一種用于治療類風濕性關節炎的皮下注射用原位凝膠的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于醫藥領域，具體涉及一種用于治療類風濕性關節炎的皮下注射用原位 凝膠。
【背景技術】
[0002] 類風濕性關節炎是以關節滑膜慢性炎癥為主的自身免疫性疾病，可引起關節腫 痛，破壞關節軟骨，導致關節畸形，最終引發不同程度的殘疾。該病全球發病率為0.5~1 %。 女性的發病率通常為男性的2~3倍，如不及時治療，會導致關節破壞和畸形，影響到患者生 活質量。
[0003] 該病的發病原因尚不完全清楚。過去幾十年的研究顯示，多種炎癥途徑與類風濕 性關節炎的發病存在關聯。類風濕性關節炎最初表現為滑膜炎性反應，包括血管分布以及 通透性增加，主要表現為抗原驅動⑶4+細胞增加。這些細胞產生出不同的細胞因子，如INF-γ、TNF_a等，進而激活單核細胞、巨噬細胞和滑膜成纖維細胞產生過量炎性細胞因子幾-l、IL-6、TNF-a等，導致炎性反應的持續發生和軟骨漸進性破壞。其他細胞因子如IL-17、 IL-18、IL-15和趨化因子等也存在于炎性滑液膜中，這些分子可觸發信號傳導通路，誘導 各種負責炎癥和組織退化基因的表達。
[0004] 甲氨蝶呤(Methotrexate，CAS 59-05-2)是一種具有多種用途的藥物活性成分，可 用于銀肩病、類風濕性關節炎及癌癥的治療。但該藥存在諸多毒性反應如潰瘍性口腔炎、末 梢血管擴張、骨髓抑制、急性肝萎縮、偏癱、驚厥等。
[0005] 在類風濕性關節炎的臨床治療中，目前甲氨蝶呤屬首選藥物之一。通常為口服或 靜脈注射等方式全身性給藥，存在不同程度的不良反應。如何降低其不良反應是目前主要 的研究方向之一。降低甲氨蝶呤的毒性反應，將會為類風濕關節炎的治療提供新的突破。
[0006] 為提高甲氨喋呤對類風濕關節炎的治療作用，避免全身給藥的廣泛毒性。近年國 外已在研究甲氨喋呤乳化微球或中心載體制劑進行關節腔注射，以減慢局部清除、增強 關節腔內藥物濃度，進一步提高藥效，減低其不良反應。但關節腔注射操作難度大，且注射 本身會對關節結構造成損傷。
[0007] 王婷等制備了甲氨喋呤的皮下注射用原位凝膠(趙歡喆，王婷，廖旎彥，丁勁松. 甲氨蝶呤皮下注射用原位凝膠的研制.中國醫藥工業雜志.2014，第4期，第466-469頁)并 進行了體內藥動學研究（陳姍姍，王婷，朱騰偉，王峰，丁勁松.皮下注射甲氨蝶呤原位凝 膠的兔體內藥動學.中國醫藥工業雜志.2014，45(5) :466-469)，但該原位凝膠僅能實現緩 釋效果。
【發明內容】
[0008] 針對上述現有技術，本發明的目的提供一種用于治療類風濕性關節炎的皮下注射 用原位凝膠。
[0009] 為實現上述的目的，本發明采用的技術方案為： 一種用于治療類風濕性關節炎的皮下注射用原位凝膠，由醫藥學上可接受的輔料和以 下重量比的原料制成：甲氨蝶呤30~60重量份、HIV-I-TAT蛋白47-57多肽片段3~9重量份。
[0010] 作為本發明的皮下注射用原位凝膠的一個優選方案，所述原料的重量比為：甲氨 蝶呤35重量份、HIV-I-TAT蛋白47-57多肽片段4重量份。
[0011] 作為本發明的皮下注射用原位凝膠的另一優選方案，所述原料的重量比為：甲氨 蝶呤58重量份、HIV-I-TAT蛋白47-57多肽片段8重量份。
[0012] 作為本發明的皮下注射用原位凝膠的又一優選方案，所述原料的重量比為：甲氨 蝶呤40重量份、HIV-I-TAT蛋白47-57多肽片段5重量份。
[0013] 作為本發明的皮下注射用原位凝膠的再一優選方案，所述原料的重量比為：甲氨 蝶呤56重量份、HIV-I-TAT蛋白47-57多肽片段4重量份。
[0014] 作為本發明技術方案的進一步優化，上述皮下注射用原位凝膠中所述醫藥學上可 接受的輔料包括碳酸鈉、泊洛沙姆P407、泊洛沙姆P188、羥丙基甲基纖維素 K4M和去離子水； 所述原位凝膠的制備方法包括如下步驟： 1) 取處方量甲氨蝶呤、HIV-I-TAT蛋白47-57多肽片段加入去離子水，攪拌均勻，加碳酸 鈉調pH為7.2~7.6，制成配液A，配液A中甲氨蝶呤濃度為lmg/ml; 2) 向配液A中依次加入泊洛沙姆P407、泊洛沙姆P188、羥丙基甲基纖維素 K4M，充分攪 拌，分散均勻，得配液B，配液B中泊洛沙姆P407的重量百分比為20%，泊洛沙姆P188的重量百 分比為1.2%，羥丙基甲基纖維素 K4M的重量百分比為0.3%; 3) 將配液B液4°C下溶脹24 h，過0.22 μπι微孔濾膜，分裝即得。
[0015] 本發明的技術方案中所述的HIV-I-TAT蛋白47-57多肽片段，氨基酸序列為 YGRKKRRQRRR，CAS號為191936-91-1，屬于已上市產品，這是本領域技術人員所公知的。
[0016] 在治療過程中，可將本發明的皮下注射用原位凝膠在類風濕性關節炎患處關節進 行皮下注射給藥。局部給藥尤其是皮下注射給藥在患處附近或患病部位給藥更有利于藥物 到達患處，這對本領域技術人員而言是公知的常識。
[0017]本發明的發明人在研究中發現，采用皮下注射給藥時，HIV-I-TAT蛋白47-57多肽 片段能夠顯著提高甲氨蝶呤在關節腔內的分布量;HIV-I-TAT蛋白47-57多肽片段與甲氨蝶 呤的組合物制備成原位凝膠后，通過皮下注射給藥則能夠實現甲氨蝶呤的緩釋效果，同時 提高藥物在關節腔的分布量，避免藥物全身分布導致的廣泛毒性作用，也可避免關節腔注 射對身體的損傷，提高甲氨蝶呤的療效，同時降低甲氨蝶呤的毒性。
【具體實施方式】
[0018] 下面結合實施例對本發明作進一步的解釋。應當理解的是，以下實施例僅用于解 釋本發明，而不是限制本發明的保護范圍。
[0019] 實施例1用于治療類風濕性關節炎的皮下注射用原位凝膠的制備 1) 取甲氨蝶呤350g、HIV-1-TAT蛋白47-57多肽片段40g，加入去離子水，攪拌均勻， 加碳酸鈉調pH為7.4，制成配液A，配液A中甲氨蝶呤濃度為lmg/ml; 2) 向配液A中依次加入泊洛沙姆P407、泊洛沙姆P188、羥丙基甲基纖維素 K4M，充分攪 拌，分散均勻，得配液B，配液B中泊洛沙姆P407的重量百分比為20%，泊洛沙姆P188的重 量百分比為1.2%，羥丙基甲基纖維素 K4M的重量百分比為0.3%; 3)將配液B液4°C下溶脹24 h，過0.22 μπι微孔濾膜，分裝即得。
[0020]實施例2用于治療類風濕性關節炎的皮下注射用原位凝膠的制備 1) 取甲氨蝶呤580g、HIV-1-TAT蛋白47-57多肽片段80g，加入去離子水，攪拌均勻， 加碳酸鈉調pH為7.3，制成配液A，配液A中甲氨蝶呤濃度為lmg/ml; 2) 向配液A中依次加入泊洛沙姆P407、泊洛沙姆P188、羥丙基甲基纖維素 K4M，充分攪 拌，分散均勻，得配液B，配液B中泊洛沙姆P407的重量百分比為20%，泊洛沙姆P188的重 量百分比為1.2%，羥丙基甲基纖維素 K4M的重量百分比為0.3%; 3) 將配液B液4°C下溶脹24 h，過0.22 μπι微孔濾膜，分裝即得。
[0021 ]實施例3用于治療類風濕性關節炎的皮下注射用原位凝膠的制備 1) 取甲氨蝶呤400g、HIV-1-TAT蛋白47-57多肽片段50g，加入去離子水，攪拌均勻， 加碳酸鈉調pH為7.5，制成配液A，配液A中甲氨蝶呤濃度為lmg/ml; 2) 向配液A中依次加入泊洛沙姆P407、泊洛沙姆P188、羥丙基甲基纖維素 K4M，充分攪 拌，分散均勻，得配液B，配液B中泊洛沙姆P407的重量百分比為20%，泊洛沙姆P188的重 量百分比為1.2%，羥丙基甲基纖維素 K4M的重量百分比為0.3%; 3) 將配液B液4°C下溶脹24 h，過0.22 μπι微孔濾膜，分裝即得。
[0022] 實施例4用于治療類風濕性關節炎的皮下注射用原位凝膠的制備 1) 取甲氨蝶呤560g、HIV-1-TAT蛋白47-57多肽片段40g，加入去離子水，攪拌均勻， 加碳酸鈉調pH為7.5，制成配液A，配液A中甲氨蝶呤濃度為lmg/ml; 2) 向配液A中依次加入泊洛沙姆P407、泊洛沙姆P188、羥丙基甲基纖維素 K4M，充分攪 拌，分散均勻，得配液B，配液B中泊洛沙姆P407的重量百分比為20%，泊洛沙姆P188的重 量百分比為1.2%，羥丙基甲基纖維素 K4M的重量百分比為0.3%; 3) 將配液B液4°C下溶脹24 h，過0.22 μπι微孔濾膜，分裝即得。
[0023] 實施例5用于治療類風濕性關節炎的皮下注射用原位凝膠的制備 1) 取甲氨蝶呤590g、HIV-1-TAT蛋白47-57多肽片段60g，加入去離子水，攪拌均勻， 加碳酸氫鈉調pH為7.5，制成配液A，配液A中甲氨蝶呤濃度為2mg/ml; 2) 向配液A中依次加入泊洛沙姆P407、泊洛沙姆P188、羥丙基甲基纖維素 K4M，充分攪 拌，分散均勻，得配液B，配液B中泊洛沙姆P407的重量百分比為20%，泊洛沙姆P188的重 量百分比為1.2%，羥丙基甲基纖維素 K4M的重量百分比為0.3%; 3) 將配液B液4°C下溶脹24 h，過0.22 μπι微孔濾膜，分裝即得。
[0024] 實施例6用于治療類風濕性關節炎的皮下注射用原位凝膠的制備 1) 取甲氨蝶呤340g、HIV-1-TAT蛋白47-57多肽片段55g，加入去離子水，攪拌均勻， 加碳酸氫鈉調pH為7.3，制成配液A，配液A中甲氨蝶呤濃度為3mg/ml; 2) 向配液A中依次加入泊洛沙姆P407、泊洛沙姆P188、羥丙基甲基纖維素 K4M，充分攪 拌，分散均勻，得配液B，配液B中泊洛沙姆P407的重量百分比為20%，泊洛沙姆P188的重 量百分比為1.2%，羥丙基甲基纖維素 K4M的重量百分比為0.3%; 3) 將配液B液4°C下溶脹24 h，過0.22 μπι微孔濾膜，分裝即得。
[0025] 實施例7用于治療類風濕性關節炎的皮下注射用原位凝膠的制備 1)取甲氨蝶呤340g、HIV-1-TAT蛋白47-57多肽片段55g，加入去離子水，攪拌均勻