一種西藏貓乳提取物及其制備方法和應用的制作方法
【專利摘要】本發明涉及醫藥【技術領域】。類風濕性關節炎(RA)是當前危害人類健康的重要疾病之一，尋求高效低毒的防治RA的藥物仍是世界醫學界面臨的一項艱巨任務和難題。本發明公開了一種民族藥物西藏貓乳莖木提取物的制備方法和應用。本發明以西藏貓乳為原料，通過水提的方法得到提取液，提取液濃縮后上樣大孔吸附樹脂，經20-85%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、真空干燥得西藏貓乳提取物。經藥理學實驗研究表明，本發明的西藏貓乳提取物具有抗類風濕性關節炎的作用。本發明為尋求新的抗類風濕性關節炎藥物提供了一種新的來源。
【專利說明】一種西藏貓乳提取物及其制備方法和應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及天然藥物化學領域，具體涉及民族藥物西藏貓乳的提取物，還涉及其制備方法和/或該提取物在制備預防治療類風濕性關節炎藥物或食品中的應用。
【背景技術】
[0002]類風濕性關節炎(rheumatoidarthritis, RA)是一種以多關節尤其是小關節化膿性炎癥為主的慢性全身性自身免疫性疾病。本病主要病變發生在滑膜，可累及關節軟骨、韌帶、肌健及全身組織，引起關節腫痛，繼而軟骨破壞，關節間隙變窄，晚期關節僵硬和發生畸形、骨骼肌萎縮、功能活動障礙，最終導致不同程度的功能障礙，嚴重者可以導致殘疾。其發病率及致殘率均較高，屬于WHO規定的現代難治病范疇。作為一種慢性疾病，類風濕性關節炎全世界發病率約為1.0%，在我國，該病的患病率約為0.36%，全國約有RA患者500萬人，且其發病率呈現不斷上升的趨勢。目前，對于類風濕性關節炎的治療藥物主要有以下幾種方式:(1)改善病情抗風濕藥(DMARDs)，如甲氨喋呤、來氟米特；(2)非留體抗炎藥(NSAIDs),如布洛芬和萘普生鈉；(3)類固醇類藥物，如強的松、氫化可的松；(4)生物制劑，如依那西普、因福利美。這些藥物可有效延緩骨質侵蝕，抑制關節破壞，從而避免畸形和殘疾，但是，長期使用也存在較多的不良反應，如:化學類藥物會引起胃腸道反應、免疫抑制、肝損傷、高血壓等；而生物制劑一方面價格高昂，另在干預病變細胞的同時，對正常細胞也會產生作用，干擾機體正常的免疫，從而產生較大的毒性，破壞機體的防御作用。除以上四類藥物外，目前，以植物藥為代表的天然藥物在治療類風濕性關節炎上有著特有優勢，不僅可緩解患者關節疼痛、紅腫等癥狀，且不良反應小，受到患者的歡迎，在類風濕性關節炎的防治中越來越顯示出優勢。
[0003]西藏貓乳(RhamnellagilgiticaMansf.etMelch)系鼠李科貓乳屬植物,其用藥部位是西藏貓乳植物莖的干燥木質部(俗稱心材)。原植物主產于我國，主要分布在西藏東南部、云南西北部、四川西南部。作為一種傳統藏藥，曾為《中國藥典》一部(1977年版)和《藏藥標準》(西藏、青海、四川等省(區)衛生局編.藏藥標準.西寧:青海人民出版社，1979.33)所收載，有祛風濕，斂干黃水、消腫止痛等功效，可治療風濕、黃水病、高山多血癥，外用能消腫、治瘡毒等。西藏貓乳的化學成分主要有黃酮類、混合脂肪酸、混合脂肪酸酯等(潘勤，楊培全，陳桂紅，等.藏藥“生等”的化學成分研究，華西藥學雜志，1997，12
[3]，153-155)，但至今未見有關西藏貓乳及其提取物用于抗類風濕性關節炎方面的報道。
【發明內容】
本發明的目的在于提供西藏貓乳的提取物及其制備方法及該提取物在預防和治療類風濕性關節炎中的應用。
[0004]本發明的西藏貓乳提取物，是西藏貓乳通過水提取、大孔吸附樹脂精制等方法得到的物質。
[0005]本發明提供的一種西藏貓乳提取物，其制備方法為:[0006]將干燥的西藏貓乳粉碎后，加生藥量8~20倍的水，提取2~6次，每次1.0~
2.0小時，過濾，合并濾液，濃縮，得相對密度1.05~1.35的流浸膏。將所得流浸膏上樣大孔吸附樹脂，收集20~85%乙醇洗脫部分，減壓回收乙醇，真空干燥，得到西藏貓乳提取物。
[0007]所述的大孔吸附樹脂為弱極性或中等極性，例如AB-8、D-1O1、D-201、D-301、DA201、HPD-100、HPD-200 等。
[0008]本發明還提供了上述西藏貓乳提取物在預防或治療類風濕性關節炎藥物或食品中的應用。
[0009]本發明采用佐劑型關節炎動物模型，觀察本發明提供的西藏貓乳提取物灌胃給藥后的治療作用。實驗結果顯示，空白組大鼠右后足趾無改變，模型組有明顯的腫大，與空白組存在顯著性差異，造模成功；而西藏貓乳提取物組大鼠右后足趾未見明顯的腫大，與模型組相比存在顯著性差異，表明西藏貓乳提取物對類風濕性關節炎模型有較好的治療作用；西藏貓乳提取物能明顯減輕踝關節的局部炎癥、降低大鼠的脾臟指數和胸腺指數；西藏貓乳提取物還能顯著降低類風濕性關節炎動物模型血清中TNF-α和IL-1的水平，說明西藏貓乳提取物具有很好的防治類風濕性關節炎效果。
[0010]本發明中的西藏貓乳提取物可制成多種藥物制劑:將上述提取物加入適當的輔料，可以制備成片劑、膠囊劑、顆粒劑等固體劑型，巴布劑、凝膠劑等透皮吸收劑型。
[0011]本發明所述西藏貓乳提取物的制備方法簡單，生產成本低，利于大規模生產，適宜推廣應用；所得提取物具有顯著的藥理活性，廣闊的市場前景。
[0012]本發明說明西藏貓乳是很好的防治類風濕性關節炎的藥物。
【具體實施方式】
[0013]實施例1`[0014]取Ikg干燥的西藏貓乳，粉碎，加生藥量10倍的水提取4次，每次2.0小時，過濾，合并濾液，濃縮，得相對密度為1.05的流浸膏，將流浸膏上樣ΑΒ-8大孔吸附樹脂，收集60%乙醇洗脫部分，減壓回收乙醇，真空干燥，得西藏貓乳提取物。
[0015]實施例2
[0016]取1.5kg干燥的西藏貓乳，粉碎，加生藥量15倍的水提取3次，每次1.0小時，過濾，合并濾液，濃縮，得相對密度為1.15的流浸膏，將流浸膏上樣D-301大孔吸附樹脂，收集70%乙醇洗脫部分，減壓回收乙醇，真空干燥，得西藏貓乳提取物。
[0017]實施例3
[0018]取1.2kg干燥的西藏貓乳，粉碎，加生藥量18倍的水提取5次，每次1.5小時，過濾，合并濾液，濃縮，得相對密度為1.20的流浸膏，將流浸膏上樣HPD-100大孔吸附樹脂，收集80%乙醇洗脫部分，減壓回收乙醇，真空干燥，得西藏貓乳提取物。
[0019]實施例4
[0020]西藏貓乳提取物的抗類風濕性關節炎藥效學實驗
[0021]4.1實驗材料
[0022]成年雄性Wistar大鼠,體重160~180g (青島藥物檢驗所提供)50只，弗氏完全佐劑(美國Sigma公司)。主要儀器:高速臺式離心機(TGL-16C型，上海安亭科學儀器廠)，RT-6000型酶標分析儀(深圳雷杜生命科學技術有限公司)，大鼠TNF-a、IL-1檢測試劑盒(美國Sigma公司)。
[0023]4.2實驗造模及給藥
[0024]將實驗大鼠隨機分為6組:空白組、模型組、雷公藤多苷陽性對照組、XZMR (本發明西藏貓乳提取物)小、中、大劑量組。自由飲水，進食。除空白組外，模型組、雷公藤多苷陽性對照組、XZMR小、中、大劑量組分別于右后足趾皮下注射弗氏完全佐劑(CFA) 0.1ml0第16天，進行加強，除空白組外，模型組、雷公藤多苷陽性對照組、XZMR小、中、大劑量組分別于右后足趾皮下注射弗氏完全佐劑0.1ml0雷公藤多苷陽性對照組、XZMR小、中、大劑量組自免疫第3d開始灌胃給藥，給藥劑量分別為96.3、25、50、IOOmg.kg-1，每天I次.連續28d。
[0025]4.3觀察指標與檢測方法
[0026]4.3.1動物一般情況及體重測量觀察記錄給藥前后大鼠的行為活動與一般狀況，每7天稱體重一次。 [0027]4.3.2用游標卡尺測量各組大鼠足趾厚度程度，同時測量各組大鼠踝關節周長。每7天測定一次。
[0028]4.3.3胸腺指數和脾臟指數的測定
[0029]胸腺組織和脾臟組織的采集及稱重:大鼠經腹主動脈取血后，立即摘取胸腺組織和脾臟組織，用生理鹽水清洗后用吸水紙吸去表面水分，稱重。按如下公式計算胸腺指數和脾臟指數:胸腺指數=胸腺組織濕重(mg)/大鼠體重(g)xl00% ;脾臟指數=脾臟組織濕重(mg) / 大鼠體重(g)xl00%。
[0030]4.3.4血清腫瘤壞死因子及白介素-1的測定
[0031]大鼠取血后，所采集的血液經3000prn/min、離心15min后，取上清液低溫保存。用ELISA法測定大鼠血清中腫瘤壞死因子(TNF-α )和白介素-1 (IL-1)水平，按試劑盒說明書進行操作。
[0032]4.4統計學處理
[0033]數據以均數土標準差(? 土SD)表示。采用SPSSV13.0軟件統計分析，兩兩比較，采用組間t檢驗。P〈0.05說明組間有顯著差異，P〈0.01說明差異具有極顯著意義。
[0034]4.5實驗結果
[0035]4.5.1 一般情況及體重變化
[0036]實驗期間正常對照組雙足無明顯腫脹，體毛色澤、神志、四肢活動無明顯變化，飲水以及食量稍有增加。模型組，雷公藤多苷片陽性對照組，XZMR小、中、大劑量組的大鼠注射CFA后第一天，右后足迅速腫脹，大鼠表現為急性局部炎癥，活動能力減弱，甚至跛行，原發側腳掌不能著地，身體傾斜，不能負重，致炎后11-13天開始逐漸減輕，飲水及食量增加，原發側腳掌能夠著地。在第14天炎癥加強以后，模型組，陽性對照組，XZMR小、中、大劑量組大鼠原發側腳掌迅速腫脹，體毛無光澤精神差，加強后第5天(首次致炎后19天)腫脹程度達到最大，模型組大鼠原發側踝關節出現畸形，精神萎靡，行動遲緩，飲水及食量明顯減少，加強致炎第8天。大鼠行動逐漸活躍，飲水及食量增加。試驗期間每組平均體重記錄見表
1
[0037]表1大鼠體重的變化(置土SD)
[0038]
【權利要求】
1.一種西藏貓乳提取物，其特征在于，該提取物是以西藏貓乳為原料，通過水提的方法得到，所述水提的方法包括以下步驟:取干燥的西藏貓乳，加8~20倍的水提取2~6次，每次1.0~2.0小時，過濾，合并濾液，濃縮濾液至相對密度1.05~1.35的流浸膏。上樣大孔吸附樹脂柱，收集20~85%乙醇洗脫流份，濃縮回收乙醇，得浸膏。真空干燥，得到西藏貓乳的提取物。
2.權利要求1所述制備方法制備得到的西藏貓乳的水提取物。
3.權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述的大孔樹脂為弱極性或中極性的大孔樹脂，其型號為 AB-8、D-101、D-201、D-301、DA201、HPD-100、HPD-200 中的一種。
4.權利要求2所述的西藏貓乳提取物在預防和治療類風濕性關節炎疾病的藥物或食品中的應 用。
【文檔編號】A61P19/02GK103735575SQ201410036896
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2014年1月26日 優先權日:2014年1月26日
【發明者】金巖, 黃山, 裴小娜, 玄光善 申請人:青島科技大學