一種具有抗耐藥性革蘭陽性細菌作用的藥物組合物的制作方法
【專利摘要】本發明涉及醫藥領域，具體涉及一種協同抗耐藥性革蘭陽性細菌的藥物組合物，具有抗耐藥性金黃色葡萄球菌感染的作用。其特征是將多肽Cbf-14與選自氨芐青霉素、頭孢他啶、萬古霉素的抗生素聯用，用于治療耐藥或多藥耐藥的金黃色葡萄球菌引起的感染。本發明采用棋盤法、殺菌曲線法驗證多肽Cbf-14與抗生素聯用的體外抗菌活性。結果表明，Cbf-14分別與氨芐青霉素、頭孢他啶或萬古霉素聯用組成的藥物組合物對耐藥性金黃色葡萄球具有顯著的抗菌活性，可用于臨床治療耐藥性金黃色葡萄球菌感染。
【專利說明】一種具有抗耐藥性革蘭陽性細菌作用的藥物組合物
【技術領域】
[0001]本發明涉及藥物【技術領域】，具體涉及協同抗耐藥性革蘭陽性細菌的藥物組合物。該藥物組合物含有多肽cbf-14和選自氨芐青霉素、頭孢他啶或萬古霉素在內的抗生素。本發明的藥物組合物具有協同抗耐藥性革蘭陽性細菌感染的用途。
【背景技術】
[0002]抗生素的發現使人們進入了控制、治療細菌感染性疾病的時代。但是大量廣譜抗生素的使用同時加強了對致病菌的篩選作用，加速了致病菌的進化，使得細菌的耐藥率逐步增加。自發耐藥突變的存在與抗生素選擇壓力的持續作用，以及病原菌的環境適應能力與人體微環境生態變化的進化催動，是臨床上耐藥菌和多重耐藥菌產生的基礎。金黃色葡萄球菌(SA)是醫院感染的主要病原菌之一，特別是耐甲氧西林的金葡菌(MRSA)感染有逐年上升的趨勢，是臨床面臨的嚴峻問題。MRSA的耐藥性主要表現為耐受青霉素，頭孢他啶等多種β -內酰胺類抗菌藥物，而萬古霉素對于多種細菌，包括對MRSA的敏感性遠高于其他藥物。但是，由于近年MRSA對于萬古霉素的敏感性降低，已出現萬古霉素耐藥菌，萬古霉素這一優勢受到挑戰。因此，單一抗生素治療多藥耐藥菌的感染已經無法達到令人滿意的療效。
[0003]氨芐青霉素、頭孢他啶是兩種常見的β -內酰胺類抗生素。β -內酰胺類抗生素能抑制胞壁粘肽合成酶，即青霉素結合蛋白(PBPs)，從而阻礙細胞壁粘肽合成，使細菌胞壁缺損，菌體膨脹裂解。而哺乳動物無細胞壁，不受內酰胺類藥物的影響。所以，此類抗生素具有殺菌活性強、毒性低、適應癥廣及臨床療效好的優點。但隨著抗生素的大量應用，特別是無指征用藥、 不恰當地選擇備用抗菌藥、過度治療及頻繁換藥，導致細菌的耐藥率越來越高，耐藥程度越來越嚴重。其中細菌產生內酰胺酶是細菌對內酰胺類抗生素耐藥的主要機制。
[0004]萬古霉素是一種糖肽類窄譜抗生素。主要對革蘭氏陽性菌有效，如金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌(包括耐甲氧西林菌株)以及鏈球菌、棒狀桿菌、梭狀芽孢桿菌、放線菌、鏈球菌屬、牛鏈球菌、腸球菌、類白喉菌等。萬古霉素通過抑制細菌細胞壁的合成而發揮速效殺菌作用，但其作用部位與青霉素類及頭孢菌素類不同，主要為抑制細胞壁糖肽的合成，也可能是改變細菌細胞膜的滲透性，并選擇性地抑制RNA的生物合成。因此，萬古霉素是臨床上治療MRSA感染的首選藥物。但是，由于近年MRSA對于萬古霉素的敏感性降低，已出現萬古霉素耐藥菌，萬古霉素這一優勢受到挑戰。初步研究表明，萬古霉素耐藥金葡菌(VRSA)的細胞壁有增厚現象，可能與其出現耐藥性有關。
[0005]由于抗微生物肽具有廣譜的抗菌活性和廣泛的生物學功能，近年來有關抗微生物肽的研究已經得到廣泛重視。與傳統抗生素相比，多肽具有分子量小、抗菌譜廣、抗菌機理獨特、不易產生耐藥性等優點。大多數抗菌肽具有廣譜殺菌作用，對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌和真菌都有效果。一些抗菌肽還有其他生理活性，抗病毒，抗癌，促進傷口愈合，激活免疫應答等。目前已經應用于臨床的抗菌肽類藥物是Polymyxins和Gramicidin S,用來治療由P.aeruginosa和Acinetobacter baumannii引起的感染，臨床證實其安全及有效,未發現抗藥性，只是由于具有很大的毒性，阻礙了其全身性的使用，只能在局部應用。此外，抗菌肽的作用機理的研究也越來越廣泛。抗菌肽的作用機理有很多種，有些可以使細胞膜透化，有些作用于細胞壁，還有一些抑制細胞內大分子的合成。
[0006]多肽Cbf-14是發明人前期依據Cathelicidin家族的抗菌多肽，將其部分活性氨基酸位點進行突變，采用固相化學合成法獲得對青霉素耐藥性細菌具有高抑制活性的抗菌多肽，其具有SEQ ID No:1所示的氨基酸序列。其含有14個氨基酸，7個正電荷，分子量為1819.33，等電點為12.31。其全序列為:精氨酸_亮氨酸_亮氨酸_精氨酸_賴氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-精氨酸-賴氨酸-亮氨酸-賴氨酸-賴氨酸-絲氨酸-纈氨酸。體外抗菌活性研究表明，Cbf-14具有顯著的殺滅耐藥性細菌的作用。公開于中國專利CN103435686A中。
【發明內容】
[0007]本發明針對傳統抗生素對耐藥細菌敏感性下降的不足，提出一種抗耐藥性革蘭陽性細菌的藥物組合物，能有效地預防和治療耐藥或多藥耐藥的金黃色葡萄球菌引起的感染，如肺炎、敗血癥等臨床疾病。
[0008]本發明公開了一種多肽Cbf-14與抗生素的復方藥物組合物，由藥物活性組分和藥學上可接受的載體組成，其中藥物活性組分含序列為SEQ ID No:1的多肽(即多肽Cbf-14)及選自氨芐青霉素、頭孢他啶或萬古霉素中的任一組分，構成復方藥物。
[0009]多肽Cbf-14與選自氨芐青霉素、頭孢他啶或萬古霉素中的任一組分的重量比優選4:1-1:4。更優選1:1_1:2。最優選1:1。
[0010]可通過常規的操作手段，向藥物活性組分中直接或間接加入藥學上可接受的輔料制成膠囊劑、顆粒劑、丸劑、散劑、片劑、口服液、糖漿、口崩片、含漱液、細粒劑、粉末、或者注射劑等劑型供臨床應用。
[0011]下面是本發明的部分抗菌試驗及結果:
[0012]一、多肽cbf-14及氨芐青霉素、頭孢他啶、萬古霉素三種抗生素對耐藥性細菌的藥效:
[0013](I)接種物的制備
[0014]將實驗用細菌從甘油管中接至營養瓊脂斜面，37°C培養過夜后，再挑取少許接種于2ml營養肉湯培養基，37°C培養8h，用無菌MH肉湯培養液稀釋成105CFU/ml左右的細菌懸液。
[0015](2)藥物的配置
[0016]精確稱取一定量的Cbf-14及氨芐青霉素、頭孢他啶、萬古霉素，配置成濃度為1024 μ g/ml的藥物溶液，0.22 um膜無菌過濾，分裝，置_70°C保藏備用。
[0017](3)最小抑菌濃度(MIC)的測定
[0018] 用無菌MH肉湯培養液將藥物原液倍比稀釋成Iml含藥濃度為512、256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5,0.25 μ g/ml的溶液。取Iml的上述菌液加至制備好的含藥培養基中，此時，各試管中藥物濃度分別為 256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5,0.25,0.125 μ g/ml。另設不含藥組作為對照。置37°C培養箱中培養16~20h，觀察抗菌效果，并記錄MIC值。結果見表1:
[0019]表lCbf-14與抗生素單獨及聯用抗耐藥性細菌臨床株及標準株的MIC
[0020]
【權利要求】
1.一種抗耐藥性革蘭陽性細菌的藥物組合物，由藥物活性組分和藥學上可接受的載體組成，其中藥物活性組分含序列為SEQ ID No:1的多肽及選自氨芐青霉素、頭孢他啶或萬古霉素中的任一組分。
2.權利要求1的藥物組合物，其中序列為SEQID No:1的多肽與選自氨芐青霉素、頭孢他啶或萬古霉素中的任一組分的重量比為4:1-1:4。
3.權利要求2的藥物組合物，其中序列為SEQID No:1的多肽與選自氨芐青霉素、頭孢他啶或萬古霉素中的任一組分的重量比為1:1-1:2。
4.權利要求3的藥物組合物，其中序列為SEQID No:1的多肽與選自氨芐青霉素、頭孢他啶或萬古霉素中的任一組分的重量比為1:1。
5.權利要求1的藥物組合物，其中耐藥性革蘭陽性細菌是耐藥性金黃色葡萄球菌。
6.權利要求1的藥物組合 物用于制備治療抗耐藥性革蘭陽性細菌感染的疾病的用途。
【文檔編號】A61K31/546GK103920137SQ201410175880
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2014年4月28日 優先權日:2014年4月28日
【發明者】周長林, 王嫣蓉, 李博, 田玉偉, 王慧, 竇潔, 賈源賓 申請人:中國藥科大學, 南京映海月生物科技有限公司