乳香部分的治療應用的制作方法

發明領域本發明涉及乳香以及其中所發現的化合物包括聚合月桂烯的治療應用。更具體地，本發明涉及用包含聚合月桂烯的組合物治療神經功能缺損的方法。發明背景對得自植物和植物產品、用于多種治療應用的新藥物實體的追尋來源于古代并持續至今。一種這樣的來源是乳香(mastic)，也被稱為乳香(gummastic)或乳香(masticgum)，其是作為漆樹科(Anacardiaceae)成員洋乳香樹(PistacialentiscusL)的滲出物獲得的樹脂。乳香在古地中海世界被用于胃腸功能紊亂，如胃痛、消化不良和消化性潰瘍。已公開向患有十二指腸潰瘍的人類患者和患有誘發性胃潰瘍和十二指腸潰瘍的實驗大鼠口服給予乳香具有治療作用(Al-Habbal等(1984)ClinExpPharmacopPhysio11(5)：541-4；Said等(1986)JEthnopharmacol15(3)：271-8)。雖然已公開乳香對幽門螺旋桿菌(Helicobacterpylori)——引起消化性潰瘍病的病原體——具有體外殺菌作用(Marone等(2001)JChemother13：611-614)，但其他報道公開了乳香在被給予幽門螺旋桿菌(H.pylori)陽性人類患者(Bebb等(2003)JAntimicrobChemother52：522-23)或給予實驗感染小鼠(Loughlin等(2003)JAntimicrobChemother51：367-371)時不發揮抗細菌活性。希臘專利號GR1,003,541公開了提取自PistacialentiscusvarChia的葉、枝和果實的chios乳香油的抗微生物和抗真菌作用。希臘專利號GR1,003,868公開了得自Pistacialentiscusvar.Chia的產物作為抗氧化劑、作為傷口愈合誘導劑和作為細胞生長抑制劑的應用。美國專利申請公開號2005/0238740公開了提取自乳香樹脂的某些組分呈抗微生物和抗細胞增殖活性。根據該公開，第一提取物(被稱為“總組分”或“全部提取物”)包含除聚合物樹脂外的乳香的所有化合物；第二提取物是包含總組分所有三萜酸的酸性組分，第三提取物是包含總組分所有其他萜烯的中性組分。還公開了通過蒸餾得到的精油，其包含單萜，包括β-月桂烯。該申請公開了藥物制劑，其包含任選地與精油組合的上述總組分、酸性組分或中性組分中的任意組分或其合成的等同物，或包含分離的成分產物或其合成的等同物；及其在用于治療微生物感染的方法中的應用，該微生物感染包括幽門螺旋桿菌、丙酸桿菌(Propionibacterium)、葡萄球菌(Staphlococcus)、假單胞菌(Pseudomonas)和細胞過度增殖。被上述專利申請的發明人中的一些授權的Paraschos等(2007)公開了不含聚合物(TMEWP)的總乳香提取物的制備，其通過對粗乳香進行極性溶劑萃取并從其中去除不溶性聚合物聚-β-月桂烯以及從TMEWP分離酸性和中性組分而制備(Paraschos等(2007)AntimicrobAgentsChemother51(2)：551-559)。根據該公開，向幽門螺旋桿菌感染的小鼠給予TMEWP3個月時間造成細菌定殖30倍減少，很大程度上歸因于從酸性組分純化的特定化合物。作者指出，由于推測在前研究所用的粗乳香制品中高百分比的聚-β-月桂烯阻礙在口服給藥過程中潛在的體內活性，因此制備了TMEWP。作者進一步公開，聚-β-月桂烯的去除造成具有抗幽門螺旋桿菌活性的治療部分增強。EP專利申請號1520585公開了得自黃連木屬(Pistacia)植物的產物對于生產治療或預防癌癥的藥物的應用。根據該公開，從不同黃連木屬物種的葉、枝、果實、堅果和花蒸餾出的精油包含不同比例的大量單體萜烯化合物，特別是β-月桂烯。該申請還公開了油對某些腫瘤細胞系如結腸和卵巢腺癌具有活性，以及乙酸龍腦酯是唯一一個被發現具有抗癌活性的成分。國際專利申請公開號WO2005/112967公開了從乳香提純具有抗增殖作用的抗癌物質，該抗癌物質被發現于可溶性組分中，該可溶性組分通過如下得到：將乳香懸浮在溶劑中，該溶劑選自非酸性脂肪烴、包含至少25％水溶性非酸性脂肪烴的水溶液或其組合；和去除不溶性組分。該申請還公開了治療癌癥細胞的方法，包括給予藥學有效量的乳香樹脂組分，該組分抑制癌癥細胞的生長。根據該公開，抗癌化合物對于多種癌癥細胞包括人類結腸癌癥細胞均有效。VanderBerg等(1998)公開了利用萃取和尺寸排阻層析分離和純化乳香的聚合物組分(VanderBerg等(1998)TetrahedronLett3：2645-2648)。根據該公開，該聚合物具有寬的分子量分布，即20,000至100,000Da，由136Da的單體單元組成，并且具有1，4-聚-β-月桂烯的結構，其順式與反式構型的比例為3∶1。作者認為，其公開是天然存在的單萜聚合物的首次報道。Barra等(2007)公開了從洋乳香樹(P.lentiscusL.)對精油的萃取和氣相色譜分析(Barra等(2007)JAgricFoodChem55(17)：7093-7098)。根據該公開，確定了共45種化合物，包括β-月桂烯作為其中一種主要化合物。Marner等(1991)公開了從乳香黃連木(P.lentiscus)的乳香中確定多種三萜類(Marner等(1991)Phytochemistry，30，3709-3712)。美國專利號5,506,406公開了乳香油，其通過將乳香溶于油或脂肪產生，并被裝入軟膠囊，該軟膠囊任選地進一步包含兩親性物質，如幾丁質或殼聚糖。根據該公開，該膠囊有效消除和抑制幽門螺旋桿菌以及減少糞便的氣味。美國專利號5,637,290公開了口腔衛生產品，其包括牙膏和選自以下的成分的組合：天然乳香、提取的乳香油和合成的乳香油劑。還公開了將乳香引入防曬霜、護發產品和化妝品的應用。美國專利號6,623,728公開了美容護膚乳液組合物，其包含約0.001wt％至約10wt％的溶解乳香；揮發性水混溶性溶劑；和美容上可接受的載體。根據該公開，該乳液優選為水包油乳液，并且優選的溶劑包括乙醇、甲醇、丙醇、異丙醇及其混合物。根據該公開，使用同種溶劑得到溶解的乳香。美國專利號6,811,769公開了口服組合物，其包含乳香的油提取物，如用橄欖油或棕櫚油制備的油提取物；和消炎劑，如甘草酸。根據該公開，該組合物對牙周病相關細菌和對齲齒相關細菌具有抗細菌作用。美國專利號7,294,651公開了類異戊二烯化合物——特別是萜烯化合物——對于抑制革蘭氏陽性細菌胞外蛋白質——如金黃色葡萄球菌(S.aureus)產生的毒性休克綜合征毒素(ToxicShockSyndromeToxin)-1——生成的應用。根據該公開，適當的萜烯可以是環狀的或無環的、飽和或不飽和的，并且除其他外還包括聚萜烯。還公開了這種化合物對于制備可被摻入水溶液的組合物如陰道清潔制劑的應用。美國專利號4,564,718公開了功能終止聚合物的制備——該功能終止聚合物被稱為“液體橡膠”，具有基本低于室溫的玻璃化轉變溫度——其通過如下制備：具有可用于聚合的雙鍵或共軛雙鍵的萜烯或其氧衍生物與提供所需功能終止的引發劑聚合。根據該公開，該聚合物優選具有500至20,000的分子量，并且用于其制備的優選無環單萜為β-月桂烯及其他。該專利公開了分子量約2000和約4000的聚合月桂烯的制備。該專利進一步公開了該發明的聚合物可與其他試劑進一步反應，提供彈性劑、密封劑或粘合劑，或其可用作橡膠增韌劑。進一步公開了從月桂烯制備羥基封端的聚月桂烯，及其對于制備聚氨酯彈性劑的應用。Newmark等J.PolymerSci26，71-77(1988)公開了具有觀測分子量87,000和計算分子量46,000的聚月桂烯的合成。美國專利號4,374,957公開了粘性熱塑性彈性線性三嵌段聚合物，其相應于式A-B-A，其中A是單乙烯基芳烴的非彈性線性均聚物嵌段，其平均分子量在10,000和60,000之間，且玻璃化轉變溫度在70℃以上，其中B是月桂烯的彈性均聚嵌段，其平均分子量在50,000和200,000之間，且玻璃化轉變溫度在約-40℃以下。美國專利號5,759,569公開了可生物降解可堆肥的制品，其至少部分包含某些反式聚合物，其中該聚合物具有至少約20,000的重均分子量，并且通過聚合單體成分制成，該單體成分包括：(1)約70至100摩爾％的1，3-二烯，特別是β-月桂烯；和(2)高達約30摩爾％的其他相容的共聚單體。根據該公開，該制品除其他外包括包裝材料；一次性吸收劑制品(例如，尿布、衛生棉)；服裝制品，如防護衣、手術簾、手術衣、手術單；機織、編織和非機織織物；手術海綿、棉球涂藥器、一次性注射器和容器。美國專利號7,232,872和7,214,750公開了聚合方法，包括使一種或多種單體——特別是月桂烯、一種或多種路易斯酸、一種或多種引發劑和含有一種或多種氫氟碳的稀釋劑在反應器中接觸。美國專利申請公開號2007/0179260和美國專利號7,417,103公開了高方向規整度(regioregularity)的基于3，4-異戊二烯的聚合物及其制備方法。根據這些公開，該聚合物的數均分子量為5000至6,000,000，并且該聚合物也可包含1，4-異戊二烯如月桂烯單元。根據該公開，該聚合物由于其機械耐久性和熱耐久性適用作塑料材料。現有技術未公開乳香或其組分對于治療神經系統疾病的應用。現有技術未教導或暗示任何分離的乳香組分在用于治療神經系統疾病的組合物中的應用。現有技術也未教導或暗示無論得自乳香或化學合成的分離的聚合月桂烯組分有利地用作藥物組合物或治療應用中的活性成分。發明概述本發明提供了具有神經保護性和神經再生性的組合物和用其治療一系列神經系統疾病和病癥的方法。更具體地，現公開包含提取自乳香的分離組分(餾分，fraction)的組合物具有神經保護活性，并可用于促進神經元細胞類型及其他細胞類型的分化和成熟。本發明部分基于如下意外的發現：乳香的分離組分呈神經保護和神經再生生物活性，其可用于多種治療用途。更具體地，包含這種分離組分的組合物具有誘導多種細胞型——包括神經元細胞類型——細胞分化的活性。已在多種細胞系中觀測到分化誘導活性，包括來自外胚層、中胚層和內胚層譜系的多種細胞類型。可用本領域已知的乳香分離組分和提取物中的任一種實踐本發明所述的新方法和治療。但是，本發明進一步公開，一些包含較高分子量乳香成分的選定組分尤其有益于在本發明所述組合物和方法中的應用。已知乳香提取物包含聚合形式的單萜化合物，其被稱為月桂烯。由此進一步首次公開的是，包含聚合月桂烯的乳香分離組分可用作治療神經退行性疾病的藥物組合物的活性成分。適于用本發明的組合物治療的疾病包括不同類型的癡呆，包括但不限于阿爾茨海默病、中風和帕金森病。同樣首次公開的是，聚合月桂烯的分離組分，無論得自植物來源或化學合成，均可用作治療神經退行性疾病和治療組織損傷的藥物組合物的活性成分。本發明的教導已經由包含聚合月桂烯的乳香分離組分和由化學合成的聚合月桂烯——相應于從乳香分離的聚合物——示例。本發明相對于現有技術教導尤其令人驚訝并且意外，現有技術教導公開了已去除聚合月桂烯的乳香提取物組分對于不同治療適應癥的應用。此外，現有技術認為，得自乳香的聚合組分在治療上不可用，以及聚合月桂烯在治療組合物中的存在實際上抑制活性化合物有益的生物活性和生物利用度。因此，現有技術將乳香的治療活性歸因于多種低分子量萜烯型分子，特別是單體月桂烯和小低聚形式的月桂烯。但是，本發明的發明人驚訝地發現，與現有技術的教導相反，即乳香提取物中存在的某些低分子量萜烯實際上妨礙和阻滯了本文公開的組分和組合物誘導細胞分化的活性。由此公開的是，本文公開的組分和組合物的新生物活性由于多種萜烯的某些單體和小低聚形式的存在而受到抑制。不希望受任何具體理論或作用機制束縛，如本文公開的包含聚合月桂烯的組合物誘導神經元細胞分化的活性使本發明可用于改善(再形成)神經元間的連接和克服在受與突觸形成不足有關的病理影響的腦和神經組織中有缺陷的神經元間連通。該病理引起多種神經系統病理，包括例如阿爾茨海默病。進一步，本發明可用于逆轉作用于神經系統的多種藥物如麻醉劑的不利影響。本發明進一步可用于大量細胞和組織的復壯。如本文所用，“聚合月桂烯”包括聚合度至少為6的月桂烯聚合形式。聚合月桂烯無限制地包括，聚合β-月桂烯(聚-β-月桂烯)、聚合α-月桂烯(聚-α-月桂烯)、其均聚物和包含月桂烯亞單元的雜聚物(也被稱為共聚物)。同樣包括聚合月桂烯化合物的幾何異構體、光學異構體和非對映異構體。如本文所用，β-月桂烯指7-甲基-3-亞甲基-1，6-辛二烯，α-月桂烯指結構異構體2-甲基-6-亞甲基-1，7-辛二烯。根據第一方面，本發明提供了治療神經功能缺損的方法，該方法包括向對其有需要的個體給予治療有效量的組合物——該組合物包含從乳香分離的提取物和藥學上可接受的載體，從而治療神經功能缺損。根據另一方面，本發明提供了治療神經功能缺損的方法，該方法包括向對其有需要的個體給予治療有效量的組合物——該組合物包含含聚合月桂烯的分離組分和藥學上可接受的載體，從而治療神經功能缺損。根據另一方面，本發明提供了治療神經系統疾病或病癥的方法，包括向對其有需要的個體給予治療有效量的組合物，該組合物包含乳香的分離組分，其中該分離組分的特征在于其可溶于至少一種極性有機溶劑和至少一種非極性有機溶劑，并且基本不含可溶于所述極性有機溶劑但不溶于所述非極性有機溶劑的化合物。根據另一方面，本發明提供了促進或誘導組織再生的方法，該方法包括向對其有需要的個體給予治療有效量的組合物，該組合物包含乳香的分離組分，其中該分離組分的特征在于其可溶于至少一種極性有機溶劑和至少一種非極性有機溶劑，并且基本不含可溶于所述極性有機溶劑但不溶于所述非極性有機溶劑的化合物；從而促進或誘導組織再生。根據還有另一方面，本發明提供了促進或誘導組織再生的方法，該方法包括向對其有需要的個體給予治療有效量的組合物，該組合物包含含聚合月桂烯的分離組分和藥學上可接受的載體；從而治療組織損傷。如本文所用，組織修復包括誘導和促進組織再生，包括神經組織。在多個實施方式中，通過適當的途徑實施給藥步驟，該途徑選自口服、局部、經皮或腸胃外。根據具體實施方式，給藥途徑是通過局部應用進行的，該局部應用選自以下：皮膚、陰道、直腸、吸入、鼻內、眼部、耳部和頰部。根據可選的實施方式，給藥途徑是通過腸胃外注射的。在多個實施方式中，通過腸胃外途徑實施給藥步驟，該腸胃外途徑選自靜脈內、肌內、皮下、皮內、腹膜內、動脈內、腦內、腦室內、骨內和鞘內。在具體實施方式中，給藥步驟包括用組合物接觸特定類型或特定譜系或在特定分化階段的細胞。在具體實施方式中，細胞選自神經細胞、神經元細胞、內皮細胞、上皮細胞和干細胞。在多個實施方式中，細胞是選自以下譜系的細胞：外胚層、中胚層和內胚層譜系。在多個實施方式中，接觸細胞的步驟在體內、離體或在體外實施。在具體實施方式中，神經功能缺損包括功能的減弱，該功能選自認知功能、感覺功能、運動功能、神經心理功能、精神功能及其組合。在具體實施方式中，神經功能缺損與以下病癥或疾病有關：包括，例如，創傷、血管性癡呆、老年性癡呆、阿爾茨海默病、肌萎縮性脊髓側索硬化(ALS)、多發性硬化癥、帕金森病、中風、精神分裂癥、雙相性精神障礙、抑郁、肥胖、厭食、惡病質、感染和免疫性疾病。在具體實施方式中，神經功能缺損源于暴露于藥物，如麻醉劑。在具體實施方式中，接觸細胞的步驟在體外或離體實施。在具體實施方式中，細胞是干細胞。在具體實施方式中，意圖將該細胞植入個體或移植到個體中。在具體實施方式中，細胞是意圖植入個體或移植到個體中的器官或組織的細胞。在具體實施方式中，該細胞分泌可溶性因子。在具體實施方式中，組合物包含基于組合物總重量約0.01至約25％(w/w)的乳香分離組分。在具體實施方式中，組合物包含基于組合物總重量約0.01至約12％(w/w)的乳香分離組分。在具體實施方式中，通過這樣的方法獲得乳香分離組分，其包括以下步驟：用至少一種極性有機溶劑處理乳香和分離可溶于所述極性有機溶劑的組分。在具體實施方式中，通過這樣的方法獲得乳香分離組分，其包括以下步驟：用至少一種非極性有機溶劑處理乳香和分離可溶于所述非極性有機溶劑的組分。在具體實施方式中，乳香分離組分的特征在于：其可溶于至少一種極性有機溶劑和至少一種非極性有機溶劑。在具體實施方式中，乳香分離組分的進一步特征在于：其基本不含可溶于所述極性有機溶劑但不溶于所述非極性有機溶劑的化合物。在具體實施方式中，乳香分離組分的特征在于：其既可溶于至少一種極性有機溶劑又可溶于至少一種非極性有機溶劑，并且基本不含可溶于所述極性有機溶劑但不溶于所述非極性有機溶劑的化合物。在具體實施方式中，通過這樣的方法獲得乳香的分離組分，其包括以下步驟：(a)用極性有機溶劑處理乳香；(b)分離可溶于所述極性有機溶劑的組分；(c)任選地去除所述極性有機溶劑；(d)用非極性有機溶劑處理在步驟(b)或(c)得到的可溶性組分；(e)分離可溶于所述非極性有機溶劑的組分；和(f)任選地去除所述非極性有機溶劑；其中步驟(d)至(f)可先于步驟(a)至(c)。適于獲得可用于本發明方法的提取物的極性有機溶劑包括醇、醚、酯、酰胺、醛、酮、腈及其組合。極性有機溶劑的具體實例為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、1-丁醇、2-丁醇、仲丁醇、叔丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、新戊醇、3-甲基-1-丁醇、2-甲基-1-丁醇、3-甲基-2-丁醇、2-甲基-2-丁醇、乙二醇、乙二醇單甲醚、二乙醚、甲基乙醚、乙基丙醚、甲基丙醚、1，2-二甲氧基乙烷、四氫呋喃、二氫呋喃、呋喃、吡喃、二氫吡喃、四氫吡喃、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙醛、甲酸甲酯、甲酸乙酯、丙酸乙酯、丙酸甲酯、二氯甲烷、氯仿、二甲基甲酰胺、乙酰胺、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、丙酮、乙基甲基酮、二乙基酮、乙腈、丙腈及其組合。適于實施本發明的非極性溶劑包括無環或環狀的、飽和或不飽和的脂肪烴和芳烴，例如，C5-C10烷烴、C5-C10環烷烴、C6-C14芳烴及其組合。上述每一種均可被一個或多個鹵素任選地取代，例如，C7-C14全氟烷烴。非極性有機溶劑的具體實例為戊烷、己烷、庚烷、辛烷、壬烷、癸烷、環戊烷、環己烷、環庚烷、苯、甲苯、二甲苯和異構體及其混合物。在具體實施方式中，獲得乳香分離組分的過程進一步包括步驟(c)或步驟(f)后得到的可溶性組分的大小分級。在具體實施方式中，大小分級包括尺寸排阻層析。在具體實施方式中，步驟(c)或(f)包括通過選自旋轉蒸發、高真空應用及其組合的手段去除溶劑。在具體實施方式中，步驟(a)至(c)在步驟(d)至(f)前實施。在具體實施方式中，步驟(d)至(f)在步驟(a)至(c)前實施。在具體實施方式中，極性有機溶劑包括乙醇，非極性有機溶劑包括己烷。在具體實施方式中，步驟(a)至(c)和步驟(d)至(f)各自獨立地實施多個循環。在具體實施方式中，乳香得自黃連木屬物種，選自乳香黃連木、大西洋黃連木(P.atlantica)、P.palestina、P.saportae、黑黃連木(P.terebinthus)、P.vera和全緣葉黃連木(P.integerrima)。在具體實施方式中，乳香的分離組分包括聚合月桂烯。在具體實施方式中，組合物包含基于組合物總重量約0.01至約12％(w/w)的聚合月桂烯。在具體實施方式中，聚合月桂烯選自聚合β-月桂烯(聚-β-月桂烯)、聚合α-月桂烯(聚-α-月桂烯)、月桂烯共聚物及其組合。在具體實施方式中，聚-β-月桂烯選自1，4-聚-β-月桂烯、3，4-聚-β-月桂烯、1，2-聚-β-月桂烯及其組合。在具體實施方式中，聚合月桂烯包括月桂烯異構體，該月桂烯異構體選自順式異構體、反式異構體及其組合。在具體實施方式中，1，4-聚-β-月桂烯選自順式1，4-聚-β-月桂烯、反式1，4-聚-β-月桂烯及其組合。在具體實施方式中，聚合月桂烯包括順式1，4-聚-β-月桂烯。在具體實施方式中，聚合月桂烯具環狀構象。在具體實施方式中，聚合月桂烯具有支鏈構象。在具體實施方式中，聚合月桂烯的聚合度在至少約6至約1800的范圍內。在具體實施方式中，聚合度為至少約10。在具體實施方式中，聚合度為至少約15。在具體實施方式中，聚合度為至少約25。在具體實施方式中，聚合度為至少約35。在具體實施方式中，聚合度在約6至約30的范圍內。在具體實施方式中，聚合度在約30至約500的范圍內，例如，在約35至約150的范圍內。各種可能性均代表本發明單獨的實施方式。要理解的是，組合物可包含不同分子量的聚合月桂烯組分，例如在至少約800至約100,000的范圍內或其多種組合。在具體實施方式中，聚合月桂烯的多分散指數低于5。在具體實施方式中，根據本發明其中一些方法所用的聚合月桂烯是化學合成產物。在具體實施方式中，化學合成包括將單體月桂烯用作底物。在具體實施方式中，底物是β-月桂烯。在具體實施方式中，β-月桂烯底物得自植物。在具體實施方式中，化學合成產物包括順式1，4-聚-β-月桂烯。在具體實施方式中，化學合成包括陰離子聚合反應。在具體實施方式中，將得自化學合成的聚合月桂烯溶于疏水性載體，如至少一種植物油。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分得自天然來源。在具體實施方式中，天然來源是歸類為漆樹科的植物。在具體實施方式中，該植物被歸類為選自以下的屬：黃連木屬(Pistacia)、松屬(Pinus)、云杉屬(Picea)、檜屬(Juniperus)、Alsies、落葉松屬(Larix)、金魚草屬(Antirrhinum)、乳香屬(Boswellia)、柑桔屬(Citrus)和三七草屬(Gynura)。在具體實施方式中，該植物是黃連木屬物種，選自乳香黃連木、大西洋黃連木、P.palestina、P.saportae、黑黃連木、P.vera和全緣葉黃連木。在具體實施方式中，該植物是洋乳香樹。在具體實施方式中，天然來源是植物材料選自樹脂、葉、枝、根、花、種子、芽、樹皮、堅果和根。在具體實施方式中，天然來源是歸類于選自以下屬的植物：羅勒屬(Ocimum)、月桂屬(Laurus)和薰衣草屬(Lavendula)。在具體實施方式中，通過這樣的方法獲得含聚合月桂烯的分離組分，該方法包括以下步驟：(a)用至少一種極性有機溶劑接觸植物材料；(b)分離可溶于至少一種極性有機溶劑的組分；(c)任選地去除所述極性有機溶劑；(d)用至少一種非極性有機溶劑處理在步驟(b)或(c)得到的可溶性組分；(e)分離可溶于所述非極性有機溶劑的組分；和(f)任選地去除所述非極性有機溶劑；其中步驟(d)至(f)可先于步驟(a)至(c)，并且其中步驟(a)至(c)和步驟(d)至(f)各自獨立地實施多個循環；從而獲得含聚合月桂烯的分離組分。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分的純度為至少約80％(w/w)。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分的純度可以為至少約85％(w/w)。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分的純度為至少約90％(w/w)，或至少約93％，或至少約95％，或至少約97％，或至少約98％，或至少約99％。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分的純度為至少80％，并且聚合月桂烯的聚合度為至少6。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分的純度為至少90％，并且聚合月桂烯的聚合度為至少10。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分包含至少90％(w/w)的順式1，4-聚-β-月桂烯。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分包含順式1，4-聚-β-月桂烯和反式1，4-聚-β-月桂烯的混合物，其中混合物包含至少50％(w/w)的順式1，4-聚-β-月桂烯。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分包含至少90％(w/w)的順式1，4-聚-β-月桂烯，該順式1，4-聚-β-月桂烯的數均分子量為至少800，或至少1,000，或至少5,000，或至少10,000。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分包含至少80％(w/w)的順式1，4-聚-β-月桂烯，該順式1，4-聚-β-月桂烯的數均分子量在約800至約5,000的范圍內。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分包含至少90％(w/w)的順式1，4-聚-β-月桂烯，該順式1，4-聚-β-月桂烯的數均分子量在約1000至約10,000的范圍內。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分包含至少90％(w/w)的順式1，4-聚-β-月桂烯，該順式1，4-聚-β-月桂烯的數均分子量在約5000至約20,000的范圍內。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分包含至少90％(w/w)的順式1，4-聚-β-月桂烯，該順式1，4-聚-β-月桂烯的數均分子量在約10,000至約20,000的范圍內。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分包含至少90％(w/w)的順式1，4-聚-β-月桂烯，該順式1，4-聚-β-月桂烯的數均分子量在約20,000至約30,000的范圍內。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分包含至少90％(w/w)的順式1，4-聚-β-月桂烯，該順式1，4-聚-β-月桂烯的數均分子量在約30,000至約50,000的范圍內。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分包含至少90％(w/w)的順式1，4-聚-β-月桂烯，該順式1，4-聚-β-月桂烯的數均分子量在約50,000至約80,000的范圍內。在具體實施方式中，組合物包含低于約10％(w/w)，更優選低于約5％(w/w)的萜烯化合物，該萜烯化合物可溶于極性有機溶劑且不溶于非極性有機溶劑。在具體實施方式中，組合物基本不含萜烯化合物，該萜烯化合物可溶于極性有機溶劑且不溶于非極性有機溶劑。在具體實施方式中，組合物包含低于約10％(w/w)，更優選低于約5％(w/w)的單體萜烯化合物。在具體實施方式中，組合物基本不含月桂烯單體。如本文所述，萜烯化合物包括單體和低聚形式的萜烯化合物，包括各種被歸類為單萜、二萜、倍半萜、三萜和四萜的萜烯化合物，包括其酸、醛和醇形式。在具體實施方式中，組合物包含低于約10％(w/w)，更優選低于約5％(w/w)的單萜化合物，其選自：β-月桂烯、α-月桂烯、順式α-羅勒烯、二氫月桂烯、檸檬烯、α-蒎烯、β-蒎烯及其組合。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分得自植物，并且組合物基本不含月桂烯單體和聚合度低于約6的月桂烯低聚形式。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分得自植物，并且組合物基本不含可溶于至少一種極性有機溶劑且不溶于至少一種非極性有機溶劑的萜烯化合物。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分是化學合成產物，并且組合物基本不含月桂烯單體和聚合度低于約6的月桂烯低聚形式。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分是化學合成產物，并且組合物基本不含可溶于極性有機溶劑的萜烯化合物。在具體實施方式中，藥學上可接受的載體包括疏水載體。在具體實施方式中，藥學上可接受的疏水載體包括至少一種油。在具體實施方式中，油選自礦物油、植物油及其組合。在具體實施方式中，植物油選自杏仁油、油菜油、椰子油、玉米油、棉花籽油、葡萄籽油、橄欖油、花生油、藏花油、芝麻油、大豆油及其組合。在具體實施方式中，礦物油是輕礦物油。在具體實施方式中，疏水載體包括至少一種蠟。在具體實施方式中，疏水載體包括至少一種油和至少一種蠟的組合。在具體實施方式中，組合物的形式選自膠囊、片劑、脂質體、栓劑、懸浮液、軟膏、乳劑、洗劑、溶液、乳液、膜、粘固劑、粉末、膠液、氣溶膠和噴霧劑。在具體實施方式中，組合物是藥物組合物。在具體實施方式中，組合物的形式適于美容性或皮膚病學給藥。在本文所公開方法的具體實施方式中，給藥或接觸細胞的步驟包括使用制品，其中組合物處于制品上或制品內。在具體實施方式中，組合物以涂層的形式處于制品上。在具體實施方式中，制品包括容器，其中組合物處于容器內。在具體實施方式中，制品選自織物制品、尿布、傷口敷料、醫療裝置、一個或多個針、一個或多個微針、注射裝置和噴霧器。在具體實施方式中，制品包括多個微針。在具體實施方式中，醫療裝置選自假肢、人造器官或其組件、閥門、導管、管、支架、人造膜、起搏器、傳感器、內窺鏡、成像裝置、泵、導線和植入物。在具體實施方式中，植入物選自心臟植入物、耳蝸植入物、角膜植入物、顱植入物、牙齒植入物、頜面植入物、器官植入物、矯形植入物、血管植入物、關節內植入物和胸植入物。在具體實施方式中，在醫療裝置植入個體前或后實施本方法。在具體實施方式中，醫療裝置是器官植入物。在具體實施方式中，器官植入物包括個體自身的細胞。在具體實施方式中，在細胞、組織或器官移植到個體前或后實施本方法。在具體實施方式中，給藥或接觸步驟包括選自以下的手段：電穿孔、超聲處理、射頻、加壓噴霧及其組合。在具體實施方式中，接觸步驟包括建立間液與組合物之間的接觸。在具體實施方式中，建立間液與組合物之間接觸的步驟包括用針、微針或包含多個針或微針的設備刺穿和/或挑撥皮膚。在具體實施方式中，個體是人類。在具體實施方式中，個體選自非人哺乳動物、魚和鳥。根據另一方面，本發明提供了乳香的分離組分用于制備治療神經功能缺損的藥物的應用。根據另一方面，本發明提供了乳香的分離組分，用于治療神經功能缺損。根據另一方面，本發明提供了藥物組合物——該組合物包含乳香的分離組分和藥學上可接受的載體，用于治療神經功能缺損。根據另一方面，本發明提供了含聚合月桂烯的分離組分，用于治療神經功能缺損。根據另一方面，本發明提供了藥物組合物——該組合物包含含聚合月桂烯的分離組分和藥學上可接受的疏水載體，用于治療神經功能缺損。根據另一方面，本發明提供了乳香的分離組分用于制備誘導或促進組織再生的藥物的應用。根據另一方面，本發明提供了乳香的分離組分，用于誘導或促進組織再生。根據另一方面，本發明提供了藥物組合物——該組合物包含乳香的分離組分和藥學上可接受的載體，用于誘導或促進組織再生。根據另一方面，本發明提供了含聚合月桂烯的分離組分，用于誘導或促進組織再生。根據另一方面，本發明提供了藥物組合物——該組合物包含含聚合月桂烯的分離組分和藥學上可接受的疏水載體，用于誘導或促進組織再生。要明確理解的是，本發明的范圍包括較短和較長形式的聚合月桂烯，包括合成和半合成形式，包括月桂烯共聚物和用多個官能團取代的衍生物以及與另外的分子的結合體——如本領域已知，并規定這些變體和改變保持本發明方法背景下的聚合月桂烯的治療能力。本發明其他目的、特征和優勢將由于以下描述和附圖而更加明確。附圖簡述圖1顯示利用SEDEX和PDA檢測器的乳香樹脂提取物尺寸排阻層析。圖2顯通過制備型尺寸排阻層析獲得的乳香樹脂提取物的低(圖2A)和重(圖2B)分子量分數。圖3顯示通過乳香樹脂提取物的制備型SEC獲得的重MW分數的1H-NMR光譜。圖4顯示通過乳香樹脂提取物的制備型尺寸排阻層析獲得的重MW組分的13C-NMR光譜。圖5顯示聚合月桂烯化學合成法獲得的高(圖5A)和低(圖5B)產物的分析型尺寸排阻層析。圖6顯示合成的1，4-聚-β-月桂烯的1H-NMR光譜。圖7顯示合成的1，4-聚-β-月桂烯的13C-NMR光譜。圖8顯示RPh-1對ARPE-19細胞的影響。圖8A，用油載體處理的對照培養物；圖8B，給予RPh-1(0.1％；1mg/ml)和溫育后48小時的測試培養物；圖8C，給予RPh-1(0.25％；2.5mg/ml)和溫育后48小時的測試培養物；圖8D，給予RPh-1(0.25％；2.5mg/ml)和溫育后72小時的測試培養物。圖9顯示用RPh-1溫育72小時前(左側)和后(右側)的分化ARPE-19細胞的免疫熒光分析，表明經處理后微管蛋白、β3(TUBB3)、活性調節細胞骨架相關蛋白(Arc/Arg3.1)和神經元正五聚蛋白(pentraxin)II(NPTX2)得到表達。圖10顯示RPh-1對ARPE-19細胞增殖的影響，如評價總蛋白含量的分析所監測。圖11顯示多級分化的ARPE-19細胞。圖11A，分化級3；圖11B，分化級4；圖11C，分化級5。圖12顯示RPh-1對人類黑素瘤細胞的影響。圖12A，油載體處理的對照細胞；圖12B，48小時溫育后經RPh-1(5μL)處理的細胞；圖12C，48小時溫育后經RPh-1(2μL)處理的細胞；圖12D，72小時溫育后經RPh-1(5μL)處理的細胞。圖13顯示化學合成的聚合月桂烯對RPh-1細胞的影響。圖13A，經組分18.1誘導的分化；圖13B，經組分18.2誘導的分化。圖14顯示患有與脫毛癥有關的皮膚病變的衰老雄性金毛尋回犬(GoldenRetrievermaledog)經RPh-1治療后的毛皮再生。圖14A，治療前；圖14B，治療2周后。圖15顯示實驗小鼠中RPh-1對造成的傷口的傷口愈合的影響，由以下表示：通過SC注射(A組，灰色條)、局部(B組，黑色條)用RPh-1治療的小鼠以及僅用載體(C組，空白條)治療的小鼠在傷口造成后不同時間點的傷口大小(mm2)。圖16顯示血管性癡呆大鼠模型中RPh-1對腦血流灌注不足恢復的影響，由Morris水迷宮測試進行評價。對RPh-1治療的動物(A組；交叉線條)、載體治療的動物(B組；水平紋條)和假對照動物(實心條)的表現進行以下測試：在平臺位置的頻率(圖16A)；在平臺區域的耗時(圖16B)；找到平臺的等待時間(圖16C)；在區域1位置的頻率(圖16D)；在有光部分(lightpart)的耗時(圖16E)；找到平臺的等待時間(圖16F)；和速率(圖16G)。圖17顯示RPh-1對體重增加的影響。圖17A顯示血管性癡呆大鼠模型中動物腦血流灌注不足后的體重增加。B組動物(RPh-1治療的；三角符號)重量的恢復顯著快于A組動物(載體治療的；正方形符號)。圖17B顯示通過皮下給藥(A組；菱形標志)或通過局部給藥(B組；正方形標志)用RPh-1治療或僅用載體(C組；三角符號)治療后的肥胖小鼠的體重增加(ob/ob)。B組和C組小鼠分別增加10.2％和9.1％。以斜率表示的所有組的體重增加速率相似(p＝0.07(A對B)、0.08(A對C)和0.43(B對C))。圖18顯示大鼠中風模型中RPh-1對從短暫大腦中動脈閉塞(tMCAO)恢復的影響。圖18A顯示用RPh-1(A組)或用載體(B組)治療大鼠的MCAO后所示以天(d)表示的不同時間點的神經肌肉分值(神經分值)。顯著差異僅在A組第8天與第14天之間和第8天與第28天之間可見。圖18B顯示用RPh-1(A組；黑色條)或用載體(B組；空白條)治療大鼠的MCAO后不同時間點的階梯測試結果。僅在第28天發現兩組間的顯著差異。圖18C顯示用RPh-1(A組)或用載體(B組)治療大鼠的MCAO后所示以天(d)表示的不同時間點的粘合劑去除測試結果。顯著差異僅在A組第2天與其他天之間可見。圖19顯示經RPh-1治療和經對照治療的大鼠在視神經軸索顯微外科術(axotomy)后存活的視網膜神經節細胞(RGC)的平均數。圖20顯示視網膜脫落后用RPh-1或載體治療的動物的脫落的視網膜(RD)和未損傷的視網膜(對照)中的SEMA3(圖20A)和胱天蛋白酶-3(圖20B)表達的蛋白質印跡分析。發明詳述本發明提供了具有神經保護和神經再生特性的組合物和用其治療一系列神經系統疾病和病癥的方法。更具體地，現公開包含提取自乳香的分離組分的組合物具有神經保護活性，并且可用于促進神經元細胞類型及其他細胞類型的分化和成熟。此外，已發現聚合月桂烯是這種乳香提取物的主要成分。聚合月桂烯的化學合成和生物測試已確定，該化合物呈現上述神經保護和神經再生生物活性。此外，這些發現大大出乎根據現有技術的意料之外，現有技術教導得自乳香的聚合組分不具有治療有益性，并且事實上妨礙歸因于粗乳香制品和乳香提取物的某些生物活性。本文首次公開，由于其刺激和誘導細胞再生的多種活性，本文所述的乳香分離組分可用作用于多種與神經功能缺損有關的治療適應癥和需要組織修復的病癥的藥物組合物的活性成分。在接觸人類和非人類個體的細胞時，組合物誘導多種組織、細胞區室和細胞譜系的細胞分化，包括皮膚、內皮、粘膜、骨、腱和軟骨。此外，可利用藥物組合物的細胞分化活性促進體內并入醫療裝置、植入物和器官移植物。定義如本文所用，術語“乳香”(mastic、gummastic和masticgum)和“乳香樹脂”交替使用，意指以任何被歸類為漆樹科的樹的滲出物得到的樹脂(也被稱為油樹脂)。黃連木屬的樹——最顯著的是洋乳香樹，具體是P.lentiscusL.cv.Chia栽培品種(在希臘的Chios島上栽培)，以其乳香高產量聞名。其他品種包括P.lentiscus.var.emarginataEngl.和P.lentiscus.var.latifoliaCoss。更多黃連木屬物種包括：例如，大西洋黃連木、P.palestina、P.saportae、黑黃連木、P.vera和全緣葉黃連木。如本文所用，術語“聚合物”指化合物或化合物的混合物，其包含具有同一化學結構的重復亞單元(也被稱為單體)，其中單體共價連接。可形成聚合物的單體實例是萜烯，例如單萜，如月桂烯。聚合物可具有不同的聚合度，因此包括多種鏈長的聚合形式。聚合物包括均聚物和雜聚物(也被稱為共聚物)，并且可具有多種異構構型和非對映異構構型。如本文所用，術語“聚合月桂烯”和“聚月桂烯”可交替地指由月桂烯單體形成的聚合物。聚合月桂烯包括具有不同聚合度的聚合形式，優選聚合度為至少6的月桂烯聚合物。本發明無限制地包括聚合β-月桂烯(聚-β-月桂烯)、聚合α-月桂烯(聚-α-月桂烯)、其均聚物、包含月桂烯單體的雜聚物(也被稱為共聚物)——該月桂烯單體與異種單體直接或間接共價連接、其反式和順式異構體、其D-和L-對映異構體或其組合。聚合月桂烯可以以分離的形式得自植物來源——具體得自乳香，或可以是化學合成反應的產物。如本文所用，術語“乳香的分離組分(部分，餾分，fraction)”指在至少一種極性或非極性有機溶劑或其組合中對乳香進行萃取后得到的組分。本發明所述的分離組分一般可溶于極性和非極性有機溶劑中的一者或二者。如本文所用，術語“含聚合月桂烯的分離組分”指具有限定分子量或分子量范圍的聚合月桂烯制備物，其從該聚合月桂烯所分離的來源中存在的其他化學成分中分離出來，該來源具體是化學反應混合物或植物提取物。如本文所用，術語“純度”指特定化合物在制備物中的含量，表示為特定化合物相對于制備物中其他化合物的重量/重量基礎下的百分比。如本文所用，“均聚物”指由一類單體生成的聚合物。例如，聚合月桂烯在其僅由月桂烯單體例如β-月桂烯生成時是均聚物。均聚物也可以是由同一單體生成但具有不同聚合度——即鏈長——的聚合物的混合物。因此，聚合月桂烯可包括一系列具有不同鏈長從而不同分子量的化合物。進一步，均聚物可包含具有不同異構構型的單體，例如，β-月桂烯和α-月桂烯。如本文所用，“雜聚物”和“共聚物”指由一個以上單體類型生成的聚合物。因此，例如，月桂烯共聚物由月桂烯單體以及非月桂烯的異種類型的單體生成。如本領域已知，共聚物包括交替共聚物、周期共聚物、無規共聚物、嵌段共聚物和統計共聚物。如本文所用，“聚合度”指共價連接在一起以形成聚合物的單體或單體單元數，例如，聚合月桂烯化合物中的月桂烯單體數。如本文所用，“重均分子量”指如下式表示的具有不同鏈長分子的聚合物的平均分子量：其中Ni是分子量Mi的分子數。重均分子量可通過如下確定：例如，光散射、小角中子散射、X射線散射和沉降速率。如本文所用，“數均分子量”指如下式表示的具有不同鏈長分子的聚合物的平均分子量：其中Ni是分子量Mi的分子數。數均分子量可通過如下確定：例如，凝膠滲透色譜(也被稱為尺寸排阻層析)或粘度測定。術語“多分散指數”和“分子分布”在本文中交替使用，指重均分子量與數均分子量的比。如本文所用，“萜烯化合物”指含有異戊二烯的烴及相關的含氧化合物如醇、醛或酮(類萜)。異戊二烯單元(CH2＝C(CH3)-CH＝CH2)是這種化合物的基本結構單元。萜烯烴一般具有分子式(C5H8)n，包括單萜、倍半萜、二萜、三萜和四萜，其分別具有2、3、4、6和8個異戊二烯單位。萜烯可被進一步分類為無環的或環狀的。單萜實例包括月桂烯、檸檬烯和蒎烯，其分別為無環、單環和雙環單萜的實例。倍半萜的實例包括橙花叔醇和法呢醇。二萜的實例包括咖啡醇和植醇。三萜和四萜的實例分別為角鯊烯和胡羅卜素。如本文所用，“基本不含”指根據本發明所述的制備物或藥物組合物一般包含低于3％、低于1％、最優選低于0.5％的所述物質。如本文所用，“治療有效量”指顯著引起、促進或造成所需治療效果的藥物成分量。如本文所用，“藥學上可接受的載體”指這樣的稀釋劑或載體：其用于增強與其所配制的藥物成分的輸送和/或藥代動力學特性，但其本身沒有治療效果，其也不引起或造成個體體內任何不需要或有害的影響或者不良反應。如本文所用，“藥學上可接受的疏水載體”指其中溶解或懸浮聚合月桂烯的疏水非極性稀釋劑或載體。如本文所用，“細胞分化”指較不特化的細胞變為較特化的細胞的過程。細胞分化可在多種細胞特性中任意種的改變的基礎上建立，該特性包括但不限于大小、形狀、細胞器外觀、膜電位、代謝活性和信號響應性。可對細胞類型給出具體“級”以描述分化程度。如本文所用，“神經功能缺損”指感覺、認知或運動功能中至少一項相對于以往功能或活性水平和/或相對于根據公認標準匹配的非缺損個體的下降或減少。本文所述的數值將被理解為所述值+/-10％。乳香分離組分和聚合月桂烯本發明采用含聚合月桂烯的分離組分。該組分可來自植物來源——具體為乳香，或其可以是化學合成產物。用于本發明的聚合月桂烯是聚合物化合物或不同分子量聚合物的混合物，其由月桂烯亞單元形成。適當的聚合月桂烯植物來源包括被歸類為漆樹科或不同植物科的植物來源。可得到聚合月桂烯產物的植物物種無限制地包括黃連木屬、松屬、云杉屬、檜屬、Alsies、落葉松屬、羅勒屬、月桂屬和薰衣草屬的植物物種。可用的黃連木屬物種無限制地包括乳香黃連木、大西洋黃連木、P.palestina、P.saportae、黑黃連木，P.vera和全緣葉黃連木。聚合月桂烯可得自任何植物部分，包括例如，樹脂、葉、枝、漿果和種子。含聚合月桂烯的分離組分可最便利地得自乳香，盡管其他植物部分和產物也可使用。本文實施例1和2示例了獲得和表征分離組分——包括乳香的聚合月桂烯——的多種方法。乳香商業制備物可從例如ChiosGumMasticGrowersAssociation或G.Baldwin&Co.，U.K.獲得。或者，聚合月桂烯可作為天然存在的聚合物的合成等同物化學生成，如順式1，4-聚-β-月桂烯，或者其可以是在自然界中的未知存在的月桂烯聚合物，如聚合α-月桂烯。本發明不受生成聚合月桂烯的方法或其是否為天然、合成或半合成所限。設想聚合月桂烯可以是合成產物，通過用單體形式的單萜月桂烯作底物的化學法生成。單體月桂烯底物可以從植物分離，或可以從前體萜烯化學轉化或酶法轉化，如本領域所知。例如，通過化學法可將從植物來源分離的單體β-月桂烯隨后聚合為聚合β-月桂烯。當月桂烯底物得自天然來源時，生成的產物可被稱為半合成產物。以下公開了聚合β-月桂烯的化學法：例如美國專利號4,564,718；5,759,569；7,232,872和7,214,750以及Newmark等(1988)J.PolymerSci.26，71-77(1988)andinCawse等(1986)JournalofAppliedPolymerScience，Vol.31，1963-1975。適當的化學合成法利用陰離子聚合反應，例如包括應用至少一種烷烴或環烷烴溶劑和至少一種烷基堿金屬的陰離子聚合反應。例如，烷基堿金屬可以是丁基鋰，烷烴溶劑可以是己烷，或環烷烴溶劑可以是環己烷。烷烴溶劑和烷基堿金屬引發劑可以以至少20∶1的比存在于反應混合物中。陰離子聚合反應可由化合物如水、醇、分子氧和二氧化碳終止。本文(實施例3)公開的1，4-聚-β-月桂烯合成方法尤其適于保持聚合物的多種生物活性，如促進細胞分化。已知單體β-月桂烯存在于多種植物中，包括松屬、云杉屬、檜屬、Alsies和落葉松屬的樹和金魚草屬、乳香屬、柑桔屬和三七草屬的花。可得到含聚合月桂烯的分離組分作為純化的化學合成反應的產物，如本文實施例3所示例。可將化學合成的聚合月桂烯從未反應的底物和其他試劑中分離，分析并進一步利用本領域已知的分析和分離方法根據分子量分級。這些方法包括在大小、電荷或疏水性的基礎上分離分子的方法，包括：例如，尺寸排阻層析(SEC)、高壓液相色譜(HPLC)、氣液相色譜(GLC)及其組合。用于測定所得聚合物的精確化學結構的分析方法包括核磁共振(例如1HNMR和13CNMR)、粘度測定、多種質譜法(例如MALDI-TOF)、組合方法如液相色譜-質譜法(LC-MS)、光散射技術如例如多角度激光光散射(MALLS)、總碳分析、UV-VIS分光光度法、IR和FT-IR分光光度法以及本領域已知的其他方法。可利用相同方法和方案從植物純化和表征聚合月桂烯，如本文實施例2所示。在特別優選的實施方式中，作為化學合成產物的聚合月桂烯組分應基本不含月桂烯單體和聚合度低于約6的月桂烯低聚形式。同樣優選的是，分離的產物基本不含可溶于極性有機溶劑的單體萜烯化合物。當聚合月桂烯將得自植物來源如乳香時，可利用類似的方法獲得乳香分離組分和聚合月桂烯分離組分。總體描述為，將收集的植物材料例如乳香在適當的容器中與適當的溶劑——常為極性溶劑——混合。適當的極性溶劑包括例如，醇、醚、酯、酰胺、醛、酮、腈及其組合。極性有機溶劑的具體實例為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、1-丁醇、2-丁醇、仲丁醇、叔丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、新戊醇、3-甲基-1-丁醇、2-甲基-1-丁醇、3-甲基-2-丁醇、2-甲基-2-丁醇、乙二醇、乙二醇單甲醚、二乙醚、甲基乙醚、乙基丙醚、甲基丙醚、1，2-二甲氧基乙烷、四氫呋喃、二氫呋喃、呋喃、吡喃、二氫吡喃、四氫吡喃、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙醛、甲酸甲酯、甲酸乙酯、丙酸乙酯、丙酸甲酯、二氯甲烷、氯仿、二甲基甲酰胺、乙酰胺、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、丙酮、乙基甲基酮、二乙基酮、乙腈、丙腈及其組合。優選混合乳香和溶劑，使溶劑大大過量，例如10∶1或20∶1。可周期性或連續攪拌混合物一段時間，該時間范圍為數分鐘至數小時。可無任何處理地將溶劑潷出，或任選地可將混合物首先進行低速離心，例如在100至2000rpm下，如本領域已知。從提取物回收不溶物，并向該不溶物添加新等份溶劑，以使萃取和溶解過程重復多個循環，從而獲得盡可能多的極性溶劑可溶性化合物。在最后的溶解步驟后，組合包含極性溶劑可溶物的提取物，并蒸發極性溶劑(例如通過利用本領域已知的旋轉蒸發)，從而生成極性溶劑可溶物，其可被稱為粗提取物或“第一步”提取物。將第一步提取物與非極性有機溶劑組合，并通過振蕩1小時時間進行萃取。適當的非極性溶劑包括無環或環狀的、飽和或不飽和的脂肪烴和芳烴，例如，C5-C10烷烴、C5-C10環烷烴、C6-C14芳烴及其組合。前述中的每一種可被一個或多個鹵素任選地取代，例如，C7-C14全氟烷烴。非極性有機溶劑的具體實例為戊烷、己烷、庚烷、辛烷、壬烷、癸烷、環戊烷、環己烷、環庚烷、苯、甲苯、二甲苯和異構體及其混合物。除去和棄去在非極性溶劑的存在下保持不溶性或沉淀的物質。然后可通過蒸發非極性溶劑(例如通過旋轉蒸發)獲得非極性溶劑可溶性組分。該組分可被稱為純化的提取物或“二步”提取物，相應于乳香的分離組分，其特征在于以下事實：其可溶于極性溶劑和非極性溶劑，而可溶于極性溶劑但不溶于非極性溶劑的物質已被去除。該特征使本發明所述的分離組分與現有技術乳香提取物得以區分，后者一般包括多種僅可溶于極性溶劑的化合物。根據本發明的教導，這種化合物妨礙本文公開的分離組分的有益生物活性。可通過如下進一步干燥二步提取物：例如高真空處理(例如＜0.01mbar長達數天)，從而去除殘留的溶劑和其他揮發性材料，將其稱重并與適當的非極性有機溶劑或影響其溶解的其他載體混合。如本文實施例1和2所公開，該分離組分包含聚合月桂烯。得到的含聚合月桂烯的組分可直接使用，或利用本領域已知的手段進行進一步純化、表征和/或分級，如上所述。在具體實施方式中，可通過這樣的方法獲得本發明所述的分離組分，該方法包括以下步驟：(a)用極性有機溶劑處理乳香；(b)分離可溶于所述極性有機溶劑的組分；(c)任選地去除所述極性有機溶劑；(d)用非極性有機溶劑處理在步驟(b)或(c)得到的可溶性組分；(e)分離可溶于所述非極性有機溶劑的組分；和(f)任選地去除所述非極性有機溶劑；其中步驟(d)至(f)可先于步驟(a)至(c)。本方法可進一步包括將步驟(c)或步驟(f)后獲得的可溶性組分進行大小分級，例如通過尺寸排阻層析或本領域已知的任何其他方法。本方法可進一步包括在步驟(c)或(f)任一者或二者后去除溶劑。可通過本領域已知的任何手段進行溶劑的去除，例如旋轉蒸發、高真空應用及其組合。在具體實施方式中，步驟(a)至(c)先于步驟(d)至(f)進行，或反之。在具體實施方式中，極性有機溶劑包括乙醇，非極性有機溶劑包括己烷。本領域技術人員容易理解，步驟(a)至(c)和步驟(d)至(f)可各自獨立地實施多個循環，以優化萃取過程和產物的純度。對于制備治療用途組合物，可使用適當的載體，如疏水載體，包括藥學上可接受的油，任選地與蠟組合，如本文所述。在特別優選的實施方式中，如本文所述包含從乳香分離的組分的組合物應包含低于約20％(w/w)的單體和低聚萜烯化合物——該單體和低聚萜烯化合物可溶于極性有機溶劑且基本不溶于非極性有機溶劑，其中上述溶劑指用于制備該組分的溶劑。更優選地，分離組分包含低于約5％(w/w)的這種萜烯化合物。甚至更優選地，分離組分基本不含這種萜烯化合物。本文實施例8示例了包含這種低分子量化合物的組分對聚合月桂烯生物活性的抑制效果。在另一個具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分得自植物且基本不含月桂烯單體和聚合度低于6的月桂烯低聚形式。在另一個具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分得自植物且基本不含可溶于極性有機溶劑但基本不溶于非極性有機溶劑的萜烯化合物。要理解的是，聚合月桂烯可以不具有單一的分子量，而具有分子量的分布，表示具有不同鏈長——即聚合度——的聚合月桂烯分子群。對聚合月桂烯的分子量或聚合度沒有具體上限。在本發明的一個當前優選的實施方式中，聚合度為至少約6。在具體實施方式中，聚合度為至少約10。在具體實施方式中，聚合度為至少約25。在具體實施方式中，聚合度為至少約35。在具體實施方式中，聚合月桂烯的聚合度在至少約6至約1800的范圍內。適當的示例性范圍包括約30至約500或約35至約150。聚合月桂烯的數均分子量優選至少約800。更優選地，數均分子量為至少約1000，如至少2000或至少3000，甚至更優選地，數均分子量為至少約5000。在具體實施方式中，聚合月桂烯的數均分子量在至少約800至約100,000的范圍內。在具體實施方式中，數均分子量在選自以下的范圍內：至少約800至約5000；至少約800至約15,000；約5000至約15,000；約5000至約20,000；約15,000至約30,000；約25,000至約40,000；約35,000至約50,000；約45,000至約60,000；約55,000至約70,000；約65,000至約80,000；約75,000至約90,000；約85,000至約100,000；及其組合。在具體實施方式中，數均分子量為至少約5000。在具體實施方式中，聚合月桂烯的數均分子量在約5000至約20,000的范圍內。要理解的是，組合物可包含不同分子量的聚合月桂烯組分，例如在至少約5000至約20,000的范圍內以及在約25,000至約40,000的范圍內。在具體實施方式中，聚合月桂烯的分子分布低于5。在具體實施方式中，分離組分主要由數均分子量在約5000至約20,000范圍內的聚合月桂烯組成。可以以多種方式表示聚合產物的分子量，例如，重均分子量或數均分子量，如本領域已知。可通過多種手段中的任意手段測定分子量，如光散射、多角度激光光散射(MALLS)、小角中子散射、X射線散射、沉降速率、粘度測定(Mark-Houwinkequation)、質譜(例如，MALDI-TOF)和凝膠滲透色譜。聚合月桂烯可以以不同的幾何異構體存在，源于取代基在碳碳雙鍵周圍的排列。這種異構體被命名為順式或反式構型(也被分別稱為Z或E構型)，其中順式(或Z)表示取代基在碳碳雙鍵同一側，反式(或E)表示取代基在碳碳雙鍵相對側。各種幾何異構體及其混合物被囊括在本發明的范圍內。聚合月桂烯產物可包含一個或多個不對稱碳原子，因此可呈現光學異構現象和/或非對映異構現象。所有立體異構體和非對映異構體均被囊括在本發明的范圍內，無論是單一的異構體或是立體化學異構形式的混合物。利用常規技術可分離各種立體異構體和非對映異構體，例如色譜或分級結晶。或者，通過如下可制備所需的光學異構體：在不會引起外消旋化或差向異構化的條件下適當的光學活性原料的反應；或通過衍生化，例如在由常規手段進行的非對映異構衍生物分離后用純手性酸進行衍生化。適當的聚合月桂烯形式包括聚合β-月桂烯(聚-β-月桂烯)，包括1，4-聚-β-月桂烯、3，4-聚-β-月桂烯、1，2-聚-β-月桂烯、順式1，4-聚-β-月桂烯、反式1，4-聚-β-月桂烯；聚合α-月桂烯(聚-α-月桂烯)；或其組合。從乳香分離和表征1，4-聚-β-月桂烯被公開于：例如VanderBerg等(1998)TetrahedronLett3：2645-2648。在具體實施方式中，聚合月桂烯具有線性構象、支鏈構象或環構象。根據本發明所述的含聚合月桂烯的分離組分具有至少90％的純度，如至少93％，或至少95％，或至少97％，或至少98％，或至少99％的純度。如本領域所知，期望盡可能高的純度，特別是為了確保符合衛生監管機構的要求。但要理解的是，聚合月桂烯的組分可包含具有各種分子量——如，在限定的窄范圍或寬范圍內——的月桂烯聚合物種類，而不降低指定純度。此外，含聚合月桂烯的分離組分可包含聚合月桂烯的上述不同的結構異構體，而不降低指定純度。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分包含至少90％(w/w)的順式1，4-聚-β-月桂烯。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分包含順式1，4-聚-β-月桂烯和反式1，4-聚-β-月桂烯的混合物，其中該混合物包含至少80％(w/w)的順式1，4-聚-β-月桂烯。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分包含至少90％(w/w)數均分子量為至少800的順式1，4-聚-β-月桂烯。數均分子量可以是至少1000。平均分子量可以是至少2000。數均分子量可以是至少3,000。數均分子量可以是至少5000。數均分子量可以是至少10,000。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分包含至少90％(w/w)數均分子量在約800至約5000范圍內的順式1，4-聚-β-月桂烯。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分包含至少90％(w/w)數均分子量在約1000至約10,000范圍內的順式1，4-聚-β-月桂烯。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分包含至少90％(w/w)數均分子量在約10,000至約20,000范圍內的順式1，4-聚-β-月桂烯。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分包含至少90％(w/w)數均分子量在約5000至約20,000的范圍內的順式1，4-聚-β-月桂烯。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分主要由數均分子量在約5000至約20,000范圍內的順式1，4-聚-β-月桂烯組成。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分的純度為至少90％，且聚合月桂烯的聚合度為至少10。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分包含至少90％(w/w)數均分子量在約20,000至約30,000范圍內的順式1，4-聚-β-月桂烯。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分包含至少90％(w/w)數均分子量在約30,000至約50,000范圍內的順式1，4-聚-β-月桂烯。在具體實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分包含至少90％(w/w)數均分子量在約50,000至約80,000范圍內的順式1，4-聚-β-月桂烯。在特別優選的實施方式中，含聚合月桂烯的分離組分基本上純化掉可溶于極性有機溶劑但基本不溶于非極性有機溶劑的萜烯化合物。具體地，組合物應包含低于約10％(w/w)，更優選低于約5％(w/w)，最優選低于約3％(w/w)的可溶于極性有機溶劑但基本不溶于非極性有機溶劑的萜烯化合物。在具體實施方式中，組合物基本不含可溶于極性有機溶劑但不溶于非極性有機溶劑的萜烯化合物。在具體實施方式中，組合物包含低于約10％(w/w)，更優選低于約5％(w/w)，最優選低于約3％(w/w)的單體萜烯化合物。在具體實施方式中，組合物基本不含月桂烯單體和聚合度低于約5的月桂烯低聚形式。在具體實施方式中，組合物包含低于約10％(w/w)，更優選低于約5％(w/w)，最優選低于約3％(w/w)的萜烯化合物，該萜烯化合物選自：β-月桂烯、α-月桂烯、順式α-羅勒烯、二氫月桂烯、檸檬烯、α-蒎烯、β-蒎烯及其組合。藥物組合物用于本發明的組合物包含治療有效量的含聚合月桂烯的分離組分和藥學上可接受的疏水載體。適當的疏水載體包含至少一種油，如例如礦物油、植物油或其組合。術語“礦物油”指得自石油蒸餾的透明、無色、幾乎無嗅且無味的液體。其也被稱為白油、白礦物油、液體礦脂、液體石蠟或白石蠟油。根據本發明的具體實施方式，該礦物油是輕礦物油，是可以以NF(國家藥典)級產品或USP(US藥典)級產品獲得的商用產品。對于本發明的應用，該礦物油優選不含芳香族和不飽和化合物。適當的植物油包括但不限于杏仁油、油菜油、椰子油、玉米油、棉花籽油、葡萄籽油、橄欖油、花生油、藏花油、芝麻油、大豆油或其組合。在具體實施方式中，礦物油是輕礦物油。藥學上可接受的載體可取而代之或另外包含適當的油替代物。油替代物包括具有至少10個碳的烷烴(例如，異十六烷)、苯甲酸酯、脂肪酯、非引起粉刺的酯、揮發性硅氧烷化合物(例如，環聚二甲基硅氧烷(cyclomethicone))和揮發性硅氧烷替代品。苯甲酸酯的實例包括C12C15烷基苯甲酸酯、異硬脂酰苯甲酸酯、2-乙基己基苯甲酸酯、二丙二醇苯甲酸酯、辛基十二烷基苯甲酸酯、硬脂酰苯甲酸酯和苯甲酸山崳酯。脂肪酯的實例包括C12C15烷基辛酸酯和馬來酸二辛酯。非引起粉刺的酯(noncomodogenicester)的實例包括異壬酸異壬酯、異壬酸異癸酯、二異硬脂酰二聚二亞油酸酯、花生醇丙酸酯和異十三烷基異壬酸酯。揮發性硅氧烷替代品的實例包括癸酸異己酯、異壬酸辛酯、辛酸異壬酯和二乙二醇二辛酸酯。環聚二甲基硅氧烷是蒸發性硅氧烷，該硅氧烷可被包含在載體中以助于制成適于從噴霧分配器噴出的組合物。此外，由于其蒸發性，環聚二甲基硅氧烷可有助于將制劑保持和固定在其所噴霧的表面例如傷口位置上。疏水載體可進一步包括至少一種蠟。蠟包括：例如，蜂蠟；植物蠟、甘蔗蠟、礦物蠟和合成蠟。植物蠟包括：例如，棕櫚蠟、小燭樹蠟、冠椰子蠟和霍霍巴蠟。礦物蠟包括：例如，石蠟、褐煤蠟、微晶蠟和地蠟。合成蠟包括：例如，聚乙烯蠟。可將藥物組合物配制成多種形式中的任意形式，如，例如，膠囊(包括軟膠囊)、片劑、凝膠、脂質體、栓劑、懸浮液、軟膏、溶液、乳液或微乳液、膜、粘固劑、粉末、膠液、氣溶膠、噴霧劑和凝膠。對于制備藥物組合物，可將聚合月桂烯適當地配制成包合絡合物、納米乳液、微乳液、粉末和脂質體。在具體實施方式中，包合絡合物包含至少一種環糊精。在具體實施方式中，環糊精包括羥丙基-β-環糊精。在具體實施方式中，納米乳液包含平均顆粒大小低于800nm的液滴。在具體實施方式中，液滴的平均顆粒大小低于500nm。在具體實施方式中，液滴的平均顆粒大小低于200nm。在具體實施方式中，粉末是噴霧干燥的粉末。在具體實施方式中，脂質體包括多層囊泡。在具體實施方式中，微乳液包含非離子型表面活性劑。非離子型表面活性劑無限制地包括聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯(聚山梨酸酯)、泊洛沙姆、維生素E的衍生物、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯硬脂酸酯、飽和聚乙二醇甘油酯或其組合。本文實施例17-21公開了聚合月桂烯的各種制劑及其制備物。本發明的藥物組合物可通過實現其意圖目的的任何手段給予。例如，可通過口服、腸胃外、局部或經皮途徑給予。腸胃外給藥包括靜脈內、肌內、皮下、皮內、腹膜內、動脈內、子宮內、尿道內、心臟內、腦內、腦室內、腎內、肝內、腱內、骨內和鞘內給藥途徑。局部給藥包括通過以下途徑的應用：選自皮膚、陰道、直腸、吸入、鼻內、眼部、耳部和頰部。給藥可另外包括如電穿孔或超聲處理的技術或手段，從而有助于其輸送，例如經皮輸送。其他可用的技術包括：例如，射頻或加壓噴霧應用。給藥劑量將取決于個體的年齡、健康狀況和體重、并行治療——如有——的使用、治療頻率以及預期效果的性質。任何單位劑型中本發明的聚合月桂烯的量包括治療有效量，其可取決于受體、給藥途徑和頻率而改變。一般，基于組合物總重量，藥物組合物中存在的聚合月桂烯或分離的乳香組分的含量可適當地在重量/重量基礎上約0.01％至約25％，如0.01％至約12％的范圍內。對于局部應用，聚合月桂烯或分離的乳香組分在組合物中的百分比可以在約0.05％至約2.5％的范圍內。對于注射給藥，聚合月桂烯或分離的乳香組分在組合物中的百分比可以在約0.1％至約7％的范圍內。對于口服給藥，聚合月桂烯或分離的乳香組分在組合物中的百分比可以在約0.005％至約7％的范圍內。可以以如下本身為本領域技術人員所知的方式制備本發明的藥物組合物：例如，通過常規的混合、粒化、制造糖衣藥丸、軟膠封裝、溶解、萃取或凍干法手段。在優選的實施方式中，該制劑無水和/或不包含直接接觸聚合月桂烯活性成分的極性溶劑，從而避免活性成分的生物活性損失。因此，口服用藥物組合物可通過將活性化合物與固體和半固體賦形劑及適當的防腐劑和/或抗氧化劑組合獲得。任選地，可磨碎和處理生成的混合物。如必要，在添加適當的助劑后，生成的微粒混合物可用于獲得片劑、軟膠、膠囊或糖衣藥丸核心。適當的賦形劑具體為填充劑，如糖類，例如，乳糖或蔗糖、甘露醇或山梨醇；纖維素制備物和/或磷酸鈣，例如，磷酸三鈣或磷酸氫鈣；和粘合劑，如淀粉糊，其利用例如，玉米淀粉、小麥淀粉、大米淀粉、馬鈴薯淀粉、凝膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮。如需，可添加崩解劑，如上述淀粉以及羧甲基淀粉、交聯聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂或海藻酸或其鹽——如海藻酸鈉。助劑為流動調節劑和潤滑劑，例如，二氧化硅、滑石、硬脂酸或其鹽——如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣——和/或聚乙二醇。糖衣藥丸核心被提供適當的包衣，如需要，該包衣對胃液具有耐受性。為此目的，可使用濃縮的糖溶液，其可任選地包含阿拉伯膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化鈦、漆溶液和適當的有機溶劑或溶劑混合物。為生成對胃液具有耐受性的包衣，使用適當的纖維素制備物如醋酸纖維素鄰苯二甲酸酯或羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯的溶液。可向片劑或糖衣藥丸包衣添加染料或顏料，從而例如，用于識別或便于表征活性化合物藥劑組合。其他口服用藥物組合物包括由凝膠制成的壓接(push-fit)膠囊和由凝膠和增塑劑如甘油或山梨醇制成的密封軟膠囊。壓接膠囊可包含微粒形式的活性化合物，該活性化合物可與如下混合：填充劑，如乳糖；粘合劑，如淀粉；和/或潤滑劑，如滑石或硬脂酸鎂；以及任選地，穩定劑。在軟膠囊中，活性化合物優選溶解于或懸浮于適當的液體，如脂肪油或液體石蠟。此外，可添加穩定劑。其他口服用藥物組合物包括膜，該膜被指定粘附于口腔粘膜，，如以下所公開：例如，美國專利號4,713,243；5,948,430；6,177,096；6,284,264；6,592,887；和6,709,671。栓劑形式的藥物組合物由活性化合物(一種或多種)與栓劑基料的組合組成。適當的栓劑基料包括例如，天然或合成甘油三酯、聚乙二醇或石蠟烴。腸胃外給藥制劑包括適當的活性化合物懸浮液和微粒分散液。在具體實施方式中，可給予油性注射懸浮液。適當的親脂性溶劑或載體包括脂肪油，例如，芝麻油或合成脂肪酸酯，例如，油酸乙酯、甘油三酯、聚乙二醇-400、克列莫佛(cremophor)或環糊精。注射懸浮液可包含使懸浮液粘度增大的物質，例如，羧甲基纖維素鈉、山梨醇和/或葡聚糖。任選地，懸浮液也可包含穩定劑。也可利用包含活性成分的脂質體制備藥物組合物。本領域已知，脂質體一般得自磷脂或其他脂類物質。脂質體由分散在水介質中的單層或多層水合液態晶體形成。任何能形成脂質體的無毒、生理上可接受和可代謝的脂質均可使用。一般，優選的脂質為磷脂和磷脂酰膽堿(卵磷脂)，天然和合成均可。形成脂質體的方法在本領域已知，如以下公開：例如，inPrescott，Ed.，MethodsinCellBiology，VolumeXIV，AcademicPress，NewYork，N.Y.(1976)和美國專利號7,048,943。局部給藥制劑包括軟膏。適當的載體包括植物或礦物油、白礦脂、支鏈脂肪或油、動物脂肪和蠟。優選的載體是活性成分可溶于其中的載體。也可包含穩定劑、濕潤劑和抗氧化劑以及——如需——賦予顏色或香味的劑。通過如下可制成軟膏：例如，混合活性成分的植物油——如杏仁油——溶液和溫軟石蠟，并使混合物冷卻。藥物組合物可包括水包油乳液或微乳液，以有助于其口服用、腸胃外用或局部用制劑。這種乳液/微乳液一般包含脂質、表面活性劑、任選地濕潤劑以及水。適當的脂質包括一般已知可用于生成水包油乳液/微乳液的脂質，例如脂肪酸甘油酯。適當的表面活性劑包括一般已知可用于生成水包油乳液/微乳液的表面活性劑，其中脂質被用作乳液中的油成分。可優選非離子型表面活性劑，如例如，乙氧基化蓖麻油、磷脂和環氧乙烷與環氧丙烷的嵌段共聚物。適當的濕潤劑——如使用——包括：例如，丙二醇或聚乙二醇。可將藥物組合物配制成凝膠形式，如水凝膠——其由如下形成凝膠的聚合物形成：卡拉膠、黃原膠、梧桐膠、阿拉伯膠、刺槐豆膠、瓜爾豆膠。水凝膠可與含活性成分的水包油乳液組合。可將藥物組合物配制成粘固劑形式，如矯形手術中所用的含聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)或磷酸鈣的粘固劑。可將藥物組合物配制成粉末形式，特別是如利用射頻用于經皮應用的粉末，如例如美國專利號6,074,688和6,319,541以及WO2006/003659所述。可將藥物組合物配制成膠液形式，如含辛基氰基丙烯酸酯、用于傷口閉合應用的膠液。在具體實施方式中，藥物組合物基本不含單體萜烯化合物和低分子量萜烯化合物，包括例如，被歸類為單萜、二萜、倍半萜、三萜、四萜的萜烯化合物。萜烯化合物的實例包括β-月桂烯、α-月桂烯、順式α-羅勒烯、二氫月桂烯、檸檬烯、α-蒎烯、β-蒎烯、甘遂醇、樺木醛(betulonal)、乳香二烯酮酸、乳香二烯醇酸、異乳香二烯酮酸、異乳香二烯醇酸、齊墩果酸和齊墩果酮酸。治療應用本發明提供了治療神經功能缺損和誘導或促進組織再生的治療應用和方法。本方法包括向個體給予治療有效量的組合物，該組合物包含乳香的分離組分或含聚合月桂烯的分離組分，如本文所述。給予組合物的步驟可包括任何可接受的途徑，包括口服、局部、腸胃外和經皮。腸胃外給藥包括靜脈內、肌內、皮下、皮內、腹膜內、動脈內、子宮內、尿道內、心臟內、腦內、腦室內、腎內、肝內、腱內、骨內和鞘內給藥途徑。局部給藥包括通過選自以下的途徑的應用：皮膚、陰道、直腸、吸入、鼻內、眼部、耳部和頰部。在具體實施方式中，給藥步驟包括用組合物接觸特定類型、特定譜系或在特定分化階段的細胞。該細胞可以是多種細胞類型中的任意種，特別地包括神經細胞、神經元細胞、內皮細胞、上皮細胞和所述譜系的干細胞。進一步，該細胞可以屬于任何譜系，例如，外胚層、中胚層、內胚層譜系，并可以是所述譜系的干細胞。在多個實施方式中，接觸細胞的步驟在體內、離體或在體外進行。本文公開的治療神經功能缺損的方法特別有利于患有神經變性病癥和疾病的個體，該病癥和疾病特別地包括創傷、血管性癡呆、老年性癡呆、阿爾茨海默病、肌萎縮性脊髓側索硬化癥(ALS)、多發性硬化癥、中風和帕金森病。在其他情況下，本方法可有利地用于患有由感染(例如，病毒、細菌、真菌、寄生蟲)引起的神經功能缺損或免疫性疾病的個體。在具體實施方式中，神經功能缺損由于暴露于藥物如麻醉劑所致。神經功能缺損也可與選自以下的病癥有關：精神分裂癥、雙相性精神障礙、抑郁、肥胖、厭食和惡病質。本文公開的誘導或促進組織再生的方法特別有利于遭受組織損傷的個體，該組織損傷——例如——可與損傷或創傷相關或由損傷或創傷所致。誘導或促進組織再生的方法可用于遭受選自如下損傷或創傷的個體：心肌梗塞、肺栓塞、腦梗塞，外周動脈閉塞癥、疝、脾梗塞、靜脈潰瘍、軸索斷裂(axotomy)、視網膜脫落、傷口(例如，燒傷傷口、咬傷傷口、凍傷傷口、刺傷傷口、彈片傷口、挫傷、感染傷口或外科傷口)、感染和外科手術程序。本文公開的實施例中示例了本發明的方法。實施例4公開了含聚合月桂烯的分離組分(得自黃連木屬乳香)誘導視網膜色素上皮細胞分化。實施例5公開了聚合月桂烯縮短實驗動物的麻醉恢復時間。實施例6公開了同一組分具有誘導黑素瘤和成神經細胞瘤腫瘤細胞系分化的活性。實施例7公開了化學合成的具有各種分子量范圍的聚合月桂烯誘導視網膜色素上皮細胞的分化。實施例8公開了，根據本發明，在其僅可溶于極性溶劑的基礎上，在其制備過程中從聚合月桂烯分離的小分子量乳香化合物干擾、降低和妨礙聚合月桂烯產生的細胞分化誘導活性。實施例9、10和11公開了本發明可用于哺乳動物和非哺乳動物個體的傷口愈合。實施例12公開了包含根據本發明聚合月桂烯的組合物在血管性癡呆動物模型中具有改善性效果。實施例13公開了本發明可用于刺激患有多種導致食欲喪失或病態體重增加以及導致肥胖的疾病的個體的食欲。實施例14公開了包含根據本發明聚合月桂烯的組合物在中風動物模型中具有改善性效果。實施例15公開了包含根據本發明聚合月桂烯的組合物在視神經損傷/創傷動物模型中具有改善性效果。實施例16公開了包含根據本發明聚合月桂烯的組合物在視網膜脫落動物模型中具有改善性效果，并提供了傷口無疤修復的證據。接觸細胞的步驟可在體外或離體進行。具體地，可根據本發明處理意圖植入個體或移植到個體中的細胞或由其衍生的器官或組織。例如，可使在培養中生長和保持的細胞外植體或細胞或組織與組合物接觸。該細胞可以源自例如自身或同源供體的干細胞，并且其用途在于器官再生和/或植入受體。在其他情況下，該細胞來自異源供體，并且其用途在于植入或移植入受體。在具體實施方式中，該細胞是來自異源供體的器官或組織、其用途在于植入或移植入受體的細胞。在具體實施方式中，該細胞是分泌可溶性因子的細胞。本方法可在醫療裝置植入個體前或后實施。醫療裝置包括但不限于假肢、人造器官或其組件、閥門、導管、管、支架、人造膜、起搏器、傳感器、內窺鏡、成像裝置、泵、導線和植入物。植入物包括但不限于心臟植入物、耳蝸植入物、角膜植入物、顱植入物、牙齒植入物、頜面植入物、器官植入物、矯形植入物、血管植入物、關節內植入物和胸植入物。在具體實施方式中，醫療裝置是器官植入物，在某些情況下其可包括個體自身的細胞。在具體實施方式中，接觸步驟包括選自以下的手段：電穿孔、超聲處理、射頻、加壓噴霧及其組合。在具體實施方式中，接觸步驟包括建立間液與組合物之間的接觸。其可特別有利于被間液包圍的傷口。間液與組合物的接觸可通過用針、微針或包含多個針或微針的設備刺穿和/或挑撥皮膚來實現。這樣的針或微針優選非中空的，并可被制成多針形式，例如在梳子或刷子樣裝置上的多針形式。本發明方法適用于人、非人的哺乳動物、魚類和鳥類。制品本發明方法可包括結合了含本文所述聚合月桂烯的組合物的制品的應用。藥物組合物可以是制品上的包衣(涂層)的形式，或可被包含在與該制品構成一體的容器中。藥物組合物有利地以裝置上的包衣存在，該裝置被嵌入機體且其目的在于在其中整合，例如植入物。因此，藥物組合物可由于聚合月桂烯誘導細胞分化的活性而促進組織在植入物上閉合。藥物組合物可有利地被結合到用于傷口愈合或組織修復的制品上或制品中，例如，敷料或繃帶。因此，藥物組合物可由于聚合月桂烯誘導細胞分化的活性而促進傷口愈合。在其他情況下，藥物組合物可被結合到輸送裝置，如針、注射裝置或噴霧分配器中，組合物從該裝置被輸送到需要治療的機體部位，例如傷口部位。制品包括但不限于織物制品、尿布、傷口敷料、醫療裝置、針、微針、注射裝置和噴霧分配器。在具體實施方式中，制品包括多個微針。醫療裝置和植入物如上文所述。提出以下實施例以更充分地說明本發明的某些實施方式。但其無論如何都不應被解釋為限制本發明的寬泛范圍。本領域技術人員可容易地對本文所公開的原理作出多種改變和修正，而不脫離本發明的范圍。實施例實施例1植物來源的乳香分離組分的制備方法1.將乳香樹脂(10g)與無水乙醇(200ml)混合，并使混合物保持過夜。振蕩混合物，使較大的不溶性顆粒沉降20分鐘，并將乙醇轉移至新燒瓶。用新的無水乙醇部分(150ml)振蕩殘余物10分鐘。將該乙醇部分與第一部分混合。用另一150ml無水乙醇部分重復該程序，將該部分與前兩個乙醇部分混合。隨后，利用旋轉蒸發器(水浴溫度30℃)在真空中去除乙醇。向殘余物添加己烷(300ml)，并反復振蕩混合物經過兩小時的時間。保持在封閉的燒瓶中過夜以完成可溶物的溶解和任何不溶物的沉淀，然后將澄清的己烷溶液轉移至干凈、預稱重的燒瓶，并利用旋轉蒸發器去除己烷。立即向所獲得的分離組分添加所需量的油，并振蕩混合物直到獲得均質的混合物。方法2.將乳香樹脂(10g)與無水甲醇(300ml)混合，并使混合物保持過夜。振蕩混合物，使較大的不溶性顆粒沉降20分鐘，并將甲醇可溶性組分轉移至新燒瓶。用新的無水甲醇部分(200ml)振蕩殘余不溶物10分鐘。將該第二甲醇可溶性組分與第一甲醇可溶性組分混合。用另一200ml無水甲醇部分重復該程序，并將該第三甲醇可溶性組分與前兩個甲醇可溶性組分混合。隨后，利用旋轉蒸發器(水浴溫度30℃)在真空中去除甲醇。向殘余物添加己烷(300ml)，并反復振蕩混合物經過兩小時的時間。保持在封閉的燒瓶中過夜以完成可溶物的溶解和任何不溶物的沉淀，然后將澄清的己烷溶液轉移至干凈、預稱重的燒瓶，并利用旋轉蒸發器去除己烷。立即向所獲得的分離組分添加所需量的油，并振蕩封閉燒瓶中的混合物直到獲得均質的混合物。方法3.用研杵和研缽研磨乳香樹脂(5g)，并將其與己烷(200ml)混合。在8小時時間內每30分鐘振蕩混合物，然后留至過夜。將己烷可溶性組分從不溶物去除，并轉移至干凈的燒瓶。利用旋轉蒸發器從己烷可溶性組分中去除己烷。然后對殘余物經歷高真空系統(＜0.01mbar)至少24小時，從而去除額外的揮發性物質。然后向殘余物添加無水乙醇(100ml)，并反復振蕩混合物1小時時間。將乙醇可溶性組分轉移至干凈的燒瓶，并用兩另外的100ml無水乙醇部分反復進行萃取。將乙醇可溶性組分組合，并使任何殘留的不溶物沉降過夜。將澄清的乙醇溶液轉移至干凈、預稱重的燒瓶中，并在真空下去除乙醇。立即向殘余物添加所需量的油，并振蕩混合物直到獲得均質制劑。方法4.收集、清洗和研磨洋乳香樹、大西洋黃連木或P.palestina樹的葉、軟枝、果實和漿果。首先進行乙醇或甲醇溶解，基本如方法1和2所述，隨后用乙醇或甲醇與植物油的組合以多個循環進行溶解。方法5.收集、清洗洋乳香樹葉(30g)，并用刀將其切成小片，置于食物處理器中。添加并處理橄欖油(100ml)。將全部混合物移出，并置于玻璃燒杯中。添加200ml乙醇(96％)，并將混合物加熱至65℃20min。將全部混合物置于紗布中，并將液體擠出。通過移液將上層乙醇相去除，棄用。可通過蒸發將剩余的乙醇從油相去除。方法6.用乙醇(96％，200ml)洗滌月桂樹(Laurusnobilis)的漿果(25克)(于五月或六月收集)30秒。去除乙醇和漿果，并向殘余物添加橄欖油。使任何不溶物沉淀，并分離澄清的油溶液。方法7.對于每一次制備，使用約10克從ZikhronYaakov，Israel地區的洋乳香樹、大西洋黃連木或P.palestina樹收集的樹脂滲出物。將該樹脂在適當的玻璃容器中與30ml甲醇混合，并在30分鐘至2小時的時間內反復劇烈振蕩混合物。溶解部分樹脂，此時不溶物沉降在容器底部。潷去上層液體，如上添加另外的甲醇等份試樣，并反復進行振蕩和潷去過程。然后將殘留的不溶物浸泡在蒸餾水中30秒至1分鐘，產生殘留不溶物的白色乳狀液。用水和甲醇進行若干次交替快速循環處理，然后將殘留的不溶物風干并稱重。一般，從10克起始樹脂得到約1-3克不溶物。用乙醇作為溶劑代替甲醇得到相似的結果。在干燥后，通過添加植物油——一般為橄欖油或葡萄籽油，立即進行最終不溶物組分的溶解，植物油的量足以提供所需濃度的溶液，一般為1％或10％。方法8.對于每一次制備，使用約10克的(i)樹脂滲出物，收集自生長在CarmelMountainRegion，Israel的洋乳香樹或P.palestina樹樹皮；或(ii)購得的Chios乳香(購自例如theChiosMasticGrowersAssociation或G.Baldwin&Co.)。將樹脂在研缽中研磨，轉移至玻璃燒杯，并添加100ml乙醇(98％)。振蕩數分鐘，然后潷去乙醇，留下由于去除了可溶物而質量減少的樹脂。添加額外量的乙醇，并快速反復進行振蕩、潷去和溶劑添加步驟多個循環，每循環持續5至30分鐘之間。將最終循環后殘留的不溶物(一般相應于按重量計購買原料的20至35％或收集的樹脂原料的10至25％)溶解在橄欖油、花生油、葡萄籽油、芝麻油、棉花油或大豆油中的一種，給出最終濃度8至10％(w/w)。方法9.將研磨的乳香(～10g)與100ml甲醇混合。振蕩數分鐘后，將甲醇潷去，留下由于去除了溶解物而質量減少的不可溶性白色物。添加額外量的甲醇，并快速反復進行振蕩、潷去和溶劑添加步驟多個循環。將最終循環后殘留的不溶物(一般相應于按重量計原料的20至30％)溶解在橄欖油中。溶解過程一般涉及溫至45℃的橄欖油和燒杯中輕微的攪拌。方法10.將研磨的乳香(～10g)與25ml大豆油和100ml甲醇在玻璃燒杯中混合。用磁力攪拌器進行攪拌2小時。潷去溶劑，并添加新的甲醇，然后攪拌1小時。潷去溶劑，然后在真空下蒸發，去除殘留的溶劑。方法11.將研磨的乳香(～10g)與100ml乙醇在玻璃燒杯中混合。用磁力攪拌器進行攪拌10分鐘。潷去溶劑，并添加額外量的乙醇，然后攪拌5分鐘，并潷去溶劑。溶劑添加、攪拌和潷去步驟反復4個循環。然后向不溶性白色物添加正己烷(100ml)，接著反復進行振蕩直到該物質溶解。將少量樣本干燥和稱重，從而測定濃度。將大量己烷溶液施加于校準的尺寸排阻柱，并棄去分子量1500以下的組分。將分子量高于1500的組分與20克重石蠟軟膏混合。通過反復混合使混合物均質化，并在真空下通過蒸發去除己烷。也可通過混合石蠟和具有增大的分子量的蠟進行該程序，從而獲得更穩固的產物。本文所用的術語“RPh-1”指以上述方法中任一種制備然后溶解在適當的油、蠟或其組合中的分離組分。將RPh-1直接用于體外細胞培養實驗或治療測試動物，一般以如下最終濃度：本文所述的具體油或油混合物中0.025至5％的范圍內。此外，如實施例2所示，RPh-1的主要成分被測定為1，4-聚-β-月桂烯，其分子量在5000至20,000的范圍內。實施例2.從植物來源分離的聚合月桂烯的化學表征概述根據方法1或2提取洋乳香樹的乳香樹脂，從而獲得所需組分(被稱為RPh-1)，將該組分通過尺寸排阻層析(SEC)進行分析，從而界定分子量分布。通過在制備型SEC分級后進行核磁共振(NMR)，分析RPh-1的化學結構。發現RPh-1包含分子量在1000以下的“輕”組分和分子量在5000至20,000范圍內的“重”聚合物組分。基于NMR分析(1H-NMR和13C-NMR)，“重”組分中的主要化合物的結構與1，4-聚-β-月桂烯一致。用乙酸乙酯和四氫呋喃(THF)作為洗脫液進行制備型分離。在兩種情況下，觀測到“重”聚合物組分呈現多種有益的生物活性，包括誘導細胞分化的生物活性，如實施例4和6所述。相反，“輕”組分在利用著色的視網膜上皮細胞進行的體外效力實驗中證實了毒性。發現為保留聚合物組分的活性，通過將其稀釋在疏水溶劑——優選油，任選地與蠟組合——中以保護其不發生氧化或交聯反應至關重要。方法將乳香樹脂(10g)與無水乙醇(200ml)混合，并使混合物保持過夜。振蕩混合物，使較大的不溶性顆粒沉降20分鐘，并將乙醇轉移至新燒瓶中。將殘余物與新的無水乙醇部分(150ml)一起震蕩10分鐘。將該乙醇組分與第一部分混合。用另一150ML無水乙醇部分反復進行該程序，將該無水乙醇部分與前兩個乙醇組分混合。隨后，在旋轉蒸發器中真空去除乙醇(水浴溫度30℃)。向殘余物添加己烷(300ml)，并反復振蕩混合物經過兩小時的時間。在封閉的燒瓶中保持過夜從而完成任何不溶物的沉淀，然后將澄清的己烷溶液轉移至干凈的燒瓶中，并用于分析型分離和制備型分離。在其被從固定相洗脫出的基礎上，利用尺寸排阻層析(SEC)分離大分子。在SEC中，最高分子量的化合物全部從裝填孔(packingpore)洗脫出，因此第一個洗脫物。在與用分子量已知的化合物——例如聚苯乙烯標準品——構建的標準曲線進行比較的基礎上，通過SEC可評價聚合物測試化合物的分子量。但是，在這種比較基礎上確定的聚合物分子量可具有固有誤差容限至少約10至15％，因為所有聚合物的流體力學體積與分子量之間的關系并不相同，因此僅可以做出近似測定。對于分析型SEC，使用PLgel(7.5*300mm5μ103A°)柱，并用分子量1000、2000、5000、10000、30000和70000的聚苯乙烯標準品對其進行校準。所用溶劑(己烷、乙酸乙酯、四氫呋喃(THF)、二氯甲烷(DCM)和丙酮)均是用于液相色譜的分析級。對于以分析為目的，發現THF是最理想的。所用的色譜儀是ThermoPhinniganTSP，配置二極管陣列檢測器或ELSD檢測器，應用流速1ml/min，運行時間為15min，且流動相為100％THF。應用以下條件進行制備型SEC：1.THF的條件：柱：PLgel：25*300mm5μ103A°流動相：己烷60％/THF40％，流速11ml/min。將1ml提取物各反復分離12次，并收集兩個組分：1)高MW部分(content)；2)低MW部分。2.DCM的條件：柱：PLgel：25*300mm5μ103A°。流動相：己烷70％/DCM30％，流速11ml/min。將1ml提取物各反復分離12次，并收集兩個組分：1)高MW部分；2)低MW部分。對于每次制備型SEC運行，用分子量1000、2000、5000、10000、30000和70000的聚苯乙烯標準品對柱進行校準。將從這兩種不同的流動相收集的組分分成兩份，一半用蒸發器蒸干，并添加3ml油。向第二半添加3ml油，然后蒸發有機溶劑。分析所獲得樣本的生物活性。分別在300MHz和75MHZ下通過1H-NMR和13C-NMR分析THF洗脫液的高MW物質。結果分析型SEC圖1顯示利用PDA檢測器(虛線)和ELSD-SEDEX檢測器(粗線)得到的SEC分析型色譜圖。僅用ELSD檢測器檢測到相應于分子量約60,000至約5000范圍內的組分(在5-7分鐘時洗脫)。兩種檢測器均表明存在分子量＜1000范圍內的組分。制備型SEC圖2顯示通過制備型SEC獲得的高分子量(圖2B)和低分子量(圖2A)組分。高分子量組分是通過在DCM/己烷中運行的SEC獲得的，而低分子量組分是通過在THF/己烷中運行的SEC獲得的。表1概括了利用制備型SEC和多種溶劑系統獲得的組分。表1.利用多種洗脫液和蒸發方式從制備柱收集的組分。NMR分析圖3顯示得自在己烷60％/THF40％中運行的制備型SEC的高MW物質的1H-NMR光譜。圖4顯示得自在己烷50％/THF50％中運行的制備型SEC的高MW物質的13C-NMR光譜。1H-NMR和13C-NMR分析表明，1，4-聚合β-月桂烯是得自極性溶劑-乳香不溶物(RPh-1)的制備型SEC的高MW組分的主要成分。實施例3.1，4-聚合β-月桂烯的化學合成利用總體上基于Newmark等(1988)J.PolymSci.26：71-77所公開程序的方法，制備不同分子量的合成1，4-聚合β-月桂烯制品。方法向配備冷凝器的250ml三頸燒瓶添加以下試劑：β-月桂烯、己烷和在環己烷中的仲丁基鋰，均在氮氣氛下，其量如表2所示。各反應中所用的己烷體積一般為丁基鋰引發劑體積的至少約20至25倍。將各反應混合物加熱至80℃，并攪拌約1小時。為評價聚合物的濃度，取少量等份試樣(幾毫升)溶液并蒸干。對于一些反應混合物，在反應后通過用過量己烷稀釋最終混合物并用水洗滌兩次而去除鋰。將有機相分離，并用硫酸鈉干燥。對用于生物活性分析和分子量表征，通過添加橄欖油至最終濃度10％(無己烷)和蒸發己烷溶劑，制備10％合成聚合物的橄欖油溶液。利用SEC和由校準曲線進行的計算確定表觀分子量，該校準曲線用分子量2000、5000、10000、30000和70000的聚苯乙烯標準品制成。用于SEC的條件如下：柱：PLgel：7.5*300mm5μ103A°流動相：100％THF流速1ml/min檢測器：ELSD結果在不同反應條件下生成的聚合β-月桂烯的預期分子量和計算分子量如表2所示。表2.試劑量和化學合成聚合月桂烯的產物分子量。由表2可見，不同的反應條件生成計算分子量在約3000至約46,000的范圍內的聚合月桂烯。產物可被界定為在“高”分子量聚合月桂烯范圍內——即＜20,000至約50,000，和“低”分子量聚合月桂烯范圍內——即＜3000至約11,000。“高”分子量和“低”分子量聚合β-月桂烯的代表性分析型SEC曲線分別如圖5A和圖5B所示。分析型SEC中用水洗滌的反應產物產生基本相同的結果。圖6顯示β-月桂烯聚合產物的代表性1H-NMR光譜。圖7顯示β-月桂烯聚合產物的代表性13C-NMR光譜。1H-NMR和13C-NMR分析表明，聚合反應產物的結構與1，4-聚-β-月桂烯的結構一致。用于制備聚合β-月桂烯的合成反應涉及陰離子聚合(被稱為“邁克爾加成反應”)的機制。為成功起始，起始步驟的自由能必須適當。因此，有必要用適當強度的引發劑配合單體，以使第一次添加是“下滑性的”(downhill)。典型的陰離子反應是利用丁基鋰C4H9Li在惰性溶劑如正己烷中進行苯乙烯聚合。當在適當條件下進行時，，終止反應不發生在陰離子聚合中。由于與鏈末端碳負離子的快速反應，一般添加化合物如水、醇、分子氧或二氧化碳以終止進程。由于不存在轉移過程，陰離子聚合引起非常明顯的分子質量分布。如果溶劑極純，聚合物鏈將在所有單體耗盡后仍具活性。聚合度被表示為：其中M＝單體，I＝引發劑。如上所述，丁基鋰是含異戊二烯分子如萜烯陰離子聚合的適當引發劑。因此，其已被用于合成本發明的1，4-聚月桂烯。雖然上述程序在現有技術中已被一般公開(參見例如Newmark等(1988)J.PolymSci.26：71-77)，但本文公開的重要修正在于如下發展：己烷高度稀釋液以及將溶劑變為油的最終步驟，從而獲得保留其生物活性并具有高電勢的聚合物。實施例4.RPh-1誘導視網膜色素上皮細胞培養物的神經元型分化。概述本發明涉及誘導分化和細胞成熟，并直接用于功能組織——特別是神經元組織——的再生。我們的實驗發現顯示，RPh-1誘導視網膜色素上皮細胞——神經元源上皮組織——分化為形態學神經元細胞，該形態學神經元細胞生成軸突、樹突和被稱為突觸的細胞間接點。經RPh-1處理細的胞形態學分化伴隨神經元特異性分化抗原β3微管蛋白的重新表達。神經元細胞分化的誘導有力地表明RPh-1對神經元干細胞分化成功能性神經元具有影響。當前關于癡呆和阿爾茨海默病病理的教條認為，該缺陷涉及神經元不能形成功能性突觸接點(參見例如，KimuraR，OhnoM.Impairmentsinremotememorystabilizationprecedehippocampalsynapticandcognitivefailuresin5XFADAlzheimermousemodel.NeurobiolDis.2008Nov5)。因此，本文所述實驗支持實施例1所述的乳香分離組分以及聚合月桂烯——RPh-1中的活性分子——的應用，作為引起神經退行性疾病如癡呆和阿爾茨海默病中神經再生的治療方式。合成的聚合月桂烯也在本發明的范圍內，并且可用于本發明的治療方法。視網膜色素上皮(RPE)細胞目的在于評價RPh-1對多種人源細胞系的作用的研究引出ARPE-19細胞——非惡性人類視網膜色素上皮細胞系——的應用。視網膜色素上皮(RPE)是單層神經元源六角形著色上皮細胞，其形成眼視網膜最外細胞層，并附于下方脈絡膜。RPE的作用包括支持、給養和保護下方的神經視網膜感光器。RPE細胞涉及維生素A循環中感光細胞外節的吞噬作用，在該循環中，其使全-反式視黃醇異構化為11-順式視網膜；并涉及為感光器提供D-葡萄糖、氨基酸和抗壞血酸。雖然RPE在體內著色，但ARPE-19細胞不形成黑色素，并且未著色。在培養中，細胞生長為紡錘形和多角形細胞。方法將ARPE-19細胞(得自theAmericanTypeCultureCollection，ATCC)在生長培養基中以每孔2-5×103個細胞(1-2.5×104細胞/mL)的濃度在平底96孔組織微量培養板(Costar)中鋪平板，該培養基由補充以10％胎牛血清、200mM谷氨酰胺、100單位/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素的DMEM：HamF-12，1∶1組成。在用RPh-1處理前，使細胞粘附平板表面過夜。RPh-1基本如實施例1的方法1所述制備，提供10％載體溶液，該載體由葡萄籽油、橄欖油、棉花籽油、810或812組成。將制備物以0.5μl、2μl、5μl和20μl的體積添加到培養物中。引入200μl樣本培養基總體積的這些體積分別相應于0.025％、0.1％、0.25％和1％的最終RPh-1濃度。油載體用作載體對照，并以相同的體積用于對照培養物。在37℃、5％CO2培養箱中溫育培養物72hr。然后去除培養基，用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)洗滌培養物兩次，用無水乙醇固定10分鐘，并用試劑(BoehringerMannheim)染色，該試劑以類似于Giemsa的方式對細胞進行染色，并且可用于定量細胞生存力分析(參見Keisari，Y.Acolorimetricmicrotiterassayforthequantitationofcytokineactivityonadherentcellintissueculture.J.Immunol.Methods146，155-161，1992)。染料用20％SDS洗脫，并在630nm下于ELISA讀數儀中進行定量(一式三份樣本進行評估)。為確定β-3微管蛋白的表達，將細胞以培養基中105個細胞/孔的濃度在浸泡在6孔微量培養板中的無菌玻璃蓋玻片上鋪平板，該培養基由補充以10胎牛血清和青霉素(100單位/ml)、鏈霉素(100μg/ml)和谷氨酰胺(2mM)的Dulbecco最低限度必需培養基(DMEM)和HamF12培養基的1∶1混合物組成。使細胞粘附于蓋玻片過夜，并將橄欖油中7％RPh-1(或僅橄欖油作為對照制備物)以25μl/ml培養基的體積注入培養物，在37℃、5％CO2下溫育72hr。然后細胞用PBS洗滌2X，并用4％多聚甲醛固定。為確定β-3微管蛋白在細胞中的表達，將玻璃蓋玻片用針對人β-3微管蛋白的鼠單克隆初次抗體染色，然后用二次FITC標記的抗鼠IgG染色。對DAPI染色的細胞核進行計數。然后在共焦顯微鏡中評價測試制備物和對照制備物。結果意外地發現，用RPh-1對ARPE-19RPE細胞的處理誘導了巨大的形態學改變，該形態學改變明顯是神經分化的特征。形態學改變在僅用油載體處理的對照培養物中沒有發生，并且在用RPh-1處理的測試培養物之中觀察到類似的結果，而不考慮用作活性化合物的載體的油。形態學改變也與細胞增殖停止相關聯，進一步支持了RPh-1誘導神經分化的結論。對照油處理的培養物顯示出ARPE-19RPE細胞典型的紡錘形和多角形生長圖案特征(圖8A)。在培養物中溫育48小時后，用RPh-1(0.1％；1mg/ml)處理的已處理細胞的形狀改變，并且生成厚重、稠密染色的單個極長突出，其表明是神經元細胞軸突(圖8B)。溫育48小時后，用RPh-1(0.25％；2.5mg/ml)處理的細胞顯示出大量較細長突出，其表明是樹突(圖8C)。用RPh-1溫育72小時后，細長突出與相鄰細胞的類似突出形成連接點，生成相互連接的細胞網，潛在地能夠在彼此之間傳遞信息(圖8D)。類似的網通常存在于中樞神經系統的神經元之間，并能傳輸和處理信息。在對照細胞在72小時溫育期間增殖時，RPh-1處理的細胞迅速停止增殖，并且細胞保持稀疏密度，進一步支持細胞分化的觀點。利用上述不誘導分化的RPh-1失活制備物，ARPE-19細胞開始生成大量黑色素微粒，這些培養物繼續增殖，且細胞密度增大以匯合。用RPh-1(棉花籽油中5％)對ARPE-19細胞的處理顯示出造成如下的表達：神經元和突觸發生標記β3微管蛋白(TUBB3)、神經元型分化標記；Arc/Arg3.1，與突觸塑性有關；和神經元正五聚蛋白II(NPTX2)，神經元即早基因，其作用于興奮性突觸發生。分化ARPE-19細胞的免疫熒光分析顯示，用RPh-1溫育72小時后，細胞對于β3TUB、Arc/Arg3.1和NPTX2陽性染色(圖9，右側)，而觀察到這些標記在處理前極少表達或不表達(圖9，左側)。進一步得到如下證據：RPh-1處理ARPE-19細胞導致細胞復制停止。用RPh-1處理細胞72小時，并將總蛋白含量(涉及培養物中存在的細胞總數)與未經處理的對照ARPE-19細胞進行比較。如圖10所示，與對照培養物相比，RPh-1處理的培養物含有明顯較低的蛋白質含量，從而確定細胞增殖基本終止。RPh-1誘導細胞分化效力的評分系統在以上結果的基礎上，以每孔2×103個細胞鋪平板，建立評分系統以評價RPh-1誘導細胞培養物分化的效力。級別及其各自的描述列于表3中。表3.第3、4和5級細胞培養物的代表性實施例分別如圖11A、11B和11C所示。實施例5.RPh-1縮短麻醉的恢復期。日益顯著的是，麻醉與神經元損傷有關，需要安全有效的方法以進行神經保護，免受這種損傷。方法經過7天對每組8只C57B1/6小鼠通過皮下途徑以0.05mL3％葡萄籽油溶液注射RPh-1三次(每隔一天)，劑量為30mg/kg。然后使小鼠經受亞致死劑量(120mg/kg)的氯胺酮，將其給予小鼠。用0.05mL葡萄籽油載體處理對照組。結果在麻醉后，RPh-1處理的小鼠的恢復明顯更快，如其完全的活動性所證，而對照仍不可活動。對照組中由可活動能力限定的恢復比RPh-1處理組用時長3分鐘。該觀察結果表明，RPh-1中的活性成分聚合月桂烯縮短了從麻醉的恢復期，并且可用于神經保護，免受與麻醉藥物有關的不良副作用。實施例6.腫瘤細胞系中細胞死亡后RPh-1誘導細胞分化。對RPh-1對兩種黑素瘤細胞系和三種成神經細胞瘤細胞系的影響進行研究。人黑素瘤細胞系5151和鼠黑素瘤細胞系B16F10均在組織培養物中以未分化的形式增殖，不生成黑色素。人成神經細胞瘤細胞系Lan-1、Lan-5和SY5Y在培養物中增殖為不呈現分化形態的紡錘形細胞。方法將細胞以每孔2×103個細胞在96孔平底微量培養板(Costar)鋪平板，并在補充有10胎牛血清、200mML-谷氨酰胺、100單位/ml青霉素和100微克/ml鏈霉素(所有試劑均來自Gibco-BRL)的200ml培養基DMEM(Dulbecco培養基)中培養。經過夜粘附后，將RPh-1(自10％葡萄籽油溶液)添加到細胞培養物中以提供0.025％、0.1％、0.25％和0.5％的最終濃度，并繼續溫育48和72小時。用葡萄籽油載體作為對照。72小時后，細胞用甲醇固定，并用試劑(BoehringerMannheim)染色。結果發現24-48hr后，相對于圖12A中經對照處理的細胞，用RPh-1對黑素瘤細胞的處理誘導黑色素形成，如圖12B和圖12C所示。RPh-1處理進一步造成復制終止，如減少的細胞密度所示，例如圖12D中。72小時后，在用四種測試RPh-1濃度中的每一種溫育的培養物中均觀察到細胞死亡。在用RPh-1(最終濃度0.025％)處理成神經細胞瘤細胞系Lan-1、Lan-5和SY5Y時，細胞開始生成樹突狀突出，且細胞增殖停止。較高RPh-1濃度造成全部培養物中細胞死亡。因此，RPh-1處理誘導形態學神經元樣分化特征，其后細胞死亡。在用聚月桂烯的分離組分(最終濃度0.025％)處理成神經細胞瘤細胞系Lan-1、Lan-5和SY5Y時，細胞開始生成樹突狀突出，且細胞增殖停止。較高RPh-1濃度造成全部培養物中細胞死亡。因此，RPh-1處理誘導形態學神經元樣分化特征，其后細胞死亡。結論聚合月桂烯——RPh-1的活性成分，與誘導多種細胞系的分化有關，該細胞系源自惡性癌癥黑素瘤和成神經細胞瘤。終末分化障礙(block)被認為是癌癥中細胞增殖持續的主要途徑。克服該障礙已被證明是若干形式癌癥的有效治療方式(例如，治療急性早幼粒細胞白血病的維甲酸類)，現被稱為“靶向治療”。靶向治療并不殺死癌細胞，但改變其行為，主要通過誘導分化進行。因此，可降低多種癌癥的攻擊性。如本文公開，聚合月桂烯——RPh-1的活性成分，已被發現克服腫瘤細胞分化的障礙——如神經元細胞樹突在成神經細胞瘤細胞系中形成和黑色素的形成在黑素瘤細胞系中被誘導所示。在這兩種情況下，這些改變與細胞增殖停止和細胞死亡有關。實施例7.化學合成的聚合月桂烯誘導視網膜色素上皮細胞培養物的細胞分化。進行實驗以確定兩種不同分子量范圍的合成聚合月桂烯是否誘導ARPE-19細胞的神經分化。方法將ARPE-19細胞以生長培養基中每孔5×103個細胞(2.5×104細胞/mL)的濃度在平底96孔組織微量培養板(BIOFIL)中鋪平板，該生長培養基由DMEM：HamF-12，1∶1組成，補充以10％胎牛血清、200mM谷氨酰胺、100單位/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素。在用化學合成的聚合月桂烯組分處理前，使細胞粘附平板表面過夜。在RPE細胞分化分析中測試具有不同分子量的分離組分——化學合成的聚合月桂烯——的活性。實施例3所述的組分18-1(分子量在約50,000道爾頓的范圍內)和組分18-2(分子量在約20,000道爾頓的范圍內)為所使用的組分18-1和18-2，并且在橄欖油中每一個以濃度10％制備RPh-1。將各制備物添加到ARPE-19細胞培養物中，所用體積為0.5μl、2μl、5μl和20μl，分別相應于0.025％、0.1％、0.25％和1％的最終濃度。橄欖油用作載體對照，并以相同體積被施用于對照培養物。在37℃、5％CO2的培養箱中溫育培養物72hr。然后去除培養基，用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)洗滌培養物兩次，用無水乙醇固定10分鐘，并用試劑染色。結果兩組分18-1和18-2均顯示具有誘導ARPE-19細胞神經分化的活性(圖13和表4)。觀測到0.25％的組分18-1具有最佳活性(如圖13A所示)，而0.1％略微有效，0.025％無效(表4)。組分18-2的效果如圖13B所示。表4.組分18-1和18-2對ARPE-19細胞分化的影響結論觀測結果支持以下結論：RPh-1——乳香分離組分制劑，具有誘導神經元細胞分化的活性。觀測結果也支持以下結論：聚合月桂烯，無論從植物來源分離或化學合成，均具有誘導神經元細胞分化的活性。實施例8.RPh-1誘導細胞分化的效果受乳香樹脂中存在的極性溶劑可溶性組分阻礙。概述乳香樹脂以及在其中鑒定的多種化合物與多種有益的生物活性和治療活性有關。各種現有技術公開表明，生物活性與通過用極性溶劑萃取乳香和回收極性溶劑可溶物而獲得的組分有關。相反，RPh-1是在其可溶于極性有機溶劑和非極性有機溶劑的基礎上從乳香樹脂分離的組分，而僅可溶于極性有機溶劑但不溶于非極性有機溶劑的化合物被棄去(后者在本文中被稱為組分SP)。RPh-1的主要成分是聚合月桂烯，如實施例2所示。但是，該化合物在前從未被認為具有有益效果，而被公認干擾乳香樹脂中存在的活性化合物的口服給藥和生物利用度。組分SP相應于現有技術中被認為具有多種有益生物活性的乳香組分。本研究的目的在于評價SP對RPh-1所發揮的細胞分化作用的影響。現公開SP中存在的化合物干擾和阻礙RPh-1誘導的細胞分化作用。方法基本如實施例1的方法1所述，用乙醇作為極性溶劑，乳香樹脂經處理得到RPh-1。從不溶物中潷去乙醇可溶性組分，得到組分SP。如下制備不同比例的RPh-1和組分SP混合物：混合物RPh-1(％)組分SP(％)A0955A19010A28020A37030A45050A52575此外，制備溶于油(加溫至60℃)的全部乳香，得到制備物TC。本研究的結果，被概括在表5中，表明富含RPh-1(A0和A1)的組分有效誘導ARPE-19分化。在這些培養物中所觀察到的形態學改變與圖8B和8C所示的相似。隨著組分SP在混合物中的比例增加，細胞死亡增加，沒有觀察到細胞分化。僅用SP處理的培養物中的細胞在所有測試劑量下均死亡，組分TC僅發揮可忽略的作用。這些結果顯示，有效的神經分化誘導活性僅由RPh-1中的聚合物提供，而SP極性組分僅導致細胞死亡。表5.RPh-1和SP的混合物對細胞分化的影響實施例9.犬傷口愈合。老齡雄性金毛尋回犬(goldenretrieverdog)患有開放式慢性腿傷超過6個月。皮膚病變與脫毛癥(毛皮脫落)和周圍毛皮脫色相關聯。通過若干RPh-1局部治療循環對該犬進行治療。在初步施用后，短暫的浮腫和腫脹發生16-20hr。然后由于肉芽組織快速和蓬勃形成，正常組織的輪廓重新形成功能性上皮組織(上皮形成)以及發生新血管生成(微血管新形成)。傷口愈合向內朝向傷口中心收縮，表明存在(中胚層源的)纖維肌細胞。傷口在約12周內完全愈合，且皮膚顯著具有功能性，毛皮再生。圖14顯示了RPh-1治療前(圖14A)和治療后(圖14B)的患病區域。在另一患有脫毛癥的老齡雄犬中，RPh-1局部治療導致毛皮再生，從而與周圍毛皮合為一體。另一狗患有頜腫瘤(非誘導)，該頜腫瘤的部分突起到口腔中。突起部分被外科手術切除，而嵌入頜內的腫瘤部分不能被去除。該腫瘤經診斷為肉瘤。將在葡萄籽油中配制成的RPh-1施用于患病頜區域。該處理使覆蓋外科手術切口處的牙齦近似完全被治愈至如下程度：沒有留下疤痕，并且外科手術切口處不再可辨。甚至腫瘤從嵌入頜的部分的預期復發也被防止數周的延長時間。RPh-1處理引起外科手術切口處極快地愈合和牙齦完全再生。在以上兩種情況下，所治療犬的傷口愈合均伴有活力、精神意識和身體活動性總體提高。以上結果支持聚合月桂烯——RPh-1的活性成分——對于傷口愈合、毛囊再生和神經系統退化逆轉的應用。實施例10.魚傷口治療。金魚和錦鯉(均為鯉科)易患細菌——特別是嗜水氣單胞菌(Aeuromonashydrophila)——引起的體被潰瘍。將均患有細菌性潰瘍的每條重約100克的金魚分成單獨罐中兩組，每組包括4條魚。各罐裝有100升體積的水，并用空氣泵保持通氣。各組重量和傷口大小(在1-1.5cm×1-1.5cm的范圍)隨機。用20微升僅葡萄籽油(對照組)或1％RPh-1的葡萄籽油溶液(治療組)穿過完整的體被在離潰瘍約5mm處對各魚進行肌內注射。測試組的魚在4個RPh-1治療循環后開始日益改善，并且經過一個月時間被治愈。經過本研究六周時間，該組所有魚均存活。這些魚也呈現靈活和響應性行為，包括積極游水、尋找和搶奪在水面提供的食物以及響應于罐壁敲擊的迅速驚嚇的離開移動。相反，對照組的魚其潰瘍情況未顯示改善。該魚嗜眠，呈現在罐底的久棲行為，并且對刺激無響應。該組的所有魚均在6周結束時死亡。這兩組的以下兩個參數的差異非常顯著：魚存活率和傷口閉合。實施例11.利用B6.V-Lepob/Olahsd小鼠模型的RPh-1在傷口愈合中的作用。利用B6.V-Lepob/OlaHsd(ob/ob)小鼠(在4周齡表現肥胖)評價RPh-1在傷口愈合中的作用。利用一次性活組織檢查穿孔器(DisposableBiopsyPunch，Premier)在各鼠背部遠端區進行全厚皮膚穿孔。穿刺為橢圓形。穿刺的平均長軸長度在5.1至5.3mm的范圍內。穿刺的平均寬軸長度在4.8至5.1mm的范圍內。將橄欖油中的RPh-1(5％)皮下注射在距傷口邊緣3-5毫米的兩個傷口周圍處(A組，n＝6)，或局部注射在傷口上(B組，n＝6)。將載體局部施用于小鼠傷口上(C組，n＝6)。其后，RPh1(5％)以20ul劑量體積(注射)或50ul劑量體積(局部給予)每周施用3次，本研究16天內共7次。圖15顯示傷口造成后第11天，與僅用載體治療的小鼠(C組)相比，RPh-1治療的小鼠(A組)的傷口大小(傷口面積)顯著減小(p＝0.005)。RPh-1治療的小鼠在傷口造成后第0天至第11天期間的傷口愈合速度明顯快于僅用載體治療的小鼠(p＝0.034)。實施例12.RPh-1在逆轉大鼠模型慢性腦灌注不足(血管性癡呆)的神經退行性效應中的作用。血管性癡呆(VD)是癡呆的子類，在西方社會中其患病率僅次于阿爾茨海默病。VD引起多種神經精神和身體問題，并帶來嚴重的經濟負擔。腦成像已揭示大腦皮層和腦白質的顯著變化，這些病變被認為是血管性癡呆患者認知下降的核心病理(參見例如，Farkas等.，Experimentalcerebralhypoperfusioninduceswhitematterinjuryandmicroglialactivationintheratbrain.ActaNeuropathol.2004；108：57-64；Stenset等.，Whitematterlesionsubtypesandcognitivedeficitsinpatientswithmemoryimpairment.DementGeriatrCognDisord.200826：424-431)。通過可影響認知功能的兩頸總動脈的持續閉塞，可在大鼠腦中實驗性誘導腦病變。該模型類似于血管性癡呆，并且實驗技術可減少大腦皮層和海馬中高達40-80％的血流數個月，誘導某些學習障礙。因此，該模型被用于研究RPh-1治療在逆轉由血管性癡呆病變引起的缺陷中的作用。總共40只動物被隨機分成3組，即未經治療的假對照組、載體對照組和RPh-1治療組(每組10-15只動物)。其被隨機分成3組，未經治療的假對照組、載體對照組和RPh-1治療組。皮下給予10μlRPh-1(棉花籽油中5％)或載體2x/wk，并且在誘導血管性癡呆后14天給予第一劑。Morris水迷宮(MWM)測試對海馬功能敏感。利用前述方法進行水迷宮工作以評價兩種CCA相關學習缺陷(Watanabe等.，CilostazolStroke.2006；37(6)：1539-1545)。在直徑160-cm充有深20-cm的水的圓形水池中準備圓形透明丙烯酸平臺，其頂面在水下3cm。將大鼠面相池壁釋放，記錄逃至該平臺所用的時間，作為逃脫等待時間。在CCA閉塞前第3天和CCA閉塞后第14、35、56、84和112天進行測試。在訓練第6天，每天以2min的測試間隔進行訓練測試。將動物置于水池中六個起始位置之一處。在每次訓練測試中，記錄逃至隱藏的平臺所需的時間和路徑長度。將六個訓練測試的結果求平均，得到一個代表值，并且將該平均值用于最終統計分析。找到平臺的動物可以停留在平臺上30sec。90sec內沒有找到平臺的動物在測試結束時被溫和地導向平臺30sec。以如下測試經RPh-1治療的動物(交叉線條)、經載體治療的動物(空白條)和假對照動物(黑色條)的性能：在平臺位置的頻率(圖16A)；在平臺區域的耗時(圖16B)；找到平臺的等待時間(圖16C)；在區域1位置的頻率(圖16D)；在有光部分的耗時(圖16E)；找到平臺的等待時間(圖16F)；和速率(圖16G)。全部測試均顯示，經RPh-1治療的動物的性能遠遠高于對照組中的至少一個。實施例13.RPh-1的病理性重量調控效果(開胃和抗肥胖效果)。實施例9所述帶有多個傷口的犬另外遭受食欲不振，并且不進食放在其面前的食物。經所述RPh-1治療約10天后，該犬對食物逐漸重拾興趣，并且開始進食。一個月內，該犬對食物顯示出強烈的興趣，并且食欲類似于正常健康犬的食欲。實施例10所述患有潰瘍的魚另外遭受食欲不振。對照組持續忽視向水中提供的食物，而經RPh-1治療的魚對于食物給予以快速的移動熱切地做出響應。實施例12所述的大鼠在慢性腦灌注不足后另外遭受重量減輕。在治療35天(研究第56天)后，所述經RPh-1治療的大鼠其重量的恢復顯著快于經載體治療的動物(圖17A)。實施例11所述的小鼠一般遭受突變瘦蛋白基因引起的肥胖。圖17B顯示對小鼠皮下給予RPh-1(A組；菱形符號)造成體重增加明顯低于經載體治療動物(C組；三角符號)或通過局部給予RPh-1治療的動物(B組；正方形符號)。A組小鼠在11天內增重4.9％。體重增加是相對于原(第0天)體重的。A組的體重增加明顯低于B組小鼠的平均體重增加(p值＝0.02，T檢驗，Excel)。C組小鼠類似于B組小鼠(p＝0.08)，并且增加的體重明顯不同于A組小鼠(p值＝0.04)。B組和C組小鼠分別增重10.2％和9.1％。所有組以斜率表示的體重增加速度相似(p＝0.07(A對B)、0.08(A對C)和0.43(B對C))。以上觀察結果支持如下結論：RPh-1是病理重量紊亂的調節劑，并且可充當開胃劑(食欲刺激劑)或抗肥胖劑。實施例14.RPh-1在大鼠短暫大腦中動脈閉塞(tMCAO)中風模型中的作用。在利用大鼠短暫大腦中動脈閉塞模型(tMCAO)評價RPh-1預防或逆轉局部缺血引起的神經缺損的能力的研究中，以10ul劑量皮下給予RPh-1(棉花籽油中5％)，并且第一次給藥在外科程序后3h進行，然后每周兩次直到第28天研究終止。在該研究過程中，以行為測試組對神經、運動和軀體感覺功能進行測試。在整個研究中，沒有觀察到兩組之間總體生理情況、體重增加或總體臨床癥狀的顯著差異。在中風后的28天期間，RPh-1治療組和載體治療對照組之間可見中風后神經功能恢復的明顯差異。一般，加速和改善的恢復在經RPh-1治療的動物中得到證實。軀體感覺功能對治療最為敏感，并且顯著的反應早在中風后第8天得到證實(圖18A和18C)。對神經值表示的顯著差異的評價僅見于經RPh-1治療的大鼠(A組)第8天與第14天之間、第8天與第28天之間(圖18A)。如貼劑去除測試(patchremovaltest)評價的神經恢復僅在經RPh-1治療的大鼠(A組)第2天與其余天之間明顯(圖18C)。如階梯測試評價的運動功能改善僅在經RPh-1治療的大鼠(黑色條)第28天明顯(圖18B)。實施例15.RPh-1對視網膜神經節細胞(RGC)的影響。對深度麻醉的大鼠(每組19只大鼠)右眼進行視神經軸索顯微外科術。測試組接受頸后部區域皮膚下注射RPh-1(棉花籽油中5％；0.025ml/注射)，對照組被類似地注射相同體積的載體。手術后對全部動物直接給予第一次注射。隨后的注射(相同的劑量和給予方法)給予每周兩次，每三至四天。軸索斷裂后14天，將熒光逆行神經示蹤劑(fluorescentretrogradeneurotracer)(Di-Asp)插入軸索斷裂的視神經，從而使存活的視網膜神經節細胞(RGC)被染色，24小時后，將大鼠在CO2飽和室中處死，并摘除受傷的右眼。將視網膜分離，平鋪在玻片上，并用基于二甲苯的固定介質固定。用熒光顯微鏡評價整裝視網膜。人工計數染色的細胞。每組RGC的平均數如圖19所示，顯示RPh-1測試組中的細胞數明顯更多。實施例16.視網膜脫落(RD)模型。在用托品酰胺滴劑0.5％進行瞳孔擴張后對深度麻醉的動物(甲苯噻嗪50mg/kg和氯胺酮35mg/kg)的右眼進行視網膜脫落(RD)。通過在視網膜的鋸齒緣生成小開口然后用30G注射針在視網膜下注射5μl鹽水引起RD。約半個視網膜區域通過該程序分離。將RD的大鼠分成兩個實驗組，并且測試組接受頸后部區域皮膚下注射RPh-1(棉花籽油中5％；0.025ml/注射)，對照組被注射相同體積的載體。手術后對全部動物直接給予第一次注射。手術后48小時給予第二次注射(相同的劑量和給予方法)。在RD后第3天和第14天，對被操作的大鼠在CO2飽和室中實施安樂死。將受傷的右眼和未經治療的左眼摘除。視網膜經分離，在干冰上冷凍和處理以進行蛋白質印跡分析或免疫組織化學分析。左眼視網膜充當未操作的對照。研究腦信號蛋白3A(Sema3A)、神經氈蛋白1(NP1)和GAP43的表達水平，將胱天蛋白酶3用作凋亡標記，并檢測Müiller和小神經膠質細胞的形態學改變。Sema3A是軸突生長抑制劑，其顯示出涉及視神經損傷后的視網膜神經節細胞損失。RD后在視網膜中檢測出高水平的Sema3A，如蛋白質印跡分析(圖20A)所示。RPh-1治療使Sema3A在未損傷的視網膜對照和RD的視網膜(圖20A)中的表達水平均顯著降低。使樣本相對于β-肌動蛋白表達(下方條帶，圖20A)標準化。對20μm用抗Sema3A抗體和核染料SytoxBlue溫育的視網膜切片的免疫組織化學分析顯示，脫落的視網膜中的Sema3A表達顯著高于對照。主要在視網膜神經節細胞周圍觀測到Sema3A表達。與蛋白質印跡分析中觀測的結果相似，經RPh-1治療的RD動物的Sema3A表達減少。NP1是功能性Sema3A受體。TUNEL陽性細胞——指示凋亡過程，在視網膜脫落后24小時顯著，并在7天后增加。胱天蛋白酶-3響應于RD被激活。但是，經RPh-1治療的RD動物中胱天蛋白酶-3的增多在被顯著削弱(圖20B)。GAP43是與生長錐體細胞的膜緊密聯系的胞內蛋白。其在突觸發生過程中正常表達。在視網膜中，GAP43于胚胎發生早期在神經元中表達，此時視神經仍在伸長。在大鼠視神經中，GAP43被發現于RGC的軸突和細胞體中，但表達在8至16周齡消失，并被再次發現于局部缺血或視神經損傷后。通過膠質纖維酸性蛋白(GFAP)染色研究Muller細胞的形態學改變。GFAP標記視網膜中的Muller細胞，并常被用作壓力指示劑。完整對照視網膜中的GFAP標記在GCL濃縮。免疫組織化學分析顯示脫落的視網膜中的GFAP水平比對照高。用RPh-1治療的脫落的視網膜呈現較高的GFAP水平。小神經膠質侵入和活化被認為是對神經元有害或有益的。急性CNS損傷后的小神經膠質活化主要是反應性和適應性神經膠質細胞反應，其被受傷的神經元引起，并且其被設計以改善主要的組織損傷，并因此促進隨后的修復和神經膠質增生(神經膠質疤痕)。小神經膠質通常在損傷后于視網膜中活化，刺激和募集內皮細胞和成纖維細胞。經IB4標記和核染料PI染色的脫落和未損傷的視網膜切片的免疫組織化學分析顯示活化小神經膠質細胞僅在脫落的視網膜中的證據。但是，用RPh-1治療的動物的脫落的視網膜中的小神經膠質活化相對于用載體治療的動物的脫落的視網膜顯著減少。結果顯示，損傷區域周圍的活性小神經膠質募集減少，并且支持傷口的無疤痕修復機制。實施例17.環糊精與聚合月桂烯的絡合物的制備。環糊精，由于其與多種藥物形成包合絡合物的能力，可使生物藥物——特別是被定義為不溶于水的生物藥物，如聚合月桂烯——的水溶性顯著提高。環糊精是水溶性化合物，其可與水溶性差的分子形成可逆的絡合物，生成可溶性分子包合絡合物。當藥物-環糊精組合的包合絡合物在足夠大量的水或血液中稀釋時，其迅速溶解，釋放螯合的藥理活性劑。聚合月桂烯與β-HPCD的絡合將如下進行：a.預稱重的聚合月桂烯在最少量的非極性溶劑如己烷、庚烷或類似溶劑中溶解。b.向β-HPCD粉末滴加非極性溶劑。c.在50-80℃進行干燥，直到非極性溶劑蒸發。d.與必需量的水的混合。e.在超聲處理和加熱下溶解。f.通過0.2-0.45μm過濾器過濾。實施例18.聚合月桂烯納米乳液的制備。液體水包油納米乳液制劑將通過全部脂質成分的高壓乳化技術制備，將活性成分聚合月桂烯溶于脂質油相，并用水相乳化，經設計導致穩定、球狀和均勻分散的含藥物脂質納米液滴形成。乳液液滴大小的減小對生成具有高穩定性的藥物制劑至關重要。優選的納米乳液液滴的平均液滴大小低于1微米(一般在0.1-0.2μm的范圍內)，均勻地分散在水相中。納米乳液液滴的內部大疏水性油核心的獨特性為水不溶性化合物如聚合月桂烯提供了高溶解能力。1.油相的制備油相由13％類脂E-75、0.026％αTP-琥珀酸酯、對羥苯甲酸丙酯作為抗氧化劑和86.9％810組成。將如實施例1制備的聚合月桂烯溶于油相。在輕度加熱下混合成分，直到得到均質的完全溶解的溶液。2.水相的制備水相由0.1％EDTA、0.5％Tween-80、2.3％甘油、對羥基苯甲酸甲酯作為防腐劑和97.1％水組成。通過NaOH1N將pH調整至7.4。3.油相和水相的混合將油相(3.7g)加熱，并添加到70ml水相(預熱)中。在室溫下輕輕攪拌混合物10-15min。4.水包油粗乳液的制備利用中等大小的分散器和高剪切力均質裝置在20,000rpm下5min制備水包油乳液。5.通過高壓均質器標定乳液為亞微米范圍通過在800bar壓力下利用Microlab70高壓均質器使乳液經受高剪切力均質化，將步驟4后得到的乳液的液滴大小減小至亞微米(納米大小)范圍。應進行總共5-6個循環，以得到均質的納米乳液液滴，該液滴的平均顆粒大小低于200nm。顆粒大小將利用N4MD顆粒大小分析儀(Electronics，UK)通過光子相關光譜(PCS)確定。當多數顆粒(＞90％)小于200nm時，確定標定大小的過程完成。6.無菌過濾利用0.2μmPES無菌過濾器在無菌條件下將納米乳液過濾到無菌小瓶中，并在40℃下保存。實施例19.噴霧干燥的聚合月桂烯粉末的制備。考慮成本效益和推廣方面的考慮，制備聚合月桂烯-脂質混合物產物的便捷方法是通過從包含所有脂質成分的非極性溶劑分散液和包含親水成分的水的混合物的直接噴霧干燥。所選的噴霧干燥法被優化，從而得到細微、自由流動的粉末。將聚合月桂烯溶于包含脂質成分卵磷脂、三癸酸甘油酯(癸酸甘油三酯)、生育酚琥珀酸酯的脂質相，并在非極性溶劑中加溫(～40℃)直到得到良好的分散液。通過使粉末在純水中膨脹制備氣相二氧化硅的水分散液(5％)。然后將生成的漿液(預加溫至40℃)緩慢倒入非極性溶劑脂質分散液，并在40℃下攪拌混合物約1hr，直到得到均質的分散液。然后利用YamatoGA32噴霧干燥器對混合物進行噴霧干燥。噴霧干燥條件為：流速7ml/min，入口溫度130℃，出口溫度70℃，干燥空氣流速0.5m3/min。預期得到包含聚合月桂烯-脂質混合物的均質干燥粉末。預期通過直接噴霧干燥法制備的聚合月桂烯-脂質混合物制劑顯示良好的水分散性，因此適于制備固體劑型如硬膠囊或片劑，以增強具有潛在良好口服生物利用度的聚合月桂烯的口服輸送。實施例20.包含聚合月桂烯的脂質體制備物的制備。將包含溶解的聚合月桂烯的脂質在圓底燒瓶中溶于100ml二氯甲烷，并在室溫下攪拌30min，直到得到澄清透明的溶液。利用旋轉蒸發裝置在39℃下將溶劑蒸發。首選，在大氣壓下以4.5rpm旋轉燒瓶5min，然后在低真空下旋轉10-30min(直到溶劑完全蒸發)，最后在全真空下旋轉15min。在蒸發過程結束時，將生成均勻的脂質膜。將該脂質膜溶于15ml等滲緩沖液。通過如下制備脂質體：通過利用多腕(multi-wrist)振蕩器劇烈振蕩10-30min，直到均勻乳狀的多層載體(MLV)分散液形成并且沒有明顯的殘留脂質膜。為得到平衡和同質的脂質體制備物，在37℃下以270rpm進一步振蕩燒瓶30-90min。實施例21.包含聚合月桂烯的微乳液的制備。多種腸胃外常用的表面活性劑可用于生成注射、口服和局部施用可接受的水包油微乳液和油包水微乳液。適于形成微乳液制劑的藥學上可接受的表面活性劑為非離子型表面活性劑，包括聚氧乙烯40氫化蓖麻油(以商標名克列莫佛出售)、聚氧乙烯35蓖麻油(以商標名EL出售)、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯(聚山梨酸酯)、泊洛沙姆維生素E-TPGS1000(VE-TPGS1000)、聚氧乙烯烷基醚、HS-15、TO、Peglicol6-油酸酯、聚氧乙烯硬脂酸酯或飽和聚乙二醇甘油酯，其全部為商業上可獲得的。優選的表面活性劑包括聚氧乙烯40氫化蓖麻油聚氧乙烯35氫化蓖麻油聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯(聚山梨酸酯)、泊洛沙姆和維生素E-TPGS1000。表面活性劑在組合物中的總量一般為約100至約700mg/g，優選約300至約500mg/g。包含聚合月桂烯的微乳液的制備可通過如下進行：將聚合月桂烯在適當的小瓶中溶于適當量油，如中等鏈甘油三酯(Miglyol)。然后將小瓶加蓋。將該小瓶置于約50-60℃的水浴中并輕輕振蕩，直到全部藥物材料完全溶解。將小瓶冷卻至室溫，然后添加適當量的表面活性劑(如EL或VE-TPGS)，如有，接著添加甘油單酯和甘油二酯與脂肪酸的混合物。然后將小瓶加蓋，并置于約50-60℃的水浴中。輕輕振蕩小瓶，得到澄清均勻的溶液。該溶液可被裝入HPMC膠囊，并在口服服藥前于室溫下保存。或者，可將替代的聚合物粉末(如HPMC)在適當的攪動(即，攪拌、振蕩)下添加到溶液中，得到均勻的聚合物懸浮液。然后可將生成的組合物裝入軟膠囊或硬膠囊，并在口服服藥前于室溫下保存。或者，可將微乳液制劑用作局部或穿過0.2um膜過濾，以在腸胃外給予。包含聚合月桂烯的微乳液在水介質中稀釋時具有良好的水分散性和自乳化性，形成微小的納米膠束，其生物利用度被提高。以上具體實施方式的說明將如此完全地揭示本發明的總體性質，即其他人通過利用現有知識不需要過分實驗并在沒有脫離總體構思下可容易地將這些具體實施方式修改和/或修正以用于多種用途。因此，這種修正和修改應當并且意圖被認為在所公開的實施方式的等同實施方式的意義和范圍內。要理解的是，本文所用的用語或術語的目的是為說明，而非限制。用于實施多種所公開的功能的手段、材料和步驟可采取多種沒有脫離本發明的替代形式。當前第1頁1 2 3