枸骨葉配方顆粒及其制備方法和檢測方法
【專利摘要】本發明公開了一種枸骨葉配方顆粒及其制備方法和檢測方法。該配方顆粒是以枸骨葉Ilicis?Cornutae?Folium為原料，經過水提、減壓濃縮、干燥等工藝流程制得枸骨葉干燥粉，枸骨葉干燥粉直接或和適量輔料混合后干法制粒得到枸骨葉配方顆粒。本發明枸骨葉配方顆粒每克相當生藥量9克，枸骨葉飲片及枸骨葉配方顆粒均采用紅外指紋圖譜進行質量檢測。本發明枸骨葉配方顆粒具有完整的、先進的生產工藝及專屬性強的、可控的檢測標準，工藝先進可以實現，質量標準涉及到的檢測方法科學、先進、快捷，可操作性強。
【專利說明】枸骨葉配方顆粒及其制備方法和檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種中藥配方顆粒及其制備方法和檢測方法，特別涉及一種枸骨葉配方顆粒及其制備方法和檢測方法。
【背景技術】
[0002]中藥配方顆粒，是在中醫理論指導下，對中藥飲片經過各種工藝加工而成，用于臨床中醫處方調配使用的顆粒劑；臨床應用和藥理實驗表明，單味中藥配方顆粒和傳統的水煎劑具有基本相同的療效和藥理作用，且中藥配方顆粒具有體積小，易于攜帶和保存，質量穩定可控等優點。它作為取代傳統中藥飲片的新型湯劑，具有方便、快捷、安全、衛生、科學等特點。
[0003]枸骨葉為冬青科植物枸骨Ilex cornuta Lindl.ex Paxt.的干燥葉。具有清熱養陰，益腎平肝的功效，常用于肺癆咯血，骨蒸潮熱，頭暈目眩，是臨床上尤其是高血壓患者常用中藥。為了滿足臨床上辨證論治和隨證加減的要求，有利于醫生靈活組方，我們采用現代工藝對枸骨葉藥材進行提取濃縮制成配方顆粒，具有重要的現實意義。
[0004]目前尚未見有關枸骨葉配方顆粒及其制備工藝的報道。而且，由于濃縮提取之后的中藥配方顆粒已經沒有了原藥材的形狀特征，以致無法從外觀或者顯微組織、細胞特征來檢測，故原料藥材的檢測顯得尤為重要。
[0005]現有文獻報到對枸骨葉藥材的研究多以測定一兩個成分為指標，不能真正反映原藥材的穩定性，從而不能確保枸骨葉配方顆粒產品的均一性，因此，建立枸骨葉藥材HPLC指紋圖譜，是現階段控制中藥和中藥配方顆粒內在質量的有效手段之一。目前尚未見有關枸骨葉藥材指紋圖譜研究的報道。
[0006]紅外光譜法是檢測`化合物和確定物質結構的常用手段之一。在藥物分析中，以紅外光譜具有的“指紋”特性作為藥物鑒定的依據，該方法科學、先進、快捷，可操作性強，是各國藥典共同采用的方法。
[0007]目前尚未見有關采用紅外光譜技術對枸骨葉配方顆粒質量進行控制研究的報道。
【發明內容】
[0008]本發明的目的之一在于公開一種枸骨葉配方顆粒的制備方法。
[0009]實現上述目的的技術方案如下。
[0010]一種枸骨葉配方顆粒的制備方法，包括以下步驟:
[0011](4)取原料枸骨葉切碎后，加入原料枸骨葉8~12倍重量份的水，浸潤0.5~2小時，提取I~3小時，提取液濾過，藥渣加入原料枸骨葉6~10倍重量份的水，提取I~3小時，濾過，合并兩次提取液；
[0012](5)減壓濃縮至相對密度1.10~1.15，得濃縮液，濃縮液噴霧干燥，得枸骨葉噴霧干燥粉；或減壓濃縮至相對密度1.20~1.25，60~75 °C真空干燥，真空度-0.05~-0.09Mpa，取真空干燥所得干浸膏粉碎，得枸骨葉真空干燥粉；[0013](6)干法制粒，得枸骨葉配方顆粒，每克所述枸骨葉配方顆粒相當生藥量9克。
[0014]在其中一個實施例中，還包括對原料枸骨葉用傅里葉紅外光譜儀進行紅外指紋圖譜的檢測，檢測條件:用傅里葉變換紅外光譜儀，DTGS檢測器，分辨率4CHT1，光譜范圍為4000~400c!!!—1，掃描次數32次，掃描過程中實時扣除水和二氧化碳干擾，環境溫度為25 ± 2°C，相對濕度30%~40%，溴化鉀直接壓片法進行檢測；
[0015]檢測結果為:在I^OOcnT1~SOOcnT1間有一個寬峰為主強峰，峰位為:1053(^1 ；在2000cm 1~1500cm 1間有一個較寬的次強峰，峰位為:1608cm 1 ;在3410cm \2929cm \1385cm \ 1265cm \ 817cm \771cm \605cm 處有特征吸收峰。
[0016]在其中一個實施例中，還包括對原料枸骨葉采用HPLC標準指紋圖譜進行檢測，包括以下步驟:
[0017]A.對照品溶液的制備:精密稱取槲皮素、山柰素和異鼠李素適量，加甲醇制成含
0.08mg.ml-1槲皮素、(0.04mg.ml-1山奈素)、0.05mg.ml—1異鼠李素的對照品溶液，搖勻即得；
[0018]B.供試品溶液的制備:精密稱取枸骨葉藥材粉末5g，置于具塞容器中，加入體積百分比為80%的甲醇溶液50ml，稱定重量，加熱回流lh，放冷后，用80%甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液25ml，加入25%鹽酸5ml，稱定重量，加熱回流水解0.5h，放冷，用80%甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，
[0019]過0.45 μ m的微孔濾膜，濾液作為供試品溶液；
[0020]C.高效液相色譜分析:色譜柱Kromasil_C18 (4.6_X 250mm, 5 μ m);流動相為乙腈-0.1%磷酸，采用梯度洗脫方式:0min — 5min — IOmin — 30min — 60min,乙腈14% — 14% — 18% — 21% — 55%,流速 0.8ml/min,檢測波長 360nm,柱溫 25°C ;得到枸骨葉標準指紋圖譜；枸骨葉標準指紋圖譜:14個共有峰，9.2min、12.6min、14.lmin、16.5min、18.7min、37.2min、39.3min、40.2min、42.5min、43.6min、45.0min、45.7min、49.5min、49.9min。
[0021]在其中一個實施例中，還包括采用紅外指紋圖譜進行對枸骨葉真空干燥粉的進行檢測，紅外指紋圖譜檢測方法為:用傅里葉變換紅外光譜儀，DTGS檢測器，分辨率4CHT1，光譜范圍為4000CHT1~400CHT1，掃描次數32次，掃描過程中實時扣除水和二氧化碳干擾，環境溫度(25 ± 2 ) °C,相對濕度30%~40%，溴化鉀直接壓片法進行檢測；
[0022]枸骨葉真空干燥粉指紋圖譜為:1607CHT1、1073cm^處有兩個特征單強峰，其中 1073cm 1 為主強峰；此外，在 3400cm \2930cm \ 1517cm \ 1385cm \ 1268cm \818cm \777cm_\612cm_1處有特征吸收峰。
[0023]在其中一個實施例中，枸骨葉噴霧干燥粉的質量控制:采用紅外指紋圖譜進行質量鑒別，紅外指紋圖譜鑒別方法為:用傅里葉變換紅外光譜儀，DTGS檢測器，分辨率4CHT1，光譜范圍為4000CHT1~400CHT1，掃描次數32次，掃描過程中實時扣除水和二氧化碳干擾，環境溫度(25 ± 2) °C,相對濕度30%~40%，溴化鉀直接壓片法進行檢測；枸骨葉噴霧干燥粉指紋圖譜為:1607011^10740^1處有兩個特征單強峰，其中1074CHT1為主強峰；此外，在3402cm \2930cm \ 1516cm \ 1395cm \ 1263cm \819cm \779cm \610cm 1 處有特征吸收峰。 [0024]在其中一個實施例中，藥液預熱溫度45~65°C，進風溫度175~195°C，出風溫度85 ~105°C，塔內負壓-0.02 ~-0.08Mpa。[0025]在其中一個實施例中，干法制粒參數為沖孔板孔徑介于1.30~1.70mm,油缸壓力20±7bar,送料螺桿轉速20~60Hz，軋輥轉速20~30Hz。
[0026]本發明的另一目的是提供一種枸骨葉配方顆粒。
[0027]實現該目的的技術方案如下。
[0028]根據上述方法得到的枸骨葉配方顆粒，采用紅外指紋圖譜進行檢測:用傅里葉變換紅外光譜儀，DTGS檢測器，分辨率4CHT1，光譜范圍為4000-400(31^1,掃描次數32次，掃描過程中實時扣除水和二氧化碳干擾，環境溫度(25±2) 0C，相對濕度30%~40%，溴化鉀直接壓片法進行檢測，得到的標準指紋圖譜為:在1200CHT1~SOOcnT1間有一個寬峰為主強峰，峰位為:1053cm 1 ;在2000cm 1~1500cm 1間有一個較寬的次強峰，峰位為:1608cm 1 ;在3410cm \2929cm \ 1385cm \ 1265cm \ 817cm \771cm \605cm-處有特征吸收峰。
[0029]本發明的另一目的是提供上述枸骨葉配方顆粒的檢測方法。
[0030]具體技術方案如下。
[0031]一種枸骨葉配方顆粒的檢測方法，包括以下中的一種或幾種:
[0032]( I)原料枸骨葉采用HPLC標準指紋圖譜進行檢測:
[0033]A.對照品溶液的制備:精密稱取槲皮素、山柰素和異鼠李素適量，加甲醇制成含
0.08mg.ml-1的槲皮素、0.04mg.ml-1白勺山奈素、0.05mg.ml-1的異鼠李素的對照品溶液,搖勻即得；
[0034]B.供試品溶液的制備:精密稱取藥材粉末5g，置于具塞容器中，加入體積百分比為80%甲醇溶液50ml，稱定重量，加熱回流lh，放冷后，用80%甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液25ml，加入25%鹽酸5ml，稱定重量，
[0035]加熱回流水解0.5h，放冷，用80%甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，過0.45 μ m的微孔濾膜，濾液作為供試品溶液；
[0036]C.高效液相色譜分析:色譜柱Kromasil-C18 ;流動相為乙腈-0.1%磷酸，采用梯度洗脫方式:0min — 5min — IOmin — 30min — 60min,乙臆 14% — 14% — 18% — 21% — 55%,流速0.8ml/min,檢測波長360nm,柱溫25°C ;在此條件下分析供試品和對照品溶液,得到枸骨葉標準指紋圖譜；14 個共有峰,9.2min、12.6min、14.lmin、16.5min、18.7min、37.2min、39.3min、40.2min、42.5min、43.6min、45.0min、45.7min、49.5min、49.9min ；
[0037](2)原料枸骨葉采用紅外指紋圖譜進行質量檢測，紅外指紋圖譜檢測方法為:用傅里葉變換紅外光譜儀，DTGS檢測器，分辨率4cm—1，光譜范圍為4000~^OcnT1，掃描次數32次，掃描過程中實時扣除水和二氧化碳干擾，環境溫度(25±2) °C，相對濕度30%~40%,溴化鉀直接壓片法進行檢測:枸骨葉Ilicis Cornutae Folium標準指紋圖譜為:在1200cm-1~800CHT1間有一個寬峰，峰位為:1069^^1 ;在2000CHT1~Ι~1500cm1間有一個較寬的次強峰，峰位為:1631cm 1 ;在 3430cm \2926cm \ 1735cm \ 1429cm \ 1375cm \ 1318cm \1257cm \ 1156cm \ 781 cm \595cm 1 處有特征吸收峰；
[0038](3)枸骨葉噴霧干燥粉的檢測:采用紅外指紋圖譜進行質量檢測，紅外指紋圖譜檢測方法為:用傅里葉變換紅外光譜儀，DTGS檢測器，分辨率4CHT1，光譜范圍為SOOcnT1~^OcnT1,掃描次數32次，掃描過程中實時扣除水和二氧化碳干擾，環境溫度(25±2) °C，相對濕度30%~40%，溴化鉀直接壓片法進行檢測；枸骨葉噴霧干燥粉指紋圖譜為:1607(^'1074cm-1處有兩個特征單強峰，其中1074cm-1為主強峰；此外，在3402cm_\2930cm_\1516cm \ 1395cm \ 1263cm \819cm \779cm \610cm 1 處有特征吸收峰；
[0039](4)枸骨葉真空干燥粉的檢測:采用紅外指紋圖譜進行質量檢測，紅外指紋圖譜檢測方法為:用傅里葉變換紅外光譜儀，DTGS檢測器，分辨率4CHT1，光譜范圍為SOOcnT1~^OcnT1,掃描次數32次，掃描過程中實時扣除水和二氧化碳干擾，環境溫度(25±2) °C，相對濕度30%~40%，溴化鉀直接壓片法進行檢測；枸骨葉真空干燥粉指紋圖譜為:1607(^'1073cm-1處有兩個特征單強峰，其中1073cm-1為主強峰；此外，在3400cm_\2930cm_\1517cm \ 1385cm \ 1268cm \818cm \777cm \612cm 1 處有特征吸收峰；
[0040](5)對枸骨葉配方顆粒進行檢測:采用紅外指紋圖譜進行檢測:用傅里葉變換紅外光譜儀，DTGS檢測器，分辨率4CHT1，光譜范圍為4000-400(31^1,掃描次數32次，掃描過程中實時扣除水和二氧化碳干擾，環境溫度(25±2) V，相對濕度30%~40%，溴化鉀直接壓片法進行檢測，枸骨葉配方顆粒標準指紋圖譜為:在1200CHT1~800CHT1間有一個寬峰為主強峰，峰位為:1053cm 1 ;在2000cm 1~1500cm 1間有一個較寬的次強峰，峰位為:1608cm 1 ；在 3410cm \2929cm \ 1385cm \ 1265cm \ 817cm \771cm \605cm 處有特征吸收峰。
[0041]本發明配方顆粒具有完整的、先進的生成工藝及專屬性強的、可控的檢測標準，工藝先進可以實現，質量標準涉及到的檢測方法科學、先進、快捷，可操作性強。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0042]圖1:枸骨葉Ilicis Cornutae Folium標準紅外指紋圖譜；
[0043]圖2:枸骨葉噴霧干燥粉標準紅外指紋圖譜；
[0044]圖3:枸骨葉真空干燥粉標準紅外指紋圖譜；
[0045]圖4:枸骨葉配方顆粒標準紅外指紋圖譜；
[0046]圖5:枸骨葉配方顆粒和枸骨葉藥材紅外指紋圖譜比較；
[0047]圖6:枸骨葉藥材HPLC指紋圖譜；
[0048]圖7:槲皮素、山奈素和異鼠李素對照品色譜圖；
[0049]圖8:枸骨葉配方顆粒與枸骨葉藥材薄層色譜比較，其中，I~2:枸骨葉對照藥材；3~4:枸骨葉藥材樣品；5~6:枸骨葉配方顆粒。
【具體實施方式】
[0050]下述實驗例和實施例用于進一步說明但不限于本發明。
[0051]實施例1
[0052]本實施例的枸骨葉配方顆粒制備方法如下:
[0053](I)取原料枸骨葉，加入原料枸骨葉12倍重量份的水，浸潤1.5小時，提取3小時，加熱煮沸后，保持微沸，加熱煎煮2h，提取液濾過；第二次加投料量10倍量的水，加熱煎煮
1.5h，濾過，提取液合并，
[0054](2)抽入濃縮器，濃縮溫度控制在50~80°C之間，濃縮至相對密度1.12，得“枸骨葉清膏”，趁熱取“枸骨葉清膏”，置配料罐中，加熱至不低于40°C，噴霧干燥，控制進風溫度185°C，出風溫度95°C，塔內負壓-0.03~-0.06Mpa,收得噴干粉8.9kg ；
[0055](3)加麥芽糊精1.1kg，混勻，干法制粒(沖孔板孔徑介于L 30~L 70mm，油缸壓力20±7bar，送料螺桿轉速50Hz，軋輥轉速35Hz)，顆粒用16~40目篩整粒，粗粒和細粉重新制粒，最后制得粒度在16~40目范圍的顆粒，所述枸骨葉配方顆粒每克相當生藥量9克，分裝，即得。
[0056]在制備方法開始前，對枸骨葉藥材進行傅里葉變換紅外光譜儀測定。
[0057]紅外指紋圖譜檢測方法為:用傅里葉變換紅外光譜儀，DTGS檢測器，分辨率4cm-l，光譜范圍為4000~400cm_l，掃描次數32次，掃描過程中實時扣除水和二氧化碳干擾，環境溫度(25±2) °C，相對濕度30%~40%，溴化鉀直接壓片法進行檢測:用傅里葉變換紅外光譜儀，DTGS檢測器，分辨率4cm—1，光譜范圍為4000~^OcnT1，掃描次數32次，掃描過程中實時扣除水和二氧化碳干擾，環境溫度(25±2)°C，相對濕度30%~40%，溴化鉀直接壓片法進行檢測:枸骨葉Ilicis Cornutae Folium標準指紋圖譜為(圖1):在UOOcnT1~800CHT1間有一個寬峰，峰位為:10690^1 ;在2000CHT1~1500cm-1間有一個較寬的次強峰，峰位為:1631cm 1 ；在 3430cm \ 2926cm \ 1735cm \ 1429cm \ 1375cm \ 1318cm \ 1257cm \1156cm \ 781 cm \595cm 1處有特征吸收峰。
[0058]制備后，對枸骨葉配方顆粒的質量檢測:采用紅外指紋圖譜進行質量檢測，紅外指紋圖譜檢測方法為:用傅里葉變換紅外光譜儀，DTGS檢測器，分辨率4cm-l，光譜范圍為4000-400cm-l，掃描次數32次，掃描過程中實時扣除水和二氧化碳干擾，環境溫度(25±2) °C，相對濕度30%~40%，溴化鉀直接壓片法進行檢測。枸骨葉配方顆粒標準指紋圖譜為(圖4):在I^OOcnT1~SOOcnT1間有一個寬峰為主強峰，峰位為:1053(^1 ;在2000cm 1~1500cm 1間有一個較寬的次強峰，峰位為:1608cm 1 ；在3410cm \2929cm \1385cm \ 1265cm \ 817cm \771cm \605cm 處有特征吸收峰。
[0059]上述檢測結果綜合比較如圖5所示，枸骨葉配方顆粒和枸骨葉藥材的紅外指紋圖譜峰形、峰位、相對峰強度基本一致。
[0060]實施例2
[0061]本實施例的枸骨葉配方顆粒制備方法如下:
[0062](I)取原料枸骨葉90kg，加入原料枸骨葉10倍重量份的水，加熱煮沸后，保持微沸，加熱煎煮3h，提取液濾過；第二次加投料量8倍量的水，加熱煎煮lh，濾過，提取液合并；
[0063](2)抽入濃縮器，濃縮溫度控制在50~80°C之間，濃縮至相對密度1.24，得“枸骨葉清膏”，趁熱取“枸骨葉清膏”置于真空干燥箱中，控制溫度60~75°C (緩慢升溫)，真空度-0.07~-0.085Mpa,收得枸骨葉干浸膏9.2kg ；
[0064](3)粉碎，加麥芽糊精0.8kg，混勻，干法制粒(沖孔板孔徑介于1.30~1.70mm,油缸壓力20±7bar，送料螺桿轉速20~60hz，軋輥轉速15~40hz)，顆粒用16~40目篩整粒，粗粒和細粉重新制粒，最后制得粒度在16~40目范圍的顆粒，所述枸骨葉配方顆粒每克相當生藥量9克，分裝，即得。
[0065]制備時，還包括按以下步驟對原材料枸骨葉藥材進行檢測，具體如下
[0066](I)對照品溶液的制備:精密稱取槲皮素、山柰素和異鼠李素適量，加甲醇制成含
0.08mg.ml-1的槲皮素、0.04mg.ml-1的山奈素、0.05mg.ml-1的異鼠李素的對照品溶液,搖勻即得。
[0067](2)供試品溶液的制備:精密稱取藥材粉末5g，置于具塞容器中，加入體積百分比為80%的甲醇溶液50ml，稱定重量，加熱回流Ih,放冷后，用80%的甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液25ml，加入25%鹽酸5ml，稱定重量，加熱回流水解0.5h，放冷，用80%的甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，過0.45 μ m的微孔濾膜，濾液作為供試品溶液。
[0068](3)高效液相色譜分析:色譜柱Kromasil-C18 (4.6mmX250mm, 5 μ m);流動相為乙腈-0.1%磷酸，采用梯度洗脫方式:0min — 5min — IOmin — 30min — 60min,乙腈14% — 14% — 18% — 21% — 55% ;流速 0.8ml/min,檢測波長 360nm，柱溫 25°C。在此條件下分析供試品和對照品溶液，得到枸骨葉標準指紋圖譜。
[0069](4)枸骨葉標準指紋圖譜(見圖6):有14個共有峰，9.2min、12.6min、14.lmin、16.5min、18.7min、37.2min、39.3min、40.2min、42.5min、43.6min、45.0min、45.7min、49.5min、49.9min。其中11號、13號、14號色譜峰分別為槲皮素、山奈素和異鼠李素參照峰，最強峰為11號色譜峰。
[0070]槲皮素、山奈素和異鼠李素對照品色譜圖見圖7。
[0071]其中，在制備時，還對枸骨葉真空干燥粉采用紅外指紋圖譜進行質量檢測，紅外指紋圖譜檢測方法為:用傅里葉變換紅外光譜儀，DTGS檢測器，分辨率4CHT1，光譜范圍為4000cm-1~400c!!!—1，掃描次數32次，掃描過程中實時扣除水和二氧化碳干擾，環境溫度(25±2) °C，相對濕度30%-40%，溴化鉀直接壓片法進行檢測:枸骨葉真空干燥粉指紋圖譜為:1607cm_1U073cm_1處有兩個特征單強峰，其中1073cm-1為主強峰;此外，在3400(^1、2930cm_\l517cm_1U385cm_1U268cm_\818cm_\777cm_\612cm_1 處有特征吸收峰。請參見圖3。
[0072]實施例3
[0073]本實施例的枸骨葉配方顆粒制備方法如下:
[0074]( 1)取原料枸骨葉90kg，加入原料枸骨葉8倍重量份的水，加熱煮沸后，保持微沸，加熱煎煮2h，提取液濾過；第二次加投料量6倍量的水，加熱煎煮1.5h，濾過，提取液合并；
[0075](2)抽入濃縮器，濃縮溫度控制在50~80°C之間，濃縮至相對密度1.13，得“枸骨葉清膏”，趁熱取“枸骨葉清膏”，置配料罐中，加熱至不低于40°C，噴霧干燥，控制進風溫度175°C，出風溫度85°C，塔內負壓-0.03~-0.06Mpa,收得噴干粉8.3kg ；
[0076](3)加麥芽糊精1.7kg，混勻，干法制粒(沖孔板孔徑介于1.30~1.70mm，油缸壓力20±7bar，送料螺桿轉速20~60hz，軋輥轉速15~40hz)，顆粒用16~40目篩整粒，粗粒和細粉重新制粒，最后制得粒度在16~40目范圍的顆粒，所述枸骨葉配方顆粒每克相當生藥量9克，分裝，即得。
[0077]其中，在制備時，還對枸骨葉噴霧干燥粉采用紅外指紋圖譜進行質量檢測:采用紅外指紋圖譜進行質量檢測，紅外指紋圖譜檢測方法為:用傅里葉變換紅外光譜儀，DTGS檢測器，分辨率4CHT1，光譜范圍為4000CHT1~400CHT1，掃描次數32次，掃描過程中實時扣除水和二氧化碳干擾，環境溫度(25±2) 0C，相對濕度30%~40%，溴化鉀直接壓片法進行檢測。枸骨葉噴霧干燥粉指紋圖譜為(圖2):1607(^^107?!^1處有兩個特征單強峰，其中 1074cm 1 為主強峰；此外，在 3402cm \2930cm \ 1516cm \ 1395cm \ 1263cm \819cm \779cm_\610cm_1處有特征吸收峰。
[0078]枸骨葉配方顆粒與枸骨葉藥材薄層色譜比較研究
[0079]按照《中華人民共和國藥典》2010年版一部中枸骨葉藥材檢測項下薄層板色譜法試驗，用枸骨葉藥材和本發明實施例1制備的枸骨葉配方顆粒樣品，進行測定，所得結果如圖8所示，枸骨葉配方顆粒色譜中，在于枸骨葉藥材色譜相對應的位置上，顯相同顏色的斑點。圖中的枸骨葉對照藥材是是從藥檢所購買的對照藥材；藥材樣品是指實施例1中的原材料枸骨葉藥材。
[0080]結果證明，本發明枸骨葉配方顆粒和枸骨葉藥材成分一致，本發明枸骨葉配方顆粒制備工藝是合理的。
[0081]以上所述實施例僅表達了本發明的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細，但并不能因此而理解為對本發明專利范圍的限制。應當指出的是，對于本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明構思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬于本發明的保護范圍。因此，本發明專利的保護范圍應以所附權利要求為準。
【權利要求】
1.一種枸骨葉配方顆粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)取原料枸骨葉切碎后，加入原料枸骨葉8~12倍重量份的水，浸潤0.5~2小時，提取I~3小時，提取液濾過，藥渣加入原料枸骨葉6~10倍重量份的水，提取I~3小時，濾過，合并兩次提取液； (2)減壓濃縮至相對密度1.10~1.15，得濃縮液，濃縮液噴霧干燥，得枸骨葉噴霧干燥粉；或減壓濃縮至相對密度1.20~1.25,60~75°C真空干燥，真空度-0.05~-0.09Mpa,取真空干燥所得干浸膏粉碎，得枸骨葉真空干燥粉； (3)干法制粒，得枸骨葉配方顆粒，每克所述枸骨葉配方顆粒相當生藥量9克。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，還包括對原料枸骨葉用傅里葉紅外光譜儀進行紅外指紋圖譜的檢測，檢測條件:用傅里葉變換紅外光譜儀，DTGS檢測器，分辨率4CHT1，光譜范圍為4000~400CHT1，掃描次數32次，掃描過程中實時扣除水和二氧化碳干擾，環境溫度為25±2°C，相對濕度30%~40%，溴化鉀直接壓片法進行檢測； 檢測結果為:在I^OOcnT1~SOOcnT1間有一個寬峰為主強峰，峰位為:1053(^1 ;在2000cm 1~1500cm 1間有一個較寬的次強峰，峰位為:1608cm 1 ；在3410cm \2929cm \1385cm \ 1265cm \ 817cm \771cm \605cm 處有特征吸收峰。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，還包括對原料枸骨葉采用HPLC標準指紋圖譜進行檢測，包括以下步驟: A.對照品溶液的制備:精密稱取槲皮素、山柰素和異鼠李素適量，加甲醇制成含0.08mg.πι 1的槲皮素 、0.04mg.πι 1白勺山奈素、0.05mg.πι 1的異鼠李素的對照品溶液,搖勻即得； B.供試品溶液的制備:精密稱取枸骨葉藥材粉末5g，置于具塞容器中，加入80%甲醇溶液50ml，稱定重量，加熱回流Ih,放冷后，用80%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液25ml，加入25%鹽酸5ml，稱定重量，加熱回流水解0.5h，放冷，用80%甲醇補足減失的重量，搖勻，過0.45 μ m的微孔濾膜，濾液作為供試品溶液； C.高效液相色譜分析:色譜柱Kromasil-C18;流動相為乙腈-0.1%磷酸，采用梯度洗脫方式:0min — 5min — IOmin — 30min — 60min,乙臆 14% — 14% — 18% — 21% — 55%,流速0.8ml/min，檢測波長360nm，柱溫25°C ;得到枸骨葉標準指紋圖譜:14個共有峰，9.2min、12.6min、14.lmin、16.5min、18.7min、37.2min、39.3min、40.2min、42.5min、43.6min、45.0min、45.7min、49.5min、49.9min。
4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，還包括采用紅外指紋圖譜進行對枸骨葉真空干燥粉的進行檢測，紅外指紋圖譜檢測方法為:用傅里葉變換紅外光譜儀，DTGS檢測器，分辨率4CHT1，光譜范圍為4000CHT1~400CHT1，掃描次數32次，掃描過程中實時扣除水和二氧化碳干擾，環境溫度為25±2°C，相對濕度30%~40%，溴化鉀直接壓片法進行檢測； 枸骨葉真空干燥粉指紋圖譜為:1607011^10730^1處有兩個特征單強峰，其中1073CHT1為主強峰；此外，(6: 3400cm \2930cm \l517cm \l385cm \l268cm \818cm \777cm \612CHT1處有特征吸收峰。
5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，枸骨葉噴霧干燥粉的質量控制:采用紅外指紋圖譜進行質量鑒別，紅外指紋圖譜鑒別方法為:用傅里葉變換紅外光譜儀，DTGS檢測器，分辨率4CHT1，光譜范圍為4000CHT1~400CHT1，掃描次數32次，掃描過程中實時扣除水和二氧化碳干擾，環境溫度為25±2°C，相對濕度30%~40%，溴化鉀直接壓片法進行檢測；枸骨葉噴霧干燥粉指紋圖譜為:1607011^10740^1處有兩個特征單強峰，其中1074CHT1為主強峰；此外，(6: 3402cm \2930cm \l516cm \l395cm \l263cm \819cm \779cm \610cnT1處有特征吸收峰。
6.根據權利要求1-5任一項所述的制備方法,其特征在于， 噴霧干燥工藝參數為:藥液預熱溫度45~65°C，進風溫度175~195°C，出風溫度85~.105°C，塔內負壓-0.02 ~-0.08Mpa。
7.根據權利要求1-5任一項所述的制備方法，其特征在于， 干法制粒工藝參數為:沖孔板孔徑介于1.30~1.70mm，油缸壓力20±7bar，送料螺桿轉速20~60Hz，軋輥轉速20~30Hz。
8.根據權利要求1-7任一項所述方法得到的枸骨葉配方顆粒，采用紅外指紋圖譜進行檢測:用傅里葉變換紅外光譜儀，DTGS檢測器，分辨率4CHT1，光譜范圍為4000-400(31^1,掃描次數32次，掃描過程中實時扣除水和二氧化碳干擾，環境溫度為25±2°C，相對濕度30%~.40%，溴化鉀直接壓片法進行檢測，得到的標準指紋圖譜為:在12OOcnT1~8OOcnT1間有一個寬峰為主強峰，峰位為:105301^1 ;在ZOOOcnr1~1500cm-1間有一個較寬的次強峰，峰位為:.1608cm 1 ；在 3410cm \2929cm \ 1385cm \ 1265cm \817cm1、771 cm \605cm 處有特征吸收峰。
9.一種枸骨葉配方顆粒的檢測方法，其特征在于，包括以下中的一種或幾種:(1)原料枸骨葉采用HPLC標準指紋圖譜進行檢測: A.對照品溶液的制備:精密稱取槲皮素、山柰素和異鼠李素適量，加甲醇制成含.0.08mg.ml-1的槲皮素、0.04mg.ml-1白勺山奈素、0.05mg.ml-1的異鼠李素的對照品溶液,搖勻即得； B.供試品溶液的制備:精密稱取藥材粉末5g，置于具塞容器中，加入80%甲醇50ml，稱定重量，加熱回流Ih,放冷后，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液25ml，加入25%鹽酸5ml，稱定重量，加熱回流水解0.5h,放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，過0.45 μ m的微孔濾膜，濾液作為供試品溶液； C.高效液相色譜分析:色譜柱Kromasil-C18;流動相為乙腈-0.1%磷酸，采用梯度洗脫方式:0min — 5min — 1Omin — 30min — 60min,乙臆 14% — 14% — 18% — 21% — 55%,流速0.8ml/min,檢測波長360nm,柱溫25°C ;在此條件下分析供試品和對照品溶液,得到枸骨葉標準指紋圖譜；14 個共有峰,9.2min、12.6min、14.lmin、16.5min、18.7min、37.2min、.39.3min、40.2min、42.5min、43.6min、45.0min、45.7min、49.5min、49.9min ； (2)原料枸骨葉采用紅外指紋圖譜進行質量檢測，紅外指紋圖譜檢測方法為:用傅里葉變換紅外光譜儀，DTGS檢測器，分辨率4cm—1，光譜范圍為4000~^OcnT1，掃描次數32次，掃描過程中實時扣除水和二氧化碳干擾，環境溫度為25±2°C，相對濕度30%~40%，溴化鉀直接壓片法進行檢測:枸骨葉IlicisCornutae Folium標準指紋圖譜為:在1200cm-1~.800CHT1間有一個寬峰，峰位為:10690^1 ;在2000CHT1~1500cm-1間有一個較寬的次強峰，峰位為:1631cm 1 ；在 3430cm \ 2926cm \ 1735cm \ 1429cm \ 1375cm \ 1318cm \ 1257cm \.1156cm \ 781 cm \595cm 1處有特征吸收峰；(3)枸骨葉噴霧干燥粉的檢測:采用紅外指紋圖譜進行質量檢測，紅外指紋圖譜檢測方法為:用傅里葉變換紅外光譜儀，DTGS檢測器，分辨率4CHT1，光譜范圍為SOOcnT1~^OcnT1,掃描次數32次，掃描過程中實時扣除水和二氧化碳干擾，環境溫度為25±2°C，相對濕度30%~40%，溴化鉀直接壓片法進行檢測；枸骨葉噴霧干燥粉指紋圖譜為:1607(^'1074cm-1處有兩個特征單強峰，其中1074CHT1為主強峰；此外，在3402011'2930011'1516cm 、1395cm 、 1263cm 、819cm 、779cm 、610cm 1 處有特征吸收峰； (4)枸骨葉真空干燥粉的檢測:采用紅外指紋圖譜進行質量檢測，紅外指紋圖譜檢測方法為:用傅里葉變換紅外光譜儀，DTGS檢測器，分辨率4CHT1，光譜范圍為SOOcnT1~^OcnT1,掃描次數32次，掃描過程中實時扣除水和二氧化碳干擾，環境溫度為25±2°C，相對濕度30%~40%，溴化鉀直接壓片法進行檢測；枸骨葉真空干燥粉指紋圖譜為:1607cm_11073cm-1處有兩個特征單強峰，其中1073cm-1為主強峰；此外，在3400cm_1、930cm_1、1517cm 、 1385cm 、 1268cm 、818cm 、777cm 、612cm 1 處有特征吸收峰； (5)對枸骨葉配方顆粒進行檢測:采用紅外指紋圖譜進行檢測:用傅里葉變換紅外光譜儀，DTGS檢測器，分辨率4CHT1，光譜范圍為4000-400(31^1,掃描次數32次，掃描過程中實時扣除水和二氧化碳干擾，環境溫度為25±2°C，相對濕度30%~40%，溴化鉀直接壓片法進行檢測，枸骨葉配方顆粒標準指紋圖譜為:在1200CHT1~800CHT1間有一個寬峰為主強峰，峰位為:1053cm 1 ;在2000cm 1~1500cm 1間有一個較寬的次強峰，峰位為:1608cm 1 ;在3410cm 、2929cm、 1385cm 、 1265cm 、817cm 、771cm 、605cm 處有特征吸收峰。
【文檔編號】A61P9/12GK103800399SQ201410023200
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2014年1月17日 優先權日:2014年1月17日
【發明者】涂瑤生, 孫冬梅, 王洛臨, 施之琪, 李智勇, 徐文杰 申請人:廣東省中醫藥工程技術研究院