用于制備軟海綿素b的中間體的制作方法

專利名稱：用于制備軟海綿素b的中間體的制作方法
技術領域：
本發明涉及在合成藥用活性大環內酯化合物中，用作中間體的化合物。
背景技術：
本發明涉及藥用活性大環內酯，其合成以及其合成所用的中間體。軟海綿素B(Halichondrin B)是一種有效的抗癌劑，最初從海洋海綿黑色軟海綿(Halichondria okadai))中分離出來，隨后在小軸海綿屬(Axinella sp.)、Phakellia carteri和扁矛海綿屬(Lissonderndryx sp.)中發現。1992年公布了軟海綿素B的全合成(Aicher，T.D.等，J.Am.Chem.Soc.1143162-3164)。已證明軟海綿素B在體外抑制微管蛋白聚合、微管裝配、βs-微管蛋白交聯、GTP及長春花堿與微管蛋白結合以及依賴于微管蛋白的GTP水解，其在體外及體內均已顯示出抗癌特性。因此，需要對制備用作抗癌劑的軟海綿素B類似物的合成方法進行開發。
發明概述如本文所述，本發明提供制備具有如抗癌活性或抗有絲分裂(阻斷有絲分裂)活性等藥用活性的軟海綿素B類似物的方法。這些化合物包括式B-1939的化合物
這些化合物用于治療癌癥和其它增生性疾病，包括但不限于黑素瘤、纖維肉瘤、白血病、結腸癌、卵巢癌、乳腺癌、骨肉瘤、前列腺癌、肺癌和ras轉化的成纖維細胞。本發明還提供用于制備所述軟海綿素B類似物的合成中間體。
本發明某些實施方式的詳述本發明的方法和中間體用于制備在諸如美國專利6,365,759和美國專利6,469,182(引入本文作為參考)中所描述的各種軟海綿素B類似物。如以下方案I所示，總體上通過對三個片段F-1、F-2和F-3的組裝來制備軟海綿素B類似物。
方案I 1、片段F-1根據一種實施方式，本發明提供化合物F-1
其中PG1和PG2各自獨立為氫或合適的羥基保護基；R1為R或OR；R2為CHO或-CH＝CH2；以及每個R獨立為氫、C1-4鹵代脂族基、芐基或C1-4脂族基，條件是當R1為OMe時，PG1和PG2不形成丙酮化合物基團。
某些實施方式中，R1為OR。其它實施方式中，R1為OR，其中R為氫、甲基或芐基。
某些實施方式中，PG1和PG2為氫。其它實施方式中，PG1和PG2中的一個為氫。
合適的羥基保護基為本領域所熟知，包括在“有機合成中的保護基團(protecting Groups in organic synthesis)”(T.W.Greene和P.G.M.Wuts，第3版，John Wiley & Sons，1999，其全文引入本文作為參考)中詳述的那些基團。某些實施方式中，PG1和PG2各自連同與之結合的氧原子一起獨立選自酯、醚、甲硅烷基醚、烷基醚、芳基烷基醚和烷氧基烷基醚。這種酯的例子包括甲酸脂、乙酸酯、碳酸酯和磺酸酯。具體的例子包括甲酸酯、苯甲酰甲酸酯、氯乙酸酯、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、對氯苯氧基乙酸酯、3-苯基丙酸酯、4-氧代戊酸酯、4，4-(亞乙基二硫代)戊酸酯、新戊酸酯(三甲基乙酰基)、巴豆酸酯、4-甲氧基巴豆酸酯、苯甲酸酯、對芐基苯甲酸酯、2，4，6-三甲基苯甲酸酯；或者碳酸酯，例如甲基、9-芴基甲基、乙基、2，2，2-三氯乙基、2-(三甲基甲硅烷基)乙基、2-(苯磺酰)乙基、乙烯基、烯丙基和對硝基芐基碳酸酯。這種甲硅烷基醚的例子包括三甲基甲硅烷基醚、三乙基甲硅烷基醚、叔丁基二甲基甲硅烷基醚、叔丁基二苯基甲硅烷基醚、三異丙基甲硅烷基醚及其它的三烷基甲硅烷基醚。烷基醚包括甲基醚、芐基醚、對甲氧基芐基醚、3，4-二甲氧基芐基醚、三苯甲基醚、叔丁基醚、烯丙基醚以及烯丙氧羰基醚或衍生物。烷氧基烷基醚包括縮醛，例如甲氧基甲基醚、甲硫基甲基醚、(2-甲氧基乙氧基)甲基醚、芐氧基甲基醚、β-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基醚和四氫吡喃基醚。芳基烷基醚的例子包括芐基醚、對甲氧基芐基醚(MPM)、3，4-二甲氧基芐基醚、O-硝基芐基醚、對硝基芐基醚、對鹵代芐基醚、2，6-二氯芐基醚、對氰基芐基醚、2-和4-吡啶甲基醚。
某些實施方式中，F-1的PG1和PG2部分中的一個或兩個為甲硅烷基醚或芳基烷基醚。其它的實施方式中，F-1的PG1和PG2部分中的一個或兩個為叔丁基二甲基甲硅烷基(t-butyldimethylsilyl)或苯甲酰基。另外的實施方式中，F-1的PG1和PG2部分均為叔丁基二甲基甲硅烷基。
根據另一種實施方式，PG1和PG2連同與它們結合的氧原子一起形成二醇保護基，例如環縮醛或縮酮，此類基團包括亞甲基、亞乙基、亞芐基、異亞丙基、亞環己基和亞環戊基；亞甲硅基衍生物，例如二叔丁基亞甲硅基和1，1，3，3-四異丙基二亞硅氧烷基衍生物；環碳酸酯及環硼酸酯。加入和脫除此類羥基保護基及其它保護基的方法為本領域所熟知，且可得自諸如“保護基(protecting Groups)”(P.J.Kocienski，Thieme，1994)和“有機合成中的保護基團(protective Groups in organicsynthesis)”(T.W.Greene和P.G.M.Wuts，第3版，John Wiley & Sons，1999)。根據另一種實施方式，PG1和PG2共同形成丙酮化合物基。
根據一種實施方式，R2為CHO。
根據另一種實施方式，R2為-CH＝CH2。
某些實施方式中，本發明提供式F-1的化合物，具有化合物F-1’所示的立體化學 其中每個變量同上文定義以及上文及此處的分類及亞類描述。
某些實施方式中，提供以下化合物F-1a和F-1b
其中，“TBS”指叔丁基二甲基甲硅烷基。
F-1a和F-1b的詳細合成在下面的實施例中進行闡述。
2、片段F-2根據另一種實施方式，本發明提供化合物F-2 其中每個 獨立為單鍵或雙鍵，條件是兩個 基不同時為雙鍵；LG1為合適的離去基團；X為鹵素或-OSO2(Ry)；Ry為C1-6脂族基或者飽和的、部分不飽和的或完全不飽和的5-7元環，其中Ry任選地被至多3個選自鹵素、R、NO2、CN、OR、SR或N(R)2的基團取代；每個R獨立為氫、C1-6鹵代脂族基或C1-4脂族基；以及PG3為合適的羥基保護基。
本文所用的合適的離去基團是容易被需要引入的化學基團取代的化學基團。合適的離去基團為本領域所熟知，例如參見“高等有機化學(Advanced Organic Chemistry)(Jerry March，第4版，pp.351-357，John Wiley and Sons，N.Y.(1992))。此類離去基團包括但不限于鹵素、烷氧基、磺酰氧基、任選取代的烷基磺酰氧基、任選取代的烯基磺酰氧基、任選取代的芳基磺酰氧基和重氮基。合適的離去基團的例子包括氯、碘、溴、氟、甲磺酰基、甲苯磺酰基(mesyl)、三氟甲磺酸根(triflate)、硝基苯磺酰基(nosyl)和溴苯磺酰基(brosyl)。某些實施方式中，F-2的LG1部分(moiety)為磺酰氧基、任選取代的烷基磺酰氧基、任選取代的烯基磺酰氧基或任選取代的芳基磺酰氧基。另外的實施方式中，F-2的LG1部分為任選取代的烷基磺酰氧基。其它的實施方式中，F-2的LG1部分為甲磺酰基或甲苯磺酰基。
某些實施方式中，F-2的X部分為鹵素。另外的實施方式中，F-2的X部分為磺酰氧基、任選取代的烷基磺酰基、任選取代的烯基磺酰基或任選取代的芳基磺酰基。其它實施方式中，F-2的X部分為三氟甲磺酸根。
某些實施方式中，F-2的PG3部分連同與之結合的氧原子一起為甲硅烷基醚。其它實施方式中，F-2的PG3部分連同與之結合的氧原子一起為酯基。根據本發明的一個方面，F-2的PG3部分連同與之結合的氧原子一起為叔丁基二甲基甲硅烷基。根據本發明的另一個方面，F-2的PG3部分連同與之結合的氧原子一起為新戊酰基或苯甲酰基。
某些實施方式中，本發明提供式F-2的化合物，具有化合物F-2’所示的立體化學 其中每個變量同上文定義以及上文及此處的分類及亞類描述。
某些實施方式中，提供化合物F-2a或F-2b 其中“MsO”指甲磺酸根，“TfO”指三氟磺酸根，“Opv”指新戊酸根(pivaloate)，“OBz”指苯甲酸根以及“TsO”指甲苯磺酸根。
另外的實施方式中，本發明提供式F-2b的化合物，其中所述化合物為結晶。根據另一種實施方式，提供式F-2b的化合物，其中所述化合物從鏈烷溶劑中結晶。某些實施方式中，提供F-2b結晶，其中所述化合物從戊烷或庚烷中結晶。其它實施方式中，提供F-2b結晶，其中所述化合物在約0℃結晶。
如以下方案A所示，式F-2的化合物一般由中間體F-2d和F-2e制備。
方案A 因此，本發明的另一個方面是提供式F-2d的化合物 其中R’為-CH＝CH2或-C(O)H；AlK為直鏈或支鏈的C1-4脂族基；以及PG5為合適的羥基保護基。
合適的羥基保護基PG5同上文對化合物F-2的PG3部分的描述和定義。某些實施方式中，PG5連同與之結合的氧原子一起為甲硅烷基醚。另外的實施方式中，PG5為叔丁基二甲基甲硅烷基。
根據一種實施方式，化合物F-2d的AlK部分為甲基。
某些實施方式中，提供式F-2d’的化合物
本發明的另一個方面提供式F-2e的化合物 其中R”為OH、OPG3或LG4；LG4為合適的離去基團；以及每個PG3獨立為合適的羥基保護基，條件是，當PG3為叔丁基二苯基甲硅烷基時，R”不是OMs。
本領域的普通技術人員能認識到化合物F-2e的R”部分可由OH變換成保護的羥基、OPG3或直接變換成LG4。這種變換為本領域熟練人員所知，尤其包括這里描述的那些。某些實施方式中R”為OH或LG4。式F-2e的離去基團LG4同上文對化合物F-2的LG1部分的描述和定義。某些實施方式中，LG4為甲苯磺酰基或甲磺酰基。
化合物F-2e的PG3部分同上文對化合物F-2的PG3部分的定義和描述。某些實施方式中，PG3連同與之結合的氧原子一起構成甲硅烷基醚。另外的實施方式中，PG3為叔丁基二苯基甲硅烷基。
本發明的又一個方面提供式F-2f的化合物 其中AlK、PG3和PG5同一般性定義以及上文和此處的分類及亞類描述。通過本文所述的方法及本領域已知的那些方法，用式F-2f的化合物制備式F-2的化合物。
F-2a的詳細合成在下面的實施例中進行闡述。
或者，如以下方案II所示，由D-奎尼酸制備式F-2的化合物。式F-2的化合物的詳細制備在下面的實施例中進行闡述。
方案II 從D-奎尼酸制備式F-2的化合物的另一種方法提供了由中間體12轉換成中間體17的另一條路線(如以下方案III所示)。
方案III 以上方案III表示通過Eschenmoser-Tanabe碎裂反應由中間體12制備中間體17的另一種方法，其中每個Rx獨立為OPGx或CN，其中PGx為本文所述的合適的羥基保護基。然后根據以上方案II，用中間體17制備式F-2的化合物。
從D-奎尼酸制備式F-2的化合物的又一種方法提供了由中間體9轉換成中間體17的又一條路線(如以下方案IV所示)。
方案IV 其中PGy為本文所述的合適的羧基保護基，每個PGx獨立為本文所述的合適的羥基保護基。
方案V表示用于由D-奎尼酸制備式F-2的化合物的中間體的再一種制備方法。
方案V 在以上方案V中，中間體7(得自方案II)，其中R為甲酯用于制備結晶中間體ER-817664。如以上方案V所述，PG5和PG6各自獨立為合適的羥基保護基。某些實施方式中，PG5和PG6共同形成環二醇保護基。其它實施方式中，PG5和PG6共同形成亞環己基保護基。如以上方案V所述，LG5為合適的離去基團。這種合適的離去基團為本領域所熟知，包括本文所述的那些基團。某些實施方式中，LG5為甲磺酰基或甲苯磺酰基。
根據另一種實施方式，本發明提供式A的化合物 其中 表示單鍵或雙鍵；n為1、2或3；PG5和PG6各自獨立為合適的羥基保護基；W為CH-A或C(O)；A為氧代或C1-6脂族基，其中A任選地被一個或更多個Q1基團取代；
每個Q1獨立選自氰基、鹵素、疊氮基、氧代、OR、SR、SO2R、OSO2R、N(R)2、NR(CO)R、NR(CO)(CO)R、NR(CO)N(R)2、NR(CO)OR、(CO)OR、O(CO)R、(CO)N(R)2、O(CO)N(R)2或OPG1，其中PG1為合適的羥基保護基，其中A上的兩個Q1任選地結合在一起以形成具有0-4個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的3-8元的飽和環、部分不飽和環或芳香環；以及每個R獨立選自氫或任選取代的選自C1-6脂族基；5-10元的飽和碳環、部分不飽和碳環或芳香碳環；或者具有0-4個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的4-10元的飽和環、部分不飽或環或芳香環的基團，其中同一氮原子上的兩個R基任選地與所述氮原子結合在一起，以形成具有1-4個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的3-8元的飽和環、部分不飽和環或芳香環。
某些實施方式中，本發明提供式A的化合物，具有式A’所示的立體化學 其中每個變量同上文定義以及上文及此處的分類及亞類描述。
某些實施方式中，本發明提供式A’的化合物，其中A為C(O)且所述化合物具有A’-1結構式 其中每個變量同上文定義以及上文及此處的分類及亞類描述。
如上文所一般性定義的，式A和A’的A基為C1-6脂族基，其中A任選地被Q1取代。某些實施方式中，式A和A’的A基為C2-5脂族基，其中A被一個或更多個Q1基團取代。
如上文所一般性定義的，式A和A’的每個Q1基獨立選自氰基、鹵素、疊氮基、氧代、OR、SR、SO2R、OSO2R、N(R)2、NR(CO)R、NR(CO)(CO)R、NR(CO)N(R)2、NR(CO)OR、(CO)OR、O(CO)R、(CO)N(R)2、O(CO)N(R)2或OPG1，其中PG1為合適的羥基保護基。某些實施方式中，式A和A’的每個Q1基獨立選自氰基、鹵素、疊氮基、氧代、N(R)2、OR、SR、SO2R或OSO2R。另外的實施方式中，式A和A’的每個Q1基獨立選自氰基、鹵素、疊氮基、氧代、OR、SR、SO2R、OSO2R、N(R)2、NR(CO)OR、NR(CO)R和O(CO)N(R)2。其它的實施方式中，示例性Q1基包括NH(CO)(CO)-(雜環基或雜芳基)、OSO2-(芳基或取代芳基)、O(CO)NH-(芳基或取代芳基)、氨基烷基、羥基烷基、NH(CO)(CO)-(芳基或取代芳基)、NH(CO)-(烷基)(雜芳基或雜環基)、O(取代的或未取代的烷基)(取代的或未取代的芳基)以及NH(CO)(烷基)(芳基或取代芳基)。
某些實施方式中，式A和A’的A基具有以下特征之一(1)A具有至少一個選自羥基、氨基、疊氮基、鹵素和氧代的取代基；(2)A為C1-6烷基，具有至少一個選自羥基、氨基和疊氮基的取代基；(3)A具有至少兩個獨立選自羥基、氨基和疊氮基的取代基；(4)A具有至少兩個獨立選自羥基和氨基的取代基；(5)A具有至少一個羥基取代基和至少一個氨基取代基；(6)A具有至少兩個羥基取代基；(7)A為取代的C2-4脂族基；(8)A為取代的C3脂族基；(9)A具有在相對于將A連接至含G環的碳原子的α位上的(S)-羥基或(R)-羥基；以及(10)A為C1-6飽和脂族基，具有至少一個選自羥基和氰基的取代基。
術語“(S)-羥基”指具有羥基的碳原子的構型為(S)。本發明的實施方式還包括化合物，其中A在相對于與A相連的碳原子的(1)α和γ、(2)β和γ或(3)α和β位的各個碳原子上至少被取代一次。每個α、β和γ碳原子獨立具有(R)或(S)構型。某些實施方式中，本發明提供所述化合物，其中A在相對于與A相連的碳原子的α和β位的各個碳原子上至少被取代一次。
式A及A’的示例性A基包括2，3-二羥丙基、2-羥乙基、3-羥基-4-全氟丁基、2，4，5-三羥戊基、3-氨基-2-羥丙基、1，2-二羥乙基、2，3-二羥基-4-全氟丁基、3-氰基-2-羥丙基、2-氨基-1-羥乙基、3-疊氮基-2-羥丙基、3，3-二氟-2，4-二羥丁基、2，4-二羥丁基、2-羥基-2-對氟苯基-乙基、-CH2(CO)(取代的或未取代的芳基)、-CH2(CO)(烷基或取代烷基，如鹵代烷基或羥烷基)和3，3-二氟-2-羥基戊-4-烯基。
某些實施方式中，A和A’之一的A基為3-氨基-2-羥丙基。
根據一個方面，本發明提供一種式A和A’之一的化合物，其中Q1為OPG1，其中PG1為合適的羥基保護基。合適的羥基保護基為本領域所熟知，包括在“有機合成中的保護基團”(T.W.Greene和P.G.M.Wuts，第3版，John Wiley & Sons，1999，將其全文引入本文作為參考)中詳述的那些基團。某些實施方式中，式A和A’之一的PG1部分連同與之結合的氧原子一起選自酯、醚、甲硅烷基醚、烷基醚、芳基烷基醚和烷氧基烷基醚。這種酯的例子包括甲酸酯、乙酸酯、碳酸酯和磺酸酯。具體的例子包括甲酸酯、苯甲酰甲酸酯、氯乙酸酯、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、對氯苯氧基乙酸酯、3-苯基丙酸酯、4-氧代戊酸酯、4，4-(亞乙基二硫代)戊酸酯、新戊酸酯(三甲基乙酰基)、巴豆酸酯、4-甲氧基巴豆酸酯、苯甲酸酯、對芐基苯甲酸酯、2，4，6-三甲基苯甲酸酯，或者碳酸酯，例如甲基、9-芴基甲基、乙基、2，2，2-三氯乙基、2-(三甲基甲硅烷基)乙基、2-(苯磺酰)乙基、乙烯基、烯丙基和對硝基芐基碳酸酯。這種甲硅烷基醚的例子包括三甲基甲硅烷基醚、三乙基甲硅烷基醚、叔丁基二甲基甲硅烷基醚、叔丁基二苯基甲硅烷基醚、三異丙基甲硅烷基醚及其它的三烷基甲硅烷基醚。烷基醚包括甲基醚、芐基醚、對甲氧基芐基醚、3，4-二甲氧基芐基醚、三苯甲基醚、叔丁基醚、烯丙基醚以及烯丙氧羰基醚或衍生物。烷氧基烷基醚包括縮醛，例如甲氧基甲基醚、甲硫基甲基醚、(2-甲氧基乙氧基)甲基醚、芐氧基甲基醚、β-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基醚和四氫吡喃基醚。芳基烷基醚的例子包括芐基醚、對甲氧基芐基醚(MPM)、3，4-二甲氧基芐基醚、O-硝基芐基醚、對硝基芐基醚、對鹵代芐基醚、2，6-二氯芐基醚、對氰基芐基醚、2-和4-吡啶甲基醚。
某些實施方式中，式A和A’之一的PG1部分連同與之結合的氧原子為甲硅烷基醚或芳基烷基醚。其它的實施方式中，式A和A’之一的PG1部分為叔丁基二甲基硅烷基或苯甲酰基。另外的實施方式中，式A和A’之一的PG1部分為叔丁基二甲基甲硅烷基(“TBS”)。
如上文所一般性定義的，A上的兩個Q1任選地結合在一起以形成具有0-4個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的3-8元的飽和環、部分不飽和環或芳香環。某些實施方式中，A上的兩個Q1共同形成環氧化環。
某些實施方式中，式A和A’的PG5和PG6基團獨立選自上文對式A和A’的PG1基團所描述的那些合適的保護基。其它實施方式中，式A和A’的PG5和PG6基團結合在一起以形成環二醇保護基。這類二醇保護基為本領域所熟知，包括Greene所描述的那些基團，且包括亞環己基和亞芐基二醇保護基。
某些實施方式中，本發明根據以下方案V-a、V-b和V-c，提供一種制備式F-2的化合物的方法。
方案V-a 其它實施方式中，本發明提供ER-817664結晶。
方案V-b
方案V-c 以ER-817664作為結晶中間體，方案VI-a表示用該化合物制備用于制備式F-2的化合物的中間體的一種通用方法。
方案VI-a
如以下方案VI-b所示，在另一種制備用于制備式F-2的化合物的中間體的方法中，使用以上方案VI-a所述的三醇中間體。
方案VI-b 在如上所示的方案VI-b中，用高碘酸鹽處理三醇中間體以生成醛。使該化合物與甲基維悌希試劑同系化(homologated)，將所得的烯烴還原成酯類化合物。用N-碘代丁二酰亞胺處理剩余的游離羥基以生成碘代中間體，用硼氫化鈉還原酯以生成上述羥基化合物。本領域普通技術人員將認識到所得的碘代化合物與以上方案II所述的化合物21相符，其中化合物21在羥基位置上具有保護基。最后經過鋅處理得到上述內酯。本領域普通技術人員將認識到所得的內酯化合物與以上方案II所述的化合物22相符，其中化合物22在羥基位置上具有保護基。
如以下方案VII所示，在用于從D-奎尼酸制備式F-2的化合物的中間體的另一種制備方法中，提供了起始于方案II所述的中間體2的又一條路線。
方案VII 在以上方案VII中，用中間體2(得自方案II)制備立體選擇形式的ER-812829。優選地，其它保護基團可用于保護二醇ER-812829。這類基團為本領域普通技術人員所已知，包括亞環己基和亞芐基二醇保護基。首先，步驟(a)中，用2-溴氯乙酸處理ER-811510的羥基以生成ER-812771。用與Murphy等描述的方法(Tettrahedron Letters，40，(1991)3455-3456)基本相似的方法，以三苯膦處理該溴代中間體以就地(in situ)生成維悌希試劑。然后該維悌希試劑形成內酯ER-812772。步驟(b)中，對雙鍵進行立體選擇加氫得到ER-812829。
如以下方案VII-a所示，本發明還提供一種用于從D-奎尼酸制備式F-2的化合物的中間體的制備方法，該方法起始于以上方案VII所示的中間體ER-812829。
方案VII-a 3、片段F-3根據另一種實施方式，本發明提供化合物F-3 其中，每個PG4獨立選自合適的羥基保護基；R3為CHO或C(O)OR4；R4為合適的羧基保護基；以及LG2為合適的離去基團。
合適的羧酸酯保護基為本領域所熟知，在“有機合成中的保護基團”(T.W.Greene和P.G.M.Wuts，第3版，John Wiley & Sons，1999)中得到詳細描述。某些實施方式中，F-3的R4基為任選取代的C1-6脂族基或任選取代的芳基。合適的R4基的例子包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、芐基和苯基，其中每個基團任選被取代。
如上文所述，合適的離去基團為本領域所熟知，例如參見“高等有機化學(Advanced organic Chemistry)(Jerry March，第4版，pp.351-357，John Wiley and Sons，N.Y.(1992))。此類離去基團包括但不限于鹵素、烷氧基、磺酰氧基、任選取代的烷基磺酰氧基、任選取代的烯基磺酰氧基、任選取代的芳基磺酰氧基、甲硅烷基和重氮基(diazonium moieties)。合適的離去基團的例子包括氯、碘、溴、氟、甲磺酰基(mesyl)、甲苯磺酰基、三氟甲磺酸根(triflate)、硝基苯磺酰基(nosyl)和溴苯磺酰基(brosyl)。某些實施方式中，F-3的LG2部分為碘。
根據另一種實施方式，合適的離去基團可在反應介質中就地生成。例如，式F-3的化合物中的LG2可由該式F-3的化合物的前體就地生成，其中所述前體含有容易被LG2就地取代的基團。這種取代的一個具體例子中，所述式F-3的化合物的前體含有被例如碘等LG2就地取代的基團(例如，三甲基甲硅烷基)。碘的來源可以為諸如N-碘代丁二酰亞胺等。合適離去基團的這類就地生成已為本領域所熟知，例如參見Id。
如上文所述，合適的羥基保護基為本領域所熟知，包括在“有機合成中的保護基團”(T.W.Greene和P.G.M.Wuts，第3版，John Wiley& Sons，1999，將其全文引入本文作為參考)中詳述的那些基團。某些實施方式中，每個PG4連同與之結合的氧原子獨立選自酯、醚、甲硅烷基醚、烷基醚、芳基烷基醚和烷氧基烷基醚。這類酯的例子包括甲酸酯、乙酸酯、碳酸酯和磺酸酯。具體的例子包括甲酸酯、苯甲酰甲酸酯、氯乙酸酯、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、對氯苯氧乙酸酯、3-苯基丙酸酯、4-氧代戊酸酯、4，4-(亞乙基二硫代)戊酸酯、新戊酸酯(三甲基乙酰基)、巴豆酸酯、4-甲氧基巴豆酸酯、苯甲酸酯、對芐基苯甲酸酯、2，4，6-三甲基苯甲酸酯，或者碳酸酯，例如甲基、9-芴基甲基、乙基、2，2，2-三氯乙基、2-(三甲基甲硅烷基)乙基、2-(苯磺酰)乙基、乙烯基、烯丙基和對硝基芐基碳酸酯。此類甲硅烷基醚包括三甲基甲硅烷基醚、三乙基甲硅烷基醚、叔丁基二甲基甲硅烷基醚、叔丁基二苯基甲硅烷基醚、三異丙基甲硅烷基醚及其它的三烷基甲硅烷基醚。烷基醚包括甲基醚、芐基醚、對甲氧基芐基醚、3，4-二甲氧基芐基醚、三苯甲基醚、叔丁基醚、烯丙基醚以及烯丙氧羰基醚或衍生物。烷氧基烷基醚包括縮醛，例如甲氧基甲基醚、甲硫基甲基醚、(2-甲氧基乙氧基)甲基醚、芐氧基甲基醚、β-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基醚和四氫吡喃基醚。芳基烷基醚的例子包括芐基醚、對甲氧基芐基醚(MPM)、3，4-二甲氧基芐基醚、O-硝基芐基醚、對硝基芐基醚、對鹵代芐基醚、2，6-二氯芐基醚、對氰基芐基醚、2-和4-吡啶甲基醚。
某些實施方式中，F-3的PG4部分中的一個、兩個或三個連同與它們結合的氧原子一起為甲硅烷基醚或芳基烷基醚。其它實施方式中，F-3的PG4部分中的一個、兩個或三個為叔丁基二甲基甲硅烷基或芐基。另外的實施方式中，F-3中的所有三個PG4部分均為叔丁基二甲基甲硅烷基。
根據另一種實施方式，提供式F-3的化合物，其中所述化合物具有式F-3’所示的立體化學 其中每個變量同上文定義以及上文及此處的分類及亞類描述。
某些實施方式中，提供化合物F-3a 其中“TBS”指叔丁基二甲基甲硅烷基。
F-3a的詳細合成在下面的實施例中進行闡述。
4、對F-1、F-2和F-3進行組裝以制備化合物I總體上，如以下方案VIII所示，對片段F-1和F-2進行偶合。方案VIII 以上方案VIII表示一種由片段F-1和F-2制備中間體F-5a的通用方法。首先，用與Kishi等描述的方法(Org Lett，425，p 4431(2002))基本相似的方法，對片段F-1和F-2進行偶合以得到中間體F-4。該偶合在手性唑(ER-807363)存在下進行，抑或在不存在ER-807363條件下進行。但是，ER-807363存在下所進行的F-1與F-2的偶合反應具有更高的選擇性。用六甲基二硅基胺基鉀(potassiumhexamethyldisilazide)處理F-4，形成F-4的分子內威廉遜醚(williamsonether)，然后提供立體異構體混合物形式的四氫吡喃F-5。然后對該立體異構體進行分離，得到F-5a。這三個步驟的詳細內容在下面的實施例中進行描述。
根據另一種實施方式，本發明提供化合物F-4
其中PG1、PG2、PG3、LG1和R1同一般性定義以及上文和此處的亞類定義。
某些實施方式中，本發明提供式F-4的化合物，其中所述化合物具有式F-4’所示的立體化學 其中PG1、PG2、PG3、LG1和R1同一般性定義以及上文和此處的亞類定義。
本發明還提供化合物F-4a

其中“MsO”指甲磺酸根，“TBS”指叔丁基二甲基甲硅烷基，“OPv”指新戊酸根。
F-4a的詳細合成在下面的實施例中進行描述。
根據又一種實施方式，本發明提供化合物F-5。
其中各PG1、PG2、PG3、LG1和R1同一般性定義以及上文和此處的亞類定義。
某些實施方式中，本發明提供式F-5的化合物，具有式F-5’或F-5a所示的立體化學。
其中各PG1、PG2、PG3、LG1和R1同一般性定義以及上文和此處的亞類定義。
如以下方案IX所示，脫除中間體F-5a的PG3基團，然后將所得羥基化合物F-6與化合物F-3a(其中R3為CHO)偶合，以生成F-7。
方案IX 以上方案IX表示由F-3a和F-6制備中間體F-9的一種通用方法。先用正丁基鋰和然后用醛F-3a處理砜中間體F-6。然后用Dess-Martin試劑氧化所得的二醇中間體F-7以生成酮-醛中間體F-8，然后用SmI2處理F-8，得到中間體F-9。這些步驟的詳細內容在下面的實施例中進行描述。
方案X 以上方案X描述一種由F-9a(LG2為碘)制備本發明軟海綿素B類似物的通用方法。首先，在與以上方案V所述的那些條件基本相似的條件下，進行分子內偶合以生成羥基化合物F-10。另一種方法中，在本文所述的手性唑配體的存在下進行分子內偶合。加入手性唑配體提高反應產率，增大反應效率。該反應的詳細內容在下面的實施例中進行描述。然后將化合物F-10氧化成F-11。用適當的方法脫除F-11的羥基保護基得到F-12。本領域普通技術人員將認識到脫除化合物F-11的保護基的適當方法取決于實際使用的保護基，包括Greene所述的那些基團。例如，當F-11的各個羥基保護基均為TBS基時，可通過任選緩沖的四丁基氟化銨處理來實現這種脫除。這些步驟的詳細內容在下面的實施例中進行描述。
中間體F-12用于制備諸如美國專利6,365,759和美國專利6,469,182(通過引用將其全文結合到本文中)所述的各種軟海綿素B類似物。
實施例以軟海綿素B類似物B-1939的制備為例，以下實施例描述了用本發明方法和化合物合成軟海綿素B類似物。
本領域的普通技術人員將認識到，通過本發明方法，由本發明化合物所制備的多種軟海綿素B類似物包括但不限于美國專利6,214,865和6,365,759(將其全文引入作為參考)所述的那些軟海綿素B類似物。因此，應理解的是，以下以實施例形式描述的合成方法并不限制所附權利要求定義的本發明范圍。
實施例1F-1a的制備 在適當大小的容器中，使D-葡糖醛酸-6，3-內酯(1份重量，1當量)與乙腈(3份體積)及丙酮(9份體積)混合。加入濃硫酸催化劑，保持體系回流3小時。檢查體系中D-葡糖醛酸-6，3-內酯的溶解情況。冷卻反應液至25℃，攪拌15小時。加入固體碳酸氫鈉(0.5份重量)，另外攪拌反應液3小時。過濾去除固體，部分濃縮有機物，并與另外的乙腈(2份重量)共沸。ER-806045未經分離而用于下一步反應。
-20℃下，將粗品ER-806045(1份重量，1當量)溶解于乙腈(6.5份體積)中。保持內溫低于5℃條件下，加入吡啶(1.5份體積，4.0當量)并緩慢加入SO2Cl2(0.38份體積，1.02當量)。保持內溫低于10℃條件下，乙腈(0.5份體積)沖洗下將反應液反加到冷水(28份體積)中，進行猝滅。通過庚烷(2份體積)沖洗過濾及干燥分離得到白色固體狀ER-806410(0.87份重量，79％理論值)。
在適當大小的容器中加入ER-806410(1份重量，1當量)和THF(10份體積)，然后冷卻至10℃。加入濕的鈀碳(5％，0.5份重量)，攪拌多相溶液10分鐘。反應液經吡啶(0.44份重量，1.3當量)緩沖，在氫氣氛下放置3小時。過濾反應液，用水(2份體積)和乙酸乙酯(10份體積)沖洗固體。所得溶液經1N鹽酸(2.1份體積)酸化，充分混合，分離所得各層。依次用碳酸氫鈉水溶液(5份體積)和水(5份體積)洗滌有機層。減壓濃縮有機物，所得產物用IPA(3.4份體積)重結晶，15℃下加入庚烷(3.4份體積)進一步收獲產物，分離得到白色固體狀ER-806047(產率67％)。
在適當大小的容器中加入ER-806047(1份重量，1當量)和甲苯(8份體積)，然后冷卻至-40℃。保持內溫低于-35℃條件下，加入DIBAL的17重量％甲苯溶液(4.6份重量，1.1當量)。對反應液進行測定后，保持溫度低于10℃條件下，加入丙酮(0.15份重量，0.5當量)，使過量的試劑猝滅。低于10℃下，反應液用乙酸乙酯(7份體積)和15％檸檬酸水溶液(8份重量)稀釋，在20℃下攪拌直至得到澄清溶液。分離各層，水層用乙酸乙酯(2×10份體積)反萃取兩次。合并的有機物依次用碳酸氫鈉水溶液(5份體積)和鹽水(5份體積)洗滌后經硫酸鎂(0.2份重量)干燥。過濾后，減壓下部分濃縮有機層，并與甲苯(4份體積)形成共沸物。以THF溶液的形式保存產物，用于下一步反應。
在適當大小的容器中加入TMSCH2MgCl的醚溶液(20重量％，2.04份重量，3.0當量)，在5℃以下冷卻。保持內溫低于15℃條件下，向反應容器中加入ER-806048(1份重量，1當量)的THF(7份體積)溶液。使反應液升溫至35℃，保持1.5小時。冷卻反應液，低于20℃下用甲苯(7份體積)進行稀釋，用乙酸(3份體積)進行猝滅。反應液進一步用10％氯化銨水溶液(6份重量)稀釋，充分混合，分離各層。有機層依次用碳酸氫鈉水溶液(5份體積)和鹽水(5份體積)洗滌。經硫酸鎂(0.2份重量)干燥，過濾，然后減壓濃縮溶液，分離得到ER-807114的甲苯濃溶液(產率90％)。
在適當大小的容器中依次加入ER-807114(1份重量，1當量)和THF(20份體積)，將溶液冷卻至5℃以下。加入KHMDS的15重量％甲苯溶液(9.16份重量，2.0當量)。用10％氯化銨水溶液(5份體積)猝滅反應。分離各層，有機層依次用氯化銨(5份體積)、2N鹽酸(8.5份體積)、碳酸氫鈉水溶液(5份體積)和水(5份體積)洗滌。用乙酸乙酯將有機物轉移至濃縮器中，濃縮至粘性油(產率90％)。在35℃下，用甲苯(4份體積)和庚烷(4份體積)對該物質進行重結晶，在更低的溫度下(15℃和10℃)，用庚烷(2×4份體積)進一步收獲產物(產率94％)。
在適當大小的容器中加入KOtBu(0.67份重量，1.2當量)和THF(7.7份體積)，冷卻至內溫為-20℃。保持內溫低于-7℃條件下，加入ER-806049(1份重量，1當量)的THF(2.3份體積)溶液。最高溫度保持在-7℃的條件下，加入純BnBr。-20℃下攪拌反應液2小時，10℃下攪拌10小時。反應液用10％氯化銨水溶液(4份體積)猝滅，用甲苯(4份體積)稀釋，充分混合。分離各層，有機層用10％鹽水(4份體積)洗滌，經硫酸鎂(0.15份重量)干燥。減壓濃縮后分離得到ER-806050的tBuOH溶液(2.5份體積)(產率95％)。
在適當大小的容器中依次加入K3Fe(CN)6(3.5份重量，3.4當量)、K2CO3(1.5份重量，3.4當量)、(DHQ)2AQN(0.0134份重量，0.005當量)、水(18份體積)、tBuOH(13份體積)和ER-806050的tBuOH溶液(1份重量，1當量溶于5份體積中)。將多相混合物冷卻至內溫為0℃，加入K2OsO4·2H2O(0.0029份重量，0.22摩爾％)。36小時后，0℃下，用Na2S2O3(3.5當量，1.7份重量)猝滅反應，使燒瓶升溫過夜至室溫。15小時后，將混合物轉移至后處理容器(workupvessel)中，用甲苯(15份體積)和水(4份體積)稀釋。劇烈攪拌并分離兩相混合物。有機層用鹽水(10份體積)洗滌，經濃縮和溶劑交換得到二醇ER-806051和ER-806052粗混合物的10％甲苯溶液(產率92％)。
用另外的甲苯(3份重量)對ER-806051/52(1份重量，1當量)的甲苯溶液(10.1重量％，9.9份重量)進行進一步稀釋。在甲苯溶液中加入N-甲基嗎啉(0.94份重量，3.0當量)和DMAP(0.075份重量，0.2當量)，將所得混合物冷卻至15℃以下。保持內溫低于25℃條件下，加入苯甲酰氯。然后在75℃下攪拌反應液12小時。冷卻反應液至15℃，保持溫度低于25℃條件下，用1N鹽酸(5份體積)進行猝滅。充分混合并分離各層。有機層依次用鹽水(3份重量)、碳酸氫鈉水溶液(3份重量)和鹽水(3份重量)洗滌。干燥有機層(硫酸鎂，0.25份重量)，用活性碳(0.1份重量)處理，經甲苯(1份重量)過濾(Celite，0.3份重量)。減壓下部分濃縮產物，與甲苯(3份重量)形成共沸物。分離得到雙苯甲酸酯ER-806053/54的甲苯溶液(5份體積)(產率95％)。
在惰性氣氛下，將20重量％TiCl4(6.42份重量，3.6當量)的甲苯溶液冷卻至15℃。保持內溫低于30℃條件下，加入Ti(OiPr)4(0.64份重量，1.2當量)，攪拌所得溶液15分鐘。將烯丙基TMS(1.03份重量，4.8當量)與前一步驟得到的ER-806053/54(1份重量，1當量)的22重量％甲苯溶液(4.55份重量，1當量)預混合，加到新鮮生成的Ti(OiPr)Cl3中。在加樣期間保持內溫低于30℃。20-30℃下，攪拌反應液2小時。冷卻反應液至-5℃，用1N鹽酸(6份體積)進行猝滅，期間保持內溫低于30℃。充分攪拌后，分離各層，有機層依次用1N鹽酸(3份體積)和鹽水(2×3份體積)洗滌。有機層與硫酸鎂(0.3份重量)及活性碳(0.15份重量)一起攪拌，甲苯(1體積)沖洗下，過濾通過Celite塞(0.2份重量)。濃縮后分離得到C-34的3∶1混合物形式的產物，產率83％。經IPA/正庚烷重結晶，得到ER-806055(C-34＞99.5％d.e.，產率71％) 室溫下，在適當大小的容器內加入醇ER-806055(1份重量，1當量)、甲苯(7份體積)、DMSO(0.31份重量，2.0當量)和三乙胺(0.78份重量，4.0當量)。將所得溶液冷卻至-19℃。保持內溫低于-10℃條件下，滴加TCAA(0.84份重量，1.4當量)。另外攪拌反應液10分鐘。保持內溫低于10℃條件下，反應液用IPA(0.5份體積)稀釋，用1N鹽酸(5份體積)猝滅。分離各層，依次用碳酸氫鈉水溶液(5份重量)和水(3份體積)洗滌有機層。減壓下部分濃縮有機層(粗產物產率100％)，進一步與另外的甲苯(4份體積)形成共沸物。將所得的酮(ER-806058)溶解于最后4份體積的甲苯中，檢測水份含量，用于下一步反應。
將ER-107446(1份重量，1.5當量)的THF(2.7份體積)溶液冷卻至10℃，保持內溫低于15℃條件下，用25.2重量％LHMDS的THF溶液(5.2份重量，1.4當量)處理。在第二個容器中，將粗品ER-806058的甲苯溶液(21.9重量％，5.4份體積)冷卻至10℃。保持內溫低于20℃條件下，將第一個容器中的內容物轉移至含有基質(substrate)的溶液中。攪拌反應液30分鐘，然后加入1M鹽酸(6.5份體積)進行猝滅，期間保持內溫低于20℃。分離各層，有機層用1∶1的甲醇/水(4×5份體積)洗滌四次后用碳酸氫鈉水溶液(5份體積)和鹽水溶液(2×5份體積)洗滌。產物經硫酸鎂(0.52份重量)干燥、過濾(用0.7份體積甲苯沖洗)，減壓濃縮至重油。
室溫下，將ER-806059溶解于1∶1甲苯/乙腈(5份體積)中。保持起始溫度低于40℃條件下，加入過濾TMSI(1.23份重量，4當量)。加熱反應液至60℃，保持2小時。冷卻反應液至-15℃，低于30℃下，用25％氫氧化銨水溶液進行猝滅。攪拌反應內容物過夜，分離各層。在有機層中另加入甲苯(5份體積)和水(2份體積)。充分混合并分離各層。然后依次用10％亞硫酸鈉水溶液(5份體積)、1N鹽酸(5份體積)、5％碳酸氫鈉水溶液(5份體積)和鹽水(5份體積)洗滌有機層。有機層經硫酸鎂(0.2份重量)干燥、過濾、部分濃縮，得到50％甲苯溶液，用于下一步反應。

在適合大小的容器中，65℃下混合NaBH(OAc)3(1.19份重量，3.15當量)、Bu4NCl(1.04份重量，2.1當量)、DME(8.2份體積)和甲苯(4份體積)，并室溫下攪拌。將混合物加熱至75℃，保持1小時。75℃下加入50重量％ER-806060(1份重量，1當量)的甲苯溶液，另用甲苯(0.3份體積)沖洗。反應溫度升高至85℃，攪拌反應液2-4小時。冷卻反應液至＜10℃，保持內溫低于20℃條件下，用水(3.2份體積)進行猝滅。充分混合并分離各層。有機層依次用碳酸氫鈉水溶液(2×5份體積)和水(2×5份體積)洗滌。有機層經過濃縮和溶劑交換得到40重量％ER-806061的甲醇溶液。
將ER-806061(1份重量，1.0當量)的甲醇溶液(40重量％)溶解于另外的甲醇(1.6份體積)中。加入碳酸鉀(0.24份重量，1.0當量)，反應溫度升高至50℃，保持1小時。冷卻反應液至15℃，內溫低于30℃條件下，用1N鹽酸(3.5份體積，2當量)進行猝滅。用水(3.9份體積)和甲苯(3份體積)稀釋反應液。分離各層，水層用甲苯(1.5份體積)反萃取。水相中加入碳酸氫鈉(0.3份重量)和氯化鈉(0.6份重量)，用nBuOH(3份體積)反萃取。合并該三份有機相，并濃縮至干，得到粗品三醇ER-806064和無機鹽。80℃下，將產物溶解于7∶1甲苯/nBuOH中，經熱過濾、冷卻重結晶和攪拌過夜。經過濾和甲醇沖洗后分離得到ER-806064(F-1b)(五步總產率57％)。FAB(+)-MS M/z357(M+H)。熔點96.2℃。

25℃下，使純化的三醇ER-806064(1份重量，1當量)分散于丙酮(2份體積)中，用2，2-二甲氧基丙烷(1份體積)稀釋，用濃硫酸(0.0086份重量，0.03當量)處理。攪拌反應液直至均勻。反應液用甲苯(5份體積)稀釋，加至5％碳酸鉀(2份體積)中進行猝滅。充分混合并分離各層。有機層用10％鹽水洗滌，經硫酸鈉(0.5份重量)干燥。溶液經過濾(甲苯沖洗)和減壓濃縮得到黃色油狀的ER-806126。該物質用于下一步驟。
將固體NaOtBu(0.34份重量，1.4當量)溶解于THF(2.7份體積)和DMF(0.3份體積)后冷卻至10℃以下。保持內溫低于15℃條件下，THF(0.5份體積)沖洗下，將ER-806126(1份重量，1當量)的THF(2.5份體積)溶液加至NaOtBu溶液中。攪拌30分鐘后，保持溫度低于15℃條件下，加入甲基碘(0.204份體積，1.3當量)(放熱)。使反應液升溫至25℃，反應液用水(5份體積)猝滅，用甲苯(7份體積)稀釋。充分混合并分離各層。有機層用鹽水(2×5份體積)洗滌兩次，經硫酸鈉(0.5份重量)干燥、過濾和減壓濃縮。
將ER-806068(1份重量，1當量)溶解于1份體積的甲醇中。加入水(1.5份體積)和2N鹽酸(1.25份體積，1當量)，并在25℃下攪拌反應液。10℃下，將反應液反加到2M NaOH(1.34份體積)中進行猝滅。反應液用乙酸異丙酯(5份體積)稀釋。充分混合并分離各層。水層用5份體積的乙酸異丙酯反萃取，合并的有機層經硫酸鎂(0.5份重量)干燥、過濾和減壓濃縮得到粗品二醇ER-806063。
向25℃的粗品ER-806063(1份重量，1.0當量)的DMF(4份體積)溶液中加入咪唑(0.62份重量，3.4當量)，然后在低于30℃的內溫下，加入TBSCl(1.02份重量，2.53當量)。25℃下攪拌反應液。反應液用MTBE(10份體積)稀釋，用水(4份體積)洗滌。有機層依次用1M鹽酸(3份體積)、水(3份體積)、碳酸氫鈉水溶液(3份體積)和鹽水(3份體積)洗滌。有機層經硫酸鎂(0.5份重量)干燥、用1份體積的MTBE沖洗過濾，減壓濃縮，用庚烷(4份體積)進行溶劑交換。
將ER-806065(1份重量，1當量)溶解于庚烷、異辛烷或IPA(10份體積)中。冷卻溶液至-60℃(±10℃)以下。低溫下，在溶液中鼓泡通過臭氧，直至該溶液保持藍色。用氮氣吹掃溶液15-30分鐘，邊繼續用氮氣吹洗，邊使反應液升溫至5℃。加入7-15重量％Lindlar催化劑(鉛毒化的5％鈀/碳酸鈣，0.1份重量)。反應器頭(reactor head)用氮氣吹掃數次，抽空、置于一個氫氣氛(g)下。然后使反應液升溫至室溫(20-25℃)。攪拌反應液2.5小時。所得的多相溶液過濾通過Celite(1.0份重量，以MTBE(2份體積)作為沖洗液)。濃縮溶液至干，分離得到1.0份重量的粗品ER-806067。粗分離物經庚烷或異辛烷重結晶，得到ER-806067(F-1a)，為白色固體結晶(五步產率68％)。FAB(+)-MS M/z601(M+H)。熔點64.5℃。
實施例2F-2a的制備 在反應器中加入預沖洗的Amberlyst15(0.05份重量)和水(4.63份體積)，冷卻至內溫為0-5℃。保持內溫為約5℃條件下，在反應器中加入2，3-二氫呋喃(1份重量，1當量)，攪拌1.5小時。在第二個反應器中加入水(4.63份體積)，加熱至內溫為35℃。在相同反應器中加入錫粉(2.2份重量，1.3當量)，分別用2，3-二溴丙烯(3.71份重量，1.3當量)和48％氫溴酸(0.002份體積)稀釋。觀察到反應開始(以溫度示蹤值達到36-38℃指示)之后，保持內溫低于45℃條件下，在第二個反應器中分批加入2，3-二溴丙烯(9×0.37份重量)。加樣完畢后，在35℃內溫下，另外攪拌第二個反應器的內容物60分鐘。以使內溫不超過45℃的速度，將第一個反應器的過濾內容物加到第二個反應器中。加樣完畢后，撤除熱源，在第二個反應器中加入Celite545(2.0份重量)，攪拌所得混合物30分鐘。多相混合物過濾通過Celite545墊(2.0份重量)，另外用水(5份體積)洗滌濾餅。將所有的濾液合并入一個反應器中，加入濃鹽酸(1.5份體積)直至云霧狀溶液變澄清。劇烈攪拌下，在該反應器中加入氯化鈉(3.6份重量)，分層。分離并擱置有機層。用正丁醇(20份體積)萃取水層。排放水層，在反應器中加入第一次分離得到的有機物。有機物用濃碳酸氫鈉(24份體積)洗滌，然后用正丁醇(20份體積)反萃取水層。合并所有的有機物，并進行真空濃縮。將濃縮物溶解于MTBE(10份體積)中，過濾，濾液濃縮至2份體積。攪拌下，使濃縮物冷卻至內溫為0℃，然后加入正庚烷(4份體積)。0℃內溫下，攪拌多相混合物2小時，通過過濾分離得到目的產物，真空干燥得到白色粉末狀的ER-806909(1.34份重量，0.45當量)。
在反應器中加入咪唑(0.65份重量，2當量)、ER-806909(1份重量，1當量)和無水DMF(4.04份體積)。攪拌下，將反應器冷卻至內溫為0℃，然后以使內溫不超過15℃的速度加入叔丁基二苯基氯硅烷(1.25份重量，0.95當量)。保持內溫為＜15℃條件下，另外攪拌反應液1小時。在反應器中加入水(3.2份體積)和正庚烷(6.4份體積)。攪拌混合物5-15分鐘，分層。分離并擱置有機層。用正庚烷(3.2份體積)萃取水層。合并所有的有機物，用鹽水(3.2份體積)洗滌，真空濃縮至恒重，得到黃色油狀的ER-806545(2.13份重量，0.95當量)。該產物未經進一步純化而用于下一步驟。
用模擬移動床(SMB)色譜分離對映異構體ER-806909，得到黃色油狀的ER-808373(0.55份重量，0.55當量)和ER-806721(0.45份重量，0.45當量)。用于分離對映異構體ER-806909的SMB色譜規程如下柱和介質Chiracel OD柱20μm 30mm×150mm(12根柱)溶劑體系96∶4(體積/體積)庚烷∶叔丁醇(流動相)模擬移動床色譜儀Knauer SMB系統CSEP C912等溫線(朗格繆爾，由迎頭分析確定)非目標異構體Qi*＝2.8768×Ci/(1+0.02327*Ci)目標異構體 Qi＝4.5320×Ci/(1+0.0034595*Ci)*其中Qi＝固相濃度(g/L)，Ci＝液相濃度(g/L)柱孔隙率0.658
溫度 27℃用EuroChrom 2000 for windows，SMB指南1.2版(Wissenschaftliche Geratebau Dr.-Ing.Herbert Knauer GmbH，D-14163柏林；作者H.Kniep和A.Seidel-Morgenstern)對流速等進行模擬計算進樣(feed)濃度36g/L(ER-806909)進樣液流速(1號泵) 15mL/min洗脫液流速(2號泵) 76.4mL/minIV區(3號泵)流速 107mL/minII區(4號泵)流速 134.3mL/min(實際流速＝143.5mL/min)I區流速 183.4mL/minIII區流速 149.3mL/min萃余液*流速42.3mL/min*萃余液＝弱結合異構體萃取液流速 49.1mL/min*萃取液＝強結合異構體間歇時間(tact time)(端口切換時間) 0.8864分鐘(53.18秒，實際間歇時間＝54秒)用以上規程，按下列方式分離對映異構體ER-806909。對于11小時運轉，將10L流動相(含36g/L的ER-806909)泵(SilogmodelChemtech)送通過直徑為142mm，孔徑為0.45μm的尼龍濾器(Cole-Parmer # 2916-48)，進入進樣槽(feed tank)。洗脫液槽中注滿36L流動相，該流動相已通過管線內的直徑為45mm的1μm玻璃纖維濾器(Whatman GFC)過濾，在運轉過程中另行加入的1份體積。SMB儀的內溫調節至27℃。
最初啟動時，進樣口和洗脫液進口均與洗脫液槽相連。用流動相溶劑對進樣泵和洗脫液泵進行注液和清洗。啟動SMB儀的柱切換，開啟泵，逐漸提高流速至全速，同時保持各泵之間的絕對流速差。一旦達到全速，測量萃余液流速和萃取液流速，調節泵流速以對泵技術規格中的偏差進行校正。進樣泵(1號泵)減速至0mL/min，進口重新與進樣槽相連，給該泵注入進樣溶液，然后逐步將流速回調到全速的運轉速度。萃余液和萃取液出口連入分離槽中，每2小時得到各個樣品。用下述HPLC方法，通過分析HPLC監測樣品的手性純度。調節2號、3號和4號泵的流速以及間歇時間，以得到所需要的出口純度。
運轉結束時，再次將進樣泵的流速降低至0，并使之與洗脫液槽相連。使進樣泵恢復至全速，洗滌體系20分鐘。在洗滌期間，萃余液和萃取液出口保持開啟10分鐘(10次間歇)，洗滌后，出口連入分離槽中。逐步濃縮洗柱液，并在后續運轉時加入樣品中。
將每次運轉結束時所收集的萃取液(ER-806721)與從同一批起始物中收集的物質合并，用下表1所述的分析HPLC方法再次分析最后批合并物的手性純度。對所收集的萃余液(ER-808373)進行同樣的操作。
表1 ER-806721手性純度的HPLC分析

檢測254nm處的紫外吸收值
在反應器中加入三苯膦(0.7份重量，1.2當量)、對硝基苯甲酸(0.45份重量，1.2當量)、ER-808373(1份重量，1當量)和無水甲苯(8份體積)。冷卻反應液至內溫為0℃，以使內溫不超過7℃的速度，緩慢加入DEAD(1.17份重量，1.2當量)。加入正庚烷(3.3份體積)，將混合物冷卻至內溫為10℃，然后攪拌30-40分鐘。過濾去除所得的沉淀物。分別用正庚烷(3.3份體積)、TBME(0.55份體積)、正庚烷(1.1份體積)和MTBE(0.55份體積)洗滌濾餅。合并所有的濾液并進行真空濃縮。將粗濃縮物溶解于THF(8份體積)中，然后加入水(0.8份體積)和二水氫氧化鋰(0.18份重量，2當量)。室溫下攪拌混合物后加入正庚烷(3.3份體積)，攪拌5分鐘。加入水(2.2份體積)和正庚烷(3.3份體積)，攪拌兩相混合物5分鐘，使分層。分離水層，必要時用正庚烷進行反萃取。合并有機層并進行真空濃縮。粗產物經SiO2柱色譜純化得到淺黃色油狀的ER-806721(0.74-0.85份重量，0.74-0.85當量)。
在反應器中加入ER-806721(1份重量，1當量)和無水二氯甲烷(4.2份體積)。將反應液冷卻至內溫為0-5℃，然后加入三乙胺(0.34份重量，1.5當量)、對甲苯磺酰氯(0.51份重量，1.2當量)和4-(二甲氨基)吡啶(0.001份重量，0.25當量)。室溫下攪拌所得的混合物48小時，然后加入水(1.8份體積)和二氯甲烷(1.8份體積)。充分攪拌后，分離有機物，并濃縮有機物。將濃縮物溶解于MTBE(1.8份體積)中，用鹽水(1.8份體積)洗滌。分離并擱置有機層。水層用MTBE(1.8份體積)反萃取，然后合并所有的有機物并進行真空濃縮。MTBE(7份體積)洗脫下，粗品油過濾通過SiO2塞(70-230目，1份重量)，真空濃縮濾液。將濃縮物溶解于IPA(5份體積)中，加入水(0.25份體積)。將所得混合物冷卻至內溫為15℃，然后加入ER-807204晶種。放入晶種后，將混合物冷卻至內溫為0℃，攪拌4-5小時。過濾懸浮液，用冷的IPA(1份體積)洗滌濾餅，真空干燥濾餅至恒重，得到白色粉末狀的ER-807204(1.05份重量，0.78當量)。IR(薄膜，cm-1)λ2597，1633，1363，1177，907，729.LRMS m/z 602(M+H).
在反應器中加入21％乙醇鈉的乙醇溶液(2.97份重量，0.9當量)。加熱該溶液至內溫為65℃，然后以使內溫不超過70℃的速度加入丙二酸二乙酯(3.24份重量，2當量)。攪拌混合物30分鐘，然后經3-5小時加入ER-806906(1份重量，1當量)。加樣完畢后，攪拌反應液60分鐘，然后冷卻至內溫為50℃。以使內溫不超過65℃的速度加入濃鹽酸(0.84重量，1.05當量)。蒸餾脫除DMF(3份體積)和乙醇后加入六水氯化鎂(0.21份重量，0.1當量)的蒸餾水(0.25份體積，1.4當量)溶液。將所得混合物加熱至內溫為135℃，同時去除餾出液。回流加熱混合物，然后冷卻至室溫，加入鹽水(12份體積)和TBME(16份體積)。分離有機層，用水(1.3份體積)和鹽水(1.2份體積)洗滌后真空濃縮。產物經蒸餾純化得到ER-805552(0.95-1.09份重量，0.71當量)。
在反應器中加入1.0M LHMDS的甲苯溶液(6.61份重量，1.04當量)，冷卻至內溫為-75℃。將ER-805552(1份重量，1當量)溶解于無水THF中，以使內溫不超過-70℃的速度加到反應器中。加樣完畢后，攪拌所得混合物30分鐘，在第二個反應器中加入無水THF(2.5份體積)和甲基碘(1.27份重量，1.25當量)，冷卻至內溫為-75℃。以使內溫不超過-65℃的速度，向甲基碘溶液中加入ER-805552的THF溶液。加樣完畢后，-78℃內溫下攪拌反應液30分鐘。劇烈攪拌下，將反應液逆猝滅(inverse quenched)至1N鹽酸溶液(1 0份體積)和MTBE(8份體積)中。加樣完畢后，分離并棄去水層。有機層用鹽水溶液(3份體積)洗滌，進行真空濃縮。產物經蒸餾純化得到ER-806724(0.75份重量)的約6/1非對映異構體混合物。
在反應器中加入鹽酸N，O-二甲基羥胺(1.05份重量，1.5當量)和無水CH2Cl2(8.1份體積)，冷卻至內溫為0℃。以使內溫不超過5℃的速度加入2M三甲基鋁的甲苯溶液(3.93份重量，1.5當量)。另外攪拌反應液10分鐘，以使內溫不超過5℃的速度加入ER-806724。反應液用CH2Cl2(15份體積)稀釋，然后以使內溫不超過10℃的速度加到內溫為0℃的1.3M酒石酸鈉(20份體積)中進行逆猝滅。加樣完畢后，使分層，分離并擱置水層。有機物用水(1份體積)洗滌，經硫酸鈉(1份重量)干燥、過濾，真空濃縮至除去極微量的二氯甲烷。在濃縮物中分別加入無水DMF(6.3份體積)、咪唑(0.64份重量，1.5當量)和叔丁基二甲基氯硅烷(0.94份重量，0.97當量)。加入水(5份體積)和MTBE(10份體積)，攪拌所得混合物，使分層。分離并棄去水層。有機層用水(5份體積)洗滌，分離各層。加入1N氫氧化鈉(2.5份體積)和甲醇(2.5份體積)，攪拌所得混合物。分離水層，有機層用鹽水(2.5份體積)洗滌后真空濃縮得到棕色油狀的ER-806753(1.94份重量，0.91當量)。

在反應器中加入ER-806753(1份重量，1當量)、CH2Cl2(5份體積)和NMO的50％水溶液(0.8份重量，1.1當量)。將混合物冷卻至內溫為10℃后加入0.197M OsO4的甲苯(0.06份體積，0.004當量)溶液。加入亞硫酸鈉(0.1份重量，0.25當量)和水(0.85份體積)，攪拌反應液1小時。混合物用鹽水(0.85份體積)稀釋，真空濃縮有機物至約1/3體積。在第二個反應器中先后加入高碘酸鹽鈉(1.3份重量，2當量)和THF(2.5份體積)。混合物用pH＝7的磷酸緩沖液(3.0份體積)稀釋，冷卻至內溫為20℃。以使內溫不超過30℃的速度加入濃二醇。加樣完畢后，室溫下攪拌所得混合物。加入水(1.25份體積)、MTBE(7份體積)和鹽水溶液(1.25份體積)，分離各層。有機物用鹽水溶液(1份體積)和飽和碳酸氫鈉(1份體積)的混合物二次洗滌。最后，有機物與鹽水(1份體積)和10％(重量/體積)硫代硫酸鈉溶液(1份體積)的混合物攪拌1小時，然后真空濃縮。粗物質經SiO2柱色譜純化得到黃色油狀的ER-806754(0.93份重量，0.93當量)IR(薄膜，cm-1)λ2953，2856，1725，1664，1463，1254，1092，833.LRMS m/z 332(M+H)。
在反應器中加入ER-806629(1.53份重量，3.1當量)和THF(10.5份體積)，噴射氮氣60分鐘，使溶液脫氣。在第二個惰性反應器中加入ER-807204(1份重量，1.0當量)、ER-806754(0.66份重量，1.2當量)和THF(2.7份體積)，噴射氬氣45分鐘，使該溶液脫氣。在含有ER-806906的反應器中先后加入CrCl2(0.63份重量，3.1當量)和三乙胺(0.52份重量，3.1當量)。在30-35℃內溫下，攪拌該深綠色懸浮液1小時，冷卻至0-5℃，然后加入NiCl2(0.1當量)。經0.5小時向第一個反應器中緩慢加入第二個反應器的內容物，使反應液升溫至室溫。冷卻反應液至內溫為0℃，然后經30分鐘加入乙二胺(1.0份重量，10當量)，在25℃內溫下，攪拌反應液至少30分鐘。在反應液中加入水(4份體積)、TBME(10份體積)和正庚烷(1份體積)，攪拌所得混合物15分鐘，使各相分開(約30min)。分離水層，用TBME(約7.5份體積)反萃取。合并有機層，用水(5份體積)、鹽水(3份體積)洗滌，真空濃縮至最小體積。在粗混合物中加入IPA(10份體積)和SiO2(1份重量)，在25℃內溫下，攪拌所得混合物至多4天。過濾懸浮液，濾餅用IPA(2×1份體積)洗滌。在濾液中加入正庚烷(6.6份體積)，真空濃縮混合物直至形成懸浮液。過濾混合物，濾餅用正庚烷洗滌，然后真空濃縮混合物。粗產物經SiO2柱色譜純化得到亮黃色(clear yellow)油狀的ER-807524(0.54份重量，0.48當量)IR(薄膜，cm-1)λ2934，1668，1471，1108，833.LRMS m/z 704(M+Na)。
在反應器中加入ER-807524(1份重量，1當量)和無水THF(1.25份體積)。將混合物冷卻至內溫為-20℃，以使內溫不超過0℃的速度加入3M甲基氯化鎂(0.59份體積，1.2當量)。加樣完畢后，經2小時使混合物升溫至內溫為0℃。將反應混合物加至半飽和的氯化銨(2.62份體積)中進行逆猝滅，劇烈混合下，用TBME(2份體積)稀釋所得混合物。棄去水層，有機物用鹽水(2份體積)洗滌后真空濃縮。粗產物經SiO2柱色譜純化得到黃色油狀的ER-807525(0.79-0.82份重量，0.85-0.88當量)。
在反應器中加入ER-807525(1份重量，1當量)、N-苯基雙三氟甲磺酰胺(0.59份重量，1.1當量)和無水THF(4.1份體積)，將混合物冷卻至內溫為-75℃。以使內溫不超過-60℃的速度加入0.5MKHMDS的甲苯溶液(2.75份重量，1當量)，然后使反應液經2小時升溫至-20℃。以使內溫不超過0℃的速度用半飽和的氯化銨(2.4份體積)猝滅反應。使混合物升溫至內溫為20℃，加入正庚烷(2.4份體積)。攪拌混合物，分離并棄去水層。有機層用飽和碳酸氫鈉(每次2.3份體積)洗滌三次，然后經真空濃縮得到ER-807526(1.2-1.4份重量，1.0-1.2當量)。該物質不經進一步純化，用于下一步驟。
20℃下，在反應器中加入ER-807526(1份重量，1當量)和無水甲醇(3份體積)。加入1.25M鹽酸的IPA溶液(4份體積，5當量)，攪拌混合物3小時。攪拌下分批加入固體碳酸氫鈉(0.42份重量，5當量)，直至反應混合物的pH達到6-7。甲醇(3×2份體積)洗滌下，過濾反應混合物。真空濃縮所有的濾液，然后經SiO2柱色譜純化得到ER-807527(0.43份重量，0.79-0.85當量)。
用制備HPLC色譜對非對映異構體混合物ER-807527進行分離，濃縮目標級分(desired fraction)，得到亮黃色油狀的ER-806730(0.56份重量，0.56當量)。用于分離ER-806730的制備HPLC色譜規程如下柱和介質 Kromasil球形硅膠柱，60A，粒徑10μml，在7.7cm×60cm的VarianDynamax Rampak柱中填充至7.7cm(直徑)×30cm(長度)HPLC填充站 Varian(Rainin)Dynamax Rampak41/77mm柱填充站HPLC泵 Varian(Rainin)SD-1鈦泵頭主(primary)HPLC檢測器 Waters R403折射率檢測器副(secondary)HPLC檢測器Varian(Rainin)UV-1檢測器(帶有制備流動池)色譜控制和獲得軟件 Varian(Rainin)Dynamax DA 1.4.6版色譜數據處理軟件 Varian(Rainin)Dynamax R4.3版流動相 28.5∶63.7∶7.85(體積/體積)正庚烷∶甲基叔丁醚∶2-丙醇流速 140mL/min柱溫 室溫(25℃)檢測 折射率，陰極(在16X處衰減)，215nm處紫外吸收值流動相梯度 等度運轉時間 40分鐘進樣量 10ml，含0.8g/mL的ER-807527用以上規程，按下列方式對非對映異構體ER-807527進行分離。首先用流動相將各批ER-807527稀釋至0.1g/ml，并在真空下過濾通過孔徑為1μm的47mm玻璃纖維濾器(Whatman GFC)。然后用旋轉蒸發儀真空濃縮濾液。開始在SD-1 HPLC泵A(用流動相注液和清洗)上流動，將流速逐漸提高到140mL/min。對體系進行洗滌直至UV和RI檢測器達到基線穩定。用新鮮的流動相對RI檢測器的參比流動池進行沖洗。
用流動相將當批ER-807527稀釋至0.8g/mL濃度，以獲得8gER-807527注射樣的色譜。注射10mL溶質的等分試樣，對應ER-807527峰值(約在24分鐘峰頂開始，持續至35分鐘)，收集洗脫液。繼續隨后的注樣和級分收集，直至耗盡起始原料。
將對應ER-806730的級分合并，用旋轉蒸發儀進行真空濃縮。用表2所述的HPLC分析方法評價非對映異構純度和面積％純度面積。
表2 ER-806730非對映異構純度的HPLC分析

檢測205nm處紫外吸收值
在反應器中加入ER-806730(1份重量，1當量)和無水二氯甲烷(4.8份體積)，冷卻至內溫為0℃。加入2，4，6-三甲基吡啶(1.16份重量，4當量)和DMAP(0.03份重量，0.1當量)，攪拌所得混合物15分鐘，然后以使內溫不超過10℃的速度加入三甲基乙酰氯(0.3份重量，1.05當量)。加入水(3份體積)，攪拌混合物15分鐘。加入TBME(10份體積)，另外攪拌混合物10分鐘。有機層用1N鹽酸(10份體積)洗滌直至2，4，6-三甲基吡啶呈負電性，然后分別用水(5份體積)、飽和碳酸氫鈉(5份體積)和飽和鹽水(5份體積)洗滌。真空濃縮有機層，濃縮物經SiO2柱色譜純化得到黃色油狀的ER-806732(1.02份重量，0.85當量)。
在反應器中加入ER-806732(1份重量，1當量)和無水THF(2.35份體積)，冷卻至內溫為0℃。以使內溫不超過10℃的速度先后加入三乙胺(0.22份重量，1.1當量)和甲磺酰氯(0.24份重量，1.05當量)。在0℃內溫下攪拌反應液，然后劇烈攪拌下加入正庚烷(3.4份體積)，使分層。有機物用飽和鹽水(3.4份體積)洗滌，經飽和硫酸鈉(2份重量)干燥、過濾，濾餅用正庚烷洗滌直至ER-805973(F-2a)呈負電性。真空濃縮濾液，得到ER-805973(1.12份重量，0.97當量)。粗品ER-805973(F-2a)未經進一步純化而用于下一步驟。IR(薄膜，cm-1)λ2961，1725，1413，1208，926.LRMS m/z 579(M+H)。
實施例3ER-806730的另一種制法 在反應器中加入奎尼酸(1份重量)、環己酮(2.11當量，1.08重量)和濃硫酸(0.011當量，0.0056份重量)。加熱反應混合物至160℃，通過共沸蒸餾脫除水分(在100℃開始共沸)。將反應液冷卻至90℃-100℃，加入碳酸氫鈉(0.0096份重量)和甲苯(3.6份重量)。使反應液經4-6小時冷卻至室溫，所得沉淀物經過濾、甲苯(2×0.9份重量)洗滌以及干燥得到白色粉末狀的1(0.97份重量)。
混合化合物1(1當量，1份重量)和咪唑(2.5當量，0.80份重量)，用氮氣吹掃，使之懸浮于無水THF(10份體積)中。以使溫度保持低于30℃的速度加入TMSCl(1.2當量，0.61份重量)。將反應液冷卻至室溫，加入庚烷(10份體積)，對所得的懸浮液進行過濾。濾餅用1∶1庚烷/THF(10份體積)洗滌，通過常壓蒸餾，用甲苯交換濾液溶劑，得到2a(1.34份重量，計算值)的甲苯(約5份重量)溶液。
冷卻2a溶液至-78℃，以使溫度保持低于-65℃的速度加入DIBAL-H(1.5M甲苯溶液，1.2當量，2.1份重量)。用甲醇(0.3當量，0.034份重量)猝滅過量的DIBAL-H，使溶液升溫至0℃。以使溫度保持低于25℃的速度，將溶液轉移至30重量％羅謝爾鹽(RochelleSalt)水溶液(10份重量)和碳酸氫鈉(1份重量)的溶液中。劇烈攪拌混合物，得到兩相溶液。分離各層，用MTBE(5份體積)萃取水層。合并的有機層先后用水(2.5份重量)和飽和鹽水(2.5份重量)洗滌。濃縮有機物，與TFH進行溶劑交換以得到2b(0.98份重量，計算值)的TFH(5份體積)溶液。
冷卻2b溶液至5℃，加入乙酸(2.9當量，0.51份體積)。加入水(1.0當量，0.055份體積)，在0℃-5℃下攪拌溶液。根據需要，另外加入至多兩等分乙酸和一等分水以促進甲硅烷基脫保護。以使溫度保持低于20℃的速度加入三乙胺(12當量，3.6份重量)和DMAP(0.05當量，0.02份重量)。加入乙酐(6當量，2.0份重量)，室溫下攪拌反應液。將反應液冷卻至5℃，以使溫度保持低于30℃的速度加入飽和碳酸氫鈉水溶液(10份體積)。攪拌所得混合物3-4小時，分離各層。用MTBE(5份體積)萃取水層。合并的有機物用水(5份體積)洗滌。通過蒸餾使用IPA對萃取液進行溶劑交換，得到2c的IPA(3份體積)溶液。將該溶液冷卻至5℃，對所得的結晶進行過濾。濃縮母液，重結晶后獲得二次收獲，得到白色固體結晶狀的2c(0.87份重量)。
將2c(1份重量)溶解于乙腈(6份體積)中，先后加入3-三甲基甲硅烷基戊-4-烯酸甲酯(3.0當量，1.86份重量)和TFAA(0.2當量，0.083份體積)。然后以使溫度保持低于25℃的速度向溶液中加入BF3OEt2(1.0當量，0.42份體積)。在反應液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液(10份體積)，攪拌所得混合物1 5分鐘。混合物先后用庚烷(10份體積)和MTBE(5份體積)萃取，對合并的萃取液進行濃縮，得到橙色油狀的3(0.72份重量，計算值)。
以使溫度保持低于25℃的速度，用甲醇鈉(25％重量/重量甲醇溶液(1.5當量，2.2份重量))處理3(1份重量)的THF(9份體積)溶液。加入1N鹽酸(10份體積)使反應猝滅。分離有機層，水層用MTBE(10份體積)萃取。合并的有機物用水(2.5份體積)、飽和碳酸氫鈉(2.5份體積)和水(2.5份體積)洗滌。濃縮溶液，得到4(0.88份重量，計算值)的THF(2.5份體積)溶液。該溶液直接用于下一步驟。
在4(1份重量)的四氫呋喃(2.5份體積)溶液中加入甲醇(5份體積)。加入1N鹽酸(0.75當量，2份體積)，使反應液升溫至60-80℃。冷卻反應液至室溫，加入飽和碳酸氫鹽水溶液。混合物用DCM(3×2.5份體積)萃取，合并的DCM萃取液與乙酸乙酯進行溶劑交換，得到5的乙酸乙酯(3份體積)溶液。加入庚烷(2份體積)以誘導結晶，將所得懸浮液冷卻至0℃。過濾收集固體，濾餅用冷的乙酸乙酯/庚烷(1∶1體積比)洗滌，經干燥得到白色粉末狀的5(0.55份重量)。
將化合物5(1份重量)溶解于乙腈(10份體積)中，然后依次加入2-乙酸基-2-甲基溴丙烷(2-acetoxy-2-methylpropanyl bromide)(4.0當量，2.2份重量)和水(1當量，0.067份重量)。室溫下攪拌所得混合物，然后冷卻至5-10℃。加入NaOMe(25％重量/重量甲醇溶液，8當量，6.2份重量)，使反應液升溫至室溫。加入飽和碳酸氫鈉(10份體積)猝滅反應液，用MTBE(2×10份體積)萃取。通過常壓蒸餾與甲醇進行溶劑交換，得到6(0.91份重量，計算值)的甲醇(10份體積)溶液。
將6(1份重量)的甲醇(10份體積)溶液加熱至55℃。分6次加入硼氫化鈉(5當量，0.68份重量)，冷卻反應液至5℃，用1N鹽酸(10份體積)進行猝滅。加入鹽水(5份體積)，用乙酸乙酯(2×10份體積)萃取反應液。合并萃取液，經濃縮得到7，為褐色殘渣。
將化合物7(1份重量)溶解于CH2Cl2(10份體積)中，然后在室溫下加入DMAP(0.1當量，0.054份重量)、三乙胺(3.0當量，1.85份體積)和TBDPSCl(1.2當量，1.38份體積)。加入碳酸氫鈉(10份體積)，分離有機層。水層再次用CH2Cl2(10份體積)萃取。合并有機萃取液，經濃縮得到無色油狀的8(1.8份重量，計算值)。
室溫下，在8(1份重量)的THF(10體積)溶液中加入LDA(1.5M環己烷溶液，4當量，6份體積)。使該溶液升溫至50℃后用1N鹽酸(5份體積)進行猝滅，用MTBE(10份體積)萃取。濃縮萃取液得到油狀的9(0.9份重量)。
將9(1份重量)的二氯甲烷(5份體積)和甲醇(5份體積)溶液冷卻至-60℃，保持溫度低于-50℃條件下，用O3進行處理。用氮氣吹掃反應液，加入NaBH4(0.5當量，0.04份重量)，使混合物升溫至0℃。另外分批加入NaBH4(1當量，0.08份重量)，使反應液升溫至室溫。3小時后，用1N鹽酸(10份體積)猝滅混合物，加入二氯甲烷(5份體積)，使分層。水層用二氯甲烷(10份體積)再萃取，合并有機萃取液，經濃縮得到無色油狀的10(0.97份重量)。
將化合物10溶解于THF(10份體積)中，加入磷酸鹽緩沖液(pH＝7，5份體積)。加入NaIO4(2當量，0.854份重量)，使反應液升溫至室溫。加入水(5份體積)和MTBE(10份體積)，劇烈攪拌所得混合物10分鐘。分離有機層，用10％重量/體積硫代硫酸鈉水溶液(5份體積)、水(5份體積)和鹽水(5份體積)洗滌，然后與THF共沸蒸餾干燥(約含水200ppm)，得到11(0.93份重量，計算值)的THF(10份體積)溶液。該溶液直接用于下一步驟。
在11(1份重量)的THF(10份體積)溶液中加入(甲酯基亞甲基)三苯膦(1份重量)，加熱至65℃。加入庚烷(40份體積)，攪拌所得混合物30分鐘。對所得沉淀物進行過濾，濃縮濾液至總體積為10份體積。加入SiO2(5份重量)，懸浮液過濾通過SiO2墊(用MTBE(20-40份體積)洗脫)。用甲醇交換溶劑，得到12(0.95份重量，計算值)的甲醇(10份體積)溶液，直接用于下一步驟。
在12(1份重量)的甲醇(10份體積)溶液中加入10％重量/重量鈀碳(0.23當量，0.37份重量)，并用氫氣處理。過濾懸浮液，同時用THF(10份體積)沖洗濾餅。用THF交換溶劑，得到13(0.95份重量，計算值)的THF(10份體積)溶液，直接用于下一步驟。
將13(1份重量)的THF(10份體積)溶液冷卻至0-5℃，以保持溫度低于10℃的速度加入LAH(1M THF溶液，0.78當量，1.5份體積)。然后以保持溫度低于10℃的速度加入水(1.7當量，0.06份體積)。以保持溫度低于10℃的速度先后加入氫氧化鈉10％重量/水溶液(0.16當量，0.06份體積)和水(4.98當量，0.17份體積)，所得混合物在劇烈攪拌下升溫至室溫。過濾懸浮液，濾餅用THF(5份體積)沖洗。對濾液進行部分濃縮，得到14(0.9份重量，計算值)的THF(10份體積)溶液，直接用于下一步驟。

將14(1份重量)的THF(10份體積)溶液冷卻至0℃，然后加入咪唑和TrCl(1.5當量，0.59份重量)。加入飽和碳酸氫鈉水溶液(5份體積)，用庚烷(10份體積)萃取混合物。萃取液用鹽水(10份體積)洗滌，經濃縮得到15(1.35份重量)。
將化合物15(1份重量)溶解于THF(10份體積)中，用TBAF(1M，1.2當量，1.6份體積)進行處理。濃縮反應混合物至2份體積，然后加入庚烷(5份體積)和SiO2(5份體積)。過濾所得懸浮液，先后用庚烷(5份體積)和THF(10份體積)進行洗脫。收集THF洗脫液，得到16(0.61份重量，計算值)的THF(10份體積)溶液，直接用于下一步驟。
在16(1份重量)的THF(10份體積)溶液中加入PPh3(5當量，2.3份重量)、吡啶(10當量，1份體積)和NIS(3.0當量，1.1份重量)。然后加入20％重量/重量檸檬酸水溶液(10當量，14份重量)，攪拌所得混合物10分鐘。反應液用庚烷(10份體積)稀釋，分離水層。有機層用水(5份體積)、10％重量/體積硫代硫酸鈉水溶液(5份體積)、水(5份體積)和鹽水(5份體積)洗滌。用乙醇交換溶劑，濃縮至5份體積。加入水(10份體積)，對所得沉淀物進行過濾收集，得到白色固體狀的17(0.65份重量)。

將化合物17(1份重量)和氰化鉀(6當量，0.54份體積)懸浮于乙醇(5份體積)和水(10份體積)中，將所得懸浮液加熱至80℃。反應液用水(5份體積)和乙酸乙酯(10份體積)稀釋，混合10分鐘。去除水層，有機層用水(5份體積)和鹽水(5份體積)洗滌。用乙醇交換溶劑，得到18(0.75份重量)的乙醇(10份體積)溶液，直接用于下一步驟。
在18(1份重量)的乙醇(10份體積)溶液中加入鋅(37當量，3.9份重量)，加熱混合物至75-80℃。將反應液部分濃縮至2-3份體積，冷卻至室溫，用MTBE(10份體積)和水(5份體積)使之分層。去除水層，有機層用飽和碳酸氫鈉(5份體積)、水(5份體積)和鹽水(5份體積)洗滌。然后經THF共沸蒸餾干燥至含水約200ppm，得到19(0.81份重量)的THF(10份體積)溶液。所得溶液直接用于下一步驟。
-78℃下，在19(1份重量)的THF(10份體積)溶液中加入LDA(1.0M THF溶液，1.2當量，2.4份體積)。攪拌所得混合物10分鐘，然后在-78℃下，向甲基碘(1.5當量，0.19份體積)的THF(5份體積)溶液中加入該烯醇化物溶液。將反應液加至飽和碳酸氫鈉(10份體積)中進行逆猝滅，用MTBE(15份體積)萃取。萃取液用鹽水(5份體積)洗滌，濃縮后經色譜純化得到20(0.86份重量)。
0℃下，在鹽酸二甲基羥胺(1份重量)的二氯甲烷(2.5份體積)懸浮液中加入AlMe3(2M甲苯溶液，1.5當量，1.5份體積)。以保持反應溫度低于5℃的速度加入20(1份重量)的二氯甲烷(5份體積)溶液。然后在保持溫度低于10℃條件下，向酒石酸鈉水溶液(1.3M，20份體積)中加入反應混合物。使分層并進行分離，有機層經硫酸鈉(5份重量)干燥。對所得懸浮液進行過濾，濃縮濾液。將殘渣溶解于DMF(2份體積)中，然后加入咪唑(0.19份重量)和TBSCl(0.29份重量)。反應液用水(5份體積)和MTBE(10份體積)稀釋，攪拌10分鐘。去除水層，有機層用水(5份體積)洗滌。在氫氧化鈉水溶液(1N，0.78份體積)和甲醇(0.7份體積)的溶液中加入萃取液。攪拌反應液后去除水層，有機層用鹽水(2.5份體積)洗滌，經濃縮得到21(1.2份重量)。
以保持反應溫度低于0℃的速度，在21(1份重量)的無水THF(1.11份重量，1.25份體積)溶液中加入甲基氯化鎂(3.0M，59份重量，1.2當量)。0℃下攪拌后，將反應液加至飽和氯化銨(2.5份體積)和水(2.3份體積)中進行逆猝滅。所得混合物用MTBE(10份體積)稀釋，劇烈攪拌。分離水層，有機層用鹽水(2.5份體積)洗滌，經濃縮得到22(0.84份重量)。
將化合物22(1份重量)溶解于THF(4份體積)中，冷卻至-78℃。保持溫度低于-60℃條件下，加入KHMDS(1.5M甲苯溶液，1.01當量，2.78份重量)。加入Tf2NPh(0.62份重量，1.1當量)的THF(1.5份體積)溶液，使反應液升溫至-20℃。加入飽和氯化銨(2.5份體積)、水(2.5份體積)和正庚烷(2.5份體積)，混合物升溫至室溫。使分層，去除水層。有機萃取液用飽和碳酸氫鈉水溶液(3×2.5份體積)和鹽水(2.5份體積)洗滌，然后經真空濃縮得到23(1.1份重量)。
將化合物23溶解于甲醇(2.5份體積)中，冷卻至15℃。加入鹽酸(5N IPA溶液，1.30當量，1.18份重量)，所得溶液升溫至25℃。冷卻反應液至0℃，加入碳酸氫鈉(3當量，0.33份重量)。攪拌反應液15分鐘，過濾去除所得沉淀物。濾餅用ACS級甲醇(1份體積)洗滌，合并濾液并進行濃縮。粗濃縮物經色譜純化得到ER-806730(24)(0.5份重量)。
實施例4a采用以上方案V所闡述的通用方案下，實施例4a提供另一種制備式A的化合物(制備F2的中間體)的方法。該方法以ER-812935為中間體(根據實施例3(化合物4)進行制備)。
將ER-812935(1份重量)溶解于THF(10份體積)中，冷卻至0℃。保持溫度低于5℃條件下，加入LAH(1.0M THF溶液，0.70當量，2.0份體積)。劇烈攪拌下，用水(0.078份體積)猝滅過量的試劑，期間保持溫度低于5℃。邊保持劇烈攪拌，邊先后加入氫氧化鈉(15％重量/重量水溶液(0.078份體積))和水(0.18份體積)。加入Celite(2份重量)后過濾懸浮液，用THF(5份體積)沖洗濾餅。將ER-817633(0.92份重量，基于100％轉化率的計算值)濃縮至5份體積，直接用于下一步驟。
用THF(5份體積)稀釋前面所制備的ER-816961溶液(1份重量溶于5份體積THF)，冷卻至5℃，加入三乙胺(3當量，0.94份重量)。以保持溫度低于10℃的速度加入MsCl(1.05當量，0.25份體積)。加入水(5份重量)，使反應猝滅。加入庚烷(8份體積)，使混合物分層。分離水相并用MTBE(2份體積)萃取。合并的有機萃取液用飽和碳酸氫鈉(5份體積)和水(1.9份體積)洗滌。濃縮有機層，用乙醇交換溶劑以制備ER-818937(1.23份重量，基于100％轉化率的計算值)的乙醇(1份體積)溶液，直接用于下一步驟。

用乙醇(190標準強度，9份體積)稀釋前面所制備的ER-818937溶液(1份重量溶于0.8份體積乙醇)。加入氰化鉀(3當量，0.41份重量)，加熱懸浮液至70-80℃。冷卻反應液至室溫，先后加入水(10份體積)和MTBE(10份體積)。分離各層，水層用MTBE(5份體積)萃取。合并的有機物用水(2份體積)和飽和鹽水(4份重量)洗滌。濃縮萃取液，直接用于下一步驟。
將ER-818950溶解于乙酸(5份體積)中，加入鹽酸(1.0M，1當量，3份體積)，室溫下攪拌反應液。冷卻反應液至0℃，以保持溫度低于10℃的速度加入氫氧化鈉(50重量％，30當量，7份重量)。用庚烷(2×10份體積)萃取溶液。水相用氯化鈉飽和，用乙腈(2×10份體積)萃取。濃縮合并的乙腈萃取液，通過常壓蒸餾，與乙酸乙酯進行溶劑交換，得到ER-817664的乙酸乙酯(3份體積)溶液。從熱溶液中濾出鹽后冷卻至0℃。過濾懸浮液得到白色固體結晶狀的ER-817664。
實施例4b實施例4b提供另一種用以上方案Vb和Vc所述的通用方案制備式F-2的化合物的方法。該方法以ER-817664(按照以上實施例4a進行制備)作為中間體。
將ER-817664(1份重量)溶解于乙腈(10份體積)中，冷卻懸浮液至0℃，先后加入2-乙酸基-2-甲基溴丙烷(4.0當量，2.4份體積)和水(1.0當量，0.07份體積)。0℃下攪拌所得混合物2小時。0℃下，緩慢加入碳酸氫鈉(飽和水溶液，8.0當量，40份體積)。室溫下攪拌所得混合物30分鐘，然后用MTBE(2×20份體積)進行萃取。有機層用鹽水(5份體積)洗滌，經濃縮得到無色油狀產物。
將剛剛在上面描述的溴起始物(1份重量)溶解于甲苯(10份體積)中。加入DBU(1.8當量，0.73份體積)，80℃下，對混合物進行加熱。冷卻混合物至室溫，用MTBE(20份體積)稀釋，用水(5份體積)和鹽水(5份體積)洗滌。然后濃縮有機層得到灰白色粉末狀產物。
將起始烯烴化合物(1份重量)(剛在上面描述)溶解于二氯甲烷(5份體積)和甲醇(5份體積)中，冷卻至-40℃至-45℃。用O3處理溶液。通過氮氣吹掃除去過量的O3，使溶液升溫至-15℃。加入NaBH4(1.0當量，0.18份重量)，使混合物升溫至0℃。加入碳酸鉀(1.3當量)，室溫下攪拌懸浮液。0℃下，用1N鹽酸(約4當量，約20份體積)中和反應液，溶液用MTBE(10份體積)萃取以除去親脂物質。濃縮水層以除去二氯甲烷和甲醇。先后加入THF(4份體積)和NaIO4(2當量，2份重量)。反應液用MTBE(10份體積)和n-BuOH(10份體積)萃取。對合并的有機萃取液進行濃縮，所得粉末經乙酸乙酯研制。過濾后分離得到淺黃色粉末狀的內半縮醛。
將ER-818638(1份重量)與LiCl(2當量，0.35份重量)攪拌于乙腈(8.7份體積)中。25℃下，加入Hunigs堿(1.5當量)。加入1N鹽酸(5份體積)，用MTBE(10份體積)萃取混合物。濃縮有機物得到ER-818640，用于下一步驟。
將起始α-烯酯化合物(1份重量)(剛在上面描述)溶解于甲醇(10份體積)中，氮氣下加入10重量％鈀碳(0.09當量，約0.33份重量)。然后在氫氣下攪拌該懸浮液。懸浮液過濾通過Celite墊(20份重量)，用甲醇(20份體積)沖洗濾餅。濃縮濾液，經快速色譜純化得到無色油狀產物(產率94.3％)。
在酯(1份重量)的THF(15份體積)溶液中分別加入吡啶(10當量)、Ph3P(7當量)和NIS(4當量)。室溫下攪拌反應混合物。加入檸檬酸水溶液(20重量％，10當量)，用TBME(30份體積)稀釋混合物。分離水層，有機層用水(5份體積)、硫代硫酸鈉水溶液(10％重量/體積，5份體積)、水(5份體積)和鹽水(5份體積)洗滌。濃縮有機層，經快速色譜純化得到無色油狀產物。
將碘起始物(1份重量)溶解于甲醇(30份體積)中，加熱至55℃。55℃下，分6次經80分鐘加入NaBH4(47當量)。冷卻反應液至0℃，用1N鹽酸(30份體積)進行猝滅。攪拌5分鐘后，混合物用鹽水(30分體積)稀釋，用DCM(50份體積×2)萃取。有機層經硫酸鈉干燥、濃縮。粗產物直接用于下一步驟。
將醇起始物(1份重量)(剛在上面描述)溶解于乙醇(70份體積)中，加入Zn(165當量)。75-80℃下，對懸浮液進行回流。冷卻反應混合物至室溫，加入1N鹽酸(70份體積)。用DCM(3×100份體積)萃取混合物，有機層用鹽水洗滌并進行濃縮。
將內酯起始物(剛在上面描述)溶解于DCM(50份體積)中，在氮氣下，室溫下分別加入三乙胺(5.0當量)、DMAP(0.3當量)和TBDPSCl(1.5當量)，室溫下攪拌所得溶液2-3小時。反應完全后，混合物用TBME(100份體積)稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(10份體積)、水(10份體積)和鹽水(10份體積)洗滌。濃縮有機層，經快速色譜純化得到無色油狀產物。
實施例4c采用以上方案VII所述的通用方案，實施例4c提供另一種制備式F-2的化合物的方法。該方法以ER-811510(按照實施例3制備，其中用丙酮代替環己酮)作為中間體。
將ER-811510(1份重量，1當量)溶解于二氯甲烷(6.3份體積)中，冷卻至-5℃。保持溫度低于0℃條件下，先后加入吡啶(0.41份體積，1.1當量)和溴乙酰溴(0.44份體積，1.1當量)。攪拌反應液1小時，升溫至室溫。加入水(8份體積)，使分層。有機層依次用五水硫酸銅水溶液(1.0M，10份體積)、水(8份體積)和鹽水(10份體積)洗滌，經硫酸鎂干燥、過濾以及真空濃縮，得到褐色固體狀的ER-812771。
將ER-812771(1份重量，1當量)溶解于乙腈(6份體積)中，加入三苯膦，加熱反應液至50℃，保持45分鐘。冷卻反應液至-10℃后加入1，8-二氮雜雙環[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU，0.35份體積，0.8當量)。攪拌反應液15分鐘，加熱至80℃，保持45分鐘，然后冷卻至室溫。加入氯化銨(飽和水溶液，10份體積)，水層用乙酸乙酯(3×10份體積)萃取。合并的有機層經硫酸鎂干燥，真空濃縮。粗產物經色譜純化得到白色固體狀的ER-812772。
將ER-812772(1份重量，1當量)溶解于乙酸乙酯(8份體積)中，加入10％鈀碳(0.05份重量，0.01當量)，用氮氣吹掃反應液后在氫氣氛下攪拌2小時。在乙酸乙酯洗滌下，通過硅藻土過濾脫除催化劑。對合并的濾液進行真空濃縮得到白色固體狀的ER-812829。
實施例5F-3a的制備 在反應容器中加入D-古洛糖酸內酯(1份重量，1當量)、環己酮(2-3當量)、甲苯(6份體積)和對甲苯磺酸(0.021份重量，0.02當量)。攪拌下，加熱反應液至回流。共沸脫除水分后反應完全。將反應混合物冷卻至85-90℃，攪拌加劇。攪拌下，經20-30分鐘加入庚烷(5.2份體積)。冷卻至65-70℃，在65-70℃下攪拌30分鐘。在65-70℃下過濾固體產物，同時保持母液溫度＞35℃。35-40℃下進行再過濾，母液保持室溫30分鐘。再過濾母液。濾餅用庚烷(2×1.7份體積)洗滌兩次后經干燥得到ER-805715(產率84％，1.6份重量)。
制備ER-805715的另一種方法中，將D-古洛糖酸內酯(1份重量)、環己酮(1.32份重量，2.4當量)、對甲苯磺酸一水合物(0.02份重量，0.02當量)和甲苯(12份體積)一起回流19小時，同時共沸脫除水分。混合物先后用5％碳酸氫鈉水溶液(4份體積)和飽和氯化鈉水溶液(2份體積×2，pH＝7)洗滌。蒸餾濃縮有機相(剩余4.5份計算體積甲苯)，冷卻至100℃后，在保持內溫＞80℃條件下加入庚烷(10份體積)。加熱混合物至回流，保持至少1小時，然后冷卻至85℃老化3小時，至80℃老化3小時后冷卻至40℃老化12小時。過濾收集產物，濾餅用庚烷(2份體積)洗滌。氣流干燥濾餅，得到ER-805715(產率78％，1.48份重量)。
在反應容器中加入ER-805715(1份重量，1當量)，使之溶解于無水THF(3.34份體積)和無水甲苯(2.5份體積)中。冷卻混合物至-15℃--10℃。-15℃--10℃下，經1小時加入DIBALH(1.5M甲苯溶液，2.4份體積，1.2當量)并攪拌混合物15-30分鐘。10℃下，將反應液加入酒石酸鉀鈉溶液(1份重量酒石酸鉀鈉溶于2.9份重量水)中進行逆猝滅，使所得混合物升溫至室溫，攪拌4小時。過濾混合物后分層，用MTBE(2份體積)萃取。合并有機層，真空脫除溶劑，得到ER-805814(1.02份重量，產率100％)。
將ER-805814(1份重量)溶解于無水THF(3.3份體積)，用(甲氧基甲基)三苯基氯化膦(2.11份重量，2.1當量)處理。加熱反應混合物至28-32℃，然后在保持反應溫度為30-35℃條件下，經100-140分鐘加入KOtBu(0.66份重量，2當量)的無水THF(2.64份體積)溶液。5小時后冷卻反應液至20-25℃，加入MTBE(5.11份體積)，攪拌混合物。加入鹽水(3份重量)和水(3份重量)(加料開始就出現放熱，用水浴控制在20-25℃)。分離有機層，用馬來酸酐(0.27份重量)的MTBE/THF(1/1體積比，1.78份體積)溶液進行處理。向反應混合物中緩慢加入氫氧化鈉溶液(0.88份重量溶于2.5份體積水)。濃縮有機層，得到粗品ER-805815(0.985份重量)。殘渣用MTBE/庚烷(1/4體積比，6.6份體積)研制三次。MTBE/庚烷(1/2體積比，45份體積)洗脫下，萃取液過濾通過SiO2(3份重量)。濃縮濾液得到ER-805815(0.88份重量，產率81％)。
在制備ER-805815的另一種方法中，保持反應溫度為0-10℃條件下，在(甲氧基甲基)三苯基氯化膦(3.12份重量，3.1當量)的THF(1.78份重量)懸浮液中加入t-BuOK(0.989份重量，3當量)的THF(4份重量)溶液。用THF(2×0.7份重量)沖洗該加樣容器(additionvessel)。保持0-10℃下，向反應液中加入ER-805814(1份重量，1當量)的THF(1.42份重量)溶液。用THF(2×0.7份重量)沖洗該加樣容器。20-30℃下攪拌混合物過夜，30-35℃下攪拌3小時。冷卻反應液至30℃以下，先后用MTBE(3.7份重量)和10重量％氯化鈉水溶液(4份重量)稀釋。攪拌混合物30分鐘，分離各層。加入馬來酸酐(0.63份重量，2.2當量)，室溫下攪拌混合物30分鐘。保持反應液低于15℃條件下，滴加水(6份重量)和氫氧化鈉溶液(48重量％，0.64份重量，2.6當量)。低于15℃下攪拌后，分離下層。先后加入水(6份重量)和氫氧化鈉溶液(48重量％，0.64份重量，2.6當量)，加樣期間保持混合物低于15℃。低于15℃下攪拌后分離下層。有機層用15重量％氯化鈉水溶液(3×4份重量)洗滌三次。真空濃縮有機層。殘渣用MTBE(1份重量)稀釋并進行真空濃縮。40-50℃下，經30分鐘滴加IPE(3份重量)對殘渣進行稀釋。40-50℃下，攪拌懸浮液1小時，緩慢冷卻至0-10℃，攪拌1小時。過濾固體，濾餅用IPE(2份重量)洗滌。真空濃縮濾液和洗滌液。殘渣用甲醇(2.37份重量)和水(0.4份重量)處理，用庚烷(2.74份重量)萃取。下層用庚烷(2.05份)萃取9次。合并萃取液，經真空濃縮得到ER-805815(1.07份重量，98.6％)。
ER-805815的另一種后處理方法中，鹽水洗滌和濃縮后所制得的粗有機層用MTBE(2.86份重量)和硅藻土(0.5份重量)處理。攪拌2.5小時后，經2小時加入庚烷(1.46份重量)，攪拌混合物過夜。過濾沉淀物。濾餅用MTBE/庚烷(1∶1，5份重量)洗滌。真空濃縮濾液直至體積減小至約3份體積。殘渣用甲醇(2份重量)和水(6份重量)溶解，用庚烷/MTBE(5∶1，3×6份重量)萃取混合物。分離有機層，經濃縮得到ER-805815，用于下一步驟。
將ER-805815(1份重量)溶解于丙酮(2.4份體積)和水(0.4份體積)中。加入N-甲基嗎啉N-氧化物(0.62份重量，2當量)，冷卻混合物至0-5℃。加入OsO4(0.15M水溶液，0.065份體積)，反應液保持在0-5℃。0-5℃下攪拌反應混合物12小時。0-2℃下，經1小時加入水(0.2份體積)。0-5℃下攪拌混合物1小時。過濾產物，用預冷(0-5℃)的丙酮/水(1/1，體積比，2×0.7份體積)洗滌固體兩次。干燥產物，得到ER-805816(0.526份重量，52％產率，殘留Os＜17ppm)。
制備ER-805816的另一種方法中，在四頸燒瓶中加入ER-805815(1份重量，1當量)的丙酮(4份體積)溶液，然后在室溫下加入水(0.5份重量)。在混合物中加入無水N-甲基嗎啉-N-氧化物(0.38份重量，1.2當量)。25-35℃下，邊用水冷卻，邊分批加入二水鋨酸鉀(0.003份重量，0.003當量)。將混合物在該溫度下保持4小時。室溫下加入硫代硫酸鈉(0.075份重量，0.49當量)的水(0.5份重量)溶液，然后攪拌混合物0.5小時。將混合物冷卻至0-5℃，攪拌2小時。收集所得的沉淀物，濕的濾餅用甲醇(0.6份重量)和水(1.5份重量)洗滌得到粗產物(1.25份重量)。對粗產物樣品進行干燥(0.611份重量)。在水(3.05份重量)中加入粗品ER-805816(1.25份重量)，約25℃下攪拌2小時。過濾沉淀物，用水(1.53份重量)洗滌，得到粗品濕濾餅(1.05份重量)。對粗產物樣品進行干燥和取樣，ICP Os＝37ppm。在水(2.81份重量)中加入粗品ER-805816(1.05份重量)，約25℃下攪拌2小時。過濾沉淀物，用水(1.4份重量)和甲醇(0.45份重量)洗滌，得到粗品ER-805816(0.736份重量)。對濕的濾餅進行干燥得到粗產物(0.56份重量，ICP(Os)＝28ppm)。45-55℃下，將ER-80581 6(0.56份重量)溶解于丙酮(1.76份重量)中。在溶液中加入活性碳(0.027份重量)，相同溫度下攪拌0.5小時。過濾混合物，濾餅用熱丙酮(0.214份重量)洗滌。濾液保持在45-50℃，經10分鐘加入水(0.83份重量)，加水過程中溫度保持在40-50℃。冷卻混合物至0-5℃，攪拌1.5小時。過濾白色沉淀物，用丙酮(0.17份重量)和水(0.22份重量)的溶液洗滌后干燥，得到ER-805816(0.508份重量，0.49當量，KF5.0％，ICP(Os)9.6ppm)。
將ER-805816(1份重量)懸浮于乙酸(0.89份體積，5.8當量)和乙酸酐(3.57份重量，13當量)中。加入無水氯化鋅(0.2份重量，0.54當量)。18-22℃下攪拌反應混合物24小時。反應液在冰(5份重量)和水(5份體積)中進行猝滅。攪拌下加入乙酸乙酯(10份體積)，分離水層。水層用乙酸乙酯(10份體積)反萃取。合并的有機層依次用鹽水(10份體積)、5％乙醇鈉水溶液(6份體積)和鹽水(6份體積)洗滌。濃縮有機層。將粗濃縮物溶解于25％EtOAc/hex(4份體積)中，經SiO2過濾。濾墊用25％EtOAc/hex(2×12份體積)洗滌，進一步用25％EtOAc/hex(48份體積)洗滌。濃縮有機層，得到ER-805819(1份重量，81％)。
制備ER-805819的另一種方法中，將氯化鋅(0.2份重量，0.54當量)、乙酸酐(2.75份重量，10當量)和乙酸(1份重量，6當量)混合。冷卻混合物至15-20℃。保持15-30℃內溫條件下，加入ER-805816(1份重量，1當量)。然后在35-40℃下攪拌混合物6小時。冷卻反應混合物至25℃以下。保持反應溫度低于25℃條件下，滴加甲醇(3.2份重量，4份體積)。加入庚烷(2.7份重量，4份體積)。保持反應溫度低于25℃條件下，加入水(4份重量，4份體積)。攪拌混合物15分鐘，然后分離各相。下層用庚烷(2.7份重量，4份體積)洗滌兩次，棄去庚烷層。下層用甲苯(6.1份重量，8份體積)萃取兩次。合并的甲苯層用17重量％碳酸氫鉀水溶液(0.82份重量碳酸氫鉀溶于3.98重量份水，4.36份體積)洗滌兩次，用水(4份重量)洗滌兩次并進行濃縮。25-30℃下加入甲醇(3.95份重量，5份體積)，攪拌混合物10分鐘。25-30℃下加入水(0.3份重量)。冷卻混合物至0℃，加入晶種。0℃下攪拌混合物1小時，經1小時滴加水(0.7份重量)。經1小時滴加水(4份重量)。過濾所得的沉淀物，濾餅用0℃的甲醇(1.03份重量)和水(0.7份重量)的溶液洗滌兩次。干燥濾餅得到ER-805819(0.99份重量，0.84當量)。
將ER-805819(1份重量)溶解于無水乙腈(15份體積)中，用ER-803055(0.93份體積，2當量)處理。冷卻反應混合物至0-5℃，經5分鐘加入BF3-OEt2(0.54份體積，1.95當量)，期間保持反應溫度為0-5℃。0-5℃下攪拌反應混合物12小時。劇烈攪拌下，將反應液加至飽和碳酸氫鈉(20份體積)中，進行猝滅。用乙酸乙酯(2×8份體積)萃取兩次。合并的有機物用鹽水(12份體積)洗滌，經濃縮得到ER-805821(1份重量，88％產率，直接使用)。
制備ER-805821的另一種方法中，將ER-805819(1份重量，1當量)和ER-803055(0.93份體積，2當量)溶解于無水乙腈(5.46份重量，7份體積)中。冷卻反應混合物至0-5℃，經5分鐘加入BF3-OEt2(0.54份體積，1.95當量)，期間保持反應溫度為0-5℃。0-5℃下攪拌反應混合物20小時，然后在0-5℃下加入庚烷(5.47份重量，8份體積)。分離各相，0-5℃下用庚烷(5.47份重量，8份體積)處理下層。保持反應溫度為0-15℃條件下，滴加7.4％碳酸氫鉀水溶液(0.64份重量碳酸氫鉀溶于8份重量水中)，使反應猝滅。加入甲苯(8.65份重量，10份體積)，攪拌混合物30分鐘。分離下層，上層有機層用水(10份體積)洗滌兩次，經濃縮得到ER-805821粗品油(1.05份重量，0.935當量)。
將ER-805821(1份重量)溶解于無水THF(8.4份體積)和無水乙酸甲酯(2份體積)中。維持17-23℃反應下，經2分鐘加入TritonB(OH)(3.6份體積)。攪拌反應液1.5小時。過濾反應混合物。濃縮濾液，通過SiO2墊(5份重量，20份體積乙酸乙酯洗脫)。濾液用鹽水(2.2份體積)洗滌，經蒸發得到ER-805822(0.54份重量，72％產率)。
制備ER-805822的另一種方法中，將ER-805821(1份重量，1當量，11.18g，21.81mmol)溶解于無水MTBE(4.4份重量，6份體積)中，冷卻至0-5℃。0-5℃下，向混合物中經1小時加入甲醇鈉(28重量％甲醇溶液，0.564份重量，1.5當量)，相同溫度范圍下攪拌3小時。加入乙酸(0.188份重量，1.6當量)猝滅反應，加樣期間保持0-5℃。攪拌混合物過夜，然后在0-5℃下，用5重量％碳酸氫鉀水溶液(3份重量)和乙酸乙酯(3.6份重量，4份體積)進行處理，隨后攪拌15分鐘。相分離后，下層用乙酸乙酯(3.6份重量，4份體積)萃取兩次。對合并的有機層進行濃縮。殘渣中加入丙酮(2份重量，2.5份體積)和IPE(2份重量，2.7份體積)，0-5℃下攪拌過夜。混合物過濾通過Celite(0.25份重量)，用丙酮(2份重量)洗滌。濃縮濾液得到粗品油(0.55份重量)。在殘渣中加入丙酮(0.2份重量，0.25份體積)和IPE(0.54份重量，0.75份體積)并40-50℃下攪拌1小時。室溫下在溶液中加入ER-805822晶種，室溫下攪拌過夜。室溫下，經2小時向懸浮液中加入IPE(1.27份重量，1.75份體積)。室溫下攪拌5小時后，過濾收集沉淀物，濾餅用丙酮/IPE(1/10)(2份體積)洗滌。所得濾餅在盤式腔室(tray-type chamber)中于30-40℃干燥過夜，得到目標產物ER-805822(0.286份重量，0.38當量，基于ER-805819的產率為38.0％)。
粗品ER-805822的另一種后處理方法中，將濃縮最終的乙酸乙酯溶液后所得到的殘渣溶解于IPA(2份重量)中，加熱溶液至50℃。加入庚烷(5份重量)，冷卻混合物至20℃，并加入晶種。20℃下攪拌混合物過夜。加入庚烷(10份重量)，30分鐘內將混合物冷卻至-5℃，在-5℃下攪拌5小時。過濾混合物，用庚烷(2份重量)洗滌濾餅。真空下對濾餅進行氣流干燥，得到ER-805822(60％)。
將ER-805822(1份重量)溶解于乙酸乙酯或其它適當的溶劑(5份體積)以及水(5份體積)中。保持反應溫度為0-10℃條件下，經30分鐘-1小時分批加入NaIO4(0.58份重量，1.05當量)。攪拌反應液至多2小時。0-10℃下用氯化鈉(1份重量)處理反應混合物并攪拌30分鐘。過濾反應混合物，濾餅用乙酸乙酯(2份體積)沖洗。分離各相，下層用乙酸乙酯(5份體積)萃取三次。合并的有機層用20％氯化鈉水溶液(5份重量)洗滌。濃縮有機層得到ER804697(1份重量)。將殘渣溶解于甲苯(2份體積)中，濃縮溶液。將殘渣溶解于乙腈(7份體積)中，用于下一步驟。
惰性氣氛下，在反應容器中加入NiCl2(0.025份重量)和CrCl2(2.5份重量)。加入無水二氯甲烷(5份體積)。開始攪拌，冷卻混合物至0-3℃。保持溫度低于20℃條件下，加入無水DMSO(6.7份體積)，同時劇烈攪拌45分鐘。將ER-804697(1份重量)溶解于無水二氯甲烷(1份體積)中并加至反應容器中。使所得混合物升溫至25℃，經20分鐘加入ER-806643(2.58份重量)。保持反應溫度低于45℃。加樣完畢后，在25-35℃下攪拌反應液30分鐘。加入甲醇(5份體積)，攪拌混合物10分鐘。加入MTBE(33份體積)，將懸浮液轉移至1N鹽酸(25份體積)和水(10份體積)中。攪拌混合物5分鐘。水層用MTBE(10份體積)反萃取，合并的有機層依次用0.2N鹽酸(17份體積)、1％氯化鈉溶液(2×17份體積，洗滌兩次)和鹽水(13份體積)洗滌。濃縮有機層，經純化(SiO2，25份重量，10個柱體積的乙酸乙酯/己烷，1/3.5體積比)得到ER-804698(0.53份重量，61％)。
另一種方法中，該反應在手性配體ER-807363的存在下進行，其方法與下文所述的ER-118047制備方法基本相似。
制備ER-804698的另一種方法中，對DMSO(7份體積)和乙腈(7份體積)進行脫氣并冷卻至0-10℃。使內溫不超過20℃條件下，用CrCl2(10當量，3.47份重量)和NiCl2(0.1當量，0.037份重量)分批處理該溶液。0-10℃下，滴加ER-804697(1份重量，1當量)的乙腈(7份體積)溶液和ER-806643(5當量，2.5份重量)，期間內溫不得超過15℃。5-15℃下攪拌反應混合物過夜。在混合物中加入甲醇(5.5份重量)、水(7份重量)和MTBE(5.2份重量)。攪拌反應液1小時，分離下層(層1)。在上層中加入氯化鈉(1.5份重量)與水(13.5份重量)的預混溶液。攪拌混合物1小時，分離下層(層2)。在上層中加入庚烷(4.8份重量)、甲醇(2.8份重量)以及氯化鈉(1.5份重量)與水(13.5份重量)的預混溶液。攪拌混合物1小時，分離下層(層3)。上層經除水后保存(有機物1)。在反應器中加入層1、甲醇(2.8份重量)和MTBE(2.8份重量)。攪拌混合物過夜。分離并棄去下層。用層2處理上層。攪拌混合物1小時，分離并棄去下層。用層3和庚烷(4.8份重量)處理上層。攪拌混合物1小時，分離并棄去下層。上層經除水后保存(有機物2)。在反應器中加入層3、MTBE(0.8份重量)和庚烷(2.7份重量)。攪拌混合物1小時，分離并棄去下層。將上層與有機物1和有機物2合并。對合并的有機物進行過濾和減壓濃縮，得到粗品ER-804698，經色譜純化(SiO2，25份重量，10個柱體積的乙酸乙酯/己烷，體積比1/3.5)得到ER-804698(0.67份重量，57％產率)。
制備ER-804698的另一種方法中，粗物質不經過純化直接用于下一步驟。
用乙酸(4.2份重量)和水(4.2份重量)處理ER804698(1份重量，1當量)。加熱混合物至90-97℃，保持100分鐘。冷卻混合物至15℃以下，然后在15℃以下用庚烷(2×2.7份重量)洗滌兩次。相分離后，在使溫度不超過15℃條件下，向下層滴加20重量％碳酸氫鉀水溶液(7.7份重量，35當量)和MTBE(5.95份重量)的混合物。相分離后，上層依次用5重量％碳酸氫鉀水溶液(0.2份重量)洗滌，用5重量％氯化鈉水溶液(2×0.2份重量)洗滌兩次。減壓濃縮有機層，加入MTBE(1.49份重量)。將混合物加熱至55℃，攪拌至溶解。在溶液中加入庚烷(1.00份重量)，冷卻溶液至40-45℃。在溶液中另外加入庚烷(4.47份重量)，冷卻溶液至5-15℃，然后攪拌過夜。過濾結晶體，用庚烷沖洗，得到ER-807023(0.58份重量，71％產率)。
氮氣氛下，在反應器中加入ER-807023(1份重量，1當量)和MTBE(7.43份重量)。在反應液中加入2，6-二甲基吡啶(2.15份重量，7.5當量)。0℃下，在混合物中滴加TBSOTf(2.47份重量，3.5當量)。0-10℃下攪拌反應混合物30分鐘，然后經1小時升溫至23℃，在23℃下保存16小時。保持溫度低于30℃條件下，在反應混合物中依次滴加甲醇(0.21份重量，2.5當量)和水(14.8份重量)。相分離后，上層分別用1N鹽酸水溶液(16.2份重量)、5％氯化鈉水溶液(14.8份重量)、5％碳酸氫鈉水溶液(14.8份重量)、5％氯化鈉水溶液(14.8份重量)和5％氯化鈉水溶液(14.8份重量)洗滌。通過減壓蒸餾對上層有機層進行濃縮，得到粗品ER-804699。加入甲醇(7.91份重量)，加熱混合物至50℃，保持30分鐘。經5小時將混合物冷卻至0℃，然后在0℃下攪拌過夜。過濾固體，濾餅用冷甲醇(4份重量)洗滌，經干燥得到ER-804699(1.42份重量，74％產率)。
氮氣氛下，在反應器中加入ER-804699(1份重量，1當量)的甲苯(2.60份重量)溶液。加入乙腈(4.72份重量)。加入TBSCl(0.011份重量，0.05當量)。使反應混合物升溫至30℃，加入NIS(1.25份重量，4當量)。30℃下攪拌反應混合物22小時。冷卻反應液至25℃，保持內溫低于30℃下，經10分鐘加入硫代硫酸鈉水溶液和碳酸氫鈉的混合物(10.35份重量)。25℃下，攪拌反應液30分鐘。分離水層。上層用10％氯化鈉水溶液(2×9.9份重量)洗滌兩次。減壓濃縮有機層，得到粗品ER-803895，經硅膠色譜純化得到ER-803895(0.96份重量，89.5％產率)。
實施例6F-1a、F-2a和F-3a的組裝及B-1939的制備A.(R)或(S)N-[2-(4-異丙基-4，5-二羥基-唑-2-基)-6-甲基-苯基]-甲磺酰胺的制備 在預干燥的玻璃襯里的反應器中加入三光氣(1份重量，1當量)和無水THF(2份體積)，冷卻至內溫為-10℃。在第二個預干燥的玻璃襯里的反應器中加入ER-807244(1.27份重量，2.5當量)和無水THF(3份體積)，冷卻至內溫為-10℃。以使內溫不超過15℃的速度將第一個反應器的內容物轉移至第二個反應器中。加樣完畢后，在0℃內溫下攪拌反應液1小時，然后逐漸升溫至25℃。噴射氮氣18小時以洗除過量的光氣(用2N氫氧化鈉溶液收集廢氣)。加入MTBE(3份體積)，40-46℃氮氣吹掃下蒸餾脫除溶劑，如果需要加入更多的MTBE。完成脫除光氣后，將混合物冷卻至內溫為5-10℃，在MTBE(3份體積)洗滌下對溶液進行過濾，得到白色固體結晶狀ER-807245(1.12份重量，0.97當量)。
在預干燥的惰性反應器1中，加入ER-807245(1份重量，1當量)和無水DMF(4份體積)。攪拌下，將混合物加熱至內溫為95℃。加熱反應器2至內溫為90℃，在該反應器中，將D或L-纈氨醇(1.05當量，0.61份重量)溶解于無水DMF(1.3份體積)中。將反應器2的內容物轉移至內溫為90℃的反應器1中。發現有二氧化碳逸出，通過氮氣流失排出反應液。90℃下攪拌反應溶液3小時后，冷卻至內溫為65℃。然后，在反應器1中加入氫氧化鋰(0.47份重量，2當量)的水(2份體積)懸浮液，65℃內溫下攪拌懸浮液1小時。在該反應器中加入水(5份體積)，經3小時冷卻至內溫為約5℃。約5℃內溫下，攪拌混合物8小時，在水(2×4份體積)和正庚烷(2×3份體積)依次洗滌下，過濾收集目標產物。真空下，35℃下用氮氣流干燥產物24小時或直至KF≤250ppm，得到固體結晶狀的ER-806628或ER-808056(0.80份重量，0.60當量)。
氮氣下，在預干燥的惰性反應器中加入ER-806628或ER-808056(1份重量，1當量)、吡啶(3份重量，11.4當量)和DMAP(0.03份重量，0.05當量)。將反應液冷卻至內溫為-10℃后，以使內溫低于15℃的速度加入甲磺酰氯(1.46份重量，3當量)。加樣完畢后，在0-15℃內溫下攪拌反應液1小時，然后經2小時緩慢升溫至25℃。以使內溫不超過35℃的速度先后加入MTBE(2.6份體積)和水(2份體積)。用6N鹽酸(約1.9份體積)分批滴定兩相混合物，直至水層的pH為約3-5。若pH低于3，加入30重量％碳酸鈉水溶液進行反滴定以得到所需要的pH。各相分開，分離水相。將所有的有機物與水(0.7份體積)混合，棄去水相。將MTBE常壓蒸餾至約2份體積，以得到55℃恒定沸點，且KF＜500ppm。如果需要另外加入MTBE。冷卻溶液至內溫為5-10℃，需要時加入晶種誘導結晶。加入正庚烷(0.5份體積)，5℃下攪拌混合物18小時，正庚烷(2×3份體積)洗滌下，過濾收集ER-806629或ER-807363。將濾液濃縮至1/2體積并冷卻至0℃，得到第二批結晶。氮氣下干燥濾餅18小時。在預干燥的反應器中加入粗稱重的ER-806629，加入MTBE(3份體積)。將所得混合物加熱至內溫為45-50℃，保持45分鐘，然后經3小時緩慢冷卻至5℃，需要時可加入晶種。加入正庚烷(0.5份體積)，5℃內溫下攪拌混合物18小時。正庚烷(2×3份體積)洗滌下過濾收集固體產物，然后35℃下真空干燥24小時，得到固體結晶狀的ER-806629或ER-807363(1.7份重量，0.57當量)。
B.F-1a和F-2a的組裝以及分子內醚的形成 在適當大小的反應器1中加入ER-807363(1.82份重量，3.55當量)，進行氮氣置換。加入無水THF(15份體積)。在反應器2中，對ER-806067(F-1a，1.14份重量，1.1當量)和ER-805973(F-2a，1份重量，1當量)進行混合，使之溶解于無水THF(6.3份體積)中。攪拌下，對該兩個反應器噴射氮氣30-45分鐘。惰性氣氛下，在反應器2中加入CrCl2(0.75份重量，3.55當量)，然后加熱至內溫為30℃。以使內溫不超過45℃的速度在反應器2中加入三乙胺(0.62份重量，3.55當量)。加樣完畢后，保持30℃內溫1小時。1小時后，將反應器2冷卻至0℃，加入NiCl2(0.02份重量，0.1當量)形成惰性環境，加入反應器1的內容物后使反應液升溫至室溫。冷卻反應器2至內溫為0 ℃，然后以使內溫不超過10℃的速度加入乙二胺(1.2份體積，10當量)。注意發現放熱。攪拌反應液1小時，然后加入水(8份體積)和正庚烷(20份體積)，攪拌兩相混合物4分鐘，分層。分離有機層，水層用MTBE(20份體積)反萃取。將合并的有機層真空濃縮至粗品油，然后與無水THF(2×10.5份體積)形成共沸物。粗產物溶解于無水THF(4.5份體積)中，然后在-20℃下保存，直至用于下一步驟。
對前一步驟所得到的ER-808227/TFH溶液進行KF分析。若KF＜1000ppm，則繼續反應。若KF＞1000ppm，則與無水THF(4.1份體積)進行真空共沸。重復共沸操作直至符合要求。符合要求的終溶液中含有溶于無水THF(4.1份體積)的粗品ER-808227。一旦符合要求，在適當大小的惰性反應器中加入無水THF(106份體積)和前一步驟所得到的ER-808227/TFH溶液。冷卻反應器至內溫為-15℃至-20℃，然后以使內溫不超過-12℃的速度加入0.5M KHMDS的甲苯(9.1份重量，3.0當量)溶液。推進完全反應需要約4.5當量的KHMDS。0℃內溫下，將反應液加至半飽和的氯化銨(40份體積)中進行逆猝滅。加入正庚烷(80份體積)，攪拌2-5分鐘后分層。分離有機層，水層用MTBE(70份體積)反萃取，然后合并有機層并用飽和氯化鈉溶液(70份體積)洗滌。分離有機層并進行真空濃縮。在粗濃縮物中加入正庚烷(60份體積)。注意ER-808373從溶液中沉淀出來。過濾所得的懸浮液，用正庚烷(20份體積)洗滌固體。真空濃縮濾液，得到棕色油狀的粗品ER-806746(約4份重量)。注意當另外的ER-808373從溶液中沉淀出來時，重復過濾操作。粗品ER-806746經SiO2柱色譜純化得到亮黃色(clear yellowish)油狀的ER-804027(1.16份重量，0.55當量)。色譜操作如下首先用足量的MTBE沖洗柱子以除去水分，然后用庚烷沖洗柱子以除去MTBE。將ER-806746以庚烷溶液形式裝柱，先后用庚烷/MTBE(5∶1)和庚烷/MTBE(4∶1)將其從柱中洗脫出來，用紫外檢測器監測230nm處的級分。
在反應器中加入ER-804027(1份重量，1當量)和無水二氯甲烷(7.6份體積)。冷卻反應器至內溫為-78℃，然后以使內溫不超過-60℃的速度加入1M DIBALH的二氯甲烷(3.0份重量，2.25當量)溶液。以使內溫不超過-60℃的速度加入甲醇(0.1份體積)。注意選出氫氣，并用氮氣流進行稀釋。加樣完畢后，使混合物升溫至室溫后加入1N鹽酸(10.6份體積)和MTBE(25份體積)。攪拌混合物20分鐘，分層。分離有機層，水層用MTBE(15.3份體積)反萃取。合并有機層，分別用水(3份體積)、飽和碳酸氫鈉(3份體積)和飽和氯化鈉(3份體積)洗滌后真空濃縮。粗濃縮物經SiO2柱色譜純化得到白色泡沫狀的ER-804028(0.84份重量，0.93當量)。
C.F-3a的并入以及轉換成B-1939 氬氣氛下，將ER-803895(F-3a)溶解于無水甲苯(14份重量)中并冷卻至＜-75℃。然后以使內部反應溫度＜-70℃的速度加入DIBALH(1.5M甲苯溶液，0.95份重量，1.3當量)。攪拌所得的混合物30分鐘后用無水甲醇(0.13份重量，3.2當量)進行猝滅，期間保持內部反應溫度＜-65℃。使反應混合物升溫至-10℃，在MTBE(3.74份重量)沖洗下轉移至含有1N鹽水(10.2份重量)的后處理容器中。攪拌混合物30分鐘，排除水層。有機相依次用1N鹽酸(10.2份重量)、水(10份重量)、飽和碳酸氫鈉水溶液(10份重量)和鹽水(10份重量)洗滌，然后進行減壓濃縮。濃縮物經硅膠柱色譜純化得到ER-803896(0.96份重量，93％產率)。該產物在-20℃下保存于氬氣下。
0℃下，用正丁基鋰(1.6M己烷溶液，1.02份重量，1.5份體積，2.05當量)以使內溫不超過5℃的速度處理共沸干燥的砜ER-804028(1.0份重量，1當量)的無水四氫呋喃(5份體積，4.45份重量)溶液。0-5℃內溫下攪拌混合物10分鐘，然后冷卻至＜-75℃。將共沸干燥的醛ER-803896(1.07份重量，1.23當量)溶解于無水己烷(3.53份重量，5.35份體積)后冷卻至＜-75℃。在內溫≤-65℃條件下，通過套管將醛溶液加至ER-804028陰離子液中。-78℃內溫下，攪拌混合物45分鐘，然后加入飽和氯化銨(5份體積)、甲基叔丁基醚(10份體積)和水(5份體積)進行猝滅。棄去水層，減壓濃縮有機層。粗物質經C-18反相色譜純化得到ER-804029(84％，1.57份重量)。
將砜-二醇ER-804029(1份重量，1當量)溶解于濕的二氯甲烷(7.4份體積，含水0.04重量％)中，置于20-25℃水浴中。一次加入Dess-Martin試劑(0.67份重量，2.5當量)。用飽和碳酸氫鈉(10份體積)和10重量％亞硫酸鈉水溶液(10份體積)猝滅反應混合物，攪拌30分鐘。混合物用飽和氯化鈉(10份體積)稀釋，用MTBE(25份體積)萃取。棄去水層，濃縮有機層，經硅膠色譜純化得到ER-804030(0.9份重量，90％)。-20℃下，該物質保存于惰性氣氛下。
惰性氣氛下，在預干燥的反應器中加入二碘化釤溶液(2.5當量)，將該溶液冷卻至內溫＜-70℃。將ER-804030(1份重量)溶解于無水甲醇(4.1份重量)和無水THF(2.3份重量)中，然后冷卻至＜-70℃。以使內溫不超過-70℃的速度在冷的釤溶液中加入ER-804030。內溫不超過-65℃條件下，用碳酸鉀/羅謝爾鹽/水(1/10/100；重量/重量/體積，15份體積)和MTBE(5份體積)猝滅反應。后處理溶液加完后，使反應液升溫至室溫，用后處理溶液(20份體積，沖洗)和MTBE(20份體積，沖洗)將混合物轉移至另一個容器中。棄去水層，蒸發有機層，殘渣經硅膠色譜純化得到ER-118049(0.77份重量，85％)。-20℃下該產物保存于惰性氣氛下。
在預干燥的反應器中加入(S)-配體ER-807363(2.05份重量)，進行氮氣置換。一次加入CrCl2(0.85份重量，10當量)后加入無水乙腈(21.5份重量)，使混合物升溫至并保持在30℃-35℃。一次加入三乙胺(0.7份重量，0.96份體積，10當量)，攪拌混合物1小時。一次加入NiCl2(0.09份重量，1當量)后經30分鐘加入酮醛ER-118049的無水THF(2.43份重量，2.73份體積)溶液。撤除熱源，加入庚烷(20.5份重量，30份體積)和Celite(1.5份重量)。攪拌混合物5分鐘，過濾通過Celite墊(15份重量)用庚烷(7.3份體積)和乙腈(5份體積)沖洗Celite墊。將濾液轉移至另外一個漏斗中，除去下層。需要時，用乙腈(最多47.2份重量，最多60份體積)洗滌合并的庚烷層。減壓蒸發庚烷層，產物經硅膠色譜純化得到ER-118047/048(0.64份重量，70％)。
將烯丙基醇ER-118047/048溶解于二氯甲烷(含0.04重量％水，9體積)中，將反應器至于水浴(20℃)中，用Dess-Martin試劑(0.48份重量，1.5當量)處理溶液。反應混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(9份體積)和10％亞硫酸鈉水溶液(9份體積)處理后攪拌20分鐘，通過DCM(10份體積)轉移至另一個漏斗中。棄去水層，蒸發有機層至殘渣。粗物質經快速色譜純化(用3個柱體積的DCM/庚烷(1∶1體積比)預處理，用1∶1DCM/庚烷將物質裝柱，然后用10/10/1庚烷/DCM/MTBE進行洗脫)。濃縮含有產物的級分，-20℃下保存于惰性氣氛下。
或者，按如下方法將ER-118047/48氧化成二酮ER-118046。在燒瓶中加入ER-118047/48(1份重量，1.0當量)，室溫下加入甲苯(10份體積)和DMSO(0.15份重量，2.5當量)。加入三乙胺(0.31份重量，4.0當量)，將溶液冷卻至-15℃。加入純凈TCAA(0.33份重量，1.4當量)，使反應液升溫至0℃。然后在0℃下攪拌10分鐘。再次攪拌反應液10分鐘后用IPA(0.15份體積)進行猝滅。0℃下攪拌反應液10分鐘。經2分鐘加入1N鹽酸(5份體積)，使反應液升溫至室溫并用MTBE(5份體積)稀釋。形成兩個透明層，移除水層。有機層用5份體積的5％碳酸氫鹽(水溶液)洗滌，用旋轉蒸發儀濃縮至深黃色油，經硅膠色譜純化(91％分離產率)。
室溫下，在適當大小的反應容器(容器A)中先后加入鹽酸咪唑(0.39份重量，5當量)和1M TBAF的THF溶液(7.6份體積，10當量)。攪拌所得的混合物直至均勻(15-30分鐘)。在第二個反應容器(容器B)中加入ER-118046(1份重量，1當量)和THF(33份體積)。將容器B的內容物置于惰性氣氛下并進行攪拌直至ER-118046完全溶解。在燒瓶B(ER-118046/THF)中一次加入燒瓶A的內容物(TBAF/咪唑)。3-4天后，將反應溶液裝柱，進行硅膠色譜純化。
氮氣氛下，將干燥的ER-118064(F-12，其中R1為甲氧基)殘渣溶解于無水二氯甲烷(28份體積)中，用PPTS(1.0份重量，5.2當量)一次處理。30-90分鐘后，將反應混合物直接從頂部裝載入合適的柱子中，進行硅膠色譜純化。真空濃縮目標級分ER-076349。對所有的純級分進行濃縮，所得到的物質在甲苯(20份體積)中共沸兩次，得到易碎的無色固體/泡沫狀的ER-076349(0.44份重量，0.79當量(對殘留甲苯校正后))。
在清潔干燥的反應容器(燒瓶C)中，將ER-076349(1份重量，1當量)溶解于無水甲苯(20份體積)中，減壓濃縮至干。將該物質再次溶解于無水甲苯(20份體積)中，濃縮至干。將該物質溶于DCM(5份體積)中，將溶液置于氬氣氛下。一次加入三甲基吡啶(0.66份重量，4.0當量)。一次加入吡啶的DCM溶液(燒瓶B中)(5摩爾％)。將燒瓶C中的所得混合物冷卻至內溫為-20至-25℃。保持內溫低于-16℃下滴加Ts2O的DCM溶液(1.02當量)。-20至-25℃下攪拌反應液80分鐘后經20分鐘升溫至0℃，進一步攪拌20分鐘。用水(2份體積)猝滅反應。移除水浴，使反應液升溫至室溫(15-20℃)并進行攪拌(20分鐘)。用IPA(100份體積)將反應液沖洗至更大的容器中，在反應液中加入氫氧化銨水溶液(100份體積)。室溫下攪拌反應液15-36小時，監控就地生成的甲苯磺酸酯(ER-082892)和環氧化物(ER-809681)的消失情況。減壓下，濃縮反應液至干或接近干。所得物質用DCM(25-40份體積)稀釋，用pH10的緩沖液(碳酸氫鈉/碳酸鈉(水溶液)，10份體積)洗滌。水相用25份體積的DCM反萃取，將合并的有機層濃縮至干。所得游離胺經硅膠色譜(以乙腈/水緩沖液為流動相)純化。對合并的級分進行減壓濃縮以脫除乙腈。所得水層用DCM(40份體積)和30份體積的緩沖儲備液(pH10，碳酸氫鈉/碳酸鈉)稀釋。充分混合各層并進行分離。水相用25份體積的DCM反萃取，將合并的有機層濃縮至干。所得游離胺經精致過濾成3∶1DCM/戊烷溶液，濃縮至干(0.80份重量)得到B-1939。
雖然，我們對本發明的大量實施方式進行了描述，顯然可對我們的基本實施例進行變換以提供利用本發明化合物及方法的其它實施方式。因此，應理解的是，本發明的范圍由所附的權利要求所定義，而不是由實施例方式表述的具體實施方式
加以限定。
權利要求
1.一種式F-4的化合物 其中PG1、PG2和PG3各自獨立為氫或合適的羥基保護基；R1為R或-OR；每個R獨立為氫、C1-4鹵代脂族基、芐基或C1-4脂族基；以及LG1為合適的離去基團。
2.根據權利要求1所述的化合物，其中所述化合物為式F-4’的化合物
3.根據權利要求2所述的化合物，其中R1為OR，其中R為氫、甲基或芐基。
4.根據權利要求2所述的化合物，其中PG1和PG2均為氫。
5.根據權利要求2所述的化合物，其中PG1和PG2各自獨立為合適的羥基保護基。
6.根據權利要求5所述的化合物，其中PG1和PG2中的一個或兩個連同各自結合的氧原子一起為甲硅烷基醚或芳基烷基醚。
7.根據權利要求6所述的化合物，其中PG1和PG2均為叔丁基二甲基甲硅烷基。
8.根據權利要求5所述的化合物，其中PG1和PG2連同與它們結合的氧原子一起形成二醇保護基。
9.根據權利要求8所述的化合物，其中所述二醇保護基為環縮醛或縮酮、亞甲硅基衍生物、環碳酸酯或環硼酸酯。
10.根據權利要求2所述的化合物，其中LG1為磺酰氧基，任選取代的烷基磺酰氧基、任選取代的烯基磺酰氧基或任選取代的芳基磺酰氧基。
11.根據權利要求10所述的化合物，其中LG1為甲磺酰基或甲苯磺酰基。
12.根據權利要求2所述的化合物，其中所述化合物為
全文摘要
本發明提供式(F－4)的大環化合物、其合成方法及中間體。這類化合物及其組合物用于治療或預防增生性疾病。
文檔編號C07D307/00GK1993342SQ200580026228
公開日2007年7月4日 申請日期2005年6月3日 優先權日2004年6月3日
發明者B·奧斯塔, C·E·蔡斯, F·G·房 申請人:衛材株式會社