本發明屬于水產養殖技術領域，具體涉及一種用于治療羅非魚三代蟲病的復合制劑及其使用方法。
背景技術：
三代蟲（Gyrodactylus）是一類常見的魚類體表寄生蟲，廣泛寄生于各種魚類，近年來其危害有加劇之勢，對魚類養殖業造成較大威脅。三代蟲隸屬于扁形動物門、吸蟲綱、單殖吸蟲亞綱、三代蟲目、三代蟲科，主要寄生在魚體表和鰓，三代蟲以多胚同體的胎生方式進行繁殖，種群增長速度快, 傳播迅速。三代蟲病是羅非魚養殖過程中最常見、又最麻煩的寄生蟲性疾病，特別是在羅非魚苗種培育階段極易導致大量死亡，危害嚴重。在養殖生產中，徹底清塘、降低養殖密度、加強飼養管理、保持優良水質、定期消毒和強化營養提高魚體免疫力等是預防三代蟲病的常見措施，但收效甚微。目前國內外對三代蟲病的防治主要采用有機磷殺蟲藥，如晶體敵百蟲、美舒添和辛硫磷等，或用菊酯類殺蟲藥，如溴氰菊酯、氰戊菊酯和氯氰菊酯等，以及高錳酸鉀、氨水和福爾馬林等；但近年來蟲體對這些藥物已產生不同程度的抗藥性，不少魚場將以上藥物用量增加1~ 3倍、或反復使用2~ 3次，仍達不到滿意的治療效果。相反，由于藥物用量增大，造成魚體肝臟損害嚴重，并發羅非魚肝膽綜合癥及敗血病，進一步加劇了羅非魚的死亡。由于缺乏高效的、安全有效的治療藥物，導致羅非魚三代蟲病得不到有效控制，對羅非魚苗種培育及其養殖構成巨大威脅，因而急需研發一種對這類寄生蟲病有特效驅殺效果的藥物制劑。
苦參堿是一種低毒、低殘留、環保型的植物源農藥，在大自然中能迅速分解，最終產物為二氧化碳和水，而且因其含有多種對有害生物具有活性的植物內源性化學物質共同發揮作用，使其不易導致有害生物產生抗藥性，可長期使用。因其安全性高，抗菌殺蟲譜寬，綠色環保，近年來在農業上應用廣泛。針對羅非魚三代蟲病的治療難題，本發明通過長期的研發，研制了一種以苦參堿、敵百蟲為主，以溴化二甲基二癸基烴銨為輔助功效的復配制劑，不但降低了使用成本，提高了使用效果，也解決了寄生蟲抗藥性的難題。
技術實現要素：
本發明的目的在于，針對上述現有技術的不足，提供一種制作工藝簡單、使用方便、殺蟲效果好的用于治療羅非魚三代蟲病的復合制劑及其制備方法，為臨床提供一種有效的治療方法。
為實現上述發明目的，本發明采取的技術方案是：
一種用于治療羅非魚三代蟲病的復合制劑，按質量分數計，其組成為：苦參堿20~25%、敵百蟲20~25%、溴化二甲基二癸基烴銨5~7%、溶解劑為43~55%，以上原料的總和為100%。
優選的，上述用于治療羅非魚三代蟲病的復合制劑，按質量分數計，其組成為：苦參堿20%、敵百蟲20%、溴化二甲基二癸基烴銨5%、溶解劑55%。
作為優選，所述的苦參堿為有效含量2.0%的醇提取液，敵百蟲為90%的晶體敵百蟲，溶解劑為二甲基亞砜。
本發明用于治療羅非魚三代蟲病的復合制劑的配方依據及各原料特點在于：有效組分苦參堿、敵百蟲和溴化二甲基二癸基烴銨，殺蟲滅菌雙效合一，且相對于單一組分作用時的殺滅效果更加快速高效：通過苦參堿與敵百蟲的藥物配伍增效，達到對三代蟲的殺滅作用；在驅殺蟲的藥物中添加了溴化二甲基二癸基烴銨雙鏈季胺鹽消毒劑，在驅殺蟲的同時防止細菌繼發感染，這也是病害控制的重要環節，在實際病害防治中取得了良好效果。
一種治療羅非魚三代蟲病復合制劑的制備方法，其步驟如下：
（1）按配比稱取各原料組分；
（2）將敵百蟲加入溶解劑二甲亞砜中，并攪拌至敵百蟲完全溶解；
（3）將苦參堿和溴化二甲基二癸基烴銨依次加入步驟（2）所得的混合溶液中并攪拌至完全溶解，即得到用于治療羅非魚三代蟲病的復合苦參堿制劑。
本發明用于治療羅非魚三代蟲病復合制劑使用時，根據發病池塘的水體容量及蟲害程度確定用量，劑量為1.5~2.0 mg/L，開啟增氧機增氧，維持水體溶氧量5mg/L以上，苦參堿復合制劑用水稀釋1000～1500倍后，全池均勻潑灑，連續浸浴24小時后換水。
本發明的有益效果在于：
1）本發明的復合制劑可有效殺滅羅非魚體表、鰓上的三代蟲，并防止細菌繼發感染；
2）本發明的復合制劑制備方法簡單，使用方便，驅殺三代蟲的效果顯著，同時防止了細菌繼發感染；并且藥效溫和，水溶性好，藥效穩定，對水產動物刺激性小；
3）本發明的復合制劑主要成份毒性低，安全性高，苦參堿與敵百蟲配伍使用具有協同增效作用，提高了藥效，且不易產生耐藥性，克服其他藥物如甲苯咪唑毒性大，安全濃度低的問題；如福爾馬林、辛硫磷、溴氰菊酯、氰戊菊酯、氯氰菊酯等療效差的問題。
具體實施方式
為了更清楚的理解本發明以及本發明制劑的藥效，以下通過發明人給出的依本發明技術方案所完成的具體的實施例對本發明作進一步的詳細描述，這些僅是本發明較好的實施例，但不限于這些實施例。
實施例1
一種治療羅非魚三代蟲病的復合制劑，由下述質量百分比的原料組成：苦參堿25%、敵百蟲20%、溴化二甲基二癸基烴銨5%、二甲基亞砜50%；
制備：按配比稱取各原料組分；依次將敵百蟲、苦參堿和溴化二甲基二癸基烴銨溶于二甲基亞砜，攪拌均勻，得到一種棕褐色液體，即為本發明實施例1 用于治療羅非魚三代蟲病的復合制劑。
實施例2
一種治療羅非魚三代蟲病的復合制劑，由下述質量百分比的原料組成：苦參堿20%、敵百蟲20%、溴化二甲基二癸基烴銨6%、二甲基亞砜54%；
制備：同實施例1。
實施例3
一種治療羅非魚三代蟲病的復合制劑，由下述質量百分比的原料組成：苦參堿25%、敵百蟲25%、溴化二甲基二癸基烴銨5%、二甲基亞砜45%；
制備：同實施例1。
實施例4
一種羅非魚三代蟲病的復合制劑，由下述質量百分比的原料組成：苦參堿23%、敵百蟲22%、溴化二甲基二癸基烴銨5%、二甲基亞砜50%；
制備：同實施例1。
實施例5
一種治療羅非魚三代蟲病的復合制劑，由下述質量百分比的原料組成：苦參堿22%、敵百蟲23%、溴化二甲基二癸基烴銨7%、二甲基亞砜48%；
制備：同實施例1。
上述實施例可以列舉很多，在此不一一列舉，從申請人所做的大量實驗得到的數據證明，只要是按照本發明的技術方案的參數范圍選擇，即可制備出達到本發明目的的治療羅非魚三代蟲病的復合制劑，效果良好。
上述實施例中復合制劑的使用方法：對發病池塘開啟增氧機進行增氧，維持水體溶氧量5 mg/L以上，將上述復合制劑用水稀釋1000～1500倍全池均勻潑灑，使用劑量為1.5~2.0 g/m3均可，維持藥物濃度連續浸泡24小時后換水。
以下是本發明復合苦參堿敵百蟲制劑用于治療羅非魚三代蟲病的效果試驗：
1 材料和方法
1.1 試驗魚
患三代蟲病的羅非魚苗種由福建省淡水水產研究所榕橋試驗基地提供，抽樣患三代蟲病的羅非魚苗種體表和鰓部寄生有大量三代蟲，試驗羅非魚苗種全長為3～5cm，各批次試驗魚規格不同，同一試驗規格一致；試驗魚暫養于基地實驗室內直徑 1.6 m 的玻璃鋼纖維養殖桶中，連續充氣，每天換水1次，每次換水量30 %左右；暫養2～3 d后檢查，蟲體量數量未減少，即可用于試驗。
1.2 試驗藥品
苦參堿為苦參總堿含量2.0%的醇提取液，敵百蟲為90%的晶體敵百蟲，溴化二甲基二癸基烴銨，溶解劑為二甲基亞砜。苦參堿和敵百蟲分別以二甲基亞砜配置成10 g/L 母液，按濃度設計要求加入實驗箱；試驗用復合制劑由苦參堿、敵百蟲、溴化二甲基二癸基烴銨按比例用二甲基亞砜溶解并定容至100%，混合攪拌均勻。
1.3 苦參堿對三代蟲的殺滅試驗
試驗在0.4 m×0.8 m×0.4 m的水簇箱中進行，水簇箱水量為0.1 m3的井水（已暴氣24 h以上）。試驗設0.32、0.42、0.56、0.75、1.00、2.00 mg/L濃度的2.0%苦參堿試驗組，對照不用藥組，每組放入受三代蟲感染且活力較強的羅非魚苗種6尾，設3個重復試驗組。試驗期間不間斷充氣，水溫26 ℃～27 ℃，浸浴72 h，每日記錄魚體死亡情況，分別于12、24、48 h和72 h用體視鏡逐尾檢查羅非魚苗體表三代蟲的數量變化及觀察魚苗的活動情況，統計殺蟲率。
殺蟲率（%）=（對照組三代蟲平均存活數量－試驗組三代蟲平均存活數量）/對照組三代蟲平均存活數量×100%。
1.4苦參堿復配敵百蟲對三代蟲的殺滅試驗
試驗設置苦參堿濃度（0、0.32、0.42、0.56、0.75、1.00 mg/L）、復配敵百蟲（0.3 mg/L），設置了7個試驗組（表1），每個濃度設置3個平行試驗組，試驗水溫26 ℃～27 ℃，浸浴48 h，每日記錄魚體死亡情況，分別于12、24和48 h體視鏡逐尾檢查羅非魚苗體表三代蟲的數量變化及觀察魚苗的活動情況，統計殺蟲率。
表1苦參堿復配敵百蟲對三代蟲的殺滅試驗濃度組合
1.5 復合制劑對羅非魚三代蟲病的治療試驗
根據前期試驗結果，分別將苦參堿、敵百蟲和溴化二甲基二癸基烴銨以5:4:0，5:5:0，5:4:1，5:5:1比例配制復合制劑試驗組和空白對照組，每組放20尾病魚進行試驗，藥物使用濃度為1.5 mg/L、2.0 mg/L。試驗過程不間斷充氣，試驗水溫26 ℃～27 ℃，浸浴觀察72 h，分別于浸浴24 h、48 h和72 h取3尾魚檢查魚體三代蟲寄生狀況，并統計患病羅非魚的存活率。
羅非魚魚平均存活率（%）=鏡檢時魚的存活數量/投放魚的數量×100%
2 結果
2.1 苦參堿對三代蟲的殺滅效果
不同濃度苦參堿對三代蟲的殺滅效果見表2。試驗結果顯示：1.00 mg/L濃度組浸浴72 h后抽樣檢查未發現有三代蟲寄生，2.00 mg/L濃度組浸浴48 h后抽樣檢查未發現有三代蟲寄生，這說明了苦參堿能有效殺滅羅非魚三代蟲，殺蟲效果與作用時間、藥物濃度成正比。
表2 不同濃度苦參堿對三代蟲的殺蟲率（%）
2.2 苦參堿復配敵百蟲對三代蟲的殺滅效果
試驗結果見表3，由表3可以看出，浸浴24 h后，苦參堿0.32 mg/L+敵百蟲0.3 mg/L的試驗組抽樣檢查未發現有三代蟲寄生，殺蟲率達到100%，而0.3 mg/L敵百蟲試驗組殺蟲率達到33.3%。說明了苦參堿與敵百蟲配伍可明顯提高其對三代蟲的驅除效果，顯疊加效應。
表3 不同濃度苦參堿復配敵百蟲對三代蟲的殺蟲率（%）
2.3 復合制劑對羅非魚三代蟲病的治療效果
試驗結果見表4，試驗組浸浴24 h檢查未發現有三代蟲寄生；以苦參堿∶敵百蟲∶溴化二甲基二癸基烴銨為5:4:1和5:5:1的試驗組，病魚存活率達到100%，魚體表無炎癥出現，試驗魚恢復攝食，說明試驗魚已痊愈；未添加溴化二甲基二癸基烴銨的試驗組病魚存活率明顯低于添加溴化二甲基二癸基烴銨的試驗組；試驗濃度1.5 mg/L的試驗組與2.0 mg/L的試驗組無明顯差異。
表4不同配比的復合制劑對羅非魚三代蟲病的治療效果
3 小結
苦參堿浸浴能有效驅殺羅非魚體表和鰓上寄生的三代蟲，尤其與敵百蟲配伍可有效提高藥物對三代蟲的驅除效果，添加適當濃度的溴化二甲基二癸基烴銨可有效提高患三代蟲病羅非魚的存活率。建議生產上使用的復合制劑組方苦參堿∶敵百蟲∶溴化二甲基二癸基烴銨∶二甲基亞砜為（2.2~2.5）∶（2.0~2.5）∶（0.5~0.7）∶（4.3~5.5）；治療的使用劑量為1.5~2.0 mg/L。