一種東革阿里提取物及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種東哥阿里提取物的制備方法，本發明同時涉及該提取物在抗腫瘤 和抗炎功效方面的應用，屬保健食品與生物醫藥領域。 技術背景
[0002] 東革阿里（Eurycomalongifolia)是生長在東南亞一帶的一種灌木植物，主 產于馬來西亞（稱為TongkatAli)。在東南亞，東革阿里主要以根入藥，長期以來都 作為能量滋補藥、退熱藥、催情藥和蛇毒解藥等藥物使用，被譽為馬來參、天然偉哥。現 代研究表明，東革阿里具有改善男性性功能障礙抗瘧疾、抗糖尿病、抗癌和退熱等功效， 其主要活性成分為苦木素（quassinoid)類二萜，此外還含有生物堿、木脂素、三萜等類 成分[(1)RajeevBhat.TongkatAli(EurycomalongifoliaJack)：Areviewonits ethnobotanyandpharmacologicalimportance，Fitoterapia，2010,81 :669-679 ; (2) LeeSuanChua，LC-MS/MS-basedmetabolitesofEurycomalongifolia(TongkatAli)in Malaysia(PerakandPahang).JournalofChromatographyB,2011,879 :3909-3919]〇
[0003] 現有的東革阿里提取物市售品一般為水提物，其中指標成分東革阿里酮 (eurycomanone)含量約為1-3%，但其有效成分含量低，服用劑量相對較大。Kit-LamChan 等報道，東革阿里根采用甲醇60度浸提5天，提取液濃縮后再采用DiaionHP20樹脂經 甲醇-水梯度洗脫，精制獲得的苦木素類組分F2中含有東革酮（7. 16-7. 34% )、東革醇 (5.0-5.31% )、東革醇苷（9.08-9.70% )，以及 13α，21-環氧東革酮（L44-L75 % )、 13α，21-二氫東革酮（0.45-0.51% )等主成分[Kit-LamChan，Developingavalidated liquidchromatography-massspectrometricmethodforthesimultaneousanalysis offivebioactivequassinoidmarkersforthestandardizationofmanufactured batchesofEurycomalongifoliaJackextractasantimalarialmedicaments.Journal ofChromatographyA，2011，1218 ; 1861-1877]。該工藝可獲得富含高純度苦木素的東革阿 里提取物，但選用甲醇有機溶劑浸提，與傳統使用的水提物在物質組成方面有一定差異，并 存在生產周期長、效率低等不足之處。為此，本發明擬對東革阿里提取物的有效成分進行研 究，并在此基礎上建立一種生產工藝可行、質量可控的先進制備工藝。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的是提供一種生產工藝和質量可控的東革阿里提取物。
[0005] 本發明提供的東革阿里提取物由以下步驟制備獲得：
[0006] (1)選取東革阿里根藥材，采用水進行提取，提取液合并，得東革阿里提取液；
[0007] (2)由（1)所得東革阿里提取液，上大孔樹脂柱進行吸附，先用水洗脫，再用 20-50%乙醇洗脫，收集20-50%乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得。
[0008] 所述工藝步驟（1)選用東革阿里根，并可根據需要適當切片；所述水提取溫度為 60-100度，用量為原藥材的20-60倍，提取方式為回流提取或滲漉提取，提取時間為每次 1-8小時，共提取2-3次。提取液可根據需要進行適當濃縮，優選方式為不進行濃縮。
[0009] 所述工藝步驟（2)中所述大孔樹脂優選弱極性苯乙烯型大孔樹脂；洗脫時先用水 洗脫除去雜質，再用20-50%乙醇洗脫，其中優選米用30-40%乙醇進彳丁洗脫。
[0010]采用HPLC分析，所述東革阿里提取物中含有東革酮、東革醇、東革醇苷、13β，21-二羥基東革酮和14,15β-二羥基克萊尼酮等五種主要苦木素類成分。其中，東革酮、 東革醇、東革醇苷三種成分含量總和大于20% ; 13β，21-二羥基東革酮含量大于1%，14， 15β-二羥基克萊尼酮含量大于1 %。此外，進一步分離鑒定研究結果表明，所述東革阿里 提取物中還含有13α，21-二氫東革酮、13β，21-二羥基東革醇、龍革內酯、Δ4'5,14-羥基 樂園樹醇、A4'16,6α-羥基異東革內酯Ε、13β，18-二氫東革醇等六種成分。
[0011] 本發明進一步公布一種高純度東革阿里提取物的制備方法，特征在于所述工藝 步驟（2)中東革阿里提取物進一步用10-15%甲醇溶解，上樣于反相碳十八柱，依次用 10-15%、40-60%甲醇洗脫，收集40-60%甲醇洗脫液，濃縮，干燥，即得。所述高純度東革阿 里提取物中，東革阿里酮、東革阿里醇、東革阿里醇苷三種成分含量大于40 %，13β，21-二 羥基東革阿里酮含量大于2%，14,15β-二羥基克萊尼酮含量大于2%。
[0012] 本發明遵循東革阿里水提取物傳統使用工藝，并選用大孔樹脂工藝對其苦木素類 組分進行精制。研制過程中發現，該類組分水溶性強，在樹脂工藝精制中優選低濃度乙醇洗 脫，可以除去主要的低級性雜質，提高產品純度。在此基礎上，選用水提取液直接通過大孔 樹脂柱吸附，從而避免了提取液濃縮工序帶來的高能耗、有效成分降解、含量降低等不利因 素。通過反相硅膠柱層析等系統分離純化實驗研究，證實本發明工藝獲得的東革阿里提取 物中含有東革酮、東革醇、東革醇苷、13β，21-二羥基東革酮和14,15β-二羥基克萊尼酮 等五種主要苦木素類成分，其中13β，21-二羥基東革酮和14,15β-二羥基克萊尼酮僅在 本發明提取物中發現含量較高（大于1% )，同時本發明提取物中還含有13α，21-二氫東 革酮等六種成分。需要指出，本發明所述東革阿里提取物中未發現13α，21_環氧東革酮， 該成分在東革阿里甲醇提取物中含量較高。這些成分差異表明，不同提取溶劑和工藝對終 產品的成分組成有顯著影響。綜上所述，本發明所述制備工藝完整保留了東革阿里水提物 中的苦木素類有效成分，并具有生產工藝簡潔、產品質量可控等顯著優點。
[0013] 本發明同時對所述東革阿里提取物（ELQE)的抗腫瘤和抗炎作用進行了考察。研 究結果表明，東革阿里提取物中含有α，β不飽和烯酮結構的苦木素類化合物如東革酮、 13β，21-二羥基東革酮、14,15β-二羥基克萊尼酮等對Α549人非小細胞肺癌細胞等5種 人腫瘤細胞株均有顯著抑制作用；ELQE(100、200mg/kg)對二甲苯所致小鼠耳廓急性炎癥 有顯著抑制作用。結果表明所述東革阿里提取物具有明確的抗腫瘤、抗炎等作用，因而可以 應用于具有抗腫瘤和抗炎功能的相關藥物或保健食品中。
[0014] 本
【發明內容】
通過大量實驗研究和工藝優化分析完成，并對提取物中主要苦木素類 活性成分進行了分離純化和結構鑒定和定量分析。所述東革阿里提取物具有有效成分含量 高、制備工藝容易產業化、產品質量可控等顯著優勢。以下述具體實施例進行說明。
【附圖說明】
[0015]附圖為實施例1中東革阿里提取物的液相色譜圖。圖中，色譜峰1-5依次為13β， 21-二羥基東革酮（1)、東革酮（2)、東革醇苷（3)、東革醇（4)和14,15β-二羥基克萊尼酮 (5)。
【具體實施方式】
[0016] 本發明所述的東革阿里提取物是按以下實施例所表示的方法制造，所涉及到的方 法是本領域的技術人員能夠掌握和運用的技術手段。但以下實施例不得理解為任何意義上 的對本領域發明權利要求的限制。
[0017] 實施例1 :東革阿里提取物的制備
[0018] 東革阿里根于2014年購自馬來西亞（批次EL20141001)，經鑒定為東革阿里 (EurycomalongifoliaJack)干燥根。
[0019] 東革阿里提取物的制備：
[0020] (1)稱取15kg東革阿里根藥材，切片，加入20倍量水回流提取2次，每次提取時間 2h，提取液合并，過濾，得東革阿里提取液；
[0021] (2)由（1)所得東革阿里提取液，上AB-8型大孔樹脂（柱體積20L/BV)，依次 用5BV水、4BV30%乙醇洗脫，收集30%乙醇洗脫液，減壓濃縮、干燥，得東革阿里提取物 (CLQE)120g〇
[0022] 含量測定：采用Agilent1260InfinitySeries高效液相色譜儀，ELSD檢測器； 色譜柱為CosmosilAR-II-C1S(4. 6mmX250mm，5ym);流動相為水（A)-甲醇⑶，梯度洗脫 (0 ~20min，20%B- 40%B;20 ~25min，40%B- 95%B);流速lmL.min\柱溫 35Γ。 采用外標兩點法，測得CLQE樣品中主要成分1-5的含量依次為13β，21-二羥基東革酮 (1.47% )、東革酮（14.49% )、東革醇苷（5.98% )、東革醇（17.06% )、14,15β-二羥基克 萊尼酮（1.74% )。
[0023] CLQE的HPLC色譜圖參見附圖。
[0024] 實施例2 :東革阿里提取物的制備
[0025] 選用藥材來源同實施例1。東革阿里提取物的制備：
[0026] (1)稱取15kg東革阿里根藥材，切片，分別加入20、20、15倍量水于60度提取3 次，每次提取時間8h，提取液合并，過濾，得東革阿里提取液；
[0027](2)由（1)所得東革阿里提取液，上HPD-450型大孔樹脂（柱體積20L/BV)，依次 用5BV水、3BV50%乙醇洗脫，收集50%乙醇洗脫液，減壓濃縮、干燥，得東革阿里提取物 155g〇
[0028] 含量測定：采用實施例1方法，測得本批次東革阿里提取物樣品中主要成分1-5的 含量依次為13β，21-二羥基東革酮（1.14%)、東革酮（13. 05%)、東革醇苷（4. 53%)、東 革醇（13. 18% )、14,15β-二羥基克萊尼酮（1. 32% )。
[0029] 實施例3 :東革阿里提取物的制備
[0030] 高純度東革阿里提取物的制備：選取實施例1中CLQE樣品10g，用10%甲醇50ml 溶解，上DaisogelRP-18柱（40-60μπι，柱體積500ml)，用10%甲醇