一種雪菊多糖口服液及其生產方法
【專利摘要】本發明公開了一種生產雪菊多糖口服液的方法。以雪菊粉為原料與水按質量體積比1：30的比例攪拌均勻，經恒溫水浴后進行超聲處理，超聲處理溫度為55℃，時間15min，功率160w，雪菊溶液進行酶解時纖維素酶的用量為1%，果膠酶的用量為1%，木瓜蛋白酶的用量為1.5%，酶促時間為3h，溫度55℃，經滅酶進行離心得到上清液經聚酰胺柱層析，流出液加蒸餾水進行調配，流出液與蒸餾水按重量體積比1:0.8，將調配好的溶液調配、灌裝、滅菌、包裝，得到雪菊多糖口服液具有明顯的抑菌作用，明顯對自由基DPPH、羥基自由基具有清除能力和還原能力，明顯具有提高機體的免疫功能，具有廣泛的應用價值。
【專利說明】一種雪菊多糖口服液及其生產方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及雪菊多糖口服液制備【技術領域】。具體的說，本發明涉及一種生產制備 具有抑菌、抗氧化、提高人體免疫力的雪菊多糖口服液【技術領域】。
【背景技術】
[0002] 雪菊生長在海拔2600米以上的昆侖山脈，是目前新疆唯一與雪蓮齊名，具有獨特 功效的稀有高寒植物。花瓣呈金黃色，球形花蕊呈棕色。最高等級的雪菊是指生長在海拔 3000米左右的高寒地區的維秘昆侖雪菊，稱之"高海拔昆侖雪菊"。目前，已從雪菊中分離 鑒定出20余類，300多種天然成分，其中包括30多種黃酮類物質，30多種人體必需的礦物 元素，20多種氨基酸，數十種芳香族化合物，還有豐富的有機酸、萜烯類、維生素、木質素、醇 類、多糖等生物活性的天然成分。雪菊具有清熱解毒、活血化瘀、清肝明目、益肝補陰、潤腸 通便等功效，降血壓降血脂以及抗氧化能力效果非常好，因此新疆維吾爾族人民在日常生 活中常選用雪菊當茶飲用。雪菊的功效與其所含的多糖成分有很大的關系。
[0003] 當前，多糖提取的研究主要集中在傳統熱水提取，近年來出現了超聲、微波新型輔 助提取技術以及生物復合酶解技術提取多糖；多糖純化的研究主要集中在離子交換柱層 析和凝膠柱層析法的研究，采用聚酰胺柱層析技術純化多糖的報道很少見；多糖口服液的 生產主要集中在加入其它的成分，而未見純雪菊多糖生產的口服液，這種生產雪菊多糖口 服液的方法具有純度高和功效好等多種優越性，對開發一種雪菊多糖口服液法具有重要意 義；對于物質的效價分析，目前的研究多集中在某種物質中單一成分具有的功能性，而對于 產品具有的功效的研究很少見，但是進入市場的是以產品的方式，因此產品的功效更加具 有價值。
【發明內容】
[0004] 針對目前沒有對功能性雪菊多糖口服液進行研究分析的現狀。本發明的目的是采 用生物復合酶解技術和超聲波技術提取并采用聚酰胺柱層析技術純化雪菊多糖，灌裝、滅 菌、包裝的方法生產雪菊多糖口服液，并對此產品進行功效評價，不僅解決了目前只是對單 一成分進行效價分析的問題，還為雪菊加工企業提升技術水平提供了切實可行的方法。
[0005] 本發明具體提供了生產雪菊多糖口服液的方法，并進行了產品的效價分析，具體 步驟如下： (1)挑選勻整度高、花骨飽滿、花蕊花瓣色澤橙黃、不含葉梗、花蕊細末或其他非雪菊類 的雜質的干制雪菊，將選好的雪菊粉碎，粉碎后的雪菊粉末的粒度在100目。
[0006] (2)雪菊粉末與水按質量體積比1 :30的比例，將水加入到步驟（1)的雪菊粉末中， 用玻璃棒攪拌均勻，放入到恒溫水浴裝置內預熱半小時，恒溫水浴溫度是55°C。
[0007] (3)將上述步驟（2)處理后的溶液進行超聲處理，超聲處理時的溫度為55°C，時間 15min，功率 160w。
[0008] (4)將上述步驟（3)超聲處理后的雪菊溶液倒入到酶反應器內，在酶反應器內加入 纖維素酶、果膠酶和木瓜蛋白酶；纖維素酶的用量為雪菊粉末質量的1%，果膠酶的用量為 雪菊粉末質量的1°/。，木瓜蛋白酶的用量為雪菊粉末質量的1. 5%，酶促反應的時間為3h，溫 度55°C，pH值自然。
[0009] (5)酶反應結束后將酶反應器內的雪菊溶液滅酶處理，滅酶的溫度為100°C,時間 為5min，使溶液內的酶失活。
[0010] (6)將步驟（5)滅酶后的溶液進行離心處理，離心的時間為15min，轉速為3500r/ min,得到上清液。
[0011] (7)將步驟（6)得到的上清液過聚酰胺柱，在過柱之前聚酰胺需要進行預處理，將 上清液加入到聚酰胺柱中，加上清液時要沿著柱子的壁緩慢的加入，以防聚酰胺飄起來，用 一倍體積的蒸餾水進行洗脫，收集流出液；聚酰胺預處理采用95%的乙醇浸泡過夜，浸泡過 夜后的聚酰胺裝入柱中用蒸餾水進行洗滌，將乙醇洗凈為止，再次用5%的氫氧化鈉進行浸 泡，浸泡6個小時，再次用蒸餾水進行洗滌，直到洗到中性為止，將洗到中性的聚酰胺用10% 的醋酸浸泡2-3個小時，然后用蒸餾水洗到中性以后的聚酰胺就可以進行裝柱、層析。
[0012] (8)將步驟（7)得到的流出液加蒸餾水進行調配，流出液與蒸餾水按重量體積比 1:0. 8,將調配好的溶液進行灌裝、滅菌包裝，即為制備的雪菊多糖口服液。
[0013] 本發明提供一種雪菊多糖口服液，雪菊多糖口服液由雪菊多糖、水、山梨酸鉀組 成，其中，含有雪菊多糖1%-1. 5%，山梨酸鉀< 0. 1%，余量為水。
[0014] 本發明采用的超聲技術、生物復合酶解技術、聚酰胺層析技術、調配及滅菌等技 術，這些技術環節具有上下一體，緊密不可分割的特點。通過超聲技術和生物復合酶解技術 將雪菊的細胞進行破碎，使雪菊中多糖物質充分的被浸提出來，達到雪菊的充分利用，而不 造成雪菊的浪費。同時利用聚酰胺柱層析技術脫去粗雪菊多糖中的色素、蛋白質等雜質，且 聚酰胺的脫色效果較粉末活性炭、顆粒活性炭、吸附樹脂的脫色效果好，雪菊多糖的回收利 用率也較高，可以制的較純的雪菊多糖口服液。
[0015] 本發明制備的雪菊多糖口服液具有如下典型的質量指標和相應的口感指標： 1、感官指標：色澤：透明，無懸浮狀的雜質，滋味：具有多糖特有的口味。
[0016] 2、理化指標：雪菊多糖的含量在1 % - 1. 5%之間，山梨酸鉀的添加量低于0. 1%， 蛋白質、核酸、色素等雜質的含量低于5%。
[0017] 通過上述提供的技術方案，與現有技術相比，本發明的具體
【發明內容】
可以達到以 下顯著的技術效果： (1)本發明以雪菊為原料，以水為輔料，采用超聲技術、生物復合酶解技術、滅酶技術、 聚酰胺層析技術、灌裝和滅菌等技術，制備得到具有抑菌作用、抗氧化及提高機體免疫力的 雪菊多糖口服液。
[0018] (2)本發明提供的雪菊多糖口服液的方法具有純度高和功效好等多種優越性，對 開發一種雪菊多糖口服液法具有重要意義；通過對本發明提供的工藝制備的雪菊多糖口服 液產品的效價分析，實驗結果表明，雪菊多糖口服液的抑菌作用顯著（P < 〇. 05)，雪菊多糖 口服液具有明顯的抑菌作用。
[0019] (3)通過對本發明提供的工藝制備的雪菊多糖口服液產品的效價分析，實驗結果 表明，本發明制備的雪菊多糖口服液明顯對自由基DPPH、羥基自由基具有清除能力和還原 能力。
[0020] (4)通過對本發明提供的工藝制備的雪菊多糖口服液產品的效價分析，實驗結果 表明，表明本發明制備的雪菊多糖口服液明顯具有提高機體的免疫功能，對于機體免疫力 低下的人群可以適當的飲用。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0021] 圖1顯示為生產雪菊多糖口服液的工藝流程圖。
【具體實施方式】
[0022] 下面結合具體實施例進一步闡明本發明，當然，這些實施例僅用于說明本發明。
[0023] 本發明中涉及到的主要原輔材料、試劑和儀器設備：主要原輔材料：雪菊、蒸餾 水、山梨酸鉀。
[0024] 主要儀器與試劑：粉碎機、玻璃棒、酶反應器、恒溫水浴鍋、超聲破碎儀、纖維素酶、 木瓜蛋白酶、果膠酶。
[0025] 本發明中選用的所有試劑和儀器都為本領域熟知選用的，但不限制本發明的實 施，其他本領域熟知的一些試劑和設備都可適用于本發明以下實施方式的實施。
[0026] 實施例一：雪菊多糖口服液的制備 參見附圖1，雪菊多糖口服液通過以下具體步驟制備獲得： (1)挑選勻整度高、花骨飽滿、花蕊花瓣色澤橙黃、不含葉梗、花蕊細末或其他非雪菊類 的雜質的干制雪菊，將選好的雪菊粉碎，粉碎后的雪菊粉末的粒度在100目。
[0027] (2)雪菊粉末與水按質量體積比1 :30的比例，將水加入到步驟（1)的雪菊粉末中， 用玻璃棒攪拌均勻，放入到恒溫水浴裝置內預熱半小時，恒溫水浴溫度是55°C。
[0028] (3)將上述步驟（2)處理后的溶液進行超聲處理，超聲處理時的溫度為55°C，時間 15min，功率 160w。
[0029] (4)將上述步驟（3)超聲處理后的雪菊溶液倒入到酶反應器內，在酶反應器內加入 纖維素酶、果膠酶和木瓜蛋白酶；纖維素酶的用量為雪菊粉末質量的1%，果膠酶的用量為 雪菊粉末質量的1°/。，木瓜蛋白酶的用量為雪菊粉末質量的1. 5%，酶促反應的時間為3h，溫 度55°C，pH值自然。
[0030] (5)酶反應結束后將酶反應器內的雪菊溶液滅酶處理，滅酶的溫度為100°C,時間 為5min，使溶液內的酶失活。
[0031] (6)將步驟（5)滅酶后的溶液進行離心處理，離心的時間為15min，轉速為3500r/ min,得到上清液。
[0032] (7)將步驟（6)得到的上清液過聚酰胺柱，在過柱之前聚酰胺需要進行預處理，將 上清液加入到聚酰胺柱中，加上清液時要沿著柱子的壁緩慢的加入，以防聚酰胺飄起來，用 一倍體積的蒸餾水進行洗脫，收集流出液；聚酰胺預處理采用95%的乙醇浸泡過夜，浸泡過 夜后的聚酰胺裝入柱中用蒸餾水進行洗滌，將乙醇洗凈為止，再次用5%的氫氧化鈉進行浸 泡，浸泡6個小時，再次用蒸餾水進行洗滌，直到洗到中性為止，將洗到中性的聚酰胺用10% 的醋酸浸泡2-3個小時，然后用蒸餾水洗到中性以后的聚酰胺就可以進行裝柱、層析。
[0033] (8)將步驟（7)得到的流出液加蒸餾水進行調配，流出液與蒸餾水按重量體積比 1:0. 8,將調配好的溶液進行灌裝、滅菌包裝，即為制備的雪菊多糖口服液。
[0034] 經上述工藝制備的雪菊多糖口服液具有如下典型的質量指標和相應的口感指 標： 1、感官指標：色澤：透明，無懸浮狀的雜質，滋味：具有多糖特有的口味。
[0035] 2、理化指標：雪菊多糖的含量在1 % - 1. 5%之間，山梨酸鉀的添加量低于0. 1%， 蛋白質、核酸、色素等雜質的含量低于5%。
[0036] 3、制備的雪菊多糖口服液由雪菊多糖、水、山梨酸鉀組成，其中，含有雪菊多糖 1%-1. 5%，山梨酸鉀< 0. 1%，余量為水。
[0037] 實施例二：雪菊多糖口服液的制備 為了進一步說明本發明，以5g雪菊為例。
[0038] (1)挑選5g勻整度高、花骨飽滿、花蕊花瓣色澤橙黃、不含葉梗、花蕊細末或其他 非雪菊類的雜質的干制雪菊，將選好的5g雪菊在萬能粉碎機內粉碎，粉碎后的雪菊粉末的 粒度在100目左右。
[0039] (2)在粉碎好的雪菊粉末中加入150ml的蒸餾水，用玻璃棒攪拌均勻，放入到已經 加熱到55°C恒溫水浴鍋內預熱半小時。
[0040] (3)將上述步驟（2)處理后的溶液利用超聲波破碎儀進行超聲處理，超聲處理時的 溫度為55°C，時間15min，功率160w。
[0041] (4)將上述步驟（3)處理后的雪菊溶液倒入到酶反應器內，在酶反應器內加入纖維 素酶、果膠酶和木瓜蛋白酶。纖維素酶為〇. 〇5g，果膠酶的用量0. 05g，木瓜蛋白酶的用量為 0· 075g，酶促反應3h，溫度55°C，pH值自然。
[0042] (5)酶反應結束后將酶反應器內的雪菊溶液滅酶處理，滅酶的溫度為100°C,時間 為5min，使溶液內的酶失活。
[0043] (6)將步驟（5)結束后的浸提液進行離心處理，離心的時間為15min，轉速為 3500r/min,得到上清液。
[0044] (7)將步驟（6)得到的上清液過聚酰胺柱，在過柱之前聚酰胺需要進行預處理，將 聚酰胺加入柱中，聚酰胺占柱體積的1/2,柱子的規格為40x580mm，加上清液時要沿著柱子 的壁緩慢的加入，以防聚酰胺飄起來，用300ml的蒸餾水進行洗脫，收集流出液；新購買的 聚酰胺用95%的乙醇浸泡過夜，浸泡過夜后的聚酰胺裝入柱中用蒸餾水進行洗滌，將乙醇 洗凈為止。再次用5%的氫氧化鈉進行浸泡，浸泡時間在6個小時左右，再次用蒸餾水進行 洗滌，直到洗到中性為止。將洗到中性的聚酰胺用10%的醋酸浸泡2-3個小時，然后用蒸餾 水洗到中性以后的聚酰胺就可以進行裝柱、層析。
[0045] (8)在流出液中加入240ml的蒸餾水、0. 05g的山梨酸鉀進行調配，將調配好的溶 液進行灌裝，每l〇ml為一瓶。
[0046] (9)將步驟（8)裝好的口服液在滅菌鍋內滅菌，溫度121°C，15min。冷卻到室溫， 即為成品。
[0047] 實施例三：雪菊多糖口服液的效價分析實驗 雪菊多糖口服液具有抑菌作用： 在無菌操作臺上將金黃色葡萄球菌均勻的涂布在盛有牛肉膏蛋白胨的平板培養基上， 將平板分成四份，在一對對角的位置將浸有上述實施例制備的雪菊多糖口服液的濾紙片貼 在平板上，另一對對角的位置將浸有無菌生理鹽水的濾紙片貼在平板上。做三個平行。將 平板在37°C下的恒溫培養箱內培養24h。通過觀察并測定抑菌圈的直徑來比較抑菌作用的 大小。實驗結果表明，雪菊多糖口服液的抑制金黃色葡萄球菌生長的作用顯著（P < 0. 05)。 同理，處理黑曲霉。黑曲霉的培養基為馬鈴薯蔗糖培養基。黑曲霉在28°C下培養48h。實 驗結果表明，雪菊多糖口服液的抑制黑曲霉生長的作用顯著（P < 0. 05)。因此，本發明制備 的雪菊多糖口服液具有明顯的抑菌作用。
[0048] 雪菊多糖口服液的抗氧化作用： 上述實施例制備的雪菊多糖口服液對自由基DPPH、羥基自由基的清除能力，以及雪菊 多糖口服液的還原能力（普魯士蘭法)。以Vc作為對照。雪菊多糖口服液的抗氧化能力低 于Vc，但是雪菊多糖口服液對自由基DPPH、羥基自由基具有一定的清除能力以及一定的還 原能力。表明本發明制備的雪菊多糖口服液明顯對自由基DPPH、羥基自由基具有清除能力 和還原能力。
[0049] 雪菊多糖口服液的提高機體免疫力的動物實驗： 小鼠為昆明種小鼠，體重在19-24g，每天給小鼠灌胃lml的上述實施例制備的雪菊多 糖口服液，連續灌胃30d，陰性對照組給予去離子水。實驗測定的指標：免疫器官、半數溶血 值及PFC的測定：給小鼠腹腔注射2%(v/v)綿羊紅細胞5d后，摘其眼球取血，進行血清半數 溶血值的測定，然后處死動物，取胸腺，脾臟稱重，計算臟/體的比值；脾淋巴細胞的轉化實 驗：小鼠無菌取脾，制成脾細胞懸液，用RPMI1640完全培養液調整細胞濃度為2X1000000 個/ml，按照MTT法在570nm波長測定吸光度值，用加 ConA孔的吸光度值減去不加 ConA孔 的吸光度值代表淋巴細胞的增殖能力；腹腔內巨噬細胞吞噬功能的測定：給小鼠腹腔注射 2%( v/v)綿羊紅細胞4d后，經腹腔注射給予小鼠2mlHanks液，立即處死動物，輕柔腹部30s， 拋開腹壁，暴露腹腔。取腹腔洗液〇. 25ml滴于載玻片上，與油鏡下對每只動物計數100個 巨噬細胞，計算吞噬率和吞噬指數。實驗結果表明：細胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨 噬細胞功能三方面結果為陽性。因此表明本發明制備的雪菊多糖口服液明顯具有提高機體 的免疫功能。
[0050] 以上闡述本發明中的實施例，并不是對本發明作其它形式上的限制，本專業的人 員可以對上述闡述的技術內容進行變更等效實施例。但是只要是沒有脫離本發明技術方案 內容，根據本發明的技術實質，只是對以上實例進行簡單修改、等同變化與改型，仍然屬于 本發明技術的保護范圍。
【權利要求】
1. 一種生產雪菊多糖口服液的方法，其特征在于，所述的生產方法步驟如下： (1) 挑選勻整度高、花骨飽滿、花蕊花瓣色澤橙黃、不含葉梗、花蕊細末或其他非雪菊類 的雜質的干制雪菊，將選好的雪菊粉碎，粉碎后的雪菊粉末的粒度在100目； (2) 雪菊粉末與水按質量體積比1 :30的比例，將水加入到步驟（1)的雪菊粉末中，用玻 璃棒攪拌均勻，放入到恒溫水浴裝置內預熱半小時，恒溫水浴溫度是55°C ; (3) 將上述步驟（2)處理后的溶液進行超聲處理，超聲處理時的溫度為55°C，時間 15min，功率 160w ; (4) 將上述步驟（3)超聲處理后的雪菊溶液倒入到酶反應器內，在酶反應器內加入纖 維素酶、果膠酶和木瓜蛋白酶；纖維素酶的用量為雪菊粉末質量的1%，果膠酶的用量為雪 菊粉末質量的1%，木瓜蛋白酶的用量為雪菊粉末質量的1、5%，酶促反應的時間為3h，溫度 55°C，pH值自然； (5) 酶反應結束后將酶反應器內的雪菊溶液滅酶處理，滅酶的溫度為KKTC，時間為 5min，使溶液內的酶失活； (6) 將步驟（5)滅酶后的溶液進行離心處理，離心的時間為15min，轉速為3500r/min, 得到上清液； (7) 將步驟（6)得到的上清液過聚酰胺柱層析，在過柱之前聚酰胺需要進行預處理，將 上清液加入到聚酰胺柱中，加上清液時要沿著柱子的壁緩慢的加入，以防聚酰胺飄起來，用 一倍體積的蒸餾水進行洗脫，收集流出液； (8) 將步驟（7)得到的流出液加蒸餾水進行調配，流出液與蒸餾水按重量體積比 1:0. 8,將調配好的溶液進行灌裝、滅菌包裝，即為制備的雪菊多糖口服液。
2. 按照權利要求1的生產雪菊多糖口服液的方法，其特征在于，所述的聚酰胺預處理 采用95%的乙醇浸泡過夜，浸泡過夜后的聚酰胺裝入柱中用蒸餾水進行洗滌，將乙醇洗凈 為止，再次用5%的氫氧化鈉進行浸泡，浸泡6個小時，再次用蒸餾水進行洗滌，直到洗到中 性為止，將洗到中性的聚酰胺用10%的醋酸浸泡2-3個小時，然后用蒸餾水洗到中性以后的 聚酰胺就可以進行裝柱、層析。
3. 按照權利要求1的生產雪菊多糖口服液的方法制備的雪菊多糖口服液，其特征在 于，所述的含有雪菊多糖1%_1. 5%，山梨酸鉀< 0. 1%，余量為水。
【文檔編號】A61P37/04GK104042622SQ201410249170
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2014年6月9日 優先權日:2014年6月9日
【發明者】陳安新, 郭媛媛, 王亮 申請人:新疆生命核力高科股份有限公司