一種蟾酥提取物及其緩釋微丸的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于制藥技術領域，具體涉及一種蟾酥提取物及其緩釋微丸的制備方法。
【背景技術】
[0002] 古往今來，人類始終為治療癌癥在不懈的努力，然而惡性腫瘤仍然呈上升趨勢，不 斷威脅著人類的健康。據最新資料顯示，今后20年全球癌癥新患者將由目前每年1000萬增 加到5000萬，因癌癥死亡人數由每年600萬增至1000萬。誘發惡性腫瘤的因素很多，其根本 原因是機體免疫系統功能低下不能及時準確發現癌細胞并及時抑制癌細胞的生存，造成癌 細胞聚合、裂變增殖，即中醫所述:正氣虧虛，熱毒蘊結。"正氣"是人體抵抗病邪致病的能 力，"正氣內存，邪不可干"，"邪之所湊，其氣必虛"，"氣為血帥，氣行則血行，氣滯則血瘀"， 氣在全身運行，無處不至，如寒熱溫涼失調，情志抑郁、濕濁、血瘀，必然造成氣的功能失調， 引起氣滯、氣郁、氣逆或氣陷等病理現象。"氣滯日久，血瘀蘊積"，必然導致局部病理變化， 形成腫塊。正常情況下，在細胞中突變產生癌細胞時或休眠癌細胞被激活時，機體的中樞神 經系統會快速采集到"異性"細胞信息（即不屬于自身需要的其他細胞)進行判斷、處理，啟 動免疫系統程序，即中醫的"衛氣"，抗御外邪入侵。現代醫學證明人的機體免疫系統能夠監 視和殺滅癌細胞，抑制腫瘤細胞的生長、侵襲和轉移。尤其是T細胞、NK細胞和巨噬細胞等都 能特異性識別靶細胞并殺傷腫瘤細胞。當機體免疫功能低下時或機體的神經系統在信息采 集判斷錯誤時，癌細胞就會乘虛而入，聚結為腫塊，并形成自我保護體系，誘導、迷惑神經系 統，形成保護屏障，難于攻破。尤其是在受到劇烈的精神創傷，喜、怒、憂、思、悲、恐、驚等情 感超出生理所能承受的正常范圍時，就會出現情志失調，人體內的陰陽氣血就容易失去平 衡，濕聚血瘀，也會誘發腫瘤。按中醫辨證理論，惡性腫瘤的主要病因機理是正氣虧虛、熱毒 蘊結、經絡瘀阻、陰陽失衡、精神情志失調、氣滯血瘀、痰濕凝聚所致。治療應以免疫調節、疏 通經絡、理氣行滯、活血化瘀、以毒攻毒、散結軟堅，達到標本同治。中醫中藥在治療惡性腫 瘤方面具有一定的優勢，可以增強人體免疫力、抑制惡性腫瘤的生長，避免放化療對正常肌 體細胞損傷的副作用，目前，市場上也出現一些治療惡性腫瘤的中藥，但這些治療惡性腫瘤 的中藥多數對惡性腫瘤細胞的殺傷力較弱，使得惡性腫瘤的縮小作用不明顯、鎮痛效果差、 療效不確切、治標不治本。
【發明內容】
[0003] 針對現有技術存在的問題，本發明的目的在于設計提供一種蟾酥提取物及其緩釋 微丸的制備方法的技術方案。
[0004] 所述的一種蟾酥提取物的制備方法，其特征在于包括以下工藝步驟： 1) 取蟾酥粉末加入60~100倍量濃度為60~90%的乙醇，提取1~3次，每次60~120min， 得到蟾毒內酯類有效成分； 2) 再在藥渣中加入40~60倍量的水，提取1~3次，每次30~60min，得到吲哚生物堿有 效成分； 3)將步驟1)和2)得到的有效成分混合，進行濃縮干燥，即得蟾酥提取物。
[0005] 所述的一種蟾酥提取物的制備方法，其特征在于所述的步驟1)中蟾酥粉末為20~ 80目粉末，優選為40目粉末。
[0006] 所述的一種蟾酥提取物的制備方法，其特征在于所述的步驟1)中取蟾酥粉末加入 100倍量濃度為90%的乙醇，提取3次，每次90min。
[0007] 所述的一種蟾酥提取物的制備方法，其特征在于所述的步驟2)中藥渣中加入60倍 量的水，提取3次，每次60min。
[0008] 所述的一種蟾酥提取物緩釋微丸的制備方法，其特征在于包括以下工藝步驟： 1) 蟾酥提取物的制備:取蟾酥粉末加入60~100倍量濃度為60~90%的乙醇，提取1~3 次，每次60~120min，得到蟾毒內酯類有效成分;再在藥渣中加入40~60倍量的水，提取1~ 3次，每次30~60min，得到吲哚生物堿有效成分;將得到的蟾毒內酯類有效成分和吲哚生物 堿有效成分混合，進行濃縮干燥，即得蟾酥提取物； 2) 緩釋包衣微丸制備:按蟾酥提取物:乳糖:微晶纖維素重量比為2:1:7將三者均勻混 合，按擠出速度50rpm/min，滾圓時間3min，滾圓速度1200rpm/min制備工藝制備素丸;再按 包衣工藝對素丸進行包衣，其中包衣液為：EudragitRS 30D: EudragitRL 30D重量比為 95:5、占包衣液聚合物總量25%的TEC、占包衣液聚合物總量滑石粉30%，包衣增重15%。
[0009] 所述的一種蟾酥提取物緩釋微丸的制備方法，其特征在于所述的步驟1)中蟾酥粉 末為20~80目粉末，優選為40目粉末。
[0010] 所述的一種蟾酥提取物緩釋微丸的制備方法，其特征在于所述的步驟1)中取蟾酥 粉末加入100倍量濃度為90%的乙醇，提取3次，每次90min，得到蟾毒內酯類有效成分;再在 藥渣中加入60倍量的水，提取3次，每次60min，得到吲哚生物堿有效成分。
[0011] 所述的一種蟾酥提取物緩釋微丸的制備方法，其特征在于所述的步驟2)中包衣采 用流化床包衣工藝，其中，投料量為25~75g;進風溫度40°C ;噴槍噴霧壓力為1.5Kg/cm2;恒 流栗流速調節為1.5rpm/min;風機流量為50m3/h。
[0012] 上述的一種蟾酥提取物緩釋微丸的制備方法，設計合理，一方面，通過本發明能夠 有效地將蟾酥內酯類和吲哚生物堿有效成分提取出來；另一方面，通過本發明為蟾酥有效 成分篩選、制劑工藝及劑型研究、新藥研究的工作基礎，這將為提升中藥新藥有效成分的物 質基礎，有效成分質量控制創造條件。
【附圖說明】
[0013] 圖1為蟾酥各提取物作用于SGC-7901細胞48h的倒置顯微鏡下形態學變化圖；圖1 中a是正常細胞圖片;b是給蟾毒內酯類成分后細胞圖片;c是給吲哚生物堿類后細胞圖片;d 是給蟾酥混合成分后細胞圖片。
[0014] 圖2蟾酥各提取物對SGC-7901腫瘤細胞抑制作用圖（48小時）。
[0015]圖3為蟾酥提取物對SGC-7901腫瘤細胞抑制作用圖（72小時）。
[0016] 圖4為素丸體外釋放度考察圖。
[0017] 圖5為素丸在不同溶出介質中的體外溶出考察圖。
[0018] 圖6為素丸在0.1%SDS溶出介質中的釋放度考察圖。
[0019] 圖7為不同包衣增重緩釋微丸在水中的釋放圖。
[0020] 圖8為包衣增重25%(80:20)微丸體外溶出考察圖。
[0021] 圖9為不同包衣微丸的體外釋放度考察圖。
[0022]圖10為不同包衣增重微丸體外釋放度考察圖。
[0023]圖11為不同TEC用量的緩釋微丸體外釋放考察圖。
[0024]圖12為不同滑石粉用量的緩釋微丸體外釋放度考察圖。
[0025] 圖13為蟾酥緩釋微丸體外釋放曲線圖。
[0026] 圖14為X衍射圖譜;a圖是蟾酥提取物X衍射圖譜;b圖是空白丸心X衍射圖譜;c圖是 緩釋包衣微丸X衍射圖譜，d圖是蟾酥提取物、空白丸心、緩釋包衣微丸的X衍射疊圖。
[0027]圖15為零級釋放擬合結果圖。
[0028]圖16為一級釋放擬合結果圖。
[0029]圖17為Higuchi釋放擬合結果圖。
[0030] 圖18為蟾酥緩釋微丸體外釋放電鏡掃描圖。
【具體實施方式】
[0031] 為使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚，下面本發明中的技術方案進行清 楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于 本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有作出創造性勞動前提下所獲得的所有其他 實施例，都屬于本發明保護的范圍。
[0032] 實施例1:蟾毒內酯類提取工藝的考察 藥材粒度、溶劑用量、提取次數、提取時間和乙醇濃度為影響提取效果的主要因素。藥 材粒度小有利于溶劑滲入藥材顆粒內部，有利于有效成分的提取，但藥材粉碎過細，不利于 有效成分的溶出。根據蟾毒內酯類在乙醇中的溶解性，大多采用乙醇進行提取，所以本部分 提取溶劑選用乙醇，首先對蟾酥進行單因素考察，再采用正交實驗優化出蟾毒內酯類成分 的最佳提取工藝。
[0033] 1.1正交設計試驗 以酯蟾毒配基和華蟾酥毒基的總量-總毒基量為指標，對溶劑的用量、提取時間、乙醇 溶度、提取次數進行考察，從而得到最佳提取工藝。采用L9(34)正交設計表進行實驗，見表1-1及表1-2。分別稱取蟾酥藥材9份，每份0.2 g，按提取工藝正交設計表進行提取，提取2次。 每個提取的溶液分別過濾合并，然后以〇. 45μπι濾膜過濾，備用。按上述脂溶物HPLC含量測定 方法學進行測定。
[0034]表1-1.蟾毒內酯類成分提取因素水平表
表1-2.正交結果表
表1-3.方差分析
由正交結果表1-3可知：提取工藝最主要的影響因素是乙醇濃度，其次分別為提取次 數、溶劑倍量、提取時間。蟾酥脂溶性成分最佳的提取工藝:提取時間90min，提取次數3次， 乙醇濃度90%，溶劑倍量100倍。
[0035] 1 · 2最佳提取工藝驗證試驗 稱取蟾酥細粉〇. 2g，共3份，按最佳提取工藝條件進行平行試驗。見表1-4。
[0036] 表1-4.蟾酥含量測定結果表(n=3)
實施例2:吲哚生物堿提取工藝的考察 1.1正交設計試驗 以5-羥色胺為指標，對水的用量、提取時間、提取次數進行考察，從而得到最佳提取工 藝。采用L9(34)正交設計表進行實驗，分別稱取蟾酥細粉9份，每份0.5g，按提取工藝正交設 計表進行提取，每個提取的溶液分別過濾合并，備用。按上述水溶物紫外分光光度法測定蟾 酥水溶物的含量。見表2-1及表2-2。
[0037]表2-1.水溶性成分提取因素水平表
表2-2.正交試驗結果表Lg(34)
表2-3.方差分析
由正交結果表2-3可知:提取工藝最主要的影響因素是提取次數，其次分別為提取次 數、水