治療和預防糖尿病及其眼并發癥的藥物組合物及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種治療和預防糖尿病及其眼并發癥的藥物組合物及其應用，該組合物由以下重量份的組分制成：炒槐米1-5重量份、黃芩1-5重量份、鹽知母1-5重量份、陳皮1-5重量份。該藥物組合物可通過醇提或水提方法制備得到。上述藥物組合物對于治療和預防糖尿病及其眼并發癥具有顯著性效果。
【專利說明】治療和預防糖尿病及其眼并發癥的藥物組合物及其應用
【技術領域】
[0001]本發明屬于中藥【技術領域】，具體涉及一種治療和預防糖尿病及其眼并發癥的藥物組合物及其應用。
【背景技術】
[0002]全世界每20個成人中就有一人為糖尿病患者,我國糖尿病患者3980萬人,位居世界第2，且發病率不斷提高。
[0003]糖尿病致死及致殘的主要原因并非高血糖本身，而是其并發癥。其中眼部并發癥已成為成人致盲的首要原因。病程10年以上的糖尿病患者眼部并發癥發病率高達60%以上。
[0004]目前西藥降糖藥物作用途徑單一，長期使用降糖效果下降但無法同時兼治并發癥；糖尿病患者眼部并發癥手術治療具有一定風險；目前治療并發癥藥物如羥苯磺酸鈣、和血明目片無顯著降糖效果。所以治療和預防糖尿病及其眼并發癥的藥物的該類藥物研發具有實際意義
[0005]中藥復方具有多組分、多靶點的特點，開發在降血糖的同時治療糖尿病眼并發癥的復方具有可能性和空間。
【發明內容】
[0006]本發明的目的是提供一種能有效治療和預防糖尿病及其眼并發癥的藥物組合物。
[0007]本發明的另一目的是提供上`述藥物組合物的制備方法。
[0008]本發明的目的是通過以下方式實現的:
[0009]一種能有效治療和預防糖尿病及其眼并發癥的藥物組合物，該組合物由以下重量份的組分制成:
[0010]炒槐米1-5份、黃芩1-5份、鹽知母1-5份、陳皮1-5份。
[0011]該組合物優選由以下重量份的組分制成:
[0012]炒槐米1-3份、黃岑1-3份、鹽知母1-3份、陳皮1-3份。
[0013]該組合物進一步優選由以下重量份的組分制成:
[0014]炒槐米1份、黃岑2份、鹽知母3份、陳皮1份；
[0015]炒槐米2份、黃岑3份、鹽知母1份、陳皮1份；
[0016]炒槐米3份、黃岑1份、鹽知母2份、陳皮1份；
[0017]炒槐米1份、黃岑2份、鹽知母3份、陳皮2份；
[0018]炒槐米2份、黃岑3份、鹽知母1份、陳皮2份；
[0019]炒槐米3份、黃岑1份、鹽知母2份、陳皮2份；
[0020]炒槐米1份、黃岑2份、鹽知母3份、陳皮3份；
[0021]炒槐米2份、黃岑3份、鹽知母1份、陳皮3份；
[0022]炒槐米3份、黃岑1份、鹽知母2份、陳皮3份；[0023]炒槐米1份、黃芩1份、鹽知母1份、陳皮1份；
[0024]炒槐米1份、黃芩1份、鹽知母1份、陳皮2份；
[0025]炒槐米1份、黃芩1份、鹽知母1份、陳皮3份；
[0026]炒槐米2份、黃芩2份、鹽知母2份、陳皮1份；
[0027]炒槐米2份、黃芩2份、鹽知母2份、陳皮3份；
[0028]炒槐米3份、黃芩3份、鹽知母3份、陳皮2份；
[0029]炒槐米3份、黃岑3份、鹽知母3份、陳皮1份。
[0030]該組合物最優選由以下重量份的組分制成:炒槐米1份、黃芩2份、鹽知母3份、陳皮1份。
[0031]所述的組合 物與藥學上可接受的載體制成制劑。所述的制劑可以為口服液、丸劑、片劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑、滴丸劑或注射劑。
[0032]上述組合物可通過醇提方法制備得到，具體的制備方法包括以下步驟:稱取炒槐米，黃芩，鹽知母和陳皮，加藥材總重8-12倍量濃度為10%-90%的乙醇加熱回流提取1-3次，每次提取1-3小時，過濾，合并濾液，濃縮。優選采用的乙醇的質量濃度為60%-70%。
[0033]上述組合物也可以通過水提方法制備得到，具體的制備方法包括以下步驟:稱取炒槐米，黃芩，鹽知母和陳皮，加藥材總重8-12倍量水，加熱提取1-3次，每次提取0.5-1小時,過濾，合并濾液,濃縮。
[0034]本發明藥物組合物可在制備治療或預防糖尿病及其眼并發癥的藥物中的應用。所述的糖尿病引起的眼并發癥為視網膜病變或白內障。
[0035]本發明使用的槐米為豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花蕾。功能涼血止血，清肝瀉火。炒槐米為用文火微炒而入藥，減緩苦寒之性，能增強涼血止血的功效。鹽知母為取知母片置鍋中用文火微炒，噴淋鹽水，炒干取出，放涼。(每知母片100斤，用鹽2斤8兩加適量開水化開澄清)。主治早泄。舌紅，苔薄，脈細而數者。陳皮，常剝成數瓣，基部相連，有的呈不規則的片狀，厚l_4mm。味苦、辛、溫，理氣健脾，燥濕化痰。黃芩(Scutellariabaicalensis Georgi ),本名“岑”,別名山茶根、土金茶根，因草色黃而有俗名“黃岑”。為唇形科植物，以根入藥，味苦、性寒，能清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎，有清熱燥濕，涼血安胎，解毒功效。發明人綜合上述原料藥材的優勢，結合現代新藥研究手段，研制出能有效治療和預防糖尿病及其眼并發癥的藥物組合物，該藥物組合物還具有使用安全、起效快的特點。
[0036]與現有技術比較本發明的有益效果:本發明具有顯著的降低血糖及治療糖尿病視網膜病變和白內障的作用；與陽性對照藥二甲雙胍、羥苯磺酸鈣及和血明目片相比總體藥效具有優效性；該組方同時具有組方創新性和活性創新性；其降糖機理與增加胰島素分泌量和增加胰島素敏感性有關；其治療糖尿病視網膜病變和白內障病變的機理與抗氧化、抑制山梨醇通路、PKC通路及AGEs通路有關。
[0037]以下通過具體試驗例對上述效果進行進一步說明:
[0038]試驗例1.HepG2細胞胰島素抵抗模型實驗
[0039]治療和預防糖尿病及其眼并發癥的藥物組合物由炒槐米、黃芩、鹽知母、陳皮4味藥物組成。四種藥物可以在1-5:1-5:1-5:1-5的重量比例范圍內任意組合，現列出藥物組合物的比例關系和序號供體外抑制α糖苷酶實驗、胰島素增敏實驗、促進胰島素分泌實驗和修復高微血管內皮損傷實驗以及糖尿病大鼠模型實驗中具體使用。
[0040]組方I組:炒槐米:黃芩:鹽知母:陳皮=1:2:3:1[0041 ] 組方2組:炒槐米:黃芩:鹽知母:陳皮=2:3:1:1
[0042]組方3組:炒槐米:黃芩:鹽知母:陳皮=3:1:2:1
[0043]組方4組:炒槐米:黃芩:鹽知母:陳皮=1:2:3:2
[0044]組方5組:炒槐米:黃芩:鹽知母:陳皮=2:3:1:2
[0045]組方6組:炒槐米:黃芩:鹽知母:陳皮=3:1:2:2
[0046]組方7組:炒槐米:黃芩:鹽知母:陳皮=1:2:3:3
[0047]組方8組:炒槐米:黃芩:鹽知母:陳皮=2:3:1:3
[0048]組方9組:炒槐米:黃芩:鹽知母:陳皮=3:1:2:3
[0049]組方10組:炒槐米:黃芩:鹽知母:陳皮=1:1:1:1
[0050]組方11組:炒槐米:黃芩:鹽知母:陳皮=1:1:1:2
[0051]組方12組:炒槐米:黃芩:鹽知母:陳皮=1:1:1:3
[0052]組方13組:炒槐米:黃芩:鹽知母:陳皮=2:2:2:1
[0053]組方14組:炒槐米:黃`芩:鹽知母:陳皮=2:2:2:3
[0054]組方15組:炒槐米:黃芩:鹽知母:陳皮=3:3:3:2
[0055]組方16組:炒槐米:黃芩:鹽知母:陳皮=3:3:3:1
[0056]1.實驗材料:
[0057]細胞:人肝癌細胞(HepG2，FROM ATCC，中國藥科大學國家新藥篩選中心)。
[0058]試藥:高糖DMEM培養基(Gibco，批號:914292);低糖DMEM培養基(Gibco，批號:914292);阿卡波糖片(拜耳醫藥保健有限公司，批號:117893);格列本脲(天津太平洋制藥有限公司，批號:120108) ;二甲雙胍(北京京豐制藥有限公司，批號:120915);羥苯磺酸鈣(西安利君制藥有限公司，批號:1202023);和血明目片(西安碑林藥業股份有限公司，201205009)。
[0059]2.實驗方法
[0060]將IfepG2細胞按8X IO4濃度接種于96孔板上，每孔200 μ L，造模組使用濃度為10_6mol/L胰島素誘導液誘導24h后，更換胰島素濃度為10_9mol/L培養液繼續孵育12h，測定各組細胞的葡萄糖消耗量。
[0061]2.lHepG2細胞培養及接板
[0062]HepG2細胞接種于細胞培養瓶中，每瓶加入約12mL含10%胎牛血清的高糖DMEM培養基，置于37°C含有5%C02的培養箱中培養，約每3天一次0.25%胰蛋白酶-0.01%EDTA溶液消化傳代，在細胞狀態較好時胰酶消化后接板。
[0063]2.2藥液的配制
[0064]2.2.1組方樣品液I (2.5mg生藥/ml)配制:
[0065]組方I藥物的提取:按1:2:3:1的比例，稱取炒槐米lg，黃芩2g，鹽知母3g，陳皮lg，置于250mL圓底燒瓶中，加藥材總重量10倍量質量濃度為70%的乙醇溶液，浸泡Ih后，85°C回流提取lh，16層紗布過濾，得濾液。同法提取3次，合并3次濾液，70°C減壓回收至無醇味，轉移至蒸發皿中置于70°C水浴鍋上蒸至近干后60°C減壓干燥，得該組方樣品的干膏粉末3.4949g，得率49.93%。[0066]組方待測樣品液I (2.5mg生藥/ml)配制:稱取組方樣品0.0012g于2mlEP管中，加2ml低糖DMEM培養液渦旋溶解，于超凈臺中過0.22 μ m濾膜除菌，得濃度為2.5mg生藥/ml的母液。
[0067]2.2.2組方樣品液2-16(2.5mg生藥/ml)配制:分別按試驗例I項下的規定比例，取組方2-16組的各組藥材，然后按“組方I樣品液(2.5mg生藥/ml)配制”方法，分別配制組方2-16樣品液(2.5mg生藥/ml)。
[0068]2.2.3組方樣品液17 (2.5mg生藥/ml)配制:
[0069]組方17藥物的提取:按組方I的藥材1:2:3:1的比例，稱取炒槐米lg，黃芩2g，鹽知母3g，陳皮lg，置于250mL圓底燒瓶中，加藥材總重量10倍量水，浸泡Ih后，水浴提取Ih, 16層紗布過濾，得濾液。同法提取3次，合并3次濾液，80°C水浴鍋上蒸至近干后60°C減壓干燥，得該組方樣品的干骨粉末3.57g,得率51%。
[0070]組方樣品液17 (2.5mg生藥/ml)配制:稱取組方樣品0.0013g于2mlEP管中，加2ml低糖DMEM培養液渦旋溶解，于超凈臺中過0.22 μ m濾膜除菌，得濃度為2.5mg生藥/ml的母液。
[0071]2.3!fepG2細胞分組、造模及給藥
[0072]!fepG2細胞生長至80~90%融合時，倒掉培養基，用PBS清洗2遍；將細胞以0.25%的胰蛋白酶消化約40s，倒出胰酶，加入含10%血清的培養基終止消化，倒掉培養基，加入新的含10%胎牛血清的培養基，輕輕吹打細胞至均勻，將細胞稀釋至8 X IO4個/mL，接種于96孔板中，每孔接種200 μ L，周圍每孔加入200 μ LD-Hank's溶液。將96孔板置于5%C02、37°C恒溫培養箱中培養，待細胞生長至80-90%融合時，吸出培養液，分組如下，每組6個復孔，各孔加入如下培養基、誘導`液及藥液后繼續培養:空白組:200 μ L高糖DMEM ;模型組:180 μ L高糖DMEM和20 μ Ll(T5mol/L胰島素誘導液；樣品組:160 μ L高糖DMEM，20 μ L誘導液、20 μ L0.025mg/ml格列本脲溶液、20 μ L436 μ g/mL輕苯磺酸韓溶液、20 μ L2.5mg/ml和血明目片樣品液、20μ L400y g/ml 二甲雙胍樣品液、20 μ L400 μ g/mL阿卡波糖樣品液及各20 μ L組方樣品液1-17。
[0073]2.4細胞培養液中葡萄糖含量測定
[0074]誘導培養16_20h后，將含藥培養液取出，每孔加入新鮮的含10_9mol/L胰島素并含1%FBS的低糖培養基200 μ L，培養12h后從各孔吸取20 μ I培養液于1.5mLEP管中，加入1000 μ L的葡萄糖濃度測定工作液，充分混勻，置于37°C水浴15min。顯色后，在波長492nm處，測定各樣品的吸光值，計算培養前后培養基中葡萄糖的含量差值即為各組葡萄糖消耗量。實驗結果如表所示。
[0075]表1.不同藥物及組方樣品液1-17組對!fepG2細胞胰島素敏感性的影響(X ± SD, n=6)
[0076]
【權利要求】
1.一種治療和預防糖尿病及其眼并發癥的藥物組合物，其特征在于該組合物由以下重量份的組分制成: 炒槐米1-5份、黃芩1-5份、鹽知母1-5份、陳皮1-5份。
2.根據權利要求1所述的治療和預防糖尿病及其眼并發癥的藥物組合物，其特征在于該組合物由以下重量份的組分制成: 炒槐米1_3份、黃岑1-3份、鹽知母1_3份、陳皮1-3份。
3.根據權利要求1所述的治療和預防糖尿病及其眼并發癥的藥物組合物，其特征在于該組合物由以下重量份的組分制成: 炒槐米1份、黃芩2份、鹽知母3份、陳皮1份； 炒槐米2份、黃芩3份、鹽知母1份、陳皮1份； 炒槐米3份、黃芩1份、鹽知母2份、陳皮1份； 炒槐米1份、黃芩2份、鹽知母3份、陳皮2份； 炒槐米2份、黃芩3份、鹽知母1份、陳皮2份； 炒槐米3份、黃芩1份、鹽知母2份、陳皮2份； 炒槐米1份、黃芩2份、鹽知母3份、陳皮3份； 炒槐米2份、黃芩3份、鹽知母1份、陳皮3份； 炒槐米3份、黃芩1份、鹽知母2份、陳皮3份； 炒槐米1份、黃岑1份、鹽知母1份、陳皮1份； 炒槐米1份、黃岑1份、鹽知母1份、陳皮2份； 炒槐米1份、黃岑1份、鹽知母1份、陳皮3份； 炒槐米2份、黃芩2份、鹽知母2份、陳皮1份； 炒槐米2份、黃芩2份、鹽知母2份、陳皮3份； 炒槐米3份、黃芩3份、鹽知母3份、陳皮2份； 炒槐米3份、黃芩3份、鹽知母3份、陳皮1份。
4.根據權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該組合物由以下重量份的組分制成:炒槐米1份、黃岑2份、鹽知母3份、陳皮1份。
5.根據權利要求1、2、3或4所述的藥物組合物，其特征在于所述的組合物與藥學上可接受的載體制成制劑。
6.根據權利要求5所述的藥物組合物，其特征在于所述的制劑為口服液、丸劑、片劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑、滴丸劑或注射劑。
7.—種權利要求1、2、3或4所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟:稱取炒槐米，黃芩，鹽知母和陳皮，加藥材總重8-12倍量濃度為10%-90%的乙醇加熱回流提取1-3次，每次提取1-3小時，過濾，合并濾液，濃縮。
8.—種權利要求1、2、3或4所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟:稱取炒槐米，黃芩，鹽知母和陳皮，加藥材總重8-12倍量水，加熱提取1-3次，每次提取0.5-1小時，過濾，合并濾液，濃縮。
9.權利要求1、2、3或4所述的藥物組合物在制備治療或預防糖尿病及其眼并發癥的藥物中的應用。
10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于所述的糖尿病引起的眼并發癥為視網膜病變或 白內障。
【文檔編號】A61K36/8964GK103599340SQ201310411108
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年9月10日 優先權日:2013年9月10日
【發明者】楊中林 申請人:楊中林