一種抗甲型h1n1流感病毒的藥物組合物及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于醫藥技術領域，具體而言，涉及一種化合物的治療活性，尤其涉及一種 抗甲型HlNl流感病毒的藥物組合物及其應用。
【背景技術】
[0002] 甲型HlNl流感，病名，俗稱豬流感，豬流感(Swine Influenza)是甲型(A型)流感病 毒引起的豬或人的一種急性、人畜共患呼吸道傳染性疾病。這種病在豬中經常發生，很少導 致豬的死亡(豬的病死率為1%~4%)。人類很少感染豬流感病毒，但也發現一些人類感染豬 流感的病例，大多數是與病豬有過直接接觸的人。2009年3月，墨西哥和美國等先后發生人 感染豬流感病毒，為A型流感病毒，HlNl亞型豬流感病毒毒株，該毒株包含有豬流感、禽流感 和人流感三種流感病毒的基因片斷，是一種新型豬流感病毒，可以人傳染人。人感染豬流感 后的臨床早期癥狀與流感類似，有發燒、咳嗽、疲勞、食欲不振等，還可以出現腹瀉或嘔吐等 癥狀。病情可迅速進展，突然高熱、肺炎，重者可以出現呼吸衰竭、多器官損傷，導致死亡。
[0003] 目前，疫苗仍是預防流感流行的主要措施，但從生產到使用周期長，因此抗病毒藥 物是當前防控甲型HlNl流感大流行的主要選擇。文獻報道，新型甲型HlNl流感病毒對神經 氨酸酶抑制劑如磷酸奧司他韋及扎那米韋敏感，對金剛烷胺、金剛乙胺耐藥。由于季節性甲 型流感流行，磷酸奧司他韋廣泛應用，全球26個國家檢測發現耐磷酸奧司他韋HlNl耐藥株， 報道歐洲樣本檢測耐藥株達24.85%及北美洲樣本達15.65%。神經氨酸甘酶蛋白H274Y突 變，HlNl病毒對磷酸奧司他韋50%的抑制濃度靈敏度下降500倍。當前全球范圍內已檢測出 散在耐磷酸奧司他韋的甲型HlNl耐藥株，包括美國9例。因此，為防止磷酸奧司他韋過度應 用，增加耐藥菌株，WHO及我國衛生部不建議輕癥甲型HlNl流感患者使用磷酸奧司他韋治 療。研發一種低毒、高效、安全、無耐藥或低耐藥抗病毒藥物預防和控制甲型HlNl流感，避免 輕癥向重癥，危重癥轉化受到廣泛重視。
[0004] 中國專利CN105237437A公開了一種恩他卡朋雜質D及其制備方法，該方法為將3、 4-二羥基苯甲醛與N、N-二乙基氰基乙酰胺在質子性溶劑中，在有機酸和有機堿的催化下， 反應生成雜質D。該文獻中僅僅將該雜志化合物用于恩他卡朋質量控制時作為雜質對照品， 而沒有進一步研究其藥理活性。
【發明內容】
[0005] 本發明人意外地發現，過期失效的恩他卡朋經服用后可以增強抗病毒感染的能 力。隨后發明人通過后續的大量試驗研究和不懈探索，最終發現恩他卡朋的降解產物 MQ613具有防治甲型HlNl流感病毒感染的生物活性。
[0006] 基于此，本發明的目的在于提供一種抗甲型HlNl流感病毒的藥物組合物及其應 用。為了實現本發明的目的，本發明人通過大量試驗研究和不懈探索，最終獲得了如下技術 方案:一種抗甲型HlNl流感病毒的藥物組合物，由活性成分和輔料制備而成，其中所述的活 性成分為具有如下結構式的化合物或其可藥用鹽(簡稱MQ613):
[0007] 優選地，如上所述抗甲型HlNl流感病毒的藥物組合物為固體口服制劑。所述的固 體口服制劑選自干混懸劑、顆粒劑、膠囊、片劑、滴丸。按照制劑領域的常規工藝，本領域的 技術人員很容易將MQ613與藥劑學上可接受的輔料制備成常用的口服制劑，如顆粒劑、片 劑、膠囊劑。其中，藥劑學上可接受的輔料包括填充劑、崩解劑、粘合劑、矯味劑、潤滑劑等 等。所述的填充劑選自以下的一種或多種:預膠化淀粉、乳糖、甘露醇和微晶纖維素;所述的 崩解劑選自以下的一種或多種:羧甲基淀粉鈉、交聯聚維酮、交聯羧甲基纖維素鈉和低取代 羥丙基纖維素;所述的粘合劑選自以下的一種或多種：淀粉漿、羥丙基纖維素溶液、聚維酮 溶液;所述的潤滑劑選自以下的一種或兩種:硬脂酸鎂、滑石粉。
[0008] 需要說明的是，本發明所述抗甲型HlNl流感病毒的活性化合物MQ613(即專利文獻 CN105237437A中的雜質D)，其經結構分析鑒定，H1-匪R(500HZ，CD30D)光譜學數據如下： 7·52(lH，d)，7·46(lH，s)，7.25(lH，dd)，6.84(lH，d),3.50(lH，s)，1.20(6H，m) ;MS(m/z): 261 [M+H] +。本發明還提供一種化合物新用途技術方案，即:MQ613或其可藥用鹽在制備抗甲 型HlNl流感病毒的藥物中的應用。
[0009] 另外，本發明所述抗甲型HlNl流感病毒的活性化合物MQ613可以按如下方法制備 而得:將3、4_二羥基苯甲醛與N、N-二乙基氰基乙酰胺在有機胺和有機酸的存在下、在質子 類有機溶劑中加熱反應;反應完后，降溫后減壓蒸干質子類有機溶劑，用非質子有機溶劑萃 取，減壓蒸干非質子類有機溶劑，再用質子類有機溶劑重結晶。
[0010] 與現有技術相比，本發明無論在細胞水平還是動物水平上都可以很好地抑制甲型 HlNl流感病毒的感染和增殖過程，明確表明了該化合物在制備抗甲型HlNl流感病毒藥物中 具有廣闊的應用前景。另外，本發明還可以有效降低病毒感染引起的死亡率，延長生存時 間。
[0011]
【具體實施方式】
[0012] 以下是該化合物MQ613的具體制備和體內外試驗過程，對本發明的技術方案做進 一步作描述，但是本發明的保護范圍并不限于該試驗例。凡是不背離本發明構思的改變或 等同替代均包括在本發明的保護范圍之內。
[0013] 實施例1:MQ613的制備 將3、4_ 二羥基苯甲醛（58,36.2!11111〇1)，11二乙基氰基乙酰胺（10.1(^，72.0111111〇1)，嗎 啉（10.07g，116mmol)，冰乙酸(6.95g，116mmol)，異丙醇40ml投入到100mL三口瓶中，加熱至 回流。點板監控反應情況，反應完全后，50°C減壓蒸干，加入二氯甲烷60ml，2N鹽酸60ml萃取 分液，減壓蒸干有機層，30ml異丙醇重結晶，抽濾，45 °C減壓烘干得到MQ613 7.12g。收率 75.6%，純度99.48^^1^^(5001^,0)300):7.52(111,(1),7.46(1^8),7.25(111,(1(1),6.84 (lH，d)，3.50(lH，s)，1.20(6H，m);MS(m/z):261[M+H]+。
[0014]實施例2:不同化合物對甲型HlNl流感病毒的抑制活性試驗 通過采用細胞病變抑制作用（CPE)進行抗病毒活性研究。測試病毒為:H1N1(流感病 毒），其中犬腎細胞(MDCK)為HlNl敏感細胞。將培養成單層的MDCK細胞用胰酶消化后，接種 于96孔板中，長成單層備用。將HlNl病接種于MDCK細胞上，加2%血清1640培養液后置37°C、 5%⑶ 2條件下培養，出現90%以上的病變后，反復凍融3次后吹打離心，定量分裝，-80°C冰 箱凍存備用。受試藥物每管以IOyL DMSO溶解后，加入200yL的2% 1640培養液，并連續10次2 倍比稀釋，共10個稀釋度，然后橫向接種于96板孔中的單層細胞上，10列為病毒對照、11列 為細胞對照，37°C、5 %⑶2培養，每小時觀察病變，連續觀察24h。病毒對照出現90 %以上的 病變后，將板孔內液體吸棄，加1 %中性紅染色，在540nm波長測定OD值，用Reed-Muench方法 計算藥物半數有效濃度(IC50)。
[0015] 表1不同化合物對甲型HlNl流感病毒的IC5q比較
通過表1的試驗統計結果可以看出，MQ613對甲型HlNl流感病毒表現出非常顯著的抑制 活性，遠強于陽性藥利巴韋林，這表明MQ613或其藥學上可接受的鹽可用于制備抗甲型HlNl 流感病毒劑。
[0016] 實施例3:MQ613對甲型HlNl流感病毒感染小鼠生存率的影響 SPF級的雌性BALB/C小鼠80只，體質量14-16g，按體質量分為正常對照組，病毒對照組， MQ613高、低劑量組，每組20只。除正常對照組外，其它各組均在乙醚輕度麻醉下以20個LD50 流感病毒液（甲型HlNl流感病毒鼠肺適應株FM/1/47株)滴鼻感染，每鼠40yL。從病毒感染前 1天開始，MQ613高、低劑量組采用灌胃方式給予MQ613,劑量分別為15mg/kg/d、5mg/kg/d，l 次/d，連續給藥7天。在病毒感染14天后，統計各組小鼠的死亡情況，并計算藥物對于小鼠的 死亡保護率(死亡保護率=模型組死亡率一實驗組死亡率）。
[0017] 通過表2的試驗統計結果可以看出，MQ613各劑量組處理的小鼠死亡率與模型對照 組相比顯著降低，死亡保護率達到75%以上。這說明MQ613可以有效降低甲型HlNl流感病毒 感染引起的小鼠死亡，延長生存時間。 圭9義々Π 咸九田開(J、>備咸成害J、閆的萬陰VU 士古呑
【主權項】
1. 一種抗甲型H1N1流感病毒的藥物組合物，該藥物組合物由活性成分和輔料制備而 成，其特征在于，所述的活性成分為具有如下結構式的化合物或其可藥用鹽： z · tRiWt乂個」安·幾 T 抓內毒的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組 合物為固體口服制劑。3. 根據權利要求1所述抗甲型Η1Ν1流感病毒的藥物組合物，其特征在于，所述的固體口 服制劑選自干混懸劑、顆粒劑、膠囊、片劑、滴丸。 4. MQ613或其可藥用鹽在制備抗甲型Η1Ν1流感病毒的藥物中的應用，所述的MQ613為具 有如下結構式的化合物：5. 根據權利要求4所述MQ613在制備抗甲型Η1Ν1流感病毒的藥物中的應用。
【專利摘要】本發明提供了一種抗甲型H1N1流感病毒的藥物組合物及其應用，該藥物組合物由活性成分和輔料制備而成，其中所述的活性成分為MQ613或其可藥用鹽。本發明無論在細胞水平還是動物水平上都可以很好地抑制甲型H1N1流感病毒的感染和增殖過程，明確表明了該化合物在制備抗甲型H1N1流感病毒藥物中具有廣闊的應用前景。
【IPC分類】A61K31/277, A61P31/16
【公開號】CN105708830
【申請號】CN201610180742
【發明人】張雪燕
【申請人】張雪燕