用于抑制癌癥相關惡病質的hdac抑制劑的制作方法

用于抑制癌癥相關惡病質的hdac抑制劑的制作方法
【專利摘要】提供了抑制患有癌癥的哺乳動物中的惡病質的方法，所述方法包括施用HDAC抑制劑。方面包括以與未接受1類和2b類HDAC抑制劑的哺乳動物相比有效地基本上保持所述哺乳動物的體重的量施用1類和2b類HDAC抑制劑的方法。
【專利說明】用于抑制癌癥相關惡病質的HDAC抑制劑
[0001] 優先權要求
[0002] 本申請要求于2013年11月20日提交的美國臨時專利申請序列號61/906,738的優 先權。W上提及的申請被通過引用如同全部重述一樣地并入本文。本文引用的所有參考文 獻，包括但不限于專利和專利申請，被通過引用W其全文并入。
[000；3]背景
[0004] 癌癥相關惡病質是癌癥患者中與肌肉質量損失、疲勞、無力和食欲不振相關的虛 弱狀態。惡病質還與嚴重的臨床后果相關，所述臨床后果包括可W導致移動困難的肌肉無 力和肺并發癥。惡病質是癌癥患者死亡中的重要影響因素。
[0005] 惡病質的特征在于不被常規營養支持逆轉的骨骼肌質量的損耗，導致嚴重影響患 者發病率和死亡率的明顯的體重減輕。它發生于多于80%的患有胃癌、膜腺癌和食道癌的 患者；70%的患有頭頸癌的患者；W及大約60%的患有肺癌、結腸直腸癌和前列腺癌的患 者。參見，例如，Muscle(2012)3,245-51。盡管惡病質影響癌癥患者的死亡率，仍沒有開發出 有效的療法W預防或阻礙惡病質的進展。例如，預測多于85%的膜腺癌患者，包括早期患 者，平均失去其患病前重量的14%。參迅，幽，BMC Cancer. 2010JU18; 10:363。惡病質的膜 腺癌患者經常無力和疲勞，并且對療法具有較低的耐受性并具有更不利的外科手術結果。 因此，惡病質是膜腺癌的死亡率的主要驅動者。不幸的是，在過去的40年，膜腺癌的5年存活 率保持在6 %，是所有惡性腫瘤中最低的。
[0006] 隨著鑒別惡病質因素及其對骨骼肌的影響的新手段的出現，近期惡病質領域在了 解癌癥和其他慢性疾病中調節肌肉萎縮的潛在機制方面取得重大進展。結果，我們現在對 細胞因子和系統性炎癥如何通過對從肌纖維內部發揮作用的關鍵信號途徑起作用來調節 肌肉萎縮有所領會。但是，將運些發現轉化成有效的療法是有挑戰性的，并且，在本文描述 的方面之前，一直缺少用于惡病質的有效治療。
[0007] 骨骼肌質量部分地通過蛋白合成與蛋白調節的相對速率來調節。Alamdari，N,等 人，Acetylation and deacetylation-novel factors in muscle wasting, Metabolism. 2013年1月；62(1): 1-11。當蛋白降解速率大于蛋白合成時，出現骨骼肌質量的 損失。14.。蛋白乙酷化和脫乙酷化改變(modify)轉錄因子和基因轉錄，其可W通過使蛋白 更加易受或較不易受降解的影響來影響肌肉質量。1^.組蛋白乙酷基轉移酶(HAT)和組蛋白 脫乙酷酶化DAC)在調節蛋白乙酷化和脫乙酷化中起作用。
[000引但是，已經證明運些分子對肌肉消耗和惡病質的作用是相互矛盾的一證據表明， 例如，HDA巧審制劑(例如，曲古抑菌素 A (TSA))的使用導致超乙酷化，超乙酷化可W增加蛋白 降解，導致增加的月幾肉消耗和惡病質。相矛盾的結果由Narver等人（Sustained improvement of spinal muscular atrophy mice treated with trichostatin A plus nu化ition. Ann化urol. 2008;64:465-70)發現。但是，由于用TSA治療還伴隨著有力的營養 支持，運些結果遭到質疑。Alamdari等人，在5。因此，認為HDA巧Φ制劑增加而不是減少惡病 質，或他們的使用產生沖突并且矛盾的結果。
[0009]癌癥惡病質的發展和進展由肌肉組織中對腫瘤的復雜、多因素的病理生理學響應 引起。迄今為止，沒有可用的經FDA批準的療法W預防或阻礙惡病質患者中的肌肉消耗的進 展。迄今為止，祀向惡病質發病機理的不同方面的若干研究用藥物已經經過人體試驗，但 是，具有不同的臨床結果。例如，齡￥曰的13的8￥138(13；[1]1曰旨1'111]1曰13)，一種阻斷肌生成抑制蛋白 (myos化tin)和激活蛋白（activin)與II型激活蛋白受體結合的mAb，獲得抑A突破性療法認 定，而GTx的肌肉消耗藥物enobosarm，一種選擇性雄激素受體調節物，在后期臨床試驗中失 敗。
[0010] 核屯、組蛋白的乙酷化通過控制DNA的核小體組裝在基因轉錄的調節中起重要作 用。組蛋白的脫乙酷化導致核小體的緊密組裝W及由轉錄因子與DNA目標的受限的接近引 起的轉錄抑制。組蛋白乙酷化使核小體結構松弛，為轉錄因子提供更多的接近。組蛋白脫乙 酷化和乙酷化之間的平衡由組蛋白脫乙酷轉移酶化MC)和組蛋白乙酷轉移酶化AT)調節。 運些因子的異常的平衡與異常的細胞生長和癌癥的多個形式相關，如美國專利號8,318， 808中討論的，該專利W引用的方式全文并入本文。尤其是，HDA巧審制劑改變乙酷化和脫乙 酷化之間的平衡，在許多腫瘤細胞類型中導致生長停滯、分化和調亡。參見，例如，美國專利 號8,318,808。
[0011] 已經在人類中鑒定了 18種皿AC，并且其特征在于依賴鋒或煙酷胺腺嚷嶺二核巧酸 (NADKDiscov Med 10(54):462-470，November 2010)，并且與W下類別相關：1 類化DAC 1、 2、3和8);11 類(HDAC 4、5、6、7、9和10;111類(3^化1111-7(511?1'));和1￥類(皿40 ll)〇Id. [001^ 本文特別感興趣的是美國專利號8,318,808中描述的皿A巧Φ制劑，并且基于，例如 通過芳族Ω-氨基酸接頭與化馨合基序偶聯的脂肪酸。在許多方面，HDA巧Φ制劑可W具有 式：
[0013]
[0014] 其中X選自Η和CH3; Y是(CH2)n，其中η是0-2;Z選自（CH2)m和（CH)2，其中m是0-3; A 是控基;B是鄰氨基苯基或徑基;并且Q是面素、氨或甲基。一種特定的HDA巧審制劑(N-徑基- 4-(3-甲基-2-苯基-下酷基氨基)-苯甲酯胺）也被稱為AR-42。在一個方面，AR-42的結構如 下：
[0015]
[0016] AR-42是組蛋白和非組蛋白蛋白二者的廣譜脫乙酷酶抑制劑，當與vorinostat (即，SAHA)相比時，其具有已被證明的在實體瘤和血液性惡性腫瘤中的更大的效力和活性。 參見，例女日，Lu YS 等人，Efficacy of 曰 novel histone de 曰 cetyl 曰 se inhibitor in murine models of hepatocellular carcinoma,Hepatology.20070ct;46(4):1119-30; Kulp SK 等人，Anti tumor effects of a novel phenylbutyr ate-based histone deacetylase inhibitor,(S)-HDAC-42, in prostate cancer,Clin Cancer Res.2006Sep l；12(17):5199-206.
[0017] AR-42也可^具有有助于其治療譜的另外的不依賴組蛋白的機制。參見，例如， Chen MC 等人，Novel mechanism by which histone deacety lase inhibitors facilitate topoisomerase Iladegradation in hepatocellular carcinoma cells. Hepatology. 2011 Jan; 53( 1): 148-59; Chen CS 等人，Hi stone acetylation-independent effect of histone deacetylase inhibitors on Akt through the reshuffling of protein phosphatase lcomplexes，J Biol Qiem.2005Nov 18:280(46):38879-87;Yoo CB 等人，Epigenetic therapy of cancer: past, present and future, Nat Rev Drug Discov.2006Jan；5(1):37-50〇
[0018] AR-42在包括但不限于乳腺腫瘤、前列腺腫瘤、卵巢腫瘤、血液細胞瘤（例如淋己 瘤、骨髓瘤和白血病）、肝部腫瘤和腦瘤的腫瘤中具有已被證明的抑制作用。參見，例如， Mims A等人，Increased anti-leukemic activity of decitabine via A民-42-induced upregulation of mi民一29b:a novel epigenetic-targeting approach in acute myeloid leukemia,Leukemia.2012Nov26.doi:10.1038/leu.2012.342.[Epub ahead of print] ;Burns SS等人，Histone deacetylase inhibitor A民-42differentially affects cell-cycle transit in meningeal and meningioma cells,potently inhibiting NF2- deficient meningioma growth,Cancer Res.2013Jan 15:73(2) :792-803;Lu YS等人， 民adiosensitizing effect of a phenylbutyrate-derived histone deacetylase inhibitor in hepatocellular carcinoma,Int J 民adiat Oncol Biol Phys.2012Jun 1; 83(2) ;Zimmerman B等人，Efficacy of novel histone deacetylase inhibitor，A民42，in a mouse model of,human T-lymphotropic virus type ladult T cell lymphoma,Leuk 民 es.2011Nov;35(ll):1491-7;Zhang S 等人，The novel histone deacetylase inhibitor,A民一42,inhibits gpl30/Stat3pathway and induces apoptosis and cell cycle arrest in multiple myeloma cells，Int J Cancer.2011Jul 1;129(1):204-13。 [0019] 概述
[0020] 本文描述的方面提供了抑制患有癌癥的哺乳動物中的惡病質的方法，包括向所述 哺乳動物施用1類和化類皿A巧Φ制劑。一個方面提供了通過^與未接受1類和化類HDA巧印制 劑的哺乳動物相比，有效地基本上保持所述哺乳動物的體重的量向所述哺乳動物施用1類 和2b類皿A巧Φ制劑，抑制所述哺乳動物中的惡病質的方法。在另一個方面，W在至少15天的 時間段內有效地基本上保持所述哺乳動物的體重的至少約90%的量向患有癌癥的哺乳動 物施用1類和化類冊A巧Φ制劑。在另一個方面，1類和化類冊A巧Φ制劑是AR-42。在又另一個 方面，患有癌癥的哺乳動物具有至少一個腫瘤，并且在用AR-42治療后最初15天期間，腫瘤 體積不減小超過6 %。
[0021] 本文描述的其他方面提供了通過向患有癌癥的哺乳動物施用AR-42,抑制惡病質 的方法，其中與未用AR-42治療的患有癌癥的哺乳動物相比，癌癥惡病質中肌肉萎縮的多個 介質（例如，促惡病質驅動物諸如比-6、比-61?(1、1^、]?誠尸1、六甘〇容111-1)的表達被降化。
[0022] 另外的方面提供了通過向患有癌癥的哺乳動物施用AR-42抑制惡病質的方法，其 中與未接受AR-42的哺乳動物相比，惡病質引起的脂肪組織的損失和骨骼肌纖維尺寸的減 小大體上恢復。
[0023] 本文描述的方面提供了保持患有癌癥的哺乳動物中的骨骼肌重量的方法，所述方 法是通過W與未接受1類和化類HDA巧φ制劑的哺乳動物相比，在至少15天的時間段內有效 保持所述哺乳動物的骨骼肌重量的至少約90%的量向所述哺乳動物施用1類和化類HDA巧審 制劑。
[0024] 另外的方面提供了延長患有癌癥的哺乳動物存活的方法，所述方法是通過W與未 接受1類和2b類HDA巧審制劑的哺乳動物相比，有效地大體上延長所述哺乳動物的存活的量 向所述哺乳動物施用1類和化類HDA巧Φ制劑。
[0025] 如本文公開的，AR-42表現出在癌癥惡病質的動物模型中抑制、降低或阻止肌肉消 耗和延長存活的體內效力。此外，AR-42對與癌癥相關的惡病質的作用不依賴于AR-42降低 腫瘤負荷的作用。
[00%] 附圖
[0027]圖1A示出了對C-26荷瘤小鼠中癌癥誘導的惡病質的示例性抑制，并且描繪了媒介 物治療的無腫瘤小鼠（對照)對用媒介物(媒介物)或每隔一天W50mg/kg口服AR-42(AR-42) 治療的荷瘤小鼠在15-天研究期間總重量(左圖，包括腫瘤)和體重（中間圖，不包括腫瘤）的 變化。箭頭指出了 AR-42治療的時間。右圖，AR-42對C-26荷瘤小鼠中的腫瘤生長缺乏抑制作 用。W平均值 ±S.D.呈現數據。P 值:a，0.045 ;b ,0.0027 ;c ,0.049 ;d，0.0048;
[00%]圖IB示出了來自每組的具有腫瘤負荷的代表性小鼠的照片，描繪AR-42對癌癥惡 病質的治療作用；
[0029] 圖1C示出了研究過程中Ξ個治療組的示例性的平均每日飲食消耗。W平均值± S.D.呈現數據(n = 8);
[0030] 圖ID示出了與媒介物治療的荷瘤小鼠和無腫瘤小鼠 （n = 8)的那些相比，AR-42在 無腫瘤和荷瘤小鼠二者中對后肢肌肉，包括脾腸肌、腔骨前肌和四頭肌的重量的示例性作 用（P值：a,<0.001;b,0.0042;c,0.0046);
[0031] 圖IE示出了與媒介物治療的荷瘤小鼠和無腫瘤小鼠 （n = 8)的那些相比，AR-42在 無腫瘤和荷瘤小鼠二者中對屯、臟、脂肪組織和脾臟的示例性作用（P值：a，<〇.〇〇l;b， 0.0059;c，0.001;d,0.009);
[0032] 圖2A示出了在的C-26荷瘤小鼠中肌肉纖維大小的示例性保持，左側描繪來自無腫 瘤對照小鼠和用媒介物或AR-42治療的荷瘤小鼠的脾腸肌肌肉的H&E染色切片的顯微照片。 比例尺，100μπι，并且在右側，脾腸肌肌肉的肌肉纖維的橫切面積W頻率直方圖呈現，顯著性 (Ρ<0.001)。^平均值±S.D.呈現數據；
[0033] 圖2B示出了用媒介物、vo;rinos1:at(50mg/kg，口服，每日 Kromid邱sin(0.6mg/kg， 腹膜內，每周2次)或AR-42(50mg/kg，口服，每隔一天)治療的荷瘤小鼠的示例性的Kap 1 an- Meier存活率曲線。存活被定義為體重(不包括腫瘤）的損失達到起始體重的20%的時間，其 充當退出研究的人道終點(*，P<〇. 001，媒介物對AR-42; η = 8);
[0034] 圖2C示出了來自每組的代表性小鼠的示例性照片，描繪了AR-42對vorinostat和 romidepsin在荷瘤小鼠中對癌癥惡病質的治療作用，如姿態、皮毛化aircoat)和身體狀況 所證明的；
[0035] 圖2D示出了在腫瘤細胞注射后15天，與媒介物-治療的荷瘤小鼠 （n = 8)相比，媒介 物治療的無腫瘤小鼠 （n = 6)和用AR-42(n = 8)、￥〇1'；[]1〇31:曰1:(]1 = 8)或1'〇1111(1邱3；[]1(]1 = 5)治 療的荷瘤小鼠的骨骼肌中Atrogin-l//MAFbx和MuRFl的示例性相對mRNA表達水平。W平均 值±5.0.呈現數據，P值:a, <0.001 ;b ,0.016 ;c ,0.0063;
[0036] 圖3A示出了對與糖酵解和葡萄糖代謝的旁路途徑相關的中間物的水平的示例性 作用；
[0037] 圖3B示出了AR-42對來自無腫瘤小鼠和荷瘤小鼠（每組n = 8)的脾腸肌肌肉中糖原 代謝的示例性的作用。從腫瘤細胞注射后第6天開始，用媒介物或AR-42(50mg/kg，口服，每 隔一天)治療荷瘤小鼠，在第17天結束。用媒介物或AR-42平行治療無腫瘤對照小鼠。W盒須 圖呈現數據。盒的底部和頂部代表第一和第Ξ四分位數，并且V'號和盒內的帶分別代表平 均數和中位數值。須的終點代表每組的最大值和最小值；
[003引圖4示出了，AR-42阻斷C-26荷瘤小鼠的肌肉中游離氨基酸和參與調節神經傳遞的 氨基酸代謝物W及膜島素抗性的生物標志物的水平的惡病質誘導的變化。從按圖3A和3B所 述的實驗產生用于分析的樣品。按圖3A和3B所述W盒須圖呈現數據；
[0039] 圖5A示出了（上圖）AR-42對無腫瘤對C-26荷瘤小鼠的血清中促惡病質細胞因子 比-6(左)和LIF(右）的水平的示例性的作用，W及(下圖MR-42對無腫瘤對C-26荷瘤小鼠的 骨骼肌中比-6Ra的mRNA表達的作用的qPCR分析。W平均值± S. D.呈現數據，P值:a，<0.001; b，0.006;C，0.012(n = 3)。按圖3所述治療小鼠；
[0040] 圖5B示出了 RNA-序列數據(左)和文氏圖（右）的示例性主成分分析，示出了四個治 療組中差異表達的基因 。TF，無腫瘤;T，荷瘤的；veh，媒介物治療的;AR，AR-42治療的。按圖3 所述治療小鼠；
[0041] 圖5C示出了通過RNA-序列進行的AR-42對6個關鍵促惡病質驅動物的轉錄物水平 的作用的示例性分析（P值：a，〇.〇24;b，0.028; C ,0.015 ;d，0.007; e，0.024;f ,0.026 ;g, 0.01;h，0.012;i，<0.001;j，0.014;n = 3)。按圖 3 所述治療小鼠；
[0042] 圖加示出了四個治療組的小鼠的骨骼肌中通過qPCR進行的AR-42對6個關鍵促惡 病質驅動物的轉錄物水平的作用的示例性分析(*，？<0.001;11 = 6)。^平均值±5.0.呈現數 據。按圖3所述治療小鼠；
[0043] 圖6A示出了通過推遲AR-42的治療直到腫瘤和惡病質末期，在C-26荷瘤小鼠中抑 制癌癥惡病質。在18天的研究期間，媒介物治療的無腫瘤對照小鼠（T/F，Veh)和用媒介物治 療的荷瘤小鼠（T，Veh)對在第6天(T，AR42/D6)、第10天(T，AR42/D10)或第12天（T，AR42/ D12)開始用口服AR-42治療的那些，體重（不包括腫瘤）的變化（在左側示出KP值：a, 0.0015;b，0.023(n = 8)。箭頭表示AR-42治療開始的時間點。W平均值呈現數據。為了清楚 展示，沒有示出每個數據點的S.D.棒。右側是示出了在推遲治療試驗中，AR-42對C-26荷瘤 小鼠的腫瘤生長缺乏抑制作用的結果。W平均值±S.D.呈現數據(n = 8);
[0044] 圖6B示出了描繪盡管推遲治療，AR-42對荷瘤小鼠的癌癥惡病質的治療作用的示 例性照片，如由正常姿態、光滑皮毛和更好的身體狀況所證明的，盡管有大腫瘤負荷；
[0045] 圖6C示出了如圖6A所述在疾病進展的不同階段開始的AR-42治療對C-26荷瘤小鼠 的后肢肌肉，包括脾腸肌、腔骨前肌和四頭肌的重量的示例性作用。W平均值±S.D.呈現數 據(n = 8;*，P<0.001);
[0046] 圖6D示出了在第15天和第16天，相對于媒介物治療的無腫瘤和荷瘤對照，AR-42對 荷瘤小鼠的握力的作用。W平均值±S.D.呈現數據(n = 8;P值:a，0.01;b，0.022;c，<0.001; d，0.0019)DN，牛頓；
[0047]圖7示出了，在惡病質的化C小鼠模型中，AR-42保護免受癌癥誘導的肌肉消耗。示 出了與媒介物治療的荷瘤小鼠的那些相比，AR-42相對媒介物在無腫瘤小鼠和荷瘤小鼠二 者中對后肢肌肉，包括脾腸肌、腔骨前肌和四頭肌的質量的示例性作用。按圖1A所述的相同 方法治療小鼠，除了在腫瘤細胞注射后第20天處死小鼠。W平均值±S.D.呈現數據(n = 8); [004引圖8示出了用于實時RT-PCR的引物的示例性序列；
[0049] 圖9示出了AR-42和媒介物治療的C-26荷瘤小鼠 （n = 6)之間與肌肉疾病或功能相 關的差異表達基因（>4倍)的示例性Ingenuity Pathway Analysis(IPA) (QIAGEN)。
[0050] 圖10示出了來自用媒介物或AR-42治療的無腫瘤小鼠和c-26荷瘤小鼠的血清樣品 的示例性的細胞因子譜分析(平均數±5.0.;每組n = 3);并且
[0051 ]圖11示出了來自AR-42治療的對媒介物治療的C-26荷瘤小鼠 （η = 3)的肌肉中差異 表達基因（>4倍)的示例性RNA-序列分析。
[00對詳述
[0053] 在描述本文描述的幾個示例性方面之前，應該理解本發明不限于W下說明書中陳 述的構建或方法步驟的細節。本文描述的方面能夠W不同方式實施或完成。
[0054] 本文描述的方面公開了口服AR-42在削弱惡病質誘導的重量損失和骨骼肌萎縮W 及在癌癥惡病質的CD2F1小鼠結腸26(C-26)腫瘤模型中延長存活的作用。小鼠 CD2F1惡病質 模型在，例如BMC化11〇6'.2010化18;10:363中描述，其通過引用全文并入本文。觀察到的 抗-惡病質作用與AR-42在患病的肌肉組織中重編程細胞代謝和下調IL-6水平W抑制肌肉 消耗和不依賴AR-42降低腫瘤負荷的作用的、與惡病質相關的其他作用相關。
[0055] 本文描述的方面公開了口服AR-42在削弱惡病質誘導的重量損失、骨骼肌萎縮W 及在癌癥惡病質的Lewis肺癌化LC)腫瘤模型中延長存活的作用。參見，例如，Expert Opin Drug Discov.Nov 1,2009；4(11):1145-1155〇
[0056] 描述于美國專利號8,318,808的HDA巧Φ制劑可W用于本文描述的各種方法。運些 HDA巧Φ制劑是基于，例如，通過芳族Ω-氨基酸接頭與化馨合基序偶聯的脂肪酸。在許多 方面，HDA巧Φ制劑可W具有式：
[0化7]
[0化引其中X選自Η和CH3; Y是(CH2)n，其中η是0-2;Z選自（CH2)m和（CH)2，其中m是0-3; A 是控基;B是鄰氨基苯基或徑基;并且Q是面素、氨或甲基。
[0059] 在另一方面，本文描述的方法利用AR-42,也被稱為（S)-N-徑基-4-(3-甲基-2-苯 基下燒酷胺基)苯甲酯胺，其具有W下化學結構：
[0060]
[0061]在又另一個方面，AR-42包括鹽、溶劑化物、水化物、無水物、共晶物和其他結晶形 式和組合。AR-42可W被配制成具有增加的穩定性、增加的生物利用度、持續釋放和其他特 性的多種劑型。
[0062] 在一方面，HDA巧Φ制劑被分類表征為鋒依賴的或煙酷胺腺嚷嶺二核巧酸(NAD)依 賴的（Discov Med 10(54):462-470，November 2010)，并且基于其HDAC底物被分成具有 18 個家族亞型的4類：1 類化DAC 1、2、3和8);11類化DAC 4、5、6、7、9和 類(sirtuin 1-7 (SIRT));和IV類化DAC 11)。社.在另一個方面，HDAC抑制劑包括但不限于Vorinostat (SAHAKI類和II類抑制劑）、縮酪膚(Depsipeptide)I類抑制劑和AR-42(I類和Hb類抑制 劑）。參迅，魚幽，S化址l，B.D.and Allis，C.D. (2000)化ture403 :41-45。其他HDA巧審制劑 (例如，曲古抑菌素 A或TSA)抑制1類和2類HDACdHDA巧Φ制劑的底物的種類和亞型有差異。
[0063] 在其他方面，HDA巧Φ制劑抑制1類和2b類皿AC。在又另一方面，HDA巧Φ制劑是AR- 42。
[0064] 在癌癥惡病質的結腸26(C-26)腫瘤模型中，C26腫瘤的一部分被移植到同基因 BALB/c小鼠中并且小鼠發生未分化癌(undifferentiated carcinoma)。骨骼肌萎縮(通過 肌肉力量和抗疲勞的測量)與觀察的生化變化相關，并且模型被描述為"對于癌癥惡病質的 研究的良好標準化的實驗模型"。BMC化ncer.2010Jul 8;10:363。
[0065] 在一個方面，提供了通過W與未接受1類和化類HDA巧審制劑的哺乳動物相比，有效 地大體上保持哺乳動物的體重的量向患有癌癥的哺乳動物施用1類和化類HDA巧Φ制劑，抑 制所述哺乳動物的惡病質的方法。在另一方面，HDA巧Φ制劑是AR-42。
[0066] 在又另一方面，在用AR-42治療后約最初15天后，哺乳動物的體重不降低超過約 6%。
[0067] 在另一方面，癌癥選自由膜腺癌、結腸癌、頭部癌癥、頸部癌癥、胃癌和食道癌組成 的組。在另一方面，哺乳動物是人類。
[006引 AR-42可W W約Img/kg至約lOOmg/kg哺乳動物的量施用并且至少每日一次地施 用。在另一方面，AR-42每日兩次地W約50mg/kg哺乳動物體重的量施用。
[0069] 在又另一方面，與未接受AR-42的哺乳動物相比，化-6的水平降低了約56%。在另 一方面，與未接受AR-42的哺乳動物相比，白血病抑制因子化IF)的水平降低了約88%。在另 一方面，與未接受AR-42的哺乳動物相比，Atrogin-lmRNA的表達恢復到基底水平。
[0070] 在一個方面，與未接受AR-42的哺乳動物相比，MuRFlmRNA的表達恢復到基底水平。 在另一方面，與未接受AR-42的哺乳動物相比，惡病質誘導的IL-6RamRNA水平的升高降低了 約 85 %。
[0071] 在又另一方面，與未接受AR-42的哺乳動物相比，惡病質誘導的脂肪組織的損失大 體上恢復。在另一方面，與未接受AR-42的哺乳動物相比，惡病質誘導的骨骼肌纖維大小的 減小被AR-42恢復。
[0072] 還提供了保持患有癌癥的哺乳動物中的骨骼肌重量的方法，包括W與未接受1類 和化類皿A巧Φ制劑的哺乳動物相比，在至少15天的時間段內有效保持所述哺乳動物的骨骼 肌重量的至少約90%的量向所述哺乳動物施用1類和化類HDA巧Φ制劑。
[0073] 在另一方面，提供了延長患有癌癥的哺乳動物的存活的方法，包括W與未接受1類 和化類皿A巧Φ制劑的哺乳動物相比，有效地大體上延長哺乳動物的存活的量向所述哺乳動 物施用1類和化類HDA巧Φ制劑。在又另一方面，在向哺乳動物施用AR-42后，哺乳動物存活至 少約21天。
[0074] 在另一方面，AR-42的施用削弱了惡病質誘導的重量損失和骨骼肌萎縮并延長了 哺乳動物的存活。不圓于理論，認為抗-惡病質作用與AR-42重新編程細胞代謝和在患病的 肌肉組織中下調IL-6水平W抑制肌肉消耗的能力和其他不依賴AR-42對降低腫瘤負荷的作 用的其他惡病質-相關作用相關。
[0075] 在一個方面，用多種技術測量AR-42的抗-惡病質作用，所述技術包括癌癥中肌肉 萎縮的已確立的介質的表達的qRT-PCR分析（例如，Cancer Cell.2008Nov δ 1) 、 血清和脾腸肌肌肉組織中抗炎性細胞因子 的水平 的測量 (Am J Patho 1. 201 IMar; 178 (3): 1059-68)、代謝組譜分析（J Cachexia Sarcopenia Muscle.2013Jun;4(2): 145-55)、 測量肌肉組織中游離氨基酸的水平（J Cachexia Sarcopenia Muscle.2013Jun;4(2) :145- 55;Am J 陸ysiol 化docrinol Metab.2007化b;292(2):E501-12)、通過測量與糖酵解通路 相關的生化水平來測量惡病質的肌肉的"糖酵解簽名"（Caches ia Sar copen ia Muscle. 2013Jun:4(2):145-55)、測量惡病質的肌肉組織中糖原膽積水平（Cell Death Differ.20120ct :19(10):1698-708)、分析惡病質的肌肉中支鏈氨基酸的新陳代謝（Int J Biochem Cell Biol.20130ct;45(10) :2163-72)和測量惡病質肌肉中2-?基下酸和視晶酸 (ophthalmate)的水平（PLoS One.2010May 28;5(5):el0883;Int J Cancer.2010Feb 1; 126(3)756-63)。
[0076] 如本文描述的HDA巧Φ制劑，可W施用至需要治療的患者(例如，患有癌癥并且表現 出惡病質癥狀的患者）。在一個方面，某些癌癥尤其與惡病質相關，包括但不限于膜腺癌、胃 癌、頭部癌癥、頸部癌癥和食道癌Γ惡病質相關的癌癥"）。在另一方面，1類、2b類HDA巧審制 劑(例如，AR-42)被施用至需要治療的患者。
[0077] 如本文使用的，術語"大體上"指例如，不患有癌癥的哺乳動物的重量或量的"大多 數"、"大部分"或至少50 %、60 %、70 %、80 %和90 %。
[007引如本文使用的，術語"治療"、"降低"、"抑制（suppress)"、"抑制（inhibit)"、"預 防"或類似術語不必須指100%或完全治療或預防。而是，運些術語指如在本領域中被認為 是有益的特定疾病的治療或預防的不同程度(例如，100%、90%、80%、70%、60%、50%、 40%'30%'20%'10%、5%或1%)。
[0079]術語"治療"或"預防"也指將疾病的發作延遲一段時間或無限期地延遲發作。術語 "治療（treatment)"或"治療（treating)"指向患者施用藥物或治療或給患者開處方藥物 (例如，由醫生、護±或其他醫學專業人±)，其中患者或第Ξ方(例如，看護人、家庭成員或 健康護理人員）施用該藥物或治療。術語"有效的量'指治療、降低、抑制（suppress)、抑制 (inMbit)、預防疾病或病癥(例如，惡病質)或延長患有疾病或病癥的哺乳動物的存活的藥 物或治療(例如，I類和Ilb類HDA巧Φ制劑)的量。
[0080]如本文使用的，術語"延長(prolong)"或"延長(prolonging)"指與未接受治療的 哺乳動物相比，增加接受治療的哺乳動物的存活的時間。在此方面，"延長的存活"可W指使 哺乳動物的壽命增加例如，不患有癌癥的哺乳動物的壽命的1 %、5 %、10%、20%、30%、 40%'50%'60%'70%'80%或90%。
[0081 ] 本文描述的任何皿A巧Φ制劑可W經口、經腸道外儲庫-IM、SQ和儲庫-SQ)、 經舌下、經鼻（吸入）、經銷內、局部或經直腸施用。本領域技術人員已知的劑型適用于本文 描述的HDA巧Φ制劑的遞送。
[0082] 在一個方面，示例的皿A巧φ制劑W 口服劑型(例如，丸劑、膠囊劑、錠劑(caplet)或 片劑等)施用于被診斷患有與惡病質相關的癌癥(例如，膜腺癌、膀脫癌、胃癌、頭部癌癥和 頸部癌癥)的患者。
[0083] HDA巧Φ制劑可W被配制成適當的藥物制劑，諸如用于口服施用的片劑、膠囊劑或 馳劑，或用于腸道外施用的無菌溶液或懸液。本文描述的HDA巧Φ制劑可W用本領域公知的 技術和過程被配制成藥物組合物。
[0084] 在一個方面，在公認的藥學實踐要求的單位劑型中，約0.1至lOOOmg、約5至約 lOOmg或約10至約50mg的HDA巧Φ制劑(例如，AR-42)或生理學上可接受的鹽或醋可W與生理 學上可接受的媒介物、載體、賦形劑、粘合劑、防腐劑、穩定劑、調味劑等配合。包含HDA巧審制 劑的組合物或制劑中活性物質的量是使得獲得指示的范圍內的適當劑量的量。
[0085] 在另一方面，組合物可W配制成單位劑型，每個劑量包含從約1至約500mg或約10 至約lOOmg活性成分。術語"單位劑型"指的是適于作為用于人類受試者和其他哺乳動物的 單一劑量的物理上分散的單元，每一個單元包含計算W產生期望的治療效果的預先確定的 量的活性材料與合適的藥學賦形劑的組合。
[0086] 在一個方面，將一種或更多種HDA巧Φ制劑與適當的藥學上可接受的載體混合W形 成組合物。在混合或添加化合物時，所得的混合物可W是溶液、懸液、乳液或類似物。脂質體 懸液或任何其他納米顆粒遞送系統也可W用作藥學上可接受的載體。運些可W根據本領域 技術人員已知的方法制備。所得混合物的形式取決于許多因素，包括預期的施用方式和化 合物在選擇的載體或媒介物中的溶解性。在一個方面，有效濃度足W減少或緩解被治療的 疾病、素亂或病癥的至少一個癥狀，并且可W由經驗確定。
[0087] 在又另一方面，AR-42抑制惡病質中的肌肉消耗，如在惡病質的C-26和化C腫瘤模 型中示出的。促炎性細胞因子，化-6和TNF，代表兩個模型的主要促惡病質因子(31，32)。細 胞因子譜分析表明，盡管AR-42對C-26荷瘤小鼠的血清TNF水平沒有影響，它降低血清化-6 水平和肌肉內IL-6RamRNA表達。但是，與無腫瘤小鼠相比，運些AR-42-治療的C-26荷瘤小鼠 仍然表現出升高的血清IL-6水平和IL-6RamRNA，表明降低的IL-6信號傳導不單獨地對AR- 42介導的肌肉消耗的抑制負責。
[0088] 機械地，AR-42的抗-惡病質作用是獨特的，因為皿A巧Φ制劑丙戊酸和曲古抑菌素 A 不能逆轉C-26荷瘤小鼠的肌肉損失，盡管它們具有調節肌肉抑制素(myostatin)/卵泡抑制 素（follistatin)軸的能力（33)。類似地，我們的發現表明，與AR-42不同，vorinostat和 romid邱sin對削弱C-26模型中的惡病質誘導的重量損失無效。此矛盾可歸因于AR-42的更 強的抑制荷瘤小鼠的肌肉中E3連接酶Atrogin-巧日MuRFl的mRNA表達的能力，其可W反映它 們各自調節骨骼肌中全基因表達的能力的差異。近來的證據暗示異常的乙酷化/轉錄因子 表達和患病的肌肉中肌肉消耗之間的機械聯系，引起惡病質-相關基因的不受控的表達[綜 述：（34)]。已經報道，P300/CBP的組蛋白乙酷轉移酶活性差異性地調節骨骼肌中化XO家族 轉錄因子的轉錄活性和核定位（35)，W及I類皿AC，特別是皿AC1，通過調節Foxo及其祀 Atrogin-l和MuRFl的表達在介導營養匿乏引起的肌肉萎縮或肌肉廢用(muscle disuse)引 起的肌肉萎縮中起重要作用(22)。
[0089] RNA-序列分析掲示了 AR-42逆轉基因表達中腫瘤誘導的改變的能力。鑒定了總計 677個基因，所述基因在AR-42治療的荷瘤小鼠和媒介物-治療的荷瘤小鼠之間W4倍或更大 地差異性地表達。可W想到，差異化表達的基因的運樣大的數量可能由AR-42對多個轉錄因 子/調節物的轉錄活性和/或表達的作用產生。除了化xolW外，AR-42還調節許多其他轉錄 因子 / 調節物的表達，包括 C/EBPδ、Fos、Jun-b、DAXX、ERNl、HIF3α、MAFF、MAFK和Mef2c(圖 11)。在運些轉錄因子之中，已經詳細記載了Mef2c在骨骼、屯、臟和平滑肌的發育中的重要性 (36)，W及AP-1信號級聯與癌癥-相關的肌肉消耗有關(37)。
[0090] 已經提出，C-26荷瘤小鼠的惡病質肌肉表現出腫瘤Warbu巧生理學，其特征在于高 糖酵解率(38)。我們的新陳代謝數據掲示了 C-26荷瘤小鼠的骨骼肌代謝(其完全被AR-42逆 轉）的明顯的重新編程。此外，AR-42對2-徑基下酸和視晶酸、膜島素抗性的生物標志物（17) 和氧化應激（18)的抑制作用是值得注意的，因為大量證據已經將膜島素抗性(39,40)和氧 化應激(41)與惡病質相關聯。
[0091] 機械地，AR-42在荷瘤小鼠中保持骨骼肌的完整性的能力產生于其對多個轉錄程 序中腫瘤誘導的變化和代謝表型的多樣的、累積的作用。運是具有治療意義的:在腫瘤生長 末期，AR-42的經口施用仍然在減緩C-26荷瘤小鼠的肌肉消耗的進展中有效。整體上，運些 發現表明，HDA巧審制劑(例如，AR-42)可W被用作癌癥惡病質的綜合治療策略的一部分，如 本文描述的。
[0092] 本文描述的適用于HDA巧Φ制劑的施用的藥物載體或媒介物包括適用于特定施用 方式的任何運樣的載體。此外，活性材料也可W與不損害期望的作用的其他活性材料、或與 補充期望的作用或具有其他作用的材料混合。化合物可W在組合物中作為單獨的藥學活性 成分配制，或可W與其他活性成分組合。
[0093] 在另一方面，如果皿A巧Φ制劑表現出不足的溶解性，可W使用增溶的方法。運樣的 方法是已知的并且包括但不限于，使用助溶劑諸如二甲基亞諷(DMS0)、使用表面活性劑諸 如吐溫和溶解于碳酸氨鋼水溶液。化合物的衍生物，諸如鹽或前藥，也可W用于配制有效的 藥物組合物。
[0094] 化合物的濃度對于在施用時遞送一定量是有效的，該量減輕或緩解針對其施用化 合物的素亂的至少一個癥狀。典型地，配制組合物用于單劑量施用。
[0095] 在另一方面，本文描述的HDA巧Φ制劑可W與保護其免于從身體快速清除的載體制 備，諸如時間-釋放制劑或包衣。運樣的載體包括控釋制劑，諸如但不限于微囊化的遞送系 統。活性化合物可足W對受治療的患者施加治療上有用的作用、對受治療的患者不產 生不需要的副作用的量包括于藥學上可接受的載體中。治療有效濃度可W通過在受治療的 素亂的已知的體外和體內模型系統中測試化合物來從經驗上確定。
[0096] 在另一方面，本文描述的皿A巧Φ制劑和組合物可W封閉于多個或單個劑量容器 中。被封閉的化合物和組合物可W在試劑盒中提供，例如，包括可裝配在一起W便使用的部 件部分。例如，凍干形式的AR-42和適當的稀釋劑可W作為在使用前組合的獨立部件提供。 試劑盒可W包括AR-42和用于共同施用的第二治療劑。AR-42和第二治療劑可W作為獨立的 部件部分提供。試劑盒可W包括多個容器，每個容器容納本文描述的化合物的一個或更多 個單位劑量。在一個方面，容器可W適合期望的施用方式，包括但不限于用于經口施用的片 劑、明膠膠囊、延遲釋放膠囊和類似物；用于腸道外施用的儲庫產品、預填充注射器、安飯 瓶、小瓶和類似物；W及用于局部施用的貼片、medipad、霜劑和類似物。
[0097] 藥物組合物中示例性HDA巧審制劑的濃度將取決于活性化合物的吸收、失活和排出 速率、劑量時間表和施用的量w及本領域技術人員已知的其他因素。
[0098] 在另一方面，活性成分可W-次施用，或可分成W時間間隔施用的多個較小劑量。 應該理解，準確的劑量和治療持續時間是被治療的疾病的函數，并且可W使用已知的試驗 方案根據經驗確定或從體內或體外試驗數據推斷。應注意，濃度和劑量值也可W隨著待緩 解的狀況的嚴重性變化。還應理解，對于任何特定受試者，應該根據個體需要和施用組合物 或監督組合物的施用的人員的專業判斷隨時間調整具體的劑量方案，W及本文陳述的濃度 范圍僅是示例性的并且不意圖限定要求保護的組合物的范圍或實踐。
[0099] 如果期望經口施用，可W在保護其避免胃的酸性環境的組合物中提供化合物。例 如，組合物可W配制成保持其在胃中的完整性并且在小腸中釋放活性化合物的腸溶衣中。 組合物也可W與抗酸藥或其他運樣的成分組合配制。
[0100] 口服組合物一般包括惰性稀釋劑或可食用的載體，并且可W被壓制成片劑或包封 于明膠膠囊中。出于經口治療施用的目的，一種或更多種活性化合物可W與賦形劑合并，并 且可片劑、膠囊劑或錠劑的形式使用。藥學上相容的粘合劑和佐劑材料可W作為組合 物的一部分包括。
[0101] 片劑、丸劑、膠囊劑、錠劑和類似物可W包含任意的W下成分或具有類似性質的化 合物:粘合劑，諸如但不限于黃著膠、阿拉伯膠、玉米淀粉或明膠;賦形劑諸如微晶纖維素、 淀粉或乳糖;崩解劑諸如但不限于海藻酸和玉米淀粉;潤滑劑諸如但不限于硬脂酸儀;助流 劑諸如但不限于膠體二氧化娃;甜味劑諸如薦糖或糖精;和矯味劑諸如薄荷、水楊酸甲醋或 水果矯味劑。
[0102] 當單位劑型是膠囊劑時，它可W包含，除W上類型的材料W外，液體載體諸如脂肪 油。此外，單位劑型可W包含多種其他材料，其修飾劑量單位的外形，例如，糖包衣和其他腸 溶劑。化合物也可W作為馳劑、懸液、糖漿、薄片(wafer)、口香糖或類似物的一部分施用。糖 漿可W包含，除活性化合物W外，薦糖作為甜味劑和某些防腐劑、染料和著色劑W及矯味 劑。
[0103] 活性材料也可W與不損害期望的作用的其他活性材料、或與補充所需作用的材料 混合。HDA巧Φ制劑可W，例如，與抗腫瘤劑、激素、醬類化合物或視黃醇組合使用。抗腫瘤劑 可W是許多化療劑之一，諸如烷基化劑、抗代謝物、激素劑、抗生素、秋水仙堿、長春花生物 堿、L-天冬酷胺酶、丙卡己阱(procarbazine)、徑基脈、米托坦(mitotane)、亞硝基脈類或咪 挫甲酯胺。適當的試劑包括促進微管蛋白去極化的那些試劑。實例包括秋水仙堿和長春花 生物堿類，包括長春花堿和長春花新堿。
[0104] 在另一方面，本文描述的HDA巧Φ制劑可W共同施用或在用疫苗免疫患者之前或之 后施用W增強對疫苗的免疫應答。在一個方面，疫苗是，例如，DNA疫苗和HPV疫苗。
[0105] 在一個方面，用于腸道外的、經皮的、皮下的或局部應用的溶液或懸液可W包括任 意W下組分:無菌的稀釋劑諸如注射用水、鹽水溶液、不揮發性油、天然存在的植物油諸如 芝麻油、挪子油、花生油、棉巧油和類似物，或合成的脂肪媒介物諸如油酸乙醋和類似物、聚 乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶劑;抗微生物劑諸如苯甲醇和對徑基苯甲酸甲醋類;抗 氧化劑諸如抗壞血酸和亞硫酸氨鋼;馨合劑諸如乙二胺四乙酸化DTA);緩沖劑諸如乙酸鹽、 巧樣酸鹽和憐酸鹽;和用于調節滲透壓的試劑諸如氯化鋼和右旋糖。腸道外制劑可W封裝 于安飯瓶、一次性注射器或玻璃、塑料或其他適當的材料制成的多劑量小瓶中。可W按需要 滲入緩沖劑、防腐劑、抗氧化劑和類似物。
[0106] 當經靜脈施用時，適當的載體包括但不限于，生理鹽水、憐酸鹽緩沖鹽水(PBS)和 包含增稠劑和溶解劑(諸如葡萄糖、聚乙二醇、聚丙二醇及其混合物)的溶液。包括組織祀向 的脂質體的脂質體懸液或任何其他納米顆粒遞送系統也可W適合作為藥學上可接受的載 體。運些可W根據本領域已知的方法制備。
[0107] 在其他方面，HDA巧Φ制劑可W與保護化合物避免身體快速清除的載體制備，諸如 時間釋放制劑或包衣。運樣的載體包括控釋制劑，諸如但不限于植入物和微囊化的遞送系 統和可生物降解的、生物相容的聚合物諸如膠原蛋白、乙締乙酸乙醋（ethylene vinyl ace化te)、聚酸酢、聚乙醇酸、聚原酸醋、聚乳酸和類似物。制備運樣的制劑的方法是本領域 技術人員已知的。
[0108] 在又另一方面，在本公開內容的方法中使用的化合物可W經腸道或經腸道外施 用。當經口施用時，在本公開內容的方法中使用的化合物可本領域技術人員公知的用 于經口施用的一般劑型施用。運些劑型包括片劑和膠囊劑的一般固體單位劑型和液體劑 型，諸如溶液、懸液和馳劑。當使用固體劑型時，它們可W是持續釋放類型，運樣在本文描述 的方法中使用的化合物需要每日僅施用一次或兩次。
[0109] 口服劑型可W向患者每日施用1次、2次、3次或4次。本文描述的HDA巧審制劑可W每 日施用3次或更少的次數，或甚至每日1次或2次。因此，在本公開內容的方法中使用的HDAC 抑制劑化合物可口服劑型施用。無論使用何種口服劑型，它們可W被設計W保護本文 描述的方法中使用的化合物免受胃的酸性環境。腸溶包衣片是本領域技術人員公知的。此 夕h用每個被包衣W保護免受酸性的胃的小球填充的膠囊，也是本領域技術人員公知的。
[0110] 使用術語"治療有效量"和"治療有效的時間段"表示W對降低腫瘤細胞生長有效 的劑量和時間段的治療。如W上所述，運樣的施用可W是腸道外的、經口的、經舌下的、經皮 的、局部的、鼻內的或直腸內的。在一個方面，當全身施用時，治療組合物可足W將化合 物的血液水平保持在從約0. ΙμΜ至約1 OOmM的劑量施用。對于局部施用，比此低得多的濃度 可W是有效的，并且高得多的濃度是可W被耐受的。本領域技術人員將理解，導致HDA巧審制 劑或AR-42的較低有效濃度的運樣的治療作用可隨著組織、器官或待被治療的特定動物或 患者大幅變化。還應理解，盡管患者可W在一個劑量開始，該劑量可W隨著患者狀況改變而 隨時間變化。
[0111] 對本領域技術人員應明顯的是:施用的準確劑量和頻率將根據施用的本公開內容 的方法中使用的特定化合物、被治療的特定狀況、被治療的狀況的嚴重程度、特定患者的年 齡、重量、總體身體狀況W及該個體可能服用的其他藥物，如本領域的管理醫師公知的。 實施例
[0112] W下非限制性實施例說明了本文描述的方面。
[01。] 實施例1
[0114] 癌癥惡病質模型 [011引 C-26模型
[0116] 在一個方面，通過向雄性CD2F1小鼠（大約6周齡；HarIan Laborator ies , Indianapolis，IN)的右脅皮下注射C-26細胞(0.5xl06細胞于0.1ml)建立腫瘤（11)。將荷瘤 小鼠 W及作為非-惡病質對照的無腫瘤小鼠隨機分配到用AR-42(50mg/kg，通過灌胃口服， 每隔一天;Arno Therapeutics,Inc. ,Flemington,NJ)或媒介物(0.5% 甲基纖維素(w/v)和 0.1%吐溫-80(v/v)于無菌水)治療的組中，治療從細胞注射后6天開始。為了研究推遲治療 的作用，在癌細胞注射后6、10和12天開始用藥物和/或媒介物治療。
[0117] 在另一方面，比較AR-42與其他皿AC抑制劑的作用。在此方面，用vorinostat (50mg/kg，口服，每日一次）和;romidepsin(0.6mg/kg ;腹膜內；每周2次）（ChemieTek (Indianapo 1 iS, IN))治療C-26荷瘤小鼠的另外的組。
[011引 LLC模型
[0119] 在另一方面，通過向右脅注射0.5x106LLC細胞在雄性巧7BL/6小鼠（大約6周齡； 化rlan)中建立皮下腫瘤。從細胞注射后6天開始，如對C-26模型一樣進行用AR-42和媒介物 的治療。在兩個模型中，每日監測體重和食物消耗，并且不低于每兩天地測量腫瘤大小。處 死前將小鼠禁食2小時，在處死時收集后肢肌肉、屯、臟、脾臟、附睪脂肪和血液，并且測量實 體組織的重量。在液氮冷卻的2-甲基下燒中冷凍肌肉樣品，并且隨后儲存在-80°C直到分 析。
[0120] 實施例2
[0121] 握力測量
[0122] 小鼠使用數字握力計(Col皿bus Ins化uments,Columbus,0H)測量前肢握力。從每 個小鼠得到5個測量，其平均數被指定為該小鼠的握力。
[01U]肌肉纖維大小的形態計量分析
[0124]使用低溫恒溫器化eica)從冷凍的骨骼肌樣品上切下10-μπι切片并隨后用H&E染 色。使用Olympus ΒΧ51顯微鏡（Olympus America, Inc.)拍攝圖像，并且使用Olympus CellSens 1.11軟件確定肌肉纖維橫截面面積。從每個組的5只小鼠的每一只的肌肉的5個 不同切片得到測量值。
[01巧]RNA分離、qRT-PCR和RNA-序列分析
[01%]用TRIzol試劑(Xife Technologies,Carlsbad,CA)從勻質化的脾腸肌肌肉（n = 3/ 組)分離總RNA，并且隨后使用RNAeasy迷你試劑盒(Qiagen,化lencia,CA)純化。如之前所述 (42)，使用具有iQ SYBR Green Supermix的Bio-Rad CFX96實時PCR檢測系統（Bio-Rad, Hercules，CA)進行qRT-PCR。圖8中列出了引物序列。在俄亥俄州立大學綜合癌癥中屯、 (0SUCCC)核酸共享資源進行RNA-序列庫生成和數據分析。
[0127] 代謝組學和細胞因子圖譜分析
[0128] 在細胞注射后第17天，從每個治療組收集脾腸肌肌肉和血清(n = 8/組）。將肌肉提 交給Metabolon，Inc. (Durham,NC)用于通過專有質譜平臺進行270個代謝中間物的代謝組 學分析。將血清提交給Eve Technologies(A化erta,Canada)用于使用小鼠細胞因子陣列 (32-重板)進行32個細胞因子的分析。
[0129] 統計學分析
[0130] 通過使用SAS 9.3軟件(SAS，Inc;化巧，NC)進行數據分析。對于使用重復量度的試 驗，用混合作用模型分析數據，并入遍及每個受試者的觀測依賴性。對于設及獨立組的其他 試驗，用AN0VA分析數據。對于時間-對-事件試驗（圖2B )，用對數-秩檢驗比較存活功能的差 異。用化Im's方法調整多樣性W控制總體家族誤差率在0.05。通過使用Ingenuity Pathway Analysis(IPA)軟件（Ingenuity Systems,Redwood City,CA)分析RNA-序列數據。僅選擇> 4倍變化且P<0.05的基因用于通路分析。
[0131] 實施例3
[0。。AR-42抑制C-26結腸腺癌模型的癌癥惡病質
[0133]在一個方面，從注射C-26細胞后6天，當形成明顯的腫瘤時，每隔一天用AR-42 (50mg/kg)或媒介物通過灌胃經口地治療小鼠。媒介物組顯示出從第12天開始的體重的大 幅下降，而AR-42治療的小鼠保持它們的體重在與無腫瘤對照的小鼠的體重相當的水平（圖 1A，左圖）。截止到研究終點（第15天），減去腫瘤的質量（1 cm3體積=1克質量)后，媒介物-治 療組的重量損失的大小達到>20%，并且AR-42-治療小鼠的重量損失達到6% (中圖）。此效 應不能歸因于降低的腫瘤負荷，因為AR-42不相對于媒介物改變腫瘤生長(右），或增加食物 攝入，因為平均每日消耗在AR-42-治療組和媒介物-治療組是相當的，并且低于無腫瘤小鼠 的平均每日消耗（圖1C)。盡管AR-42-治療的小鼠有大腫瘤負荷，它們警覺、反應敏捷、有活 力，并且在截止研究終點，不具有在媒介物-治療的相對物中觀察到的駝背的姿態和粗糖的 皮毛（圖1B)。
[0134] 實施例4
[0。引 AR-42保護肌肉避免惡病質誘導的萎縮癥
[0136] 與體重的維持一致，在AR-42-治療的荷瘤小鼠中維持骨骼肌重量。作為惡病質的 指示，相對于來自無腫瘤對照小鼠的相應肌肉，來自媒介物治療的荷瘤小鼠（荷瘤的/媒介 物）的脾腸肌、腔骨前肌和四頭肌的重量分別降低了20.6%、10.5%和18.1%，而AR-42治療 的荷瘤小鼠（荷瘤的/AR-42)中的那些肌肉的重量分別降低了 9.6%、0.8%和5.8%(圖10)。
[0137] 荷瘤的/媒介物小鼠表現出惡病質的其他標志，包括屯、臟組織和特別是脂肪組織 質量的顯著損失（無腫瘤對照的29.3±6.0%)，運被AR-42治療緩解（圖1E，上圖）。有趣的 是，AR-42顯著降低了無腫瘤小鼠的脂肪組織質量的大約50%，但是使荷瘤小鼠的脂肪組織 質量的損失恢復到與無腫瘤/AR-42小鼠相當的水平，運個二分的作用表明其保持脂質平衡 的能力。
[0138] 在另一方面，相對于無腫瘤對照小鼠（11)，C-26荷瘤小鼠表現出嚴重擴大的脾臟， 運沒有通過AR-42改善（圖化，下圖）。由于C-26荷瘤小鼠的脾增大來自骨髓源抑制細胞和脾 臟(12)中其他免疫細胞的擴張，此發現表明，AR-42主要作用于肌肉而非通過免疫機制。
[0139] AR-42抗肌肉損耗的保護性作用通過終止惡病質-引發的骨骼肌纖維大小的減小 證明。相對于無腫瘤對照，荷瘤的/媒介物小鼠在第15天的肌肉纖維的平均橫截面積表現出 48.2 % 的降低（1297.6 ± 638.8對2503.5 ± 917.5μπι2)，其被AR-42恢復（2146.3 ± 923.4μπι2) (圖2Α，左圖）。荷瘤的/媒介物小鼠的惡病質肌肉中，纖維大小分布向更小的橫截面積的突 出轉變被AR-42逆轉（圖2Α，右圖）。
[0140] AR-42延長了 C-26荷瘤小鼠的存活
[0141 ] 在C-26荷瘤小鼠中比較AR-42與其他HDA巧審制劑（即，vorinostat和romid邱sin) 的作用。從腫瘤細胞注射后第6天開始，用AR-42(每隔一天50mg/kg，經口地）、vorinostat [每日一次50mg/kg，經口地（13)] jomid邱sin[每周兩次0.6mg/kg，腹膜內（14)]或媒介物 連續治療小鼠，直到重量損失達到開始重量的20%，如通過每日體重測量和減去腫瘤質量 確定的。如所示的，口服AR-42在保護運些小鼠免受腫瘤-相關的損耗方面有效，在第21天當 腫瘤體積達到安樂死的闊值時具有100%累計存活率（圖2B)。與之相比，vorinostat和 romidepsin對體重表現出有限的或無可觀的保護作用。此外，與媒介物-(第15天）、 romidepsin-(第16天)和vorinostat-治療的小鼠（第18天)不同，荷瘤的/AR-42小鼠在腫瘤 細胞注射后的21天警覺、反應敏捷、有活力，并且表現的健康(圖2C)。
[01創實施例3
[01創對骨骼肌蛋白質周轉的調節的差異化作用
[0144] 骨骼肌質量由蛋白質合成和降解之間的平衡調節。不圓于理論，相信AR-42對 vorinostat和romidepsin的差異化的抗惡病質作用可W歸因于其調節控制蛋白質周轉的 通路的能力的差異。運由AR-42對Atrogin-1/MAFbx和MuRFl的mRNA表達的抑制作用支持， Atrogin-1/MA即X和MuRFl是參與泛素-介導的骨骼肌蛋白降解（15，16)的兩種E3連接酶（圖 2D)。
[0145] 脾腸肌肌肉的qPCR掲示了，相對于無腫瘤/媒介物對照(n = 6)，惡病質肌肉（荷瘤 的/媒介物;n = 8)中Atrogin-1和MuRFlmRNA水平的顯著升高(分別為29.4 ± 3.5倍和25.8 ± 3.9倍）eAR-42能夠將Atrogin-1 (2.7 ±0.7倍)和MuRFl (1.1 ±0.2倍)mRNA的表達恢復到基 礎水平(n = 8) eVo;rinostat(n = 8)和romid邱sin(n = 5)也顯著降低惡病質肌肉中運兩種E3 連接酶的mRNA表達，但W比AR-42更小的程度(Ahogin-l/MuRFI: vorinostat，9.6 + 1.8/ 5.5±1.1倍^〇1111(1巧3111，19.6±3.1/14.6±3.3倍）（圖20)。
[0146] 為確認AR-42的抗惡病質活性不是對C-26模型特異性的，還在化C模型中評價。月中 瘤細胞注射后6天開始，用AR-42(50mg/kg，口服，每隔一天)治療荷皮下化C腫瘤的巧7BL/6 小鼠，并且持續直到第20天，此時處死收獲后肢肌肉。如圖7中所示，AR-42保護荷LLC腫瘤的 C57化/6小鼠避免肌肉質量損失（脾腸肌:媒介物，非-惡病質對照的81.7 ± 3.7 % ; AR-42， 92.2±3.5%;腔骨前肌:媒介物，80.3±4.0%;43-42,93.4±3.9%;四頭肌:媒介物，84.4 ±4.6%;43-42,93.4±4.8%;所有?值<0.05，11 = 8)。
[0147] 實施例4
[014引 AR-42在荷瘤小鼠中保持肌肉的代謝完整性
[0149] 由于惡病質，骨骼肌響應腫瘤/宿主衍生的炎性和神經內分泌應激因子（1)而經歷 復雜的代謝變化。因此，我們進行了代謝譜分析W探究AR-42對惡病質誘導的骨骼肌的代謝 表型的變化的作用。如上所述用媒介物或AR-42治療無腫瘤小鼠和C-26荷瘤小鼠，在第17天 收集脾腸肌肌肉用于代謝組學分析。在4組(n = 8/組）中的肌肉生化譜的比較掲示了 AR-42 恢復骨骼肌中惡病質誘導的代謝變化的能力，其如W下總結的。
[0150] 糖酵解.來自荷瘤的/媒介物小鼠的惡病質肌肉表現出比無腫瘤對照的顯著更低 的葡萄糖和關鍵糖酵解中間物的水平（圖3A)"AR-42逆轉了運些代謝變化，將葡萄糖和中間 物的肌肉內水平恢復至，或者，在一些情況下，高于在無腫瘤/媒介物小鼠中檢測的基線水 平。此外，升高的葡萄糖被分流到山梨糖醇-果糖生物合成和戊糖憐酸途徑，導致山梨糖醇、 果糖、核糖(一種源自戊糖憐酸途徑的代謝物)的增加的產生。
[0151] 糖原膽積.來自荷瘤的/媒介物小鼠的肌肉顯示出短鏈低聚麥芽糖和葡萄糖-1-憐 酸的顯著降低（圖3B)，表明惡病質肌肉的糖原膽積的耗盡。AR-42治療顯著地補充了運些糖 原代謝中間物。
[0152] 游離氨基酸.與表征肌肉消耗的升高的蛋白質降解一致，來自荷瘤的/媒介物小鼠 的惡病質肌肉中大量游離氨基酸相對于無腫瘤/媒介物小鼠中的那些顯著地提高（圖4)，表 明惡病質表型。類似地，充當神經遞質的幾個氨基酸衍生物/代謝物增加，包括犬尿氨酸 化ynurenin)、N-乙酷基-天口冬氨酷-谷氨酸和丫-氨基下酸。相反，丙氨酸，其由肌肉釋放 W支持肝糖異生，在惡病質肌肉中降低。此惡病質表型被AR-42治療逆轉，表明其阻止肌肉 蛋白質降解的能力。
[0153] 有機酸.氨基酸代謝物2-徑基下酸和視晶酸分別是膜島素抗性（17)和氧化應激 (18)的生物標志物。運兩種有機酸在荷瘤的/媒介物小鼠的肌肉中的增加（圖4)表明，惡病 質促進膜島素抗性和氧化應激，其反過來加劇肌肉消耗。AR-42將兩種生物標志物急劇降低 至與在無腫瘤小鼠中測量的那些相當的水平。
[0154] 實施例5
[01巧]AR-42通過祀向多個促-惡病質驅動物抑制癌癥惡病質
[0156] 為闡釋AR-42藉W介導其抗-惡病質作用的機制，分別使用來自媒介物或AR-42-治 療的無腫瘤小鼠和C-26荷瘤小鼠的血清和脾腸肌肌肉用于細胞因子譜分析和全轉錄組鳥 槍測序法(RNA-序列）。
[0157] 細胞因子譜.32種檢測的細胞因子中（圖10)，IL-6和白血病抑制因子化IF)，兩種 公認的惡病質驅動物（19)，在荷瘤的/媒介物小鼠的血清中相對于無腫瘤/媒介物小鼠顯著 增加（比-6,230±105對2.9±1.3口邑/1111;1^尸，19.7±9.3對1.7±1.5口邑/1111)(圖54，上圖），而 沒有觀察到其它細胞因子的顯著差異。與媒介物-治療的相對物相比，在荷瘤小鼠中，AR-42 分別降低了比-6和LIF水平的56 %和88 % (化-6，102 ± 38pg/ml; LIF，3.8 ± 1.6pg/ml)。鑒于 AR-42減弱比-6的惡病質相關的增加的能力，我們檢驗了AR-42對化-6受體α鏈（比-6Ra)的 肌肉內mRNA水平的作用。與無腫瘤小鼠 （n = 6)的a-6RamRNA相比，荷瘤的/媒介物小鼠 （n = 9)的肌肉中IL-6RamRNA顯著增加（13± 1.4倍）dAR-42將此惡病質誘導的增加降低了85% (2.0±0.2倍;11=10)(圖5，下圖）。運些發現表明，41?-42部分通過阻斷化-6信號傳導抑制肌 肉消耗。
[015引 RNA-序列分析.RNA-序列數據的主成分分析(Principal component analysis)掲 示了相對于無腫瘤/媒介物對應物，C-26腫瘤在荷瘤的/媒介物小鼠的肌肉中對全基因表達 模式的明顯的作用（圖5B，左圖）。盡管AR-42在無腫瘤小鼠的非-惡病質肌肉中對基因表達 的模式沒有明顯作用，它將腫瘤-誘導的惡病質肌肉的基因表達的變化逆轉至接近無腫瘤 小鼠的狀態。據此，我們進行了荷瘤的/媒介物小鼠和其他Ξ個治療組之間的差異化表達基 因的配對分析，其結果在文氏圖中展現（圖5B，右側）。配對分析的重疊的大面積表明，AR-42 W很大程度恢復全基因表達中腫瘤-誘導的變化。
[0159] 來自媒介物-和AR-42-治療的荷瘤小鼠的肌肉的基因表達的配對比較掲示了具有 4倍或更大的差異化表達的總計677個基因（376個上調和301個下調）（圖10)。使用 Ingenuity Pathway Analysis!；IPA)對運些基因組學數據進行的功能和疾病相關的分析掲 示了，運些差異化表達基因的66個被注釋為萎縮癥、收縮能力、發育和肌肉形態W及骨骼肌 細胞大小、肌肉細胞死亡和蛋白質分解代謝的類別（圖11)。
[0160] 運些肌肉功能-相關基因和疾病-相關基因中，鑒于其已經建立的與癌癥-誘導的 惡病質的聯系，AR-42對W下6個基因的作用是值得注意的。運些包括化xol(編碼叉頭框蛋 白01 )(20-23)及其祀基因 Trim63(MuRFl)和即xo32(Atrogin-l )(24,25)、PNPLA2[脂肪組織 甘油Ξ醋脂肪酶(ATGL) ] (26，27)、UCP3(解偶聯蛋白3) (28，29)和Mef 2c[肌源性轉錄因子肌 細胞增強因子](30)(圖5C)。由qRT-PCR進行的運6個基因的RNA-序列數據的驗證表現了4個 治療組中相對mRNA表達水平的數據組之間的高相關性（圖5D)。
[0161] 實施例6
[01創延遲的AR-42治療在抑制肌肉損耗中保持有效
[0163] W上發現證明了口服AR-42通過在骨骼肌中恢復代謝和基因表達譜在抑制癌癥相 關的肌肉損耗中的效力。在那些試驗中，在惡病質進展早期當損耗的明顯的標志不可檢測 時開始治療。為研究AR-42治療的推遲的開始是否依然保護免受惡病質，在腫瘤細胞注射后 6天、10天和12天開始用AR-42 (50mg/kg，口服，每隔一天)治療C-26荷瘤小鼠。
[0164] 與我們的早期數據（圖1) 一致，截止到第17天，荷瘤的/媒介物小鼠損失體重(不包 括腫瘤）的19%。與之相比，在第6天(D6)、第10天(D10)或第12天(D12)開始的AR-42治療分 別將體重損失限制在6%、11%和12%(n = 8)(圖6A，左圖），對腫瘤生長無明顯作用（右圖）。 此外，AR-42-治療的小鼠表現出比其媒介物-治療的對應物更好的健康的跡象（圖6B)。AR- 42 的運個保護作用反映在脾腸肌重量和， W 更小的程度，腔骨前肌和四頭肌肌肉的重量的 保留上（圖6C)。與對肌肉質量的保護作用一致，手握肌力測定法化andgr iP dynamomet巧） 表明，在第15和16天，相對于媒介物-治療的對照，在所有藥物治療組中，AR-42幫助保留前 肢肌肉力量(圖6D)。
[01化]實施例7
[0166] 荷瘤的/媒介物小鼠表現出惡病質的其他標志，包括屯、肌，和特別是，脂肪組織質 量的顯著損失(無腫瘤對照的29.3±6.0%)，該損失由AR-42治療緩解（圖化，上圖）。有趣的 是，AR-42顯著降低了無腫瘤小鼠的脂肪組織質量的大約50%，但是使荷瘤小鼠的脂肪組織 質量的損失恢復到與無腫瘤/AR-42小鼠相當的水平，運個對立的作用表明其保持脂質平衡 的能力。
[0167] 相對于無腫瘤對照小鼠（11)，C-26荷瘤小鼠表現出嚴重擴大的脾臟，運沒有通過 AR-42改善（圖1E，下圖）。由于C-26荷瘤小鼠的脾增大來自骨髓源抑制細胞和脾臟中其他免 疫細胞的擴張（12)，此發現表明，AR-42主要作用于肌肉而非通過免疫機制。
[0168] AR-42抗肌肉損耗的保護性作用通過終止惡病質-引發的骨骼肌纖維大小的減小 證明。相對于無腫瘤對照，荷瘤的/媒介物小鼠在第15天的肌肉纖維的平均橫截面積表現出 48.2 % 的降低（1297.6 ± 638.8對2503.5 ± 917.5μπι2)，其被AR-42恢復（2146.3 ± 923.4μπι2) (圖2Α，左圖）。荷瘤的/媒介物小鼠的惡病質肌肉中，纖維大小分布向更小的橫截面積的突 出轉變被AR-42逆轉（圖2Α，右圖）。
[01~]實施例8
[0170] 對骨骼肌蛋白質周轉的調節的差異化作用
[0171] 由于骨骼肌質量由蛋白質合成和降解之間的平衡調節，AR-42對vorinostat和 romid邱sin的差異化的抗惡病質作用可W歸因于其調節控制蛋白質周轉的通路的能力的 差異。運由AR-42對Atrogin-1/MAFbx和MuRFl的mRNA表達的抑制作用支持，Atrogin-1/ ΜΑ即X和MuRFl是參與泛素-介導的骨骼肌蛋白降解的兩種E3連接酶（15，16)(圖2D)。如預期 地，脾腸肌肌肉的qPCR掲示了，相對于無腫瘤/媒介物對照(n = 6)，惡病質肌肉（荷瘤的/媒 介物;n = 8)中Mrogin-l和MuRFlmRNA水平的顯著升高（分別為29.4±3.5倍和25.8±3.9 倍）dAR-42能夠將Atrogin-1 (2.7 ±ο. 7倍)和MuRFl (1.1 ±ο. 2倍)mRNA的表達恢復到基礎水 平(n = 8)。￥〇1'；[]1〇31:曰1:(]1 = 8)和1'〇1111(1邱3；[]1(]1 = 5)也顯著降低惡病質肌肉中運兩種63連接 酶的mRNA表達，但 W 比AR-42更小的程度(Atrogin-l/MuRFl: vorinostat，9.6 ± 1.8/5.5 ± 1.1倍^〇1111(1巧3111，19.6±3.1/14.6±3.3倍）（圖20)。
[017。實施例9
[0173] im
[0174] 在37°C、5%C02的濕潤培養箱中，將培養的C-26和化C細胞分別保持在胎牛血清 (FBS)-補充的（10%)RPMI 1640培養基和DMEM培養基（Invitrogen，Carlsbad，CA)中。為了 注射進入小鼠建立癌癥惡病質模型，通過膜蛋白酶處理收獲細胞、在FBS-補充的培養基中 沉淀并且隨后W5 X 106細胞/ml的濃度重懸于無菌PBS中。
[0175] 小鼠
[0176] 在恒定光周期（12小時光照/12小時黑暗）、溫度和濕度W及自由飲水和標準飲食 的條件下，將CD2F1和巧7BL/6小鼠群養。通過口服灌胃施用藥物(AR-42、vorinostat、媒介 物)期間，將小鼠短暫地麻醉(異氣燒，3-4%)。通過每日稱量每籠的食物的重量并且用食物 的每日降低量除W籠中小鼠的數目來估計食物消耗。使用標準公式(長X寬2xV6)從測徑儀 (ca 1 i P er)測量值計算腫瘤體積。
[0177] 握力測量
[0178] 為測量前肢握力，握住每只小鼠的尾己的基部，并將其在儀器上方降低，直到其前 爪抓住拉桿。然后將小鼠沿水平方向W直線從握力計緩緩移開，直到小鼠釋放桿，并且記錄 獲得的最大力。從每個小鼠得到5個測量值，其平均數被指定為該小鼠的握力。
[0179] RNA-序列庫的產生和數據分析流水線
[0180] 使用Pico RNA忍片在Agilent 2100生物分析儀上評價RNA質量，并且使用Agilent Qubit RNA測定評價輸入的總RNA量。使用Illumina TruSeq RNA樣品制備試劑盒V2制備轉 錄組庫。使用Agilent Qubit DNA測定和用化rki址Imer Labchip DNA GX分析分別評價所 得庫的數量和質量。W等份混合所有的庫產生樣品池，該樣品池在用Illumina化Seq 2500 測序儀上測序時能夠獲得大約4000萬通過的過濾器讀數(passed filter reads)。使用 FastQC、RNASeQC和RSeQC軟件評價來自Illumina Hiseq CASAVA流水線的原始測序數據的 質量。隨后的分析如下：使用Top化t 2(v2.0.7)RNA序列對齊器(aligner)將去多路復用的 通過過濾器的測序讀數與GRCm38/mmlO對齊;使用CufTLinks 2(c2.1.1)將對其的讀數與 UCSCmmlO基因注釋裝配;使用CuffCompare和化ffMerge匯編對齊的讀數和mmlO基因，并且 將轉錄物合并組裝成自定義的基因注釋;使用CuffDiff比較與每個治療組相關的差異化基 因表達。
[0181] 實施例10
[0182] 為確認AR-42的抗-惡病質活性不是對C-26模型特異性的，還在化C模型中評價了 AR-42。腫瘤細胞注射后第6天，開始用AR-42(50mg/kg，口服，每隔一天)治療荷皮下11UX月中 瘤的巧7BL/6小鼠，并且持續直到第20天，此時處死采集后肢肌肉。
[0183] 如圖7中示出的，AR-42在惡病質的化C小鼠模型中保護免受癌癥-誘導的肌肉損 耗。，比較了在無腫瘤和荷瘤小鼠二者中AR-42對媒介物對后肢肌肉，包括脾腸肌、腔骨前肌 和四頭肌的質量的作用與媒介物治療的荷瘤小鼠中的那些。用圖1A描述的相同方法治療小 贏，除了在腫瘤細胞注射后第20天處死小贏。平均值±S.D.呈現數據(n = 8);(脯腸肌:媒 介物，非-惡病質對照的81.7 ±3.7% ;AR-42,92.2 ±3.5% ;胚骨前肌：媒介物，80.3 ± 4.0%;六民-42,93.4±3.9%;四頭肌:媒介物，84.4±4.6%;六民-42,93.4±4.8%;全部口值〈 0·05，η二8) D [0184] 參考文獻
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[0227] 盡管W上描述提及特定方面，應理解這些方面僅僅是說明性的。對本文描述的方 法可W進行多種改變和變化，這對本領域技術人員而言是明顯的。因此，本說明書意圖包括 隨附的權利要求和其等價物的范圍內的改變和變化。
【主權項】
1. 抑制患有癌癥的哺乳動物中的惡病質的方法，包括以與未接受1類和2b類HDAC抑制 劑的哺乳動物相比有效地基本上保持所述哺乳動物的體重的量向所述哺乳動物施用1類和 2b類HDAC抑制劑。2. 根據權利要求1所述的方法，其中所述HDAC抑制劑是AR-42。3. 根據權利要求2所述的方法，其中在用AR-42治療后約最初15天后，所述哺乳動物的 體重不降低多于約6%。4. 根據權利要求1所述的方法，其中所述癌癥選自由胰腺癌、結腸癌、頭部癌癥、頸部癌 癥、胃癌和食道癌組成的組。5. 據權利要求1所述的方法，其中所述哺乳動物是人類。6. 根據權利要求2所述的方法，其中以約lmg/kg至約100mg/kg所述哺乳動物的量施用 AR-42〇7. 根據權利要求6所述的方法，其中AR-42被一天至少一次地施用。8. 根據權利要求7所述的方法，其中AR-42以約50mg/kg所述哺乳動物的量被一天兩次 地施用。9. 根據權利要求2所述的方法，其中與未接受AR-42的哺乳動物相比，IL-6的水平降低 了約 56 %。10. 根據權利要求2所述的方法，其中與未接受AR-42的哺乳動物相比，LIF的水平降低 了約 88 %。11. 根據權利要求2所述的方法，其中與未接受AR-42的哺乳動物相比，Atrogin-lmRNA 的表達恢復到基線水平。12. 根據權利要求2所述的方法，其中與未接受AR-42的哺乳動物相比，MuRFlmRNA的表 達恢復到基線水平。13. 根據權利要求2所述的方法，其中與未接受A R - 4 2的哺乳動物相比，惡病質誘導的 IL_6RamRNA水平的增加降低了約85%。14. 根據權利要求2所述的方法，其中與未接受AR-42的哺乳動物相比，惡病質誘導的脂 肪組織的損失大體上恢復。15. 根據權利要求2所述的方法，其中與未接受AR-42的哺乳動物相比，惡病質誘導的骨 骼肌纖維大小的減小被AR-42大體上恢復。16. 保持患有癌癥的哺乳動物中的骨骼肌重量的方法，包括以與未接受1類和2b類HDAC 抑制劑的哺乳動物相比在至少15天的時間段內有效維持所述哺乳動物骨骼肌重量的至少 約90 %的量向所述哺乳動物施用1類和2b類HDAC抑制劑。17. 根據權利要求16所述的方法，其中所述1類和2b類HDAC抑制劑是AR-42。18. 延長患有癌癥的哺乳動物的存活的方法，包括以與未接受1類和2b類HDAC抑制劑的 哺乳動物相比有效延長所述哺乳動物的存活的量向所述哺乳動物施用1類和2b類HDAC抑制 劑。19. 根據權利要求18所述的方法，其中所述1類和2b類HDAC抑制劑是AR-42。20. 根據權利要求18所述的方法，其中所述哺乳動物在向所述哺乳動物施用AR-42后存 活至少約21天。
【文檔編號】A61K31/167GK106029061SQ201480063679
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2014年11月19日
【發明人】陳慶士, 塔尼奧斯·貝卡伊-薩布, 丹尼斯·格特里奇, 圭多·馬庫奇, 塞繆爾·庫爾普, 曾裕洲
【申請人】俄亥俄州國家創新基金會