一種短直鏈淀粉?胰島素或短直鏈淀粉?胰島素?原花青素納米復合物的制備方法與流程
本發明涉及納米復合材料技術領域，尤其是涉及一種通過將短鏈淀粉與胰島素或者短鏈淀粉與胰島素、原花青素混合制備納米復合物的方法。
背景技術：
胰島素制劑皮下注射是目前用于糖尿病治療的主要手段，具有更快的降血糖效果和更高的藥物利用度，但由于藥物釋放較快，需要頻繁注射給藥，增加了病人的身體和心理負擔。注射給藥這種方式與正常生理狀態下體內的胰島素的分泌也存在著較大的差異；胰島素經注射給藥后直接進入人體循環；在正常生理條件下，胰島分泌的胰島素先進入肝門靜脈系統，大部分為肝臟攝取，胰島素以口服途徑給藥最接近正常生理狀態下的分泌模式，因此，無論從服用的方便程度上，還是從代謝的模式上看，口服都是胰島素最為理想的給藥方式。納米技術的快速發展為胰島素口服給藥開辟了新的途徑。以納米顆粒作為藥物載體，可有效地保護胰島素免受胃酸及胃腸道酶的降解，增加其黏膜吸收；還可以有效地穿過小腸peyer's結，經淋巴循環進入血液循環，同時還具有控制釋放和體內靶向分布等特點。在眾多用于制備納米粒的天然大分子中，淀粉是一類重要的具有生物可降解性、可再生、良好生物相容性的天然多糖類高分子材料，來源豐富，價格低廉，廣泛地應用于各種藥物的納米粒制劑中，是一種理想的載體材料。
天然產物多酚因具有良好的生物兼容性和諸多生理學功能，如抗氧化、抗粉樣纖維、抗癌和抑菌等活性，一直是生命領域研究的重要對象之一。原花青素在抗氧化、清除體內自由基、免疫調節、治療炎癥以及預防心腦血管、癌癥和神經退行性等重大疾病方面均發揮了重要作用，因此被廣泛應用于食品工業、生物醫藥、衛生保健、日用化工等領域。
技術實現要素：
針對現有技術存在的上述問題，本發明申請人提供了一種短直鏈淀粉-胰島素或短直鏈淀粉-胰島素-原花青素納米復合物的制備方法。本發明短直鏈淀粉-胰島素或短直鏈淀粉-胰島素-原花青素納米復合物粒徑較小，可以緊密的粘附在小腸的膜粘附層，延長在胃腸帶停留時間，同時可以克服消化道系統中存在的粘液層屏障、酶屏障及上皮屏障，提高口服胰島素的生物利用率。
本發明的技術方案如下：
一種短直鏈淀粉-胰島素納米復合物，所述納米復合物通過如下步驟制得：
(1)制備短直鏈淀粉：配制質量百分比為10-25％的蠟質玉米淀粉乳，100℃水浴30min使之完全糊化，隨后降溫至58℃，向其中加入100-500u/ml的普魯蘭酶，酶解6-12h，離心，滅酶，凍干得短直鏈淀粉；
(2)制備短直鏈淀粉溶液：稱取短直鏈淀粉加入到去離子水中，超聲5min，然后100℃水浴30min使之完全糊化，降至室溫待用，制得質量濃度為1-10％的短直鏈淀粉溶液；
(3)制備胰島素溶液：稱取胰島素粉末用ph＝2的鹽酸溶液溶解，配制成質量濃度為1‰-1％的胰島素溶液；
(4)制備短直鏈淀粉-胰島素納米復合物：將步驟(3)制得的胰島素溶液逐滴加入到步驟(2)制得的短直鏈淀粉溶液中攪拌1h，在室溫下使其充分反應，然后將其放置4℃冰箱下回生處理12～48h，離心得到沉淀，將沉淀凍干即得短直鏈淀粉-胰島素納米復合物。
步驟(4)中所述胰島素溶液與短直鏈淀粉溶液的體積比為1:8。
步驟(4)中所述凍干的條件為真空度為1pa，冷阱溫度為-82℃，干燥至樣品最終含水量為5-7％。
一種短直鏈淀粉-胰島素-原花青素納米復合物的制備方法，所述方法將短鏈淀粉、胰島素與原花青素復合，具體制備過程為：將質量濃度為1‰-1％的胰島素溶液和質量濃度為1‰-1％的原花青素溶液同時分別逐滴加入到質量濃度為1％-10％的胰島素溶液中攪拌1h，在室溫下使其充分反應，然后將其放置4℃冰箱下回生處理12～48h，離心得到沉淀，將沉淀凍干即得短直鏈淀粉-胰島素-原花青素納米復合物。
所述原花青素溶液的制備過程為：將原花青素加入到去離子水中，制得質量濃度為1‰-1％的原花青素溶液。
本發明有益的技術效果在于：
本發明采用生物酶法制備短直鏈淀粉，短直鏈淀粉含有大量的-oh，胰島素含有nh2，原花青素可以作為交聯劑跟穩定劑，抑制胰島素本身的聚集，利用短直鏈自組裝并結合二者之間或者三者之間的相互作用，制得所述納米復合物。制備得到的納米復合物粒徑較小，可以緊密的粘附在小腸的膜粘附層，延長在胃腸帶停留時間，同時可以克服消化道系統中存在的粘液層屏障、酶屏障及上皮屏障，提高口服胰島素的生物利用率。制備得到的納米復合物，具有包埋率高，成本低，降血糖作用明顯等特性，有效提高了口服胰島素的生物利用度，而且口服納米復合物在胃腸道環境中具有明顯的緩釋功效。
附圖說明
圖1為實施例1、2所得納米復合物的透射電鏡和粒徑圖；
圖2本發明實施例所用短直鏈淀粉與胰島素兩者或短直鏈淀粉、原花青素和胰島素三者相互作用的熒光圖譜；
圖3本發明實施例所用短直鏈淀粉與胰島素兩者或短直鏈淀粉、原花青素和胰島素三者相互作用的同步熒光圖譜；
圖4短直鏈淀粉與胰島素兩者或短直鏈淀粉、原花青素和胰島素三者相互作用的共振光散射圖譜；
圖5為實施例1、3、5、7所得短直鏈淀粉-胰島素納米復合物的x衍射圖和實施例2、4、6、8所得短直鏈淀粉-胰島素-原花青素納米復合物的x衍射圖；
圖6為實施例1、3、5、7所得納米復合物中短直鏈淀粉對胰島素的包埋率；和實施例2、4、6、8所得納米復合物中短直鏈淀粉和原花青素對胰島素的包埋率；
圖7為實施例1、2所得納米復合物體內降血糖效果曲線。
具體實施方式
下面結合附圖和實施例，對本發明進行具體描述。
實施例1
一種短直鏈淀粉-胰島素納米復合物，所述納米復合物通過如下步驟制得：
(1)制備短直鏈淀粉：配制質量百分比為15％的蠟質玉米淀粉乳，100℃水浴30min使之完全糊化，隨后降溫至58℃，向其中加入100u/ml的普魯蘭酶，酶解6h，離心，滅酶，凍干得短直鏈淀粉；
(2)制備短直鏈淀粉溶液：稱取0.1g步驟(1)制得的短直鏈淀粉加入到10ml去離子水中，超聲5min，然后100℃水浴30min使之完全糊化，降至室溫，制得質量濃度為1％的短直鏈淀粉溶液；
(3)制備胰島素溶液：稱取0.01g胰島素粉末用10mlph＝2的鹽酸溶解，配制成1‰的胰島素溶液；
(4)制備短直鏈淀粉-胰島素納米復合物：將5ml步驟(3)制得的胰島素溶液逐滴加入到40ml步驟(2)制得的短直鏈淀粉溶液中，攪拌1h，在室溫下使其充分反應，然后將其放置4℃冰箱下回生處理48h，離心得到沉淀，將沉淀凍干即得短直鏈淀粉-胰島素納米復合物。本發明實施例所得納米復合物的透射電鏡圖和粒徑圖分別如圖1a、c所示；所得納米復合物體內降血糖效果曲線如圖7所示；所得納米復合物動物體內生物利用率如表1所示。
實施例2
一種短直鏈淀粉-胰島素-原花青素納米復合物的制備方法，其特征在于所述制備方法包括如下步驟：
(1)制備短直鏈淀粉：配制質量百分比為15％的蠟質玉米淀粉乳，100℃水浴30min使之完全糊化，隨后降溫至58℃，向其中加入100u/ml的普魯蘭酶，酶解6h，離心，滅酶，凍干得短直鏈淀粉；
(2)制備短直鏈淀粉溶液：稱取0.1g步驟(1)制得的短直鏈淀粉加入到10ml去離子水中，超聲5min，然后100℃水浴30min使之完全糊化，降至室溫，制得質量濃度為1％的短直鏈淀粉溶液；
(3)制備胰島素溶液：稱取0.01g胰島素粉末用10mlph＝2的鹽酸溶解，配制成1‰的胰島素溶液；
(4)制備原花青素溶液：稱取0.01g的原花青素粉末用10ml的去離子水溶解，配制成1‰的原花青素溶液；
(5)制備短直鏈淀粉-胰島素-原花青素納米復合物：將5ml步驟(3)制得的胰島素溶液、5ml步驟(4)制得的原花青素溶液同時逐滴加入到40ml步驟(2)制得的短直鏈淀粉溶液中，攪拌1h，在室溫下使其充分反應，然后將其放置4℃冰箱下回生處理48h，離心得到沉淀，將沉淀凍干即得短直鏈淀粉-胰島素-原花青素納米復合物。本發明實施例所得納米復合物的透射電鏡圖和粒徑圖分別如圖1b、d所示；所得納米復合物體內降血糖效果曲線如圖7所示；所得納米復合物動物體內生物利用率如表1所示。
實施例3
一種短直鏈淀粉-胰島素納米復合物，所述納米復合物通過如下步驟制得：
(1)制備短直鏈淀粉：配制質量百分比為15％的蠟質玉米淀粉乳，100℃水浴30min使之完全糊化，隨后降溫至58℃，向其中加入100u/ml的普魯蘭酶，酶解6h，離心，滅酶，凍干得短直鏈淀粉；
(2)制備短直鏈淀粉溶液：稱取0.1g步驟(1)制得的短直鏈淀粉加入到10ml去離子水中，超聲5min，然后100℃水浴30min使之完全糊化，降至室溫，制得質量濃度為1％的短直鏈淀粉溶液；
(3)制備胰島素溶液：稱取0.01g胰島素粉末用10mlph＝2的鹽酸溶解，配制成1‰的胰島素溶液；
(4)制備短直鏈淀粉-胰島素納米復合物：將5ml步驟(3)制得的胰島素溶液逐滴加入到40ml步驟(2)制得的短直鏈淀粉溶液中，攪拌1h，在室溫下使其充分反應，然后將其放置4℃冰箱下回生處理36h，離心得到沉淀，將沉淀凍干即得短直鏈淀粉-胰島素納米復合物。本發明實施例所得納米復合物的x衍射圖如圖5a所示。
實施例4
一種短直鏈淀粉-胰島素-原花青素納米復合物的制備方法，其特征在于所述制備方法包括如下步驟：
(1)制備短直鏈淀粉：配制質量百分比為15％的蠟質玉米淀粉乳，100℃水浴30min使之完全糊化，隨后降溫至58℃，向其中加入100u/ml的普魯蘭酶，酶解6h，離心，滅酶，凍干得短直鏈淀粉；
(2)制備短直鏈淀粉溶液：稱取0.1g步驟(1)制得的短直鏈淀粉加入到10ml去離子水中，超聲5min，然后100℃水浴30min使之完全糊化，降至室溫，制得質量濃度為1％的短直鏈淀粉溶液；
(3)制備胰島素溶液：稱取0.01g胰島素粉末用10mlph＝2的鹽酸溶解，配制成1‰的胰島素溶液；
(4)制備原花青素溶液：稱取0.01g的原花青素粉末用10ml的去離子水溶解，配制成1‰的原花青素溶液；
(5)制備短直鏈淀粉-胰島素-原花青素納米復合物：將5ml步驟(3)制得的胰島素溶液、5ml步驟(4)制得的原花青素溶液同時逐滴加入到40ml步驟(2)制得的短直鏈淀粉溶液中，攪拌1h，在室溫下使其充分反應，然后將其放置4℃冰箱下回生處理36h，離心得到沉淀，將沉淀凍干即得短直鏈淀粉-胰島素-原花青素納米復合物。本發明實施例所得納米復合物的x衍射圖如圖5b所示。
實施例5
一種短直鏈淀粉-胰島素納米復合物，所述納米復合物通過如下步驟制得：
(1)制備短直鏈淀粉：配制質量百分比為15％的蠟質玉米淀粉乳，100℃水浴30min使之完全糊化，隨后降溫至58℃，向其中加入100u/ml的普魯蘭酶，酶解6h，離心，滅酶，凍干得短直鏈淀粉；
(2)制備短直鏈淀粉溶液：稱取0.1g步驟(1)制得的短直鏈淀粉加入到10ml去離子水中，超聲5min，然后100℃水浴30min使之完全糊化，降至室溫，制得質量濃度為1％的短直鏈淀粉溶液；
(3)制備胰島素溶液：稱取0.01g胰島素粉末用10mlph＝2的鹽酸溶解，配制成1‰的胰島素溶液；
(4)制備短直鏈淀粉-胰島素納米復合物：將5ml步驟(3)制得的胰島素溶液逐滴加入到40ml步驟(2)制得的短直鏈淀粉溶液中，攪拌1h，在室溫下使其充分反應，然后將其放置4℃冰箱下回生處理24h，離心得到沉淀，將沉淀凍干即得短直鏈淀粉-胰島素納米復合物。本發明實施例所得納米復合物的x-衍射圖如圖5a所示。
實施例6
一種短直鏈淀粉-胰島素-原花青素納米復合物的制備方法，其特征在于所述制備方法包括如下步驟：
(1)制備短直鏈淀粉：配制質量百分比為15％的蠟質玉米淀粉乳，100℃水浴30min使之完全糊化，隨后降溫至58℃，向其中加入100u/ml的普魯蘭酶，酶解6h，離心，滅酶，凍干得短直鏈淀粉；
(2)制備短直鏈淀粉溶液：稱取0.1g步驟(1)制得的短直鏈淀粉加入到10ml去離子水中，超聲5min，然后100℃水浴30min使之完全糊化，降至室溫，制得質量濃度為1％的短直鏈淀粉溶液；
(3)制備胰島素溶液：稱取0.01g胰島素粉末用10mlph＝2的鹽酸溶解，配制成1‰的胰島素溶液；
(4)制備原花青素溶液：稱取0.01g的原花青素粉末用10ml的去離子水溶解，配制成1‰的原花青素溶液；
(5)制備短直鏈淀粉-胰島素-原花青素納米復合物：將5ml步驟(3)制得的胰島素溶液、5ml步驟(4)制得的原花青素溶液同時逐滴加入到40ml步驟(2)制得的短直鏈淀粉溶液中，攪拌1h，在室溫下使其充分反應，然后將其放置4℃冰箱下回生處理24h，離心得到沉淀，將沉淀凍干即得短直鏈淀粉-胰島素-原花青素納米復合物。本發明實施例所得納米復合物的x衍射圖如圖5b所示。
實施例7
一種短直鏈淀粉-胰島素納米復合物，所述納米復合物通過如下步驟制得：
(1)制備短直鏈淀粉：配制質量百分比為15％的蠟質玉米淀粉乳，100℃水浴30min使之完全糊化，隨后降溫至58℃，向其中加入100u/ml的普魯蘭酶，酶解6h，離心，滅酶，凍干得短直鏈淀粉；
(2)制備短直鏈淀粉溶液：稱取0.1g步驟(1)制得的短直鏈淀粉加入到10ml去離子水中，超聲5min，然后100℃水浴30min使之完全糊化，降至室溫，制得質量濃度為1％的短直鏈淀粉溶液；
(3)制備胰島素溶液：稱取0.01g胰島素粉末用10mlph＝2的鹽酸溶解，配制成1‰的胰島素溶液；
(4)制備短直鏈淀粉-胰島素納米復合物：將5ml步驟(3)制得的胰島素溶液逐滴加入到40ml步驟(2)制得的短直鏈淀粉溶液中，攪拌1h，在室溫下使其充分反應，然后將其放置4℃冰箱下回生處理12h，離心得到沉淀，將沉淀凍干即得短直鏈淀粉-胰島素納米復合物。本發明實施例所得納米復合物的x衍射圖如圖5a所示。
實施例8
一種短直鏈淀粉-胰島素-原花青素納米復合物的制備方法，其特征在于所述制備方法包括如下步驟：
(1)制備短直鏈淀粉：配制質量百分比為15％的蠟質玉米淀粉乳，100℃水浴30min使之完全糊化，隨后降溫至58℃，向其中加入100u/ml的普魯蘭酶，酶解6h，離心，滅酶，凍干得短直鏈淀粉；
(2)制備短直鏈淀粉溶液：稱取0.1g步驟(1)制得的短直鏈淀粉加入到10ml去離子水中，超聲5min，然后100℃水浴30min使之完全糊化，降至室溫，制得質量濃度為1％的短直鏈淀粉溶液；
(3)制備胰島素溶液：稱取0.01g胰島素粉末用10mlph＝2的鹽酸溶解，配制成1‰的胰島素溶液；
(4)制備原花青素溶液：稱取0.01g的原花青素粉末用10ml的去離子水溶解，配制成1‰的原花青素溶液；
(5)制備短直鏈淀粉-胰島素-原花青素納米復合物：將5ml步驟(3)制得的胰島素溶液、5ml步驟(4)制得的原花青素溶液同時逐滴加入到40ml步驟(2)制得的短直鏈淀粉溶液中，攪拌1h，在室溫下使其充分反應，然后將其放置4℃冰箱下回生處理12h，離心得到沉淀，將沉淀凍干即得短直鏈淀粉-胰島素-原花青素納米復合物。發明實施例所得納米復合物的x衍射圖如圖5b所示。
實施例9
一種短直鏈淀粉-胰島素納米復合物，所述納米復合物通過如下步驟制得：
(1)制備短直鏈淀粉：配制質量百分比為15％的蠟質玉米淀粉乳，100℃水浴30min使之完全糊化，隨后降溫至58℃，向其中加入100u/ml的普魯蘭酶，酶解6h，離心，滅酶，凍干得短直鏈淀粉；
(2)制備短直鏈淀粉溶液：稱取0.5g步驟(1)制得的短直鏈淀粉加入到10ml去離子水中，超聲5min，然后100℃水浴30min使之完全糊化，降至室溫，制得質量濃度為5％的短直鏈淀粉溶液；
(3)制備胰島素溶液：稱取0.1g胰島素粉末用10mlph＝2的鹽酸溶解，配制成1％的胰島素溶液；
(4)制備短直鏈淀粉-胰島素納米復合物：將5ml步驟(3)制得的胰島素溶液逐滴加入到40ml步驟(2)制得的短直鏈淀粉溶液中，攪拌1h，在室溫下使其充分反應，然后將其放置4℃冰箱下回生處理12h，離心得到沉淀，將沉淀凍干即得短直鏈淀粉-胰島素納米復合物。
實施例10
一種短直鏈淀粉-胰島素-原花青素納米復合物的制備方法，其特征在于所述制備方法包括如下步驟：
(1)制備短直鏈淀粉：配制質量百分比為15％的蠟質玉米淀粉乳，100℃水浴30min使之完全糊化，隨后降溫至58℃，向其中加入100u/ml的普魯蘭酶，酶解6h，離心，滅酶，凍干得短直鏈淀粉；
(2)制備短直鏈淀粉溶液：稱取0.5g步驟(1)制得的短直鏈淀粉加入到10ml去離子水中，超聲5min，然后100℃水浴30min使之完全糊化，降至室溫，制得質量濃度為5％的短直鏈淀粉溶液；
(3)制備胰島素溶液：稱取0.1g胰島素粉末用10mlph＝2的鹽酸溶解，配制成1％的胰島素溶液；
(4)制備原花青素溶液：稱取0.1g的原花青素粉末用10ml的去離子水溶解，配制成1％的原花青素溶液；
(5)制備短直鏈淀粉-胰島素-原花青素納米復合物：將5ml步驟(3)制得的胰島素溶液、5ml步驟(4)制得的原花青素溶液同時逐滴加入到40ml步驟(2)制得的短直鏈淀粉溶液中，攪拌1h，在室溫下使其充分反應，然后將其放置4℃冰箱下回生處理12h，離心得到沉淀，將沉淀凍干即得短直鏈淀粉-胰島素-原花青素納米復合物。
實施例11
一種短直鏈淀粉-胰島素納米復合物，所述納米復合物通過如下步驟制得：
(1)制備短直鏈淀粉：配制質量百分比為15％的蠟質玉米淀粉乳，100℃水浴30min使之完全糊化，隨后降溫至58℃，向其中加入100u/ml的普魯蘭酶，酶解6h，離心，滅酶，凍干得短直鏈淀粉；
(2)制備短直鏈淀粉溶液：稱取1g步驟(1)制得的短直鏈淀粉加入到10ml去離子水中，超聲5min，然后100℃水浴30min使之完全糊化，降至室溫，制得質量濃度為10％的短直鏈淀粉溶液；
(3)制備胰島素溶液：稱取0.05g胰島素粉末用10mlph＝2的鹽酸溶解，配制成0.5％的胰島素溶液；
(4)制備短直鏈淀粉-胰島素納米復合物：將5ml步驟(3)制得的胰島素溶液逐滴加入到40ml步驟(2)制得的短直鏈淀粉溶液中，攪拌1h，在室溫下使其充分反應，然后將其放置4℃冰箱下回生處理48h，離心得到沉淀，將沉淀凍干即得短直鏈淀粉-胰島素納米復合物。
實施例12
一種短直鏈淀粉-胰島素-原花青素納米復合物的制備方法，其特征在于所述制備方法包括如下步驟：
(1)制備短直鏈淀粉：配制質量百分比為15％的蠟質玉米淀粉乳，100℃水浴30min使之完全糊化，隨后降溫至58℃，向其中加入100u/ml的普魯蘭酶，酶解6h，離心，滅酶，凍干得短直鏈淀粉；
(2)制備短直鏈淀粉溶液：稱取1g步驟(1)制得的短直鏈淀粉加入到10ml去離子水中，超聲5min，然后100℃水浴30min使之完全糊化，降至室溫，制得質量濃度為10％的短直鏈淀粉溶液；
(3)制備胰島素溶液：稱取0.05g胰島素粉末用10mlph＝2的鹽酸溶解，配制成0.5％的胰島素溶液；
(4)制備原花青素溶液：稱取0.05g的原花青素粉末用10ml的去離子水溶解，配制成0.5％的原花青素溶液；
(5)制備短直鏈淀粉-胰島素-原花青素納米復合物：將5ml步驟(3)制得的胰島素溶液、5ml步驟(4)制得的原花青素溶液同時逐滴加入到40ml步驟(2)制得的短直鏈淀粉溶液中，攪拌1h，在室溫下使其充分反應，然后將其放置4℃冰箱下回生處理48h，離心得到沉淀，將沉淀凍干即得短直鏈淀粉-胰島素-原花青素納米復合物。
測試例：
1、tem
將本發明實施例1、2制得的納米復合物分散在水中，用碳膜蘸一滴納米復合物的懸浮液，真空冷凍干燥，然后用于透射電鏡觀察，透射電鏡圖分別如圖1a、圖1b所示；粒徑圖如圖1c、圖1d所示。
從圖1a、c可以看出，用短直鏈淀粉包埋胰島素形成的短直鏈-胰島素復合物的粒徑基本分布在60-200nm之間，納米復合物呈球形且分布比較均勻，不聚集；由圖1b、d可以看出短直鏈淀粉-胰島素-原花青素形成的納米顆粒是球形的，且有聚集的情況，這主要是由于原花青素起到了交聯劑的作用。
2、熒光圖譜
使用光程路徑1cm，體積3.0ml石英池，胰島素濃度固定在1mg/ml，向其中滴加濃度為0，2，4，6，8，10的短直鏈淀粉，等體積混合5分鐘后在25℃條件下測量胰島素熒光光譜；固定胰島素濃度1mg/ml，短直鏈淀粉濃度10mg/ml，向其中滴加濃度為0，0.2，0.4，0.6，0.8，1mg/ml的原花青素，激發波長為278nm，掃描范圍是300-450nm，激發和發射帶寬均為5.0nm，并記錄掃描數據。所得熒光圖譜如圖2所示。
由圖2可以看出，隨著體系中短直鏈淀粉濃度逐漸增加，短直鏈-胰島素復合物峰強逐漸降低；當在短直鏈-胰島素復合物中添加原花青素時，復合物峰強逐漸降低，并出現藍移現象，表明胰島素不僅能與短直鏈發生相互作用形成復合物，而且能與原花青素和短直鏈淀粉形成二元復合物。
3、同步熒光圖譜
同步熒光光譜是分別固定激發和發射波長間距為δλ＝30同步掃描激發和發射光譜所得。
由圖3可以看出，隨著體系中短直鏈淀粉濃度逐漸增加，峰強度逐漸降低，且峰的位置發生紅移，表面酪氨酸所處的微環境發生改變，說明短直鏈淀粉、原花青素、胰島素能在混合的過程中發生相互作用形成納米復合物。
4、共振光散射圖譜
共振光散射光譜是在220～800nm范圍內以λex＝λem(即δλ＝0)方式進行同步掃描所得。
由圖4可以看出，隨著體系中短直鏈淀粉濃度增加，體系共振光強度逐漸增加，說明短直鏈淀粉、胰島素能在混合的過程中形成復合物，并且隨著短直鏈淀粉濃度的增大，胰島素與短直鏈之間的結合越來越多。隨著體系中原花青素濃度增加，體系共振光強度峰逐漸增加，說明短直鏈淀粉、原花青素、胰島素能在混合的過程中形成二元復合物。
5、x衍射光譜
將本發明實施例1-8制得的納米復合物用x射線衍射儀檢測，測試條件為：特征射線cu-kα，石墨單色器，管壓為40.0kv，電流100ma，掃描速率為1°/min，測量角度2θ＝4–40°，步寬為0.02°，發射狹峰為1°，防發射狹峰為1°，接收狹峰為0.3mm。測試結果如圖5所示。
由圖5可以看出，胰島素在2θ<20°的范圍內呈現出許多結晶峰，表明胰島素為有晶體和無定形的混合物，在復合物的衍射圖譜中，胰島素的晶體衍射峰幾乎完全消失，這表明在形成復合物過程中，可能處于一種高度分散的無定形狀態，胰島素自身的晶體特征被抑制，證明了短直鏈淀粉-胰島素/短直鏈淀粉-胰島素-原花青素納米復合物的形成。隨著回生時間的增加，納米復合物的x-衍射峰逐漸增加，說明納米復合物的結晶度增加，這可能是由于延長了回生時間，淀粉鏈在回生過程中重組更加完善。
6、包埋率
將本發明實施例1-8所得的納米復合物于12000rpm/min離心30min，收集上清液，利用考馬斯亮藍法在595nm測定溶液吸光值a595，根據標曲測得上清中胰島素含量，測試結果如圖6所示。
由圖6可以看出，隨著短直鏈的回生，短直鏈淀粉-胰島素的最大包埋率是50.9％，短直鏈淀粉-胰島素-原花青素的最大包埋率是70.2％。
7、體內降血糖效果
取禁食24h的雄性健康大鼠數十只，按40mg/kg劑量尾靜脈注射3％(w/v)四氧嘧啶溶液，正常飼養72h后禁食，尾靜脈取血0.2ml，血液凝固后，12,000rpm離心4min。取血清20μl，葡萄糖氧化酶法測定血糖值，血糖值高于16.67mmol/l的為高血糖模型大鼠。
糖尿病大鼠12只，分為三組，每組4只，實驗前禁食12h，可自由飲水，稱重，灌胃給藥。第一組注射5iu/kg的胰島素，第二組和第三組分別給予實施例1短直鏈-胰島素復合物(100iu/kg)和實施例2短直鏈-胰島素-原花青素(100iu/kg)的混懸液，于0h，0.5h，1h，2h，3h，4h，5h，6h，7h，8h尾靜脈取血0.2ml，血液凝固后，12000rpm離心4min，精密量取血清20μl，葡萄糖氧化酶法測定血糖值。測試結果分別如圖7、表1所示。
由圖7和表1可看出，相對于注射胰島素溶液，短直鏈淀粉-胰島素納米復合物的生物利用率能夠達到4.59％，短直鏈-胰島素-原花青素納米復合物的生物利用率能夠達到6.98％。
表1
注：aac0→8h表示0至8h時間內經計算得到血糖曲線上面積。
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