一種靈芝孢子粉多糖及其制備方法
【專利摘要】本發明提供了一種靈芝孢子粉多糖及其制備方法，該靈芝孢子粉多糖是由如下方法制備得到的：靈芝孢子粉用無水乙醇提取，收集沉淀再用沸水提取，收集上清液；上清液減壓濃縮后進行醇沉，即得到靈芝孢子粉多糖。本發明得到的靈芝孢子粉多糖具有很好的保濕效果。
【專利說明】一種靈芝孢子粉多糖及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及食用菌提取領域，具體的說涉及一種靈芝孢子粉多糖及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 靈芝（Ganoderma lucidum)為多孔菌科靈芝屬真菌，是一種具有扶正固本的傳統 珍貴藥材。靈芝孢子粉是靈芝生長成熟期，從靈芝菌褶中彈射出來的極其微小的卵形生殖 細胞。隨著靈芝栽培技術的發展，靈芝孢子粉的產量越來越高，甚至超過子實體的產量。多 糖是孢子粉中的主要活性成分之一，近十幾年對靈芝孢子粉的功效也進行了大量的研究， 發現具有多種生物活性，如提1?機體免疫力，提1?機體耐缺氧能力，消除自由基，抑制腫瘤、 抗福射等。
【發明內容】
[0003] 本發明首先提供了一種靈芝孢子粉多糖的制備方法，該方法包括如下步驟：
[0004] 靈芝孢子粉用無水乙醇提取，收集沉淀再用沸水提取，收集上清液；上清液減壓濃 縮后進行醇沉，即得到靈芝孢子粉多糖。
[0005] 具體的說，本發明的一種靈芝孢子粉多糖的制備方法，包括如下步驟：
[0006] 1)靈芝孢子粉粗多糖的提取：靈芝孢子粉中加入8-12倍重量的無水乙醇中，煮沸 并保持微沸l_3h，離心收集沉淀；沉淀加入8-12倍重量的蒸餾水，煮沸并保持微沸l-3h，離 心,收集上清液；
[0007] 2)多糖粗提液的濃縮：上清液減壓濃縮至料液比（質量/體積）為1:0· 5-1. 5 ;
[0008] 3)乙醇沉淀：向濃縮液中加入無水乙醇，至乙醇與濃縮液體積比達到56% -57%， 室溫靜置1小時，離心，收集沉淀，加蒸餾水溶解凍干，即得粗多糖。
[0009] 本發明還提供了由上述方法制備得到的靈芝孢子粉多糖。
[0010] 本發明制備得到的粗多糖得率約為1.5%，多糖含量達到79%以上，蛋白質含量 低。HPSEC-MALLS-RI分析顯示粗多糖主要有一個糖峰，單糖分析結果顯示粗多糖主要由葡 萄糖組成。制備得到的靈芝孢子粉多糖具有高的保濕活性，具體可用于保濕的化妝品類和 改善老年人體質的保健品類等。本發明的靈芝孢子粉多糖的制備方法是一種簡便、高效、成 本低、多糖得率及含量高、適合規模化生產的方法。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0011] 圖 1 HPSEC-MALLS-RI 分析圖譜
[0012] 圖2高效陰離子色譜檢測結果
[0013] 圖3保濕率測定效果（其GLW1代表實施1制備得到的靈芝孢子粉多糖；GLW2代 表實施2制備得到的靈芝孢子粉多糖；HyaluronateAcid代表透明質酸。）
【具體實施方式】：
[0014] 靈芝孢子粉來源：浙江龍泉基地的滬農靈芝1號采收的孢子粉。
[0015] 實施例1 :
[0016] 1、靈芝孢子粉多糖的提取：稱取200. 9g靈芝孢子粉，加入2000mL無水乙醇，加熱 至沸騰，保持微沸120分鐘，9700g離心20min。沉淀重復上述步驟，再提取1次，9700g離心 20min。沉淀加入2000mL蒸饋水，加熱至沸騰，保持微沸120分鐘，9700g離心20min，沉淀 重復上述步驟，再提取1次，9700g離心20min，合并上清液。
[0017] 2、多糖粗提液的濃縮：上清液濃縮至220mL。
[0018] 3、乙醇沉淀：向濃縮液中緩慢加入無水乙醇，邊加邊攪拌，至乙醇含量達到56%， 室溫靜置1小時，離心去除醇沉上清，收集沉淀，蒸餾水溶解后放入冷凍干燥機中冷凍干 燥，即得多糖干品。
[0019] 制備所得多糖得率為1.51%，多糖含量為79. 79%。
[0020] 分析天平稱量多糖干品的重量。按以下公式計算粗多糖得率。
[0021] /〇/Λ 多糖的重量§) infW 稱取樣品重量?)
[0022] 多糖含量的檢測：
[0023] 多糖含量測定：用苯酚一硫酸法測定，精密稱取本品5mg置2ml離心管中，加蒸餾 水lml，溶解后，離心。上清液稀釋50倍，精密吸取樣品1.0ml，置15ml試管中，分別加入苯 酚、硫酸試劑，充分反應后在490nm處測定吸光度值，以葡聚糖為標準品計算樣品的多糖含 量。本工藝所得靈芝破壁孢子粉多糖含量達到79%以上。
[0024] 實施例2 :
[0025] 1、靈芝孢子粉多糖的提取：稱取90. 17g靈芝孢子粉，加入900mL無水乙醇，加熱至 沸騰，保持微沸120分鐘，9700g離心20min。沉淀重復上述步驟，再提取1次，9700g離心 20min。沉淀加入2000mL蒸饋水，加熱至沸騰，保持微沸120分鐘，9700g離心20min，沉淀 重復上述步驟，再提取1次，9700g離心20min，合并上清液。
[0026] 2、多糖粗提液的濃縮：上清液濃縮至65mL。
[0027] 3、乙醇沉淀：向濃縮液中緩慢加入無水乙醇，邊加邊攪拌，至乙醇含量達到56%， 室溫靜置1小時，離心去除醇沉上清，收集沉淀，蒸餾水溶解后放入冷凍干燥機中冷凍干 燥，即得多糖干品。
[0028] 制備所得多糖得率為1.56%，多糖含量為79.67%。
[0029] 實施例3
[0030] 1、樣品制備：稱取實施例2中多糖2mg，加入lmLHPLC流動相，充分溶解，13200r/ min離心15min，上清液經0. 25 μ m的水相微孔膜過濾后進行HPSEC-MALLS-RI分析。
[0031] 2、色譜分析條件：分析柱選日本東洋曹達TOSOH TSK PWXL6000和TSK PWXL3000 凝膠色譜柱串聯后分析，流動相為含〇· 〇5mol/L的NaH2P04和0· 15mol/L的NaN03溶液（pH =7,0.02%疊氮鈉），流速為0.5111171^11，色譜柱溫用柱溫箱恒定在351：;激光檢測器光源 波長選用623. 8nm。多糖在溶液中的折光指數增量（dn/dc)按照0. 146mL/g計算。
[0032] 3、分子量計算：使用 Astra (version6. 1. 1，Wyatt Technology, Santa Barbara，CA)數據分析軟件對光散射數據進行采集和分析，計算分子量和其他多糖分子特 性。
[0033] HPSEC-MALLS-RI分析圖譜如圖1所示，實施例1的靈芝孢子粉多糖組分主要含有 1個大峰，這個峰的重均分子量7. 312X 105Da。
[0034] 實施例4:
[0035] 1、樣品制備：稱取實施2中的孢子粉多糖2mg加入帶蓋玻璃瓶，加入3mL 2mol/L 的三氟乙酸，110°C油浴4h，冷卻至室溫，50°C氮吹儀吹干，再加甲醇吹干，重復兩次至無酸 味，用2mL超純水沖洗玻璃瓶于離心管中，13200r/min離心lOmin，對上清液上高效陰離子 色譜（HPAEC)分析。
[0036] 2、色譜條件：Dionex 公司色譜柱 CarboPac?PA20 (3X 150nm);流動相 0· 8% NaOH 溶液（pH = 12);時間 30min ;柱溫 30°C ;流速 0· 45mL/min ;進樣量 25ul。
[0037] 經高效陰離子色譜檢測所得單糖組成如圖2所示。多糖組分由海藻糖、半乳糖、葡 萄糖和甘露糖四種單糖組成，其中葡萄糖所占比例最高，百分摩爾比為94. 53%，而海藻糖、 半乳糖和甘露糖糖比例很低。
[0038] 實施例5 :
[0039] 體外保濕功效測定：通過測定物質的保濕效果來測定實施例1和實施例2的靈芝 破壁孢子粉多糖的保濕效果，以透明質酸為對照。將由飽和（nh 4)2so4水溶液作為相對濕度 (R.H.)為81%的干燥器和由飽和K 2C03水溶液作為R.H. = 43%的干燥器置于20°C恒溫環 境中，精確稱取1. 〇g各種提取物干燥試樣置于直徑為3cm的結晶皿中，放在81 %的干燥器 內，48h后吸濕后的試樣繼續放置43 %的干燥器中24h，測定放置前后試樣的重量差，由式 (1)求出保濕率，H0為試樣含水重量，Hn為放置后試樣含水重量。
[0040] 保濕率（％ ) = 100Hn/H0 (1)
[0041] 結果顯示實施例1和實施例2的靈芝破壁孢子粉多糖均具有較好的保濕效果。
【權利要求】
1. 一種靈芝孢子粉多糖的制備方法，該方法包括如下步驟： 靈芝孢子粉用無水乙醇提取，收集沉淀再用沸水提取，收集上清液；上清液減壓濃縮后 進行醇沉，即得到靈芝孢子粉多糖。
2. 根據權利要求1所述的一種靈芝孢子粉多糖的制備方法，包括如下步驟： 1) 靈芝孢子粉粗多糖的提取：靈芝孢子粉中加入8-12倍重量的無水乙醇中，煮沸并保 持微沸l_3h，離心收集沉淀；沉淀加入8-12倍重量的蒸餾水，煮沸并保持微沸l-3h，離心， 收集上清液； 2) 多糖粗提液的濃縮：上清液減壓濃縮至料液比為1 :0. 5-1. 5 ; 3) 乙醇沉淀：向濃縮液中加入無水乙醇，至乙醇與濃縮液體積比達到56% -57%，室溫 靜置1小時，離心，收集沉淀，加蒸餾水溶解凍干，即得粗多糖。
3. 根據權利要求1或2的制備方法制備得到的靈芝孢子粉多糖。
【文檔編號】A61K8/73GK104193840SQ201410374769
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年7月31日 優先權日:2014年7月31日
【發明者】唐慶九, 于華崢, 張勁松, 劉艷芳, 周帥, 張忠, 唐傳紅 申請人:上海市農業科學院, 上海百信生物科技有限公司