專利名稱：從中藥決明子中提取蒽醌類化合物的方法
技術領域：
本發明涉及一種從中藥決明子(Cassia obtusifolia L.)中提取蒽醌類化合物的方法。即從中藥決明子中提取大黃素-1-O-β-龍膽二糖甙、大黃酚-1-O-β-龍膽二糖甙、大黃素甲醚-8-O-β-龍膽二糖甙和大黃酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖甙四種蒽醌類化合物。
背景技術：
決明子為豆科植物決明Cassia obtusifolia L.或小決明Cassia tora L.的干燥成熟種子，為臨床常用中藥。大量的研究表明決明子水煎劑以及乙醇、正酊醇、乙酸乙酯等有機溶劑的提取物、決明子浸膏等均有明顯的降脂作用。進一步的研究認為決明子降脂的主要成分有蒽醌類、決明子苷B、蛋白質等。但其降脂的有效成分卻仍不清楚，尚未見有具體化學結構的降脂成分報道。
決明子的化學成分主要有蒽醌類、萘駢一吡酮類、蛋白質及氨基酸、脂肪酸、非皂化物質、糖和無機元素等。蒽醌類是決明子主要的藥用成分之一，其含量約占1.2％左右。目前已從決明子中分離鑒定了20多種蒽醌類化合物。決明子的蒽醌苷元中主要是大黃酚，含量為2.7‰(王清華，紀玲，叢保忠，宋偉靜.高效液相色譜法測定決明子中大黃酚的含量。中醫藥學報，1996，548-49)。郝延軍等首次從中國產決明中分得大黃酚、大黃素甲醚、大黃素、蘆薈大黃素、橙黃決明素、大黃素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷6個蒽醌類化合物(郝延軍，桑育黎，趙余慶.決明子蒽醌類化學成分研究，中草藥，2003，3418-19)。
決明子的化學成分非常復雜，目前常用的分離方法主要有浸出法、萃取法、色譜法等。使用這些方法很難把決明子中的化學成分完全分離出來，而且較難得到單體化合物。
發明內容
本發明的目的在于針對現有技術的不足，提供一種從中藥決明子中提取蒽醌類化合物單體的方法，通過該方法可以獲得大黃素-1-O-β-龍膽二糖甙、大黃酚-1-O-β-龍膽二糖甙、大黃素甲醚-8-O-β-龍膽二糖甙、大黃酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖甙四種蒽醌類化合物，這對決明子在降脂作用中的進一步開發利用具有重要的意義。
為了達到本發明的目的，本方法采用溶劑分部提取、大孔樹脂吸附以及硅膠層析對中藥決明子進行分離，并通過理化性質分析和波譜解析鑒定了4個化合物，其中大黃素-1-O-β-龍膽二糖甙為新的蒽醌類化合物，大黃酚-1-O-β-龍膽二糖甙和大黃酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖甙系首次從決明子中分離得到。
具體的講，本發明方法包括如下步驟(1)將中藥決明子磨成粉末，采用溶劑分部提取法，按照極性由小至大依次以溶劑環己烷、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、水在索氏提取儀中各回流提取4-6次，每次所用的溶劑體積為中藥粉末體積的1.5-2.5倍，每次提取時間為40-80min，溫度為60±5℃；合并每一分步驟中的提取液，回收溶劑，得到水提物；(2)將步驟(1)得到的水提物溶于5.0-10.0倍體積的蒸餾水中，過濾去除不溶物，溶于水部分用正丁醇萃取4-8次，每次萃取所用體積為水溶液體積的0.5-1.5倍，每次萃取時間為20-40min，合并萃取液，揮干溶劑，得到的混合物用3.0-8.0倍體積的95％乙醇溶解，分離出不溶于95％乙醇的混合物；(3)將步驟(2)得到的不溶于95％乙醇的混合物溶于3-5倍體積的蒸餾水中，濾去難溶的雜質，溶液部分流經大孔吸附樹脂柱；吸附在柱上的有效部分依次采用95％的乙醇、水進行洗脫至無色，收集乙醇洗脫液，濃縮得乙醇洗脫物；(4)用100～200目硅膠柱分離步驟(3)得到的乙醇洗脫物，采用氯仿—甲醇—水洗脫系統；調整洗脫系統中氯仿∶甲醇＝4∶1的體積，得到的混合物經硅膠層析，采用乙酸乙酯∶95％乙醇＝4∶1.5的體積洗脫，得到的混合物進一步經聚酰胺柱層析，甲醇∶水＝2∶3的體積洗脫得到蒽醌類化合物II和蒽醌類化合物III；調整洗脫系統中氯仿∶甲醇＝3∶1的體積，得到的混合物經硅膠柱反復層析，采用乙酸乙酯∶95％乙醇＝3-5∶1.0-2.0的體積洗脫，得到蒽醌類化合物I；調整洗脫系統中氯仿∶甲醇∶水＝3∶1∶0.1的體積，得到的混合物經聚酰胺柱層析，用甲醇∶水＝2∶3的體積洗脫得到的混合物進一步經凝膠柱層析、水洗脫得到蒽醌類化合物IV。
通過本領域通用的理化性質分析和波譜(MS，IR，UV，NMR)解析鑒定，確認所述蒽醌類化合物I為大黃素-1-O-β-龍膽二糖甙、蒽醌類化合物II為大黃酚-1-O-β-龍膽二糖甙、蒽醌類化合物III為大黃素甲醚-8-O-β-龍膽二糖甙蒽醌類化合物IV為大黃酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖甙。
在步驟(1)中，本發明所用決明子可以從普通中藥房購得，使用時先磨成粉末，過100-200目篩。在所有溶劑中，每次提取時間最好為55-65min，每次提取溶劑的體積以藥品體積的2.0倍為佳。每換另一種溶劑提取時，殘渣均必須揮干溶劑。
在步驟(2)中，正酊醇的萃取在室溫下進行，每次萃取體積以樣品溶液體積的0.5倍為佳，每次萃取時間以25min為佳；加入95％乙醇后最好充分搖勻、放置20min，沉淀析出部分即為不溶于95％乙醇的混合物，命名為混合物C。
在步驟(3)、(4)、(5)中大孔吸附樹脂介質依次用丙酮—乙醇—水沖洗干凈后，再裝柱。分離純化所用的溶劑以分析純為佳，大孔樹脂、硅膠、聚酰胺以及凝膠的用量均視樣品的量而定。
在本發明所獲得的四種蒽醌類化合物中，大黃素-1-O-β-龍膽二糖甙為新化合物，大黃酚-1-O-β-龍膽二糖甙和大黃酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖甙系首次從決明子中分離得到。經鑒定，大黃素-1-O-β-龍膽二糖甙的分子式為C27H30O15；其它三種化合物鑒定的分子式分別為C27H30O14(II)、C28H32O15(III)及C33H40O19(IV)。四種蒽醌類化合物的平面結構圖為 化合物IR1＝glc(1→6)glc，R2＝OH，R3＝H化合物II R1＝R2＝H，R3＝glc(1→6)glc化合物III R1＝H，R2＝OCH3，R3＝glc(1→6)glc化合物IV R1＝glc(1→3)glc(1→6)glc，R2＝R3＝H本發明與現有技術相比具有如下優點(1)采用溶劑分部法提取決明子降脂有效成分；(2)首次從決明子中分離得到新化合物大黃素-1-O-β-龍膽二糖甙；大黃酚-1-O-β-龍膽二糖甙和大黃酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖甙系首次從決明子中分離得到。
圖1為本發明方法的總流程圖；圖2為本發明步驟(1)流程圖；
圖3為本發明步驟(2)流程4為本發明步驟(3)、(4)和(5)流程圖。
具體的實施方式圖1為本發明提取分離決明子蒽醌類化合物的總流程圖，從圖中可以看出，本發明包括(1)分部提取、(2)不溶于95％乙醇的混合物的制備、(3)大孔樹脂分離純化不溶于95％乙醇的混合物、(4)硅膠柱分離純化乙醇洗脫物和蒽醌類化合物的分離、純化。
實施例1圖2為本發明步驟(1)——決明子溶劑分部提取程序圖。本例中所用決明子購于藥房，安徽產。取決明子500g，磨成粉末，過100-200目篩。采用溶劑分部提取法，按照極性由小至大順序依次以溶劑(環己烷—氯仿—乙酸乙酯—正丁醇—乙醇—水)在索氏提取儀中各回流提取5次，合并每一分步驟的提取液，回收溶劑，得到該分步驟的相應提取物。每次所用的溶劑體積為決明子粉的2倍左右。每次回流提取時間為60min。每換另一種溶劑提取時，殘渣均必須揮干溶劑。動物實驗結果表明決明子粉及其乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、乙醇提取物和水提取物對高脂血癥動物模型的形成均具有明顯的預防作用，以水提物的作用最佳，因此選取水提物進行下一步的分離。
圖3為本發明步驟(2)——決明子混合物C的制備流程圖。將步驟(1)中的水提物溶于10倍體積的蒸餾水中，過濾去除不溶物，溶于水部分用正丁醇萃取6次，每次萃取體積為水溶液的0.5倍，每次萃取時間為30min，合并萃取液，揮干溶劑，得混合物A；將混合物A用3倍體積的95％乙醇充分溶解，分離出不溶于95％乙醇的混合物C。動物實驗結果表明混合物C對高脂血癥具有顯著的治療作用。
圖4為本發明步驟(3)、(4)、(5)——決明子蒽醌類化合物的分離與純化示意圖。如步驟(3)、(4)、(5)所示將混合物C充分溶于3倍體積的蒸餾水中，濾去難溶的雜質，溶液部分流經大孔吸附樹脂柱。吸附在柱上的有效部分依次采用95％的乙醇、水進行洗脫至無色，分別收集乙醇和水部分的洗脫液，濃縮，得干物質。乙醇洗脫所得物質遠多于水洗脫部分，活性檢測結果表明乙醇洗脫物具有較明顯的降脂作用。因此收集乙醇洗脫物進行下一步的分離純化。
乙醇洗脫物分別用硅膠(100～200目)柱層析(氯仿—甲醇—水為洗脫系統)，凝膠柱(水洗脫)以及聚酰胺柱層析(甲醇—水為洗脫系統)，分得化合物I～IV。通過本領域通用的理化性質分析和波譜(MS，IR，UV，NMR)解析鑒定了化合物I為大黃素-1-O-β-龍膽二糖甙、化合物II為大黃酚-1-O-β-龍膽二糖甙、化合物III為大黃素甲醚-8-O-β-龍膽二糖甙和化合物IV為大黃酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖甙。其中I為新化合物，II和IV系首次從決明子中分離得到。
實施例2其它同實施例1，所不同的是步驟(1)中決明子1000g，在索氏提取儀中各回流提取4次，每次所用的溶劑體積為決明子粉的2.5倍，每次提取時間為40min；步驟(2)中將水提物溶于5倍體積的蒸餾水中，溶于水部分用正丁醇萃取8次，每次萃取體積為水溶液體積的1倍，每次萃取時間為40min，合并萃取液，揮干溶劑，得混合物A。將混合物A用5倍的95％乙醇充分溶解，分離出不溶于95％乙醇的混合物C；步驟(3)中將混合物C充分溶于4倍的蒸餾水中，溶液部分流經大孔吸附樹脂柱，吸附在柱上的有效部分依次采用95％的乙醇、水進行洗脫至無色，收集乙醇洗脫液，濃縮，得乙醇洗脫物。結果獲得所需的化合物。
實施例3其它同實施例1，所不同的是步驟(1)中決明子1500g，在索氏提取儀中各回流提取6次，每次所用的溶劑體積為決明子粉的1.5倍。每次提取時間最佳為80min；步驟(2)中將水提物溶于7.5倍體積的蒸餾水中，溶于水部分用正丁醇萃取4次，每次萃取體積為水溶液體積的1.5倍，每次萃取時間為20min，合并萃取液，揮干溶劑，得混合物A。將混合物A用8倍的95％乙醇充分溶解，分離出不溶于95％乙醇的混合物C；步驟(3)中將混合物C充分溶于3倍的蒸餾水中，溶液部分流經大孔吸附樹脂柱，吸附在柱上的有效部分依次采用95％的乙醇、水進行洗脫至無色，收集乙醇洗脫液，濃縮，得乙醇洗脫物。結果獲得所需的化合物。
權利要求
1.一種從中藥決明子中提取蒽醌類化合物的方法，其特征在于包括如下步驟(1)將中藥決明子磨成粉末，采用溶劑分部提取法，按照極性由小至大依次以溶劑環己烷、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、水在索氏提取儀中各回流提取4-6次，每次所用的溶劑體積為中藥決明子粉末體積的1.5-2.5倍，每次提取時間為40-80min，溫度為60±5℃；合并提取液，回收溶劑，得到水提物；(2)將步驟(1)得到的水提物溶于5.0-10.0倍體積的蒸餾水中，過濾去除不溶物，溶于水部分用正丁醇萃取4-8次，每次萃取所用體積為水溶液體積的0.5-1.5倍，每次萃取時間為20-40min，合并萃取液，揮干溶劑，得到的混合物用3.0-8.0倍體積的95％乙醇溶解，分離出不溶于95％乙醇的混合物；(3)將步驟(2)得到的不溶于95％乙醇的混合物溶于3-5倍體積的蒸餾水中，濾去難溶的雜質，溶液部分流經大孔吸附樹脂柱；吸附在柱上的有效部分依次采用95％的乙醇、水進行洗脫至無色，收集乙醇洗脫液，濃縮得乙醇洗脫物；(4)用100～200目硅膠柱分離步驟(3)得到的乙醇洗脫物，采用氯仿—甲醇—水洗脫系統；調整洗脫系統中氯仿∶甲醇＝4∶1的體積，得到的混合物經硅膠層析，采用乙酸乙酯∶95％乙醇＝4∶1.5的體積洗脫，得到的混合物進一步經聚酰胺柱層析，甲醇∶水＝2∶3的體積洗脫得到蒽醌類化合物II和蒽醌類化合物III；調整洗脫系統中氯仿∶甲醇＝3∶1的體積，得到的混合物經硅膠柱反復層析，采用乙酸乙酯∶95％乙醇＝3-5∶1.0-2.0的體積洗脫，得到蒽醌類化合物I；調整洗脫系統中氯仿∶甲醇∶水＝3∶1∶0.1的體積，得到的混合物經聚酰胺柱層析，用甲醇∶水＝2∶3的體積洗脫得到的混合物進一步經凝膠柱層析、水洗脫得到蒽醌類化合物IV；所述蒽醌類化合物I為大黃素-1-O-β-龍膽二糖甙；蒽醌類化合物II為大黃酚-1-O-β-龍膽二糖甙；蒽醌類化合物III為大黃素甲醚-8-O-β-龍膽二糖甙；蒽醌類化合物IV為大黃酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖甙。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于步驟(1)中，所用決明子使用時先磨成粉末，過100-200目篩，每次溶劑提取時間為55-65min，每次提取溶劑的體積為中藥決明子粉末體積的2.0倍。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于在步驟(2)中，正酊醇的萃取在室溫下進行，每次萃取體積為樣品體積的0.5倍，每次萃取時間為25min；加入95％乙醇后充分搖勻、放置20min，沉淀析出部分即為不溶于95％乙醇的混合物。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于在步驟(3)(4)、(5)中，大孔吸附樹脂介質依次用丙酮—乙醇—水沖洗干凈后，再裝柱。
全文摘要
本發明涉及從中藥決明子中提取蒽醌類化合物的方法，包括(1)分部提取、(2)不溶于95％乙醇的混合物的制備、(3)大孔樹脂分離純化不溶于95％乙醇的混合物、(4)硅膠柱分離純化乙醇洗脫物和蒽醌類化合物的分離、純化；得到降脂有效成分大黃素－1－O－β－龍膽二糖甙、大黃酚－1－O－β－龍膽二糖甙、大黃素甲醚－8－O－β－龍膽二糖甙、大黃酚－1－O－β－D－吡喃葡萄糖基－(1→3)－β－D－吡喃葡萄糖基－(1→6)－β－D－吡喃葡萄糖甙。
文檔編號C07C46/10GK1733679SQ20051003685
公開日2006年2月15日 申請日期2005年8月30日 優先權日2005年8月30日
發明者李楚華, 李續娥, 郭寶江 申請人:華南師范大學