一種天然防腐中藥復方提取液的制備方法
【專利摘要】一種天然防腐中藥復方提取液的制備方法，包括以下制備步驟：將原料用提取溶劑提取；用納濾裝置脫除大分子物質。本發明的制備方法克服了傳統中藥小極性有效成分的脫色難問題。
【專利說明】一種天然防腐中藥復方提取液的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明設計一種提取液的制備方法，更具體地說，涉及一種天然防腐中藥復方提取液的制備方法。
【背景技術】
[0002]目前中藥制備最常用脫色方法為活性炭脫色，活性炭對小極性物質的吸附效果特別好，不適合使用極性較小的溶劑提取溶液的脫色，會使有效成分大量損失。也有用大孔樹脂進行脫色處理的，但該法成本非常高，相對產量低，生產周期也很長；采用耐有機試劑的納濾裝置進行脫色精制，是開發簡單易行的色素脫除技術，特別是小極性物質中的色素脫除技術的可行思路。
【發明內容】
[0003]本發明所要解決的技術問題在于克服了傳統中藥小極性有效成分的脫色難，成本高等問題，提供了一種天然防腐中藥復方提取液及其制備方法，該方法進行脫色精制，在滿足化妝品美感和節約成本上有突出貢獻。
[0004]本發明提供的天然防腐中藥復方提取液的制備方法，包括:
[0005]( I)將復方(飲片)用乙醇-水提取
[0006](2)過濾
`[0007](3)過濾液加入納濾裝置的攪拌罐中；
[0008](4)開啟循環，調節回流閥使壓力表壓力保持0.5~0.7MP ；
[0009](5)接收池接收60~80%透過液時，打開回流閥，并在儲罐中加入0.2~0.4倍溶劑，循環2min ；
[0010](6)調節回流閥使壓力表壓力保持0.5~0.7MP ；
[0011](7)繼續收集透過液至原液量，停止循環；
[0012]濃縮除去溶劑，置換成所需溶劑，如丙二醇，甘油，丁二醇，及其含水溶液，辛酸/癸酸甘油三酯等。
[0013]本案天然防腐中藥復方中的有效成分主要為分子量小于300道爾頓的成分，而葉綠素等色素的分子量在900道爾頓左右，可利用孔徑介于這兩類分子大小之間的膜將其分離。
[0014]本發明的突出技術效果在于:
[0015](I)本發明找到小極性物質脫色的新方法，在有效保留有效成分的基礎上，脫除葉綠素等大分子有色成分，并且增加產品的穩定性；
[0016](2)與傳統的柱層析技術相比，膜分離技術能有效的縮短生產周期，大幅提高產量，降低生產成本，并降低工人的勞動強度；
[0017](3)采用剛性高分子微孔板做支撐的平板式過濾設計，能承受高的壓力，提高膜分離的效率，并且易進行高壓反沖，便于膜的清洗；[0018]通過中藥組合以及特殊的純化工藝開發出具有高效抗菌且具有化妝品美感的產
品O
[0019](4)化妝品用的植物提取液需要有較淺的顏色并保持澄清和穩定，而葉綠素等有色物質的存在使提取液的顏色很深，并且因其分子量較大易引起提取液不穩定，嚴重影響產品的性能。特別是在使用極性較小的溶劑進行提取時，葉綠素的溶出更為嚴重。本發明針對防腐中藥復方有效成分主要集中在極性較小部位，以極性較小溶劑進行提取后葉綠素大量溶出這一情況，采用耐有機溶劑的納濾膜進行納濾的技術，選擇性的除去葉綠素等脂溶性大分子物質，使提取液顏色變淺，穩定性增加。該法同樣適合使用極性較小的溶劑提取后的葉綠素等脂溶性大分子物質的去除，對中藥提取液在化妝品中添加應用，乃至傳統中藥的制備工藝，都有重要的指導意義。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0020]圖1為本發明的制備工藝的示意圖。
【具體實施方式】
[0021]下面通過實施例的方式進一步說明本發明，但并不因此將本發明限制在所述的實施例范圍之中。
[0022]實施例1:
[0023]工藝流程:
[0024]制備裝置及工藝如圖1所示，包含攪拌罐1，泵2，納濾裝置3和回流閥4，其中，納濾裝置3包括有機膜301，微孔板302及鋼支撐板303，中藥復方經常規的提取過濾后加入攪拌罐1，通過泵2不斷循環，再`通過納濾裝置3時小分子量物質不斷透過有機膜301，未透過有機膜301的液體循環回到攪拌罐I中，通過回流閥4可以調節納濾裝置內的壓力，透過液5即為脫色后的液體。圖1中箭頭的指向為液體的流向。
[0025]抑菌試驗步驟:
[0026](I)試驗菌株
[0027]金黃色葡萄球菌(ATCC8739)，大腸桿菌(ATCC6538)，綠膿桿菌(ATCC9027)，白色念珠球菌(ATCC10231 )，黑曲霉菌(ATCC16404)。
[0028](2)培養基
[0029]TSB 固體培養基:蛋白胨 10g/L，NaC110g/L, K2HP042.5g/L，酵母提取物 3g/L，瓊脂15g/L，蒸餾水溶解，調節pH為7.2±0.2，115°C高壓滅菌20min ;TSB液體培養基:蛋白胨 10g/L，NaC110g/L, K2HP042.5g/L，酵母提取物 3g/L，蒸餾水溶解，調節 pH 為 7.2±0.2，115°C高壓滅菌20min ；
[0030]SDB固體培養基:蛋白胨10g/L，葡萄糖20g/L，K2HP043g/L，酵母提取物5g/L，瓊脂15g/L，蒸餾水溶解，115°C高壓滅菌20min ；SDB液體培養基:蛋白胨10g/L，葡萄糖20g/L，K2HP043g/L，酵母提取物5g/L，蒸餾水溶解，115°C高壓滅菌20min。
[0031](3)菌懸液制備及接種
[0032]取甘油保藏的金黃色葡萄球菌，大腸桿菌，綠膿桿菌100 μ L涂布于TSB固體培養基上，37°C培養2d，用生理鹽水重懸，得到菌懸液，并用平板培養法計數，將測試菌濃度調整為 IO5 ~106CFU/mL。
[0033]白色念珠球菌和黑曲霉菌100 μ L涂布于SDB固體培養基上，30°C培養2d，用生理鹽水重懸，得到菌懸液，并用平板培養法計數，將測試菌濃度調整為IO5~106。
[0034](4)樣品抑菌作用的測定
[0035]杯碟法
[0036]在培養皿中倒入TSB或SDB固體培養基，待凝固后，在此培養基上均勻涂布測試菌100 μ L0在培養基上等距離放2個無菌牛津杯[內徑(6.0±0.1)mm,外徑(8.0±0.1)mm,高(10.0±0.l)mm，在杯內分別注入200 μ L待測樣品，用生理鹽水或含一定量的DMSO的生理鹽水作為對照。37°C或30°C恒溫箱中培養2d后，用直尺測量各種藥品的抑菌圈直徑，取其平均值。
[0037]微孔板法
[0038]在微孔中加入100 μ L待測樣品(初始濃度)，再加入含測試菌濃度1.0 X 105CFU/mL為2XTSB或2XSDB液體培養基100 μ L，混勻，即待測樣品的測試濃度為初始濃度的50%。30°C或37°C恒溫箱中培養2d后，觀察有無菌生長。結果判斷的前提是生長對照良好，空白對照無菌生長清晰。
[0039](5)最低抑菌濃度(MIC值)的測定
[0040]①最低抑制金黃色葡萄球菌濃度(MIC)、最低抑制大腸桿菌濃度(MIC)、最低抑制綠膿桿菌濃度(MIC)、最低抑制白色念珠球菌濃度(MIC)的測定方法如下:
[0041](I)藥液制備`
[0042]將待測樣品用生理鹽水稀釋成實驗濃度。
[0043](2)菌液制備用2XTSB或2XSDB液體培養基稀釋菌懸液，使其最終菌濃度為105CFU/mL。
[0044](3)培養及結果判讀在微孔中加入菌液100 μ L和藥液100 μ L，同時設不加菌的陰性對照和不加藥液的正常生長對照，每種藥做3個平行，取平均值。置37°C或30°C濕盒孵育，48h后觀察結果，采用直接法讀取數據。結果判斷的前提是生長對照良好，空白對照無菌生長清晰，其它孔隨藥物濃度梯度升高而菌的生長受到抑制。
[0045]②最低抑制黑曲霉濃度(MIC)測定
[0046]采用杯碟法，在培養皿中倒入SDB固體培養基，待凝固后，在此培養基上加入黑曲霉菌(105CFU/ml) lOOyL，均勻涂布。在培養基上等距離放3個無菌牛津杯[內徑(6.0±0.1)臟，外徑(8.0±0.l)mm，高(10.0±0.l)mm，在杯內分別注入200 μ L不同濃度的樣品(用生理鹽水稀釋)。同時設不加測試樣品的正常生長對照和生理鹽水對照。結果判斷的前提是生長對照和生理鹽水對照生長良好，其它隨藥物濃度梯度升高而菌的生長受到抑制。
[0047]制備步驟:
[0048](I)羅勒30g，金銀花20g，迷迭香20g、夏枯草20g，丹參10g，用1000ml乙醇回流提取2h ；
[0049](2)定性濾紙過濾；
[0050](3)過濾液轉移進入攪拌罐，邊攪拌邊循環液體，調節回流閥使壓力保持0.5~
0.7MP，納濾膜的孔徑為900道爾頓；[0051](4)透過液收集至原液量70%時，攪拌罐中加入0.3倍乙醇，打開回流閥循環2min，調節回流閥使壓力維持0.5~0.7MP，收集透過液至原液量，停止循環；
[0052](5)濃縮至40ml，加丙二醇至200ml，攪勻即得。
[0053]實施例2:
[0054](I)羅勒20g，金銀花10g，迷迭香30g、夏枯草30g，丹參10g，用1000ml50%的乙醇回流提取2h ；
[0055](2)定性濾紙過濾；
[0056](3)過濾液轉移進入攪拌罐，邊攪拌邊循環液體，調節回流閥使壓力保持0.5~
0.7MP，納濾膜的孔徑為500道爾頓；
[0057](4)透過液收集至原液量60%時，攪拌罐中加入0.4倍50%乙醇，打開回流閥循環2min，調節回流閥使壓力維持0.5~0.7MP，收集透過液至原液量，停止循環；
[0058](5)濃縮至40ml，加丙二醇至200ml，攪勻即得。
[0059]實施例3:
[0060](I)羅勒20g，金銀花10g，迷迭香30g、夏枯草20g，丹參20g，用1000ml75%的乙醇回流提取2h ; (2)定性濾紙過濾；
[0061](3)過濾液轉移進入攪拌罐，邊攪拌邊循環液體，調節回流閥使壓力保持0.5~`0.7MP，納濾膜的孔徑為900道爾頓；
[0062](4)透過液收集至原液量80%時，攪拌罐中加入0.2倍75%乙醇，打開回流閥循環2min，調節回流閥使壓力維持0.5~0.7MP，收集透過液至原液量，停止循環；
[0063](5)濃縮至40ml，加丙二醇至200ml，攪勻即得。
[0064]對比實施例1:
[0065]傳統煎煮-活性炭脫色法:
[0066](I)羅勒30g，金銀花20g，迷迭香20g、夏枯草20g，丹參10g，用1000ml95%的乙醇回流提取2h ；
[0067](2)定性濾紙過濾；
[0068](3)過濾液加入0.5%活性炭(150目)，煮沸攪拌0.5h,過濾；
[0069](4)濃縮至40ml，加丙二醇至200ml，攪勻即得。
[0070]對比實施例2:
[0071]傳統煎煮法:
[0072](I)羅勒30g，金銀花20g，迷迭香20g、夏枯草20g，丹參10g，用1000ml95%的乙醇回流提取2h ；
[0073](2)定性濾紙過濾；
[0074](3)濃縮至40ml，加丙二醇至200ml，攪勻即得。
[0075]本發明與傳統的生產方式相比，產品各項指標如表1所示:
[0076]表1
[0077]
【權利要求】
1.一種天然防腐中藥復方提取液的制備方法，其特征在于，包括以下制備步驟: (1)將原料用提取溶劑提取； (2)用納濾裝置脫除大分子物質。
2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述原料為復方(飲片)。
3.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述復方(飲片)的組成及重量配比為:羅勒20~30份，金銀花10~20份，迷迭香20~30份、夏枯草20~30份以及丹參10~20份。
4.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述提取溶劑為50-100wt%乙醇溶液，所述納濾裝置為平板式耐高壓的納濾設備。
5.如權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述納濾裝置為截留分子量為500~900道爾頓的耐有機溶劑的平板式納濾膜，所述納濾裝置的支撐層為剛性高分子微孔板，操作壓力 0.5-0.7MP。
6.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述大分子物質的分子量大于500道爾頓。
7.如權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述大分子物質為葉綠素。
8.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述步驟(1)和步驟(2)之間，還包含過濾步驟；進一步地，所述步驟(2)包括開啟循環，調節回流閥使壓力表壓力保持0.5~0.7MP ;接收池接收60~80%透過液時，打開回流閥，并在儲罐中加入0.2~0.4倍溶劑，循環2min ;調節回流閥使壓力表壓力保持0.5~0.7MP ;繼續收集透過液至原液量，停止循環。
9.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述制備方法還包括步驟(3):濃縮除去乙醇，置換成所需溶劑。
10.如權利要求9所述的制備方法，其特征在于，所述所需溶劑為丙二醇，甘油，丁二醇和/或其含水溶液。
【文檔編號】A61K8/97GK103494738SQ201310455009
【公開日】2014年1月8日 申請日期:2013年9月29日 優先權日:2013年9月29日
【發明者】李成亮, 袁圓, 卞春亮 申請人:上海萊博生物科技有限公司