藤黃酸季銨化殼聚糖納米粒的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于藥品技術領域，尤其涉及一種藤黃酸季銨化殼聚糖納米粒的制備方法。
【背景技術】
[0002]藤黃酸為植物藤黃的主要成分，具有良好的抗腫瘤作用，其水溶性較差，限制了其臨床應用。文獻報道藤黃酸與L-精氨酸形成鹽、加入聚氧乙烯麻油(cremophorEL)或進行結構改造達到增溶的目的。納米粒具有穩定、載藥量高的特點，粒徑較小，可以避免被網狀內皮系統細胞攝取實現在血液中長循環，并通過腫瘤部位通透性增強滯留效應最終被動靶向到腫瘤部位。水溶性季銨化殼聚糖(TMC)是天然聚合物殼聚糖的衍生化產物，可作為藥物和基因載體。由于TMC具有正電性，GA結構中具有帶負電的羧基。
[0003]因此筆者設想可將TMC與GA通過電性作用形成水溶性納米粒，增加藤黃酸的水溶性，提高GA在化學治療中的有效性與安全性。
[0004]現有的藤黃酸季銨化殼聚糖納米粒的制備方法，有效性低且安全性差。
【發明內容】
[0005]本發明就是針對上述問題，提供一種操作簡單，有效性高且安全性高的一種藤黃酸季銨化殼聚糖納米粒的制備方法。
[0006]為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案。
[0007]藤黃酸季銨化殼聚糖納米粒的制備方法，包括下步驟。
[0008](1)取殼聚糖原料(70k, 12g)，加入1-甲基-2-吡咯烷酮240mL,碘甲烷70mL,碘化鈉31.2g和15%氫氧化鈉溶液66mL，攪拌，在60°C水浴中回流lh。反應完畢，將反應產物傾入300mL乙醇和200mL乙醚的混和溶劑中，沉淀，離心，沉淀物用乙醚洗滌2次，然后再加入1-甲基-2-吡咯烷酮260L，加熱到40°C，除去乙醚，冷卻到室溫后加入碘甲烷70mL，碘化鈉31.2和15%氫氧化鈉溶液66mL，快速攪拌，60°C水浴加熱30min，再加入碘甲烷12mL，2.4gNaOH,繼續反應lh，反應結束后，沉淀，離心，沉淀用乙醚洗滌2次，將產物倒入10%NaC1240mL中交換I 一，去離子水透析3d，凍干。得淡黃色絮狀的水溶性TMC。
[0009](2)采用混合溶劑法制備載藥納米粒。14mgGA與lOmgTMC分別溶于0.56mL 二甲亞砜和1.67mL蒸餾水中，兩溶液在磁力攪拌下混合裝入透析袋，封口后在蒸餾水中透析，所得溶液經3000r/min離心后過0.451^微孔濾膜。所得樣品在4°C下避光保存。
[0010](3)標準曲線的建立:將藤黃酸標準品用色譜甲醇溶解制成1.084mg/mL的儲備液，分別吸取上述儲備液和量瓶中，容量瓶中，以流動相定容的標準溶液，在上述的色譜條件下測定GA含量，記錄色譜峰面積A，繪制標準曲線。
[0011](4)粒徑、電位與形態:納米粒溶液經過0.45Mm微孔濾膜后，在25°C，633nm的He-Ne光下，使用Zetasizer3000H粒徑測定儀測定載藥納米粒的粒徑。將過0.22Mm膜的納米粒溶液滴加到銅載網上，干燥后使用透射電鏡JEM-200CX在200kV下觀察。
[0012]作為一種優選方案，以殼聚糖為原料采用兩步季銨化合成季銨化殼聚糖(TMC)，用FT-1R和1HNMR表征其結構并計算季銨化程度(DQ)。通過混合溶劑法制備藤黃酸(GA)TMC納米粒，采用HPLC測定載藥量與包封產率。
[0013]本發明有益效果。
[0014]本發明本文粒徑、電位與形態:粒徑對納米藥物傳遞系統的性質具有重要的影響。納米粒的平均粒徑能影響其被動革G向以及所包裹藥物的傳遞，納米粒粒徑在10~200nm之間能減少被網狀內皮系統攝取進入體循環的可能性，這也是納米粒藥物遞送系統具有一些獨特性質的結構基礎。經測定載藥納米粒的粒徑是98.24nm。從透射電鏡照片中可以看出載藥納米粒為粒徑lOOnm左右球體。電鏡結果與粒徑儀測定相符。是一種效果好且操作簡單的藤黃酸季銨化殼聚糖納米粒的制備方法。
【具體實施方式】
[0015]藤黃酸季銨化殼聚糖納米粒的制備方法，包括下步驟。
[0016](1)取殼聚糖原料(70k，12g)，加入1-甲基-2-吡咯烷酮240mL，碘甲烷70mL，碘化鈉31.2g和15%氫氧化鈉溶液66mL，攪拌，在60°C水浴中回流lh。反應完畢，將反應產物傾入300mL乙醇和200mL乙醚的混和溶劑中，沉淀，離心，沉淀物用乙醚洗滌2次，然后再加入1-甲基-2-吡咯烷酮260L，加熱到40°C，除去乙醚，冷卻到室溫后加入碘甲烷70mL，碘化鈉31.2和15%氫氧化鈉溶液66mL，快速攪拌，60°C水浴加熱30min，再加入碘甲烷12mL，2.4gNaOH,繼續反應lh，反應結束后，沉淀，離心，沉淀用乙醚洗滌2次，將產物倒入10%NaC1240mL中交換I 一，去離子水透析3d，凍干。得淡黃色絮狀的水溶性TMC。
[0017](2)采用混合溶劑法制備載藥納米粒。14mgGA與lOmgTMC分別溶于0.56mL 二甲亞砜和1.67mL蒸餾水中，兩溶液在磁力攪拌下混合裝入透析袋，封口后在蒸餾水中透析，所得溶液經3000r/min離心后過0.45μπι微孔濾膜。所得樣品在4°C下避光保存。
[0018](3)標準曲線的建立:將藤黃酸標準品用色譜甲醇溶解制成1.084mg/mL的儲備液，分別吸取上述儲備液和量瓶中，容量瓶中，以流動相定容的標準溶液，在上述的色譜條件下測定GA含量，記錄色譜峰面積A，繪制標準曲線。
[0019](4)粒徑、電位與形態:納米粒溶液經過0.45Mm微孔濾膜后，在25°C，633nm的He-Ne光下，使用Zetasizer3000H粒徑測定儀測定載藥納米粒的粒徑。為了觀察其表面形態，將過0.22Pm膜的納米粒溶液滴加到銅載網上，干燥后使用透射電鏡JEM-200CX在200kV下觀察。
[0020]作為一種優選方案，以殼聚糖為原料采用兩步季銨化合成季銨化殼聚糖，用FT-1R和1HNMR表征其結構并計算季銨化程度(DQ)。通過混合溶劑法制備藤黃酸TMC納米粒，采用HPLC測定載藥量與包封產率。
【主權項】
1.藤黃酸季銨化殼聚糖納米粒的制備方法，其特征在于，包括下步驟； (1)取殼聚糖原料(70k，12g)，加入1-甲基-2-吡咯烷酮240mL，碘甲烷70mL，碘化鈉31.2g和15%氫氧化鈉溶液66mL，攪拌，在60°C水浴中回流lh ;反應完畢，將反應產物傾入300mL乙醇和200mL乙醚的混和溶劑中，沉淀，離心，沉淀物用乙醚洗滌2次，然后再加入1-甲基-2-吡咯烷酮260L，加熱到40°C，除去乙醚，冷卻到室溫后加入碘甲烷70mL，碘化鈉31.2和15%氫氧化鈉溶液66mL，快速攪拌，60°C水浴加熱30min，再加入碘甲烷12mL, 2.4gNaOH,繼續反應lh，反應結束后，沉淀，離心，沉淀用乙醚洗滌2次，將產物倒入10%NaC1240mL中交換I 一，去離子水透析3d，凍干；得淡黃色絮狀的水溶性TMC ； (2)采用混合溶劑法制備載藥納米粒；14mgGA與lOmgTMC分別溶于0.56mL 二甲亞砜和1.67mL蒸餾水中，兩溶液在磁力攪拌下混合裝入透析袋，封口后在蒸餾水中透析，所得溶液經3000r/min離心后過0.451^微孔濾膜；所得樣品在4°C下避光保存； (3)標準曲線的建立:將藤黃酸標準品用色譜甲醇溶解制成1.084mg/mL的儲備液，分別吸取上述儲備液和量瓶中，容量瓶中，以流動相定容的標準溶液，在上述的色譜條件下測定GA含量，記錄色譜峰面積A，繪制標準曲線； (4)粒徑、電位與形態:納米粒溶液經過0.45Pm微孔濾膜后，在25°C，633nm的He_Ne光下，使用Zetasizer3000H粒徑測定儀測定載藥納米粒的粒徑；將過0.22Pm膜的納米粒溶液滴加到銅載網上，干燥后使用透射電鏡JEM-200CX在200kV下觀察。2.根據權利要求1所述的藤黃酸季銨化殼聚糖納米粒的制備方法，其特征在于，以殼聚糖為原料采用兩步季銨化合成季銨化殼聚糖，用FT-1R和1HNMR表征其結構并計算季銨化程度；通過混合溶劑法制備藤黃酸TMC納米粒，采用HPLC測定載藥量與包封產率。
【專利摘要】藤黃酸季銨化殼聚糖納米粒的制備方法屬于藥品技術領域，尤其涉及一種藤黃酸季銨化殼聚糖納米粒的制備方法。本發明提供一種操作簡單，有效性高且安全性高的一種藤黃酸季銨化殼聚糖納米粒的制備方法。藤黃酸季銨化殼聚糖納米粒的制備方法，包括下步驟。（1）取殼聚糖原料(70k，12g)，加入1-甲基-2-吡咯烷酮240mL，碘甲烷70mL，碘化鈉31.2g和15%氫氧化鈉溶液66mL，攪拌，在60℃水浴中回流1h。（2）采用混合溶劑法制備載藥納米粒。14mgGA與10mgTMC分別溶于0.56mL二甲亞砜和1.67mL蒸餾水中。（3）標準曲線的建立：將藤黃酸標準品用色譜甲醇溶解制成1.084mg/mL的儲備液。（4）粒徑、電位與形態：納米粒溶液經過0.45μm微孔濾膜后，干燥后使用透射電鏡JEM-200CX在200kV下觀察。
【IPC分類】A61K47/48, A61K31/352, A61P35/00, A61K9/51
【公開號】CN105288643
【申請號】CN201410376200
【發明人】史樹元
【申請人】史樹元
【公開日】2016年2月3日
【申請日】2014年8月3日