培養，光強7001x，空氣相對濕度85%，22°C，10天后得到冬蟲夏草菌絲體固體發酵物。
將冬蟲夏草菌絲體固體發酵物在50°C的烘箱內烘干，并將其粉碎，再加入30倍體積的蒸餾水，通過90°C的熱水回流提取2次，趁熱抽濾，濃縮至濾液體積的40%，得到冬蟲夏草固體發酵水提液。取經檢疫后的SPF級KM雄性小鼠作為實驗動物，隨機分為四組，即正常對照組、模型對照組、陽性對照組及發酵水提液處理組，以每組11只/籠，群養，自由進食飲水為條件進行實驗。除正常對照組外，其他組小鼠分別在實驗的第8、11、15、18、22、25、29天進行給藥造模，每次按0.02mL.g-1.bw^1腹腔注射2.5mg.mL—1環磷酰胺藥液，正常對照組腹腔注射等量生理鹽水，共注射7次。實驗期間，各組小鼠按0.02mL.g-1.bw^1.cf1灌胃給予相應樣品液，模型對照組給予等量蒸餾水。陽性對照組樣品液中含人參烏雞口服液，劑量為5mL kg—1 ^cT1 ;發酵水提液處理組樣品液中含實施例2的冬蟲夏草固體發酵水提液，劑量為2.0g -kg-1 -d-1 ;每天I次，連續給藥34天。在第34天灌胃給藥Ih后，所有動物稱重完后經頸椎脫白處死，然后給每只動物腹腔注射6mL RPM1-1640培養基，制備小鼠腹腔巨噬細胞。涌流式細胞儀檢測并分析吞噬不同熒光微球的巨噬細胞的比例，以計算吞噬百分率。實驗結果表明冬蟲夏草固體發酵水提液具有增強免疫功能低下小鼠巨噬細胞吞噬功能的作用，與模型對照組吞噬率(42.3%)相比，發酵水提液處理組的吞噬率(56.8%)顯著提高，效果強于陽性藥物烏雞口服液(陽性對照組吞噬率為56.0%)，且能將免疫功能低下小鼠的吞噬率調節到接近正常水平(正常對照組的吞噬率為57.3%)，因此冬蟲夏草菌絲體固體發酵水提物具有免疫調節作用。實施例3:將收集到的野生冬蟲夏草(Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc.)子實體通過常規方法進行組織分離，按0.3cmX0.5cm大小的量接于冬蟲夏草斜面培養基(按其總質量分數100%計，由葡萄糖2%，蛋白胨1%，麥芽浸出粉0.5%，酵母浸膏0.5%，瓊脂2%和余量的水組成)上培養，獲得純菌株，為防止菌株退化，按照實施例1常規方法對菌種進行復壯。將原始菌株按0.3cmX0.5cm大小的量接入無菌的冬蟲夏草斜面培養基(按其總質量分數100%計，由葡萄糖2%，蛋白胨1%，麥芽浸出粉0.5%，酵母浸膏0.5%，瓊脂2%和余量的水組成)中，15°C下，暗培養35天后，光照6天，選取轉色較快且菌絲生長整齊的菌種，作為母種。 取葡萄糖20g，蛋白胨10g，麥芽浸出粉5g，酵母浸膏5g，溶解于無菌水960g，調整PH至6.5，得到冬蟲夏草液體培養基。將母種按照實施例1常規方法復壯挑選后接至無菌冬蟲夏草液體培養基中，振蕩培養20天,選取菌絲球大小均勻一致、直徑為3mm的作為一級菌種。
將一級液體菌種IOmL接入IOOmL冬蟲夏草液體培養基中，選取菌絲球大小均勻一致、直徑為3_的作為二級生產種，用于蟲草的固體發酵生產。
將葡萄糖24g,蛋白胨12g,麥芽浸出粉6g,酵母浸膏6g,無菌水1152g混合,調節pH至6.5，得到營養液。將大米Ikg和營養液1.5L配制成固體發酵培養基，經高壓滅菌，冷卻后即可用于接種。在無菌室內，將二級生產種用無菌水按體積比1:1.3稀釋后接入無菌的固體發酵培養基中，每瓶接入22mL。再進行避光培養14天，待菌絲長滿培養基后，進行光照培養，光強ΙΟΟΟΙχ，空氣相對濕度90%，25°C，12天后得到冬蟲夏草菌絲體固體發酵物。將冬蟲夏草菌絲體固體發酵物在60°C的烘箱內烘干,并將其粉碎,再加入50倍體積的蒸餾水，通過90°C的熱水回流提取3次，趁熱抽濾，濃縮至濾液體積的50%，得到冬蟲夏草固體發酵水提液。取經檢疫后的SPF級KM雄性小鼠作為實驗動物，隨機分為四組，即正常對照組、模型對照組、陽性對照組及發酵水提液處理組，以每組11只/籠，群養，自由進食飲水為條件進行實驗。除正常對照組外，其他組小鼠分別在實驗的第8、11、15、18、22、25、29天進行給藥造模，每次按0.02mL.g-1.bw^1腹腔注射2.5mg.mL—1環磷酰胺藥液，正常對照組腹腔注射等量生理鹽水，共注射7次。實驗期間，各組小鼠按0.02mL.g-1.bw^1.cf1灌胃給予相應樣品液，模型對照組給予等量蒸餾水。陽性對照組樣品液中含人參烏雞口服液，劑量為5mL kg—1 ^cT1 ;發酵水提液處理組樣品液中含實施例3的冬蟲夏草固體發酵水提液，劑量為
2.5g -kg-1 -d-1 ;每天I次，連續給藥34天。在第34天灌胃給藥Ih后，所有動物稱重完后經頸椎脫白處死，然后給每只動物腹腔注射6mL RPM1-1640培養基，制備小鼠腹腔巨噬細胞。涌流式細胞儀檢測并分析吞噬不同熒光微球的巨噬細胞的比例，以計算吞噬百分率。實驗結果表明冬蟲夏草固體發酵水提液具有增強免疫功能低下小鼠巨噬細胞吞噬功能的作用，與模型對照組吞噬率(42.3%)相比，發酵水提液處理組的吞噬率(56.8%)顯著提高，效果強于陽性藥物烏雞口服液(陽性對照組吞噬率為56.0%)，且能將免疫功能低下小鼠的吞噬率調節到接近正常水平(正常對照組的吞噬率為57.3%)，因此冬蟲夏草菌絲體固體發酵水提物具有免疫調節作用。
權利要求
1.一種冬蟲夏草菌絲體固體發酵水提液在制備具有免疫調節功能的產品方面的應用，所述的冬蟲夏草菌絲體固體發酵水提液，由包括以下步驟的方法制備得到: (1)將野生冬蟲夏草(Cordycepssinensis (Berk.) Sacc.)子實體進行組織分離，于冬蟲夏草斜面培養基上培養，獲得純菌株，并進行復壯，所述的冬蟲夏草斜面培養基按其總質量分數100%計，由葡萄糖1% 2%，蛋白胨0.5% 1%，麥芽浸出粉·0.3% 0.5%，酵母浸膏··0.3% 0.5%，瓊脂2%和余量的水組成； (2)將步驟(I)的純菌株接入無菌的冬蟲夏草斜面培養基中，10 15°C下，暗培養30 ·35天后，光照4 6天，選取轉色較快且菌絲生長整齊的菌種，作為母種，所述的冬蟲夏草斜面培養基組成與步驟(I)相同； (3)將母種經復壯挑選后接至無菌冬蟲夏草液體培養基中，振蕩培養·10 20天，選取菌絲球大小均勻一致、直徑為2 3mm的菌種作為一級液體菌種，所述的冬蟲夏草液體培養基pH6.0 6.5，按其總質量分數100%計，由葡萄糖1% 2%，蛋白胨·0.5% 1%，麥芽浸出粉0.3% 0.5%，酵母浸膏0.3% 0.5%和余量的水組成； (4)將步驟(3)得到的一級液體菌種接入冬蟲夏草液體培養基中進行培養，一級液體菌種體積是冬蟲夏草液體培養基體積的3% 10%，選取菌絲球大小均勻一致、直徑為2 3mm的菌種作為二級生產種， 所述的冬蟲夏草液體培養基及培養方法與步驟(3)相同； (5)在無菌的環境下，將二級生產種用無菌水按體積比1:1 1.3稀釋后接入無菌的固體發酵培養基中，進行避光培養9 14天至菌絲長滿培養基后，進行光照培養，光強400 IOOOlx,空氣相對濕度80% 90%，18 25V’經7 12天后得到冬蟲夏草菌絲體固體發酵物，所述的固體發酵培養基是按Ikg大米和I 1.5L營養液的比例配制而成，所述的營養液pH6.0 6.5，按總質量分數100%，由葡萄糖1% 2%，蛋白胨·0.5% 1%，麥芽浸出粉·0.3% 0.5%，酵母浸膏0.3% 0.5%和余量的水組成； (6)將步驟(5)得到的冬蟲夏草菌絲體固體發酵物在40 60°C的溫度下烘干，粉碎，再加入10 50倍體積的蒸餾水，通過80 90°C的熱水回流提取I 3次，趁熱抽濾，合并濾液，濃縮至濾液體積的30% 50%，得到冬蟲夏草菌絲體固體發酵水提液。
全文摘要
本發明涉及一種冬蟲夏草菌絲體固體發酵水提液在制備具有免疫調節功能的產品方面的應用。本發明用一種由野生冬蟲夏草(Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.)子實體通過菌種收集、保藏與復壯，母種、一級液體種和二級生產種的制作，固體發酵物的制備、水提取等步驟，得到的冬蟲夏草菌絲體固體發酵水提液，對小鼠進行免疫調節功效實驗，實驗結果表明該冬蟲夏草菌絲體固體發酵水提液顯著增強免疫功能低下小鼠巨噬細胞吞噬功能，且能將免疫功能低下小鼠的吞噬率調節到接近正常水平，具有免疫調節作用，可用于制備具有免疫調節功能的產品。
文檔編號A61K36/068GK103191158SQ20131008052
公開日2013年7月10日 申請日期2013年3月13日 優先權日2013年3月13日
發明者閆文娟, 李泰輝 申請人:廣東省微生物研究所