本發明涉及一種芒果核黃酮提取物及其制備方法，屬于食品技術及生物技術領域。
背景技術：
芒果(拉丁學名：Mangifera indica Linn)，又稱檬果、悶果、蜜望子等，屬于漆樹科植物，主要生長于熱帶和亞熱帶沿海潮間帶。芒果的種植分布很廣，世界上有70多個國家生產芒果，我國主要省份廣西、廣東、臺灣、海南均有芒果種植，且芒果資源豐富、品種繁多。2014年我國芒果種植面積為117萬公頃，總產量達88萬噸，是我國的大宗傳統熱帶農產品，出口創匯潛力巨大，在我國對外貿易中有重要的地位。
芒果為著名熱帶水果之一，因其果肉細膩(肉質滑嫩、多汁)、風味獨特(味道香甜)、營養豐富(富含糖、蛋白質、粗纖維、維生素、礦物質及脂肪等)，集熱帶水果精華于一身，被譽為“熱帶水果之王”。芒果具有極高的藥用價值，其果皮可入藥，為利尿、浚下劑；核仁和芒果葉也可入藥，能解毒消滯、降壓。據中醫分析，芒果屬于性平味甘、解渴生津的果品，有益胃、止嘔、防暈的功效。芒果中含有的芒果苷具有明顯的抗過氧化、保護腦神經元和祛痰止咳的功效。
廣西作為我國生產芒果為數不多的主要省份之一，更是具有芒果資源豐富，品種繁多等優勢，但是目前市場上主要還是以產地鮮銷為主，少量加工成果汁、果脯以及果肉為輔外，芒果深加工產業亟待需要進一步發展。在芒果生產加工中的廢棄物，在過去常被丟棄或者飼養牲畜。近年來，人們逐漸對芒果廢棄物進行研究，包括芒果葉、芒果皮、芒果核、芒果樹皮等，尤其是占芒果總重20-60％的芒果核獲得大部分研究者和企業家的關注。據報道，芒果核富含有氨基酸、多肽、蛋白質、酚類、黃酮、多糖、有機酸、皂苷、鞣質、黃酮、蒽醌、生物堿、香豆素與內酯、三萜及甾體、生物堿、揮發油及油脂等多種活性成分。
近年來，我國圍繞芒果核多酚類物質、黃酮類、吡酮類、萜類等活性成分及其抑菌、抗氧化功能進行的相關研究逐漸較多，但是也存在不少問題，主要有提取分離效果不明顯，鑒定獲得的活性成分較少，活性成分抑菌、抗氧化作用等藥理作用還不明確。
現有的芒果核黃酮提取方法，也存在提取的總黃酮含量低，有機溶劑殘留較多等問題。
技術實現要素：
本發明的目的是充分利用自然資源，尤其是廣西特色果蔬資源，提供一種芒果核黃酮提取物及其制備方法，該黃酮提取物具有抑菌抗氧化性能，可用于保健品或者藥物制備。同時為了解決目前已有芒果核黃酮提取方法存在的總黃酮含量低、有機溶劑殘留較多的問題，本發明方法是經過醇提取及大孔樹脂純化方法制備芒果核黃酮提取物。
本發明的芒果核黃酮提取物的制備方法，包括以下步驟：
(1)將芒果核干燥粉碎；
(2)用醇濃度20％-80％(v/v)的乙醇溶液或甲醇溶液作為溶劑對步驟(1)中得到的芒果核干燥粉末進行提取，然后將得到的提取液減壓濃縮或真空冷凍干燥至浸膏；
(3)將步驟(2)中得到的浸膏用水、醇濃度小于50％(v/v)的乙醇溶液或者醇濃度小于50％(v/v)的甲醇溶液溶解，除去不溶物，得到上樣溶液；
(4)取D101大孔吸附樹脂，將步驟(3)得到的上樣溶液上樣，先用水洗去雜質，然后用洗脫劑(乙醇溶液或甲醇溶液)進行洗脫，收集洗脫液；所述D101大孔吸附樹脂和芒果核干燥粉末重量比為1:0.5-1:20；
(5)將步驟(4)收集的洗脫液減壓濃縮或真空冷凍干燥，得到芒果核黃酮提取物。
在本發明的一種實施方式中，步驟(2)中提取方法為每千克芒果核粉末加入2-50L醇濃度為30％-80％的乙醇溶液或甲醇溶液，熱回流或浸漬或浸漉提取2-5次，熱回流提取時每次提取1-3h，浸漬或浸漉提取時每次提取1-5天，合并提取液。
在本發明的一種實施方式中，所述步驟(2)的提取，是將芒果核粉末以40％-60％(v/v，下同)的乙醇提取。
在本發明的一種實施方式中，所述步驟(2)的提取，是將芒果核粉末以乙醇提取次數1-4次，最優選為2-3次。
在本發明的一種實施方式中，所述步驟(2)的提取，料液比(芒果核粉末質量與乙醇溶液之比，m/v)為1:1-1:40，優選1:5-1:30，更優選地為1:20-1:30。
在本發明的一種實施方式中，所述步驟(2)的提取，每次提取時間為0.5-4h，優選提取時間為1-3h。
在本發明的一種實施方式中，所述步驟(2)的提取，是在30-50℃下進行。
在本發明的一種實施方式中，所述步驟(2)具體工藝條件是：乙醇濃度50％，料液比1:30，提取溫度40℃，提取時間150min。
在本發明的一種實施方式中，所述步驟(3)中浸膏的溶解所用的水、乙醇溶液或者甲醇溶液的重量為浸膏重量的3-50倍。
在本發明的一種實施方式中，步驟(3)的提取方法如下：將步驟(2)中得到的浸膏用10倍浸膏重量的水或者10％乙醇溶液溶解，除去不溶物后得到上樣溶液。
在本發明的一種實施方式中，步驟(3)的除去不溶物，是采用過濾或離心的方法。
在本發明的一種實施方式中，步驟(4)中的先用水洗去雜質，是指用2-5BV的水進行洗脫以除去雜質。
在本發明的一種實施方式中，所述步驟(4)的洗脫流速為洗脫液流速1BV/h-10BV/h，優選為2BV/h-5Bv/h。
在本發明的一種實施方式中，所述步驟(4)中洗脫劑乙醇溶液或者甲醇溶液的濃度為5％-95％，優選為20％-80％；洗脫劑的洗脫體積為1-10倍柱體積，優選為3-8個柱體積。
在本發明的一種實施方式中，所述步驟(4)，是使用醇濃度為40-60％的乙醇溶液進行洗脫。
在本發明的一種實施方式中，步驟(4)的純化方法如下：取與芒果核粉重量之比為1:5的D101大孔樹脂，將步驟(3)中得到的上樣溶液上樣，采用2-5BV的水洗去雜質，后采用3-10BV的50％乙醇溶液進行洗脫，收集50％的乙醇溶液洗脫得到的洗脫液。
在本發明的一種實施方式中，所述步驟(4)中，芒果核黃酮提取液的上樣量(芒果核粉末質量：樹脂質量)優選為1:1-10:1。
在本發明的一種實施方式中，所述方法是：以乙醇溶液加熱回流提取芒果核黃酮，回收乙醇，濃縮，將芒果核黃酮提取液吸附到大孔樹脂上、洗脫、收集洗脫液、濃縮、干燥，獲得純化的芒果核黃酮。
在本發明的一種實施方式中，所述方法具體是：(1)將芒果核干燥粉碎；(2)秤取芒果核粉末1kg加入20L～25L濃度為50％的乙醇溶液，熱回流提取三次，熱回流提取每次1～3h，合并提取液，提取液減壓濃縮汁浸膏；(3)浸膏用浸膏重量5～10倍的水溶解，過濾出去不溶物，得到上樣溶液；(4)將上樣溶液上柱，控制流出液流速為0.5BV/h，上樣量與樹脂AB-8體積比為2:1，至提取液全部進入樹脂床；采用2-5BV的水進行洗脫，以除去雜質，然后用3-10BV的40～60％乙醇溶液沖洗樹脂床，控制流出液流速2BV/h，收集乙醇溶液的洗脫液；(5)將收集的洗脫液減壓濃縮至一定體積，進行噴霧干燥，即得純化產物。
本發明還要求保護按照所述制備方法或者純化方法得到的芒果核黃酮提取物在制備食品、保健品或藥物上的應用。
所述保健品或藥物，是具有抑菌抗氧化活性的保健品或藥物。
本發明的有益效果：
1、本發明通過對芒果核黃酮提取步驟進行改進，有效提高了黃酮物質的提取效率，得到的提取液中黃酮含量可達9.5-12.8mg/g(即1kg芒果核干燥粉末中可提取得到9.5-12.8g黃酮)。而且，本發明方法以水或者乙醇為溶劑，既廉價又無毒。
2、本發明采用大孔樹脂純化的方法進一步對提取液進行純化，該純化方法操作簡便、快捷，選用的大孔樹脂具有吸附量大、解吸率大的特點，有效去除了提取液的雜質，防止了有機溶劑殘留的問題。
3、按照本發明方法得到的芒果核黃酮提取物，產量可達9.5-12.8mg/g(干芒果核)，得到的黃酮提取物對羥基和超氧自由基陰離子具有明顯的清除作用。
附圖說明
圖1為蘆丁標準曲線圖。
具體實施方式
下面結合實施例對本發明的技術內容做進一步說明，下述實施例是說明性的，不是限定性的，不能以下述實施例來限定本發明的保護范圍。
各實施例中使用的一起設備、化學試劑以及檢測方法如下：
儀器與設備：FW100高速萬能粉碎機，天津市泰斯特儀器有限公司；UPC-Ⅱ-20T優普系列超純水器，四川優普超純科技有限公司；SQP電子天平，賽多利斯科學儀器(北京)有限公司；ZWYR-D2403振蕩培養箱，上海智誠分析儀器制造有限公司；SHZ-DⅢ予華牌循環水真空泵，鞏義市予華儀器有限責任公司；HHS-6S電子恒溫不銹鋼水浴鍋，上海宜昌儀器紗篩廠；UV1901PC紫外可見分光光度計，上海奧析科學儀器有限公司；
化學試劑：無水碳酸鈉、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、福林酚試劑、沒食子酸標準品、各種類型大孔樹脂等均由柳州蘇利有限責任公司提供。
蘆丁標準曲線的建立：準確取蘆丁標準品粉末20mg，用60％乙醇溶解在50mL的燒杯中溶解后，裝置于100mL容量瓶中，后用60％乙醇稀釋至刻度，搖勻；即得到蘆丁0.2mg/mL溶液[9]；后分別取蘆丁溶液0.0mL、0.25mL、0.50mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL分別放置于25mL容量瓶中，然后分別加入60％乙醇溶液至10mL，再依次加入1mL 5％亞硝酸鈉溶液，搖勻，放置6min；之后加入1mL 10％硝酸鋁溶液，搖勻，放置6min；加入4％氫氧化鈉溶液1mL；再加60％的乙醇定容至刻度，搖勻，放置15min后在500nm波長下用分分光光度計測定其吸光度值；制作蘆丁標準曲線，以蘆丁濃度(mg/mL)為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線(圖1)，并進行回歸分析。結果表明，蘆丁在濃度0-0.07mg/ml內與其吸光值呈良好的線性關系，在此范圍內的線性回歸方程為：y＝13.403x-0.01063，R2＝0.9991。
總黃酮含量的測定：稱取芒果核粉末樣品后加入乙醇提取劑，根據蘆丁標準曲線計算出樣品溶液中總黃酮濃度，再根據公式計算芒果核粉末中總黃酮量。計算公式如下：
總黃酮含量(mg/g)＝C×V/W
式中C——根據標準曲線求得的樣品濃度值(mg/mL)；
V——樣品液總體積(mL)；
W——原料重量(g)。
抗氧化活性的測定：
清除羥基自由基能力測定：分別取不同質量濃度的待測樣液于5只試管中，各加入硫酸亞鐵、雙氧水，靜置，10min后加入水楊酸，靜置后在510nm處測定吸光度A1，用蒸餾水替代水楊酸按照上述方法測定吸光度值A2，用蒸餾水代替待測液按上述方法測定吸光度值A0，VC做對照，按照下列公式求黃酮物質對羥自由基的清除率：羥自由基(％)＝[A0-(A1-A2)]/(A0)*100(％)。
清除超氧陰離子自由基能力測定：取4.5ml Tris-HCl緩沖溶液，于20℃水浴中預熱20min，分別加入1ml不同濃度的樣品液和0.4ml 25mmol/L的鄰苯三酚溶液，混勻后，于25℃水浴中反應5min，然后加入8mol/L的HCl溶液1ml終止反應，然后在325nm處測定吸光度A1，空白以蒸餾水代替樣品液，測定吸光度A0。樣品對超氧陰離子自由基的清除率：清除率(％)＝(1-A1/A0)*100(％)。
DPPH清除能力測定：分別取2.0mL不同質量濃度(1.0、5.0、10.0、15.0、芒果核活性成分樣液于5只試管中，各加入2mL DPPH(0.04mg/ml)，靜置20min在517nm檢測吸光度A1；以無水乙醇代替DPPH，按照上述方法測定吸光度A2；做空白組按上述方法測定吸光度A0，以VC做對照，樣品對DPPH自由基的清除率：DPPH清除率(％)＝[1-(A1-A2)/A0]*100(％)。
實施例1：本發明的芒果核黃酮提取物的制備方法
(1)芒果核黃酮提取：芒果核干燥粉碎，秤取芒果核粉末1kg加入22L濃度為50％的乙醇，熱回流提取三次，熱回流提取每次1.5h，合并提取液，提取液減壓濃縮汁浸膏，浸膏用浸膏重量10倍的水溶解，過濾出去不溶物，得到上樣溶液，總黃酮含量約為11.5g/kg芒果核粉末。
(2)上柱：將芒果核黃酮提取液上柱，控制流出液流速為0.5BV/h，上樣量與樹脂DM101體積比為2:1，至提取液全部進入樹脂床。
(3)洗脫：采用2-5BV的水進行洗脫，以除去雜質，后分別采用3-10BV的5％-80％乙醇沖洗樹脂床，控制流出液流速2BV/h，收集洗脫液，分別減壓濃縮至一定體積，進行噴霧干燥，即得不同組分的純化產物，其中全部組分總黃酮含量約為11.5g/kg，純化產物中，水洗脫液中黃酮含量約為1.1g/kg，5％乙醇洗脫液中黃酮含量約為1.9g/kg，10％乙醇洗脫液中黃酮含量約為2.4g/kg，20％乙醇洗脫液中黃酮含量約為3.8g/kg，30％乙醇洗脫液中黃酮含量約為4.8g/kg，40％乙醇洗脫液中黃酮含量約為7.6g/kg，50％乙醇洗脫液中黃酮含量約為8.1g/kg，60％乙醇洗脫液黃酮中含量約為7.4g/kg，70％乙醇洗脫液中黃酮含量約為5.6g/kg，80％乙醇洗脫液中黃酮含量約為4.6g/kg。
以上數據表面，采用醇濃度為40-60％的乙醇溶液進行洗脫，得到的組分中黃酮含量最高。
實施例2：選用不同條件進行提取
采用本發明提供的方法，選用不用條件進行芒果核黃酮(樣品為芒果核干燥粉碎1g)提取實驗，在單因素試驗基礎上，選取乙醇濃度、料液比、提取時間和提取溫度四個主要因素做L9(34)正交試驗(表1)，正交結果分析如表2。
表1芒果核黃酮提取工藝正交試驗表頭設計
表2芒果核黃酮提取工藝L9(34)正交實驗結果
表3芒果核黃酮提取驗證試驗
由表2可知，各因素對芒果核總黃酮提取影響大小順序為：D>A>C>B，即料液比>提取溫度>提取時間>乙醇濃度，其中料液比對芒果核黃酮提取的影響最顯著，乙醇濃度對芒果核黃酮提取的影響最不顯著。由正交試驗結果可以得出最佳試驗組合為A2B3C2D3，即提取溫度40℃，提取時間為2.5h，乙醇濃度為50％，料液比為1:30。由于最佳工藝組合沒有在正交表的組合中，需要做驗證試驗作分析，結果驗證試驗所得的黃酮含量為1.91mg/g，所以芒果核黃酮提取的最佳工藝條件為乙醇濃度50％，料液比1:30，提取溫度40℃，提取時間150min。
實施例3：大孔樹脂純化工藝
發明人比較了不同樹脂種類、樣液濃度、吸附速率、上樣量、乙醇洗脫濃度、洗脫速率等對芒果核黃酮提取物的處理效果。
上樣液制備：秤取芒果核粉末20g，按照乙醇濃度50％，料液比1:30，提取溫度40℃，每次提取1h，提取3次，提取后濾液合并，減壓濃縮至干，真空干燥至恒重，精密秤取干膏適量，以甲醇或乙醇溶液溶于10ml容量瓶中，加甲醇或乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻備用。移取1ml濾液至10ml容量瓶，加甲醇或乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻。按照上述方法測定黃酮的含量。
靜態吸附：取10種經過預處理好的大孔吸附樹脂各10g，各加入芒果核黃酮溶液10ml，每10min振搖一次，2h后分別各取樹脂吸附后的溶液測定黃酮含量，計算各樹脂對芒果核黃酮的吸附率。
靜態解吸：
將靜態吸附的樹脂過濾抽干，加30ml 50％乙醇解吸，每10min振搖一次，2h后分別各取樹脂吸附后的溶液測定黃酮含量，計算各樹脂對芒果核黃酮的解吸率。見表4。從表中可以看出，10種樹脂的吸附率都較大(大于90％)，解吸率都大于40％，其中AB-8、DM21、D101的解吸率都大于60％，選取AB-8、DM21、D101做動態吸附實驗。
表4大孔樹脂對芒果核黃酮的吸附與解吸率
動態吸附：
取處理好的靜態吸附優選3種樹脂AB-8、DM21、D101各15mL于柱內，加芒果核黃酮提取液于柱頂，以0.5BV/h的流速進行動態吸附，按照樹脂體積流出收集流出液，測定黃酮含量，計算各樹脂對芒果核黃酮的吸附率。結果見表5，表明AB-8和D101達到飽和吸附時，所吸附的總黃酮量較DM21大，選取其做解吸實驗。
表5大孔樹脂對芒果核黃酮的動態吸附結果
動態解吸：取處理好的AB-8和D101樹脂各20ml于柱內，分別加芒果核黃酮提取液于柱頂，以0.5BV/h的流速進行吸附后，用50％乙醇以2BV/h的流速進行洗脫，按照樹脂體積流出收集洗脫液，測定黃酮含量，計算各樹脂對芒果核黃酮的吸附率。結果見表6，可以看出D101比AB-8解吸效果好，選取其作為最佳樹脂。
表6大孔樹脂對芒果核黃酮的動態解吸結果
乙醇濃度：取10份處理好的DM101樹脂20ml于柱內，加芒果核黃酮提取液于柱頂，以0.5BV/h的流速進行吸附后，再分別用5BV的水、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％乙醇以2BV/h流速進行單獨洗脫，按照樹脂體積流出收集洗脫液，測定黃酮含量，結果見表7，可以看出，當乙醇洗脫濃度為40％-60％時，洗脫總黃酮得率最高。
表7乙醇洗脫濃度考察
實施例4：芒果核黃酮提取物的制備方法
將芒果核干燥粉碎，秤取芒果核粉末1kg加入20L濃度為50％的乙醇，熱回流提取三次，熱回流提取每次1h，合并提取液，提取液減壓濃縮汁浸膏，浸膏用浸膏重量10倍的水溶解，過濾出去不溶物，得到上樣溶液，總黃酮含量為12.8g/kg芒果核粉末。
將芒果核黃酮提取液上柱，控制流出液流速為0.5BV/h，上樣量與樹脂DM101體積比為2:1，至提取液全部進入樹脂床。采用3BV的水除去雜質，然后采用8BV的50％乙醇沖洗樹脂床，控制流出液流速2BV/h，收集洗脫液，分別減壓濃縮至一定體積，進行噴霧干燥，即得純化產物-芒果核黃酮提取物，黃酮含量為10.9g/kg芒果核粉末。
實施例5：芒果核黃酮提取物的制備方法
將芒果核干燥粉碎，秤取芒果核粉末1kg加入25L濃度為50％的乙醇，熱回流提取三次，熱回流提取每次1h，合并提取液，提取液減壓濃縮汁浸膏，浸膏用浸膏重量10倍的水溶解，過濾出去不溶物，得到上樣溶液，總黃酮含量為12.1g/kg。
將芒果核黃酮提取液上柱，控制流出液流速為0.5BV/h，上樣量與樹脂DM101體積比為2:1，至提取液全部進入樹脂床。采用2BV的水除去雜質，然后采用10BV的40％乙醇沖洗樹脂床，控制流出液流速2BV/h，收集洗脫液，分別減壓濃縮至一定體積，進行噴霧干燥，即得純化產物-芒果核黃酮提取物，黃酮含量為9.8g/kg芒果核粉末。
實施例6：芒果核黃酮提取物的制備方法
將芒果核干燥粉碎，秤取芒果核粉末1kg加入20L濃度為50％的乙醇，熱回流提取三次，熱回流提取每次1.5h，合并提取液，提取液減壓濃縮汁浸膏，浸膏用浸膏重量8倍的水溶解，過濾出去不溶物，得到上樣溶液，總黃酮含量為11.2g/kg。
將芒果核黃酮提取液上柱，控制流出液流速為0.5BV/h，上樣量與樹脂DM101體積比為2:1，至提取液全部進入樹脂床。采用5BV的水除去雜質，然后采用8BV的60％乙醇沖洗樹脂床，控制流出液流速2BV/h，收集洗脫液，分別減壓濃縮至一定體積，進行噴霧干燥，即得純化產物-芒果核黃酮提取物，黃酮含量為9.1g/kg芒果核粉末。
實施例7：本發明方法得到的芒果核黃酮提取物的抗菌抗氧化性能
抑菌效果的測定：
將供試菌株于斜面培養基上活化，用接種環挑取環1-2環于50mL無菌生理鹽水三角瓶中振蕩10min(內有數粒玻璃珠)，要求菌懸液約108CFU/mL左右備用。稱取一定量真空冷凍干燥的實施例4-6得到的芒果核黃酮提取物樣品，在超凈工作臺上用無菌的40％乙醇水溶液溶解樣品至所需的濃度，備用。新鮮配制的培養基基于121℃條件下滅菌，當培養基冷至50-60℃時，于超凈工作臺上將培養基倒入滅菌的的培養皿中，每皿15-20mL培養基，待平板冷卻后，每皿中加入0.5mL菌懸液，用三角玻璃涂棒均勻涂成薄板備用。將無菌濾紙片浸入配好的藥液其中12h，瀝干。每一含菌平板上，呈正三角形排布3片帶藥無菌紙片，細菌于37℃條件下培養24h，啤酒酵母和黑曲霉于30℃條件下培養5d，測其抑菌圈直徑。根據抑菌圈大小來確定其抑菌效果。以不加芒果核黃酮溶液只加菌懸液為對照。結果顯示，本發明得到的芒果核黃酮提取物具有強烈的抑菌效果。
芒果核黃酮物質抗氧化活性研究：
羥基是活性最強的活性氧化自由基，會誘發機體產生氧化損傷，其清除率常常是反應藥物抗氧化作用的重要指標。同樣的，超氧陰離子也是生物體主要的活性氧自由基，由其引起的體內脂質過氧化是機體衰老、心血管疾病及腫瘤發生的重要原因。芒果核黃酮羥基自由基清除能力測定實驗發現其清除能力隨著黃酮濃度增加而增加，當芒果核黃酮的濃度達到0.38-0.45mg/ml時清除率能達到約90％，說明芒果核黃酮具有較強的清除羥基自由基作用。芒果核黃酮超氧陰離子自由基清除能力測定實驗發現芒果核黃酮的濃度越高，清除超氧陰離子自由基的能力越強，當芒果核黃酮的濃度達到0.32-0.43mg/mL，清除能力趨于平穩，清除率達到83％，但是清除能力較Vc弱些。芒果核黃酮提取物DPPH自由基清除能力測定實驗發現其清除能力隨著黃酮濃度增加而增加，當濃度達到0.43-0.49mg/mL以上時，其對DPPH自由基的清除率能達到90％，說明芒果核黃酮具有較強的清除DPPH自由基作用。以上數據說明芒果果核黃酮對羥基自由基以及超氧陰離子自由基均具有較好的清除能力，研究結果將為芒果核資源的綜合利用及其相應的功能性食品開發提供參考借鑒。
以上通過實施例對本發明的內容進行了詳細說明，但所述內容僅為本發明的較佳實施例，不能被認為用于限定本發明的實施范圍。任何熟悉此技術的人，在不脫離本發明的精神和范圍內，都可做各種的改動與修飾，因此本發明的保護范圍應該以權利要求書所界定的為準。