一種胰島素的脂質復合物及其制備方法和制劑的制作方法

一種胰島素的脂質復合物及其制備方法和制劑的制作方法
【專利摘要】提供的是一種胰島素脂質復合物及其制備方法和制劑。所述胰島素脂質復合物是由胰島素與脂質材料在含低沸點酸的有機溶劑系統中復合并干燥來制備的。所述復合物中胰島素與脂質材料的質量比為1:3～1:20。還提供了胰島素脂質復合物的油溶液和含有胰島素的囊泡。
【專利說明】一種胰島素的脂質復合物及其制備方法和制劑
[0001 ] 本申請是中國專利申請201180002259.4的分案申請，原申請的申請日為2011年07月14日，發明名稱為一種胰島素的脂質復合物及其制備方法和制劑。
【技術領域】
[0002]本發明涉及一種胰島素脂質復合物及其制備方法，還涉及包含胰島素脂質復合物的油溶液及其在制備緩釋注射劑和非注射給藥途徑制劑中的用途，又涉及包含胰島素脂質復合物的新型囊泡(脂質體)及其在制備非注射給藥途徑制劑中的用途，屬醫藥制劑【技術領域】。
【背景技術】
[0003]1、脂質復合物研究進展及背景介紹
[0004]1.1復合物的構造特點及形成機制
[0005]磷脂復合物是由意大利學者Bombardelli在研究脂質體時發現的，早期磷脂復合物研究涉及的藥物大多是含有酚羥基的黃酮或多酚類成分，后期更多的研究證實，除酚羥基外，一些醇羥基、酰胺基或羰基等極性基團均有可能與磷脂或其他脂質材料(如膽固醇、膽酸鈉等)的親水端通過分子間氫鍵或范德華力等相互作用形成復合物球狀體。不論是親水性藥物還是親脂性藥物，只要含有能復合的極性基團，都可形成脂質復合物。脂質復合物的形成，可顯著提高藥物親脂性和油溶性。
[0006]如附圖2所示，磷 脂復合物的組成、結構與同樣由磷脂構成的囊泡(又稱脂質體)在構造上明顯不同。脂質體是磷脂分子的親水端向外、疏水端向內形成的雙分子膜圍成的囊泡結構。而磷脂復合物則是活性成分的極性基團與磷脂的親水端部位通過分子間相互作用而被固定，將磷脂的親水部位包裹，而疏水端不參與復合反應，可自由移動，形成一個親脂性的球狀體。
[0007]—個脂質體囊泡可能有成百甚至上千個磷脂分子包圍而成，雙分子膜的外層和內層均為磷脂的親水端，而中間夾層則為疏水端。對于親脂性藥物，可被包封于雙分子膜的夾層中(圖中藍色方塊)，包封率通常較高且穩定，不易泄漏；而親水性藥物只能分散在雙分子膜圍成的囊泡內核或外圍，由于藥物進入內核比較困難，實際上親水性藥物大多數分布在外圍，穩定性較差且易發生泄漏。在粘膜透過性方面，親脂性藥物的脂質體往往明顯優于親水性藥物的脂質體。
[0008]因此，對于親水性藥物，如先制備脂質復合物提高親脂性，再制備囊泡，可提高包封率和穩定性，改善粘膜轉運特性。
[0009]2、胰島素脂質復合物研究背景及現有技術的缺陷
[0010]2.1胰島素脂質復合物研究背景
[0011]胰島素易受胃酸及消化道各種蛋白水解酶的破壞，且因分子量大難以穿透胃腸粘膜屏障，常規口服制劑無效，皮下注射仍是目前最主要的給藥途徑，長期頻繁的注射患者順應性差。在過去的幾十年中，國內外醫藥工作者為克服頻繁注射的順應性問題，開展了大量研究，一方面是通過結構修飾，制備中效和長效胰島素，延長了藥效維持時間，減少注射次數，另一方面是通過藥劑學技術方法，制備脂質體、納米粒、微球、微乳或油溶液，提高藥物對抗酸堿及生物酶的穩定性、促進藥物經上皮粘膜的轉運與吸收，為口服、經皮、粘膜、肺部吸入等非注射給藥制劑的發展提供釋藥載體。
[0012]由于胰島素親脂性差，限制了微粒載體的制備與發展。胰島素脂質體是國內外報道最多的微粒載體，但由于胰島素分子量大，親水性強，藥物大多存在于磷脂雙分子膜的外圍，包封率低，易發生泄漏，對胃腸穩定性及粘膜透過性的改善程度有限；而納米粒、微球的制備大多是在有機溶劑系統中進行的，而胰島素難溶于有機溶劑，包封率極低，且僅吸附于微粒表面，給藥后藥物易發生突釋，穩定化效果同樣較差；現有文獻報道的微乳或自微乳，均將胰島素溶于水相，無法避免藥物與胃酸及生物酶的接觸，不利于提高胃腸環境中的穩定性。
[0013]胰島素分子中含有大量的酰氨基、酚羥基、羥基、羰基等極性基團，均有可能與脂質材料的親水端發生分子間相互作用形成脂質復合物，從而改善其親脂性，突破微粒載體制備的限制。近年來，關于胰島素脂質復合物的研究成為國內外關注的熱點。但胰島素的親脂性較差，同樣限制了脂質復合物的制備，國內外文獻報道和專利普遍存在復合率低、質量不穩定的缺陷。
[0014]2.2現有技術的不足與缺陷
[0015]胰島素由A、B兩個肽鏈組成，分子量接近6千，介于多肽和蛋白質之間。人胰島素(Insulin Human) A鏈有11種21個氨基酸，B鏈有15種30個氨基酸，共26種51個氨基酸組成。胰島素不溶于水及有機溶劑，但可溶于酸性稀醇、PH7.4的磷酸鹽緩沖液、稀酸和稀堿中。
[0016]胰島素中含有大量的可能與脂質材料親水端發生分子間相互作用的極性基團，具備形成脂質復合物的條件。但胰島素的蛋白質類結構特征及理化性質特點，使得脂質復合物的制備極其困難，最大的障礙就是復合溶劑的選擇。
[0017]有機溶劑尤其是非質子傳遞溶劑有利于復合反應，但胰島素在有機溶劑中不溶，且有機溶劑有可能導致胰島素降解或構象變化，因此，單純的有機溶劑無法制備胰島素復合物，至今未見文獻報道。如果選用PH7.4的磷酸鹽緩沖液，雖然胰島素具有一定的溶解度且質量穩定，但脂質材料不能夠溶解成澄清透明的溶液，再加上水的極性太大，制得的復合物包封率極低，且分子間作用力極弱，質量不穩定。沃維漢[沃維漢，重組人胰島素復合物、其制備方法及包含該復合物的藥物組合物，中國專利:01140047，2004-10-06]采用磷酸鹽緩沖液為溶劑，將胰島素和磷脂分別溶于或混懸于水溶液中，混合均勻，冷凍干燥去除水分制備磷脂復合物，結果發現，當磷脂與藥物的質量比為25:1(摩爾比約為185:1)時，復合率僅21.35%，150:1(摩爾比約為1110:1)時復合率為72.0%.[0018]理論上分析，胰島素含53個酰氨基，4個酚羥基，12個醇羥基，這些基團都有可能與磷脂復合，則I摩爾的藥物理論上需要約70摩爾的磷脂(重量比約為1:10)。通常，為確保藥物復合完全，脂質材料的投料量應略高于理論值，按理論量的1.5倍計算，脂質材料最大用量應不超過藥物質量的15倍，即磷脂用量應控制在胰島素質量的15倍以下比較經濟合理。但01140047專利技術中，磷脂的質量高達胰島素的150倍時，仍未能完全復合，提示以水為溶劑復合效率太低。[0019]另一公開文件[R*R.C.New，包含中鏈單酸甘油酯的疏水性制劑，中國專利:97196069，1999-07-28]被稱為Macrosol技術，提供了一種含脂質復合物的胰島素油溶液，其脂質復合物的制備方法也是將藥物與雙親性的脂質材料共同溶于緩沖鹽的水相溶劑中，經旋轉蒸發或凍干技術除去溶劑，再溶于油相中制得油溶液(或將復合溶液直接與油混合，再進行冷凍干燥)。其確定的胰島素與磷脂的重量比為1:1至1:20，優選1:2至1: 8，但未提供復合率評價結果。鑒于01140047專利以水為溶劑難以獲得高復合率的復合物，不難推測，97196069專利條件制備的復合物，大部分藥物可能并未與磷脂復合。
[0020]本專利發明人對97196069專利方法進行了驗證。首先根據胰島素復合物在環己烷中易溶、而游離胰島素不溶的特點，建立了復合率測定方法(HPLC方法定量)。根據97196069專利方法制備胰島素磷脂復合物，當胰島素/磷脂質量比為1:2時，復合率低于8% ;質量比為1:8時，復合率未超過21% ;質量比為1:12時，復合率未超過25%。進一步將胰島素/磷脂質量比為1:8和1:12的復合物溶于中鏈油中，攪拌制備藥物濃度為1.5mg/g的中鏈油溶液，室溫下放置I個月和冰箱(2_8°C )條件下放置3個月，均出現混濁現象。
[0021]雖然97196069專利確定的胰島素/磷脂質量比例與理論值接近，但由于其制備方法中以水為復合溶劑，因此復合率極低，這與01140047專利技術結果相吻合。
[0022]綜合以上兩項專利，以水為溶劑制備胰島素脂質復合物，復合率低，存在明顯缺陷。
[0023]后續一些專利或報道，均在97196069基礎上對溶劑系統進行了改進，選用含有冰醋酸的乙醇、含有冰醋酸的DMS0、或含有稀鹽酸溶液的乙醚等為復合反應的溶劑。與水溶液相比，有機溶劑的極性相對較小，而酸的加入是為了增加胰島素的溶解度，提高復合效率。本專利發明人也進行了驗證試驗 ，結果表明，由于冰醋酸和鹽酸的酸性較強，且不易揮除干凈，制備過程中胰島素含量下降約5-10%，貯存過程中含量繼續下降至20%或更多。
[0024]綜上所述，關于胰島素脂質復合物的制備，現有的專利或文獻方法因溶劑系統選擇的缺陷導致復合效率低、藥物在制備過程中易發生降解、酸性成分或水分的殘留影響貯存過程中的質量穩定性。此外，對藥物/脂質材料用量比例未經科學優化，最終獲得的復合物因復合率低而導致油中溶解度的改善程度有限，制成的油溶液載藥量低且貯存過程中易出現混濁等不穩定現象。

【發明內容】
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[0025]本發明提供了一種胰島素脂質復合物，由胰島素和脂質材料在含低沸點酸的有機溶劑系統中復合而成，復合物中，胰島素與脂質材料的質量比為1:3~1:20 ;優選為1:3~1:15 ;優選地為1:4~1:12 ;更優選地為1:5~1:10。所述復合物的復合率在90%以上。
[0026]本發明的胰島素脂質復合物，胰島素可選自天然胰島素、豬胰島素、牛胰島素、重組人胰島素及各類中、長效胰島素，優選地為重組人胰島素；脂質材料選自天然磷脂、合成磷脂、膽留醇、膽酸及其鹽類的一種或它們的混合物，優選的脂質材料選自天然磷脂，優選的天然磷脂選自蛋黃磷脂或大豆磷脂。
[0027]本發明的胰島素脂質復合物，還可包含一種或多種選自抗氧化劑、金屬螯合劑和蛋白酶抑制劑的其它成分。
[0028]本發明的胰島素脂質復合物，所使用的復合溶劑為含低沸點酸的有機溶劑，其中，低沸點酸選自三氟乙酸和氯化氫氣體中的一種或它們的混合物，有機溶劑為甲醇、四氫呋喃、DMSO、三氯甲烷、二氯甲烷和乙醚中的一種或其混合物。
[0029]本發明的胰島素脂質復合物，可采用如下方法制備:
[0030]方法I)取有機溶劑，先加入適量三氟醋酸等低沸點酸或通入適量氯化氫氣體，再加入胰島素和脂質材料，攪拌使兩者充分復合至形成澄清透明的溶液，旋轉蒸法或噴霧干燥除去有機溶劑，殘余物干燥即得。
[0031]方法2)取有機溶劑，將脂質材料先溶于其中，再加入胰島素，攪拌條件下緩慢通入適量氯化氫氣體或加入適量三氟醋酸，至胰島素完全溶解形成澄清透明的溶液，常溫條件下攪拌或超聲處理一定時間，使胰島素與脂質材料充分復合，旋轉蒸法或噴霧干燥除去有機溶劑，殘余物經干燥即得。
[0032]方法3)將胰島素溶于含適量三氟乙酸等低沸點酸或氯化氫氣體的溶劑A中，制成澄清的胰島素溶液，脂質材料溶于適量的溶劑B中制成澄清的脂質溶液，將胰島素溶液與脂質溶液混合均勻后，水浴減壓旋蒸，再經水泵抽干處理，干燥即得。
[0033]方法4)將胰島素溶于含適量三氟乙酸等低沸點酸或氯化氫氣體的的溶劑A中，制成澄清的胰島素溶液,脂質材料溶于適量的溶劑B中制成澄清的脂質溶液，將胰島素溶液與脂質溶液混合均勻后，在一定溫度下水浴減壓旋蒸，在溶劑蒸除過程中，分次加入適量的溶劑B，繼續旋蒸，水泵抽除溶劑，干燥即得。
[0034]上述的方法I)及方法2)中，所述的“有機溶劑”選自甲醇、四氫呋喃和DMSO中的一種或其混合物，優選地為甲醇。三氟乙酸的加入量或氯化氫氣體的通入量，以能使加入的胰島素完全溶解為準，優選地，酸在有機溶劑中的濃度為0.01-0.5%,優選0.05-0.1 %。(重量/體積，g/ml)
[0035]在上述方法3)及方法4)中，所述的“溶劑A”可選自甲醇、四氫呋喃或DMSO中的任一種溶劑或它們的混合物，優選甲醇；所述的“溶劑B”可選自三氯甲烷、二氯甲烷或乙醚中的一種或其混合物，優選二氯甲烷。三氯醋酸或氯化氫氣體在溶劑A中的濃度約為
0.01-0.5%,優選0.05-0.1 %。溶劑B的用量約為溶劑A的3_8倍，優選4_6倍。
[0036]胰島素與脂質材料的復合溶液中，胰島素的濃度應控制在0.5~30mg/ml，優選1.0~10.0mg/ml。“常溫條件下攪拌或超聲處理一定時間”中的“常溫條件”系指控制在15°C~30°C，例如15°C、20°C、25°C或30°C ;“一定時間”是指控制在30分鐘以內，例如30分鐘、20分鐘、10分鐘或5分鐘。“
[0037]在本發明的制備方法中，去除有機溶的方法可以是旋轉蒸發法，也可以是冷凍干燥法，還可采用其它揮除溶劑的方法，只要能夠將溶劑揮除干凈，并且不影響藥物的穩定性即可。旋轉蒸發法去除溶劑時，應在不超過40°C的條件下進行，具體地說，可以是35°C、30°C或 25°C。
[0038]本發明還提供一種胰島素油溶液的制劑，其包含本發明所述的胰島素脂質復合物和油。其中，油選自長鏈甘油三酸酯(長鏈油)、中鏈甘油酸三酯(中鏈油)、甘油單油酸酯、甘油單甘酯、油酸乙酯、肉豆蘧酸異丙酯中的一種或它們的混合物。
[0039]本發明的包含胰島素脂質復合物的油溶液，其特征在于，油中還可任選地加入選地加入一種或多種選自吐溫80、司盤20、?卞澤、聚氧乙烯氫化蓖麻油(Cremphor RH40)、聚氧乙烯蓖麻油(Cremphor EL35)和Labrosal的乳化劑。[0040]本發明的包含胰島素脂質復合物的油溶液，其特征在于，油中還可任選地加入一種或多種選自丙二醇、PEG400、Transcutol P中的助乳化劑。
[0041]本發明的包含胰島素脂質復合物的油溶液，藥物含量可以是12mg/g，10mg/g,8mg/g, 6mg/g, 5mg/g, 4mg/g, 2mg/g 或更低。
[0042]本發明制備的胰島素脂質復合物，在制備胰島素緩釋注射劑中的應用。
[0043]本發明的包含胰島素脂質復合物的油溶液，在制備胰島素口服、經皮、粘膜和肺部吸入等非注射給藥制劑中的應用。
[0044]本發明還提供了一種胰島素新型囊泡，其包含本發明的胰島素脂質復合物和磷脂，還可加入適量的TWeen20，Span60等一種或幾種混合表面活性劑，平均粒徑約為20nm_200nm。
[0045]本發明包含胰島素脂質復合物的新型囊泡，可以是水分散液，還可以經冷凍干燥或噴霧干燥后制成固體粉末。
[0046]本發明的包含胰島素復合物的新型囊泡，在制備胰島素口服、經皮、粘膜和肺部吸入等非注射給藥制劑中的應用。
[0047]與現有技術方法相比，本發明的復合物具有以下優點:
[0048]I)含低沸點酸的有機溶劑系統作為復合溶劑:復合溶劑中不含水，低沸點的三氟醋酸和氯化氫氣體 易于蒸除，既為胰島素的溶解提供了酸性環境，又縮短了有機溶劑揮除時間；選擇的有機溶劑可保證胰島素與脂質材料的復合溶液澄清，其極性可確保胰島素與脂質材料的復合穩定性，且不影響胰島素的質量穩定，制得的復合物中無酸性物質或水分殘留，復合率在90 %以上，制備及貯存過程中藥物含量無明顯變化。
[0049]2)藥物/脂質材料用量合理:基于復合溶劑的突破，胰島素與脂質材料的質量比為1:3~1:15，即可獲得復合完全的復合物。脂質材料用量與理論推測值相吻合。
[0050]3)制備穩定的油溶液:復合物顯著改善了胰島素的油溶性，制得的油溶液不僅載藥量高，且穩定性好，長期放置不發生混濁，物理性質和化學性質均較穩定。
[0051]4)制備穩定的新型囊泡:復合物顯著改善了胰島素的親脂性，使藥物分布在囊泡的雙分子膜夾層中，藥物在胃腸液中的穩定性及粘膜轉運速率均明顯改善。
[0052]在本發明中，如果沒有特別地指出，本文所用的科學和技術術語以及名稱都具有與本發明所屬領域普通技術人員常規理解相同的意思；并且，如果沒有特別地指出，其中所采用的物質及其含量或比例、裝置、儀器、制備條件等都是本領域技術人員所熟知的或者其根據本發明的描述可得知的。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0053]附圖1:包含胰島素脂質復合物的油溶液及新型囊泡降血糖曲線
[0054]附圖2:磷脂復合物與脂質體結構示意圖
[0055]制各實施例
[0056]1.前期探索性研究結果
[0057]1.1有機溶劑對藥物化學性質及空間結構的影響考察
[0058]本發明人在前期研究工作中，對不同的有機溶劑進行了系統考察，具體方法如下:取胰島素溶液(PH7.4PBS)適量，加入適量的甲醇、乙醇、丙酮、四氫呋喃、乙酸乙酯、乙醚、氯仿，充分混勻放置I小時，氮吹吹干，加入PH7.4的PBS溶液復溶，過濾后進行HPLC測定，以相同濃度的胰島素對照品PBS溶液為對照，依法測定，計算胰島素含量的變化，結果顯示，甲醇中藥物含量無明顯變化，最為穩定，其次為四氫呋喃，而乙醇和丙酮則使藥物含量下降約5-10%，乙醚下降約15%，乙酸乙酯、氯仿和四氫呋喃中下降更為明顯，約30-40%，提示在甲醇和四氫呋喃中胰島素化學性質比較穩定。此外還考察了 DMSO和DMF，由于DMSO和DMF沸點太高，氮吹法難以吹干，因此采用冷凍干燥法去除溶劑，再加入pH7.4的PBS溶液復溶，過濾后同上法進行HPLC測定并計算胰島素含量，結果顯示，DMF使胰島素含量明顯下降，可能與其堿性條件有關，而DMSO質量相對比較穩定。
[0059]進一步按上述甲醇、四氫呋喃和DMSO處理方法操作，去除溶劑后用5mMPBS(pH7.4)溶解成含胰島素0.lmg/ml的供試溶液，照圓二色譜測定法，將供試溶液置于光徑0.1cm的石英樣品池中，于遠紫外區(190nm~250nm)測定,記錄二級結構圖譜的特征峰峰位及最低橢圓率；另將供試溶液置于Icm的樣品池，于近紫外區(250nm~350nm)測定，記錄三級結構圖譜的特征負峰峰位及最低橢圓率。結果表明，三種溶劑處理后的胰島素，二級圖譜均顯示兩個負峰，分別在210nm和223nm左右，最低橢圓率分別為-10.63和-8.45左右；三級圖譜中均有一個負峰，峰位在274.5nm左右，最低橢圓率約為-2.26。與未經有機溶劑處理的胰島素PBS結果相比，無明顯變化，提示甲醇、四氫呋喃和DMSO不會導致空間結構的改變。
[0060]1.2冰醋酸和鹽酸的加入對復合物質量的影響
[0061]現有文獻中，為了使胰島素形成澄清透明的溶液，大多在有機溶劑中加入冰醋酸或鹽酸。
[0062]冰醋酸沸點高，旋轉蒸發耗時長，隨著有機溶劑的揮除，冰醋酸濃度越來越濃，導致胰島素降解或變性。尤其是最終的復合物中殘留的冰醋酸無法去除，會使復合物貯存穩定性變差。這種冰醋酸殘留量較高的復合物，即使溶于油溶液中，藥物含量仍會明顯下降，在最初的24小時含量通常下降。
[0063]本發明人曾選用對胰島素含量沒有影響的甲醇為復合溶劑，加入1-5%的冰醋酸，以藥物/磷脂質量比為1:10制備復合物，35°C旋轉蒸發法去除溶劑，真空條件下干燥48小時，對制得的復合物進行測定，復合率達98%以上，但氣相色譜法測定冰醋酸殘留量超出0.5%。制得的復合物在2-8°C條件下貯存4周后，與初始含量相比，胰島素含量下降約20%。將復合物溶于中鏈油中，室溫放置24小時，與初始含量相比，含量下降約15%。由此提示，冰醋酸的殘留對產品穩定性有極為顯著的影響。
[0064]本發明人進一步用含有稀鹽酸的甲醇溶液作為反應溶劑進行試驗，35°C旋轉蒸發法(溫度達到50°C即對胰島素質量產生明顯影響，通常需控制在40°C以下、且時間不宜過長)，結果發現，因引入了一定的水分，去除溶劑更加困難，復合物成形不好。氣相色譜法測定鹽酸殘留量約0.2 %，在2-8°C條件下貯存4周后，與初始含量相比，復合物中的胰島素含量下降約10%。將復合物溶于中鏈油中，室溫放置24小時，與初始含量相比，含量下降約5%。
[0065]1.3以甲醇(含0.1%三氟乙酸)_ 二氯甲烷為復合溶劑的考察
[0066]以甲醇(含0.1%三氟乙酸)_ 二氯甲烷為溶劑，設定藥物質量濃度為1.5mg/ml，胰島素與大豆磷脂的投料比分別為1:1，1:3，1:5，1:7.5，I:10,1:15和1:20(w/w)。將胰島素溶于甲醇中，磷脂加入二氯甲烷中，然后將兩者混合，旋轉蒸發除去溶劑，水浴溫度為37°C，氮吹。
[0067]照如下方法測定復合率及油中溶解度
[0068]?復合率(包封率):利用胰島素復合物在環己環中易溶，而游離胰島素不溶于環己環的特征，進行復合率測定。
[0069]復合物藥物總含暈測定:精密稱取胰島素磷脂復合物適量，用含I %冰醋酸的甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試液；另精密稱取胰島素對照品適量，用PBS(pH7.4)溶液溶解制成濃度為lmg/ml的溶液，再用含I %冰醋酸的甲醇稀釋成濃度為0.2mg/mL的溶液作為對照液。分別精密量取供試液和對照液各10 μ L，照HPLC方法，以0.2% TFA:乙腈=70:30 為流動相，柱溫 30°C，流速 lmL/min，波長 214nm，色譜柱為 Agilent Z0RBAX300SB-C8,依法測定，根據峰面積按外標法計算復合中的藥物總含量，記為W,6。
[0070]復合物中與磷脂結合的藥物含暈測定:精密稱取胰島素磷脂復合物適量(含胰島素約IOmg)，置IOmL容量瓶中，加環己烷溶解并定容，搖勻，經0.45 μ m有機膜濾除未被復合的游離胰島素，精密量取續濾液2mL于IOmL容量瓶中，氮吹除去溶劑，加入含I %冰醋酸的甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，照上述HPLC方法依法測定，按外標法計算溶液中的藥物含量，記為W復合。
[0071]復合率按下式計算:復合率％= (fffi^/ff,6)X100%
[0072]?油中溶解度:分別取適量的胰島素及磷脂復合物，加入大豆油或中鏈油，置30°C磁力攪拌器中，攪拌6h使充分混合、溶解，30°C放置24h，觀察藥物是否析出，如無藥物析出，再加適量胰島素磷脂復合物，同法操作，直至藥物析出。取樣5mL，用0.45 μ m濾膜過濾，取續濾液用1%醋酸甲醇稀釋適宜倍數，照HPLC依法測定，計算大豆油及中鏈油中的表觀溶解度。
[0073]7組復合物測定結果如下表所示:
[0074]藥物與磷脂比例對復合物的影響
[0075]
【權利要求】
1.一種胰島素脂質復合物，其特征在于，所述的胰島素脂質復合物由胰島素和脂質材料復合而成，復合物中胰島素與脂質材料的質量比例為1:3~1:20，所述復合物的復合率在90 以上。
2.根據權利要求1的胰島素脂質復合物，其特征在于， 所述的胰島素選自天然胰島素和重組人胰島素中至少一種； 所述的脂質材料選自天然磷脂、合成磷脂、膽留醇、膽酸及其鹽類中至少一種。
3.根據權利要求1的胰島素脂質復合物，其特征在于， 所述的胰島素選自豬胰島素和牛胰島素中至少一種； 所述的脂質材料選自天然磷脂、合成磷脂、膽留醇、膽酸及其鹽類中至少一種。
4.根據權利要求1的胰島素脂質復合物，其特征在于， 所述的胰島素選自中效胰島素和長效胰島素中至少一種； 所述的脂質材料選自天然磷脂、合成磷脂、膽留醇、膽酸及其鹽類中至少一種。
5.根據權利要求2的胰島素脂質復合物，其特征在于， 所述的胰島素選自重組人胰島素，所述的脂質材料選自天然磷脂，并且胰島素與天然磷脂的質量比為1:5~1:10。
6.根據權利要求1-5中任一項的胰島素脂質復合物，其特征在于，所述的胰島素脂質復合物還包含選自抗氧化劑、金屬螯合劑或蛋白酶抑制劑中至少一種。
7.根據權利要求1-5的胰島素脂質復合物，其特征在于， 所述的有機溶劑選自甲醇、四氫呋喃、DMSO、三氯甲烷、二氯甲烷和乙醚中的一種或其混合物。
8.一種胰島素脂質復合物油溶液，其特征在于，含有權利要求1-7中任一項的胰島素脂質復合物和油。
9.根據權利要求8的胰島素脂質復合物油溶液，其特征在于，所述的油含有乳化劑。
10.根據權利要求9的胰島素脂質復合物油溶液，其特征在于，所述的乳化劑選自吐溫80、司盤20、?卞澤、聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚氧乙烯蓖麻油和Labrosal中至少一種。
11.根據權利要求8-10中任一項的胰島素脂質復合物油溶液，其特征在于，所述的油中還含有助乳化劑。
12.根據權利要求11的胰島素脂質復合物油溶液，其特征在于，所述的助乳化劑劑選自丙二醇、PEG400、Transcutol P 中至少一種。
13.根據權利要求8的胰島素脂質復合物油溶液，其特征在于，所述的油選自長鏈甘油三酸酯、中鏈甘油酸三酯、甘油單油酸酯、甘油單甘酯、油酸乙酯、肉豆蘧酸異丙酯中的一種或它們的混合物。
14.根據權利要求13的胰島素脂質復合物油溶液，其特征在于，所述的油含有乳化劑。
15.根據權利要求14的胰島素脂質復合物油溶液，其特征在于，所述的乳化劑選自吐溫80、司盤20、?卞澤、聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚氧乙烯蓖麻油和Labrosal中至少一種。
16.根據權利要求13-15中任一項的胰島素脂質復合物油溶液，其特征在于，所述的油中還含有助乳化劑。
17.根據權利要求16的胰島素脂質復合物油溶液，其特征在于，所述的助乳化劑劑選自丙 二醇、PEG400、Transcutol P 中至少一種。
18.權利要求8-17任一項的胰島素脂質復合物油溶液在制備胰島素緩釋注射劑中的應用。
19.權利要求8-17任一項的胰島素脂質復合物油溶液在制備胰島素口服、經皮、粘膜和肺部吸入非注射給藥制劑中的應用。
20.一種胰島素新型囊泡，其特征在于，含有權利要求1-7中任一項的胰島素脂質復合物和磷脂。
21.根據權利要求20的胰島素新型囊泡，其特征在于，還含有表面活性劑。
22.根據權利要求21的胰島素新型囊泡，其特征在于，所述的表面活性劑選自Tween20> Span60 中至少一種。
23.根據權利要求20-22中任一項的胰島素新型囊泡，其特征在于，所述的囊泡可以是水分散液，還可以經冷凍干燥或噴霧干燥后制成固體粉末。
24.權利要求20-23中任一項的胰島素新型囊泡在制備胰島素口服、經皮、粘膜和肺部吸入非注射給藥制劑中的應用。
25.制備權利 要求1至7中任一項的胰島素脂質復合物的方法，包括如下步驟:取有機溶劑，先加入或通入適量的低沸點酸，再加入胰島素和脂質材料，攪拌使兩者充分復合至形成澄清透明的溶液，旋轉蒸法或噴霧干燥除去有機溶劑，殘余物干燥即得； 該制備方法的有機溶劑可選自甲醇、四氫呋喃或DMSO中的任一種溶劑或它們的混合物。
26.根據權利要求25的方法，其特征在于，所述的有機溶劑選自甲醇。
27.制備權利要求1至7中任一項的胰島素脂質復合物的方法，包括如下步驟:將脂質材料先溶于有機溶劑中，再加入胰島素，攪拌條件下緩慢加入或通入適量低沸點酸，至胰島素完全溶解形成澄清透明的溶液，常溫條件下攪拌或超聲處理一定時間，使胰島素與脂質材料充分復合，旋轉蒸法或噴霧干燥除去有機溶劑，殘余物經干燥即得； 該制備方法的有機溶劑可選自甲醇、四氫呋喃或DMSO中的任一種溶劑或它們的混合物。
28.根據權利要求27的方法，其特征在于，所述的有機溶劑選自甲醇。
29.制備權利要求1至7中任一項的胰島素脂質復合物的方法，包括如下步驟:將胰島素溶于含適量低沸點酸的溶劑A中制成澄清的胰島素溶液，脂質材料溶于適量的溶劑B中制成澄清的脂質溶液，將胰島素溶液與脂質溶液混合均勻后，水浴減壓旋蒸，再經水泵抽干處理，干燥即得； 該制備方法中，溶劑A可選自甲醇、四氫呋喃或DMSO中的任一種溶劑或它們的混合物；溶劑B可選自三氯甲烷、二氯甲烷或乙醚中的一種或其混合物。
30.根據權利要求29的方法，其特征在于，所述的溶劑A選自甲醇；所述的溶劑B選自二氯甲烷。
31.制備權利要求1至7中任一項的胰島素脂質復合物的方法，包括如下步驟:將胰島素溶于含適量低沸點酸的溶劑A中制成澄清的胰島素溶液，脂質材料溶于適量的溶劑B中制成澄清的脂質溶液，將胰島素溶液與脂質溶液混合均勻后，在一定溫度下水浴減壓旋蒸，旋蒸過程中分次加入適量的溶劑B，繼續旋蒸，水泵抽除溶劑，干燥即得； 該制備方法中，溶劑A可選自甲醇、四氫呋喃或DMSO中的任一種溶劑或它們的混合物；溶劑B可選自三氯甲烷、二氯甲烷或乙醚中的一種或其混合物。
32.根據權利要求31的方法，其特征在于，所述的溶劑A選自甲醇；所述的溶劑B選自 二氯甲烷。
【文檔編號】A61K47/24GK104001159SQ201410174195
【公開日】2014年8月27日 申請日期:2011年7月14日 優先權日:2010年7月14日
【發明者】劉玉玲, 宋智慧, 周翠萍, 李琳, 王洪亮, 夏學軍, 汪仁蕓, 董武軍, 金篤嘉 申請人:中國醫學科學院藥物研究所