專利名稱：一種鵝去氧膽酸的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種鵝去氧膽酸(3α，7α-二羥基-5β-膽甾烷酸)的制備方法，尤其涉及一種從家禽或動物的膽汁中提取鵝去氧膽酸的方法。
背景技術：
鵝去氧膽酸(3α，7α-二羥基-5β-膽甾烷酸)Chenodeoxycholic Acid(簡稱CDCA)，是一種治療膽結石的藥物。1848年首次發現在鵝膽汁中，1924年定名為鵝去氧膽酸。其通過減少膽固醇吸收、合成，使膽汁內膽固醇下降，從而阻抑膽固醇結石形成和促其溶解，并且能有效降低膽固醇飽和度。
鵝去氧膽酸除本身的藥用外，還可作為制取熊去氧膽酸(3α，7β-二羥基-5β-膽烷酸，簡稱UDCA)的原料。熊去氧膽酸是名貴中藥熊膽所含的主要有效成分，在臨床上用于治療各種膽疾及消化道疾病。但是中藥熊膽來源有限，而且有違于動物保護原則。所以，天然熊膽的來源日趨減少，不能滿足醫療要求。因此，制備鵝去氧膽酸對于進一步制備熊去氧膽酸也具有重要的意義。
CDCA主要由家禽的膽汁或動物膽汁中提取，過去的提取方法由于涉及有毒化學品(動物生化制藥學，1981，人民衛生出版社，P259；醫藥工業，1987，18(2)75-76；)或使用大量不安全有機溶劑(中國生化藥物雜志，1996，17(1)17；應用技術，1998，49-10；US Patent，3,965,131；US Patent，4,331,607；USPatent，4,163,017)，不能適應現代工業的要求，而且制備的CDCA純度低，成本高。
發明內容
為了克服上述現有技術的缺陷，采用安全無毒、簡單實用的方法，得到純度較高的鵝去氧膽酸，本發明提供了一種可用于大規模制備高純度鵝去氧膽酸的方法。
本發明是通過以下技術方案實現的以家禽膽汁為例，本發明的制備方法包括以下步驟(1)總膽汁酸的鈣鹽制備取新鮮或冷凍鴨膽汁或其它家禽膽汁，按其體積以1-3mol/L在膽汁中加入工業氫氧化鈉，加熱煮沸3-24小時，進行皂化，按膽汁體積12-20％加入CaCl2攪拌30-60分鐘，離心過濾，收集沉淀。
(2)脫色與沉淀轉化將濾餅懸浮于3-10量倍量的水中，加入雙氧水使濃度達到混懸液體積的0.1-2％，然后按膽汁重量的6-12％加入碳酸鈉固體，使沉淀轉化，過濾，收集濾液；濾餅用少量水洗滌，合并濾液與洗滌液，加鹽酸至pH1-5之間，攪拌30分鐘，放置，充分沉淀，離心過濾，收集濾餅，即得粗制鵝去氧膽酸。將粗品按濕重加3-10倍水混懸，用NaOH調至固體物溶解，按粗品濕重的1∶0.1-0.5加入無水氯化鈣使之形成鈣鹽沉淀，過濾，將其沉淀懸于3-10倍體積的1-6mol/LHCl中，使鈣鹽沉淀轉化為游離的CDCA。
(3)大孔吸附劑層析純化將前述制得的初步純化的CDCA粗品按1∶4-1∶8的比例，用95％(V/V-)酒精溶解，調整酒精濃度至30-50％，上經相同濃度酒精平衡的過大孔吸附樹脂(所用大孔吸附樹脂是指具有苯乙烯-二乙烯苯，丙烯酸-甲基丙烯酸酯型結構的各型樹脂)，流速按層析柱液體流動線性速度1.0-5.0cm/分控制，接著用2-5倍柱體積的50％酒精溶液洗滌，繼之用60％乙醇洗脫，其間不斷用薄層層析檢測，待出現外觀純一的CDCA斑點時開始收集洗脫液直至完畢。將經薄層檢定外觀為CDCA純點的洗脫液合并，加0.1-1％活性碳脫色后，于真空下蒸發回收酒精，得到無定型CDCA結晶，將此無定型結晶置60-80℃水浴中培育24小時，取出后置于60℃真空干燥16-20小時，可得到純度為95％左右，熔點在120-140℃ CDCA結晶。該結晶可使用公知的方法，進一步制備熔點在160-170℃的CDCA結晶(USPatent，4,213,911；US Patent，4,022,806；US Patent.4,163,017)。
對于動物膽汁，將膽紅素提取后的殘渣，按濕重1∶4加水懸浮，照家禽膽汁相同的方法進行皂化，其后的步聚完全相同。
具體實施例方式
下面通過具體實施例對本方法作進一步說明。
實施例1取新鮮或冷凍鴨膽汁，鵝膽汁或其它家禽膽汁，按其體積加入工業氫氧化鈉至2mol/L，加熱煮沸5小時，進行皂化，按膽汁體積15％加入CaCl2攪拌30鐘，離心過濾，收集沉淀。
將濾餅懸浮于8量倍量的水中，加入雙氧水使濃度達到混懸液體積的1％，然后按膽汁重量的10％加入碳酸鈉固體，使沉淀轉化，過濾，收集濾液，濾餅用少量水洗滌，合并濾液與洗滌液，加鹽酸至pH3，攪拌30分鐘，放置，充分沉淀，離心，收集濾餅，即得粗制鵝去氧膽酸。將粗品按濕重加5倍水混懸，用NaOH調至固體物溶解，按粗品濕重的1∶0.4加入無水氯化鈣使形成鈣鹽沉淀，過濾，將沉淀懸于8倍體積的2 mol/L HCl中，使鈣鹽沉淀轉化為游離的CDCA。
將前述制得的初步純化的CDCA粗品按1∶8用95％(V/V)酒精溶解，調整酒精濃度至40％，上經相同濃度酒精平衡的過大孔吸附樹脂，流速按層析柱液體流動線性速度1.0cm/分控制，接著用2-5倍柱體積的50％酒精溶液洗滌，繼之用60％乙醇洗脫，其間不斷用薄層層析檢測，待出現外觀純一的CDCA斑點時開始收集洗脫液直至完畢。將經薄層檢定外觀為CDCA純點的洗脫液合并，加1％活性碳脫色后，于真空下蒸發回收酒精，得到無定型CDCA結晶，純度為95％左右，熔點在120-140℃。
實施例2取豬牛羊動物膽汁，按膽紅素提取方法提取膽紅素，將膽紅素提取后的殘渣，按濕重1∶4加水懸浮，照家禽膽汁相同的方法進行皂化，其后的步聚完全相同。可得到純度為93％左右的鵝去氧膽酸。
權利要求
1.一種鵝去氧膽酸(3α，7α-二羥基-5β-膽甾烷酸)的制備方法，其特征是，所用的膽汁為家禽膽汁或動物來源的膽汁，包括以下步驟(1)總膽汁酸的鈣鹽制備按膽汁體積以加入1-3mol/L的比例加入工業氫氧化鈉，加熱煮沸3-24小時，皂化結束后按膽汁體積12-20％加入CaCl2；(2)脫色與沉淀轉化將鈣鹽濾餅懸浮于3-10倍量的水中，加入工業雙氧水使濃度達到混懸液體積的0.1-2％進行脫色，然后按膽汁重量的6-12％加入碳酸鈉固體，使之沉淀轉化；將CDCA粗品加水混懸，用NaOH調至固體物溶解，按粗品濕重的1∶0.1-0.5加入無水氯化鈣使形成鈣鹽沉淀，將CDCA鈣鹽沉淀懸于1-6mol/L HCl中，使鈣鹽沉淀轉化為游離的CDCA；(3)大孔吸附劑層析純化將初步純化的CDCA的粗品用酒精溶解，調整酒精濃度至30-50％，上大孔吸附樹脂層析柱，用50％酒精溶液洗滌，繼之用60％乙醇洗脫；用薄層層析檢測外觀純一的CDCA斑點，將經薄層檢定為外觀CDCA純點的洗脫液合并，獲得純度為95％CDCA；對于動物膽汁，將膽紅素提取后的殘渣，按濕重1∶4加水懸浮，照家禽膽汁相同的方法進行皂化，其后的步聚完全相同。
2.如權利要求1所述的制備方法，其特征是，在總膽汁酸的鈣鹽制備中，按所用膽汁體積加入工業氫氧化鈉至2mol/L，加熱煮沸5小時，進行皂化，按膽汁體積15％加入CaCl2攪拌30鐘，離心過濾，收集沉淀。
3.如權利要求1所述的制備方法，其特征是，在脫色與沉淀轉化步驟中，將濾餅懸浮于8量倍量的水中，加入雙氧水使濃度達到混懸液體積的1％，然后按膽汁重量的10％加入碳酸鈉固體進行脫色；將粗品按濕重加5倍水混懸，用NaOH調至固體物溶解，按粗品濕重的1∶0.4加入無水氯化鈣使形成鈣鹽沉淀，過濾，將沉淀懸于8倍體積的2mol/L HCl中，使鈣鹽沉淀轉化為游離的CDCA。
4.如權利要求1所述的制備方法，其特征是，在大孔吸附劑層析純化步驟中，將初步純化的CDCA粗品按1∶8比例用95％(V/V)酒精溶解，調整酒精濃度至40％。
5.如權利要求1所述的制備方法，其特征是，所用大孔吸附樹脂是指具有苯乙烯-二乙烯苯，丙烯酸-甲基丙烯酸酯型結構的各型樹脂。
全文摘要
本發明涉及從家禽及動物膽汁中提取純化鵝去氧膽酸的工業化制備方法。其過程包括通過堿液皂化膽汁、制備總膽汁酸的鈣鹽沉淀、雙氧水及活性碳脫色、碳酸鈉及鹽酸轉化鵝去氧膽酸鈣鹽沉淀及大孔吸附樹脂純化等步驟。整個工藝具有環境友好，安全無毒，低成本，易于大規模操作的優點。
文檔編號C07J9/00GK1528779SQ0315147
公開日2004年9月15日 申請日期2003年9月29日 優先權日2003年9月29日
發明者曹學君 申請人:華東理工大學