腦信號蛋白-4d結合分子在促進中風后的神經發生中的用圖
【專利說明】腦信號蛋白-4D結合分子在促進中風后的神經發生中的用 途
[0001] 相關申請的相互參引
[0002] 本申請要求2013年3月15日提交的美國非臨時申請No. 13/842,523以及2012 年5月11日提交的美國臨時申請No. 61/646, 119的優先權，各申請的內容以引證的方式整 體納入本文。
[0003] 電子方式提交的序列表參引
[0004] 隨本申請提交的以 ASCII text 文件（文件名："1843072PC01_SequenceListing· tXt"， 大小 7, 562 字節； 生成日期 ：2013 年 5 月 10 日） 電子提交的序列表的內容通過引證 的方式整體納入本文。
【背景技術】
[0005] 腦信號蛋白4D(SEMA4D)，也稱為⑶100,是屬于腦信號蛋白基因家族的一種跨膜 蛋白（例如，SEQ ID N0:1(人）；SEQ ID N0:2(小鼠））。SEMA4D以同型二聚體在細胞 表面上表達，但在細胞活化時，SEMA4D可以經由蛋白水解裂解而從細胞表面釋放，以產生 sSEMA4D，其為該蛋白質的一種可溶形式，也是具有生物活性的。參見Suzuki et al, Nature Rev. Immunol. 5:159-167 (2003) ；Kikutani et al, Nature Immunol. 9:17-23 (2008)〇
[0006] SEMA4D以高水平在淋巴器官（包括脾、胸腺和淋巴結）以及非淋巴器官（如腦、心 臟、和腎臟）中表達。在淋巴器官中，SEMA4D大量表達于靜息T細胞，但僅微弱表達在靜息 B細胞和抗原呈遞細胞（APC)，例如樹突細胞（DC)中。但是，其在這些細胞中的表達在通過 各種刺激活化后被上調。可溶性SEMA4D從免疫細胞的釋放也被細胞活化增加。
[0007] SEMA4D與自身免疫性脫髓鞘疾病、如多發性硬化癥和某些癌癥的進展有關。哺乳 動物神經系統從損傷后的崩潰至完全再生是一個重大的臨床問題。由于中風或腦部的外 傷，以及神經變性疾病如阿爾茨海默氏病所導致的神經損傷的結果，是死亡和殘疾的首要 原因。雖然SEMA4D通過其受體（如神經叢蛋白-BI)的信號轉導對血管生成的作用是已知 的，但SEMA4D信號轉導對于促進神經再生的作用尚不清楚。因此，仍然需要提供一種方案 來解決對于神經再生治療手段的未滿足的醫療需要。
【發明內容】
[0008] 本文公開了使用腦信號蛋白-4D結合分子用于促進神經再生的方法。本文給出了 證據證明SEMA4D會損害神經細胞再生的能力。根據本文中示例的本發明的方面，提供了促 進表現出至少一種中樞神經系統病癥癥狀的患者的神經組織中神經發生的方法，該方法包 括向有需要的受試者給藥有效量的分離的結合分子，其特異性地結合至和/或抑制腦信號 蛋白-4D(SEMA4D)。
[0009] 根據本文中示例的本發明的方面，提供了一種增加患有中樞神經系統病癥人受試 者中祖細胞數量的方法，包括向受試者給藥有效量的分離的結合分子，其特異性地結合至 腦信號蛋白-4D(SEMA4D)，其中與SEMA4D的結合起到增加祖細胞數量的作用。
[0010] 根據本文中示例的本發明的方面，提供了一種促進表現出至少一種中樞神經系統 病癥癥狀的患者中神經組織神經再生的方法，包括向受試者給藥有效量的分離的結合分 子，其特異性地結合SEMA4D，其中所述結合分子競爭性地抑制選自VX15/2503或67的參比 單克隆抗體與SEMA4D的特異性結合。
[0011] 根據本文中示例的本發明的方面，提供了一種緩解患者的中樞神經系統的疾病或 病癥（例如中風）的癥狀的方法，包括向受試者給藥有效量的分離的結合分子，其特異性地 結合至和/或抑制腦信號蛋白-4D(SEMA4D)，其中與SEMA4D的結合起到緩解所述癥狀的作 用。
[0012] 附圖簡要說明
[0013] 圖1 :示意性地示出了實施例中描述的大腦中動脈（MCA)阻塞的實驗方案。
[0014] 圖2A-2E :示出了在大腦中動脈阻塞（MCAO)后，用同型對照（"對照IgG"，2A和 2C)或MAb 67-2 ( "抗-Sema4D-Ab"，2B和2D)治療的如2E中所示區域的巢蛋白/Sox2被 染色的腦樣品中神經干細胞/祖細胞。腦樣品在MCAO之后的7天制備。
[0015] 圖3A-3D :示出了用同型對照（"對照IgG"）或MAb 67-2( "抗-SEMA4D"）處理的 MCAO小鼠腦組織的（A) RT-PCR的mRNA表達，以及（B) Sox2、（C)巢蛋白和（D) PLP相對于肌 動蛋白對照的定量分析。腦組織在MCAO后7天分離。巢蛋白和Sox2是神經干前體細胞的 標志物。PLP是髓鞘形成的標志物。
[0016] 圖4A-4D :示出了用同型對照或MAb 67-2處理的MCAO小鼠中，大腦和紋狀體在經 處理的和未處理的半球體中的相對總體積。測量在MCAO之后的30天進行。圖4A-4B示出 了用NeuN染色的大腦切片，其來自（A)I種代表性的同型對照（"對照IgG"）小鼠，和（B)I 種代表性的用抗-SEMA4D抗體處理的（"抗-SEMA4D"）小鼠。腦體積由紋狀體（實線）和 半球體（虛線）的體積表示。圖4C-4D分別示出了同型對照（"IgG"）小鼠和抗SEMA4D抗 體處理的（"SEMA"）小鼠的紋狀體與半球體積的計算比例（L/R)。
[0017] 圖5A-5B示出MCAO后30天，成熟神經細胞標志物NeuN在⑷MAb 67-2( "Sema4D-Ab"）或⑶同型對照（"對照IgG"）的MCAO小鼠中的表達情況。腦梗死 的邊緣部分的紋狀體用箭頭標記。
[0018] 圖6A-C示出了在MCAO后的第30天，在MCAO小鼠和用同型對照（" IgG"）或Mb 67-2( "SEMA4D"）處理之后的小鼠，或用假手術治療的（"SHAM"）小鼠在明亮和黑暗狀態 下在敞箱實驗中的活動能力。圖6A-6B分別示出了在明亮和黑暗狀態下的活動能力。圖6C 示出了活動能力的明亮/黑暗狀態比（D/L)。
[0019] 圖7示出了實施例6中描述的實驗方案的示意圖。
【具體實施方式】
[0020] I.定義
[0021] 應理解，術語"一個"或"一種"實體是指一種或多種所述的實體；例如"一種 抗-SEMA4D抗體"應理解為代表一種或多種抗-SEMA4D抗體。因此，在本文中術語"一個"（或 "一種""一種或多種"以及"至少一種"可以互換使用。
[0022] 術語"神經發生"在本文中定義為神經細胞在體內或體外的增殖、分化、迀移和/ 或存活。在不同的實施方案中，神經細胞是成人、胎兒、或胚胎的神經干細胞或細胞群。細 胞可以位于動物或人類的中樞神經系統或其他地方。細胞也可以位于組織、例如神經組織 中。在一些實施方案中，神經細胞是成人、胎兒、或胚胎的祖細胞或細胞群，或者包含干細胞 和祖細胞的細胞群。神經細胞包括所有腦干細胞、所有腦祖細胞，以及所有腦前體細胞。神 經發生包括在正常發育期間發生的神經發生，以及在疾病、損傷或治療性干預（例如本文 中所描述的治療）之后發生的神經再生。
[0023] 術語"神經細胞"、"干細胞"、"神經干細胞"、"前體細胞"、"神經干/前體細胞 (NSPC) "或"神經干/祖細胞（NSPC) "可以互換使用，是指能夠自我更新和分化成神經元、 星形膠質細胞和/或少突膠質細胞的未分化細胞。
[0024] 本文中使用的術語"祖細胞"（例如神經祖細胞）是指來自于干細胞但本身不是干 細胞的細胞。一些祖細胞可以產生能夠分化成多于一種細胞類型的后代。神經祖細胞包括 神經元組細胞，其產生神經元，以及神經膠質祖細胞，其產生星形膠質細胞和/或少突膠質 細胞。
[