樹突狀殺手細胞群組用于制備藥物的用途及其醫藥組合物的制作方法
【專利摘要】本發明提供一種樹突狀殺手細胞群組用于制備藥物的用途，上述藥物用以治療癌癥，其中樹突狀殺手細胞群組通過細胞激素放大培養而得，且上述細胞激素包含介白素15號。另外，包含上述樹突狀殺手細胞群組的一種治療癌癥的醫藥組合物也于本發明中同時揭露。
【專利說明】樹突狀殺手細胞群組用于制備藥物的用途及其醫藥組合物
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種治療癌癥的醫藥組合物，該醫藥組成物包含經細胞激素放大培養后的樹突狀殺手細胞群組，以及樹突狀殺手細胞用于制備藥物的用途，尤其是一種利用經細胞激素放大培養后的樹突狀殺手細胞群組來制備該治療癌癥的醫藥組合物。
【背景技術】
[0002]人體對外來異物具有辨識和啟動一連串反應的防御機轉，這防御系統就是免疫系統。免疫系統擁有不同作用的白血球及淋巴細胞、不同功能的蛋白質因子，如免疫球蛋白、介白質及細胞激素等，互相協調合作，形成人體的防御力。免疫反應依其特異性及記憶性的有無，分為先天性及后天性。先天性免疫系統包括可溶性化學因子、干擾素、補體系統、嗜中性淋巴球及巨噬細胞的吞噬作用和自然殺手細胞的毒殺作用等。后天性免疫系統包括體液免疫及細胞免疫，前者包括抗體生成系統，后者包括淋巴細胞、淋巴激素及免疫記憶系統。記憶的功能使免疫系統對已對付過的抗原，引發強而快速的次發反應，可將外來危害因子有效去除。
[0003]免疫反應對抗原會有不同反應是由于主要組織兼容復合物(MajorHistocompatibility Complex, MHC)的作用。外來抗原通常需要經過細胞處理與MHC分子結合后，才能被免疫系統所認知。因此MHC的類型與個人對特定因子的免疫力有關，是造成個體對疾病易感性的重要因素。人類的MHC又名人類白血球抗原(Human LeukocyteAntigen, HLA)。HLA可分為class 1、class II,為結構相似的醣蛋白，與抗原呈現功能有關。HLAclass I抗原表現于所有體細胞上，而class II只表現于巨噬細胞、B細胞及樹突狀細胞(Dendritic Cell, DC)的細胞表面上。
[0004]人體內有一種高 度分化的免疫細胞，叫做抗原呈現細胞(Antigen PresentingCells, APC)。抗原呈現細胞的功能是攝取、加工、處理外源性抗原并將加工后抗原呈現給T淋巴細胞，誘導T淋巴細胞進行增殖進而分化成效應細胞，產生免疫反應，以辨識并抵抗感染甚至癌癥細胞。樹突細胞(Dendritic cells, DCs)是目前所知的人體內功能最強大的抗原呈現細胞，因其成熟時伸出許多樹突樣或偽足樣突起而得名。DC的最大特點是能夠顯著刺激初始T細胞進行增殖，而其他的抗原呈現細胞，如巨噬細胞、B細胞僅能刺激已活化的或記憶性T細胞。因此DC是機體免疫反應的始動者,在免疫反應的誘導中具有獨特的地位。
[0005]另外，自然殺手細胞(Natural Killer cell, NK cell)也是一種在免疫反應中占有重要地位的細胞，其起源于淋巴前驅細胞，占人類血液中淋巴球的5~10%。NK細胞表面缺乏專一性的抗原受體，負責非專一性防御，可以胞殺腫瘤細胞和被病毒感染細胞。NK細胞表面雖然沒有抗原專一性受體，但其表面有許多其他的膜蛋白接受來自目標細胞的刺激，以調節NK細胞的活性，這些膜蛋白大致可分為“抑制性受體”和“活化性受體”。當NK細胞與細胞接觸后，獲得活化性受體的訊息，若與正常細胞接觸，則正常細胞表面的第一型MHC分子與抑制性受體結合，傳遞了 “抑制” NK細胞活性的訊息，故NK細胞不會被活化，以避免殺死正常細胞。若正常細胞被病毒感染或轉為腫瘤細胞后，第一型MHC分子的表現常會發生異常，因此當NK細胞接觸不正常細胞時，便無法獲得抑制性受體的訊息，于是NK細胞便活化進行胞殺作用。也就是說，只有“活化”訊息存在，且“抑制”的訊息異常或不存在時，NK細胞才會進行胞殺作用。
[0006]近年來，同時具有上述兩種DC與NK細胞功能的干擾素分泌型殺手樹突細胞逐漸受到關注。干擾素分泌型殺手樹突細胞可以從毒殺目標、抗原呈現到活化T細胞都由自己完成，也即干擾素分泌型殺手樹突細胞找到目標后會毒殺目標，接著把碎片吞噬后呈現抗原給T細胞，并活化T細胞。然而，正如同前文述及，干擾素分泌型殺手樹突細胞雖然在免疫反應中扮演了相當重要的角色，但因為干擾素分泌型殺手樹突細胞在體內的量非常稀少，如此低的細胞比率及數目，需要繁瑣的步驟來加以純化，也限制了針對干擾素分泌型殺手樹突細胞的進一步研究。不僅如此，目前的技術僅能從老鼠的脾臟、淋巴結或骨髓中分離出干擾素分泌型殺手樹突細胞，使得要實際將其應用于研究或臨床上都面臨了不小的瓶頸。
【發明內容】
[0007]有鑒于此，發明人經過長年的努力以及無數次的試驗，已成功篩選出了人類體內同時具有毒殺及抗原呈現功能的細胞，并定義該細胞為樹突狀殺手細胞(DendriticKiller Cell，DKC)，又稱為毒殺型樹突細胞(cytoDC)或干擾素分泌型殺手樹突細胞(IKDC)。然而，從發明人實驗的結果嚴格說來，樹突狀殺手細胞在人類周邊淋巴細胞中所占的比率低于0.01%。
[0008]因此，發明人設法將人體外圍血中微量的樹突狀殺手細胞擴增至200至400倍，并通過樹突狀殺手細胞的細胞毒殺的功能，將其進一步運用于毒殺腫瘤細胞及治療癌癥上。據此，本發明提供一種樹突狀殺手細胞群組用于制備藥物的用途，上述藥物用以治療癌癥，其中樹突狀殺手細胞群組系通過細胞激素放大培養而得。
[0009]在本發明的一`實施例中，其中該醫藥組成物的樹突狀殺手細胞群組，系通過下列步驟而通過細胞激素放大培養而得。首先，取得人類血液檢體的外圍血單核細胞群組。再來，加入有效量之細胞激素與外圍血單核細胞群組混合。接著，靜置一合適時間。最后，分離出樹突狀殺手細胞群組。上述細胞激素包含介白素15號。較佳地，上述細胞激素可進一步包含介白素12號。
[0010]在本發明的一實施例中，樹突狀殺手細胞群組用于制備藥物的用途，其中該藥物系投用于該癌癥病患體內以抑制該癌癥的腫瘤生長。較佳地，上述樹突狀殺手細胞群組用于制備藥物的用途系可與細胞可接受的緩沖液組合形成一醫藥組合物。
[0011]本發明的另一目的在于，提供一種治療癌癥的醫藥組合物，包含醫藥有效量的經細胞激素放大培養后的一樹突狀殺手細胞群組及其細胞可接受之緩沖液，其中該藥物系投用于該癌癥病患體內以抑制該癌癥的腫瘤生長。
[0012]在本發明的一實施例中，其中樹突狀殺手細胞群組包含細胞表面標記為CD 14T1LA-GTD3TD19T1LA-DR+CD56+ 的細胞。
[0013]在本發明的一實施例中，其中該細胞可接受的緩沖液可選擇自由磷酸緩沖溶液與生理食鹽水所組成的群組。
[0014]在本發明的一實施例中，其中本發明的醫藥組合物包含的樹突狀殺手細胞群組，將人體血液檢體中的樹突狀殺手細胞于生物體之外經由細胞激素放大培養而得。較佳地，人類血液檢體選擇自于一癌癥病患的外圍血。較佳地，上述細胞激素包含介白素15號。較佳地，上述細胞激素可進一步包含介白素12號。
[0015]在本發明的一實施例中，上述醫藥組合物可投用于該癌癥病患體內以抑制該癌癥病患的腫瘤生長，較佳的，上述醫藥組合物通過注射的方式進行傳輸。
[0016]由下文的說明，可更進一步了解本發明的特征及其優點，閱讀時請參考圖1至圖8B。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0017]圖1顯示本發明一實施例的制備醫藥組成中培養樹突狀殺手細胞的方法流程圖；
[0018]圖2A至圖2C顯示本發明一實施例中藉流式細胞儀測量及分選出經培養的樹突狀殺手細胞的結果；
[0019]圖3A至圖3C顯示本發明一實施例中藉流式細胞儀測量樹突狀殺手細胞與腫瘤細胞反應后細胞死亡的情況；
[0020]圖4A至圖4B顯示腫瘤細胞于加入本發明的醫藥組成物前后的情形；
[0021]圖5顯示腫瘤細胞加入本發明的醫藥組成物與對照組的細胞死亡比率；
[0022]圖6A至圖6B顯示卵巢癌細胞于加入本發明之醫藥組成物前后的情形；
[0023]圖7A至圖7B顯示經培養的樹突狀殺手細胞藉流式細胞儀測量其抗原呈現功能的結果;及
[0024]圖8A至圖SB顯示經活化的T細胞藉流式細胞儀測量其細胞內Y型干擾素的結果O
[0025]附圖編號說明
[0026]SlOO~S103 培養樹突狀殺手細胞群組的步驟
[0027]10 樹突狀殺手細胞
[0028]20 經流式細胞儀分選出的樹突狀殺手細胞
[0029]30 自然殺手細胞
[0030]40 腫瘤細胞
【具體實施方式】
[0031]名詞定義
[0032]除非有其他定義，所有在此所用的技術及科學詞匯，如同作為本發明所屬【技術領域】中具有一般技藝者一般性地了解具有相同意義。在此指稱的所有專利、申請案、公開申請案及其他應用，以及基因庫登錄號都完整以參考文獻被整合起來。若本章節提出的定義與其他專利、申請案、公開申請案及其他在此引用的參考文獻所提出的定義相反或不一致，以本章節提出的定義為主。
[0033]如本發明所使用，術語“樹突狀殺手細胞(DKC)”指同時具有細胞毒殺及抗原呈現功能的細胞。
[0034]如本發明所使用，符號“ + ”指細胞表面標記有表現于細胞表面，如利用流式細胞儀測得細胞表面標記量大于陰性控制組的表現量。
[0035]如本發明所使用，符號指細胞表面標記沒有表現于細胞表面，如利用流式細胞儀測得細胞表面標記量等于陰性控制組的表現量。
[0036]上述細胞表面標記的表現量，使用的流式細胞儀測量結果，但本發明不以此為限，若他人采相關技藝的替代技術，執行與本發明精神相同的利用，均為本發明的專利范圍中。
[0037]如本發明所使用，術語“介白素”指一組細胞因子，可以由多種細胞產生，人體免疫系統的功能在很大程度上依賴于介 白素。
[0038]實施例
[0039]為了更好地理解本發明的特點以及所能達到的效果，現結合附圖對本發明的較佳實施例進行詳細說明。
[0040]雖然下文詳述本發明多個實施例的配方及培養方法，但應了解本發明可提供許多可在多種具體背景下實施的實用發明概念。本文所述的具體實施例僅制備及使用本發明的具體方式的例示性說明且并不界定本發明的范圍。下文將定義若干術語以便于理解本發明。本文所定義之術語具有熟習與本發明相關領域之一般技術者通常理解之含義。例如“一(a、an)”及“該(the)”等術語非欲僅指單數實體，而是包括可使用具體實例說明的一般類別。本文術語用以闡述本發明的具體實施例，但除申請專利范圍所概述之外，其用法并不界定本發明。
[0041]另外，本發明所揭示的培養方法中的多個分離或篩選步驟均通過一流式細胞檢測技術(即流式細胞儀)來完成，并適合使用各一或多種流式細胞儀來利用不同群組的細胞擁有不同的細胞表面標記物區分篩選出目標細胞群組。流式細胞儀能夠以遠遠超過相關技藝任何其他單細胞分析技術的速度實施單細胞分析，相比于使用其他替代技術能夠較快速地分析統計學上有意義的數量的細胞，但本發明并不欲以此為限。較佳地，在一個實施例中，使用本領域技術人員常用的任一適宜試樣制備自動裝置或液體處理器的流式細胞儀。另外，使用單路雷射流式細胞儀或多路雷射流式細胞儀來實施分析步驟均可，本發明并不以此為限。
[0042]首先，事先說明的是，如前文所述發明人經過長年的努力以及無數次的試驗，已成功篩選出了人類體內同時具有毒殺及抗原呈現功能的細胞，并定義該細胞為樹突狀殺手細胞(DKC)，即具有包含有細胞表面標記為HLA-GXD14-CD19-CD3XD56+HLA-DR+的細胞。
[0043]承上述，既然能夠鑒定出人體外圍血中的樹突狀殺手細胞，后續請參考圖1，圖1進一步說明制備本發明的醫藥組成物的經放大培養的樹突狀殺手細胞群組，如何將人體外圍血中微量的樹突狀殺手細胞放大以利應用。
[0044]首先，如圖1所示，先取得人類血液檢體的外圍血單核細胞群組S100。接著，加入有效量細胞激素與外圍血單核細胞群組混合SIOI。其中，上述細胞激素包含有效量的介白素15號。再來，靜置一合適時間S102。最后，便可分離出本發明所需的樹突狀殺手細胞群組 S103。
[0045]較佳地，上述細胞激素更包含有效量的介白素12號。較佳地，上述所使用的介白素15號的濃度為10ng/mL,介白素12號的濃度為0.5~20ng/mL。
[0046]另外，上述步驟SlOO更包含下述步驟。首先，收集人類血液檢體，采集40ml，并分離出人類外圍血單核細胞(Peripheral blood mononuclear cell, PBMC),接著,去除外圍血單核細胞群組中的T細胞與B細胞。基本上，人類外圍血可分為五類細胞，如:單核細胞(Monocytic cells)、小細胞(small cells)、淋巴細胞(Lymphoid cells)、大細胞(largecells)與大顆粒細胞(large and granular cells),可先利用流式細胞儀選取其中一種或多種類型的細胞為基準來進行后續步驟。該細胞較佳地可包含單核細胞群組或淋巴細胞群組或上述兩者同時包含在內等，但本發明并不欲以此為限，后續將以單核細胞群組為例來說明。
[0047]另外，上述第一合適時間指將介白素15號與外圍血單核細胞群組均置入培養基后放置一段時間使其開始進行細胞擴增。較佳地，一合適時間可為培養后的第七天。
[0048]請參照圖2A至圖2C所示，圖2A為人類外圍血單核細胞去除T細胞與B細胞(⑶3_CD19_PBMC)，在培養前以流式細胞儀測量⑶56及HLA-DR的結果。圖2B為在細胞培養第7天以流式細胞儀測量CD56及HLA-DR的結果。圖2C為利用流式細胞儀分選出樹突狀殺手細胞群的結果。
[0049]如圖2A所示，在培養前同時具有自然殺手細胞表面標記(CD56+)與樹突細胞表面標記(HLA-DR+)的細胞數量很少，而圖中央如紡錘狀的細胞群30，為帶有⑶56但不具HLA-DR的自然殺手細胞。再請參考圖2B，經培養七天后，細胞會轉變成同時具有自然殺手細胞表面標記(⑶56+)與樹突細胞表面標記(HLA-DR+)的樹突狀殺手細胞(DKC) 10，不只原本的樹突狀殺手細胞會增生更會趨化自然殺手細胞轉變成樹突狀殺手細胞。最后，請參考圖2C，利用流式細胞儀分選出一細胞群(sorted cells)，該細胞表面標記為HLA-GXD14XD19TD3XD56+HLA-DR+ 的樹突狀殺手細胞群 20。
[0050]然而，必須說明的是，上述一合適時間為一較佳實驗手段，但本發明并不欲以此為限。也就是說，本發明也可于培養后第四天進行步驟S103，或于培養后第十天進行步驟S103。再者，于步驟S103之后，可再重復進行步驟SlOl~S103，也即再次收集未附著的細胞，重復上述步驟即可將樹突狀殺手細胞放大至所需數量。
[0051]再者，本發明中所進行的步驟均于生物體之外進行(ex vivo)，且其所收集的人類血液檢體均來自于癌癥病患，且此癌癥患者所罹患的癌癥可選擇自于鱗狀細胞癌、原位性與小葉性乳癌、肝癌、鼻咽 癌、肺癌、骨癌、胰臟癌、皮膚癌、頭部或頸部癌癥、皮膚或是眼內的惡性黑色素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門區域癌、胃癌、結腸癌、乳癌、睪丸癌、輸卵管癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、何杰金氏癥、非何杰金氏癥、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、腎上腺癌、軟組織癌、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、孩童硬腫瘤、淋巴癌、膀胱癌、腎臟或輸尿管癌、腎臟細胞癌、腎盂癌、中樞神經系統癌、原發性中樞神經系統淋巴瘤、腫瘤血管新生、脊軸腫瘤、腦干神經膠質瘤、腦垂體腺瘤、卡波希氏瘤、表皮樣癌和這些癌癥的任何組合及其散播或轉移形式所組成的群組。
[0052]承上述，經由上述步驟將人體外圍血中微量的樹突狀殺手細胞于體外放大培養，最后被分選出來的樹突狀殺手細胞群組20內的細胞數量為人類血液檢體中之樹突狀殺手細胞數量的200至400倍，此時樹突狀殺手細胞群組20便可進一步用以制備治療癌癥的藥物，也即樹突狀殺手細胞群組20系可與細胞可接受之緩沖液組合形成一醫藥組合物，以有效地應用于癌癥治療領域。較佳的，其中上述的醫藥組合的樹突狀殺手細胞群濃度為IO6細胞/毫升。
[0053]因此，本發明的另一目的便在于，提供一種治療癌癥的醫藥組合物，此種醫藥組合物包含醫藥有效量的經細胞激素放大培養后的樹突狀殺手細胞群組及其細胞可接受的緩沖液。其中，如前文所述，樹突狀殺手細胞群組為包含細胞表面標記為CD 14T1LA-GTD3TD19T1LA-DR+CD56+ 的細胞。
[0054]而且，上述經放大培養的樹突狀殺手細胞群組自癌癥病患的外圍血中于體外培養而得，后續此醫藥組合物可再投用于上述癌癥病患體內。也就是說，將從病患身上取得的樹突狀殺手細胞，經放大培養制備成醫藥組成物后，重新投入該病患體內以抑制腫瘤的生長，達到良好癌癥治療效果。至于，培養樹突狀殺手細胞群組的方法均已說明如前文，在此不再贅述。
[0055]較佳地，醫藥組合物可通過注射的方式進行傳輸，但本發明并不欲以任一方式為限。
[0056]為證明樹突狀殺手細胞群組可用于制備藥物的用途，且上述藥物可用以治療癌癥，發明人將經放大培養的樹突狀殺手細胞群組20與標靶腫瘤細胞K562 (Target Cell)40反應，并使用流式細胞儀測量腫瘤細胞死亡的情況，如圖3A至圖3C所示，圖式縱軸為細胞大小，橫軸為細胞內Capase6的量，Caspase6是細胞凋亡的重要蛋白質水解酶，若細胞內有Caspase6被染上就代表該細胞死亡或正在死亡，因此可通過測量腫瘤細胞內的Capase6得知與樹突狀殺手細胞群組反應后死亡的情況。
[0057]請看圖3A至圖3C，圖3A至圖3C的結果均會分成4區塊:圖上半之細胞為腫瘤細胞；圖下半之細胞為樹突狀殺手細胞；圖左半之細胞為細胞內沒有Caspase6被染上的細胞(活細胞)；圖右半之細胞為細胞內有Caspase6被染上的細胞(死細胞)。在本實施例中，上述目標細胞選自K562細胞株。此時，對應圖3A的是上述經培養放大后分選出的樹突狀殺手細胞20。而圖3B為尚未與任何其他細胞反應的腫瘤細胞40，因此如圖3B所示，所有腫瘤細胞均位于左上角且沒被染上caspasee，代表現階段的腫瘤細胞都是活細胞。
[0058]請參考圖3C，對應圖3C的是將樹突狀殺手細胞群與標靶腫瘤細胞共同培養，經40分鐘反應后的結果。如圖所示，將腫瘤細胞與樹突狀殺手細胞群組反應后，腫瘤細胞(圖上半部之細胞群)明顯右移，顯示約85%的細胞都染上caspasee，也即絕大多數的腫瘤細胞都死亡。然而，樹突狀殺手細胞群大多存活(圖下半部之細胞群)。顯示樹突狀殺手細胞具有良好的毒殺腫瘤細胞的效果。
[0059]請參考圖4A至圖4B，圖4A至圖4B顯示原始腫瘤細胞生長情況與加入樹突狀殺手細胞群共同培養40分鐘后的情形。如圖4A所示，實際上尚未加入樹突狀殺手細胞群組的腫瘤細胞在培養基上生長的很好，然而，在加入樹突狀殺手細胞群共同培養后，便可明顯看出腫瘤細胞大量死亡，如圖4B所示。
[0060]請參考圖5，圖5顯示腫瘤細胞加入濃度為IO6細胞/毫升之樹突狀殺手細胞群與對照組的細胞死亡比率。如圖所示，加入樹突狀殺手細胞群組的腫瘤細胞有超過一半都死亡，也即腫瘤細胞有超過半數被樹突狀殺手細胞群組毒殺而死亡。然而，對照組(僅加培養基)只有約不到10%的細胞死亡。
[0061]接著，請參考圖6A至圖6B，圖6A至圖6B顯示由癌癥病患取出的卵巢癌細胞加入濃度為IO6細胞/毫升的病患自體的樹突狀殺手細胞群組前后的情形。如圖6A所示，圖中將癌癥病患經手術取出的卵巢癌細胞放置于培養基中，在與樹突狀殺手細胞反應前，可以看出癌細胞呈現正常生長的狀態。接著，加入從該卵巢癌病患外圍血培養出的樹突狀殺手細胞群組，共同培養40分鐘，便可明顯看出腫瘤細胞與樹突狀殺手細胞群組反應后大量死亡,如圖6B所示。[0062]最后，為證明本案所使用的細胞群確實為樹突狀殺手細胞，即同時具有細胞毒殺及抗原呈現的功能(也即樹突細胞功能)，而上述樹突狀殺手細胞殺死腫瘤細胞已顯示其細胞毒殺的功能，而下述的試驗為證實其同時具有抗原呈現的功能。請參考圖7A至圖7B至圖8A至圖8B。
[0063]發明人從第一受試者的外圍血檢體中取出其單核細胞培養放大后分選出樹突狀殺手細胞，與從第二受試者外圍血篩選出的CD8+的T細胞反應，并使用流式細胞儀測量T細胞活化、分裂的情況。如圖7A至圖7B所示，本試驗系利用混合淋巴球反應，將第一受試者外圍血單核球細胞培養放大后分選出樹突狀殺手細胞，與第二受試者標記有CFSE的T細胞反應。第一受試者的樹突狀殺手細胞會活化第二受試者的T細胞。因此，通過測量第二受試者的T細胞被樹突狀殺手細胞活化分裂的情況，便可得知利用本案技術所培養放大并分選出的樹突狀殺手細胞是否具有抗原呈現的功能。上述CFSE是可量化細胞增生程度的染劑，可辨認7-10個連續細胞世代，細胞分裂期間每分裂一次，CFSE的相對熒光強度由一半減少，如此可用來測量細胞分裂的次數及相對應的比例。
[0064]圖7A是將第一受試者的經培養放大的樹突狀殺手細胞與第二受試者標記有CFSE的T細胞反應，并用流式細胞儀所測得的結果；圖中縱軸為細胞數量，橫軸為細胞內CFSE的熒光強度；如圖7A所示，經第一受試者的樹突狀殺手細胞與第二受試者的T細胞反應后，46.1%的T細胞被樹突狀殺手細胞活化進行細胞分裂。而第圖7B為僅有第二受試者的T細胞，為陰性控制對照組，其結果只有4.08%的T細胞被活化進行分裂。其結果證明了利用本發明的技術所放大培養分選出的樹突狀殺手細胞確實具有抗原呈現的功能。
[0065]最后，請參照圖8A至圖8B，圖8A至圖8B為圖7A至圖7B的結果，測量其反應后的T細胞其細胞內的Y型干擾素(IFN-Y)的結果。如圖8A所示，被樹突狀殺手細胞群活化而分裂的T細胞其多數T細胞內具有IFN-Y (圖左上的框格中)。而僅放置第二受試者的T細胞反應后的結果，如圖8B 所示，其T細胞內無測得IFN-Y。
[0066]綜上所述，樹突狀殺手細胞是一種同時擁有自然殺手細胞與樹突細胞功能的細胞，在人體內的量非常稀少，但其于免疫反應中扮演重要的角色。經由發明人所研究的放大培養、篩選與鑒定等技術可在體外從人類外圍血中將微量的樹突狀殺手細胞放大200至400倍，其具有用以制備治療癌癥的藥物的用途。也就是說，運用有效量的樹突狀殺手細胞群組及細胞可接受的緩沖液即可提供一治療癌癥的醫藥組合物，且此藥物可再重新投用于同一病患的體內以達到癌癥免疫療法的目的。
[0067]以上所述實施例只用于說明本發明的技術思想及特點，其目的是使本領域技術人員能夠了解本發明的內容并據以實施，但不應該以此限定本發明專利的范圍，所屬領域技術人員在不脫離本發明的精神和范圍之內，相對上述實施例進行等同變化和改進，都應該屬于本發明所保護的技術范圍。
【權利要求】
1.一種治療癌癥的醫藥組合物，其特征在于，包含醫藥有效量的經細胞激素放大培養后的一樹突狀殺手細胞群組及一細胞可接受的緩沖液。
2.根據權利要求1所述的醫藥組合物，其特征在于，該樹突狀殺手細胞群組包含細胞表面標記為 HLA-GTD14TD19XD3TD56+HLA-DR+ 的細胞。
3.根據權利要求1所述的醫藥組合物，其特征在于，該細胞可接受的緩沖液可選擇自由磷酸緩沖溶液與生理食鹽水所組成的群組。
4.根據權利要求1所述的醫藥組合物，其特征在于，該細胞激素為一有效量的介白素15號。
5.根據權利要求4所述的醫藥組合物，其特征在于，該細胞激素更包含有效量的另一細胞激素，且該另一細胞激素為介白素12號。
6.根據權利要求1所述的醫藥組合物，其特征在于，該樹突狀殺手細胞群組將人體血液檢體中的樹突狀殺手細胞于生物體之外經由該細胞激素放大培養而得。
7.根據權利要求6所述的醫藥組合物，其特征在于，該人類血液檢體系選擇自于一癌癥病患的外圍血。
8.根據權利要求7所述的醫藥組合物，其特征在于，其可投用于該癌癥病患體內以抑制該癌癥病患的腫瘤生長。
9.根據權利要求1所述的醫藥組合物，其特征在于，透注射方式進行傳輸。
10.一種樹突狀殺手細胞群組用于制備藥物的用途，其特征在于，該藥物用以治療癌癥，其中該樹突狀殺手細胞群組通過一細胞激素放大培養而得。
11.根據權利要求10所述的用途，其特征在于，該藥物投用于該癌癥病患體內以抑制該癌癥的腫瘤生長。
12.根據權利要求10所述的用途，其特征在于，該細胞激素為一有效量的介白素15號。
13.根據權利要求10所述的用途，其特征在于，該細胞激素更包含有效量的另一細胞激素，且該另一細胞激素為介白素12號。
14.根據權利要求10所述的用途，其特征在于，該經放大培養而得樹突狀殺手細胞群組可與一細胞可接受的緩沖液組合形成一醫藥組合物。
【文檔編號】A61K35/14GK103520208SQ201310240836
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2013年6月18日 優先權日:2012年7月5日
【發明者】李建謀 申請人:富禾生醫股份有限公司