專利名稱:富含肌醇和總黃酮的蕎麥提取物、制備方法及其用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及藥物保健技術領域：
。具體涉及一種具有預防、治療糖尿病、高血壓、高血脂、多囊卵巢綜合癥(PC0Q、機體胰島素抵抗所致疾病的蕎麥提取物產品。
背景技術：
我國民間謗語就有“作物種類多，作物蕎為大”、“五谷蕎為首”的說法。我國古籍中關于蕎麥防病治病的記載有很多《齊民要術》有“頭風畏冷者，以面湯和粉為餅，更令罨出汗，雖數十年亦愈”的記載；《圖經本草》有“實腸胃，益氣力，，的記載；《本草綱目》有“降氣寬腸磨積滯，消熱腫風痛，除白濁血滯，脾積泄瀉”的論述，記載蕎麥性味苦、平、寒，有益氣力、續精神、利耳目、降氣寬腸健胃的作用；《植物名實圖考》稱蕎麥“性能消積，俗呼凈腸草”。蕎麥能降血壓、降血脂、降血糖，改善微循環等作用，又被稱作“三降”食品。
蕎麥是屬于蓼科(Polygonaceae)蕎麥屬(Fagopyrum)，主要有甜蕎(Fagopyrum esculentum Moench，也口L]普通養麥)禾口苦養(Fagopyrum tararicum Gaerth，也口L]軸革旦養麥)兩個栽培品種。蕎麥的生產國有中國、俄羅斯、日本、波蘭、法國、加拿大、美國等。我國主要分布在西北、華北、西南和東北各省，湖北、湖南、江西也有較多的種植區。我國常年種植面積在270萬公頃，占世界總面積的55%，年產量約263萬噸左右，總產量居世界第二。
蕎麥含有多種營養成分，如高活性蛋白、維生素、高活性膳食纖維、淀粉、脂肪酸含量較高且結構合理，礦物質含量也十分豐富，并且含有其它禾谷類糧食所沒有的葉綠素和蘆丁。同時，蕎麥富含生物類黃酮(Flavonoid)、糖醇(Fagopyritol)、花青素 (Anthocyahidin)等功能成分。這些成分結構明確，含量豐富，在抗腫瘤、抗氧化和清除自由基、防治心腦血管疾病，有效調節血糖、血脂、血壓等方面效果顯著。蕎麥獨特的營養保健功能使之成為現代臨床營養學最具影響力的糧食資源之一。
黃酮類化合物屬植物次生代謝產物，蕎麥含量較高的類黃酮物質是蘆丁、槲皮素、 桑色素、茨菲醇等。蕎麥中黃酮對心腦血管具有較強的調節作用。研究發現，蕎麥中的黃酮能夠軟化血管，改善微循環，清熱解毒、活血化瘀、拔毒生肌、益氣提神，有降血糖和尿糖的作用。黃酮還有擴張血管的作用，能維持毛細血管的抵抗力，降低其通透性及脆性，促進細胞增生和防止血細胞的凝集，還有降血脂、擴張冠狀動脈、增強冠狀動脈血流量等作用。
胰島素抵抗(IR)是指各種原因引起機體對生理水平的胰島素失去敏感性，需要高水平胰島素才能控制血糖的現象。從頂的發生條件分析，可分為生理性和病理性頂。
生理性胰島素抵抗在生理情況下，頂是體內一種自我保護機制。這種機制對于保證大腦細胞能量供應是必須的。
病理性胰島素抵抗病理情況下，引起生理性頂的因素(FFA、糖皮質激素及炎癥介質)長期處于高水平，一旦監時性頂變成持久性頂，造成病理變化，稱之為病理性IR。此時機體對生理水平的胰島素失去敏感性，并需要高水平的胰島素才能控制血糖，并由此導致一系列疾病的產生。
胰島素通過與細胞膜表面的特異性受體結合發揮其生物學作用。其生物學作用多種多樣，但最主要的作用包括刺激細胞吸收葡萄糖，促進毛細血管擴張而改善微循環，誘導 TG合成并促進脂肪細胞儲存能量。這些作用都依賴于胰島素受體信號通路在體內暢通無阻。這條信號通路由多種蛋白激酶和配體蛋白組成，胰島素的信號依次由受體往下傳遞。關于頂的機制，存在多種學說，包括內質網應激、氧化應激、炎癥、線粒體功能障礙、脂肪肝、 低脂聯素血癥及高胰島素血癥等。
脂肪細胞功能障礙是肥胖條件下頂發生的根源。脂肪細胞的功能分兩種，一是儲存TG，二是分泌激素或細胞因子，如瘦素、脂聯素及炎癥介質。脂肪組織在肥胖條件下過度增生，導致其內部不斷重建，以滿足組織厚度增加帶來的新需要，如細胞間質重組、細胞體積增大、毛細血管延伸等。這種重建過程有一定限度，當達到極限時，脂肪組織會因微循環不足而產生缺氧。在缺氧反應中，脂肪細胞失去儲存脂肪的能力，產生脂聯素的能力降低， 同時引起巨噬細胞浸潤及慢性炎癥反應，還可導致內質網應激和氧化應激。這些變化都可促進頂的產生。肥胖發展到一定階段，脂肪組織的儲存功能達到滿負荷，導致脂肪在血液及其他非脂肪組織或器官中堆積。過多的脂肪酸會通過中間產物(如DAG或神經胺)引起 IR。
不同個體的脂肪組織在肥胖時的重建能力不同，重建能力強的個體肥胖時較晚甚至不發生脂肪組織功能障礙，不易出現頂；重建能力差的個體，障礙發生較早，易出現頂。 這就是頂存在個體差異的原因之一。此外，脂肪在體內的分布也是個體差異的原因。總之， 個體差異由遺傳背景決定。
由于胰島素具有廣泛的生物作用，因此在發生胰島素抵抗時，除了葡萄糖代謝會發生改變外，脂質、蛋白質、水和電解質的代謝也會發生變化。近年來發現II型糖尿病、高血壓、高血脂、PC0S、高甘油三酯血癥、低高密度脂蛋白膽固醇血癥、腹型肥胖、動脈粥樣硬化、冠心病、腦血管病、糖耐量異常、高尿酸血癥、纖溶功能異常、微量白蛋白尿以及瘦素抵抗等均與胰島素抵抗有關。因為這些疾病大多為糖、脂代謝紊亂，目前許多學者稱其為胰島素抵抗綜合征或代謝綜合征(metabolic syndrome)。
美國科學家研究發現，正常人血液中及尿液中含有一定濃度的D-手性肌醇，而在 II型糖尿病人中則幾乎檢測不到，因此，提示D-手性肌醇在胰島素作用的信號傳遞過程中扮演了重要角色。2003年，加拿大科學家在《農業與食品化學》雜志上公布了一項研究成果， 他們發現蕎麥提取物可以顯著的降低糖尿病大鼠的血糖，并推測其中的功效分子是一種手性INOSITOL類小分子。
一直以來，科學家的研究主要集中于蕎麥總黃酮，將其作為普通營養補充劑為研究目的，隨著中國書公開號CN1442399公開了一種將蕎麥中的INOSITOL衍生物轉化為INOSITOL單體的方法，越來越多的對蕎麥的研究傾向于INOSITOL，利用其胰島素增敏劑樣作用，應用于解決機體內的胰島素抵抗類疾病。但由于通過蕎麥內INOSITOL衍生物轉化為INOSITOL產品得率較低，以及通過化學方法合成INOSITOL條件要求高，生產成本太高致使無法大規模生產。且大部分研究僅對INOSITOL和蕎麥總黃酮單獨進行研究，沒有綜合考慮這兩種功效成分對于解決胰島素抵抗及相關疾病的協同作用研究。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種蕎麥提取物，它在制備過程中綜合考慮INOSITOL與蕎麥總黃酮這兩種協同功效成分，其中含有8-25 % INOSITOL和30-50 %的總黃酮。含有此比例的INOSITOL與蕎麥總黃酮的蕎麥提取物與高純度的INOSITOL、蕎麥總黃酮相同劑量相比，對于解決胰島素抵抗及相關疾病具有更好的協同作用。
更佳的功效成分配比的蕎麥提取物為10-20%的INOSITOL和35% -45%的總黃酮；
最佳的功效成分配比的蕎麥提取物為15%的INOSITOL和40%的總黃酮；
為了制備上述發明所得的蕎麥提取物，本發明提供如下制備方法取得一定量的蕎麥種子，加入酶激活劑浸泡處理后，在一定的條件下發芽得發芽蕎麥種子后，用乙醇提取得蕎麥種子提取液后，加入0. 5-30ppm的高分子殼聚糖作為絮凝劑，過濾得過濾液后上大孔吸附樹脂如AB-8或聚酰胺樹脂后，用50-80%的乙醇洗脫，收集洗脫液后送干燥，得蕎麥提取物干粉。該方法包含有具體生產步驟如下
1.將成熟蕎麥種子在酶激活劑浸泡充分后，發芽；
2.收集萌芽后的蕎麥種子，加入一定量的乙醇，粉碎，回流提取后，過濾，收集蕎麥種子提取液；
3.將重量比為0. 5-30ppm的高分子殼聚糖作為絮凝劑加入蕎麥種子提取液中，攪拌均勻后，靜置吸附；
4.過濾去除絮凝劑，過濾液上柱層析分離，層析柱為大孔吸附樹脂，如AB-8型大孔吸附樹脂或聚酰胺，用50-80%的乙醇進行洗脫，收集洗脫液，濃縮回收乙醇，送干燥，得上述蕎麥提取物。
按此生產工藝制備的蕎麥提取物含有重量比為8-25% INOSITOL和30_50%的總黃酮。
本發明提供的蕎麥提取物可用于制備具有治療、預防機體胰島素抵抗所致疾病的藥品、保健食品、營養補充食品。
本發明人對蕎麥提取物進行了動物藥效學實驗研究，實驗結果表明蕎麥提取物能有效治療、預防胰島素抵抗綜合征如糖尿病、高血脂、高血壓、多囊卵巢綜合癥，且蕎麥提取物中的INOSITOL和總黃酮在此比例下表現出較好的協同作用。
本發明的蕎麥提取物可與各種藥學上可以接受的載體混合制成膠囊、懸浮物、口服液等劑型藥物組合物、保健食品。
具體實施方式
為了進一步理解本發明，以下將結合實施例對本發明做出詳細的、非限定性的說明。
實施例1
稱取100克成熟蕎麥種子，加入酶激活劑浸泡2小時后，取出于25士2°C，光照條件下萌芽；收集萌芽后的蕎麥種子，加入10倍量的60%藥用乙醇，粉碎后、沸騰回流提取3 小時，濾出提取液；加入重量比為IOppm的絮凝劑——高分子殼聚糖，攪拌后靜置3小時， 過濾，濾出液上層析柱分離，層析柱為AB-8型大孔吸附樹脂，洗脫液為55%乙醇，收集洗脫液，真空濃縮回收乙醇后，干燥得蕎麥提取物干粉。采用GC-MS檢測方法檢測INOSITOL含量，其中D-chiro-inositol含量為14. 1 % ,Myo-inositol含量為8. 3%;采用UV法檢測總黃酮含量為35.8%。
實施例2
稱取100克成熟蕎麥種子，加入酶激活劑浸泡2小時后，取出于25士2°C，光照條件下萌芽；收集萌芽后的蕎麥種子，加入10倍量的60%藥用乙醇，粉碎后、沸騰回流提取3小時，濾出提取液；加入重量比為3ppm的絮凝劑——高分子殼聚糖，攪拌后靜置3小時，過濾，濾出液上層析柱分離，層析柱為聚酰胺，洗脫液為50 %乙醇，收集洗脫液，真空濃縮回收乙醇后，干燥得蕎麥提取物干粉。采用GC-MS檢測方法檢測INOSITOL含量，其中 D-chiro-inositol含量為8. 6%,Myo-inositol含量為8. 7% ；采用UV法檢測總黃酮含量為 32. 8%。
實施例3
稱取100克成熟蕎麥種子，加入酶激活劑浸泡2小時后，取出于25士2°C，光照條件下萌芽；收集萌芽后的蕎麥種子，加入10倍量的60%藥用乙醇，粉碎后、沸騰回流提取 3小時，濾出提取液；加入重量比為30ppm的絮凝劑——高分子殼聚糖，攪拌后靜置2小時，過濾，濾出液上層析柱分離，層析柱為聚酰胺，洗脫液為80%乙醇，收集洗脫液，真空濃縮回收乙醇后，干燥得蕎麥提取物干粉。采用GC-MS檢測方法檢測INOSITOL含量，其中 D-chiro-inositol含量為19. 6% ,Myo-inositol含量為4. 8%;采用UV法檢測總黃酮含量為 40. 8%。
實施例4
稱取100克成熟蕎麥種子，加入酶激活劑浸泡2小時后，取出于25士2°C，光照條件下萌芽；收集萌芽后的蕎麥種子，加入10倍量的60%藥用乙醇，粉碎后、沸騰回流提取3 小時，濾出提取液；加入重量比為ISppm的絮凝劑——高分子殼聚糖，攪拌后靜置3小時， 過濾，濾出液上層析柱分離，層析柱為AB-8型大孔吸附樹脂，洗脫液為70%乙醇，收集洗脫液，真空濃縮回收乙醇后，干燥得蕎麥提取物干粉。采用GC-MS檢測方法檢測INOSITOL含量，其中D-chiro-inositol含量為13. 1 % ,Myo-inositol含量為6. 3%;采用UV法檢測總黃酮含量為45.8%。
實施例5
蕎麥提取物對胰島素抵抗大鼠胰島素敏感性的影響
方法用高脂脂飼料誘導的胰島素抵抗大鼠作為模型，用高胰島素-正葡萄糖鉗夾技術作為評價方法，選用蕎麥提取物作為實驗樣品，觀察對胰島素敏感性的影響。
1.材料與方法
1. 1實驗動物
Wistard 大鼠，雄性，4-5 周齡，體重 137_146g。
1. 2模型的建立與實驗分組
Wistard雄性大鼠80只適應性喂養2天后，模型組70只給予高脂飼料(每100克飼料總熱量為1900千焦，其中脂肪提供熱量占52%，蛋白質占15%，碳水化合物占33%脂肪主要為煉豬油)，對照組繼續給予普通飼料(每100克飼料總熱量為1554. 4千焦，其中脂肪提供熱量占12 %，蛋白質占19 %，碳水化合物占69 ，喂養10周后，模型組再隨機分為 7組，即①模型組10只(給予普通飼料)；②飲食控制組10只(普通飼料，模型組攝食量的 80%)；③羅格列酮組10只C3mg/kg體重/日灌胃，普通飼料)；④純D-chiro-inositol低劑量組10只(10mg/kg體重/日灌胃，普通飼料)；⑤純D-chiro-inositol高劑量組10只 (20mg/kg體重/日灌胃，普通飼料)；⑥蕎麥提取物(19. 6%的DCI和40. 8%總黃酮)低劑量組(50mg/kg體重/日灌胃，普通飼料)；⑦蕎麥提取物(19. 6%的DCI和40. 8%總黃酮) 高劑量組(100mg/kg體重/日灌胃，普通飼料)。治療各組連續給藥3周，正常對照組、模型組和飲食控制組分別以相應量的生理鹽水連續灌胃三周。
實驗用蕎麥提取物中含有19. 6%的DCI和40. 8%總黃酮。
1. 3高胰島素一正葡萄糖鉗夾試驗每組取一只大鼠開始分批隔夜禁食10小時， 稱體重，尾靜脈取血測基礎血糖值，然后以10%水合氯醛(0.3mL/kg)進行腹腔麻醉。分離大鼠右側頸總動脈和左側頸內或頸外靜脈，75IU/mL肝素抗凝，進行插管(美國產硬膜外麻醉用硅膠導管，內徑0. 6mm,外徑Imm)，動脈插管以取血測血糖及穩態胰島素，靜脈插管以接微量注射泵以輸注胰島素及葡萄糖。插管完畢后，將大鼠靜置30分鐘后開始試驗，開始時先恒定輸注短效豬胰島素(輸注速率為8mu/kg ^irT1,臨用時胰島素用10. 5%牛血清白蛋白稀釋)，每5或10分鐘從左頸動脈取血測血糖i次，當血糖下降至基礎血糖+2. Ommol/ L時，開始小量輸注20%葡萄糖溶液，并根據血糖水平不斷調整葡萄糖輸注率，使血糖逐漸達到穩態。將所有大鼠衄糖都鉗夾在基礎血糖土 0. 2mmol/L水平，記錄穩態下連續30分鐘內的葡萄糖輸注率，取均值。
1. 4統計方法
計數資料以均數士標準差表示，組間顯著性差異采用t檢驗。
1. 5實驗結果
各組葡萄糖輸注率(mg/kg. min)檢測結果如下
權利要求
1.一種蕎麥提取物，其特征在于含有重量比為8-25%肌醇和30-50%的總黃酮，該提取物的通過以下方法制備的1)將成熟蕎麥種子在酶激活劑浸泡充分后，發芽；2)收集萌芽后的蕎麥種子，加入一定量的乙醇，粉碎，回流提取后，過濾，收集蕎麥種子提取液；3)將重量比為0.5-30ppm的高分子殼聚糖作為絮凝劑加入蕎麥種子提取液中，攪拌均勻后，靜置吸附；4)過濾去除絮凝劑，過濾液上柱層析分離，層析柱為大孔吸附樹脂，用50-80%的乙醇進行洗脫，收集洗脫液，濃縮回收乙醇，送干燥，得上述蕎麥提取物。
2.如權利要求
1所述的蕎麥提取物，其特征在于含有重量比為10-20%的肌醇和 35% -45%的總黃酮。
3.如權利要求
1所述的蕎麥提取物，其特征于含有重量比為15%的肌醇和40%的總黃酮。
4.一種如權利要求
1所述的蕎麥提取物的制備方法，其特征在于該方法為1)將成熟蕎麥種子在酶激活劑浸泡充分后，發芽；2)收集萌芽后的蕎麥種子，加入一定量的乙醇，粉碎，回流提取后，過濾，收集蕎麥種子提取液；3)將重量比為0.5-30ppm的高分子殼聚糖作為絮凝劑加入蕎麥種子提取液中，攪拌均勻后，靜置吸附；4)過濾去除絮凝劑，過濾液上柱層析分離，層析柱為大孔吸附樹脂，用50-80%的乙醇進行洗脫，收集洗脫液，濃縮回收乙醇，送干燥，得上述蕎麥提取物。
5.如權利要求
4所述的蕎麥提取物的制備方法，其特征在于所述的大孔吸附樹脂的類型為AB-8型大孔吸附樹脂或者聚酰胺型大孔樹脂。
6.如權利要求
1所述的蕎麥提取物在制備治療機體胰島素抵抗所致疾病的藥物的用途。
7.如權利要求
1所述的蕎麥提取物在制備治療機體胰島素抵抗所致疾病的保健食品中的用途。
專利摘要
本發明涉及一種富含INOSITOL和總黃酮的蕎麥提取物及其制備方法。所述的制備方法，步驟為1)將成熟蕎麥種子用酶激活劑浸泡充分后發芽；2)收集萌芽后的蕎麥種子，加入一定量的乙醇，粉碎，回流提取后過濾，收集種子提取液；3)將絮凝劑加入蕎麥種子提取液中，攪拌均勻后，靜置吸附；4)過濾去除絮凝劑，過濾液上柱層析分離，層析柱為大孔吸附樹脂，洗脫，收集洗脫液，濃縮回收乙醇，送干燥，得蕎麥提取物。該蕎麥提取物有效濃縮了INOSITOL和總黃酮類物質，協同作用使蕎麥提取物具有了制備具有治療、預防或者輔助治療糖尿病、高血壓、高血脂、PCOS等機體胰島素抵抗所致疾病的食品、保健食品、藥物中的用途。
文檔編號A61P3/06GKCN101904907 B發布類型授權 專利申請號CN 200910057368
公開日2012年4月18日 申請日期2009年6月3日
發明者劉華奇, 吳芬宏, 夏濤, 陳丹青 申請人:上海諾金科生物科技有限公司導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan專利引用 (6), 非專利引用 (3),