人抑癌基因及其編碼的蛋白質的制作方法

專利名稱：人抑癌基因及其編碼的蛋白質的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種人抑癌基因、其編碼的蛋白質、包含該基因的表達載體及用該載體轉化的細胞。

背景技術：
抑癌基因產物起到抑制正常細胞轉化成某種癌細胞的作用，因此抑癌基因產物這種功能的喪失使正常細胞變為惡性轉化體(Klein，G，FASEB J.，7，821-825(1993))。為了使癌細胞發展成癌癥，細胞應該喪失控制抑癌基因正常拷貝數的功能。發現p53抑癌基因的編碼序列中的變異是人類癌癥中最普遍的基因變異之一(Bishop，J.M.，Cell，64，235-248(1991)；和Weinberg，R.A.，Science，254，1138-1146(1991))。
然而，因為乳腺癌中報道的p53突變總計在總的乳腺癌的30％的范圍內，所以推測只有一些乳腺癌組織表現出p53突變(Keen，J.C. & Davidson，N.E.，Cancer，97，825-833(2003))和Borresen-Dale，A-L.，Human Mutation，21，292-300(2003))。而且，因為白血病中報道的p53突變總計在總的白血病的20％的范圍內，所以推測只有一些白血病組織表現出p53突變(Boyapati，A.，等人，Acta Haematol.，111(1-2)，100-106(2004))。
p53突變占肝癌的至少50％，尤其是在遭受黃曲酶毒素B1的或具有高頻率的乙型病毒感染的區域，其主要特征是p53癌基因中密碼子249的錯義突變(Montesano，R.等人，J.Natl.Cancer Inst.，89，1844-1851(1997)；Szymanska，K.& Hainaut，P.Acta Biochimica Polonica，50，231-238(2003))。然而，據報道在美國和西歐p53突變總計只在肝癌的30％的范圍內，這里沒有這種突變頻繁發生的熱點(Szymanska，K. & Hainaut，P.Acta Biochimica Polonica，50，231-238(2003))。
同時，因為子宮頸癌中報道的p53突變總計只在總的子宮頸癌的2～11％的范圍內，所以推測只有一些子宮頸癌組織表現出p53突變(Crook，T.等人，Lancet，339，1070-1073(1992)；和Busby-Earle，R.M.C.等人，Br.j.Cancer，69，732-737(1994))。
而且，據報道非小細胞肺癌和小細胞肺癌中p53抑癌基因的突變頻率總計分別占總的肺癌的約50％和70％(Takahashi，T.等人，Science，246，491-4941989；Bodner，S.M.等人，Oncogene，7，743-749(1992)；Mao，L.Lung Cancer，34，S27-S34(2001))。吸煙是肺癌發病和擴展的最關鍵因素之一，除了p53之外，其它多種抑癌基因和癌基因共同與肺癌的發病和擴展相關(Osada，H. &Takahashi，T.Oncogene，21，7421-7434(2002))。
因此，本發明人已積極嘗試通過mRNA差異顯示(DD)法從如乳腺、肝、子宮頸、肺等的正常組織中分離新的抑癌基因，mRNA差異顯示(DD)法用于更有效地顯示如乳腺、肝、子宮頸和肺的正常組織和如乳腺癌、肝癌、子宮頸癌和肺癌的癌組織之間的基因差異性表達(Liang，P.和Pardee，A.B.，Science，257，967-971(1992)；以及Liang，P.等人，Cancer Res.，52，6966-6968(1993))。


發明內容
為此，本發明企圖解決現有技術的問題，因此本發明的一個目的是提供一種新的人抑癌基因。
本發明的另一個目的是提供由所述抑癌基因編碼的抑癌蛋白。
本發明的又一個目的是提供包含所述抑癌基因的表達載體。
為實現上述目的之一，本發明提供一種具有選自由SEQ ID NO1、SEQID NO5、SEQ ID NO9、SEQ ID NO13、SEQ ID NO17、SEQ ID NO21、SEQ ID NO25、SEQ ID NO29、SEQ ID NO33、SEQ ID NO37、SEQ ID NO41、SEQ ID NO45、SEQ ID NO49、SEQ ID NO53、SEQ ID NO57、SEQID NO61、SEQ ID NO65、SEQ ID NO69、SEQ ID NO73、SEQ ID NO77、SEQ ID NO81、SEQ ID NO85、SEQ ID NO89、SEQ ID NO93、SEQ ID NO97、SEQ ID NO101、SEQ ID NO105、SEQ ID NO109和SEQ ID NO113組成的組中的DNA序列的人抑癌基因。
根據本發明的另一個上述目的，本發明提供一種具有選自由SEQ ID NO2、SEQ ID NO6、SEQ ID NO10、SEQ ID NO14、SEQ ID NO18、SEQ IDNO22、SEQ ID NO26、SEQ ID NO30、SEQ ID NO34、SEQ ID NO38、SEQ ID NO42、SEQ ID NO46、SEQ ID NO50、SEQ ID NO54、SEQ ID NO58、SEQ ID NO62、SEQ ID NO66、SEQ ID NO70、SEQ ID NO74、SEQID NO78、SEQ ID NO82、SEQ ID NO86、SEQ ID NO90、SEQ ID NO94、SEQ ID NO98、SEQ ID NO102、SEQ ID NO106、SEQ ID NO110和SEQID NO114組成的組中的氨基酸序列的人抑癌蛋白。
根據又一個上述目的，本發明提供一種包含所述抑癌基因的表達載體。
根據再一個上述目的，本發明提供一種用所述表達載體轉化的細胞。



結合附圖，在下面詳細描述中更充分地描述本發明的優選實施方式的這些和其它特征、技術方案及優點。在附圖中 圖1為示出使用SEQ ID NO3的5′-13-mer隨機引物H-AP33和SEQ IDNO4的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖2為示出使用SEQ ID NO7的5′-13-mer隨機引物H-AP10和SEQ IDNO8的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖3為示出使用SEQ ID NO11的5′-13-mer隨機引物H-AP5和SEQ IDNO12的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖4為示出使用SEQ ID NO15的5′-13-mer隨機引物H-AP2和SEQ IDNO16的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖5為示出使用SEQ ID NO19的5′-13-mer隨機引物H-AP8和SEQ IDNO20的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖6為示出使用SEQ ID NO23的5′-13-mer隨機引物H-AP7和SEQ IDNO24的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖7為示出使用SEQ ID NO27的5′-13-mer隨機引物H-AP11和SEQ IDNO28的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖8為示出使用SEQ ID NO31的5′-13-mer隨機引物H-AP3和SEQ IDNO32的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖9為示出使用SEQ ID NO35的5′-13-mer隨機引物H-AP4和SEQ IDNO36的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖10為示出使用SEQ ID NO39的5′-13-mer隨機引物H-AP8和SEQ IDNO40的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖11為示出使用SEQ ID NO43的5′-13-mer隨機引物H-AP33和SEQ IDNO44的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖12為示出使用SEQ ID NO47的5′-13-mer隨機引物H-AP35和SEQ IDNO48的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖13為示出使用SEQ ID NO51的5′-13-mer隨機引物H-AP3和SEQ IDNO52的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖14為示出使用SEQ ID NO55的5′-13-mer隨機引物H-AP12和SEQ IDNO56的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖15為示出使用SEQ ID NO59的5′-13-mer隨機引物H-AP12和SEQ IDNO60的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖16為示出使用SEQ ID NO63的5′-13-mer隨機引物H-AP7和SEQ IDNO64的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖17為示出使用SEQ ID NO67的5′-13-mer隨機引物H-AP8和SEQ IDNO68的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖18為示出使用SEQ ID NO71的5′-13-mer隨機引物H-AP10和SEQ IDNO72的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖19為示出使用SEQ ID NO75的5′-13-mer隨機引物H-AP16和SEQ IDNO76的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖20為示出使用SEQ ID NO79的5′-13-mer隨機引物H-AP2和SEQ IDNO80的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖21為示出使用SEQ ID NO83的5′-13-mer隨機引物H-AP9和SEQ IDNO84的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖22為示出使用SEQ ID NO87的5′-13-mer隨機引物H-AP9和SEQ IDNO88的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖23為示出使用SEQ ID NO91的5′-13-mer隨機引物H-AP32和SEQ IDNO92的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖24為示出使用SEQ ID NO95的5′-13-mer隨機引物H-AP10和SEQ IDNO96的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖25為示出使用SEQ ID NO99的5′-13-mer隨機引物H-AP22和SEQ IDNO100的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖26為示出使用SEQ ID NO103的5′-13-mer隨機引物H-AP12和SEQID NO104的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖27為示出使用SEQ ID NO107的5′-13-mer隨機引物H-AP10和SEQID NO108的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖28為示出使用SEQ ID NO111的5′-13-mer隨機引物H-AP12和SEQID NO112的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖；以及 圖29為示出使用SEQ ID NO115的5′-13-mer隨機引物H-AP4和SEQ IDNO116的oligo-dT錨定引物的PCR結果的凝膠圖； 圖30～圖58分別為示出本發明的GIG8基因產物(圖30)、GIG10基因產物(圖31)、GIG13基因產物(圖32)、GIG15基因產物(圖33)、GIG16基因產物(圖34)、GIG24基因產物(圖35)、GIG26基因產物(圖36)、GIG29基因產物(圖37)、GIG30基因產物(圖38)、GIG32基因產物(圖39)、GIG33基因產物(圖40)、GIG34基因產物(圖41)、GIG35基因產物(圖42)、GIG38基因產物(圖43)、GIG39基因產物(圖44)、GIG40基因產物(圖45)、GIG42基因產物(圖46)、GIG43基因產物(圖47)、GIG46基因產物(圖48)、PIG33基因產物(圖49)、PIG35基因產物(圖50)、PIG36基因產物(圖51)、MIG20基因產物(圖52)、PIG49基因產物(圖53)、PIG51基因產物(圖54)、MIG12基因產物(圖55)、PIG37基因產物(圖56)、GIG44基因產物(圖57)和GIG31基因產物(圖58)的SDS-PAGE分析結果的圖； 圖59、圖60、圖61、圖67、圖68、圖69、圖70、圖71、圖72、圖73、圖76、圖82、圖83、圖86和圖87分別為示出GIG8基因、GIG10基因、GIG13基因、GIG30基因、GIG32基因、GIG33基因、GIG34基因、GIG35基因、GIG38基因、GIG39基因、GIG43基因、PIG49基因、PIG51基因、GIG44基因和GIG31基因在正常乳腺組織、原發性乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果的圖； 圖62為示出本發明的GIG15基因在正常骨髓組織、白血病骨髓組織和K562白血病細胞中差異性表達的RNA印跡結果的圖； 圖63、圖64、圖65、圖66、圖74、圖75、圖78、圖79、圖80和圖85分別為示出GIG16基因、GIG24基因、GIG26基因、GIG29基因、GIG40基因、GIG42基因、PIG33基因、PIG35基因、PIG36基因和PIG37基因在正常肝組織、原發性肝癌組織和肝癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果的圖； 圖77和圖81分別為示出GIG46基因和MIG20基因在正常的外宮頸組織、原發性子宮癌組織和子宮癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果的圖； 圖84為示出本發明的MIG12基因在正常肺組織、原發性肺癌組織、轉移性肺癌組織和肺癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果的圖，且圖59～87的底部分別為示出通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果的圖； 圖88～116分別為示出GIG8基因(圖88)、GIG10基因(圖89)、GIG13基因(圖90)、GIG15基因(圖91)、GIG16基因(圖92)、GIG24基因(圖93)、GIG26基因(圖94)、GIG29基因(圖95)、GIG30基因(圖96)、GIG32基因(圖97)、GIG33基因(圖98)、GIG34基因(圖99)、GIG35基因(圖100)、GIG38基因(圖101)、GIG39基因(圖102)、GIG40基因(圖103)、GIG42基因(圖104)、GIG43基因(圖105)、GIG46基因(圖106)、PIG33基因(圖107)、PIG35基因(圖108)、PIG36基因(圖109)、MIG20基因(圖110)、PIG49基因(圖111)、PIG51基因(圖112)、MIG12基因(圖113)、PIG37基因(圖114)、GIG44基因(圖115)和GIG31基因(圖116)在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果的圖，且圖88～116的底部分別為示出通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果的圖； 圖117～145分別為示出GIG8基因(圖117)、GIG10基因(圖118)、GIG13基因(圖119)、GIG15基因(圖120)、GIG16基因(圖121)、GIG24基因(圖122)、GIG26基因(圖123)、GIG29基因(圖124)、GIG30基因(圖125)、GIG32基因(圖126)、GIG33基因(圖127)、GIG34基因(圖128)、GIG35基因(圖129)、GIG38基因(圖130)、GIG39基因(圖131)、GIG40基因(圖132)、GIG42基因(圖133)、GIG43基因(圖134)、GIG46基因(圖135)、PIG33基因(圖136)、PIG35基因(圖137)、PIG36基因(圖138)、MIG20基因(圖139)、PIG49基因(圖140)、PIG51基因(圖141)、MIG12基因(圖142)、PIG37基因(圖143)、GIG44基因(圖144)和GIG31基因(圖145)在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果的圖，且圖117～145的底部分別為示出通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果的圖； 圖146、圖147、圖148、圖154、圖155、圖156、圖157、圖158、圖159、圖160、圖169、圖170、圖173以及圖174分別為示出野生型MCF-7細胞，以及分別用GIG8基因、GIG10基因、GIG13基因、GIG30基因、GIG32基因、GIG33基因、GIG34基因、GIG35基因、GIG38基因、GIG39基因、PIG49基因、PIG33基因、GIG44基因以及GIG31基因轉染的MCF-7乳腺癌細胞，和用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞的生長曲線的圖； 圖149為示出野生型K562細胞系、用GIG15基因轉染的K562白血病細胞和用表達載體pcDNA3.1轉染的K562細胞的生長曲線的圖； 圖150、圖151、圖152、圖153、圖161、圖162、圖163、圖165、圖166、圖167以及圖172為示出野生型HepG2肝癌細胞系，分別用GIG16基因、GIG24基因、GIG26基因、GIG29基因、GIG40基因、GIG42基因、GIG43基因、PIG33基因、PIG35基因、PIG36基因以及PIG37基因轉染的HepG2肝癌細胞，以及用表達載體pcDNA3.1轉染的HepG2細胞的生長曲線的圖； 圖164和圖168分別為示出野生型HeLa細胞、分別用GIG46基因和MIG20基因轉染的HeLa子宮癌細胞以及用表達載體pcDNA3.1轉染的HeLa細胞的生長曲線的圖；以及 圖171為示出野生型A549肺癌細胞系、用MIG12基因轉染的A549肺癌細胞和以及用表達載體pcDNA3.1轉染的A549細胞的生長曲線的圖。

具體實施例方式 下文將參照附圖詳細描述本發明的優選實施方式。
1.GIG8 本發明的基因為具有SEQ ID NO1的DNA序列的人抑癌基因8(GIG8)，其以AY634687的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2005年12月31日)，該存入的基因的DNA序列與以NM_002166的收錄號而被存入數據庫的人類DNA結合抑制因子2(即顯性負相螺旋-環-螺旋蛋白(ID2))的基因的DNA序列相似。然而從這些研究結果發現GIG8基因與多種人類致癌作用密切相關。從這些研究結果發現GIG8抑癌基因在包括乳腺癌的多種人類腫瘤中很少或不表達，而在多種正常組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO1的DNA序列具有一個對應于DNA序列的120～524的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(522～524的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由134個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO2的氨基酸序列和約15kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO1中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO3的隨機引物H-AP33(5′-AAGCTTGCTGCTC-3′)和SEQID NO4的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTA-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得163-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系中不表達或很少表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。
認為本發明的基因在正常組織，優選在乳腺、腦、心臟、肌肉、大腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤和肺中過量表達以抑制致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約1.3kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達。
2.GIG10 本發明的基因為具有SEQ ID NO5的DNA序列的人抑癌基因10(GIG10)，其以AY542305的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2005年12月31日)，該存入的基因的DNA序列與以AF230904的收錄號而被存入數據庫的人類c-Cb1-相互作用蛋白(CIN85)mRNA基因的相似。
然而從這些研究結果發現GIG10基因與多種人類致癌作用密切相關。從這些研究結果發現GIG10抑癌基因在包括乳腺癌的多種人類腫瘤中很少表達或不表達，而在多種正常組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO5的DNA序列具有一個對應于DNA序列的52～2,049的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(2,047～2,049的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由665個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO6的氨基酸序列和約73kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO5中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO7的隨機引物H-AP10(5′-AAGCTTCCACGTA-3′)和SEQID NO8的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTC-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得321-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系中不表達或很少表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。
認為本發明的基因在正常組織，優選在乳腺、腦、心臟、肌肉、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤和肺中過量表達以抑制致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約3.5kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達。
3.GIG13 本發明的基因為具有SEQ ID NO9的DNA序列的人抑癌基因13(GIG13)，其以AY493418的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2005年12月31日)，該存入的基因的DNA序列與以NM_016831的收錄號而被存入數據庫的人類晝夜節律基因亞型3(period homolog 3)(果蠅)(PER3)基因的相似。
然而從這些研究結果發現GIG13基因與多種人類致癌作用密切相關。從這些研究結果發現GIG13抑癌基因在包括乳腺癌的多種人類腫瘤中很少表達或不表達，而在多種正常組織中其表達顯著提高。SEQ ID NO9的DNA序列具有一個對應于DNA序列的72～3,677的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(3,675～3,677的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由1,201個氨基酸殘基組成，其具有SEQID NO10的氨基酸序列和約132kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO1中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO11的隨機引物H-AP5(5′-AAGCTTAGTAGGC-3′)和SEQID NO12的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTC-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得347-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系中不表達或很少表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。
認為本發明的基因在正常組織，優選在乳腺和肝中過量表達以抑制致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約1.3kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達。尤其是，本發明的基因只有在正常組織中差異性表達。例如，本發明的基因在如乳腺癌組織和乳腺癌細胞系MCF-7的癌組織和癌細胞中很少表達或不表達，而只有在正常乳腺組織中差異性地提高表達。
4.GIG15 本發明的基因為具有SEQ ID NO13的DNA序列的人抑癌基因15(GIG15)，其以AY927233的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2006年10月1日)，該存入的基因的DNA序列與以AC116533的收錄號而被存入數據庫的人類染色體11、克隆RP11-466H18基因的相似。然而從這些研究結果發現GIG15基因與多種人類致癌作用密切相關。從這些研究結果發現GIG15抑癌基因在包括白血病的多種人類腫瘤中很少表達或不表達，而在多種正常組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO13的DNA序列具有一個對應于DNA序列的18～338的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(366～338的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由106個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO14的氨基酸序列和約12kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO13中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO15的隨機引物H-AP2(5′-AAGCTTCGACTGT-3′)和SEQ ID NO16的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTC-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得133-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系中很少表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。
認為本發明的基因在正常組織，優選在乳腺、腦、心臟、肌肉、大腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤和肺中過量表達以抑制致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約0.5kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達。尤其是，本發明的基因只在正常組織中差異性表達。例如，本發明的基因在癌組織和如白血病細胞和白血病細胞系K562的癌細胞中很少表達，而只有在正常乳腺組織中差異性地提高表達。
5.GIG16 本發明的基因為具有SEQ ID NO17的DNA序列的人抑癌基因16(GIG16)，其以AY513277的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2005年12月31日)，該存入的基因的一些DNA序列與以NM_016527的收錄號而被存入數據庫的人類羥酸氧化酶2(長鏈)(HAO2)基因的不同，已知HAO2基因是三個具有2-羥酸氧化酶活性的基因之一(Jones，J.M.，等人，J.Biol.Chem.275(17)，12590-12597(2000))。然而從這些研究結果發現GIG16抑癌基因在包括肝癌的多種人類腫瘤中根本不表達，而在多種正常組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO17的DNA序列具有一個對應于DNA序列的41～1,096的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(1,094～1,096的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由351個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO18的氨基酸序列和約39kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO17中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO19的隨機引物H-AP8(5′-AAGCTTTTACCGC-3′)和SEQ ID NO20的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTC-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得213-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系中不表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。本發明人將全長GIG16cDNA插入表達載體pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美國)，然后用所得的表達載體轉化大腸桿菌(E.coli)DH5α以獲得轉化體，其稱為大腸桿菌DH5α/GIG16/pBAD/Thio-Topo。
認為本發明的基因在正常組織，優選在肝和腎中過量表達以抑制致癌作用。還認為其基因表達在白血病、子宮癌、惡性淋巴瘤、結腸癌、肺癌和皮膚癌中受到抑制，從而引起致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約2.0kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達。尤其是，本發明的基因只有在正常組織差異性表達。例如，本發明的基因在如肝癌組織和肝癌細胞系HepG2的癌組織和癌細胞中不表達，而只有在正常乳腺組織中差異性表達。
6.GIG24 本發明的基因為具有SEQ ID NO21的DNA序列的人抑癌基因24(GIG24)，其以AY513275的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2005年12月31日)，該存入的基因的DNA序列與人類cDNA FLJ35730 fis，克隆TESTI2003131的相似，并與以AK093049的收錄號而被存入數據庫的α1-抗胰凝乳蛋白酶前體基因的高度相似。然而從這些研究結果發現GIG24抑癌基因在包括肝癌的多種人類腫瘤中根本不表達，而在正常肝組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO21的DNA序列具有一個對應于DNA序列的34～1,305的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(1,303～1,305的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由423個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO22的氨基酸序列和約47kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO1中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO23的隨機引物H-AP7(5′-AAGCTTAACGAGG-3′)和SEQ ID NO24的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTC-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得221-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系中不表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。本發明人將全長GIG24cDNA插入表達載體pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美國)，然后用所得的表達載體轉化大腸桿菌DH5α以獲得轉化體，其稱為大腸桿菌DH5α/GIG24/pBAD/Thio-Topo。
認為本發明的基因在正常組織，優選在肝、心臟和肌肉中過量表達以抑制致癌作用。還認為其基因表達在白血病、子宮癌、惡性淋巴瘤、結腸癌、肺癌和皮膚癌中受到抑制，從而引起致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約2.4kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達。
7.GIG26 本發明的基因為具有SEQ ID NO25的DNA序列的人抑癌基因26(GIG26)，其以AY544126的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2005年12月31日)，該存入的基因的DNA序列與分別以NM_153696和AF261715的收錄號而被存入數據庫的人類前列腺特異性膜抗原(PSMAL)基因和人類前列腺特異性膜抗原蛋白(PSMAL/GCP III)mRNA基因的相似，已知前列腺特異性膜抗原是主要在前列腺上皮中表達的標志物蛋白((Lee，S.J.，等人，J.Mol.Biol.330(4)，749-760(2003))。然而從這些研究結果發現GIG26抑癌基因在包括肝癌的多種人類腫瘤中根本不表達，而在多種正常組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO25的DNA序列具有一個對應于DNA序列的26～1,354的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(1,352～1,354的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由442個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO26的氨基酸序列和約50kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO25中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO27的隨機引物H-AP11(5′-AAGCTTCGGGTAA-3′)和SEQ ID NO28的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTG-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得204-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系中不表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。
本發明人將全長GIG26cDNA插入表達載體pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美國)，然后用所得的表達載體轉化大腸桿菌DH5α以獲得轉化體，其稱為大腸桿菌DH5α/GIG26/pBAD/Thio-Topo。
認為本發明的基因在正常組織，優選在肝、腎、腦和心臟中過量表達以抑制致癌作用。還認為其基因表達在白血病、子宮癌、惡性淋巴瘤、結腸癌、肺癌和皮膚癌中受到抑制，從而引起致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約2.0kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達。
8.GIG29 本發明的基因為具有SEQ ID NO29的DNA序列的人抑癌基因29(GIG29)，其以AY544127的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2005年12月31日)，該存入的基因的DNA序列與以NM_003049的收錄號而被存入數據庫的人類溶質轉運家族10(鈉/膽汁酸共轉運家族)基因的相似。然而從這些研究結果發現GIG29抑癌基因在包括肝癌的多種人類腫瘤中根本不表達，而在正常肝組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO29的DNA序列具有一個對應于DNA序列的62～1,111的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(1,109～1,111的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由349個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO30的氨基酸序列和約38kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO29中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO31的隨機引物H-AP3(5′-AAGCTTTGGTCAG-3′)和SEQ ID NO32的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTA-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得277-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系中不表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。本發明人將全長GIG29cDNA插入表達載體pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美國)，然后用所得的表達載體轉化大腸桿菌DH5α以獲得轉化體，其稱為大腸桿菌DH5α/GIG29/pBAD/Thio-Topo。
認為本發明的基因在正常組織，優選在肝中過量表達以抑制致癌作用。還認為其基因表達在白血病、子宮癌、惡性淋巴瘤、結腸癌、肺癌和皮膚癌中受到抑制，從而引起致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約1.4kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達。
9.GIG30 本發明的基因為具有SEQ ID NO33的DNA序列的人抑癌基因30(GIG30)，其以AY524045的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2005年12月31日)，該存入的基因的DNA序列與以AY358814的收錄號而被存入數據庫的人類克隆DNA43305RIPK2(UNQ277)基因的相似。然而從這些研究結果發現GIG30基因與多種人類致癌作用密切相關。從研究結果發現GIG30抑癌基因在包括乳腺癌的多種人類腫瘤中很少表達或不表達，而在多種正常組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO33的DNA序列具有一個對應于DNA序列的88～1,710的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(1,708～1,710的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由540個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO34的氨基酸序列和約61kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO35中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO35的隨機引物H-AP4(5′-AAGCTTCTCAACG-3′)和SEQ ID NO36的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTG-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得278-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系中不表達或很少表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。
認為本發明的基因在正常組織，優選在乳腺、心臟、肌肉和肝中過量表達以抑制致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約1.9kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達。
10.GIG32 本發明的基因為具有SEQ ID NO37的DNA序列的人抑癌基因32(GIG32)，其以AY762103的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2005年12月31日)，該存入的基因的DNA序列與以NM_001753的收錄號而被存入數據庫的人類小窩蛋白1(小窩蛋白，22kDa)(CAV1)基因的相似。然而從這些研究結果發現GIG32基因與多種人類致癌作用密切相關。從研究結果發現GIG32抑癌基因在包括乳腺癌的多種人類腫瘤中很少表達或不表達，而在多種正常組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO37的DNA序列具有一個對應于DNA序列的43～579的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(577～579的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由178個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO38的氨基酸序列和約20kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO37中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO39的隨機引物H-AP8(5′-AAGCTTTTACCGC-3′)和SEQ ID NO40的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTG-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得172-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系中不表達或很少表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。
認為本發明的基因在正常組織，優選在乳腺、腦、心臟、肌肉、大腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤和肺中過量表達以抑制致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約4.0kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達。
11.GIG33 本發明的基因為具有SEQ ID NO41的DNA序列的人抑癌基因33(GIG33)，其以AY871273的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2006年10月1日)，該存入的基因的DNA序列與以NM_000996的收錄號而被存入數據庫的人類核糖體蛋白L35a(RPL35A)基因的相似。核糖體基因為催化蛋白質合成并由40S小亞基和60S大亞基組成的細胞內細胞器。然而，該基因的功能有待于詳細說明(Herzog，H.，等人，Nucleic Acids Res.，18(15)，4600(1990)；Kenmochi，N.，等人，GenomeRes.，8(5)，509-523(1998)；Lopez，C.D.，等人，Cancer Lett.180(2)，195-202(2002))。然而從這些研究結果發現GIG33基因與多種人類致癌作用密切相關。從研究結果發現GIG33抑癌基因在包括乳腺癌的多種人類腫瘤中很少表達或不表達，而在多種正常組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO41的DNA序列具有一個對應于DNA序列的74～406的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(404～406的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由110個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO42的氨基酸序列和約12kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO41中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO43的隨機引物H-AP33(5′-AAGCTTGCTGCTC-3′)和SEQ ID NO44的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTG-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得182-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系系中不表達或很少表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。
認為本發明的基因在正常組織，優選在乳腺、腦、心臟、肌肉、大腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞中過量表達以抑制致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約0.6kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達。
12.GIG34 本發明的基因為具有SEQ ID NO45的DNA序列的人抑癌基因34(GIG34)，其以AY871274的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2006年10月1日)，該存入的基因的DNA序列與以BC018970的收錄號而被存入數據庫的人類核糖體蛋白L11基因的相似。然而從這些研究結果發現GIG34基因與多種人類致癌作用密切相關。從研究結果發現GIG34抑癌基因在包括乳腺癌的多種人類腫瘤中很少表達或不表達，而在多種正常組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO45的DNA序列具有一個對應于DNA序列的5～538的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(536～538的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由177個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO46的氨基酸序列和約20kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO45中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO47的隨機引物H-AP35(5′-AAGCTTCAGGGCA-3′)和SEQ ID NO48的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTC-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得205-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系中不表達或很少表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。
認為本發明的基因在正常組織，優選在乳腺、腦、心臟、肌肉、大腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞中過量表達以抑制致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約0.6kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達。
13.GIG35 本發明的基因為具有SEQ ID NO49的DNA序列的人抑癌基因35(GIG35)，其以AY542307的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2005年12月31日)，該存入的基因的DNA序列與以NM_001404的收錄號而被存入數據庫的人類真核翻譯延伸因子1γ(EEF1G)基因的相似。該基因為在將氨酰tRNA轉運到核糖體上中起重要作用的延伸因子1的亞單位((Kumabe，T.，等人，Nucleic Acids Res.，20(10)，2598(1992))。然而從這些研究結果發現GIG35基因與多種人類致癌作用密切相關。從研究結果發現GIG35抑癌基因在包括乳腺癌的多種人類腫瘤中很少表達或不表達，而在多種正常組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO49的DNA序列具有一個對應于DNA序列的19～1,332的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(1,330～1,332的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由437個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO50的氨基酸序列和約50kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO49中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO51的隨機引物H-AP3(5′-AAGCTTTGGTCAG-3′)和SEQ ID NO52的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTC-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得212-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系中不表達或很少表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。
認為本發明的基因在正常組織，優選在乳腺、腦、心臟、肌肉、大腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤和肺中過量表達以抑制致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約1.3kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達。
14.GIG38 本發明的基因為具有SEQ ID NO53的DNA序列的人抑癌基因38(GIG38)，其以AY550970的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2005年12月31日)，該存入的基因的DNA序列與以NM_005870的收錄號而被存入數據庫的人類sin3相關多肽(18kDa)(SAP18)基因的相似。然而從這些研究結果發現GIG38基因與多種人類致癌作用密切相關。從研究結果發現GIG38抑癌基因在包括乳腺癌的多種人類腫瘤中很少表達或不表達，而在多種正常組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO53的DNA序列具有一個對應于DNA序列的17～478的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(476～478的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由153個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO54的氨基酸序列和約17kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO53中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO55的隨機引物H-AP12(5′-AAGCTTGAGTGCT-3′)和SEQ ID NO56的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTC-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得172-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系中不表達或很少表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。
認為本發明的基因在正常組織，優選在乳腺、心臟、肌肉、腎、肝和胎盤中過量表達以抑制致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約0.7kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達。
15.GIG39 本發明的基因為具有SEQ ID NO57的DNA序列的人抑癌基因39(GIG39)，其以AY550972的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2005年12月31日)，該存入的基因的DNA序列與以BC030531的收錄號而被存入數據庫的人類染色體1開放閱讀框24基因的相似。然而從這些研究結果發現GIG39基因與多種人類致癌作用密切相關。從研究結果發現GIG39抑癌基因在包括乳腺癌的多種人類腫瘤中很少表達或不表達，而在多種正常組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO57的DNA序列具有一個對應于DNA序列的70～2,856的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(2,854～2,856的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由928個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO58的氨基酸序列和約103kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO57中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO59的隨機引物H-AP12(5′-AAGCTTGAGTGCT-3′)和SEQ ID NO60的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTA-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得327-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系中不表達或很少表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。
認為本發明的基因在正常組織，優選在乳腺和肝中過量表達以抑制致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約2.4kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達。
16.GIG40 本發明的基因為具有SEQ ID NO61的DNA序列的人抑癌基因40(GIG40)，其以AY550966的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2005年12月31日)，該存入的基因的DNA序列與以NM_005228的收錄號而被存入數據庫的人類表皮生長因子受體(鳥類成紅細胞白血病病毒(v-erb-b)致癌基因同源體)(EGFR)基因的相似。然而從這些研究結果發現GIG40抑癌基因在包括肝癌的多種人類腫瘤中很少表達，而在正常肝組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO61的DNA序列具有一個對應于DNA序列的47～3,679的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(3,677～3,679的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由1,210個氨基酸殘基組成，其具有SEQID NO62的氨基酸序列和約134kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO61中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO63的隨機引物H-AP7(5′-AAGCTTAACGAGG-3′)和SEQ ID NO64的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTG-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得275-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系中不表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。本發明人將全長GIG40cDNA插入表達載體pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美國)，然后用所得的表達載體轉化大腸桿菌DH5α以獲得轉化體，其稱為大腸桿菌DH5α/GIG40/pBAD/Thio-Topo。
認為本發明的基因在正常組織，優選在肝、心臟和肌肉中過量表達以抑制致癌作用。還認為其基因表達在白血病、子宮癌、惡性淋巴瘤、結腸癌、肺癌和皮膚癌中受到抑制，從而引起致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約1.5kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達。
17.GIG42 本發明的基因為具有SEQ ID NO65的DNA序列的人抑癌基因42(GIG42)，其以AY550967的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2005年12月31日)，該存入的基因的DNA序列與以BC034023的收錄號而被存入數據庫的人類白蛋白基因的相似。然而從這些研究結果發現GIG42抑癌基因在包括肝癌的多種人類腫瘤中根本不表達，而在正常肝組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO65的DNA序列具有一個對應于DNA序列的8～1,837的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(1,835～1,837的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由609個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO66的氨基酸序列和約69kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO65中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO67的隨機引物H-AP8(5′-AAGCTTTTACCGC-3′)和SEQ ID NO68的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTG-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得327-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系中不表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。本發明者將全長GIG42cDNA插入表達載體pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美國)，然后用所得的表達載體轉化大腸桿菌DH5α以獲得轉化體，其稱為大腸桿菌DH5α/GIG42/pBAD/Thio-Topo。
認為本發明的基因在正常組織，優選在肝中過量表達以抑制致癌作用。還認為其基因表達在白血病、子宮癌、惡性淋巴瘤、結腸癌、肺癌和皮膚癌中受到抑制，從而引起致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約2.5kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達。
18.GIG43 本發明的基因為具有SEQ ID NO69的DNA序列的人抑癌基因43(GIG43)，其以AY550971的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2005年12月31日)，該存入的基因的DNA序列與以BC028354的收錄號而被存入數據庫的人類磷脂爬行酶基因的相似。然而從這些研究結果發現GIG43基因與多種人類致癌作用密切相關。從研究結果發現GIG43抑癌基因在包括乳腺癌的多種人類腫瘤中很少表達或不表達，而在多種正常組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO69的DNA序列具有一個對應于DNA序列的96～1,085的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(1,083～1,085的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由329個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO70的氨基酸序列和約37kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO69中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO71的隨機引物H-AP10(5′-AAGCTTCCACGTA-3′)和SEQ ID NO72的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTG-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得273-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系中不表達或很少表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。
認為本發明的基因在正常組織，優選在乳腺、心臟、腎、肝、胎盤和肺中過量表達以抑制致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約3.5kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達。
19.GIG46 本發明的基因為具有SEQ ID NO73的DNA序列的人抑癌基因1(GIG46)，其以AY692464的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2006年5月1日)，該存入的基因的DNA序列與以NM_001613的收錄號而被存入數據庫的人類肌動蛋白α2(平滑肌主動脈)(ACTA2)基因的相似。然而與其以前報道的功能相反，通過研究結果發現GIG46基因與多種人類致癌作用密切相關。從這些研究結果發現GIG8抑癌基因在包括子宮癌的多種人類腫瘤中很少表達，而在多種正常組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO73的DNA序列具有一個對應于DNA序列的393～1,526的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(1,524～1,526的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由377個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO74的氨基酸序列和約42kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO73中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO75的隨機引物H-AP16(5′-AAGCTTTAGAGCG-3′)和SEQ ID NO76的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTA-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得255-bp cDNA片段(對應于1,323～1,577的堿基位置)，該片段在癌組織或癌細胞系中不表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。
認為本發明的基因在正常組織，優選在子宮、腦、心臟、骨骼肌、大腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞中過量表達以抑制致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約1.5kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達，除了1.5kb的mRNA轉錄物之外，大約2.0kb大小的mRNA轉錄物也表達。
20.PIG33 本發明的基因為具有SEQ ID NO77的DNA序列的人抑癌基因(PIG33)，其以AY513278的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2005年12月31日)，該存入的基因的DNA序列與以BC033721的收錄號而被存入數據庫的人類SPARC樣1(mast9，hevin)基因的相似。然而通過這些研究結果發現PIG35抑癌基因在包括肝癌的多種人類腫瘤中很少表達，而在正常肝組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO77的DNA序列具有一個對應于DNA序列的81～2,075的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(2,073～2,075的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由664個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO78的氨基酸序列和約75kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO77中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO79的隨機引物H-AP2(5′-AAGCTTCGACTGT-3′)和SEQ ID NO80的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTA-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得256-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系中不表達或很少表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。
本發明者將全長PIG33cDNA插入表達載體pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美國)，然后用所得的表達載體轉化大腸桿菌DH5α以獲得轉化體，其稱為大腸桿菌DH5α/PIG33/pBAD/Thio-Topo。
認為本發明的基因在正常組織，優選在肝、腦、心臟、肌肉、大腸、胸腺、脾、腎、小腸、胎盤和肺中過量表達以抑制致癌作用。還認為其基因表達在白血病、子宮癌、結腸癌、肺癌和皮膚癌中受到抑制，從而引起致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約3.0kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達。
21.PIG35 本發明的基因為具有SEQ ID NO81的DNA序列的人抑癌基因(PIG35)，其以AY513280的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2005年12月31日)，該存入的基因的DNA序列與以NM_002615的收錄號而被存入數據庫的人類絲氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑制因子的相似。然而通過這些研究結果發現PIG35抑癌基因在包括乳腺癌的多種人類腫瘤中很少表達，而在正常肝組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO81的DNA序列具有一個對應于DNA序列的50～1,306的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(1,304～1,306的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由418個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO82的氨基酸序列和約46kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO81中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO83的隨機引物H-AP9(5′-AAGCTTCATTCCG-3′)和SEQ ID NO84的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTC-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得312-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系中不表達或很少表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。
本發明者將全長PIG35cDNA插入表達載體pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美國)，然后用所得的表達載體轉化大腸桿菌DH5α以獲得轉化體，其稱為大腸桿菌DH5α/PIG35/pBAD/Thio-Topo。
認為本發明的基因在正常組織，優選在肝、心臟、肌肉、腦、小腸、肺和胎盤中過量表達以抑制致癌作用。還認為其基因表達在白血病、子宮癌、惡性淋巴瘤、結腸癌、肺癌和皮膚癌中受到抑制，從而引起致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約1.7kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達。
22.PIG36 本發明的基因為具有SEQ ID NO85的DNA序列的人抑癌基因(PIG36)，其以AY544129的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2005年12月31日)，該存入的基因的DNA序列與以NM_001685的收錄號而被存入數據庫的人類ATP合成酶，H+轉運，線粒體F0復合體，亞基F6(ATP5J)的相似。然而通過這些研究結果發現PIG36抑癌基因在包括肝癌的多種人類腫瘤中很少表達，而在正常肝組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO85的DNA序列具有一個對應于DNA序列的102～428的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(426～428的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由108個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO86的氨基酸序列和約13kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO85中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO87的隨機引物H-AP9(5′-AAGCTTCATTCCG-3′)和SEQ ID NO88的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTG-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得162-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系中不表達或很少表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。本發明人將全長PIG36cDNA插入表達載體pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美國)，然后用所得的表達載體轉化大腸桿菌DH5α以獲得轉化體，其稱為大腸桿菌DH5α/PIG36/pBAD/Thio-Topo。
認為本發明的基因在正常組織，優選在肝、心臟、肌肉、腎和胎盤中過量表達以抑制致癌作用。還認為其基因表達在白血病、子宮癌、惡性淋巴瘤、結腸癌、肺癌和皮膚癌中受到抑制，從而引起致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約1.0kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達。
23.MIG20 SEQ ID NO89的DNA序列以AY871271的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2006年10月1日)，該存入的基因的DNA序列與以BX537651的收錄號而被存入數據庫的人類mRNA；cDNA DKFZp686C0390基因的相似。然而通過這些研究結果發現MIG20抑癌基因在包括子宮癌的多種人類腫瘤中根本不表達，而在多種正常組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO89的DNA序列具有一個對應于DNA序列的8～202的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(200～202的堿基位置表示終止密碼子)。而且，SEQ IDNO89的DNA序列具有另一個對應于DNA序列的233～442的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(440～442的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由64個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO90的氨基酸序列和約7kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO89中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO91的隨機引物H-AP32(5′-AAGCTTCCTGCAA-3′)和SEQ ID NO92的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTA-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得311-bp cDNA片段(對應于2,067～2,377的堿基位置)，該片段在癌組織或癌細胞系中不表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。
認為本發明的基因在正常組織，優選在子宮、心臟、骨骼肌、腎和肝中過量表達以抑制致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約4.4kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達，除了4.4kb的mRNA轉錄物之外，大約2.4kb和1.5kb大小的mRNA轉錄物也表達。
24.PIG49 本發明的基因為具有SEQ ID NO93的DNA序列的人抑癌基因(GIG49)，其以AY524047的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2005年12月31日)，該存入的基因的DNA序列與以NM_005749的收錄號而被存入數據庫的人類ERBB2轉導蛋白1(TOB1)基因的相似。然而通過這些研究結果發現GIG49基因與多種人類致癌基因密切相關。研究結果發現GIG49抑癌基因在包括乳腺癌的多種人類腫瘤中很少表達或不表達，而在多種正常組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO93的DNA序列具有一個對應于DNA序列的11～1,048的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(1,046～1,048的堿基位置表示終止密碼子)。然而，由于密碼子簡并性，或者考慮到生物體表達基因的密碼子偏愛性，本發明的基因可以在編碼區進行多種修飾而沒有改變由編碼區表達的蛋白的氨基酸序列，且還可以在不影響基因表達的范圍內的除了編碼區的區域中進行多種修飾或改變。這種修飾的基因還可以在本發明的范圍內。因此，本發明還包括具有與上述基因基本相同DNA序列的多核苷酸以及基因片段。術語“基本相同的多核苷酸”指具有至少80％、優選至少90％且最優選至少95％的序列同源性的DNA序列。
由本發明的基因表達的蛋白質由345個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO94的氨基酸序列和約38kDa的分子量。而且，甚至在不影響蛋白質功能的范圍內的蛋白質氨基酸序列中取代、添加或缺失一個或多個氨基酸，且根據它們的用途可以只使用一些蛋白質。這種改變的氨基酸序列還包括在本發明的范圍內。因此，本發明還包括具有與所述蛋白質基本相同的氨基酸序列的多肽及其片段。術語“基本相同的多肽”指具有至少80％、優選至少90％且最優選至少95％的序列同源性的多肽。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO93中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO95的隨機引物H-AP10(5′-AAGCTTCCACGTA-3′)和SEQ ID NO96的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTA-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得272-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系中不表達或很少表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。
由此制備的基因可以插入本領域中已知的用于在微生物或動物細胞中表達的載體中，以獲得表達載體，然后所述基因的DNA可以大量復制或者通過將表達載體引入如大腸桿菌(Escherichia coli)、MCF-7細胞系等的合適宿主細胞中而以市場量來生產其蛋白質。在構建表達載體時，根據生產基因或蛋白質的宿主細胞的種類可以適當地選擇和組合如啟動子和終止子、自主復制序列、分泌信號等的表達調節序列。
認為本發明的基因在正常組織，優選在乳腺、肌肉、心臟、腎、肝和胎盤中過量表達以抑制致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約2.4kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達。而且，除了2.4kb的mRNA轉錄物之外，大約1.5kb大小的mRNA轉錄物也表達。
25.PIG51 本發明的基因為具有SEQ ID NO97的DNA序列的人抑癌基因(PIG51)，其以AY542308的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2005年12月31日)，該存入的基因的DNA序列與以BC007054的收錄號而被存入數據庫的人類TBC1域家族成員7基因的相似。然而通過這些研究結果發現PIG51基因與多種人類致癌基因密切相關。研究結果發現PIG51抑癌基因在包括乳腺癌的多種人類腫瘤中很少表達或不表達，而在多種正常組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO97的DNA序列具有一個對應于DNA序列的59～802的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(800～802的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由247個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO98的氨基酸序列和約28kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO97中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO99的隨機引物H-AP22(5′-AAGCTTTTGATCC-3′)和SEQ ID NO100的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTG-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得211-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系中不表達或很少表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。
認為本發明的基因在正常組織，優選在乳腺、心臟、肌肉、胸腺、脾、腎、肝、胎盤和外周血白細胞中過量表達以抑制致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約1.0kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達。
26.MIG12 本發明的基因為具有SEQ ID NO101的DNA序列的人抑癌基因(MIG12)，其以AY453400的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2005年3月31日)，該存入的基因的DNA序列與以BC016731的收錄號而被存入數據庫的人類胸腺素β10基因的相似。然而通過這些研究結果發現MIG12抑癌基因在包括肺癌的多種人類腫瘤中很少表達，而在多種正常組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO101的DNA序列具有一個對應于DNA序列的29～163的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(161～163的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由44個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO102的氨基酸序列和約5kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO101中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO103的隨機引物H-AP12(5′-AAGCTTGAGTGCT-3′)和SEQ ID NO104的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTC-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得211-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系中很少表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。
認為本發明的基因在正常組織，優選在肺、腦、心臟、肌肉、大腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤和外周血白細胞中過量表達以抑制致癌作用。
本發明的基因主要在這些組織中以大約0.5kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達，除了0.5kb的mRNA轉錄物之外，大約1.0kb和0.8kb大小的mRNA轉錄物也表達。
27.PIG37 本發明的基因為具有SEQ ID NO105的DNA序列的人抑癌基因(PIG37)，其以AY513281的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2005年12月31日)，該存入的基因的DNA序列與以NM_002221的收錄號而被存入數據庫的人類1，4，5-三磷酸肌醇3-激酶B(ITPKB)基因的相似。然而通過這些研究結果發現PIG37抑癌基因在包括肝癌的多種人類腫瘤中很少表達，而在正常肝組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO105的DNA序列具有一個對應于DNA序列的4～1,422的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(1,420～1,422的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由472個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO106的氨基酸序列和約53kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO105中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO107的隨機引物H-AP10(5′-AAGCTTCCACGTA-3′)和SEQ ID NO108的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTG-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得263-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系中不表達或很少表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。本發明人將全長PIG33cDNA插入表達載體pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美國)，然后用所得的表達載體轉化大腸桿菌DH5α以獲得轉化體，其稱為大腸桿菌DH5α/PIG33/pBAD/Thio-Topo。
認為本發明的基因在正常組織，優選在肝、腦、心臟、肌肉、大腸、胸腺、脾、腎、小腸、胎盤和肺中過量表達以抑制致癌作用。還認為本發明的基因在白血病、子宮癌、結腸癌、肺癌和皮膚癌中受到抑制，從而引起致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約7.0kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達。
28.GIG44 本發明的基因為具有SEQ ID NO109的DNA序列的人抑癌基因44(GIG44)，其以AY971350的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2006年5月31日)，該存入的基因的DNA序列與以BC042127的收錄號而被存入數據庫的人類推定的胰島素樣生長因子-II相關蛋白基因的相似。然而通過研究結果發現GIG44基因與多種人類致癌作用密切相關。從這些研究結果發現GIG44抑癌基因在包括乳腺癌的多種人類腫瘤中很少表達或不表達，而在多種正常組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO109的DNA序列具有一個對應于DNA序列的59～400的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(398～400的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由113個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO110的氨基酸序列和約12kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO109中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO111的隨機引物H-AP12(5′-AAGCTTGAGTGCT-3′)和SEQ ID NO112的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTG-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得221-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系中不表達或很少表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。
認為本發明的基因在正常組織，優選在乳腺、心臟、腎、肝、胎盤和肺中過量表達以抑制致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約1.0kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達。
29.GIG31 本發明的基因為具有SEQ ID NO113的DNA序列的人抑癌基因31(GIG31)，其以AY971351的收錄號而被存入美國國立衛生研究院(NIH)的基因數據庫(規定的公布日期2006年5月31日)，該存入的基因的DNA序列與以NM_002923的收錄號而被存入數據庫的人類G蛋白信號調節蛋白2基因相似。然而通過研究結果發現GIG31基因與多種人類致癌作用密切相關。從這些研究結果發現GIG31抑癌基因在包括乳腺癌的多種人類腫瘤中很少表達或不表達，而在多種正常組織中其表達顯著提高。
SEQ ID NO113的DNA序列具有一個對應于DNA序列的14～649的堿基位置的開放閱讀框(ORF)(647～649的堿基位置表示終止密碼子)。
由本發明的基因表達的蛋白質由211個氨基酸殘基組成，其具有SEQ IDNO114的氨基酸序列和約24kDa的分子量。
本發明的基因和蛋白質可以從人體組織中分離，或還可以根據用于合成DNA或肽的已知方法來合成。例如，可以以SEQ ID NO113中所列的DNA序列的信息為基礎，根據常規方法篩選并克隆本發明的基因。作為另一個例子，可以使用SEQ ID NO115的隨機引物H-AP4(5′-AAGCTTCTCAACG-3′)和SEQ ID NO116的oligo-dT錨定引物(5′-AAGCTTTTTTTTTTTA-3′)通過用從正常組織和癌組織或癌細胞系中提取的總RNA進行反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)而獲得223-bp cDNA片段，該片段在癌組織或癌細胞系中不表達或很少表達而在正常組織中差異性表達，用作探針的所得片段可以與cDNA文庫進行噬菌斑雜交以獲得全長cDNA克隆。
認為本發明的基因在正常組織，優選在乳腺、心臟、大腸、脾、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞中過量表達以抑制致癌作用。本發明的基因主要在這些組織中以大約1.4kb大小的mRNA轉錄物進行過量表達。
同時，由于密碼子簡并性，或者考慮到生物體表達基因的密碼子偏愛性，本發明的基因可以在編碼區進行多種修飾而沒有改變由編碼區表達的蛋白的氨基酸序列，且還可以在不影響基因表達的范圍內的除了編碼區的區域中進行多種修飾或改變。這種修飾的基因還可以在本發明的范圍內。因此，本發明還包括具有與上述基因基本相同DNA序列的多核苷酸以及基因片段。術語“基本相同的多核苷酸”指具有至少80％、優選至少90％且最優選至少95％的序列同源性的DNA序列。
而且，甚至在不影響蛋白質功能的范圍內的蛋白質氨基酸序列中取代、添加或缺失一個或多個氨基酸，且根據它們的用途可以只使用一些蛋白質。這種修改的氨基酸序列還包括在本發明的范圍內。因此，本發明還包括具有與所述蛋白質基本相同的氨基酸序列的多肽及其片段。術語“基本相同的多肽”指具有至少80％、優選至少90％且最優選至少95％的序列同源性的多肽。
在一些實施方式中，由此制備的本發明的基因可以插入本領域中已知的用于在微生物或動物細胞中表達的載體中，以獲得表達載體，然后所述基因的DNA可以大量復制或者通過將表達載體引入如大腸桿菌、MCF-7細胞系等的合適宿主細胞中而以市場量來生產其蛋白質。在構建表達載體時，根據生產基因或蛋白質的宿主細胞的種類可以適當地選擇和組合如啟動子和終止子、自主復制序列、分泌信號等的表達調節序列。
具體地，本發明的基因只在正常組織中差異性表達。例如，在癌組織或癌細胞，如乳腺癌組織、乳腺癌細胞系MCF-7、白血病細胞、白血病細胞系K562、肝癌組織、肝癌細胞系HepG2、子宮頸癌、子宮頸癌細胞系、肺癌組織、轉移肺癌組織和肺癌細胞系(A549和NCI-H358)中稍微檢測到或檢測不到它們的基因表達，而只有在正常子宮組織中差異性地提高。
引入本發明的基因的癌細胞系呈現出高死亡率，因此本發明的基因可以有效地用于治療并防治癌癥。
下文將參照優選實施例詳細描述本發明。因此，這里提出的描述僅是僅用于說明性目的的優選實施例，且不打算限制本發明的范圍。
參考實施例總RNA的分離 使用RNeasy總RNA試劑盒(Qiagen公司，德國)從新鮮組織或培養細胞中分離總RNA樣品，然后使用message clean試劑盒(GenHunter公司，MA，美國)從RNA樣品中除去污染DNA。
實施例1總RNA的分離和mRNA差異性顯示 觀察基因在正常乳腺組織、原發性乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中的差異性表達圖式如下。
正常乳腺組織樣品由在乳房切除術期間的乳腺癌患者獲得，原發性乳腺癌組織樣品在根治性乳房切除術期間由在外科手術治療之前未進行放射治療和/或抗癌化學治療的乳腺癌患者獲得。使用MCF-7(美國典型微生物菌種保藏中心，ATCC號HTB-22)作為人乳腺癌細胞系。按照與如參考實施例中所述的相同方法從這些組織和細胞中分離總RNA。
為進行GIG15的mRNA差異性顯示，還從正常人體中獲得骨髓組織，并在骨髓活檢時從以前未進行過抗癌化學治療和/或放射治療的白血病患者獲得原發性白血病骨髓組織。在差異性顯示方法中使用K-562(美國典型微生物菌種保藏中心，ATCC號CCL-243)作為人慢性髓細胞性白血病細胞系。按照與如參考實施例中所述的相同方法從這些組織和細胞中分離總RNA。
同時，在肝癌相關基因的情況下，在正常肝組織、原發性肝癌組織和肝癌細胞系中觀察基因的差異性表達圖式，如下。
正常肝組織樣品和肝癌組織樣品由在組織活檢時的肝癌患者獲得，使用肝癌細胞系HepG2(美國典型微生物菌種保藏中心，ATCC號HB-8065)作為人肝癌細胞系。按照與如參考實施例中所述的相同方法從這些組織和細胞中分離總RNA。
還在正常外宮頸組織、原發性子宮頸癌組織和子宮頸癌細胞系中觀察目的基因的差異性表達圖式，如下。正常外宮頸組織樣品由在子宮切除術期間的患有子宮肌瘤的患者獲得，且原發性子宮頸癌組織樣品和轉移性髂淋巴結癌組織樣品在根治性子宮切除術期間由在外科手術治療之前未進行放射治療和/或抗癌化學治療的乳腺癌患者獲得。使用CUMC-6(Kim，J.W.等人，Gynecol.Oncol.62230-240，1996)作為人子宮頸癌細胞系。按照與如參考實施例中所述的相同方法從這些組織和細胞中分離總RNA。按照與如參考實施例中所述的相同方法從這些組織和細胞中分離總RNA。
還在正常肺組織、原發性肺癌組織、轉移性肺癌組織和肺癌細胞系中測定目的基因的差異性表達，如下。正常肺組織樣品、肺癌組織樣品、轉移性肺癌組織樣品由在外科手術操作期間的肺癌患者獲得。使用肺癌細胞系A549(美國典型微生物菌種保藏中心，ATCC號CCL-185)和NCI-H358(美國典型微生物菌種保藏中心，ATCC號CRL-5807)作為人肺癌細胞系。按照與如參考實施例中所述的相同方法從這些組織和細胞中分離總RNA。
根據公開文本(Liang，P.和Pardee，A.B.，Science，257，967-971(1992)；以及Liang，P.等人，Cancer Res.，52，6966-6968(1993))中所述修改的方法，使用從組織和細胞中分離的各總RNA樣品進行RT-PCR反應，如下。
1-1.GIG8 使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO4的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO3的5′-13-mer隨機引物H-AP33(RNAimage引物對5，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖1表示使用SEQ ID NO3的5′-13-mer隨機引物H-AP33和SEQ ID NO4的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖1中，泳道1、2和3表示正常乳腺組織；泳道4、5和6表示乳腺癌組織；以及泳道7表示乳腺癌細胞系MCF-7。如圖1中所示，證實163-bp cDNA片段(全長GIG8基因序列的317～479的堿基位置)在乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中很少表達，而只有在正常肺組織中以提高的水平差異性表達。該cDNA片段稱為FC33。
從干膠中除去163-bp條帶，FC33片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增FC33cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段FC33克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-2.GIG10 使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO8的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO7的5′-13-mer隨機引物H-AP10(RNAimage引物對2，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖2表示使用SEQ ID NO7的5′-13-mer隨機引物H-AP10和SEQ ID NO8的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖2中，泳道1、2和3表示正常乳腺組織；泳道4、5和6表示乳腺癌組織；以及泳道7表示乳腺癌細胞系MCF-7。如圖2中所示，證實321-bp cDNA片段(全長GIG10基因序列的1,716～2,036的堿基位置)在乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中很少表達，而只有在正常肺組織中以提高的水平差異性表達。該cDNA片段稱為FC42。
從干膠中除去321-bp條帶，FC42片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增FC42cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段FC42克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-3.GIG13 使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO12的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO11的5′-13-mer隨機引物H-AP5(RNAimage引物對1，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖3表示使用SEQ ID NO11的5′-13-mer隨機引物H-AP5和SEQ ID NO12的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖3中，泳道1、2和3表示正常乳腺組織；泳道4、5和6表示乳腺癌組織；以及泳道7表示乳腺癌細胞系MCF-7。如圖3中所示，證實347-bp cDNA片段(全長GIG13基因序列的3,253～3,599的堿基位置)在乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中很少表達，而只有在正常乳腺組織中以提高的水平差異性表達。該cDNA片段稱為FC59。
從干膠中除去347-bp條帶，FC59片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增FC59cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段FC59克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-4.GIG15 為進行mRNA差異性顯示，還從正常人體中獲得骨髓組織，并在骨髓活檢時從以前未進行過抗癌化學治療和/或放射治療的白血病患者獲得原發性白血病骨髓組織。在差異性顯示方法中使用K-562(美國典型微生物菌種保藏中心，ATCC號CCL-243)作為人慢性髓細胞性白血病細胞系。按照與如參考實施例中所述的相同方法從這些組織和細胞中分離總RNA。
根據公開文本(Liang，P.和Pardee，A.B.，Science，257，967-971(1992)；以及Liang，P.等人，CancerRes.，52，6966-6968(1993))中所述修改的方法，使用從組織和細胞中分離的各總RNA樣品進行RT-PCR反應，如下。使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO16的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO15的5′-13-mer隨機引物H-AP2(RNAimage引物對1，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖4表示使用SEQ ID NO15的5′-13-mer隨機引物H-AP2和SEQ ID NO16的oligo-dT錨定引物的PCR結果。如圖4中所示，使用差異顯示(DD)方法證實該基因在正常骨髓組織和白血病細胞以及K-562細胞中以差異性水平表達。如圖4中所示，133-bp cDNA片段，GV2(全長GIG15基因序列的212～344的堿基位置)在白血病和K-562細胞中很少表達，而只有在正常骨髓組織中較高地表達。該cDNA片段稱為GV2。從干膠中除去133-bp條帶，GV2片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增GV2cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段GV2克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-5.GIG16 在正常肝組織、原發性肝癌組織和肝癌細胞系中觀察基因的差異性表達圖式，如下。
正常肝組織樣品和肝癌組織樣品由在組織活檢時的肝癌患者獲得，使用肝癌細胞系HepG2(美國典型微生物菌種保藏中心，ATCC號HB-8065)作為人肝癌細胞系。按照與如參考實施例中所述的相同方法從這些組織和細胞中分離總RNA。
根據公開文本(Liang，P.和Pardee，A.B.，Science，257，967-971(1992)；以及Liang，P.等人，Cancer Res.，52，6966-6968(1993))中所述修改的方法，使用從組織和細胞中分離的各總RNA樣品進行RT-PCR反應，如下。使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO20的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO19的5′-13-mer隨機引物H-AP8(RNAimage引物對1，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖5表示使用SEQ ID NO19的5′-13-mer隨機引物H-AP8和SEQ ID NO20的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖5中，泳道1、2和3表示正常肝組織；泳道4、5和6表示肝癌組織；以及泳道7表示肝腺癌細胞系HepG2。如圖5中所示，證實213-bp cDNA片段(全長GIG16基因序列的867～1,079的堿基位置)在肝癌組織和肝癌細胞系中不表達，而只有在正常肝組織中差異性表達。該cDNA片段稱為HP8。
從干膠中除去213-bp條帶，HP8片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增HP8cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段HP8克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-6.GIG24 在正常肝組織、原發性肝癌組織和肝癌細胞系中觀察基因的差異性表達圖式，如下。
正常肝組織樣品和肝癌組織樣品由在組織活檢時的肝癌患者獲得，使用肝癌細胞系HepG2(美國典型微生物菌種保藏中心，ATCC號HB-8065)作為人肝癌細胞系。按照與如參考實施例中所述的相同方法從這些組織和細胞中分離總RNA。
根據公開文本(Liang，P.和Pardee，A.B.，Science，257，967-971(1992)；以及Liang，P.等人，Cancer Res.，52，6966-6968(1993))中所述修改的方法，使用從組織和細胞中分離的各總RNA樣品進行RT-PCR反應，如下。使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO24的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO23的5′-13-mer隨機引物H-AP7(RNAimage引物對1，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖6表示使用SEQ ID NO23的5′-13-mer隨機引物H-AP7和SEQ ID NO24的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖6中，泳道1、2和3表示正常肝組織；泳道4、5和6表示肝癌組織；以及泳道7表示肝腺癌細胞系HepG2。如圖6中所示，證實221-bp cDNA片段(全長GIG42基因序列的1,057～1,277的堿基位置)在肝癌組織和肝癌細胞系中不表達，而只有在正常肝組織中差異性表達。該cDNA片段稱為HP71。
從干膠中除去221-bp條帶，HP71片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增HP71cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段HP71克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-7.GIG26 使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO28的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO27的5′-13-mer隨機引物H-AP11(RNAimage引物對1，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖7表示使用SEQ ID NO27的5′-13-mer隨機引物H-AP11和SEQ ID NO28的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖7中，泳道1、2和3表示正常肝組織；泳道4、5和6表示肝癌組織；以及泳道7表示肝腺癌細胞系HepG2。如圖7中所示，證實204-bp cDNA片段(全長GIG26基因序列的1,036～1,239的堿基位置)在肝癌組織和肝癌細胞系中不表達，而只有在正常肝組織中差異性表達。該cDNA片段稱為HP115。
從干膠中除去204-bp條帶，HP115片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增HP115cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段HP115克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-8.GIG29 使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO32的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO31的5′-13-mer隨機引物H-AP3(RNAimage引物對1，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖8表示使用SEQ ID NO31的5′-13-mer隨機引物H-AP3和SEQ ID NO32的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖8中，泳道1、2和3表示正常肝組織；泳道4、5和6表示肝癌組織；以及泳道7表示肝腺癌細胞系HepG2。如圖8中所示，證實277-bp cDNA片段(全長GIG26基因序列的8,23～1,099的堿基位置)在肝癌組織和肝癌細胞系中不表達，而只有在正常肝組織中差異性表達。該cDNA片段稱為HP3。
從干膠中除去277-bp條帶，HP3片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增HP3cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段HP3克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-9.GIG30 使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO36的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO35的5′-13-mer隨機引物H-AP4(RNAimage引物對1，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖9表示使用SEQ ID NO35的5′-13-mer隨機引物H-AP4和SEQ ID NO36的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖9中，泳道1、2和3表示正常乳腺組織；泳道4、5和6表示乳腺癌組織；以及泳道7表示乳腺癌細胞系MCF-7。如圖9中所示，證實278-bp cDNA片段(全長GIG30基因序列的1,452～1,739的堿基位置)在乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中很少表達，而只有在正常乳腺組織中以提高的水平差異性表達。該cDNA片段稱為FC48。
從干膠中除去278-bp條帶，FC48片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增FC48cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段FC48克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-10.GIG32 使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO40的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO39的5′-13-mer隨機引物H-AP8(RNAimage引物對1，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖10表示使用SEQ ID NO39的5′-13-mer隨機引物H-AP8和SEQ ID NO40的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖10中，泳道1、2和3表示正常乳腺組織；泳道4、5和6表示乳腺癌組織；以及泳道7表示乳腺癌細胞系MCF-7。如圖10中所示，證實172-bp cDNA片段(全長GIG32基因序列的428～599的堿基位置)在乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中很少表達，而只有在正常乳腺中以提高的水平差異性表達。該cDNA片段稱為FC82。
從干膠中除去172-bp條帶，FC82片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增FC82cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段FC82克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-11.GIG33 使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO44的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO43的5′-13-mer隨機引物H-AP33(RNAimage引物對5，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖11表示使用SEQ ID NO43的5′-13-mer隨機引物H-AP33和SEQ IDNO44的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖11中，泳道1、2和3表示正常乳腺組織；泳道4、5和6表示乳腺癌組織；以及泳道7表示乳腺癌細胞系MCF-7。如圖11中所示，證實182-bp cDNA片段(全長GIG32基因序列的216～397的堿基位置)在乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中很少表達，而只有在正常乳腺組織中以提高的水平差異性表達。該cDNA片段稱為FC86。
從干膠中除去182-bp條帶，FC86片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增FC86cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段FC86克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-12.GIG34 使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO48的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO47的5′-13-mer隨機引物H-AP35(RNAimage引物對5，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖12表示使用SEQ ID NO47的5′-13-mer隨機引物H-AP35和SEQ IDNO48的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖12中，泳道1、2和3表示正常乳腺組織；泳道4、5和6表示乳腺癌組織；以及泳道7表示乳腺癌細胞系MCF-7。如圖12中所示，證實205-bp cDNA片段(全長GIG34基因序列的343～547的堿基位置)在乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中很少表達，而只有在正常乳腺組織中以提高的水平差異性表達。該cDNA片段稱為FC35。
從干膠中除去205-bp條帶，FC42片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增FC35cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段FC35克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-13.GIG35 使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO52的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO51的5′-13-mer隨機引物H-AP3(RNAimage引物對1，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖13表示使用SEQ ID NO51的5′-13-mer隨機引物H-AP3和SEQ ID NO52的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖13中，泳道1、2和3表示正常乳腺組織；泳道4、5和6表示乳腺癌組織；以及泳道7表示乳腺癌細胞系MCF-7。如圖13中所示，證實212-bp cDNA片段(全長GIG35基因序列的1,108～1,319的堿基位置)在乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中很少表達，而只有在正常乳腺組織中以提高的水平差異性表達。該cDNA片段稱為FC38。
從干膠中除去212-bp條帶，FC38片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增FC38cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段FC38克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-14.GIG38 使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO56的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO55的5′-13-mer隨機引物H-AP12(RNAimage引物對2，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖14表示使用SEQ ID NO55的5′-13-mer隨機引物H-AP12和SEQ IDNO56的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖14中，泳道1、2和3表示正常乳腺組織；泳道4、5和6表示乳腺癌組織；以及泳道7表示乳腺癌細胞系MCF-7。如圖14中所示，證實172-bp cDNA片段(全長GIG38基因序列的328～499的堿基位置)在乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中很少表達，而只有在正常乳腺組織中以提高的水平差異性表達。該cDNA片段稱為FC122。
從干膠中除去172-bp條帶，FC122片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增FC122cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段FC122克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-15.GIG39 使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO60的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO59的5′-13-mer隨機引物H-AP12(RNAimage引物對2，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖15表示使用SEQ ID NO59的5′-13-mer隨機引物H-AP12和SEQ IDNO60的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖15中，泳道1、2和3表示正常乳腺組織；泳道4、5和6表示乳腺癌組織；以及泳道7表示乳腺癌細胞系MCF-7。如圖15中所示，證實327-bp cDNA片段(全長GIG39基因序列的2,553～2,859的堿基位置)在乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中很少表達，而只有在正常乳腺組織中以提高的水平差異性表達。該cDNA片段稱為FC126。
從干膠中除去327-bp條帶，FC 126片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增FC126cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段FC126克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-16.GIG40 使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO64的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO63的5′-13-mer隨機引物H-AP7(RNAimage引物對1，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖16表示使用SEQ ID NO63的5′-13-mer隨機引物H-AP7和SEQ ID NO64的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖16中，泳道1、2和3表示正常肝組織；泳道4、5和6表示肝癌組織；以及泳道7表示肝腺癌細胞系HepG2。如圖16中所示，證實275-bp cDNA片段(全長GIG40基因序列的3,112～3,386的堿基位置)在肝癌組織和肝癌細胞系中很少表達，而只有在正常肝組織中差異性表達。該cDNA片段稱為HP79。
從干膠中除去275-bp條帶，HP79片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增HP79cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段HP79克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-17.GIG42 使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO68的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO67的5′-13-mer隨機引物H-AP8(RNAimage引物對1，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖17表示使用SEQ ID NO67的5′-13-mer隨機引物H-AP8和SEQ ID NO68的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖17中，泳道1、2和3表示正常肝組織；泳道4、5和6表示肝癌組織；以及泳道7表示肝癌細胞系HepG2。如圖17中所示，證實327-bp cDNA片段(全長GIG42基因序列的1,473～1,799的堿基位置)在肝癌組織和肝癌細胞系中不表達，而只有在正常肝組織中差異性表達。該cDNA片段稱為HP85。
從干膠中除去327-bp條帶，HP85片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增HP85cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段HP85克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-18.GIG43 使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO72的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO71的5′-13-mer隨機引物H-AP10(RNAimage引物對5，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖18表示使用SEQ ID NO71的5′-13-mer隨機引物H-AP10和SEQ IDNO72的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖18中，泳道1、2和3表示正常乳腺組織；泳道4、5和6表示乳腺癌組織；以及泳道7表示乳腺癌細胞系MCF-7。如圖18中所示，證實273-bp cDNA片段(全長GIG43基因序列的727～999的堿基位置)在乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中很少表達，而只有在正常乳腺組織中以提高的水平差異性表達。該cDNA片段稱為FC102。
從干膠中除去273-bp條帶，FC102片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增FC102cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段FC102克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-19.GIG46 在正常外宮頸組織、原發性子宮頸癌組織和子宮頸癌細胞系中觀察目的基因的差異性表達，如下。正常外宮頸組織樣品由在子宮切除術期間的患有子宮肌瘤的患者獲得，且原發性子宮頸癌組織樣品和轉移性髂淋巴結癌組織樣品在根治性子宮切除術期間由在外科手術治療之前未進行放射治療和/或抗癌化學治療的乳腺癌患者獲得。使用CUMC-6(Kim，J.W.等人，Gynecol.Oncol.62230-240，1996)作為人子宮頸癌細胞系。按照與如參考實施例中所述的相同方法從這些組織和細胞中分離總RNA。
根據公開文本(Liang，P.和Pardee，A.B.，Science，257，967-971(1992)；以及Liang，P.等人，CancerRes.，52，6966-6968(1993))中所述修改的方法，使用從組織和細胞中分離的各總RNA樣品進行RT-PCR反應，如下。使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO76的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO75的5′-13-mer隨機引物H-AP16(RNAimage引物對5，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖19表示使用SEQ ID NO75的5′-13-mer隨機引物H-AP16和SEQ IDNO76的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖19中，泳道1表示正常外宮頸組織；泳道2表示子宮頸癌組織；泳道3表示轉移性髂淋巴結組織；以及泳道4表示子宮頸癌細胞系CUMC-6。如圖19中所示，證實255-bp cDNA片段在子宮頸癌組織、轉移性髂淋巴結組織以及子宮頸癌細胞系CUMC-6中不表達，而只有在正常外宮頸組織中差異性表達。該cDNA片段稱為CA161。
從干膠中除去255-bp條帶，CA161片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增CA161cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段CA161克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-20.PIG33 使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO80的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO79的5′-13-mer隨機引物H-AP2(RNAimage引物對1，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖20表示使用SEQ ID NO79的5′-13-mer隨機引物H-AP2和SEQ ID NO80的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖20中，泳道1、2和3表示正常肝組織；泳道4、5和6表示肝癌組織；以及泳道7表示肝癌細胞系HepG2。如圖20中所示，證實256-bp cDNA片段(全長PIG33基因序列的1,623～1,878的堿基位置)在肝癌組織和肝癌細胞系中不表達或很少表達，而只有在正常肝組織中差異性表達。該cDNA片段稱為HP29。
從干膠中除去256-bp條帶，HP29片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增HP29cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段HP29克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-21.PIG35 使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO84的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO83的5′-13-mer隨機引物H-AP9(RNAimage引物對1，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖21表示使用SEQ ID NO83的5′-13-mer隨機引物H-AP9和SEQ ID NO84的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖21中，泳道1、2和3表示正常肝組織；泳道4、5和6表示肝癌組織；以及泳道7表示肝癌細胞系HepG2。如圖21中所示，證實312-bp cDNA片段(全長PIG35基因序列的966～1,277的堿基位置)在肝癌組織和肝癌細胞系中不表達或很少表達，而只有在正常肝組織中差異性表達。該cDNA片段稱為HP95。
從干膠中除去312-bp條帶，HP95片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增HP95cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段HP95克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-22.PIG36 使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO88的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO87的5′-13-mer隨機引物H-AP9(RNAimage引物對1，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖22表示使用SEQ ID NO87的5′-13-mer隨機引物H-AP9和SEQ ID NO88的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖22中，泳道1、2和3表示正常肝組織；泳道4、5和6表示肝癌組織；以及泳道7表示肝癌細胞系HepG2。如圖22中所示，證實162-bp cDNA片段(全長PIG36基因序列的238～399的堿基位置)在肝癌組織和肝癌細胞系中不表達或很少表達，而只有在正常肝組織中差異性表達。該cDNA片段稱為HP96。
從干膠中除去162-bp條帶，HP96片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增HP96cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段HP96克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemicai公司)測定其DNA序列。
1-23.MIG20 使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO92的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO91的5′-13-mer隨機引物H-AP32(RNAimage引物對5，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖23表示使用SEQ ID NO91的5′-13-mer隨機引物H-AP32和SEQ IDNO92的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖23中，泳道1表示正常外宮頸組織；泳道2表示子宮頸癌組織；泳道3表示轉移性髂淋巴結組織；以及泳道4表示子宮頸癌細胞系CUMC-6。如圖23中所示，證實311-bp cDNA片段在子宮頸癌組織、轉移性髂淋巴結組織以及子宮頸癌細胞系CUMC-6中不表達，而只有在正常外宮頸組織中差異性表達。該cDNA片段稱為CA324。
從干膠中除去311-bp條帶，CA324片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增CA324cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段CA324克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-24.PIG49 使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO96的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO95的5′-13-mer隨機引物H-AP10(RNAimage引物對2，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖24表示使用SEQ ID NO95的5′-13-mer隨機引物H-AP10和SEQ IDNO96的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖24中，泳道1、2和3表示正常乳腺組織；泳道4、5和6表示乳腺癌組織；以及泳道7表示乳腺癌細胞系MCF-7。如圖24中所示，證實272-bp cDNA片段(全長PIG49基因序列的767～1,038的堿基位置)在乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中很少表達，而只有在正常乳腺組織中以提高的水平差異性表達。該cDNA片段稱為FC101。
從干膠中除去272-bp條帶，FC101片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增FC101cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段FC101克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-25.PIG51 使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO100的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO99的5′-13-mer隨機引物H-AP22(RNAimage引物對1，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖25表示使用SEQ ID NO99的5′-13-mer隨機引物H-AP22和SEQ IDNO100的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖25中，泳道1、2和3表示正常乳腺組織；泳道4、5和6表示乳腺癌組織；以及泳道7表示乳腺癌細胞系MCF-7。如圖25中所示，證實211-bp cDNA片段(全長PIG51基因序列的519～729的堿基位置)在乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中很少表達，而只有在正常乳腺組織中以提高的水平差異性表達。該cDNA片段稱為FC22。
從干膠中除去211-bp條帶，FC22片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增FC22cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段FC22克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-26.MIG12 使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO104的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO103的5′-13-mer隨機引物H-AP12(RNAimage引物對1，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖26表示使用SEQ ID NO103的5′-13-mer隨機引物H-AP12和SEQ IDNO104的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖26中，泳道1表示正常肺組織；泳道2表示肺癌組織；泳道3表示轉移性肺癌組織；以及泳道4表示肺癌細胞系A549。如圖26中所示，證實161-bp cDNA片段(全長MIG12基因序列的35～195的堿基位置)在肺癌組織、轉移性肺癌組織以及肺癌細胞系中很少表達，而只有在正常肺組織中差異性表達。該cDNA片段稱為L927。
從干膠中除去161-bp條帶，L927片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增L927cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段L927克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-27.PIG37 使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO108的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO107的5′-13-mer隨機引物H-AP10(RNAimage引物對1，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖27表示使用SEQ ID NO107的5′-13-mer隨機引物H-AP10和SEQ IDNO108的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖27中，泳道1、2和3表示正常肝組織；泳道4、5和6表示肝癌組織；以及泳道7表示肝癌細胞系HepG2。如圖27中所示，證實263-bp cDNA片段(全長PIG37基因序列的1,217～1,479的堿基位置)在肝癌組織和肝癌細胞系中不表達或很少表達，而只有在正常肝組織中差異性表達。該cDNA片段稱為HP102。
從干膠中除去263-bp條帶，HP102片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增HP102cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段HP102克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-28.GIG44 使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO112的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO111的5′-13-mer隨機引物H-AP12(RNAimage引物對5，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖28表示使用SEQ ID NO111的5′-13-mer隨機引物H-AP12和SEQ IDNO112的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖28中，泳道1、2和3表示正常乳腺組織；泳道4、5和6表示乳腺癌組織；以及泳道7表示乳腺癌細胞系MCF-7。如圖28中所示，證實221-bp cDNA片段(全長GIG44基因序列的179～399的堿基位置)在乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中很少表達，而只有在正常乳腺組織中以提高的水平差異性表達。該cDNA片段稱為FC123。
從干膠中除去221-bp條帶，FC123片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增FC123cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段FC123克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
1-29.GIG31 使用試劑盒(RNAimage試劑盒，GenHunter)通過SEQ ID NO116的oligo-dT錨定引物將0.2μg總RNA反轉錄，然后在0.5mM[α-35S]標記的dATP(1,200Ci/mmol)的存在下，使用相同的oligo-dT錨定引物和SEQ ID NO115的5′-13-mer隨機引物H-AP4(RNAimage引物對1，GenHunter公司，美國)進行PCR反應。在下面條件下進行PCR反應總共40個擴增循環，每個循環由95℃下40秒的變性步驟、40℃下2分鐘的退火步驟以及72℃下40秒的延伸步驟組成，接著一個72℃下5分鐘的延伸步驟。擴增片段在6％的用于DNA堿基序列的聚丙烯酰胺凝膠中電泳，然后放射自顯影。
圖29表示使用SEQ ID NO115的5′-13-mer隨機引物H-AP4和SEQ IDNO116的oligo-dT錨定引物的PCR結果。在圖29中，泳道1、2和3表示正常乳腺組織；泳道4、5和6表示乳腺癌組織；以及泳道7表示乳腺癌細胞系MCF-7。如圖29中所示，證實223-bp cDNA片段(全長GIG31基因序列的445～667的堿基位置)在乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中很少表達，而只有在正常乳腺組織中以提高的水平差異性表達。該cDNA片段稱為FC47。
從干膠中除去223-bp條帶，FC47片段，煮沸15分鐘以洗脫cDNA，然后除了在這里不使用[α-35S]標記的dATP和20μM dNTP之外，在相同的所述條件下使用如上所述的相同引物對進行PCR反應，以再擴增FC47cDNA。使用TA克隆系統(Promega)將再擴增的cDNA片段FC47克隆進表達載體pGEM-T Easy中，然后使用Sequenase Version 2.0DNA測序系統(美國Biochemical公司)測定其DNA序列。
實施例2cDNA文庫篩選 根據公開文本(Feinberg，A.P.和Vogelstein，B.，Anal.Biochem.，132，6-13(1983))的方法分別將實施例1-1中獲得的cDNA片段FC33、FC42、FC59、GV2、H-AP8、HP71、HP115、HP3、FC48、FC82、FC86、FC35、FC38、FC122、FC126、HP79、HP85、FC102、CA161、HP29、HP95、HP96、CA324、FC101、FC22、L927、HP102、FC123以及FC47標記以獲得32P標記的探針FC33、FC42、FC59、GV2、H-AP8、HP71、HP115、HP3、FC48、FC82、FC86、FC35、FC38、FC122、FC126、HP79、HP85、FC102、CA161、HP29、HP95、HP96、CA324、FC101、FC22、L927、HP102、FC123以及FC47cDNA，根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，NewYorkCold Spring Harbor Laboratory(1989)中所述的方法將32P標記的探針與噬菌體λgt11人胚肺成纖維細胞cDNA文庫(Miki，T.等人，Gene，83，137-146(1989))進行噬菌斑雜交以獲得人抑癌基因GIG的全長cDNA克隆。
將全長cDNA克隆測序，因此GIG8的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO1一致。GIG8的DNA序列具有編碼134個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO2一致。得到的蛋白質還具有大約15kDa的分子量。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達GIG8基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖30為示出GIG8蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖30中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示GIG8基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖30中所示，表達的GIG8蛋白質具有大約15kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
GIG10的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO5一致。GIG10的DNA序列具有編碼665個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO6一致。得到的蛋白質還具有大約73kDa的分子量。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達GIG10基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖31為示出GIG10蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖31中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示GIG10基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖31中所示，表達的GIG10蛋白質具有大約73kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
GIG13的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO9一致。GIG13的DNA序列具有編碼1,201個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO10一致。得到的蛋白質還具有大約132kDa的分子量。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達GIG13基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖32為示出GIG13蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖32中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示GIG13基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖32中所示，表達的GIG13蛋白質具有大約132kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
GIG15的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO13一致。GIG15的DNA序列具有編碼106個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO14一致。得到的蛋白質還具有大約12kDa的分子量。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達GIG15基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖33為示出GIG15蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖33中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示GIG15基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖33中所示，表達的GIG15蛋白質具有大約12kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
GIG16的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO17一致。GIG16的DNA序列具有編碼351個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO18一致。得到的蛋白質還具有大約39kDa的分子量。將得到的全長GIG 16cDNA插入原核表達載體pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美國)，然后用所得的表達載體轉化大腸桿菌DH5α以獲得轉化體，其稱為大腸桿菌DH5α/GIG16/pBAD/Thio-Topo。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達GIG16基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖34為示出GIG16蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖34中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示GIG16基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖34中所示，表達的GIG16蛋白質具有大約39kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
GIG24的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO21一致。GIG24的DNA序列具有編碼423個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO22一致。得到的蛋白質還具有大約47kDa的分子量。將得到的全長GIG24cDNA插入原核表達載體pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美國)，然后用所得的表達載體轉化大腸桿菌DH5α以獲得轉化體，其稱為大腸桿菌DH5α/GIG24/pBAD/Thio-Topo。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達GIG24基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖35為示出GIG24蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖35中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示GIG24基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖35中所示，表達的GIG24蛋白質具有大約47kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
GIG26的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO25一致。GIG26的DNA序列具有編碼442個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO26一致。得到的蛋白質還具有大約50kDa的分子量。將得到的全長GIG26cDNA插入原核表達載體pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美國)，然后用所得的表達載體轉化大腸桿菌DH5α以獲得轉化體，其稱為大腸桿菌DH5α/GIG26/pBAD/Thio-Topo。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達GIG26基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖36為示出GIG24蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖36中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示GIG26基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖36中所示，表達的GIG26蛋白質具有大約50kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
GIG29的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO29一致。GIG29的DNA序列具有編碼349個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO30一致。得到的蛋白質還具有大約38kDa的分子量。將得到的全長GIG29cDNA插入原核表達載體pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美國)，然后用所得的表達載體轉化大腸桿菌DH5α以獲得轉化體，其稱為大腸桿菌DH5α/GIG29/pBAD/Thio-Topo。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達GIG29基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖37為示出GIG29蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖37中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示GIG29基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖37中所示，表達的GIG29蛋白質具有大約38kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
GIG30的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO33一致。GIG30的DNA序列具有編碼540個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO34一致。得到的蛋白質還具有大約61kDa的分子量。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達GIG30基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖38為示出GIG30蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖38中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示GIG30基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖38中所示，表達的GIG30蛋白質具有大約61kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
GIG32的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO37一致。GIG32的DNA序列具有編碼178個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO38一致。得到的蛋白質還具有大約20kDa的分子量。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達GIG32基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖39為示出GIG32蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖39中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示GIG32基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖39中所示，表達的GIG32蛋白質具有大約20kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
GIG33的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO41一致。GIG33的DNA序列具有編碼110個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO42一致。得到的蛋白質還具有大約12kDa的分子量。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達GIG34基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖40為示出GIG33蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖40中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示GIG33基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖10中所示，表達的GIG33蛋白質具有大約12kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
GIG34的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO45一致。GIG34的DNA序列具有編碼177個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO46一致。得到的蛋白質還具有大約20kDa的分子量。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達GIG34基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖41為示出GIG34蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖41中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示GIG34基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖41中所示，表達的GIG34蛋白質具有大約20kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
GIG35的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO49一致。GIG35的DNA序列具有編碼437個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO50一致。得到的蛋白質還具有大約50kDa的分子量。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達GIG35基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖42為示出GIG35蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖42中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示GIG35基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖42中所示，表達的GIG35蛋白質具有大約50kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
GIG38的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO53一致。GIG38的DNA序列具有編碼153個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO54一致。得到的蛋白質還具有大約17kDa的分子量。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達GIG38基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖43為示出GIG38蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖43中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示GIG38基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖43中所示，表達的GIG38蛋白質具有大約17kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
GIG39的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO57一致。GIG39的DNA序列具有編碼928個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO58一致。得到的蛋白質還具有大約103kDa的分子量。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達GIG39基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖44為示出GIG39蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖44中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示GIG39基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖44中所示，表達的GIG39蛋白質具有大約103kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
GIG40的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO61一致。GIG40的DNA序列具有編碼1,210個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO62一致。得到的蛋白質還具有大約134kDa的分子量。將得到的全長GIG40cDNA插入原核表達載體pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美國)，然后用所得的表達載體轉化大腸桿菌DH5α以獲得轉化體，其稱為大腸桿菌DH5α/GIG40/pBAD/Thio-Topo。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達GIG40基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖45為示出GIG40蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖45中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示GIG40基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖45中所示，表達的GIG40蛋白質具有大約134kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
GIG42的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO65一致。GIG42的DNA序列具有編碼609個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO66一致。得到的蛋白質還具有大約69kDa的分子量。將得到的全長GIG42cDNA插入原核表達載體pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美國)，然后用所得的表達載體轉化大腸桿菌DH5α以獲得轉化體，其稱為大腸桿菌DH5α/GIG42/pBAD/Thio-Topo。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達GIG42基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖46為示出GIG42蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖46中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示GIG42基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖46中所示，表達的GIG42蛋白質具有大約69kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
GIG43的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO69一致。GIG43的DNA序列具有編碼329個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO70一致。得到的蛋白質還具有大約37kDa的分子量。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達GIG43基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖47為示出GIG43蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖47中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示GIG43基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖47中所示，表達的GIG43蛋白質具有大約37kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
GIG46的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO73一致。GIG46的DNA序列具有編碼377個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO74一致。得到的蛋白質還具有大約42kDa的分子量。
將得到的全長GIG46cDNA克隆插入原核表達載體pBAD/thio-Topo(Invitrogen，美國)的多克隆位點，以獲得載體pBAD/Thio-Topo/GIG46，然后用所得的pBAD/thio-Topo/GIG46轉化大腸桿菌Top10(Invitrogen，美國)。表達蛋白HT-硫氧還蛋白插入載體pBAD/thio-Topo多克隆位點的上游。轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中振蕩培養，將所得的培養基稀釋1/100，然后再培養3小時。向培養的培養基中加入0.5mM L-阿拉伯糖(Sigma，美國)以誘導蛋白質的產生。將培養基中的大腸桿菌細胞在L-阿拉伯糖誘導之前和之后超聲破碎，然后用超聲破碎的勻漿進行12％十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)。圖48為示出使用SDS-PAGE的用載體pBAD/thio-Topo/GIG46轉化的大腸桿菌Top10株的蛋白質表達的圖，其中在L-阿拉伯糖誘導后明顯觀察到一條具有約57kDa的分子量的融合蛋白條帶。57kDa的融合蛋白包含插入載體pBAD/thio-Topo/GIG46的約15kDa的HT-硫氧還蛋白蛋白和約42kDa的GIG 46蛋白。
圖48為示出GIG46蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖48中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示GIG46基因通過L-阿拉伯糖誘導表達后的蛋白質樣品。
PIG33的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO77一致。PIG33的DNA序列具有編碼664個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO78一致。得到的蛋白質還具有大約75kDa的分子量。將得到的全長PIG33cDNA插入原核表達載體pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美國)，然后用所得的表達載體轉化大腸桿菌DH5α以獲得轉化體，其稱為大腸桿菌DH5α/PIG33/pBAD/Thio-Topo。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達PIG33基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖49為示出PIG33蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖49中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示PIG33基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖49中所示，表達的PIG33蛋白質具有大約75kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
PIG35的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO81一致。PIG35的DNA序列具有編碼418個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO82一致。得到的蛋白質還具有大約46kDa的分子量。將得到的全長PIG35cDNA插入原核表達載體pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美國)，然后用所得的表達載體轉化大腸桿菌DH5α以獲得轉化體，其稱為大腸桿菌DH5α/PIG35/pBAD/Thio-Topo。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達PIG35基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖50為示出PIG35蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖50中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示PIG35基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖50中所示，表達的PIG35蛋白質具有大約46kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
PIG36的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO85一致。PIG36的DNA序列具有編碼108個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO86一致。得到的蛋白質還具有大約13kDa的分子量。將得到的全長PIG36cDNA插入原核表達載體pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美國)，然后用所得的表達載體轉化大腸桿菌DH5α以獲得轉化體，其稱為大腸桿菌DH5α/PIG36/pBAD/Thio-Topo。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達PIG36基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖51為示出PIG36蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖51中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示PIG36基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖51中所示，表達的PIG36蛋白質具有大約13kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
MIG20的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO89一致。MIG20的DNA序列具有編碼64個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO90一致。得到的蛋白質還具有大約7kDa的分子量。
將得到的全長MIG20cDNA克隆插入原核表達載體pBAD/thio-Topo(Invitrogen，美國)的多克隆位點，以獲得載體pBAD/thio-Topo/MIG20，然后用所得的pBAD/thio-Topo/MIG20轉化大腸桿菌Top10(Invitrogen，美國)。表達蛋白HT-硫氧還蛋白插入載體pBAD/thio-Topo多克隆位點的上游。轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中振蕩培養，將所得的培養基稀釋1/100，然后再培養3小時。向培養的培養基中加入0.5mM L-阿拉伯糖(Sigma，美國)以誘導蛋白質的產生。將培養基中的大腸桿菌細胞在L-阿拉伯糖誘導之前和之后超聲破碎，然后用超聲破碎的勻漿進行12％十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)。圖52為示出使用SDS-PAGE的用載體pBAD/thio-Topo/MIG20轉化的大腸桿菌Top10株的蛋白質表達的圖，其中在L-阿拉伯糖誘導后明顯觀察到一條具有約22kDa的分子量的融合蛋白條帶。22kDa的融合蛋白包含插入載體pBAD/thio-Topo/MIG20的約15kDa的HT-硫氧還蛋白蛋白和約7kDa的MIG20蛋白。
圖52為示出MIG20蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖52中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示MIG20基因通過L-阿拉伯糖誘導表達后的蛋白質樣品。
PIG49的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO93一致。PIG49的DNA序列具有編碼345個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO94一致。得到的蛋白質還具有大約38kDa的分子量。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達PIG49基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖53為示出PIG49蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖53中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示PIG49基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖53中所示，表達的PIG49蛋白質具有大約38kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
PIG51的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO97一致。PIG51的DNA序列具有編碼247個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO98一致。得到的蛋白質還具有大約28kDa的分子量。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達PIG51基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖54為示出PIG51蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖54中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示PIG51基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖54中所示，表達的PIG51蛋白質具有大約28kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
MIG12的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO101一致。MIG12的DNA序列具有編碼44個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO102一致。得到的蛋白質還具有大約5kDa的分子量。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達MIG12基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖55為示出MIG12蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖55中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示MIG12基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖55中所示，表達的MIG12蛋白質具有大約5kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
PIG37的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO105一致。PIG37的DNA序列具有編碼472個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO106一致。得到的蛋白質還具有大約53kDa的分子量。將得到的全長PIG37cDNA插入原核表達載體pBAD/Thio-Topo(Invitrogen，美國)，然后用所得的表達載體轉化大腸桿菌DH5α以獲得轉化體，其稱為大腸桿菌DH5α/PIG37/pBAD/Thio-Topo。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達PIG37基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖56為示出PIG37蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖56中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示PIG37基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖56中所示，表達的PIG37白質具有大約53kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
GIG44的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO109一致。GIG44的DNA序列具有編碼113個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO110一致。得到的蛋白質還具有大約12kDa的分子量。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達GIG44基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖57為示出GIG44蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖57中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示GIG44基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖57中所示，表達的GIG44蛋白質具有大約12kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
GIG31的DNA堿基測序結果與SEQ ID NO113一致。GIG31的DNA序列具有編碼211個氨基酸殘基的開放閱讀框，來自該開放閱讀框的氨基酸序列與SEQ ID NO114一致。得到的蛋白質還具有大約24kDa的分子量。
轉化的大腸桿菌菌株在LB液體培養基中培養，然后將1mM異丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)加入培養基中，并在37℃反應3小時以表達GIG31基因。從培養基獲得蛋白質樣品，然后根據公開文本(Sambrook，J.等人，Molecular CloningA Laboratory manual，New YorkCold Spring HarborLaboratory(1989))中所述的方法用該蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳。
圖58為示出GIG31蛋白的SDS-PAGE分析的圖。在圖58中，泳道1表示IPTG誘導前的蛋白質樣品，泳道2表示GIG31基因通過IPTG誘導表達后的蛋白質樣品。如圖58中所示，表達的GIG31蛋白質具有大約24kDa的分子量，其對應于來自其DNA序列的蛋白質的分子量。
實施例3GIG基因的RNA印跡 3-1.GIG8、GIG10、GIG13、GIG30、GIG32、GIG33、GIG34、GIG35、GIG38、GIG39、GIG43、PIG49、PIG51、GIG44以及GIG31 為評價GIG和PIG基因的表達水平，進行RNA印跡，如下。
分別將20μg在實施例1中從三個正常乳腺組織、三個原發性乳腺癌組織和乳腺癌細胞系MCF-7獲得的各總RNA樣品變性并在1％甲醛瓊脂糖凝膠中電泳，然后將得到的瓊脂糖凝膠轉移到尼龍膜(Boehringer-Mannheim，德國)上。然后將尼龍膜與由全長GIG cDNA的部分序列FC33、FC42、FC59、FC48、FC82、FC86、FC35、FC38、FC122、FC126、FC102、FC101、FC22、FC123以及FC47使用Rediprime II隨機引物標記系統(Amersham，英國)而制備的32P標記的隨機引物探針在42℃下雜交過夜。RNA印跡步驟重復兩次，其中之一是使用光密度計將印跡定量，而另一個是使印跡與β-肌動蛋白探針雜交以確定mRNA的總量。
圖59示出了GIG8基因在正常乳腺組織、原發性乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖59的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖59和圖59的底部所示，證實GIG8基因的表達水平在全部三個正常乳腺組織樣品中較高地檢測到，而在三個乳腺癌組織樣品中其表達明顯比正常組織低或檢測不到，且或許在一個乳腺癌細胞系樣品中稍微檢測到。
在正常人多個組織(Clontech)和人癌細胞系(Clontech)進行RNA印跡。換句話說，通過與如上所述相同的方法，使從正常組織和癌細胞系提取的各總RNA樣品轉移到其上面的印跡進行雜交來進行RNA印跡，其中所述印跡可商業購自Clontech公司(美國)，正常組織例如選自由腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞組成的組，而癌細胞系例如選自由早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4(lymphoblastoidleukemia MOLT-4)、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞組成的組。
圖88示出了GIG8基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖88的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖88中所示，具有大約1.3kb大小的主要的GIG8mRNA轉錄物在如腦、心臟、肌肉、大腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血的正常組織中過量表達。同時，具有大約2.5kb大小的GIG8mRNA轉錄物也在如肝和外周血的正常組織中表達。圖117示出了GIG8基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖117的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖117中所示，GIG8基因在如早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中不表達。從這些結果可以看出，本發明的GIG8基因在如乳腺、腦、心臟、肌肉、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺、大腸和外周血的正常組織中具有抑癌功能。
圖60示出了GIG10基因在正常乳腺組織、原發性乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖60的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖60所示，證實GIG10基因的表達水平在全部三個正常乳腺組織樣品中較高地檢測到，而在三個乳腺癌組織樣品中其表達明顯比正常組織低或檢測不到，且或許在一個乳腺癌細胞系樣品中稍微檢測到。
在正常人多個組織(Clontech)和人癌細胞系(Clontech)進行RNA印跡。換句話說，通過與如上所述相同的方法，使從正常組織和癌細胞系提取的各總RNA樣品轉移到其上面的印跡進行雜交來進行RNA印跡，其中所述印跡可商業購自Clontech公司(美國)，正常組織例如選自由腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞組成的組，而癌細胞系例如選自由早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞組成的組。
圖89示出了GIG10基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖89的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖89中所示，具有大約3.5kb大小的主要的GIG10mRNA轉錄物在如腦、心臟、肌肉、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血的正常組織中過量表達，而在大腸組織中不表達。同時，具有大約2.2kb大小的GIG10mRNA轉錄物也在如心臟和胎盤的正常組織中表達。圖118示出了GIG10基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖118的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖118中所示，GIG8基因在如HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中不表達，而在早幼粒白血病細胞HL-60、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞和SW480結腸癌細胞中檢測到其表達。
從這些結果可以看出，本發明的GIG10基因在如乳腺、腦、心臟、肌肉、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血的正常組織中具有抑癌功能。
圖61示出了GIG13基因在正常乳腺組織、原發性乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖61的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖61所示，證實GIG13基因的表達水平在全部三個正常乳腺組織樣品中較高地檢測到，而在三個乳腺癌組織樣品中其表達明顯比正常組織低或檢測不到，且或許在一個乳腺癌細胞系樣品中稍微檢測到。
在正常人多個組織(Clontech)和人癌細胞系(Clontech)進行RNA印跡。換句話說，通過與如上所述相同的方法，使從正常組織和癌細胞系提取的各總RNA樣品轉移到其上面的印跡進行雜交來進行RNA印跡，其中所述印跡可商業購自Clontech公司(美國)，正常組織例如選自由腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞組成的組，而癌細胞系例如選自由早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞組成的組。
圖90示出了GIG13基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖90的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖90中所示，具有大約1.3kb大小的主要的GIG13mRNA轉錄物只在正常肝組織中過量表達。圖119示出了GIG13基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖119的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖119中所示，GIG13基因在如早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中不表達。從這些結果可以看出，本發明的GIG13基因在如乳腺和肝的正常組織中具有抑癌功能。
圖67示出了GIG30基因在正常乳腺組織、原發性乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖67的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖67所示，證實GIG30基因的表達水平在全部三個正常乳腺組織樣品中較高地檢測到，而在三個乳腺癌組織樣品中其表達明顯比正常組織低或檢測不到，且或許在一個乳腺癌細胞系樣品中稍微檢測到。
在正常人多個組織(Clontech)和人癌細胞系(Clontech)進行RNA印跡。換句話說，通過與如上所述相同的方法，使從正常組織和癌細胞系提取的各總RNA樣品轉移到其上面的印跡進行雜交來進行RNA印跡，其中所述印跡可商業購自Clontech公司(美國)，正常組織例如選自由腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞組成的組，而癌細胞系例如選自由早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞組成的組。
圖96示出了GIG30基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖96的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖96中所示，具有大約1.9kb大小的主要的GIG30mRNA轉錄物在如心臟、肌肉和肝的正常組織中過量表達。同時，具有大約1.0kb大小的GIG30mRNA轉錄物也在如肝和外周血的正常組織中表達。圖125示出了GIG30基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖125的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖125中所示，GIG30基因在如早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中不表達。從這些結果可以看出，本發明的GIG30基因在如乳腺、心臟、肌肉和肝的正常組織中具有抑癌功能。
圖68示出了GIG32基因在正常乳腺組織、原發性乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖68的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖68所示，證實GIG32基因的表達水平在全部三個正常乳腺組織樣品中較高地檢測到，而在三個乳腺癌組織樣品中其表達明顯比正常組織低或檢測不到，且或許在一個乳腺癌細胞系樣品中稍微檢測到。
在正常人多個組織(Clontech)和人癌細胞系(Clontech)進行RNA印跡。換句話說，通過與如上所述相同的方法，使從正常組織和癌細胞系提取的各總RNA樣品轉移到其上面的印跡進行雜交來進行RNA印跡，其中所述印跡可商業購自Clontech公司(美國)，正常組織例如選自由腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞組成的組，而癌細胞系例如選自由早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞組成的組。
圖97示出了GIG32基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖97的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖97中所示，具有大約4.0kb大小的主要的GIG32mRNA轉錄物在如肌肉、大腸、胸腺、脾、腎、胎盤、肺和外周血的正常組織中過量表達。同時，具有大約1.0kb大小的GIG32mRNA轉錄物也在如肌肉和大腸的正常組織中表達。圖126示出了GIG32基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖126的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖126中所示，GIG32基因在如HeLa子宮頸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中表達，而在早幼粒白血病細胞HL-60、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞和SW480結腸癌細胞中不表達。
從這些結果可以看出，本發明的GIG32基因在如乳腺、肌肉、大腸、胸腺、脾、腎、胎盤和外周血的正常組織中具有抑癌功能。
圖70示出了GIG34基因在正常乳腺組織、原發性乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖70的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖70所示，證實GIG34基因的表達水平在全部三個正常乳腺組織樣品中較高地檢測到，而在三個乳腺癌組織樣品中其表達明顯比正常組織低或檢測不到，且或許在一個乳腺癌細胞系樣品中稍微檢測到。
在正常人多個組織(Clontech)和人癌細胞系(Clontech)進行RNA印跡。換句話說，通過與如上所述相同的方法，使從正常組織和癌細胞系提取的各總RNA樣品轉移到其上面的印跡進行雜交來進行RNA印跡，其中所述印跡可商業購自Clontech公司(美國)，正常組織例如選自由腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞組成的組，而癌細胞系例如選自由早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞組成的組。
圖99示出了GIG34基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖99的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖99中所示，具有大約0.6kb大小的主要的GIG34mRNA轉錄物在如腦、心臟、肌肉、大腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血的正常組織中過量表達。圖128示出了GIG34基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖128的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖128中所示，GIG34基因在如早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中很少表達。
從這些結果可以看出，本發明的GIG34基因在如乳腺、腦、心臟、肌肉、大腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血的正常組織中具有抑癌功能。
圖71示出了GIG35基因在正常乳腺組織、原發性乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖71的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖71所示，證實GIG35基因的表達水平在全部三個正常乳腺組織樣品中較高地檢測到，而在三個乳腺癌組織樣品中其表達明顯比正常組織低或檢測不到，且或許在一個乳腺癌細胞系樣品中稍微檢測到。
在正常人多個組織(Clontech)和人癌細胞系(Clontech)進行RNA印跡。換句話說，通過與如上所述相同的方法，使從正常組織和癌細胞系提取的各總RNA樣品轉移到其上面的印跡進行雜交來進行RNA印跡，其中所述印跡可商業購自Clontech公司(美國)，正常組織例如選自由腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞組成的組，而癌細胞系例如選自由早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞組成的組。
圖100示出了GIG35基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖100的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖100中所示，具有大約1.3kb大小的GIG35mRNA轉錄物同樣在如腦、心臟、肌肉、大腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血的正常組織中過量表達。圖129示出了GIG35基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖129的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖129中所示，GIG35基因在如早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中很少表達。從這些結果可以看出，本發明的GIG35基因在如乳腺、腦、心臟、肌肉、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺、大腸和外周血的正常組織中具有抑癌功能。
圖72示出了GIG38基因在正常乳腺組織、原發性乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖72的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖72所示，證實GIG38基因的表達水平在全部三個正常乳腺組織樣品中較高地檢測到，而在三個乳腺癌組織樣品中其表達明顯比正常組織低或檢測不到，且或許在一個乳腺癌細胞系樣品中稍微檢測到。
在正常人多個組織(Clontech)和人癌細胞系(Clontech)進行RNA印跡。換句話說，通過與如上所述相同的方法，使從正常組織和癌細胞系提取的各總RNA樣品轉移到其上面的印跡進行雜交來進行RNA印跡，其中所述印跡可商業購自Clontech公司(美國)，正常組織例如選自由腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞組成的組，而癌細胞系例如選自由早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞組成的組。
圖101示出了GIG38基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖101的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖101中所示，具有大約0.7kb大小的主要的GIG38mRNA轉錄物在如心臟、肌肉、腎、肝和胎盤的正常組織中過量表達。同時，具有大約1.5kb和2.0kb大小的GIG38mRNA轉錄物也在如心臟和肌肉的正常組織中表達。圖130示出了GIG38基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖130的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖130中所示，GIG38基因在如早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中很少表達或幾乎不表達。證明具有大約1.5kb和2.0kb大小的GIG38mRNA轉錄物在正常組織中表達，而在癌細胞系中全部不表達。從這些結果可以看出，本發明的GIG38基因在如乳腺、心臟、肌肉、腎、肝和胎盤的正常組織中具有抑癌功能。
圖73示出了GIG39基因在正常乳腺組織、原發性乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖73的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖73所示，證實GIG39基因的表達水平在全部三個正常乳腺組織樣品中較高地檢測到，而在三個乳腺癌組織樣品中其表達明顯比正常組織低或檢測不到，且或許在一個乳腺癌細胞系樣品中稍微檢測到。
在正常人多個組織(Clontech)和人癌細胞系(Clontech)進行RNA印跡。換句話說，通過與如上所述相同的方法，使從正常組織和癌細胞系提取的各總RNA樣品轉移到其上面的印跡進行雜交來進行RNA印跡，其中所述印跡可商業購自Clontech公司(美國)，正常組織例如選自由腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞組成的組，而癌細胞系例如選自由早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞組成的組。
圖102示出了GIG39基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖102的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖102中所示，具有大約2.4kb大小的主要的GIG39mRNA轉錄物只在正常肝組織中過量表達。圖131示出了GIG39基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖131的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖131中所示，GIG39基因在如早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中不表達。從這些結果可以看出，本發明的GIG39基因在如乳腺和肝的正常組織中具有抑癌功能。
圖76示出了GIG43基因在正常乳腺組織、原發性乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖76的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖76所示，證實GIG43基因的表達水平在全部三個正常乳腺組織樣品中較高地檢測到，而在三個乳腺癌組織樣品中其表達明顯比正常組織低或檢測不到，且或許在一個乳腺癌細胞系樣品中稍微檢測到。
在正常人多個組織(Clontech)和人癌細胞系(Clontech)進行RNA印跡。換句話說，通過與如上所述相同的方法，使從正常組織和癌細胞系提取的各總RNA樣品轉移到其上面的印跡進行雜交來進行RNA印跡，其中所述印跡可商業購自Clontech公司(美國)，正常組織例如選自由腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞組成的組，而癌細胞系例如選自由早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞組成的組。
圖105示出了GIG43基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖105的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖105中所示，具有大約3.5kb大小的主要的GIG43mRNA轉錄物在如心臟、腎、肝、胎盤和肺的正常組織中過量表達。圖134示出了GIG43基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖134的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖134中所示，GIG8基因在如早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中不表達。從這些結果可以看出，本發明的GIG8基因在如乳腺、心臟、腎、肝、胎盤和肺的正常組織中具有抑癌功能。
圖82示出了PIG49基因在正常乳腺組織、原發性乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖82的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖82所示，證實PIG49基因的表達水平在全部三個正常乳腺組織樣品中較高地檢測到，而在三個乳腺癌組織樣品中其表達明顯比正常組織低或檢測不到，且或許在一個乳腺癌細胞系樣品中稍微檢測到。
在正常人多個組織(Clontech)和人癌細胞系(Clontech)進行RNA印跡。換句話說，通過與如上所述相同的方法，使從正常組織和癌細胞系提取的各總RNA樣品轉移到其上面的印跡進行雜交來進行RNA印跡，其中所述印跡可商業購自Clontech公司(美國)，正常組織例如選自由腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞組成的組，而癌細胞系例如選自由早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞組成的組。
圖111示出了PIG49基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖111的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖111中所示，具有大約2.4kb大小的主要的PIG49mRNA轉錄物在如心臟、肌肉、腎、肝和胎盤的正常組織中過量表達。同時，具有大約1.5kb大小的PIG49mRNA轉錄物也在正常肌肉組織中表達。圖140示出了PIG49基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖140的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖140中所示，PIG49基因在如早幼粒白血病細胞HL-60、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中不表達或者很少表達。
從這些結果可以看出，本發明的PIG49基因在如乳腺、心臟、肌肉、腎、肝和胎盤的正常組織中具有抑癌功能。
圖83示出了PIG51基因在正常乳腺組織、原發性乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖83的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖83所示，證實PIG51基因的表達水平在全部三個正常乳腺組織樣品中較高地檢測到，而在三個乳腺癌組織樣品中其表達明顯比正常組織低或檢測不到，且或許在一個乳腺癌細胞系樣品中稍微檢測到。
在正常人多個組織(Clontech)和人癌細胞系(Clontech)進行RNA印跡。換句話說，通過與如上所述相同的方法，使從正常組織和癌細胞系提取的各總RNA樣品轉移到其上面的印跡進行雜交來進行RNA印跡，其中所述印跡可商業購自Clontech公司(美國)，正常組織例如選自由腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞組成的組，而癌細胞系例如選自由早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞組成的組。
圖112示出了PIG51基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖112的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖112中所示，具有大約1.0kb大小的主要的PIG51mRNA轉錄物在如心臟、肌肉、胸腺、脾、腎、肝、胎盤和外周血的正常組織中過量表達。圖141示出了PIG51基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖141的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖141中所示，PIG51基因在如早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中不表達。從這些結果可以看出，本發明的PIG51基因在如乳腺、心臟、肌肉、胸腺、脾、腎、肝、胎盤和外周血的正常組織中具有抑癌功能。
圖86示出了GIG44基因在正常乳腺組織、原發性乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖86的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖86所示，證實GIG44基因的表達水平在全部三個正常乳腺組織樣品中較高地檢測到，而在三個乳腺癌組織樣品中其表達明顯比正常組織低或檢測不到，且或許在一個乳腺癌細胞系樣品中稍微檢測到。
在正常人多個組織(Clontech)和人癌細胞系(Clontech)進行RNA印跡。換句話說，通過與如上所述相同的方法，使從正常組織和癌細胞系提取的各總RNA樣品轉移到其上面的印跡進行雜交來進行RNA印跡，其中所述印跡可商業購自Clontech公司(美國)，正常組織例如選自由腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞組成的組，而癌細胞系例如選自由早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞組成的組。
圖115示出了GIG44基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖115的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖115中所示，具有大約1.0kb大小的主要的GIG44mRNA轉錄物同樣在如腦、心臟、肌肉、大腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和白細胞的正常組織中過量表達。同時，具有大約0.5kb大小的GIG44mRNA轉錄物也在正常組織中表達。
圖144示出了GIG44基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖144的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖144中所示，GIG44基因在如早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中很少表達。從這些結果可以看出，本發明的GIG44基因在如腦、心臟、肌肉、大腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和白細胞的正常組織中具有抑癌功能。
圖87示出了GIG31基因在正常乳腺組織、原發性乳腺癌組織和乳腺癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖87的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖87所示，證實GIG31基因的表達水平在全部三個正常乳腺組織樣品中較高地檢測到，而在三個乳腺癌組織樣品中其表達明顯比正常組織低或檢測不到，且或許在一個乳腺癌細胞系樣品中稍微檢測到。
在正常人多個組織(Clontech)和人癌細胞系(Clontech)進行RNA印跡。換句話說，通過與如上所述相同的方法，使從正常組織和癌細胞系提取的各總RNA樣品轉移到其上面的印跡進行雜交來進行RNA印跡，其中所述印跡可商業購自Clontech公司(美國)，正常組織例如選自由腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞組成的組，而癌細胞系例如選自由早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞組成的組。
圖116示出了GIG31基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖116的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖116中所示，具有大約1.4kb大小的主要的GIG31mRNA轉錄物在如乳腺、心臟、大腸、脾、小腸、胎盤、肺和白細胞的正常組織中過量表達。圖145示出了GIG31基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖145的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖145中所示，GIG31基因在如早幼粒白血病細胞HL-60、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中不表達，而在HeLa子宮頸癌細胞和A549肺癌細胞中很少表達。從這些結果可以看出，本發明的GIG31基因在如乳腺、心臟、大腸、脾、小腸、胎盤、肺和白細胞的正常組織中具有抑癌功能。
3-5.GIG15 為評價GIG15基因的表達水平，進行RNA印跡，如下。如實施例1中所述，從正常骨髓組織、白血病骨髓組織和K-562細胞中提取總RNA樣品。分別將20μg各總RNA樣品變性并在1％甲醛瓊脂糖凝膠中電泳，然后將得到的瓊脂糖凝膠轉移到尼龍膜(Boehringer-Mannheim，德國)上。然后將尼龍膜與由全長GIG15cDNA的部分序列GV2使用Rediprime II隨機引物標記系統(Amersham，英國)而制備的32P標記的隨機引物探針在42℃下雜交過夜。RNA印跡步驟重復兩次，其中之一是使用光密度計將印跡定量，而另一個是使印跡與β-肌動蛋白探針雜交以確定mRNA的總量。
圖62示出了GIG15基因在正常骨髓組織、白血病骨髓組織和K-562細胞中差異性表達的RNA印跡結果，且圖62的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖62所示，證實GIG15基因的表達水平在全部正常骨髓組織樣品中較高地檢測到，而在白血病骨髓組織樣品中其表達明顯比正常組織低，且或許在一個白血病細胞系樣品中稍微檢測到。
在正常人多個組織(Clontech)和人癌細胞系(Clontech)進行RNA印跡。換句話說，通過與如上所述相同的方法，使從正常組織和癌細胞系提取的各總RNA樣品轉移到其上面的印跡進行雜交來進行RNA印跡，其中所述印跡可商業購自Clontech公司(美國)，正常組織例如選自由腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞組成的組，而癌細胞系例如選自由早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞組成的組。
圖91示出了GIG15基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖91的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖91中所示，具有大約0.5kb大小的主要的GIG15mRNA轉錄物在如腦、心臟、肌肉、大腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血的正常組織中過量表達。同時，具有大約1.0kb大小的GIG15mRNA轉錄物也在如肝和腎的正常組織中表達。圖120示出了GIG15基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖120的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖120中所示，GIG15基因在如早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中很少表達。從這些結果可以看出，本發明的GIG15基因在如骨髓、腦、心臟、肌肉、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺、大腸和外周血的正常組織中具有抑癌功能。
3-3.GIG16，GIG24，GIG26，GIG29，GIG40，GIG42，PIG33，PIG35，PIG36，PIG37 為評價GIG和PIG基因的表達水平，進行RNA印跡，如下。
分別將20μg在實施例1中從三個正常肝組織、三個原發性肝癌組織和肝癌細胞系HepG2獲得的各總RNA樣品變性并在1％甲醛瓊脂糖凝膠中電泳，然后將得到的瓊脂糖凝膠轉移到尼龍膜(Boehringer-Mannheim，德國)上。然后將尼龍膜與由全長GIG和PIG cDNA使用Rediprime II隨機引物標記系統(Amersham，英國)而制備的32P標記的隨機引物探針在42℃下雜交過夜。RNA印跡步驟重復兩次，其中之一是使用光密度計將印跡定量，而另一個是使印跡與β-肌動蛋白探針雜交以確定mRNA的總量。
圖63示出了GIG16基因在正常肝組織、原發性肝癌組織和肝癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖63的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖63所示，證實GIG16基因的表達水平在全部三個正常肝組織樣品中較高地檢測到，而在三個肝癌組織樣品中其表達明顯比正常組織低，且在一個肝癌細胞系樣品中檢測不到。
在正常人多個組織(Clontech)和人癌細胞系(Clontech)進行RNA印跡。換句話說，通過與如上所述相同的方法，使從正常組織和癌細胞系提取的各總RNA樣品轉移到其上面的印跡進行雜交來進行RNA印跡，其中所述印跡可商業購自Clontech公司(美國)，正常組織例如選自由腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞組成的組，而癌細胞系例如選自由早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞組成的組。
圖92示出了GIG16基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖92的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖92中所示，具有大約2.0kb大小的主要的GIG16mRNA轉錄物在如肝和腎的正常組織中過量表達。
圖121示出了GIG16基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖121的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖121中所示，GIG16基因在如早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中根本不表達。從這些結果可以看出，本發明的GIG16基因在如肝和腎的正常組織中具有抑癌功能。而且，通過如下事實甚至其表達在白血病、子宮癌、惡性淋巴瘤、結腸癌、肺癌和皮膚癌中被抑制而引起致癌作用，可以看出本發明的GIG16基因具有抑癌功能。
圖64示出了GIG24基因在正常肝組織、原發性肝癌組織和肝癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖64的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖64所示，證實GIG24基因的表達水平在全部三個正常肝組織樣品中較高地檢測到，而在三個肝癌組織樣品中其表達明顯比正常組織低，且甚至在一個肝癌細胞系樣品中檢測不到。
在正常人多個組織(Clontech)和人癌細胞系(Clontech)進行RNA印跡。換句話說，通過與如上所述相同的方法，使從正常組織和癌細胞系提取的各總RNA樣品轉移到其上面的印跡進行雜交來進行RNA印跡，其中所述印跡可商業購自Clontech公司(美國)，正常組織例如選自由腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞組成的組，而癌細胞系例如選自由早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞組成的組。
圖93示出了GIG24基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖93的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖93中所示，具有大約2.4kb大小的主要的GIG24mRNA轉錄物在如肝、心臟和肌肉的正常組織中過量表達。
圖122示出了GIG24基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖122的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖122中所示，GIG24基因在如早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中根本不表達。從這些結果可以看出，本發明的GIG24基因在如肝、心臟和肌肉的正常組織中具有抑癌功能。而且，通過如下事實甚至其表達在白血病、子宮癌、惡性淋巴瘤、結腸癌、肺癌和皮膚癌中被抑制而引起致癌作用，可以看出本發明的GIG24基因具有抑癌功能。
圖65示出了GIG26基因在正常肝組織、原發性肝癌組織和肝癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖65的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖65所示，證實GIG26基因的表達水平在全部三個正常肝組織樣品中較高地檢測到，而在三個肝癌組織樣品中其表達明顯比正常組織低，且在一個肝癌細胞系樣品中檢測不到。
在正常人多個組織(Clontech)和人癌細胞系(Clontech)進行RNA印跡。換句話說，通過與如上所述相同的方法，使從正常組織和癌細胞系提取的各總RNA樣品轉移到其上面的印跡進行雜交來進行RNA印跡，其中所述印跡可商業購自Clontech公司(美國)，正常組織例如選自由腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞組成的組，而癌細胞系例如選自由早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞組成的組。
圖94示出了GIG26基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖94的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖94中所示，具有大約2.0kb大小的主要的GIG26mRNA轉錄物在正常肝組織中過量表達，且同時，具有大約2.5kb和1.5kb大小的GIG26mRNA轉錄物也在腎、腦和心臟中表達。圖123示出了GIG26基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖123的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖123中所示，GIG26基因在如早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中根本不表達。從這些結果可以看出，本發明的GIG26基因在如肝、腎、腦和心臟的正常組織中具有抑癌功能。而且，通過如下事實甚至其表達在白血病、子宮癌、惡性淋巴瘤、結腸癌、肺癌和皮膚癌中被抑制而引起致癌作用，可以看出本發明的GIG16基因具有抑癌功能。
圖66示出了GIG29基因在正常肝組織、原發性肝癌組織和肝癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖66的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖66所示，證實GIG29基因的表達水平在全部三個正常肝組織樣品中較高地檢測到，而在三個肝癌組織樣品中其表達明顯比正常組織低，且在一個肝癌細胞系樣品中檢測不到。
在正常人多個組織(Clontech)和人癌細胞系(Clontech)進行RNA印跡。換句話說，通過與如上所述相同的方法，使從正常組織和癌細胞系提取的各總RNA樣品轉移到其上面的印跡進行雜交來進行RNA印跡，其中所述印跡可商業購自Clontech公司(美國)，正常組織例如選自由腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞組成的組，而癌細胞系例如選自由早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞組成的組。
圖95示出了GIG29基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖95的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖92中所示，具有大約1.4kb大小的主要的GIG29mRNA轉錄物在正常肝組織中過量表達。
圖124示出了GIG29基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖124的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖124中所示，GIG29基因在如早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中根本不表達。從這些結果可以看出，本發明的GIG29基因在正常肝組織中具有抑癌功能。而且，通過如下事實甚至其表達在白血病、子宮癌、惡性淋巴瘤、結腸癌、肺癌和皮膚癌中被抑制而引起致癌作用，可以看出本發明的GIG29基因具有抑癌功能。
圖74示出了GIG40基因在正常肝組織、原發性肝癌組織和肝癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖74的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖74所示，證實GIG40基因的表達水平在全部三個正常肝組織樣品中較高地檢測到，而在三個肝癌組織樣品中其表達明顯比正常組織低，且甚至在一個肝癌細胞系樣品中檢測不到。
在正常人多個組織(Clontech)和人癌細胞系(Clontech)進行RNA印跡。換句話說，通過與如上所述相同的方法，使從正常組織和癌細胞系提取的各總RNA樣品轉移到其上面的印跡進行雜交來進行RNA印跡，其中所述印跡可商業購自Clontech公司(美國)，正常組織例如選自由腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞組成的組，而癌細胞系例如選自由早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞組成的組。
圖103示出了GIG40基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖103的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖103中所示，具有大約1.5kb大小的主要的GIG40mRNA轉錄物在如肝、心臟和肌肉的正常組織中過量表達。且同時，具有大約5.0kb大小的GIG40mRNA轉錄物表達。
圖132示出了GIG40基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖132的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖132中所示，GIG40基因在如早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中很少表達。從這些結果可以看出，本發明的GIG40基因在如肝、心臟和肌肉的正常組織中具有抑癌功能。而且，通過如下事實甚至其表達在白血病、子宮癌、惡性淋巴瘤、結腸癌、肺癌和皮膚癌中被抑制而引起致癌作用，可以看出本發明的GIG40基因具有抑癌功能。
圖75示出了GIG42基因在正常肝組織、原發性肝癌組織和肝癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖75的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖75所示，證實GIG42基因的表達水平在全部三個正常肝組織樣品中較高地檢測到，而在三個肝癌組織樣品中其表達明顯比正常組織低，且在一個肝癌細胞系樣品中檢測不到。
在正常人多個組織(Clontech)和人癌細胞系(Clontech)進行RNA印跡。換句話說，通過與如上所述相同的方法，使從正常組織和癌細胞系提取的各總RNA樣品轉移到其上面的印跡進行雜交來進行RNA印跡，其中所述印跡可商業購自Clontech公司(美國)，正常組織例如選自由腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞組成的組，而癌細胞系例如選自由早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞組成的組。
圖104示出了GIG42基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖104的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖104中所示，具有大約2.5kb大小的主要的GIG42mRNA轉錄物在正常肝組織中過量表達。
圖133示出了GIG42基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖133的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖133中所示，GIG42基因在如早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中根本不表達。從這些結果可以看出，本發明的GIG42基因在正常肝組織中具有抑癌功能。而且，通過如下事實甚至其表達在白血病、子宮癌、惡性淋巴瘤、結腸癌、肺癌和皮膚癌中被抑制而引起致癌作用，可以看出本發明的GIG42基因具有抑癌功能。
圖78示出了PIG33基因在正常肝組織、原發性肝癌組織和肝癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖78的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖78所示，證實PIG33基因的表達水平在全部三個正常肝組織樣品中較高地檢測到，而在三個肝癌組織樣品中其表達明顯比正常組織低，且在一個肝癌細胞系樣品中檢測不到。
在正常人多個組織(Clontech)和人癌細胞系(Clontech)進行RNA印跡。換句話說，通過與如上所述相同的方法，使從正常組織和癌細胞系提取的各總RNA樣品轉移到其上面的印跡進行雜交來進行RNA印跡，其中所述印跡可商業購自Clontech公司(美國)，正常組織例如選自由腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞組成的組，而癌細胞系例如選自由早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞組成的組。
圖107示出了PIG33基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖107的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖107中所示，具有大約3.0kb大小的主要的PIG33mRNA轉錄物在如腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤和肺的正常組織中過量表達。
圖136示出了PIG33基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖136的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖136中所示，PIG33基因在如HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中根本不表達，而在早幼粒白血病細胞HL-60和伯基特淋巴瘤Raji細胞中很少表達。從這些結果可以看出，本發明的PIG33基因在如腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤和肺的正常組織中具有抑癌功能。而且，通過如下事實甚至其表達在白血病、子宮癌、結腸癌、肺癌和皮膚癌中被抑制而引起致癌作用，可以看出本發明的PIG33基因具有抑癌功能。
圖79示出了PIG35基因在正常肝組織、原發性肝癌組織和肝癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖79的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖79所示，證實PIG35基因的表達水平在全部三個正常肝組織樣品中較高地檢測到，而在三個肝癌組織樣品中其表達明顯比正常組織低，且甚至在一個肝癌細胞系樣品中檢測不到。
在正常人多個組織(Clontech)和人癌細胞系(Clontech)進行RNA印跡。換句話說，通過與如上所述相同的方法，使從正常組織和癌細胞系提取的各總RNA樣品轉移到其上面的印跡進行雜交來進行RNA印跡，其中所述印跡可商業購自Clontech公司(美國)，正常組織例如選自由腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞組成的組，而癌細胞系例如選自由早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞組成的組。
圖108示出了PIG35基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖108的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖108中所示，具有大約1.7kb大小的主要的PIG35mRNA轉錄物在如腦、心臟、骨骼肌、肝、小腸、胎盤和肺的正常組織中過量表達。
圖137示出了PIG35基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖137的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖137中所示，PIG35基因在如早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中根本不表達，而在慢性髓細胞性白血病細胞系K-562中很少表達。從這些結果可以看出，本發明的PIG35基因在如腦、心臟、骨骼肌、肝、小腸、胎盤和肺的正常組織中具有抑癌功能。而且，通過如下事實甚至其表達在白血病、子宮癌、惡性淋巴瘤、結腸癌、肺癌和皮膚癌中被抑制而引起致癌作用，可以看出本發明的PIG35基因具有抑癌功能。
圖80示出了PIG36基因在正常肝組織、原發性肝癌組織和肝癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖80的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖80所示，證實PIG36基因的表達水平在全部三個正常肝組織樣品中較高地檢測到，而在三個肝癌組織樣品中其表達明顯比正常組織低，且或許在一個肝癌細胞系樣品中檢測不到。
在正常人多個組織(Clontech)和人癌細胞系(Clontech)進行RNA印跡。換句話說，通過與如上所述相同的方法，使從正常組織和癌細胞系提取的各總RNA樣品轉移到其上面的印跡進行雜交來進行RNA印跡，其中所述印跡可商業購自Clontech公司(美國)，正常組織例如選自由腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞組成的組，而癌細胞系例如選自由早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞組成的組。
圖109示出了PIG36基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖109的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖109中所示，具有大約1.0kb大小的主要的PIG36mRNA轉錄物在正常肝組織中過量表達。
圖138示出了PIG36基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖138的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖138中所示，PIG36基因在如早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中根本不表達或很少表達。從這些結果可以看出，本發明的PIG36基因在如肝、心臟、肌肉、腎和胎盤的正常組織中具有抑癌功能。而且，通過如下事實甚至其表達在白血病、子宮癌、惡性淋巴瘤、結腸癌、肺癌和皮膚癌中被抑制而引起致癌作用，可以看出本發明的PIG36基因具有抑癌功能。
圖85示出了PIG37基因在正常肝組織、原發性肝癌組織和肝癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖85的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖85所示，證實PIG37基因的表達水平在全部三個正常肝組織樣品中較高地檢測到，而在三個肝癌組織樣品中其表達明顯比正常組織低，且在一個肝癌細胞系樣品中檢測不到。
在正常人多個組織(Clontech)和人癌細胞系(Clontech)進行RNA印跡。換句話說，通過與如上所述相同的方法，使從正常組織和癌細胞系提取的各總RNA樣品轉移到其上面的印跡進行雜交來進行RNA印跡，其中所述印跡可商業購自Clontech公司(美國)，正常組織例如選自由腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞組成的組，而癌細胞系例如選自由早幼粒自血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞組成的組。
圖114示出了PIG37基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖114的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖114中所示，具有大約7.0kb大小的主要的PIG37mRNA轉錄物在如腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤和肺的正常組織中過量表達。同時，具有大約2.0和1.0kb大小的PIG37mRNA轉錄物在正常組織中過量表達。
圖143示出了PIG37基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖143的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖143中所示，PIG37基因在如早幼粒白血病細胞HL-60、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、SW480結腸癌細胞和A549肺癌細胞的組織中幾乎不表達，而在HeLa子宮頸癌細胞、伯基特淋巴瘤Raji細胞和G361黑色素瘤細胞中很少表達。從這些結果可以看出，本發明的PIG37基因在如腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤和肺的正常組織中具有抑癌功能。而且，通過如下事實甚至其表達在白血病、子宮癌、結腸癌、肺癌和皮膚癌中被抑制而引起致癌作用，可以看出本發明的PIG37基因具有抑癌功能。
3-4.GIG46、MIG20 為評價GIG和PIG基因的表達水平，進行RNA印跡，如下。
分別將20μg如實施例1中所述的從三個正常外宮頸組織、三個原發性子宮頸癌組織和兩個子宮頸癌細胞系獲得的各總RNA樣品變性并在1％甲醛瓊脂糖凝膠中電泳，然后將得到的瓊脂糖凝膠轉移到尼龍膜(Boehringer-Mannheim，德國)上。然后將尼龍膜與使用全長GIG46和MIG20cDNA的32P標記的隨機引物探針在42℃下雜交過夜。RNA印跡步驟重復兩次，其中之一是使用光密度計將印跡定量，而另一個是使印跡與β-肌動蛋白探針雜交以確定mRNA的總量。
圖77示出了GIG46基因在正常外宮頸組織、原發性子宮頸癌組織和子宮頸癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖77為示出β-肌動蛋白表達的RNA印跡結果。在圖77中，泳道1～3表示正常外宮頸組織樣品，泳道4～6表示子宮頸癌組織樣品，泳道7表示子宮頸癌細胞系HeLa的樣品，且泳道8表示子宮頸癌細胞系CUMC-6的樣品。如圖77中所示，證實GIG46基因的表達水平在全部三個正常外宮頸組織樣品中較高地檢測到，而在三個子宮頸癌組織的樣品中其表達水平明顯比正常組織低，且在兩個子宮頸癌細胞系樣品中檢測不到。
圖106示出了GIG46基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖106示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖106中所示，具有大約1.5kb大小的主要的GIG46mRNA轉錄物在如子宮、腦、心臟、骨骼肌、大腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞的正常組織中過量表達，且除了1.5kb的GIG46mRNA轉錄物，具有大約2.0kb大小的轉錄物也表達。
圖135示出了GIG46基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖135的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖135中所示，GIG46基因在如早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中很少表達。然而，被證明在正常組織中表達的2.0kb的mRNA轉錄物在癌細胞系中不表達。
從這些結果可以看出，本發明的GIG46基因在如子宮、腦、心臟、骨骼肌、大腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞的正常組織中具有抑癌功能。
圖81示出了MIG20基因在正常外宮頸組織、原發性子宮頸癌組織和子宮頸癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖81為示出β-肌動蛋白表達的RNA印跡結果。在圖81中，泳道1～3表示正常外宮頸組織樣品，泳道4～6表示子宮頸癌組織樣品，泳道7表示子宮頸癌細胞系HeLa的樣品，且泳道8表示子宮頸癌細胞系CUMC-6的樣品。如圖81中所示，證實MIG20基因的表達水平在全部三個正常外宮頸組織樣品中較高地檢測到，而在三個子宮頸癌組織的樣品中其表達水平明顯比正常組織低，且在兩個子宮頸癌細胞系樣品中檢測不到。
圖110示出了MIG20基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖110示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖110中所示，具有大約4.4kb大小的主要的MIG20mRNA轉錄物在如心臟、骨骼肌和肝的正常組織中過量表達，且除了4.4kb的MIG20mRNA轉錄物，具有大約2.4kb和1.5kb大小的轉錄物也表達。
圖139示出了MIG20基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖139的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖139中所示，MIG20基因在如早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中不表達。從這些結果可以看出，本發明的MIG20基因在如子宮頸、心臟、骨骼肌和肝的正常組織中具有抑癌功能。
3-5.MIG12 為評價MIG12基因的表達水平，進行RNA印跡，如下。
將20μg如實施例1中所述的從三個正常肺組織、兩個原發性肺癌組織、兩個轉移性肺癌組織和肺癌細胞系(A549和NCI-H358)獲得的各總RNA樣品變性并在1％甲醛瓊脂糖凝膠中電泳，然后將得到的瓊脂糖凝膠轉移到尼龍膜(Boehringer-Mannheim，德國)上。然后將尼龍膜與由全長MIG12 cDNA使用Rediprime II隨機引物標記系統(Amersham，英國)而制備的32P標記的隨機引物探針在42℃下雜交過夜。RNA印跡步驟重復兩次，其中之一是使用光密度計將印跡定量，而另一個是使印跡與β-肌動蛋白探針雜交以確定mRNA的總量。
圖84示出了MIG12基因在正常肺組織、原發性肺癌組織、轉移性肺癌組織和肺癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖84的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖84所示，證實MIG9基因的表達水平在全部三個正常肺組織樣品中較高地檢測到，而兩個肺癌組織樣品、兩個轉移性肺癌組織樣品和兩個肺癌細胞系樣品中稍微檢測到。
在正常人多個組織(Clontech)和人癌細胞系(Clontech)進行RNA印跡。換句話說，通過與如上所述相同的方法，使從正常組織和癌細胞系提取的各總RNA樣品轉移到其上面的印跡進行雜交來進行RNA印跡，其中所述印跡可商業購自Clontech公司(美國)，正常組織例如選自由腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞組成的組，而癌細胞系例如選自由早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞組成的組。
圖113示出了MIG12基因在多種正常組織中差異性表達的RNA印跡結果，且圖113的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖113中所示，具有大約0.5kb大小的主要的MIG12mRNA轉錄物在如腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞的正常組織中過量表達。除了0.5kb的MIG12mRNA轉錄物，具有大約1.0kb和0.8kb大小的轉錄物在如心臟、肌肉、肝和腎的正常組織中也表達。
圖142示出了MIG12基因在多種癌細胞系中差異性表達的RNA印跡結果，且圖142的底部示出了通過使相同的印跡與β-肌動蛋白探針雜交而獲得的RNA印跡結果。如圖142中所示，在正常組織中表達的主要的0.5kb的MIG12mRNA轉錄物在如早幼粒白血病細胞HL-60、HeLa子宮頸癌細胞、慢性髓細胞性白血病細胞系K-562、類淋巴母細胞白血病細胞MOLT-4、伯基特淋巴瘤Raji細胞、SW480結腸癌細胞、A549肺癌細胞和G361黑色素瘤細胞的組織中很少表達。從這些結果可以看出，本發明的MIG12基因在如腦、心臟、骨骼肌、結腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血白細胞的正常組織中具有抑癌功能。
實施例4表達載體的構建和轉染 4-1.GIG8、GIG10、GIG13、GIG30、GIG32、GIG33、GIG34、GIG35、GIG38、GIG39、GIG43、PIG49、PIG51、GIG44、GIG31 構建包含各GIG和PIG基因的編碼區的表達載體，如下。首先，分別將實施例2中制備的全長cDNA克隆插入真核表達載體pcDNA3.1(Invitrogen，美國)以獲得表達載體pcDNA3.1/GIG8、pcDNA3.1/GIG10、pcDNA3.1/GIG13、pcDNA3.1/GIG30、pcDNA3.1/GIG32、pcDNA3.1/GIG33、pcDNA3.1/GIG34、pcDNA3.1/GIG35、pcDNA3.1/GIG38、pcDNA3.1/GIG39、pcDNA3.1/GIG43、pcDNA3.1/PIG49、pcDNA3.1/PIG51、pcDNA3.1/GIG44和pcDNA3.1/GIG31。使用lipofectamine(Gibco BRL)將各表達載體轉染進MCF-7乳腺癌細胞系中，然后在含有0.6mg/ml的G418(Gibco)的DMEM培養基中培養以篩選轉染的細胞。同時，使用用缺少GIG cDNA的表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞作為對照組。
4-2.GIG15 構建包含GIG15基因的編碼區的表達載體，如下。首先，將實施例2中制備的全長GIG15cDNA克隆插入真核表達載體pcDNA3.1(Invitrogen，美國)以獲得表達載體pcDNA3.1/GIG15。使用lipofectamine(Gibco BRL)將表達載體轉染進K562白血病細胞系中，然后在含有0.6mg/ml的G418(Gibco)的DMEM培養基中培養以篩選轉染的細胞。同時，使用用缺少GIG cDNA的表達載體pcDNA3.1轉染的K562細胞作為對照組。
4-3.GIG16、GIG24、GIG26、GIG29、GIG40、GIG42、PIG33、PIG35、PIG36、PIG37 構建包含各GIG和PIG基因的編碼區的表達載體，如下。首先，分別將實施例2中制備的全長cDNA克隆GIG16、GIG24、GIG26、GIG29、GIG40、GIG42、PIG33、PIG35、PIG36和PIG37插入真核表達載體pcDNA3.1(Invitrogen，美國)以獲得表達載體pcDNA3.1/GIG16、pcDNA3.1/GIG24、pcDNA3.1/GIG26、pcDNA3.1/GIG29、pcDNA3.1/GIG40、pcDNA3.1/GIG42、pcDNA3.1/PIG33、pcDNA3.1/PIG35、pcDNA3.1/PIG36以及pcDNA3.1/PIG37。使用lipofectamine(Gibco BRL)將各表達載體轉染進HepG2肝癌細胞系中，然后在含有0.6mg/ml的G418(Gibco)的DMEM培養基中培養以篩選轉染的細胞。同時，使用用缺少GIG cDNA的表達載體pcDNA3.1轉染的HepG2細胞作為對照組。
4-4.GIG46、MIG20 構建包含各GIG和MIG基因的編碼區的表達載體，如下。首先，分別將實施例2中制備的全長GIG46cDNA克隆插入真核表達載體pcDNA3.1(Invitrogen，美國)以獲得表達載體pcDNA3.1/GIG46和pcDNA3.1/MIG20。使用lipofectamine(Gibco BRL)將各表達載體轉染進HeLa子宮頸癌細胞系(ATCC CCL-2)中，然后在含有0.6mg/ml的G418(Gibco)的DMEM培養基中培養以篩選轉染的細胞。同時，使用用缺少GIG46或MIG20cDNA的表達載體pcDNA3.1轉染的HeLa細胞作為對照組。
4-5.MIG12 構建包含MIG12基因的編碼區的表達載體，如下。首先，將實施例2中制備的全長MIG12cDNA克隆插入真核表達載體pcDNA3.1(Invitrogen，美國)以獲得表達載體pcDNA3.1/MIG12。使用lipofectamine(Gibco BRL)將表達載體轉染進A549肺癌細胞系中，然后在含有0.6mg/ml的G418(Gibco)的DMEM培養基中培養以篩選轉染的細胞。同時，使用用缺少MIG12cDNA的表達載體pcDNA3.1轉染的A549細胞作為對照組。
實施例5用GIG基因轉染的乳腺癌細胞的生長曲線 5-1.GIG8、GIG10、GIG13、GIG30、GIG32、GIG33、GIG34、GIG35、GIG38、GIG39、GIG43、PIG49、PIG51、GIG44、GIG31 為檢測GIG和PIG基因對乳腺癌細胞生成的影響，分別在DMEM培養基中以1x105個細胞/ml的細胞密度培養野生型MCF-7細胞；分別用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/GIG8、pcDNA3.1/GIG10、pcDNA3.1/GIG13、pcDNA3.1/GIG30、pcDNA3.1/GIG32、pcDNA3.1/GIG33、pcDNA3.1/GIG34、pcDNA3.1/GIG35、pcDNA3.1/GIG38、pcDNA3.1/GIG39、pcDNA3.1/GIG43、pcDNA3.1/PIG49、pcDNA3.1/PIG51、pcDNA3.1/GIG44以及pcDNA3.1/GIG31轉染的MCF-7乳腺癌細胞；以及只用載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞9天。分別通過用胰蛋白酶(Sigma)處理而從細胞附著的培養瓶上分離培養液中的細胞，然后根據臺盼藍染色排出法(Freshney，I.R.，Culture ofAnimal Cells，第2版.A.R.Liss，紐約(1987))分別在第1、3、5、7和9天計數活細胞。
圖146為示出野生型MCF-7細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/GIG8轉染的MCF-7乳腺癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞的生長曲線的圖。如圖146中所示，證實用載體pcDNA3.1/GIG8轉染的MCF-7乳腺癌細胞呈現出比用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞和野生型MCF-7細胞更高的死亡率。培養9天后，與野生型MCF-7細胞相比只有大約30％的用載體pcDNA3.1/GIG8轉染的MCF-7乳腺癌細胞存活。從這種結果可以看出GIG8基因抑制乳腺癌細胞的生長。
圖147為示出野生型MCF-7細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/GIG10轉染的MCF-7乳腺癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞的生長曲線的圖。如圖147中所示，證實用載體pcDNA3.1/GIG10轉染的MCF-7乳腺癌細胞呈現出比用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞和野生型MCF-7細胞更高的死亡率。培養9天后，與野生型MCF-7細胞相比只有大約40％的用載體pcDNA3.1/GIG10轉染的MCF-7乳腺癌細胞存活。從這種結果可以看出GIG10基因抑制乳腺癌細胞的生長。
圖148為示出野生型MCF-7細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/GIG13轉染的MCF-7乳腺癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞的生長曲線的圖。如圖148中所示，證實用載體pcDNA3.1/GIG13轉染的MCF-7乳腺癌細胞呈現出比用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞和野生型MCF-7細胞更高的死亡率。培養9天后，與野生型MCF-7細胞相比只有大約30％的用載體pcDNA3.1/GIG13轉染的MCF-7乳腺癌細胞存活。從這種結果可以看出GIG13基因抑制乳腺癌細胞的生長。
圖154為示出野生型MCF-7細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/GIG30轉染的MCF-7乳腺癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞的生長曲線的圖。如圖154中所示，證實用載體pcDNA3.1/GIG30轉染的MCF-7乳腺癌細胞呈現出比用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞和野生型MCF-7細胞更高的死亡率。培養9天后，與野生型MCF-7細胞相比只有大約30％的用載體pcDNA3.1/GIG30轉染的MCF-7乳腺癌細胞存活。從這種結果可以看出GIG30基因抑制乳腺癌細胞的生長。
圖155為示出野生型MCF-7細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/GIG32轉染的MCF-7乳腺癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞的生長曲線的圖。如圖155中所示，證實用載體pcDNA3.1/GIG32轉染的MCF-7乳腺癌細胞呈現出比用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞和野生型MCF-7細胞更高的死亡率。培養9天后，與野生型MCF-7細胞相比只有大約50％的用載體pcDNA3.1/GIG32轉染的MCF-7乳腺癌細胞存活。從這種結果可以看出GIG32基因抑制乳腺癌細胞的生長。
圖156為示出野生型MCF-7細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/GIG33轉染的MCF-7乳腺癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞的生長曲線的圖。如圖156中所示，證實用載體pcDNA3.1/GIG33轉染的MCF-7乳腺癌細胞呈現出比用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞和野生型MCF-7細胞更高的死亡率。培養9天后，與野生型MCF-7細胞相比只有大約70％的用載體pcDNA3.1/GIG33轉染的MCF-7乳腺癌細胞存活。從這種結果可以看出GIG33基因抑制乳腺癌細胞的生長。
圖157為示出野生型MCF-7細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/GIG34轉染的MCF-7乳腺癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞的生長曲線的圖。如圖157中所示，證實用載體pcDNA3.1/GIG34轉染的MCF-7乳腺癌細胞呈現出比用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞和野生型MCF-7細胞更高的死亡率。培養9天后，與野生型MCF-7細胞相比只有大約80％的用載體pcDNA3.1/GIG34轉染的MCF-7乳腺癌細胞存活。從這種結果可以看出GIG34基因抑制乳腺癌細胞的生長。
圖158為示出野生型MCF-7細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/GIG35轉染的MCF-7乳腺癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞的生長曲線的圖。如圖158中所示，證實用載體pcDNA3.1/GIG35轉染的MCF-7乳腺癌細胞呈現出比用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞和野生型MCF-7細胞更高的死亡率。培養9天后，與野生型MCF-7細胞相比只有大約70％的用載體pcDNA3.1/GIG35轉染的MCF-7乳腺癌細胞存活。從這種結果可以看出GIG35基因抑制乳腺癌細胞的生長。
圖159為示出野生型MCF-7細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/GIG38轉染的MCF-7乳腺癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞的生長曲線的圖。如圖159中所示，證實用載體pcDNA3.1/GIG38轉染的MCF-7乳腺癌細胞呈現出比用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞和野生型MCF-7細胞更高的死亡率。培養9天后，與野生型MCF-7細胞相比只有大約60％的用載體pcDNA3.1/GIG38轉染的MCF-7乳腺癌細胞存活。從這種結果可以看出GIG38基因抑制乳腺癌細胞的生長。
圖160為示出野生型MCF-7細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/GIG39轉染的MCF-7乳腺癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞的生長曲線的圖。如圖160中所示，證實用載體pcDNA3.1/GIG39轉染的MCF-7乳腺癌細胞呈現出比用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞和野生型MCF-7細胞更高的死亡率。培養9天后，與野生型MCF-7細胞相比只有大約40％的用載體pcDNA3.1/GIG39轉染的MCF-7乳腺癌細胞存活。從這種結果可以看出GIG39基因抑制乳腺癌細胞的生長。
圖163為示出野生型MCF-7細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/GIG43轉染的MCF-7乳腺癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞的生長曲線的圖。如圖163中所示，證實用載體pcDNA3.1/GIG43轉染的MCF-7乳腺癌細胞呈現出比用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞和野生型MCF-7細胞更高的死亡率。培養9天后，與野生型MCF-7細胞相比只有大約60％的用載體pcDNA3.1/GIG43轉染的MCF-7乳腺癌細胞存活。從這種結果可以看出GIG43基因抑制乳腺癌細胞的生長。
圖169為示出野生型MCF-7細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/PIG49轉染的MCF-7乳腺癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞的生長曲線的圖。如圖169中所示，證實用載體pcDNA3.1/PIG49轉染的MCF-7乳腺癌細胞呈現出比用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞和野生型MCF-7細胞更高的死亡率。培養9天后，與野生型MCF-7細胞相比只有大約60％的用載體pcDNA3.1/PIG49轉染的MCF-7乳腺癌細胞存活。從這種結果可以看出PIG49基因抑制乳腺癌細胞的生長。
圖170為示出野生型MCF-7細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/PIG51轉染的MCF-7乳腺癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞的生長曲線的圖。如圖170中所示，證實用載體pcDNA3.1/PIG51轉染的MCF-7乳腺癌細胞呈現出比用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞和野生型MCF-7細胞更高的死亡率。培養9天后，與野生型MCF-7細胞相比只有大約40％的用載體pcDNA3.1/PIG51轉染的MCF-7乳腺癌細胞存活。從這種結果可以看出PIG51基因抑制乳腺癌細胞的生長。
圖173為示出野生型MCF-7細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/GIG44轉染的MCF-7乳腺癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞的生長曲線的圖。如圖173中所示，證實用載體pcDNA3.1/GIG44轉染的MCF-7乳腺癌細胞呈現出比用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞和野生型MCF-7細胞更高的死亡率。培養9天后，與野生型MCF-7細胞相比只有大約60％的用載體pcDNA3.1/GIG44轉染的MCF-7乳腺癌細胞存活。從這種結果可以看出GIG44基因抑制乳腺癌細胞的生長。
圖174為示出野生型MCF-7細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/GIG31轉染的MCF-7乳腺癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞的生長曲線的圖。如圖174中所示，證實用載體pcDNA3.1/GIG31轉染的MCF-7乳腺癌細胞呈現出比用表達載體pcDNA3.1轉染的MCF-7細胞和野生型MCF-7細胞更高的死亡率。培養9天后，與野生型MCF-7細胞相比只有大約70％的用載體pcDNA3.1/GIG31轉染的MCF-7乳腺癌細胞存活。從這種結果可以看出GIG31基因抑制乳腺癌細胞的生長。
5-2.GIG15 為檢測GIG基因對白血病細胞生成的影響，分別在DMEM培養基中以1x105個細胞/ml的細胞密度培養野生型K562細胞；分別用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/GIG15轉染的K562白血病細胞；以及只用載體pcDNA3.1轉染的K562細胞9天。分別通過用胰蛋白酶(Sigma)處理而從細胞附著的培養瓶上分離培養液中的細胞，然后根據臺盼藍染色排出法(Freshney，I.R.，Cultureof Animal Cells，第2版.A.R.Liss，紐約(1987))分別在第1、3、5、7和9天計數活細胞。
圖149為示出野生型K562細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/GIG15轉染的K562白血病細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的K562細胞的生長曲線的圖。如圖149中所示，證實用載體pcDNA3.1/GIG15轉染的K562細胞呈現出比用表達載體pcDNA3.1轉染的K562細胞和野生型K562細胞更高的死亡率。培養9天后，與野生型K562細胞相比只有大約80％的用載體pcDNA3.1/GIG15轉染的K562細胞存活。從這種結果可以看出GIG15基因抑制乳腺癌細胞的生長。
5-3.GIG16、GIG24、GIG26、GIG29、GIG40、GIG42、PIG33、PIG35、PIG36、PIG37 為檢測GIG和PIG基因對肝癌細胞生成的影響，分別在DMEM培養基中以1x105個細胞/ml的細胞密度培養野生型HepG2細胞；分別用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/GIG16、pcDNA3.1/GIG24、pcDNA3.1/GIG26、pcDNA3.1/GIG29、pcDNA3.1/GIG40、pcDNA3.1/GIG42、pcDNA3.1/PIG33、pcDNA3.1/PIG35、pcDNA3.1/PIG36以及pcDNA3.1/PIG37轉染的HepG2肝癌細胞；以及只用載體pcDNA3.1轉染的HepG2細胞9天。分別通過用胰蛋白酶(Sigma)處理而從細胞附著的培養瓶上分離培養液中的細胞，然后根據臺盼藍染色排出法(Freshney，I.R.，Culture of Animal Cells，第2版.A.R.Liss，紐約(1987))分別在第1、3、5、7和9天計數活細胞。
圖150為示出野生型HepG2細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/GIG16轉染的HepG2肝癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的HepG2細胞的生長曲線的圖。如圖150中所示，證實用載體pcDNA3.1/GIG16轉染的HepG2肝癌細胞呈現出比用表達載體pcDNA3.1轉染的HepG2細胞和野生型HepG2細胞更高的死亡率。培養9天后，與野生型HepG2細胞相比只有大約70％的用載體pcDNA3.1/GIG16轉染的HepG2肝癌細胞存活。從這種結果可以看出GIG16基因抑制肝癌細胞的生長。
圖151為示出野生型HepG2細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/GIG24轉染的HepG2肝癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的HepG2細胞的生長曲線的圖。如圖151中所示，證實用載體pcDNA3.1/GIG24轉染的HepG2肝癌細胞呈現出比用表達載體pcDNA3.1轉染的HepG2細胞和野生型HepG2細胞更高的死亡率。培養9天后，與野生型HepG2細胞相比只有大約60％的用載體pcDNA3.1/GIG24轉染的HepG2肝癌細胞存活。從這種結果可以看出GIG24基因抑制肝癌細胞的生長。
圖152為示出野生型HepG2細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/GIG26轉染的HepG2肝癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的HepG2細胞的生長曲線的圖。如圖152中所示，證實用載體pcDNA3.1/GIG26轉染的HepG2肝癌細胞呈現出比用表達載體pcDNA3.1轉染的HepG2細胞和野生型HepG2細胞更高的死亡率。培養9天后，與野生型HepG2細胞相比只有大約50％的用載體pcDNA3.1/GIG26轉染的HepG2肝癌細胞存活。從這種結果可以看出GIG26基因抑制肝癌細胞的生長。
圖153為示出野生型HepG2細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/GIG29轉染的HepG2肝癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的HepG2細胞的生長曲線的圖。如圖153中所示，證實用載體pcDNA3.1/GIG29轉染的HepG2肝癌細胞呈現出比用表達載體pcDNA3.1轉染的HepG2細胞和野生型HepG2細胞更高的死亡率。培養9天后，與野生型HepG2細胞相比只有大約70％的用載體pcDNA3.1/GIG29轉染的HepG2肝癌細胞存活。從這種結果可以看出GIG29基因抑制肝癌細胞的生長。
圖161為示出野生型HepG2細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/GIG40轉染的HepG2肝癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的HepG2細胞的生長曲線的圖。如圖161中所示，證實用載體pcDNA3.1/GIG40轉染的HepG2肝癌細胞呈現出比用表達載體pcDNA3.1轉染的HepG2細胞和野生型HepG2細胞更高的死亡率。培養9天后，與野生型HepG2細胞相比只有大約80％的用載體pcDNA3.1/GIG40轉染的HepG2肝癌細胞存活。從這種結果可以看出GIG40基因抑制肝癌細胞的生長。
圖162為示出野生型HepG2細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/GIG42轉染的HepG2肝癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的HepG2細胞的生長曲線的圖。如圖162中所示，證實用載體pcDNA3.1/GIG42轉染的HepG2肝癌細胞呈現出比用表達載體pcDNA3.1轉染的HepG2細胞和野生型HepG2細胞更高的死亡率。培養9天后，與野生型HepG2細胞相比只有大約60％的用載體pcDNA3.1/GIG42轉染的HepG2肝癌細胞存活。從這種結果可以看出GIG42基因抑制肝癌細胞的生長。
圖165為示出野生型HepG2細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/PIG33轉染的HepG2肝癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的HepG2細胞的生長曲線的圖。如圖165中所示，證實用載體pcDNA3.1/PIG33轉染的HepG2肝癌細胞呈現出比用表達載體pcDNA3.1轉染的HepG2細胞和野生型HepG2細胞更高的死亡率。培養9天后，與野生型HepG2細胞相比只有大約60％的用載體pcDNA3.1/PIG33轉染的HepG2肝癌細胞存活。從這種結果可以看出PIG33基因抑制肝癌細胞的生長。
圖166為示出野生型HepG2細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/PIG35轉染的HepG2肝癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的HepG2細胞的生長曲線的圖。如圖166中所示，證實用載體pcDNA3.1/PIG35轉染的HepG2肝癌細胞呈現出比用表達載體pcDNA3.1轉染的HepG2細胞和野生型HepG2細胞更高的死亡率。培養9天后，與野生型HepG2細胞相比只有大約70％的用載體pcDNA3.1/PIG35轉染的HepG2肝癌細胞存活。從這種結果可以看出PIG35基因抑制肝癌細胞的生長。
圖167為示出野生型HepG2細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/PIG36轉染的HepG2肝癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的HepG2細胞的生長曲線的圖。如圖167中所示，證實用載體pcDNA3.1/PIG36轉染的HepG2肝癌細胞呈現出比用表達載體pcDNA3.1轉染的HepG2細胞和野生型HepG2細胞更高的死亡率。培養9天后，與野生型HepG2細胞相比只有大約60％的用載體pcDNA3.1/PIG36轉染的HepG2肝癌細胞存活。從這種結果可以看出PIG36基因抑制肝癌細胞的生長。
圖172為示出野生型HepG2細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/PIG37轉染的HepG2肝癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的HepG2細胞的生長曲線的圖。如圖172中所示，證實用載體pcDNA3.1/PIG37轉染的HepG2肝癌細胞呈現出比用表達載體pcDNA3.1轉染的HepG2細胞和野生型HepG2細胞更高的死亡率。培養9天后，與野生型HepG2細胞相比只有大約70％的用載體pcDNA3.1/PIG37轉染的HepG2肝癌細胞存活。從這種結果可以看出PIG37基因抑制肝癌細胞的生長。
5-4.GIG46、MIG20 為檢測GIG和MIG基因對子宮頸癌細胞生長的影響，分別在DMEM培養基中以1x105個細胞/ml的細胞密度培養正常HeLa細胞；用實施例4中制備的GIG46基因轉染的HeLa子宮頸癌細胞；以及只用載體pcDNA3.1轉染的HeLa細胞9天。分別通過用胰蛋白酶(Sigma)處理而從細胞附著的培養瓶上分離培養液中的細胞，然后根據臺盼藍染色排出法(Freshney，I.R.，Culture ofAnimal Cells，第2版.A.R.Liss，紐約(1987))分別在第1、3、5、7和9天計數活細胞。
圖164為示出正常HeLa細胞；用實施例4中制備的GIG46基因轉染的HeLa子宮頸癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的HeLa細胞的生長曲線的圖。如圖164中所示，證實與用表達載體pcDNA3.1轉染的HeLa細胞和正常HeLa細胞相比，用GIG46基因轉染的HeLa子宮頸癌細胞呈現出更高的死亡率。培養9天后，與正常HeLa細胞相比只有大約80％的用GIG46基因轉染的HeLa子宮頸癌細胞存活。從這種結果可以看出GIG46基因抑制肝癌細胞的生長。
圖168為示出正常HeLa細胞；用實施例4中制備的MIG20基因轉染的HeLa子宮頸癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的HeLa細胞的生長曲線的圖。如圖168中所示，證實與用表達載體pcDNA3.1轉染的HeLa細胞和正常HeLa細胞相比，用MIG20基因轉染的HeLa子宮頸癌細胞呈現出更高的死亡率。培養9天后，與正常HeLa細胞相比只有大約80％的用MIG20基因轉染的HeLa子宮頸癌細胞存活。從這種結果可以看出MIG20基因抑制肝癌細胞的生長。
5-5.MIG12 為檢測MIG12基因對肺癌細胞生長的影響，分別在DMEM培養基中以1x105個細胞/ml的細胞密度培養野生型A549細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/MIG12轉染的A549肺癌細胞；以及只用載體pcDNA3.1轉染的A549細胞9天。分別通過用胰蛋白酶(Sigma)處理而從細胞附著的培養瓶上分離培養液中的細胞，然后根據臺盼藍染色排出法(Freshney，I.R.，Culture ofAnimal Cells，第2版.A.R.Liss，紐約(1987))分別在第1、3、5、7和9天計數活細胞。
圖171為示出野生型A549細胞；用實施例4中制備的載體pcDNA3.1/MIG12轉染的A549肺癌細胞；以及只用表達載體pcDNA3.1轉染的A549細胞的生長曲線的圖。如圖171中所示，證實與用表達載體pcDNA3.1轉染的A549細胞和野生型A549細胞相比，用載體pcDNA3.1/MIG12轉染的A549肺癌細胞呈現出更高的死亡率。培養9天后，與野生型A549細胞相比只有大約70％的用載體pcDNA3.1/MIG12轉染的A549肺癌細胞存活。從這種結果可以看出MIG12基因抑制肝癌細胞的生長。
工業應用性 本發明的GIG、PIG或MIG基因可以有效地用于診斷、預防和治療人癌癥。
序列表
<110>金弦起
<120>人抑癌基因、其編碼的蛋白質
<130>PCT06-025
<150>KR10-2005-0026254
<151>2005-03-30
<160>116
<170>Kopatentln 1.71
<210>1
<211>531
<212>DNA
<213>人類
<400>1
tcgggcttca ttctgagccg agcccggtgc caagcgcagc tagctcagca ggcggcagcg 60
gcggcctgag cttcagggca gccagctccc tcccggtctc gccttccctc gcggtcagca120
tgaaagcctt cagtcccgtg aggtccgtta ggaaaaacag cctgtcggac cacagcctgg180
gcatctcccg gagcaaaacc cctgtggacg acccgatgag cctgctatac aacatgaacg240
actgctactc caagctcaag gagctggtgc ccagcatccc ccagaacaag aaggtgagca300
agatggaaat cctgcagcac gtcatcgact acatcttgga cctgcagatc gccctggact360
cgcatcccac tattgtcagc ctgcatcacc agagacccgg gcagaaccag gcgtccagga420
cgccgctgac caccctcaac acggatatca gcatcctgtc cttgcaggct tctgaattcc480
cttctgagtt aatgtcaaat gacagcaaag cactgtgtgg ctgaataagc g 531
<210>2
<211>134
<212>PRT
<213>人類
<400>2
Met Lys Ala Phe Ser Pro Val Arg Ser Val Arg Lys Asn Ser Leu Ser
1 5 10 15
Asp His Ser Leu Gly Ile Ser Arg Ser Lys Thr Pro Val Asp Asp Pro
20 25 30
Met Ser Leu Leu Tyr Asn Met Asn Asp Cys Tyr Ser Lys Leu Lys Glu
35 40 45
Leu Val Pro Ser Ile Pro Gln Asn Lys Lys Val Ser Lys Met Glu Ile
50 55 60
Leu Gln His Val Ile Asp Tyr Ile Leu Asp Leu Gln Ile Ala Leu Asp
65 70 75 80
Ser His Pro Thr Ile Val Ser Leu His His Gln Arg Pro Gly Gln Asn
85 90 95
Gln Ala Ser Arg Thr Pro Leu Thr Thr Leu Asn Thr Asp Ile Ser Ile
100 105 110
Leu Ser Leu Gln Ala Ser Glu Phe Pro Ser Glu Leu Met Ser Asn Asp
115 120 125
Ser Lys Ala Leu Cys Gly
130
<210>3
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG8的引物H-AP33
<400>3
aagcttgctg ctc 13
<210>4
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG8的oligo-dT錨定引物
<400>4
aagctttttt ttttta 16
<210>5
<211>2090
<212>DNA
<213>人類
<400>5
gcctccgcca actttcacgc tgcctcggcg gcccggcccg gctcgacgcc aatggtggag 60
gccatagtgg agtttgacta ccaggcccag cacgatgatg agctgacgat cagcgtgggt 120
gaaatcatca ccaacatcag gaaggaggat ggaggctggt gggagggaca gatcaacggc 180
aggagaggtt tgttccctga caactttgta agagaaataa agaaagagat gaagaaagac 240
cctctcacca acaaagctcc agaaaagccc ctgcacgaag tgcccagtgg aaactctttg 300
ctgtcttctg aaacgatttt aagaaccaat aagagaggcg agcgacggag gcgccggtgc 360
caggtggcat tcagctacct gccccagaat gacgatgaac ttgagctgaa agttggcgac 420
atcatagagg tggtaggaga ggtagaggaa ggatggtggg aaggtgttct caacgggaag 480
actggaatgt ttccttccaa cttcatcaag gagctgtcag gggagtcgga tgagcttggc 540
atttcccagg atgagcagct atccaagtca agtttaaggg aaaccacagg ctccgagagt 600
gatgggggtg actcaagcag caccaagtct gaaggtgcca acgggacagt ggcaactgca 660
gcaatccagc ccaagaaagt taagggagtg ggctttggag acattttcaa agacaagcca 720
atcaaactaa gaccaaggtc aattgaagta gaaaatgact ttctgccggt agaaaagact 780
attgggaaga agttacctgc aactacagca actccagact catcaaaaac agaaatggac 840
agcaggacaa agagcaagga ttactgcaaa gtaatatttc catatgaggc acagaatgat 900
gatgaattga caatcaaaga aggagatata gtcactctca tcaataagga ctgcatcgac 960
gtaggctggt gggaaggaga gctgaacggc agacgaggcg tgttccccga taacttcgtg1020
aagttacttc caccggactt tgaaaaggaa gggaatagac ccaagaagcc accgcctcca1080
tccgctcctg tcatcaaaca aggggcaggc accactgaga gaaaacatga aattaaaaag1140
atacctcctg aaagaccaga aatgcttcca aacagaacag aagaaaaaga aagaccagag1200
agagagccaa aactggattt acagaagccc tccgttcctg ccataccgcc aaaaaagcct1260
cggccaccta agaccaattc tctcagcaga cctggcgcac tgcccccgag aaggccggag1320
agaccggtgg gtccgctgac acacaccagg ggtgacagtc caaagattga cttggccggc1380
agttcgctat ctggcatcct ggacaaagat ctctcggacc gcagcaatga cattgactta1440
gaaggttttg actccgtggt atcatctact gagaaactca gtcatccgac cacaagcaga1500
ccaaaagcta cagggaggcg gcctccgtcc cagtccctca catcttcatc cctttcaagc1560
cctgatatct tcgactcccc aagtcccgaa gaggataagg aggaacacat ttcacttgcg1620
cacagaggag tggacgcgtc aaagaaaact tccaagactg ttaccatatc ccaagtgtct1680
gacaacaaag catccctgcc gcccaagccg gggaccatgg cagcaggtgg cggtgggcca1740
gcccctctgt cctcagcggc gccctccccc ctgtcatcct ctttgggaac agctggacac1800
agagccaact ccccgtctct gttcggcacg gaaggaaaac caaagatgga gcctgcggcc1860
agcagccagg cggccgtgga ggagctaagg acacaggtcc gcgagctgag gagcatcatc1920
gagaccatga aggaccagca gaaacgagag attaaacagt tattgtctga gttggatgaa1980
gagaagaaaa tccggcttcg gttgcagatg gaagtgaacg acataaagaa agctctacaa2040
tcaaaatgaa tacttgatca atgaaatgtc acattattca tcctgagtcc 2090
<210>6
<211>665
<212>PRT
<213>人類
<400>6
Met Val Glu Ala Ile Val Glu Phe Asp Tyr Gln Ala Gln His Asp Asp
1 5 10 15
Glu Leu Thr Ile Ser Val Gly Glu Ile Ile Thr Asn Ile Arg Lys Glu
20 25 30
Asp Gly Gly Trp Trp Glu Gly Gln Ile Asn Gly Arg Arg Gly Leu Phe
35 40 45
Pro Asp Asn Phe Val Arg Glu Ile Lys Lys Glu Met Lys Lys Asp Pro
50 55 60
Leu Thr Asn Lys Ala Pro Glu Lys Pro Leu His Glu Val Pro Ser Gly
65 70 75 80
Asn Ser Leu Leu Ser Ser Glu Thr Ile Leu Arg Thr Asn Lys Arg Gly
85 90 95
Glu Arg Arg Arg Arg Arg Cys Gln Val Ala Phe Ser Tyr Leu Pro Gln
100 105 110
Asn Asp Asp Glu Leu Glu Leu Lys Val Gly Asp Ile Ile Glu Val Val
115 120 125
Gly Glu Val Glu Glu Gly Trp Trp Glu Gly Val Leu Asn Gly Lys Thr
130 135 140
Gly Met Phe Pro Ser Asn Phe Ile Lys Glu Leu Ser Gly Glu Ser Asp
145 150 155 160
Glu Leu Gly Ile Ser Gln Asp Glu Gln Leu Ser Lys Ser Ser Leu Arg
165 170 175
Glu Thr Thr Gly Ser Glu Ser Asp Gly Gly Asp Ser Ser Ser Thr Lys
180 185 190
Ser Glu Gly Ala Asn Gly Thr Val Ala Thr Ala Ala Ile Gln Pro Lys
195 200 205
Lys Val Lys Gly Val Gly Phe Gly Asp Ile Phe Lys Asp Lys Pro Ile
210 215 220
Lys Leu Arg Pro Arg Ser Ile Glu Val Glu Asn Asp Phe Leu Pro Val
225 230 235 240
Glu Lys Thr Ile Gly Lys Lys Leu Pro Ala Thr Thr Ala Thr Pro Asp
245 250 255
Ser Ser Lys Thr Glu Met Asp Ser Arg Thr Lys Ser Lys Asp Tyr Cys
260 265 270
Lys Val Ile Phe Pro Tyr Glu Ala Gln Asn Asp Asp Glu Leu Thr Ile
275 280 285
Lys Glu Gly Asp Ile Val Thr Leu Ile Asn Lys Asp Cys Ile Asp Val
290 295300
Gly Trp Trp Glu Gly Glu Leu Asn Gly Arg Arg Gly Val Phe Pro Asp
305 310 315 320
Asn Phe Val Lys Leu Leu Pro Pro Asp Phe Glu Lys Glu Gly Asn Arg
325 330 335
Pro Lys Lys Pro Pro Pro Pro Ser Ala Pro Val Ile Lys Gln Gly Ala
340 345 350
Gly Thr Thr Glu Arg Lys His Glu Ile Lys Lys Ile Pro Pro Glu Arg
355 360 365
Pro Glu Met Leu Pro Asn Arg Thr Glu Glu Lys Glu Arg Pro Glu Arg
370 375 380
Glu Pro Lys Leu Asp Leu Gln Lys Pro Ser Val Pro Ala Ile Pro Pro
385 390 395 400
Lys Lys Pro Arg Pro Pro Lys Thr Asn Ser Leu Ser Arg Pro Gly Ala
405 410 415
Leu Pro Pro Arg Arg Pro Glu Arg Pro Val Gly Pro Leu Thr His Thr
420 425 430
Arg Gly Asp Ser Pro Lys Ile Asp Leu Ala Gly Ser Ser Leu Ser Gly
435 440 445
Ile Leu Asp Lys Asp Leu Ser Asp Arg Ser Asn Asp Ile Asp Leu Glu
450 455 460
Gly Phe Asp Ser Val Val Ser Ser Thr Glu Lys Leu Ser His Pro Thr
465 470 475 480
Thr Ser Arg Pro Lys Ala Thr Gly Arg Arg Pro Pro Ser Gln Ser Leu
485 490 495
Thr Ser Ser Ser Leu Ser Ser Pro Asp Ile Phe Asp Ser Pro Ser Pro
500 505 510
Glu Glu Asp Lys Glu Glu His Ile Ser Leu Ala His Arg Gly Val Asp
515 520 525
Ala Ser Lys Lys Thr Ser Lys Thr Val Thr Ile Ser Gln Val Ser Asp
530 535 540
Asn Lys Ala Ser Leu Pro Pro Lys Pro Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly
545 550 555560
Gly Gly Pro Ala Pro Leu Ser Ser Ala Ala Pro Ser Pro Leu Ser Ser
565 570 575
Ser Leu Gly Thr Ala Gly His Arg Ala Asn Ser Pro Ser Leu Phe Gly
580 585 590
Thr Glu Gly Lys Pro Lys Met Glu Pro Ala Ala Ser Ser Gln Ala Ala
595 600 605
Val Glu Glu Leu Arg Thr Gln Val Arg Glu Leu Arg Ser Ile Ile Glu
610 615 620
Thr Met Lys Asp Gln Gln Lys Arg Glu Ile Lys Gln Leu Leu Ser Glu
625 630 635 640
Leu Asp Glu Glu Lys Lys Ile Arg Leu Arg Leu Gln Met Glu Val Asn
645 650 655
Asp Ile Lys Lys Ala Leu Gln Ser Lys
660 665
<210>7
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GlG10的引物H-AP10
<400>7
aagcttccac gta13
<210>8
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG10的oligo-dT錨定引物
<400>8
aagctttttt tttttc 16
<210>9
<211>3718
<212>DNA
<213>人類
<400>9
gactgcaaag tgagcgagaa gcaggctgcg ggccgtccca gcacgacgtg gagccccgcg 60
gagacctcga gatgccccgc ggggaagctc ctggccccgg gagacggggg gctaaggacg120
aggccctggg cgaagaatcg ggggagcggt ggagccccga gttccatctg cagaggaaat180
tggcggacag cagccacagt gaacagcaag atcgaaacag agtttctgaa gaacttatca240
tggttgtcca agaaatgaaa aaatacttcc cctcggagag acgcaataaa ccaagcactc300
tagatgccct caactatgct ctccgctgtg tccacagcgt tcaagcaaac agtgagtttt360
tccagattct cagtcagaat ggagcacctc aggcagatgt gagcatgtac agtcttgagg420
agctggccac tatcgcttca gaacacactt ccaaaaacac agataccttt gtggcagtat480
tttcatttct gtctggaagg ttagtgcaca tttctgaaca ggctgctttg atcctgaatc540
gtaagaaaga tgtcctggcg tcttctcact ttgttgacct gcttgcacct caagacatga600
gggtattcta cgcgcacact gccagagctc agcttccttt ctggaacaac tggacccaaa660
gagctgcacg gtatgaatgt gctccggtga aacctttttt ctgcaggatc cgtggaggtg720
aagacagaaa gcaagagaag tgtcactccc cattccggat catcccctat ctgattcatg780
tacatcaccc tgcccagcca gaattggaat cggaaccttg ctgtctcact gtggttgaaa840
agattcactc tggttatgaa gctcctcgga tcccagtgaa taaaagaatc ttcaccacca 900
cacacacccc agggtgtgtt tttcttgaag tagatgaaaa agcagtgcct ttgctgggtt 960
acctacctca ggacctgatt ggaacatcga tcctaagcta cctgcaccct gaagatcgtt1020
ctctgatggt tgccatacac caaaaagttt tgaagtatgc agggcatcct ccctttgaac1080
attctcccat tcgattttgt actcaaaacg gagactacat catactggat tccagttggt1140
ccagctttgt gaatccctgg agccggaaga tttctttcat cattggtcgg cataaagttc1200
gaacgagccc actaaatgag gatgtttttg ctaccaaaat taaaaagatg aacgataatg1260
acaaagacat aacagaatta caagaacaaa tttacaaact tctcttacag ccagttcacg1320
tgagcgtgtc cagcggctac gggagcctgg ggagcagcgg gtcgcaggag cagcttgtca1380
gcatcgcctc ctccagtgag gccagtgggc accgtgtgga ggagacgaag gcggagcaga1440
tgaccttgca gcaggtctat gccagtgtga acaaaattaa aaatctgggt cagcagctct1500
acattgagtc aatgaccaaa tcatcattca agccagtgac ggggacacgc acagaaccga1560
atggtggtgg tgaatgtaag acctttactt ccttccacca aacactgaaa aacaatagtg1620
tgtacactga gccctgtgag gatttgagga acgatgagca cagcccatcc tatcaacaga1680
tcaactgtat cgacagtgtc atcagatacc tgaagagcta caacattcca gctttgaaaa1740
gaaagtgtat ctcctgtaca aatacaactt cttcctcctc agaagaagac aaacagaacc1800
acaaggcaga tgatgtccaa gccttacaag ctggtttgca aatcccagcc atacctaaat1860
cagaaatgcc aacaaatgga cggtccatag acacaggagg aggagctcca cagatcctgt1920
ccacggcgat gctgagcttg gggtcgggca taagccaatg cggttacagc agcaccattg1980
tccatgtccc acccccagag acagccaggg atgctaccct cttctgtgag ccctggaccc2040
tgaacatgca gccagcccct ttgacctcgg aagaatttaa acacgtgggg ctcacagcgg2100
ctgttctgtc agcgcacacc cagaaggaag agcagaatta tgttgataaa ttccgagaaa2160
agatcctgtc atcaccctac agctcctatc ttcagcaaga aagcaggagc aaagctaaat2220
attcatattt tcaaggagat tctacttcca agcagacgcg gtcggccggc tgcaggaaag2280
ggaagcacaa gcggaagaag ctgccggagc cgccagacag cagcagctcg aacaccggct2340
ctggtccccg caggggagcg catcagaacg cacagccctg ctgcccctcc gcggcctcct2400
ctccgcacac ctcgagcccg accttcccac ctgccgccat ggtgcccagc caggcccctt2460
acctcgtccc agcttttccc ctcccagccg cgacctcacc cggaagagaa tacgcagccc2520
ccggaactgc accggaaggc ctgcatgggc tgcccttgtc cgagggcttg cagccttacc2580
cagctttccc ttttccttac ttggatactt ttatgaccgt tttcctgcct gacccccctg2640
tctgtcctct gttgtcgcca tcgtttttgc catgtccatt cctgggggcg acagcctctt2700
ctgcgatatc accctcaatg tcgtcagcaa tgagtccaac tctggaccca cccccttcag2760
tcaccagcca aaggagagag gaggaaaagt gggaggcaca aagcgagggg cacccgttca2820
ttacttcgag aagcagctca cccttgcagt taaacttact tcaggaagag atgcccagac2880
cctctgaatc tccagatcag atgagaagga acacgtgccc acaaactgag tattgtgtta2940
caggcaacaa tggcagtgag agcagtcctg ctactaccgg tgcactgtcc acggggtcac3000
ctcccaggga gaatccatcc catcctactg ccagcgctct gtccacagga tcgcctccca3060
tgaagaatcc atcccatcct actgccagcg ctctgtccac aggatcgcct cccatgaaga3120
atccatccca tcctactgcc agcacactgt ccatgggat tgcctcccagc aggactccat3180
cccatcctac tgccactgtt ctgtccacgg ggtcacctcc cagcgaatcc ccatccagaa3240
ctggttcagc agcatcagga agcagcgaca gcagtatata ccttactagt agtgtttatt3300
cttctaaaat ctcccaaaat gggcagcaat ctcaggacgt acagaaaaaa gaaacatttc3360
ctaatgtcgc cgaagagccc atctggagaa tgatacggca gacacctgag cgcattctca3420
tgacatacca ggtacctgag agggttaaag aagttgtact aaaagaagac ctggaaaagc3480
tagaaagtat gaggcagcag cagccccagt tttctcatgg gcaaaaggag gagctggcta3540
aggtgtataa ttggattcaa agccagactg tcactcaaga aatcgacatt caagcctgtg3600
tcacttgtga aaatgaagat tcagctgatg gtgcggccac atcctgtggt caggttctgg3660
tagaagacag ctgttgagtg actgtgagga tgaaccttca taccctttcc aagacgtg 3718
<210>10
<211>1201
<212>PRT
<213>人類
<400>10
Met Pro Arg Gly Glu Ala Pro Gly Pro Gly Arg Arg Gly Ala Lys Asp
1 5 10 15
Glu Ala Leu Gly Glu Glu Ser Gly Glu Arg Trp Ser Pro Glu Phe His
20 25 30
Leu Gln Arg Lys Leu Ala Asp Ser Ser His Ser Glu Gln Gln Asp Arg
35 40 45
Asn Arg Val Ser Glu Glu Leu Ile Met Val Val Gln Glu Met Lys Lys
50 55 60
Tyr Phe Pro Ser Glu Arg Arg Asn Lys Pro Ser Thr Leu Asp Ala Leu
65 70 75 80
Asn Tyr Ala Leu Arg Cys Val His Ser Val Gln Ala Asn Ser Glu Phe
85 90 95
Phe Gln Ile Leu Ser Gln Asn Gly Ala Pro Gln Ala Asp Val Ser Met
100 105 110
Tyr Ser Leu Glu Glu Leu Ala Thr Ile Ala Ser Glu His Thr Ser Lys
115 120 125
Asn Thr Asp Thr Phe Val Ala Val Phe Ser Phe Leu Ser Gly Arg Leu
130 135 140
Val His Ile Ser Glu Gln Ala Ala Leu Ile Leu Asn Arg Lys Lys Asp
145 150 155 160
Val Leu Ala Ser Ser His Phe Val Asp Leu Leu Ala Pro Gln Asp Met
165 170 175
Arg Val Phe Tyr Ala His Thr Ala Arg Ala Gln Leu Pro Phe Trp Asn
180 185 190
Asn Trp Thr Gln Arg Ala Ala Arg Tyr Glu Cys Ala Pro Val Lys Pro
195 200 205
Phe Phe Cys Arg Ile Arg Gly Gly Glu Asp Arg Lys Gln Glu Lys Cys
210 215 220
His Ser Pro Phe Arg Ile Ile Pro Tyr Leu Ile His Val His His Pro
225 230 235 240
Ala Gln Pro Glu Leu Glu Ser Glu Pro Cys Cys Leu Thr Val Val Glu
245 250 255
Lys Ile His Ser Gly Tyr Glu Ala Pro Arg Ile Pro Val Asn Lys Arg
260 265 270
Ile Phe Thr Thr Thr His Thr Pro Gly Cys Val Phe Leu Glu Val Asp
275 280 285
Glu Lys Ala Val Pro Leu Leu Gly Tyr Leu Pro Gln Asp Leu Ile Gly
290 295 300
Thr Ser Ile Leu Ser Tyr Leu His Pro Glu Asp Arg Ser Leu Met Val
305 310 315 320
Ala Ile His Gln Lys Val Leu Lys Tyr Ala Gly His Pro Pro Phe Glu
325 330 335
His Ser Pro Ile Arg Phe Cys Thr Gln Asn Gly Asp Tyr Ile Ile Leu
340 345 350
Asp Ser Ser Trp Ser Ser Phe Val Asn Pro Trp Ser Arg Lys Ile Ser
355 360 365
Phe Ile Ile Gly Arg His Lys Val Arg Thr Ser Pro Leu Asn Glu Asp
370 375 380
Val Phe Ala Thr Lys Ile Lys Lys Met Asn Asp Asn Asp Lys Asp Ile
385 390 395 400
Thr Glu Leu Gln Glu Gln Ile Tyr Lys Leu Leu Leu Gln Pro Val His
405 410 415
Val Ser Val Ser Ser Gly Tyr Gly Ser Leu Gly Ser Ser Gly Ser Gln
420 425 430
Glu Gln Leu Val Ser Ile Ala Ser Ser Ser Glu Ala Ser Gly His Arg
435 440 445
Val Glu Glu Thr Lys Ala Glu Gln Met Thr Leu Gln Gln Val Tyr Ala
450 455 460
Ser Val Asn Lys Ile Lys Asn Leu Gly Gln Gln Leu Tyr Ile Glu Ser
465 470 475 480
Met Thr Lys Ser Ser Phe Lys Pro Val Thr Gly Thr Arg Thr Glu Pro
485 490 495
Asn Gly Gly Gly Glu Cys Lys Thr Phe Thr Ser Phe His Gln Thr Leu
500 505 510
Lys Asn Asn Ser Val Tyr Thr Glu Pro Cys Glu Asp Leu Arg Asn Asp
515 520 525
Glu His Ser Pro Ser Tyr Gln Gln Ile Asn Cys Ile Asp Ser Val Ile
530 535 540
Arg Tyr Leu Lys Ser Tyr Asn Ile Pro Ala Leu Lys Arg Lys Cys Ile
545 550 555 560
Ser Cys Thr Asn Thr Thr Ser Ser Ser Ser Glu Glu Asp Lys Gln Asn
565 570 575
His Lys Ala Asp Asp Val Gln Ala Leu Gln Ala Gly Leu Gln Ile Pro
580 585 590
Ala Ile Pro Lys Ser Glu Met Pro Thr Asn Gly Arg Ser Ile Asp Thr
595 600 605
Gly Gly Gly Ala Pro Gln Ile Leu Ser Thr Ala Met Leu Ser Leu Gly
610 615 620
Ser Gly Ile Ser Gln Cys Gly Tyr Ser Ser Thr Ile Val His Val Pro
625 630 635 640
Pro Pro Glu Thr Ala Arg Asp Ala Thr Leu Phe Cys Glu Pro Trp Thr
645 650 655
Leu Asn Met Gln Pro Ala Pro Leu Thr Ser Glu Glu Phe Lys His Val
660 665 670
Gly Leu Thr Ala Ala Val Leu Ser Ala His Thr Gln Lys Glu Glu Gln
675 680 685
Asn Tyr Val Asp Lys Phe Arg Glu Lys Ile Leu Ser Ser Pro Tyr Ser
690 695 700
Ser Tyr Leu Gln Gln Glu Ser Arg Ser Lys Ala Lys Tyr Ser Tyr Phe
705 710 715 720
Gln Gly Asp Ser Thr Ser Lys Gln Thr Arg Ser Ala Gly Cys Arg Lys
725 730 735
Gly Lys His Lys Arg Lys Lys Leu Pro Glu Pro Pro Asp Ser Ser Ser
740 745 750
Ser Asn Thr Gly Ser Gly Pro Arg Arg Gly Ala His Gln Asn Ala Gln
755 760 765
Pro Cys Cys Pro Ser Ala Ala Ser Ser Pro His Thr Ser Ser Pro Thr
770 775 780
Phe Pro Pro Ala Ala Met Val Pro Ser Gln Ala Pro Tyr Leu Val Pro
785 790 795 800
Ala Phe Pro Leu Pro Ala Ala Thr Ser Pro Gly Arg Glu Tyr Ala Ala
805 810 815
Pro Gly Thr Ala Pro Glu Gly Leu His Gly Leu Pro Leu Ser Glu Gly
820 825 830
Leu Gln Pro Tyr Pro Ala Phe Pro Phe Pro Tyr Leu Asp Thr Phe Met
835 840 845
Thr Val Phe Leu Pro Asp Pro Pro Val Cys Pro Leu Leu Ser Pro Ser
850 855 860
Phe Leu Pro Cys Pro Phe Leu Gly Ala Thr Ala Ser Ser Ala Ile Ser
865 870 875 880
Pro Ser Met Ser Ser Ala Met Ser Pro Thr Leu Asp Pro Pro Pro Ser
885 890 895
Val Thr Ser Gln Arg Arg Glu Glu Glu Lys Trp Glu Ala Gln Ser Glu
900 905 910
Gly His Pro Phe Ile Thr Ser Arg Ser Ser Ser Pro Leu Gln Leu Asn
915 920 925
Leu Leu Gln Glu Glu Met Pro Arg Pro Ser Glu Ser Pro Asp Gln Met
930 935 940
Arg Arg Asn Thr Cys Pro Gln Thr Glu Tyr Cys Val Thr Gly Asn Asn
945 950 955 960
Gly Ser Glu Ser Ser Pro Ala Thr Thr Gly Ala Leu Ser Thr Gly Ser
965 970 975
Pro Pro Arg Glu Asn Pro Ser His Pro Thr Ala Ser Ala Leu Ser Thr
980 985 990
Gly Ser Pro Pro Met Lys Asn Pro Ser His Pro Thr Ala Ser Ala Leu
99510001005
Ser Thr Gly Ser Pro Pro Met Lys Asn Pro Ser His Pro Thr Ala Ser
101010151020
Thr Leu Ser Met Gly Leu Pro Pro Ser Arg Thr Pro Ser His Pro Thr
1025 103010351040
Ala Thr Val Leu Ser Thr Gly Ser Pro Pro Ser Glu Ser Pro Ser Arg
104510501055
Thr Gly Ser Ala Ala Ser Gly Ser Ser Asp Ser Ser Ile Tyr Leu Thr
106010651070
Ser Ser Val Tyr Ser Ser Lys Ile Ser Gln Asn Gly Gln Gln Ser Gln
107510801085
Asp Val Gln Lys Lys Glu Thr Phe Pro Asn Val Ala Glu Glu Pro Ile
109010951100
Trp Arg Met Ile Arg Gln Thr Pro Glu Arg Ile Leu Met Thr Tyr Gln
1105 111011151120
Val Pro Glu Arg Val Lys Glu Val Val Leu Lys Glu Asp Leu Glu Lys
112511301135
Leu Glu Ser Met Arg Gln Gln Gln Pro Gln Phe Ser His Gly Gln Lys
114011451150
Glu Glu Leu Ala Lys Val Tyr Asn Trp Ile Gln Ser Gln Thr Val Thr
115511601165
Gln Glu Ile Asp Ile Gln Ala Cys Val Thr Cys Glu Asn Glu Asp Ser
117011751180
Ala Asp Gly Ala Ala Thr Ser Cys Gly Gln Val Leu Val Glu Asp Ser
1185 119011951200
Cys
<210>11
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GI G13的引物H-AP5
<400>11
aagcttagta ggc13
<210>12
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG13的oligo-dT錨定引物
<400>12
aagctttttt tttttc16
<210>13
<211>351
<212>DNA
<213>人類
<400>13
atagcgctca cgcaagcatg gttaacgtcc ctaaaacccg ccggactttc tgtaagaagt 60
gtggcaagca ccaaccccat aaagtgacac agtacaagaa gggcaaggat tctctgtacg120
cccagggaaa gcggcgttat gacaggaagc agagtggcta tggtgggcaa actaagccga180
ttttccggaa aaaggctaaa actacaaaga agattgtgct aaggcttgag tgcgttgagc240
ccaactgcag atctaagaga atgctggcta ttaaaagatg caagcatttt gaactgggag300
gagataagaa gagaaagggc caagtgatcc agttctaagt gtcatctttt a 351
<210>14
<211>106
<212>PRT
<213>人類
<400>14
Met Val Asn Val Pro Lys Thr Arg Arg Thr Phe Cys Lys Lys Cys Gly
1 5 10 15
Lys His Gln Pro His Lys Val Thr Gln Tyr Lys Lys Gly Lys Asp Ser
20 25 30
Leu Tyr Ala Gln Gly Lys Arg Arg Tyr Asp Arg Lys Gln Ser Gly Tyr
35 40 45
Gly Gly Gln Thr Lys Pro Ile Phe Arg Lys Lys Ala Lys Thr Thr Lys
50 55 60
Lys Ile Val Leu Arg Leu Glu Cys Val Glu Pro Asn Cys Arg Ser Lys
65 70 75 80
Arg Met Leu Ala Ile Lys Arg Cys Lys His Phe Glu Leu Gly Gly Asp
85 90 95
Lys Lys Arg Lys Gly Gln Val Ile Gln Phe
100 105
<210>15
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG15的引物H-AP2
<400>15
aagcttcgac tgt 13
<210>16
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG15的oligo-dT錨定引物
<400>16
aagctttttt tttttc 16
<210>17
<211>1131
<212>DNA
<213>人類
<400>17
tttccctgag gactggaaga cattagaata aggtccagaa atgtccttgg tgtgtctgac 60
agactttcag gcccatgcgc gagagcagct gtctaagtca actcgggatt ttattgaagg120
tggagcagat gacagcatca cgcgggatga caacattgca gcgtttaaaa gaattcgcct180
ccgtccgcgg tacctgagag atgtgtctga ggtggacacc agaaccacaa tccaagggga240
ggagatcagt gcccctattt gtatcgcacc cacagggttc cactgccttg tctggcctga300
tggggaaatg agcaccgcaa gagctgccca agcggctggt atctgctaca tcaccagcac360
atttgccagc tgtagccttg aagacattgt cattgcagct cccgaaggcc tccgatggtt420
ccaactctat gtgcatccag acctgcagct gaacaaacag ttgatccaga gggtagaatc480
cctaggtttc aaagctttgg taataacttt ggatacacct gtatgtggca acaggcgaca540
tgacattcga aaccagttga ggaggaactt aacactaaca gatcttcaat cacctaaaaa600
gggaaatgca ataccttatt tccagatgac tcctatcagc acttctctct gctggaatga660
tctctcctgg tttcagagca taactcgatt gcccatcatc ctgaaaggga ttttgacaaa720
agaggatgca gagttagctg tgaagcacaa tgtccagggt atcattgttt ccaaccatgg 780
tgggaggcag cttgatgagg ttcttgcttc aattgatgct ttgacagaag tggtggctgc 840
tgtaaagggg aaaattgaag tctacctgga tggcggggtc cgaactggca atgatgtgct 900
gaaggctctg gcccttggag ctaagtgcat ttttcttggg agaccaatcc tatggggcct 960
tgcctgcaag ggtgaacatg gtgttaagga agttttgaac attttaacaa atgagttcca1020
cacttccatg gcccttacag gctgccggtc ggtcgctgag atcaatcgaa acttggtcca1080
gttttccagg ctgtaagaaa aaagggccaa caaccagact gctgaggttg c 1131
<210>18
<211>351
<212>PRT
<213>人類
<400>18
Met Ser Leu Val Cys Leu Thr Asp Phe Gln Ala His Ala Arg Glu Gln
1 5 10 15
Leu Ser Lys Ser Thr Arg Asp Phe Ile Glu Gly Gly Ala Asp Asp Ser
20 25 30
Ile Thr Arg Asp Asp Asn Ile Ala Ala Phe Lys Arg Ile Arg Leu Arg
35 40 45
Pro Arg Tyr Leu Arg Asp Val Ser Glu Val Asp Thr Arg Thr Thr Ile
50 55 60
Gln Gly Glu Glu Ile Ser Ala Pro Ile Cys Ile Ala Pro Thr Gly Phe
65 70 75 80
His Cys Leu Val Trp Pro Asp Gly Glu Met Ser Thr Ala Arg Ala Ala
85 90 95
Gln Ala Ala Gly Ile Cys Tyr Ile Thr Ser Thr Phe Ala Ser Cys Ser
100 105 110
Leu Glu Asp Ile Val Ile Ala Ala Pro Glu Gly Leu Arg Trp Phe Gln
115 120 125
Leu Tyr Val His Pro Asp Leu Gln Leu Asn Lys Gln Leu Ile Gln Arg
130 135 140
Val Glu Ser Leu Gly Phe Lys Ala Leu Val Ile Thr Leu Asp Thr Pro
145 150 155 160
Val Cys Gly Asn Arg Arg His Asp Ile Arg Asn Gln Leu Arg Arg Asn
165 170 175
Leu Thr Leu Thr Asp Leu Gln Ser Pro Lys Lys Gly Asn Ala Ile Pro
180 185 190
Tyr Phe Gln Met Thr Pro Ile Ser Thr Ser Leu Cys Trp Asn Asp Leu
195 200 205
Ser Trp Phe Gln Ser Ile Thr Arg Leu Pro Ile Ile Leu Lys Gly Ile
210 215 220
Leu Thr Lys Glu Asp Ala Glu Leu Ala Val Lys His Asn Val Gln Gly
225 230 235 240
Ile Ile Val Ser Asn His Gly Gly Arg Gln Leu Asp Glu Val Leu Ala
245 250 255
Ser Ile Asp Ala Leu Thr Glu Val Val Ala Ala Val Lys Gly Lys Ile
260 265 270
Glu Val Tyr Leu Asp Gly Gly Val Arg Thr Gly Asn Asp Val Leu Lys
275 280 285
Ala Leu Ala Leu Gly Ala Lys Cys Ile Phe Leu Gly Arg Pro Ile Leu
290 295 300
Trp Gly Leu Ala Cys Lys Gly Glu His Gly Val Lys Glu Val Leu Asn
305 310 315 320
Ile Leu Thr Asn Glu Phe His Thr Ser Met Ala Leu Thr Gly Cys Arg
325 330 335
Ser Val Ala Glu Ile Asn Arg Asn Leu Val Gln Phe Ser Arg Leu
340 345 350
<210>19
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GlG16的引物H-AP8
<400>19
aagcttttac cgc 13
<210>20
<211>16
<212>0NA
<213>人工序列
<220>
<223>GlG16的oligo-dT錨定引物
<400>20
aagctttttt tttttc 16
<210>21
<211>1336
<212>DNA
<213>人類
<400>21
agctacatcc agctccctga ggcagagttg agaatggaga gaatgttacc tctcctgact 60
ctggggctct tagcggctgg gttctgccct gctgtcctct gccaccctaa cagcccactt 120
gacgaggaga atctgaccca ggagaaccaa gaccgaggga cacacgtgga cctcggatta 180
gcctccgcca acgtggactt cgctttcagc ctgtacaagc agttagtcct gaaggcccct 240
gataagaatg tcatcttctc cccactgagc atctccaccg ccttggcctt cctgtctctg 300
ggggcccata ataccaccct gacagagatt ctcaaaggcc tcaagttcta cctcacggag 360
acttctgagg cagaaattca ccagagcttc cagcacctcc tgcgcaccct caatcagtcc 420
agcgatgagc tgcagctgag tatgggaaat gccatgtttg tcaaagagca actcagtctg 480
ctggacaggt tcacggagga tgccaagagg ctgtatggct ccgaggcctt tgccactgac 540
tttcaggact cagctgcagc taagaagctc atcaacgact acgtgaagaa tggaactagg 600
gggaaaatca cagatctgat caaggacctt gactcgcaga caatgatggt cctggtgaat 660
tacatcttct ttaaagccaa atgggagatg ccctttgacc cccaagatac tcatcagtca 720
aggttctact tgagcaagaa aaagtgggta atggtgccta tgatgagttt gcatcacctg 780
actatacctt acttccggga cgaggagctg tcctgcaccg tggtggagct gaagtacaca 840
ggcaatgcca gcgcactctt catcctccct gatcaagaca agatggagga agtggaagcc 900
atgctgctcc cagagaccct gaagcggtgg agagactctc tggagttcag agagataggt 960
gagctctacc tgccaaagtt ttccatctcg agggactata acctgaacga catacttctc1020
cagctgggca ttgaggaagc cttcaccggc aaggctgacc tgtcagggag cacaggggcc1080
aggaacctag cagtctccca ggtggtccat aaggctgtgc ttgatgtatt tgaggagggc1140
acagaagcat ctgctgccac agcagtcaaa atcaccctcc tttctgcatt agtggagaca1200
aggaccattg tgcgtttcaa caggcccttc ctgatgatca ttgtccctac agacacccag1260
aacatcttct tcatgagcaa agtcaccaat cccaagcaag cctagagctt gccatcaagc1320
agtggggctc tcagta1336
<210>22
<211>423
<212>PRT
<213>人類
<400>22
Met Glu Arg Met Leu Pro Leu Leu Thr Leu Gly Leu Leu Ala Ala Gly
1 5 10 15
Phe Cys Pro Ala Val Leu Cys His Pro Asn Ser Pro Leu Asp Glu Glu
20 25 30
Asn Leu Thr Gln Glu Asn Gln Asp Arg Gly Thr His Val Asp Leu Gly
35 40 45
Leu Ala Ser Ala Asn Val Asp Phe Ala Phe Ser Leu Tyr Lys Gln Leu
50 55 60
Val Leu Lys Ala Pro Asp Lys Asn Val Ile Phe Ser Pro Leu Ser Ile
65 70 75 80
Ser Thr Ala Leu Ala Phe Leu Ser Leu Gly Ala His Asn Thr Thr Leu
85 90 95
Thr Glu Ile Leu Lys Gly Leu Lys Phe Tyr Leu Thr Glu Thr Ser Glu
100 105 110
Ala Glu Ile His Gln Ser Phe Gln His Leu Leu Arg Thr Leu Asn Gln
115 120 125
Ser Ser Asp Glu Leu Gln Leu Ser Met Gly Asn Ala Met Phe Val Lys
130 135 140
Glu Gln Leu Ser Leu Leu Asp Arg Phe Thr Glu Asp Ala Lys Arg Leu
145 150 155 160
Tyr Gly Ser Glu Ala Phe Ala Thr Asp Phe Gln Asp Ser Ala Ala Ala
165 170 175
Lys Lys Leu Ile Asn Asp Tyr Val Lys Asn Gly Thr Arg Gly Lys Ile
180 185 190
Thr Asp Leu Ile Lys Asp Leu Asp Ser Gln Thr Met Met Val Leu Val
195 200 205
Asn Tyr Ile Phe Phe Lys Ala Lys Trp Glu Met Pro Phe Asp Pro Gln
210 215 220
Asp Thr His Gln Ser Arg Phe Tyr Leu Ser Lys Lys Lys Trp Val Met
225 230 235 240
Val Pro Met Met Ser Leu His His Leu Thr Ile Pro Tyr Phe Arg Asp
245 250 255
Glu Glu Leu Ser Cys Thr Val Val Glu Leu Lys Tyr Thr Gly Asn Ala
260 265 270
Ser Ala Leu Phe Ile Leu Pro Asp Gln Asp Lys Met Glu Glu Val Glu
275 280 285
Ala Met Leu Leu Pro Glu Thr Leu Lys Arg Trp Arg Asp Ser Leu Glu
290 295300
Phe Arg Glu Ile Gly Glu Leu Tyr Leu Pro Lys Phe Ser Ile Ser Arg
305 310 315 320
Asp Tyr Asn Leu Asn Asp Ile Leu Leu Gln Leu Gly Ile Glu Glu Ala
325 330 335
Phe Thr Gly Lys Ala Asp Leu Ser Gly Ser Thr Gly Ala Arg Asn Leu
340 345 350
Ala Val Ser Gln Val Val His Lys Ala Val Leu Asp Val Phe Glu Glu
355 360 365
Gly Thr Glu Ala Ser Ala Ala Thr Ala Val Lys Ile Thr Leu Leu Ser
370 375 380
Ala Leu Val Glu Thr Arg Thr Ile Val Arg Phe Asn Arg Pro Phe Leu
385 390 395 400
Met Ile Ile Val Pro Thr Asp Thr Gln Asn Ile Phe Phe Met Ser Lys
405 410 415
Val Thr Asn Pro Lys Gln Ala
420
<210>23
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG24的引物H-AP7
<400>23
aagcttaacg agg13
<210>24
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG24的oligo-dT錨定引物
<400>24
aagctttttt tttttc 16
<210>25
<211>1402
<212>DNA
<213>人類
<400>25
tgatgcacag aagctcctag aaaaaatggg tggctcagca ccaccagata gcagctggag 60
aggaagtctc aaagtgtcct acaatgttgg acctggcttt actggaaact tttctacaca120
aaaagtcaag atgcacatcc actctaccaa tgaagtgacg agaatttaca atgtgatagg180
tactctcaga ggagcagtgg aaccagacag atatgtcatt ctgggaggtc accgggactc240
atgggtgttt ggtggtattg accctcagag tggagcagct gttgttcatg aaactgtgag300
gagctttgga acactgaaaa aggaagggtg gagacctaga agaacaattt tgtttgcaag360
ctgggatgca gaagaatttg gtcttcttgg ttctactgag tgggcagagg ataattcaag420
actccttcaa gagcgtggcg tggcttatat taatgctgac tcatctatag aaggaaacta480
cactctgaga gttgattgta caccactgat gtacagcttg gtatacaacc taacaaaaga540
gctgaaaagc cctgatgaag gctttgaagg caaatctctt tatgaaagtt ggactaaaaa600
aagtccttcc ccagagttca gtggcatgcc caggataagc aaattgggat ctggaaatga660
ttttgaggtg ttcttccaac gacttggaat tgcttcaggc agagcacggt atactaaaaa720
ttgggaaaca aacaaattca gcggctatcc actgtatcac agtgtctatg aaacatatga780
gttggtggaa aagttttatg atccaatgtt taaatatcac ctcactgtgg cccaggttcg840
aggagggatg gtgtttgagc tagccaattc catagtgctc ccttttgatt gtcgagatta900
tgctgtagtt ttaagaaagt atgctgacaa aatctacaat atttctatga aacatccaca960
ggaaatgaag acatacagtt tatcatttga ttcacttttt tctgcagtaa aaaattttac1020
agaaattgct tccaagttca gcgagagact ccaggacttt gacaaaagca acccaatatt1080
gttaagaatg atgaatgatc aactcatgtt tctggaaaga gcatttattg atccattagg1140
gttaccagac agaccttttt ataggcatgt catctatgct ccaagcagcc acaacaagta1200
tgcaggggag tcattcccag gaatttatga tgctctgttt gatattgaaa gcaaagtgga1260
cccttccaag gcctggggag atgtgaagag acagatttct gttgcagcct tcacagtgca1320
ggcagctgca gagactttga gtgaagtagc ctaagaggat tctttagaga ctctgtattg1380
aatttgtgtg gtatgtcact ca 1402
<210>26
<211>442
<212>pRT
<213>人類
<400>26
Met Gly Gly Ser Ala Pro Pro Asp Ser Ser Trp Arg Gly Ser Leu Lys
1 5 10 15
Val Ser Tyr Asn Val Gly Pro Gly Phe Thr Gly Asn Phe Ser Thr Gln
20 25 30
Lys Val Lys Met His Ile His Ser Thr Asn Glu Val Thr Arg Ile Tyr
35 40 45
Asn Val Ile Gly Thr Leu Arg Gly Ala Val Glu Pro Asp Arg Tyr Val
50 55 60
Ile Leu Gly Gly His Arg Asp Ser Trp Val Phe Gly Gly Ile Asp Pro
65 70 75 80
Gln Ser Gly Ala Ala Val Val His Glu Thr Val Arg Ser Phe Gly Thr
85 90 95
Leu Lys Lys Glu Gly Trp Arg Pro Arg Arg Thr Ile Leu Phe Ala Ser
100 105 110
Trp Asp Ala Glu Glu Phe Gly Leu Leu Gly Ser Thr Glu Trp Ala Glu
115 120 125
Asp Asn Ser Arg Leu Leu Gln Glu Arg Gly Val Ala Tyr Ile Asn Ala
130 135 140
Asp Ser Ser Ile Glu Gly Asn Tyr Thr Leu Arg Val Asp Cys Thr Pro
145 150 155 160
Leu Met Tyr Ser Leu Val Tyr Asn Leu Thr Lys Glu Leu Lys Ser Pro
165 170 175
Asp Glu Gly Phe Glu Gly Lys Ser Leu Tyr Glu Ser Trp Thr Lys Lys
180 185 190
Ser Pro Ser Pro Glu Phe Ser Gly Met Pro Arg Ile Ser Lys Leu Gly
195 200 205
Ser Gly Asn Asp Phe Glu Val Phe Phe Gln Arg Leu Gly Ile Ala Ser
210 215 220
Gly Arg Ala Arg Tyr Thr Lys Asn Trp Glu Thr Asn Lys Phe Ser Gly
225 230 235 240
Tyr Pro Leu Tyr His Ser Val Tyr Glu Thr Tyr Glu Leu Val Glu Lys
245 250 255
Phe Tyr Asp Pro Met Phe Lys Tyr His Leu Thr Val Ala Gln Val Arg
260 265 270
Gly Gly Met Val Phe Glu Leu Ala Asn Ser Ile Val Leu Pro Phe Asp
275 280 285
Cys Arg Asp Tyr Ala Val Val Leu Arg Lys Tyr Ala Asp Lys Ile Tyr
290 295 300
Asn Ile Ser Met Lys His Pro Gln Glu Met Lys Thr Tyr Ser Leu Ser
305 310 315 320
Phe Asp Ser Leu Phe Ser Ala Val Lys Asn Phe Thr Glu Ile Ala Ser
325 330 335
Lys Phe Ser Glu Arg Leu Gln Asp Phe Asp Lys Ser Asn Pro Ile Leu
340 345 350
Leu Arg Met Met Asn Asp Gln Leu Met Phe Leu Glu Arg Ala Phe Ile
355 360 365
Asp Pro Leu Gly Leu Pro Asp Arg Pro Phe Tyr Arg His Val Ile Tyr
370 375 380
Ala Pro Ser Ser His Asn Lys Tyr Ala Gly Glu Ser Phe Pro Gly Ile
385 390 395 400
Tyr Asp Ala Leu Phe Asp Ile Glu Ser Lys Val Asp Pro Ser Lys Ala
405 410 415
Trp Gly Asp Val Lys Arg Gln Ile Ser Val Ala Ala Phe Thr Val Gln
420 425 430
Ala Ala Ala Glu Thr Leu Ser Glu Val Ala
435 440
<210>27
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG26的引物H-AP11
<400>27
aagcttcggg taa 13
<210>28
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG26的oligo-dT錨定引物
<400>28
aagctttttt tttttg16
<210>29
<211>1160
<212>DNA
<213>人類
<400>29
ctgcacaaga aacggagtca gccggagaac aaggagtggt cttccactgc ctcacaggag 60
gatggaggcc cacaacgcgt ctgccccatt caacttcacc ctgccaccca actttggcaa 120
gcgccccaca gacctggcac tgagcgtcat cctggtgttc atgttgttct tcatcatgct 180
ctcgctgggc tgcaccatgg agttcagcaa gatcaaggct cacttatgga agcctaaagg 240
gctggccatc gccctggtgg cacagtatgg catcatgccc ctcacggcct ttgtgctggg 300
caaggtcttc cggctgaaga acattgaggc actggccatc ttggtctgtg gctgctcacc 360
tggagggaac ctgtccaatg tcttcagtct ggccatgaag ggggacatga acctcagcat 420
tgtgatgacc acctgctcca ccttctgtgc ccttggcatg atgcctctcc tcctgtacat 480
ctactccagg gggatctatg atggggacct gaaggacaag gtgccctata aaggcatcgt 540
gatatcactg gtcctggttc tcattccttg caccataggg atcgtcctca aatccaaacg 600
gccacaatac atgcgctatg tcatcaaggg agggatgatc atcattctct tgtgcagtgt 660
ggccgtcaca gttctctctg ccatcaatgt ggggaagagc atcatgtttg ccatgacacc 720
actcttgatt gccacctcct ccctgatgcc ttttattggc tttctgctgg gttatgttct 780
ctctgctctc ttctgcctca atggacggtg cagacgcact gtcagcatgg agactggatg 840
ccaaaatgtc caactctgtt ccaccatcct caatgtggcc tttccacctg aagtcattgg 900
accacttttc ttctttcccc tcctctacat gattttccag cttggagaag ggcttctcct 960
cattgccata ttttggtgct atgagaaatt caagactccc aaggataaaa caaaaatgat1020
ctacacagct gccacaactg aagaaacaat tccaggagct ctgggaaatg gcacctacaa1080
aggggaggac tgctcccctt gcacagccta gcccttcccc tggtggcctg gattctggtc1140
ccaaagcaat tctgaaagcc1160
<210>30
<211>349
<212>PRT
<213>人類
<400>30
Met Glu Ala His Asn Ala Ser Ala Pro Phe Asn Phe Thr Leu Pro Pro
1 5 10 15
Asn Phe Gly Lys Arg Pro Thr Asp Leu Ala Leu Ser Val Ile Leu Val
20 25 30
Phe Met Leu Phe Phe Ile Met Leu Ser Leu Gly Cys Thr Met Glu Phe
35 40 45
Ser Lys Ile Lys Ala His Leu Trp Lys Pro Lys Gly Leu Ala Ile Ala
50 55 60
Leu Val Ala Gln Tyr Gly Ile Met Pro Leu Thr Ala Phe Val Leu Gly
65 70 75 80
Lys Val Phe Arg Leu Lys Asn Ile Glu Ala Leu Ala Ile Leu Val Cys
85 90 95
Gly Cys Ser Pro Gly Gly Asn Leu Ser Asn Val Phe Ser Leu Ala Met
100 105 110
Lys Gly Asp Met Asn Leu Ser Ile Val Met Thr Thr Cys Ser Thr Phe
115 120 125
Cys Ala Leu Gly Met Met Pro Leu Leu Leu Tyr Ile Tyr Ser Arg Gly
130 135 140
Ile Tyr Asp Gly Asp Leu Lys Asp Lys Val Pro Tyr Lys Gly Ile Val
145 150 155 160
Ile Ser Leu Val Leu Val Leu Ile Pro Cys Thr Ile Gly Ile Val Leu
165 170 175
Lys Ser Lys Arg Pro Gln Tyr Met Arg Tyr Val Ile Lys Gly Gly Met
180 185 190
Ile Ile Ile Leu Leu Cys Ser Val Ala Val Thr Val Leu Ser Ala Ile
195 200 205
Asn Val Gly Lys Ser Ile Met Phe Ala Met Thr Pro Leu Leu Ile Ala
210 215 220
Thr Ser Ser Leu Met Pro Phe Ile Gly Phe Leu Leu Gly Tyr Val Leu
225 230 235 240
Ser Ala Leu Phe Cys Leu Asn Gly Arg Cys Arg Arg Thr Val Ser Met
245 250 255
Glu Thr Gly Cys Gln Asn Val Gln Leu Cys Ser Thr Ile Leu Asn Val
260 265 270
Ala Phe Pro Pro Glu Val Ile Gly Pro Leu Phe Phe Phe Pro Leu Leu
275 280 285
Tyr Met Ile Phe Gln Leu Gly Glu Gly Leu Leu Leu Ile Ala Ile Phe
290 295 300
Trp Cys Tyr Glu Lys Phe Lys Thr Pro Lys Asp Lys Thr Lys Met Ile
305 310 315 320
Tyr Thr Ala Ala Thr Thr Glu Glu Thr Ile Pro Gly Ala Leu Gly Asn
325 330 335
Gly Thr Tyr Lys Gly Glu Asp Cys Ser Pro Cys Thr Ala
340 345
<210>31
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG29的引物H-AP3
<400>31
aagctttggt cag 13
<210>32
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG29的oligo-dT錨定引物
<400>32
aagctttttt ttttta 16
<210>33
<211>1825
<212>DNA
<213>人類
<400>33
gtatctgggc gcctgagcgc ggcgtgggag ccttgggagc cgccgcagca gggggcacac 60
ccggaaccgg cctgagcgcc cgggaccatg aacggggagg ccatctgcag cgccctgccc 120
accattccct accacaaact cgccgacctg cgctacctga gccgcggcgc ctctggcact 180
gtgtcgtccg cccgccacgc agactggcgc gtccaggtgg ccgtgaagca cctgcacatc 240
cacactccgc tgctcggcag tgaaagaaag gatgtcttaa gagaagctga aattttacac 300
aaagctagat ttagttacat tcttccaatt ttgggaattt gcaatgagcc tgaatttttg 360
ggaatagtta ctgaatacat gccaaatgga tcattaaatg aactcctaca taggaaaact 420
gaatatcctg atgttgcttg gccattgaga tttcgcatcc tgcatgaaat tgcccttggt 480
gtaaattacc tgcacaatat gactcctcct ttacttcatc atgacttgaa gactcagaat 540
atcttattgg acaatgaatt tcatgttaag attgcagatt ttggtttatc aaagtggcgc 600
atgatgtccc tctcacagtc acgaagtagc aaatctgcac cagaaggagg gacaattatc 660
tatatgccac ctgaaaacta tgaacctgga caaaaatcaa gggccagtat caagcacgat 720
atatatagct atgcagttat cacatgggaa gtgttatcca gaaaacagcc ttttgaagat 780
gtcaccaatc ctttgcagat aatgtatagt gtgtcacaag gacatcgacc tgttattaat 840
gaagaaagtt tgccatatga tatacctcac cgagcacgta tgatctctct aatagaaagt 900
ggatgggcac aaaatccaga tgaaagacca tctttcttaa aatgtttaat agaacttgaa 960
ccagttttga gaacatttga agagataact tttcttgaag ctgttattca gctaaagaaa1020
acaaagttac agagtgtttc aagtgccatt cacctatgtg acaagaagaa aatggaatta1080
tctctgaaca tacctgtaaa tcatggtcca caagaggaat catgtggatc ctctcagctc1140
catgaaaata gtggttctcc tgaaacttca aggtccctgc cagctcctca agacaatgat1200
tttttatcta gaaaagctca agactgttat tttatgaagc tgcatcactg tcctggaaat1260
cacagttggg atagcaccat ttctggatct caaagggctg cattctgtga tcacaagacc1320
actccatgct cttcagcaat aataaatcca ctctcaactg caggaaactc agaacgtctg1380
cagcctggta tagcccagca gtggatccag agcaaaaggg aagacattgt gaaccaaatg1440
acagaagcct gccttaacca gtcgctagat gcccttctgt ccagggactt gatcatgaaa1500
gaggactatg aacttgttag taccaagcct acaaggacct caaaagtcag acaattacta1560
gacactactg acatccaagg agaagaattt gccaaagtta tagtacaaaa attgaaagat1620
aacaaacaaa tgggtcttca gccttacccg gaaatacttg tggtttctag atcaccatct1680
ttaaatttac ttcaaaataa aagcatgtaa gtgactgttt ttcaagaaga aatgtgtttc1740
ataaaaggat atttatatct ctgttgcttt gacttttttt atataaaatc cgtgagtatt1800
aaagctttat tgaaggttct ttggg 1825
<210>34
<211>540
<212>PRT
<213>人類
<400>34
Met Asn Gly Glu Ala Ile Cys Ser Ala Leu Pro Thr Ile Pro Tyr His
1 5 10 15
Lys Leu Ala Asp Leu Arg Tyr Leu Ser Arg Gly Ala Ser Gly Thr Val
20 25 30
Ser Ser Ala Arg His Ala Asp Trp Arg Val Gln Val Ala Val Lys His
35 40 45
Leu His Ile His Thr Pro Leu Leu Gly Ser Glu Arg Lys Asp Val Leu
50 55 60
Arg Glu Ala Glu Ile Leu His Lys Ala Arg Phe Ser Tyr Ile Leu Pro
65 70 75 80
Ile Leu Gly Ile Cys Asn Glu Pro Glu Phe Leu Gly Ile Val Thr Glu
85 90 95
Tyr Met Pro Asn Gly Ser Leu Asn Glu Leu Leu His Arg Lys Thr Glu
100 105 110
Tyr Pro Asp Val Ala Trp Pro Leu Arg Phe Arg Ile Leu His Glu Ile
115 120 125
Ala Leu Gly Val Asn Tyr Leu His Asn Met Thr Pro Pro Leu Leu His
130 135 140
His Asp Leu Lys Thr Gln Asn Ile Leu Leu Asp Asn Glu Phe His Val
145 150 155 160
Lys Ile Ala Asp Phe Gly Leu Ser Lys Trp Arg Met Met Ser Leu Ser
165 170 175
Gln Ser Arg Ser Ser Lys Ser Ala Pro Glu Gly Gly Thr Ile Ile Tyr
180 185 190
Met Pro Pro Glu Asn Tyr Glu Pro Gly Gln Lys Ser Arg Ala Ser Ile
195 200 205
Lys His Asp Ile Tyr Ser Tyr Ala Val Ile Thr Trp Glu Val Leu Ser
210 215 220
Arg Lys Gln Pro Phe Glu Asp Val Thr Asn Pro Leu Gln Ile Met Tyr
225 230 235 240
Ser Val Ser Gln Gly His Arg Pro Val Ile Asn Glu Glu Ser Leu Pro
245 250 255
Tyr Asp Ile Pro His Arg Ala Arg Met Ile Ser Leu Ile Glu Ser Gly
260 265 270
Trp Ala Gln Asn Pro Asp Glu Arg Pro Ser Phe Leu Lys Cys Leu Ile
275 280 285
Glu Leu Glu Pro Val Leu Arg Thr Phe Glu Glu Ile Thr Phe Leu Glu
290 295 300
Ala Val Ile Gln Leu Lys Lys Thr Lys Leu Gln Ser Val Ser Ser Ala
305 310 315 320
Ile His Leu Cys Asp Lys Lys Lys Met Glu Leu Ser Leu Asn Ile Pro
325 330 335
Val Asn His Gly Pro Gln Glu Glu Ser Cys Gly Ser Ser Gln Leu His
340 345 350
Glu Asn Ser Gly Ser Pro Glu Thr Ser Arg Ser Leu Pro Ala Pro Gln
355 360 365
Asp Asn Asp Phe Leu Ser Arg Lys Ala Gln Asp Cys Tyr Phe Met Lys
370 375 380
Leu His His Cys Pro Gly Asn His Ser Trp Asp Ser Thr Ile Ser Gly
385 390 395 400
Ser Gln Arg Ala Ala Phe Cys Asp His Lys Thr Thr Pro Cys Ser Ser
405 410 415
Ala Ile Ile Asn Pro Leu Ser Thr Ala Gly Asn Ser Glu Arg Leu Gln
420 425 430
Pro Gly Ile Ala Gln Gln Trp Ile Gln Ser Lys Arg Glu Asp Ile Val
435 440 445
Asn Gln Met Thr Glu Ala Cys Leu Asn Gln Ser Leu Asp Ala Leu Leu
450 455 460
Ser Arg Asp Leu Ile Met Lys Glu Asp Tyr Glu Leu Val Ser Thr Lys
465 470 475 480
Pro Thr Arg Thr Ser Lys Val Arg Gln Leu Leu Asp Thr Thr Asp Ile
485 490 495
Gln Gly Glu Glu Phe Ala Lys Val Ile Val Gln Lys Leu Lys Asp Asn
500 505 510
Lys Gln Met Gly Leu Gln Pro Tyr Pro Glu Ile Leu Val Val Ser Arg
515 520 525
Ser Pro Ser Leu Asn Leu Leu Gln Asn Lys Ser Met
530 535 540
<210>35
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG30的引物H-AP4
<400>35
aagcttctca acg13
<210>36
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG30的oligo-dT錨定引物
<400>36
aagctttttt tttttg 16
<210>37
<211>648
<212>DNA
<213>人類
<400>37
cagggaaacc tcctcacagt tttcatccag ccacgggcca gcatgtctgg gggcaaatac 60
gtagactcgg agggacatct ctacaccgtt cccatccggg aacagggcaa catctacaag120
cccaacaaca aggccatggc agacgagctg agcgagaagc aagtgtacga cgcgcacacc180
aaggagatcg acctggtcaa ccgcgaccct aaacacctca acgatgacgt ggtcaagatt240
gactttgaag atgtgattgc agaaccagaa gggacacaca gttttgacgg catttggaag300
gccagcttca ccaccttcac tgtgacgaaa tactggtttt accgcttgct gtctgccctc360
tttggcatcc cgatggcact catctggggc atttacttcg ccattctctc tttcctgcac420
atctgggcag ttgtaccatg cattaagagc ttcctgattg agattcagtg catcagccgt480
gtctattcca tctacgtcca caccgtctgt gacccactct ttgaagctgt tgggaaaata540
ttcagcaatg tccgcatcaa cttgcagaaa gaaatataaa tgacatttca aggatagaag600
tatacctgat tttttttcct tttaattttc ctggtgccaa tttcaagt 648
<210>38
<211>178
<212>PRT
<213>人類
<400>38
Met Ser Gly Gly Lys Tyr Val Asp Ser Glu Gly His Leu Tyr Thr Val
1 5 10 15
Pro Ile Arg Glu Gln Gly Asn Ile Tyr Lys Pro Asn Asn Lys Ala Met
20 25 30
Ala Asp Glu Leu Ser Glu Lys Gln Val Tyr Asp Ala His Thr Lys Glu
35 40 45
Ile Asp Leu Val Asn Arg Asp Pro Lys His Leu Asn Asp Asp Val Val
50 55 60
Lys Ile Asp Phe Glu Asp Val Ile Ala Glu Pro Glu Gly Thr His Ser
65 70 75 80
Phe Asp Gly Ile Trp Lys Ala Ser Phe Thr Thr Phe Thr Val Thr Lys
85 90 95
Tyr Trp Phe Tyr Arg Leu Leu Ser Ala Leu Phe Gly Ile Pro Met Ala
100 105 110
Leu Ile Trp Gly Ile Tyr Phe Ala Ile Leu Ser Phe Leu His Ile Trp
115 120 125
Ala Val Val Pro Cys Ile Lys Ser Phe Leu Ile Glu Ile Gln Cys Ile
130 135 140
Ser Arg Val Tyr Ser Ile Tyr Val His Thr Val Cys Asp Pro Leu Phe
145 150 155 160
Glu Ala Val Gly Lys Ile Phe Ser Asn Val Arg Ile Asn Leu Gln Lys
165 170 175
Glu Ile
<210>39
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG32的引物H-AP8
<400>39
aagcttttac cgc 13
<210>40
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG32的oligo-dT錨定引物
<400>40
aagctttttt tttttg 16
<210>41
<211>406
<212>DNA
<213>人類
<400>41
ggcctcgtcc ttctcttacc gccatcttgg ctcctgtgga ggcctgctgg gaacgggact 60
tctaaaagga actatgtctg gaaggctgtg gtccaaggcc atttttgctg gctataagcg 120
gggtctccgg aaccaaaggg agcacacagc tcttcttaaa attgaaggtg tttacgcccg 180
agatgaaaca gaattctatt tgggcaagag atgcgcttat gtatataaag caaagaacaa 240
cacagtcact cctggcggca aaccaaacaa aaccagagtc atctggggaa aagtaactcg 300
ggcccatgga aacagtggca tggttcgtgc caaattccga agcaatcttc ctgccaaggc360
cattggacac agaatccgag tgatgctgta cccctcaagg atttaa 406
<210>42
<211>110
<212>PRT
<213>人類
<400>42
Met Ser Gly Arg Leu Trp Ser Lys Ala Ile Phe Ala Gly Tyr Lys Arg
1 5 10 15
Gly Leu Arg Asn Gln Arg Glu His Thr Ala Leu Leu Lys Ile Glu Gly
20 25 30
Val Tyr Ala Arg Asp Glu Thr Glu Phe Tyr Leu Gly Lys Arg Cys Ala
35 40 45
Tyr Val Tyr Lys Ala Lys Asn Asn Thr Val Thr Pro Gly Gly Lys Pro
50 55 60
Asn Lys Thr Arg Val Ile Trp Gly Lys Val Thr Arg Ala His Gly Asn
65 70 75 80
Ser Gly Met Val Arg Ala Lys Phe Arg Ser Asn Leu Pro Ala Lys Ala
85 90 95
Ile Gly His Arg Ile Arg Val Met Leu Tyr Pro Ser Arg Ile
100 105 110
<210>43
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG33的引物H-AP33
<400>43
aagcttgctg ctc 13
<210>44
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG33的oligo-dT錨定引物
<400>44
aagctttttt tttttg16
<210>45
<211>560
<212>DNA
<213>人類
<400>45
catcatggcg gatcaaggtg aaaaggagaa ccccatgcgg gaacttcgca tccgcaaact 60
ctgtctcaac atctgtgttg gggagagtgg agacagactg gcgcgagcag ccaaggtgtt120
ggagcagctc acagggcaga cccctgtgtt ttccaaagct agatacactg tcagatcctt180
tggcatccgg agaaatgaaa agattgctgt ccactgcaca gttcgagggg ccaaggcaga240
agaaatcttg gagaagggtc taaaggtgcg ggagtatgag ttaagaaaaa acaacttctc300
agatactgga aactttggtt ttgggatcca ggaacacatc gatctgggta tcaaatatga360
cccaagcatt ggtatctacg gcctggactt ctatgtggtg ctgggtaggc caggtttcag420
catcgcagac aagaagcgca ggacaggctg cattggggcc aaacacagaa tcagcaaaga480
ggaggccatg cgctggttcc agcagaagta tgatgggatc atcct tcctg gcaaataaat 540
tcccgtttct atccaaaaga560
<210>46
<211>177
<212>PRT
<213>人類
<400>46
Met Ala Asp Gln Gly Glu Lys Glu Asn Pro Met Arg Glu Leu Arg Ile
1 5 10 15
Arg Lys Leu Cys Leu Asn Ile Cys Val Gly Glu Ser Gly Asp Arg Leu
20 25 30
Ala Arg Ala Ala Lys Val Leu Glu Gln Leu Thr Gly Gln Thr Pro Val
35 40 45
Phe Ser Lys Ala Arg Tyr Thr Val Arg Ser Phe Gly Ile Arg Arg Asn
50 55 60
Glu Lys Ile Ala Val His Cys Thr Val Arg Gly Ala Lys Ala Glu Glu
65 70 75 80
Ile Leu Glu Lys Gly Leu Lys Val Arg Glu Tyr Glu Leu Arg Lys Asn
85 90 95
Asn Phe Ser Asp Thr Gly Asn Phe Gly Phe Gly Ile Gln Glu His Ile
100 105 110
Asp Leu Gly Ile Lys Tyr Asp Pro Ser Ile Gly Ile Tyr Gly Leu Asp
115 120 125
Phe Tyr Val Val Leu Gly Arg Pro Gly Phe Ser Ile Ala Asp Lys Lys
130 135 140
Arg Arg Thr Gly Cys Ile Gly Ala Lys His Arg Ile Ser Lys Glu Glu
145 150 155 160
Ala Met Arg Trp Phe Gln Gln Lys Tyr Asp Gly Ile Ile Leu Pro Gly
165 170 175
Lys
<210>47
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG34的引物H-AP35
<400>47
aagctcagg gca 13
<210>48
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG34的oligo-dT錨定引物
<400>48
aagctttttt tttttc 16
<210>49
<211>1398
<212>DNA
<213>人類
<400>49
tttctttgcg gaatcaccat ggcggctggg accctgtaca cgtatcctga aaactggagg 60
gccttcaagg ctctcatcgc tgctcagtac agcggggctc aggtccgcgt gctctccgca 120
ccaccccact tccattttgg ccaaaccaac cgcacccctg aatttctccg caaatttcct 180
gccggcaagg tcccagcatt tgagggtgat gatggattct gtgtgtttga gagcaacgcc 240
attgcctact atgtgagcaa tgaggagctg cggggaagta ctccagaggc agcagcccag 300
gtggtgcagt gggtgagctt tgctgattcc gatatagtgc ccccagccag tacctgggtg 360
ttccccacct tgggcatcat gcaccacaac aaacaggcca ctgagaatgc aaaggaggaa 420
gtgaggcgaa ttctggggct gctggatgct tacttgaaga cgaggacttt tctggtgggc 480
gaacgagtga cattggctga catcacagtt gtctgcaccc tgttgtggct ctataagcag 540
gttctagagc cttctttccg ccaggccttt cccaatacca accgctggtt cctcacctgc 600
attaaccagc cccagttccg ggctgtcttg ggcgaagtga aactgtgtga gaagatggcc 660
cagtttgatg ctaaaaagtt tgcagagacc caacctaaaa aggacacacc acggaaagag 720
aagggttcac gggaagagaa gcagaagccc caggctgagc ggaaggagga gaaaaaggcg 780
gctgcccctg ctcctgagga ggagatggat gaatgtgagc aggcgctggc tgctgagccc 840
aaggccaagg accccttcgc tcacctgccc aagagtacct ttgtgttgga tgaatttaag 900
cgcaagtact ccaatgagga cacactctct gtggcactgc catatttctg ggagcacttt 960
gataaggacg gctggtccct gtggtactca gagtatcgct tccctgaaga actcactcag1020
accttcatga gctgcaatct catcactgga atgttccagc gactggacaa gctgaggaag1080
aatgccttcg ccagtgtcat cctttttgga accaacaata gcagctccat ttctggagtc1140
tgggtcttcc gaggccagga gcttgccttt ccgctgagtc cagattggca ggtggactac1200
gagtcataca catggcggaa actggatcct ggcagcgagg agacccagac gctggttcga1260
gagtactttt cctgggaggg ggccttccag catgtgggca aagccttcaa tcagggcaag1320
atcttcaagt gaacatctct tgccatcacc tagctgcctg cacctgccct tcagggagat1380
gggggtcatt aaaggaaa 1398
<210>50
<211>437
<212>PRT
<213>人類
<400>50
Met Ala Ala Gly Thr Leu Tyr Thr Tyr Pro Glu Asn Trp Arg Ala Phe
1 5 10 15
Lys Ala Leu Ile Ala Ala Gln Tyr Ser Gly Ala Gln Val Arg Val Leu
20 25 30
Ser Ala Pro Pro His Phe His Phe Gly Gln Thr Asn Arg Thr Pro Glu
35 40 45
Phe Leu Arg Lys Phe Pro Ala Gly Lys Val Pro Ala Phe Glu Gly Asp
50 55 60
Asp Gly Phe Cys Val Phe Glu Ser Asn Ala Ile Ala Tyr Tyr Val Ser
65 70 75 80
Asn Glu Glu Leu Arg Gly Ser Thr Pro Glu Ala Ala Ala Gln Val Val
85 90 95
Gln Trp Val Ser Phe Ala Asp Ser Asp Ile Val Pro Pro Ala Ser Thr
100 105 110
Trp Val Phe Pro Thr Leu Gly Ile Met His His Asn Lys Gln Ala Thr
115 120125
Glu Asn Ala Lys Glu Glu Val Arg Arg Ile Leu Gly Leu Leu Asp Ala
130 135 140
Tyr Leu Lys Thr Arg Thr Phe Leu Val Gly Glu Arg Val Thr Leu Ala
145 150 155 160
Asp Ile Thr Val Val Cys Thr Leu Leu Trp Leu Tyr Lys Gln Val Leu
165 170 175
Glu Pro Ser Phe Arg Gln Ala Phe Pro Asn Thr Asn Arg Trp Phe Leu
180 185 190
Thr Cys Ile Asn Gln Pro Gln Phe Arg Ala Val Leu Gly Glu Val Lys
195 200 205
Leu Cys Glu Lys Met Ala Gln Phe Asp Ala Lys Lys Phe Ala Glu Thr
210 215 220
Gln Pro Lys Lys Asp Thr Pro Arg Lys Glu Lys Gly Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Lys Gln Lys Pro Gln Ala Glu Arg Lys Glu Glu Lys Lys Ala Ala Ala
245 250 255
Pro Ala Pro Glu Glu Glu Met Asp Glu Cys Glu Gln Ala Leu Ala Ala
260 265 270
Glu Pro Lys Ala Lys Asp Pro Phe Ala His Leu Pro Lys Ser Thr Phe
275 280 285
Val Leu Asp Glu Phe Lys Arg Lys Tyr Ser Asn Glu Asp Thr Leu Ser
290 295 300
Val Ala Leu Pro Tyr Phe Trp Glu His Phe Asp Lys Asp Gly Trp Ser
305 310 315 320
Leu Trp Tyr Ser Glu Tyr Arg Phe Pro Glu Glu Leu Thr Gln Thr Phe
325 330 335
Met Ser Cys Asn Leu Ile Thr Gly Met Phe Gln Arg Leu Asp Lys Leu
340 345 350
Arg Lys Asn Ala Phe Ala Ser Val Ile Leu Phe Gly Thr Asn Asn Ser
355 360 365
Ser Ser Ile Ser Gly Val Trp Val Phe Arg Gly Gln Glu Leu Ala Phe
370 375 380
Pro Leu Ser Pro Asp Trp Gln Val Asp Tyr Glu Ser Tyr Thr Trp Arg
385 390 395 400
Lys Leu Asp Pro Gly Ser Glu Glu Thr Gln Thr Leu Val Arg Glu Tyr
405 410 415
Phe Ser Trp Glu Gly Ala Phe Gln His Val Gly Lys Ala Phe Asn Gln
420 425 430
Gly Lys Ile Phe Lys
435
<210>51
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG35的引物H-AP3
<400>51
aagctttggt cag13
<210>52
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG35的oligo-dT錨定引物
<400>52
aagctttttt tttttc 16
<210>53
<211>560
<212>DNA
<213>人類
<400>53
aggccgtagg aggaagatgg cggtggagtc gcgcgttacc caggaggaaa ttaagaagga 60
gccagagaaa ccgatcgacc gcgagaagac atgcccactg ttgctacggg tcttcaccac 120
caataacggc cgccaccacc gaatggacga gttctcccgg ggaaatgtac cgtccagcga 180
gttgcagatc tacacttgga tggatgcaac tttgaaagaa ctgacaagct tagtaaaaga 240
agtctaccca gaagctagaa agaagggcac tcacttcaat tttgcaatcg tttttacaga 300
tgttaaaaga cctggctatc gagttaagga gattggcagc accatgtctg gcagaaaggg 360
gactgatgat tccatgaccc tgcagtcgca gaagttccag ataggagatt acttggacat 420
agcaattacc cctccaaatc gggcaccacc tccttcaggg cgcatgagac catattaaat 480
tctatttact atttgttgaa tttatttttc cgtcagttat gtaaaataaa catactcttc 540
ttcctcccct gattattgcc 560
<210>54
<211>153
<212>PRT
<213>人類
<400>54
Met Ala Val Glu Ser Arg Val Thr Gln Glu Glu Ile Lys Lys Glu Pro
1 5 10 15
Glu Lys Pro Ile Asp Arg Glu Lys Thr Cys Pro Leu Leu Leu Arg Val
20 25 30
Phe Thr Thr Asn Asn Gly Arg His His Arg Met Asp Glu Phe Ser Arg
35 40 45
Gly Asn Val Pro Ser Ser Glu Leu Gln Ile Tyr Thr Trp Met Asp Ala
50 55 60
Thr Leu Lys Glu Leu Thr Ser Leu Val Lys Glu Val Tyr Pro Glu Ala
65 70 75 80
Arg Lys Lys Gly Thr His Phe Asn Phe Ala Ile Val Phe Thr Asp Val
85 90 95
Lys Arg Pro Gly Tyr Arg Val Lys Glu Ile Gly Ser Thr Met Ser Gly
100 105 110
Arg Lys Gly Thr Asp Asp Ser Met Thr Leu Gln Ser Gln Lys Phe Gln
115 120 125
Ile Gly Asp Tyr Leu Asp Ile Ala Ile Thr Pro Pro Asn Arg Ala Pro
130 135 140
Pro Pro Ser Gly Arg Met Arg Pro Tyr
145 150
<210>55
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG38的引物H-AP12
<400>55
aagcttgagt gct 13
<210>56
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG38的oligo-dT錨定引物
<400>56
aagctttttt tttttc 16
<210>57
<211>2874
<212>DNA
<213>人類
<400>57
caacctccag gagctagcag cgggcgcgga ccgggcagtt tccgcgctca gcacaggcag 60
ctcgcggtca tgggcggctc agcctccagc cagctggacg agggcaagtg cgcttacatc 120
cgagggaaaa ctgaggctgc catcaaagac ttcagtccct actacagtcg tcagtactct 180
gtggctttct gcaatcacgt gcgcactgaa gtagaacagc aaagagattt aacgtcacag 240
tttttgaaga ccaagccacc attggcgcct ggaactattt tgtatgaagc agagctatca 300
caattttctg aagacataaa gaagtggaag gagagatacg ttgtagttaa aaatgattat 360
gctgtggaga gctatgagaa taaagaggcc tatcagagag gagctgctcc taaatgtcga 420
attcttccag ccggtggcaa ggtgttaacc tcagaagatg aatataatct gttgtctgac 480
aggcatttcc cagaccctct tgcctccagt gagaaggaga acactcagcc ctttgtggtc 540
ctgcccaagg aattcccagt gtacctgtgg cagcccttct tcagacacgg ctacttctgc 600
ttccacgagg ctgctgacca gaagaggttt agtgccctcc tgagtgactg cgtcaggcat 660
ctcaatcatg attacatgaa gcagatgaca tttgaagccc aagccttttt agaagctgtg 720
caattcttcc gacaggagaa gggtcactat ggttcctggg aaatgatcac tggggatgaa 780
atccagatcc tgagtaacct ggtgatggag gagctcctgc ccactcttca gacagacctg 840
ctgcctaaga tgaaggggaa gaagaatgac agaaagagga cgtggcttgg tctcctcgag 900
gaggcctaca ccctggttca gcatcaagtt tcagaaggat taagtgcctt gaaggaggaa 960
tgcagagctc tgacaaaggg cctggaagga acgatccgtt ctgacatgga tcagattgtg1020
aactcaaaga actatttaat tggaaagatc aaagcgatgg tggcccagcc ggcggagaaa1080
agctgcttgg agagtgtgca gccattcctg gcatccatcc tggaggagct catgggacca1140
gtgagctcgg gattcagtga agtacgtgta ctctttgaga aagaggtgaa tgaagtcagc1200
cagaacttcc agaccaccaa agacagtgtc cagctaaagg agcatctaga ccggcttatg1260
aatcttccgc tgcattccgt gaagatggaa ccttgttata ctaaagtcaa cctgcttcac1320
gagcgcctgc aggatctcaa gagccgcttc agattccccc acattgatct ggtggttcag1380
aggacacaga actacatgca ggagctaatg gagaatgcag tgttcacttt tgagcagttg1440
ctttccccac atctccaagg agaggcctcc aaaactgcag ttgccattga gaaggttaaa1500
ctccgagtct taaagcaata tgattatgac agcagcacca tccgaaagaa gatatttcaa1560
gaggcactag ttcaaatcac acttcccact gtgcagaagg cactggcgtc cacatgcaaa1620
ccagagcttc agaaatacga gcagttcatc tttgcagatc ataccaatat gattcacgtt1680
gaaaatgtct atgaggagat tttacatcag atcctgcttg atgaaactct gaaagtgata1740
aaggaagctg ctatcttgaa gaaacacaac ttatttgaag ataacatggc cttgcccagt1800
gaaagtgtgt ccagcttaac agatctaaag ccccccacag ggtcaaacca ggccagccct1860
gccaggagag cttctgccat tctgccagga gttctgggta gtgagaccct cagtaacgaa1920
gtattccagg agtcagagga agagaagcag cctgaggtcc ctagctcgtt ggccaaagga1980
gaaagccttt ctctccctgg gccaagccca cccccagatg ggactgagca ggtgattatt2040
tcaagagtgg atgaccccgt ggtgaatcct gtggcaacag aggacacagc aggactcccg2100
ggcacatgct catcagagct ggagtttgga gggacccttg aggatgaaga acccgcccag2160
gaagagccag aacccatcac tgcctcgggt tctttgaagg cgctcagaaa gttgctgaca2220
gcgtccgtgg aagtaccagt ggactctgct ccagtgatgg aagaagatac gaatggggag2280
agccacgttc cccaagaaaa tgaagaagaa gaggaaaaag agcccagtca ggcagctgcc2340
atccaccccg acaactgtga agaaagtgaa gtcagcgaga gggaggccca acctccctgt2400
cccgaggccc atggggagga gttgggggga tttccagagg taggcagccc agcctctccg2460
ccagccagtg gagggctcac cgaggagccc ctggggccca tggaggggga gctcccagga2520
gaggcctgca cactcactgc ccatgaagga agagggggca agtgtaccga ggaaggggat2580
gcctcacagc aagagggctg caccttaggt tctgacccca tctgcctcag tgagagccag2640
gtttctgagg aacaagaaga gatgggaggg caaagcagcg cggcccaggc cacggccagt2700
gtgaatgcag aggagatcaa ggtagcccgt attcatgagt gtcagtgggt ggtggaggat2760
gctccaaacc cggatgtcct gctgtcacac aaagatgacg tgaaggaggg agaaggtggt2820
caggagagtt tcccagagct gccctcagag gagtgaaagg gacaatttgg ctga 2874
<210>58
<211>928
<212>PRT
<213>人類
<400>58
Met Gly Gly Ser Ala Ser Ser Gln Leu Asp Glu Gly Lys Cys Ala Tyr
1 5 10 15
Ile Arg Gly Lys Thr Glu Ala Ala Ile Lys Asp Phe Ser Pro Tyr Tyr
20 25 30
Ser Arg Gln Tyr Ser Val Ala Phe Cys Asn His Val Arg Thr Glu Val
35 40 45
Glu Gln Gln Arg Asp Leu Thr Ser Gln Phe Leu Lys Thr Lys Pro Pro
50 55 60
Leu Ala Pro Gly Thr Ile Leu Tyr Glu Ala Glu Leu Ser Gln Phe Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ile Lys Lys Trp Lys Glu Arg Tyr Val Val Val Lys Asn Asp
85 90 95
Tyr Ala Val Glu Ser Tyr Glu Asn Lys Glu Ala Tyr Gln Arg Gly Ala
100 105 110
Ala Pro Lys Cys Arg Ile Leu Pro Ala Gly Gly Lys Val Leu Thr Ser
115 120 125
Glu Asp Glu Tyr Asn Leu Leu Ser Asp Arg His Phe Pro Asp Pro Leu
130 135 140
Ala Ser Ser Glu Lys Glu Asn Thr Gln Pro Phe Val Val Leu Pro Lys
145 150 155 160
Glu Phe Pro Val Tyr Leu Trp Gln Pro Phe Phe Arg His Gly Tyr Phe
165 170 175
Cys Phe His Glu Ala Ala Asp Gln Lys Arg Phe Ser Ala Leu Leu Ser
180 185 190
Asp Cys Val Arg His Leu Asn His Asp Tyr Met Lys Gln Met Thr Phe
195 200 205
Glu Ala Gln Ala Phe Leu Glu Ala Val Gln Phe Phe Arg Gln Glu Lys
210 215 220
Gly His Tyr Gly Ser Trp Glu Met Ile Thr Gly Asp Glu Ile Gln Ile
225 230 235 240
Leu Ser Asn Leu Val Met Glu Glu Leu Leu Pro Thr Leu Gln Thr Asp
245 250 255
Leu Leu Pro Lys Met Lys Gly Lys Lys Asn Asp Arg Lys Arg Thr Trp
260 265 270
Leu Gly Leu Leu Glu Glu Ala Tyr Thr Leu Val Gln His Gln Val Ser
275 280 285
Glu Gly Leu Ser Ala Leu Lys Glu Glu Cys Arg Ala Leu Thr Lys Gly
290 295 300
Leu Glu Gly Thr Ile Arg Ser Asp Met Asp Gln Ile Val Asn Ser Lys
305 310 315 320
Asn Tyr Leu Ile Gly Lys Ile Lys Ala Met Val Ala Gln Pro Ala Glu
325 330 335
Lys Ser Cys Leu Glu Ser Val Gln Pro Phe Leu Ala Ser Ile Leu Glu
340 345 350
Glu Leu Met Gly Pro Val Ser Ser Gly Phe Ser Glu Val Arg Val Leu
355 360 365
Phe Glu Lys Glu Val Asn Glu Val Ser Gln Asn Phe Gln Thr Thr Lys
370 375 380
Asp Ser Val Gln Leu Lys Glu His Leu Asp Arg Leu Met Asn Leu Pro
385 390 395 400
Leu His Ser Val Lys Met Glu Pro Cys Tyr Thr Lys Val Asn Leu Leu
405 410 415
His Glu Arg Leu Gln Asp Leu Lys Ser Arg Phe Arg Phe Pro His Ile
420 425 430
Asp Leu Val Val Gln Arg Thr Gln Asn Tyr Met Gln Glu Leu Met Glu
435 440 445
Asn Ala Val Phe Thr Phe Glu Gln Leu Leu Ser Pro His Leu Gln Gly
450 455 460
Glu Ala Ser Lys Thr Ala Val Ala Ile Glu Lys Val Lys Leu Arg Val
465 470 475 480
Leu Lys Gln Tyr Asp Tyr Asp Ser Ser Thr Ile Arg Lys Lys Ile Phe
485 490 495
Gln Glu Ala Leu Val Gln Ile Thr Leu Pro Thr Val Gln Lys Ala Leu
500 505 510
Ala Ser Thr Cys Lys Pro Glu Leu Gln Lys Tyr Glu Gln Phe Ile Phe
515 520 525
Ala Asp His Thr Asn Met Ile His Val Glu Asn Val Tyr Glu Glu Ile
530 535 540
Leu His Gln Ile Leu Leu Asp Glu Thr Leu Lys Val Ile Lys Glu Ala
545 550 555 560
Ala Ile Leu Lys Lys His Asn Leu Phe Glu Asp Asn Met Ala Leu Pro
565 570 575
Ser Glu Ser Val Ser Ser Leu Thr Asp Leu Lys Pro Pro Thr Gly Ser
580 585 590
Asn Gln Ala Ser Pro Ala Arg Arg Ala Ser Ala Ile Leu Pro Gly Val
595 600 605
Leu Gly Ser Glu Thr Leu Ser Asn Glu Val Phe Gln Glu Ser Glu Glu
610 615 620
Glu Lys Gln Pro Glu Val Pro Ser Ser Leu Ala Lys Gly Glu Ser Leu
625 630 635 640
Ser Leu Pro Gly Pro Ser Pro Pro Pro Asp Gly Thr Glu Gln Val Ile
645 650 655
Ile Ser Arg Val Asp Asp Pro Val Val Asn Pro Val Ala Thr Glu Asp
660 665 670
Thr Ala Gly Leu Pro Gly Thr Cys Ser Ser Glu Leu Glu Phe Gly Gly
675 680 685
Thr Leu Glu Asp Glu Glu Pro Ala Gln Glu Glu Pro Glu Pro Ile Thr
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Ala Ser Gly Ser Leu Lys Ala Leu Arg Lys Leu Leu Thr Ala Ser Val
705 710 715 720
Glu Val Pro Val Asp Ser Ala Pro Val Met Glu Glu Asp Thr Asn Gly
725 730 735
Glu Ser His Val Pro Gln Glu Asn Glu Glu Glu Glu Glu Lys Glu Pro
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Ser Gln Ala Ala Ala Ile His Pro Asp Asn Cys Glu Glu Ser Glu Val
755 760 765
Ser Glu Arg Glu Ala Gln Pro Pro Cys Pro Glu Ala His Gly Glu Glu
770 775 780
Leu Gly Gly Phe Pro Glu Val Gly Ser Pro Ala Ser Pro Pro Ala Ser
785 790795 800
Gly Gly Leu Thr Glu Glu Pro Leu Gly Pro Met Glu Gly Glu Leu Pro
805 810 815
Gly Glu Ala Cys Thr Leu Thr Ala His Glu Gly Arg Gly Gly Lys Cys
820 825 830
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835 840 845
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850 855860
Met Gly Gly Gln Ser Ser Ala Ala Gln Ala Thr Ala Ser Val Asn Ala
865 870 875 880
Glu Glu Ile Lys Val Ala Arg Ile His Glu Cys Gln Trp Val Val Glu
885 890 895
Asp Ala Pro Asn Pro Asp Val Leu Leu Ser His Lys Asp Asp Val Lys
900 905 910
Glu Gly Glu Gly Gly Gln Glu Ser Phe Pro Glu Leu Pro Ser Glu Glu
915 920 925
<210>59
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG39的引物H-AP12
<400>59
aagcttgagt gct 13
<210>60
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG39的oligo-dT錨定引物
<400>60
aagctttttt ttttta16
<210>61
<211>3693
<212>DNA
<213>人類
<400>61
ccagtattga tcgggagagc cggagcgagc tcttcgggga gcagcgatgc gaccctccgg60
gacggccggg gcagcgctcc tggcgctgct ggctgcgctc tgcccggcga gtcgggctct 120
ggaggaaaag aaagtttgcc aatgcacgag taacaagctc acgcagttgg gcacttttga 180
agatcatttt ctcagcctcc agaggatgtt caataactgt gaggtggtcc ttgggaattt 240
ggaaattacc tatgtgcaga ggaattatga tctttccttc ttaaagacca tccaggaggt 300
ggctggttat gtcctcattg ccctcaacac agtggagcga attcctttgg aaaacctgca 360
gatcatcaga ggaaatatgt actacgaaaa ttcctatgcc ttagcagtct tatctaacta 420
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tggcgccgtg cggttcagca acaaccctgc cctgtgcaac gtggagagca tccagtggcg 540
ggacatagtc agcagtgact ttctcagcaa catgtcgatg gacttccaga accacctggg 600
cagctgccaa aagtgtgatc caagctgtcc caatgggagc tgctggggtg caggagagga 660
gaactgccag aaactgacca aaatcatctg tgcccagcag tgctccgggc gctgccgtgg 720
caagtccccc agtgactgct gccacaacca gtgtgctgca ggctgcacag gcccccggga 780
gagcgactgc ctggtctgcc gcaaattccg agacgaagcc acgtgcaagg acacctgccc 840
cccactcatg ctctacaacc ccaccacgta ccagatggat gtgaaccccg agggcaaata 900
cagctttggt gccacctgcg tgaagaagtg tccccgtaat tatgtggtga cagatcacgg 960
ctcgtgcgtc cgagcctgtg gggccgacag ctatgagatg gaggaagacg gcgtccgcaa1020
gtgtaagaag tgcgaagggc cttgccgcaa agtgtgtaac ggaataggta ttggtgaatt1080
taaagactca ctctccataa atgctacgaa tattaaacac ttcaaaaact gcacctccat1140
cagtggcgat ctccacatcc tgccggtggc atttaggggt gactccttca cacatactcc1200
tcctctggat ccacaggaac tggatattct gaaaaccgta aaggaaatca cagggttttt1260
gctgattcag gcttggcctg aaaacaggac ggacctccat gcctttgaga acctagaaat1320
catacgcggc aggaccaagc aacatggtca gttttctctt gcagtcgtca gcctgaacat1380
aacatccttg ggattacgct ccctcaagga gataagtgat ggagatgtga taatttcagg1440
aaacaaaaat ttgtgctatg caaatacaat aaactggaaa aaactgtttg ggacctccgg1500
tcagaaaacc aaaattataa gcaacagagg tgaaaacagc tgcaaggcca caggccaggt1560
ctgccatgcc ttgtgctccc ccgagggctg ctggggcccg gagcccaggg actgcgtctc1620
ttgccggaat gtcagccgag gcagggaatg cgtggacaag tgcaaccttc tggagggtga1680
gccaagggag tttgtggaga actctgagtg catacagtgc cacccagagt gcctgcctca1740
ggccatgaac atcacctgca caggacgggg accagacaac tgtatccagt gtgcccacta1800
cattgacggc ccccactgcg tcaagacctg cccggcagga gtcatgggag aaaacaacac1860
cctggtctgg aagtacgcag acgccggcca tgtgtgccac ctgtgccatc caaactgcac1920
ctacggatgc actgggccag gtcttgaagg ctgtccaacg aatgggccta agatcccgtc1980
catcgccact gggatggtgg gggccctcct cttgctgctg gtggtggccc tggggatcgg2040
cctcttcatg cgaaggcgcc acatcgttcg gaagcgcacg ctgcggaggc tgctgcagga2100
gagggagctt gtggagcctc ttacacccag tggagaagct cccaaccaag ctctcttgag2160
gatcttgaag gaaactgaat tcaaaaagat caaagtgctg ggctccggtg cgttcggcac2220
ggtgtataag ggactctgga tcccagaagg tgagaaagtt aaaattcccg tcgctatcaa2280
ggaattaaga gaagcaacat ctccgaaagc caacaaggaa atcctcgatg aagcctacgt2340
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cgtgcagctc atcacgcagc tcatgccctt cggctgcctc ctggactatg tccgggaaca2460
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ggatggagtc tgctggcatc catgaaacca cctacaacag catcatgaag tgtgatattg1260
acatcaggaa ggacctctat gctaacaatg tcctatcagg gggcaccact atgtaccctg1320
gcattgccga ccgaatgcag aaggagatca cggccctagc acccagcacc atgaagatca1380
agatcattgc ccctccggag cgcaaatact ctgtctggat cggtggctcc atcctggcct1440
ctctgtccac cttccagcag atgtggatca gcaaacagga atacgatgaa gccgggcctt1500
ccattgtcca ccgcaaatgc ttctaaaaca ctttcctgct cctctctgtc tctagcacac1560
aactgtgaat gtcctgtgga attatgcctt cagttctttt ccaaatcatt cctagccaaa1620
gctctgactc gttacctatg tgttttttaa taaatctgaa ataggctact ggtaaaaaaa1680
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaa 1715
<210>74
<211>377
<212>PRT
<213>人類
<400>74
Met Cys Glu Glu Glu Asp Ser Thr Ala Leu Val Cys Asp Asn Gly Ser
1 5 10 15
Gly Leu Cys Lys Ala Gly Phe Ala Gly Asp Asp Ala Pro Arg Ala Val
20 25 30
Phe Pro Ser Ile Val Gly Arg Pro Arg His Gln Gly Val Met Val Gly
35 40 45
Met Gly Gln Lys Asp Ser Tyr Val Gly Asp Glu Ala Gln Ser Lys Arg
50 55 60
Gly Ile Leu Thr Leu Lys Tyr Pro Ile Glu His Gly Ile Ile Thr Asn
65 70 75 80
Trp Asp Asp Met Glu Lys Ile Trp His His Ser Phe Tyr Asn Glu Leu
85 90 95
Arg Val Ala Pro Glu Glu His Pro Thr Leu Leu Thr Glu Ala Pro Leu
100 105 110
Asn Pro Lys Ala Asn Arg Glu Lys Met Thr Gln Ile Met Phe Glu Thr
115 120 125
Phe Asn Val Pro Ala Met Tyr Val Ala Ile Gln Ala Val Leu Ser Leu
130 135 140
Tyr Ala Ser Gly Arg Thr Thr Gly Ile Val Leu Asp Ser Gly Asp Gly
145 150 155 160
Val Thr His Asn Val Pro Ile Tyr Glu Gly Tyr Ala Leu Pro His Ala
165 170 175
Ile Met Arg Leu Asp Leu Ala Gly Arg Asp Leu Thr Asp Tyr Leu Met
180 185 190
Lys Ile Leu Thr Glu Arg Gly Tyr Ser Phe Val Thr Thr Ala Glu Arg
195 200 205
Glu Ile Val Arg Asp Ile Lys Glu Lys Leu Cys Tyr Val Ala Leu Asp
210 215 220
Phe Glu Asn Glu Met Ala Thr Ala Ala Ser Ser Ser Ser Leu Glu Lys
225 230 235 240
Ser Tyr Glu Leu Pro Asp Gly Gln Val Ile Thr Ile Gly Asn Glu Arg
245 250 255
Phe Arg Cys Pro Glu Thr Leu Phe Gln Pro Ser Phe Ile Gly Met Glu
260 265 270
Ser Ala Gly Ile His Glu Thr Thr Tyr Asn Ser Ile Met Lys Cys Asp
275 280 285
Ile Asp Ile Arg Lys Asp Leu Tyr Ala Asn Asn Val Leu Ser Gly Gly
290 295 300
Thr Thr Met Tyr Pro Gly Ile Ala Asp Arg Met Gln Lys Glu Ile Thr
305 310 315 320
Ala Leu Ala Pro Ser Thr Met Lys Ile Lys Ile Ile Ala Pro Pro Glu
325 330 335
Arg Lys Tyr Ser Val Trp Ile Gly Gly Ser Ile Leu Ala Ser Leu Ser
340 345 350
Thr Phe Gln Gln Met Trp Ile Ser Lys Gln Glu Tyr Asp Glu Ala Gly
355 360 365
Pro Ser Ile Val His Arg Lys Cys Phe
370 375
<210>75
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<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG46的引物H-AP16
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<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG46的oligo-dT錨定引物
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aagctttttt ttttta 16
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<212>DNA
<213>人類
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gtctgtgtgc agaggggatt caacttcaat ttttctgcag tggctctgag tccagcccct 60
tacttaaaga tctggaaagc atgaagactg ggcttttttt cctatgtctc ttgggaactg 120
cagctgcaat cccgacaaat gcaagattat tatctgatca ttccaaacca actgctgaaa 180
cggtagcacc cgacaacact gcaatcccca gtttaagggc tgaagatgaa gaaaatgaaa 240
aagaaacagc agtatccaca gaagacgatt cccaccataa ggctgaaaaa tcatcagtac 300
taaagtcaaa agaggaaagc catgaacagt cagcagaaca gggcaagagt tctagccaag 360
agctgggatt gaaggatcaa gaggacagtg atggtgactt aagtgtgaat ttggagtatg 420
caccaactga aggtacattg gacataaaag aagatatgag tgagcctcag gagaaaaaac 480
tctcagagaa cactgattttt tggctcctg gtgttagttc cttcacagat tctaaccaac 540
aagaaagtat cacaaagaga gaggaaaacc aagaacaacc tagaaattat tcacatcatc 600
agttgaacag gagcagtaaa catagccaag gcctaaggga tcaaggaaac caagagcagg 660
atccaaatat ttccaatgga gaagaggaag aagaaaaaga gccaggtgaa gttggtaccc 720
acaatgataa ccaagaaaga aagacagaat tgcccaggga gcatgctaac agcaagcagg 780
aggaagacaa tacccaatct gatgatattt tggaagagtc tgatcaacca actcaagtaa 840
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cagaaatgga agaggaaaat gcatcgaacg tcaataagca cattcaagaa actgaatggc 960
agagtcaaga gggtaaaact ggcctagaag ctatcagcaa ccacaaagag acagaagaaa1020
agactgtttc tgaggctctg ctcatggaac ctactgatga tggtaatacc acgcccagaa1080
atcatggagt tgatgatgat ggcgatgatg atggcgatga tggcggcact gatggcccca1140
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ctcaatccat tgcctatcac ctcaaaattg aggagcaaag agaaaaagta catgaaaatg1260
aaaatatagg taccactgag cctggagagc accaagaggc caagaaagca gagaactcat1320
caaatgagga ggaaacgtca agtgaaggca acatgagggt gcatgctgtg gattcttgca1380
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ggaccaaaaa ggggcatcaa ctccagctgg attattttgg agcctgcaaa tctattccta1620
cttgtacgga ctttgaagtg attcagtttc ctctacggat gagagactgg ctcaagaata1680
tcctcatgca gctttatgaa gccaactctg aacacgctgg ttatctaaat gagaagcaga1740
gaaataaagt caagaaaatt tacctggatg aaaagaggct tttggctggg gaccatccca1800
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ctcctctgcg agcatctctg gtgcccatgg aacactgcat aacccgtttc tttgaggagt1980
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aagaagagga catagatgaa aatctcttgt tttgaacgaa gattttaaag aactcaactt2100
tccagcatcc tcctctg 2117
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<212>PRT
<213>人類
<400>78
Met Lys Thr Gly Leu Phe Phe Leu Cys Leu Leu Gly Thr Ala Ala Ala
1 5 10 15
Ile Pro Thr Asn Ala Arg Leu Leu Ser Asp His Ser Lys Pro Thr Ala
20 25 30
Glu Thr Val Ala Pro Asp Asn Thr Ala Ile Pro Ser Leu Arg Ala Glu
35 40 45
Asp Glu Glu Asn Glu Lys Glu Thr Ala Val Ser Thr Glu Asp Asp Ser
50 55 60
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65 70 75 80
His Glu Gln Ser Ala Glu Gln Gly Lys Ser Ser Ser Gln Glu Leu Gly
85 90 95
Leu Lys Asp Gln Glu Asp Ser Asp Gly Asp Leu Ser Val Asn Leu Glu
100 105 110
Tyr Ala Pro Thr Glu Gly Thr Leu Asp Ile Lys Glu Asp Met Ser Glu
115 120 125
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130 135 140
Val Ser Ser Phe Thr Asp Ser Asn Gln Gln Glu Ser Ile Thr Lys Arg
145 150 155 160
Glu Glu Asn Gln Glu Gln Pro Arg Asn Tyr Ser His His Gln Leu Asn
165 170 175
Arg Ser Ser Lys His Ser Gln Gly Leu Arg Asp Gln Gly Asn Gln Glu
180 185 190
Gln Asp Pro Asn Ile Ser Asn Gly Glu Glu Glu Glu Glu Lys Glu Pro
195 200 205
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210 215 220
Pro Arg Glu His Ala Asn Ser Lys Gln Glu Glu Asp Asn Thr Gln Ser
225 230 235 240
Asp Asp Ile Leu Glu Glu Ser Asp Gln Pro Thr Gln Val Ser Lys Met
245 250 255
Gln Glu Asp Glu Phe Asp Gln Gly Asn Gln Glu Gln Glu Asp Asn Ser
260 265 270
Asn Ala Glu Met Glu Glu Glu Asn Ala Ser Asn Val Asn Lys His Ile
275 280 285
Gln Glu Thr Glu Trp Gln Ser Gln Glu Gly Lys Thr Gly Leu Glu Ala
290 295 300
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305 310 315 320
Leu Met Glu Pro Thr Asp Asp Gly Asn Thr Thr Pro Arg Asn His Gly
325 330 335
Val Asp Asp Asp Gly Asp Asp Asp Gly Asp Asp Gly Gly Thr Asp Gly
340 345 350
Pro Arg His Ser Ala Ser Asp Asp Tyr Phe Ile Pro Ser Gln Ala Phe
355 360 365
Leu Glu Ala Glu Arg Ala Gln Ser Ile Ala Tyr His Leu Lys Ile Glu
370 375 380
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Pro Gly Glu His Gln Glu Ala Lys Lys Ala Glu Asn Ser Ser Asn Glu
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450 455 460
Thr Lys Pro Leu Asp Gln Val Cys Gly Thr Asp Asn Gln Thr Tyr Ala
465 470 475 480
Ser Ser Cys His Leu Phe Ala Thr Lys Cys Arg Leu Glu Gly Thr Lys
485 490 495
Lys Gly His Gln Leu Gln Leu Asp Tyr Phe Gly Ala Cys Lys Ser Ile
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Pro Thr Cys Thr Asp Phe Glu Val Ile Gln Phe Pro Leu Arg Met Arg
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Asp Trp Leu Lys Asn Ile Leu Met Gln Leu Tyr Glu Ala Asn Ser Glu
530 535 540
His Ala Gly Tyr Leu Asn Glu Lys Gln Arg Asn Lys Val Lys Lys Ile
545 550 555 560
Tyr Leu Asp Glu Lys Arg Leu Leu Ala Gly Asp His Pro Ile Asp Leu
565 570 575
Leu Leu Arg Asp Phe Lys Lys Asn Tyr His Met Tyr Val Tyr Pro Val
580 585 590
His Trp Gln Phe Ser Glu Leu Asp Gln His Pro Met Asp Arg Val Leu
595 600 605
Thr His Ser Glu Leu Ala Pro Leu Arg Ala Ser Leu Val Pro Met Glu
610 615 620
His Cys Ile Thr Arg Phe Phe Glu Glu Cys Asp Pro Asn Lys Asp Lys
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His Ile Thr Leu Lys Glu Trp Gly His Cys Phe Gly Ile Lys Glu Glu
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Asp Ile Asp Glu Asn Leu Leu Phe
660
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<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PIG33的引物H-AP2
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aagcttcgac tgt13
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<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PIG33的oligo-dT錨定引物
<400>80
aagctttttt ttttta 16
<210>81
<211>1349
<212>DNA
<213>人類
<400>81
agagggacta ggctgggtgt ggagctgcag cgtatccaca ggccccagga tgcaggccct 60
ggtgctactc ctctgcattg gagccctcct cgggcacagc agctgccaga accctgccag120
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tcctttcttc aaagtccccg tgaacaagct ggcagcggct gtctccaact tcggctatga240
cctgtaccgg gtgcgatcca gcatgagccc cacgaccaac gtgctcctgt ctcctctcag300
tgtggccacg gccctctcgg ccctctcgct gggagcggag cagcgaacag aatccatcat360
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caggcccaga gtcctgacgg gcaaccctcg cttggacctg caagagatca acaactgggt600
gcaggcgcag atgaaaggga agctcgccag gtccacaaag gaaattcccg atgagatcag660
cattctcctt ctcggtgtgg cgcacttcaa ggggcagtgg gtaacaaagt ttgactccag720
aaagacttcc ctcgaggatt tctacttgga tgaagagagg accgtgaggg tccccatgat780
gtcggaccct aaggctgttt tacgctatgg cttggattca gatctcagct gcaagattgc840
ccagctgccc ttgaccggaa gcatgagtat catcttcttc ctgcccctga aagtgaccca900
gaatttgacc ttgatagagg agagcctcac ctccgagttc attcatgaca tagaccgaga960
actgaagacc gtgcaggcgg tcctcactgt ccccaagctg aagctgagtt atgaaggcga 1020
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cccgctggac tatcacctta accagccttt catcttcgta ctgagggaca cagacacagg1260
ggcccttctc ttcattggca agattctgga ccccaggggc ccctaatatc ccagtttaat1320
attccaatac cctagaagaa aacccgagg 1349
<210>82
<211>418
<212>PRT
<213>人類
<400>82
Met Gln Ala Leu Val Leu Leu Leu Cys Ile Gly Ala Leu Leu Gly His
1 5 10 15
Ser Ser Cys Gln Asn Pro Ala Ser Pro Pro Glu Glu Gly Ser Pro Asp
20 25 30
Pro Asp Ser Thr Gly Ala Leu Val Glu Glu Glu Asp Pro Phe Phe Lys
35 40 45
Val Pro Val Asn Lys Leu Ala Ala Ala Val Ser Asn Phe Gly Tyr Asp
50 55 60
Leu Tyr Arg Val Arg Ser Ser Met Ser Pro Thr Thr Asn Val Leu Leu
65 70 75 80
Ser Pro Leu Ser Val Ala Thr Ala Leu Ser Ala Leu Ser Leu Gly Ala
85 90 95
Glu Gln Arg Thr Glu Ser Ile Ile His Arg Ala Leu Tyr Tyr Asp Leu
100 105 110
Ile Ser Ser Pro Asp Ile His Gly Thr Tyr Lys Glu Leu Leu Asp Thr
115 120 125
Val Thr Ala Pro Gln Lys Asn Leu Lys Ser Ala Ser Arg Ile Val Phe
130 135 140
Glu Lys Lys Leu Arg Ile Lys Ser Ser Phe Val Ala Pro Leu Glu Lys
145 150155 160
Ser Tyr Gly Thr Arg Pro Arg Val Leu Thr Gly Asn Pro Arg Leu Asp
165 170 175
Leu Gln Glu Ile Asn Asn Trp Val Gln Ala Gln Met Lys Gly Lys Leu
180 185 190
Ala Arg Ser Thr Lys Glu Ile Pro Asp Glu Ile Ser Ile Leu Leu Leu
195 200 205
Gly Val Ala His Phe Lys Gly Gln Trp Val Thr Lys Phe Asp Ser Arg
210 215 220
Lys Thr Ser Leu Glu Asp Phe Tyr Leu Asp Glu Glu Arg Thr Val Arg
225 230 235 240
Val Pro Met Met Ser Asp Pro Lys Ala Val Leu Arg Tyr Gly Leu Asp
245 250 255
Ser Asp Leu Ser Cys Lys Ile Ala Gln Leu Pro Leu Thr Gly Ser Met
260 265 270
Ser Ile Ile Phe Phe Leu Pro Leu Lys Val Thr Gln Asn Leu Thr Leu
275 280 285
Ile Glu Glu Ser Leu Thr Ser Glu Phe Ile His Asp Ile Asp Arg Glu
290 295 300
Leu Lys Thr Val Gln Ala Val Leu Thr Val Pro Lys Leu Lys Leu Ser
305 310 315 320
Tyr Glu Gly Glu Val Thr Lys Ser Leu Gln Glu Met Lys Leu Gln Ser
325 330 335
Leu Phe Asp Ser Pro Asp Phe Ser Lys Ile Thr Gly Lys Pro Ile Lys
340 345 350
Leu Thr Gln Val Glu His Arg Ala Gly Phe Glu Trp Asn Glu Asp Gly
355 360 365
Ala Gly Thr Thr Pro Ser Pro Gly Leu Gln Pro Ala His Leu Thr Phe
370 375 380
Pro Leu Asp Tyr His Leu Asn Gln Pro Phe Ile Phe Val Leu Arg Asp
385 390 395 400
Thr Asp Thr Gly Ala Leu Leu Phe Ile Gly Lys Ile Leu Asp Pro Arg
405 410 415
Gly Pro
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<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PIG35的引物H-AP9
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aagcttcatt ccg13
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<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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aagctttttt tttttc 16
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<211>430
<212>DNA
<213>人類
<400>85
ggaagcactt accctccact tcctcctcct gtttggcttc tgtctcacct agacccgtcc 60
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ttacagcagt ggcatttaat aaggaacttg atcctataca gaaactcttt gtggacaaga240
ttagagaata caaatctaag cgacagacat ctggaggacc tgttgatgct agttcagagt300
atcagcaaga gctggagagg gagcttttta agctcaagca aatgtttggt aatgcagaca360
tgaatacatt tcccaccttc aaatttgaag atcccaaatt tgaagtcatc gaaaaacccc420
aggcctgaag 430
<210>86
<211>108
<212>PRT
<213>人類
<400>86
Met Ile Leu Gln Arg Leu Phe Arg Phe Ser Ser Val Ile Arg Ser Ala
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Val Ser Val His Leu Arg Arg Asn Ile Gly Val Thr Ala Val Ala Phe
20 25 30
Asn Lys Glu Leu Asp Pro Ile Gln Lys Leu Phe Val Asp Lys Ile Arg
35 40 45
Glu Tyr Lys Ser Lys Arg Gln Thr Ser Gly Gly Pro Val Asp Ala Ser
50 55 60
Ser Glu Tyr Gln Gln Glu Leu Glu Arg Glu Leu Phe Lys Leu Lys Gln
65 70 75 80
Met Phe Gly Asn Ala Asp Met Asn Thr Phe Pro Thr Phe Lys Phe Glu
85 90 95
Asp Pro Lys Phe Glu Val Ile Glu Lys Pro Gln Ala
100 105
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<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PIG36的引物H-AP9
<400>87
aagcttcat ccg 13
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<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PIG36的oligo-dT錨定引物
<400>88
aagctttttt tttttg 16
<210>89
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<212>DNA
<213>人類
<400>89
gcaatacatg gctactaagt ctttgatcat aagtcgaatt tatagacctg gaatttgcca 60
tcctagtctt tcctttttag taagacttct gtcctctggc agtgcatatg gtaggtctct120
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tagaaatgta acatttttat aaaaacagat taatgtgttt ttcacttagt aaatgttttc240
aagagctgaa ttgagaagga aagagactgg agtggttaat ggtgatttga tttctggcat300
tctgagtttt ctgctacaat tagctgcatt acttggtgcc aaagagcagt ggggaattgt360
tgagttgctg tatcctttaa aaaaaaacaa aaaacttgtt attttgaaag aacttaaggc420
tcacaagatg ttacaaaaat agtagagtgg ccttacccta gatccagttt tccccattta480
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ctaaactaca gacctttttt caatttcgcc agtttttcca cacatattca tttagttgct600
ggatactttt aattcttgct gatttgtaaa ctggccttgc ttggatacaa caggaaagat 660
actatctgga taaagttcta cagttttaga gagactatta acacattaat gtgttccttt 720
gtcatgagca ataccctgcc tacactgctt ctaaattttc tgatttgttt ggctgtttgg 780
catctgaaac aatccaagac aaacttagaa agattaggca acacaaaaca cagtaagacc 840
tgttcatagc ttgttgccta gaaaaccagg tagcaggata ttctagatgc ttcctgctgc 900
ttctacgtga gtaggattag cactggggac aaaataagga gtttagagta aaccagtatt 960
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gttttatttg cctaaatagc cgttattaaa tggaataaca accacattag accaaattaa1140
ttgcaaacac agcggcaacc tggggagaag ttgaaactcc agttttgtgg attacagttt1200
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gtgtcttact aagtttctag gtcattgtga gcacttgata aatatttgct gaatgttgtt1320
tttttgaatg aacataagat agaaacaaaa acttctcatc cagttaacta gagtgaatgt1380
agggagaatt gttttgcttg taacatggag agtttatttt caagtgagga aagagaaaaa1440
aattactcag acttgttcct ggtgaagtgc attctctgtt tgtatacttt ttgatggaga1500
aattgatcta tagaactgct taattttttg aggcatttag acagcaatga aaggtagttc1560
tccacaggac accgaatcaa aaggagagac cagactctgg cctcataccc agcctatttg1620
aaacaagcta tctagtttct cctgcagaca ccttgtcaac aacatgcaac agtgtcaggt1680
gccttgcagg aaaataatct gagtcccaag ctagcctgtg ctcatccaca atctcaatga1740
acatgtcaag gaagaatttg cagagactca agggaagcac aatgggataa ggtaatcact1800
ttcagtgaaa aactgttttc ctgaaaacag gcttggacac aattgaaagc tggcttcctg1860
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attgtatatt ttcttttctt tatttattct ctgtaagtct gtcagatgat aaattgtaaa2220
taacaatgat taaagagtca tgcttctgaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa2280
aaaaaaaaa2289
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<211>69
<212>PRT
<213>人類
<400>90
Met Phe Ser Arg Ala Glu Leu Arg Arg Lys Glu Thr Gly Val Val Asn
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Gly Asp Leu Ile Ser Gly Ile Leu Ser Phe Leu Leu Gln Leu Ala Ala
20 25 30
Leu Leu Gly Ala Lys Glu Gln Trp Gly Ile Val Glu Leu Leu Tyr Pro
35 40 45
Leu Lys Lys Asn Lys Lys Leu Val Ile Leu Lys Glu Leu Lys Ala His
50 55 60
Lys Met Leu Gln Lys
65
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<211>13
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<213>人工序列
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<223>MIG20的引物H-AP32
<400>91
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<220>
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<400>92
aagctttttt ttttta 16
<210>93
<211>1087
<212>DNA
<213>人類
<400>93
cgtagcagct atgcagcttg aaatccaagt agcactaaat tttattattt cgtatttgta 60
caataagctt cccaggagac gtgtcaacat ttttggtgaa gaacttgaaa gacttcttaa120
gaagaaatat gaagggcact ggtatcctga aaagccatac aaaggatcgg ggtttagatg180
tatacacata ggggagaaag tggacccagt gattgaacaa gcatccaaag agagtggttt240
ggacattgat gatgttcgtg gcaatctgcc acaggatctt agtgtttggg tcgacccatt300
tgaggtttct taccaaattg gtgaaaaggg accagtgaag gtgctttacg tggatgataa360
taatgaaaat ggatgtgagt tggataagga gatcaaaaac agctttaacc cagaggccca420
ggtttttatg cccataagtg acccagcctc atcagtgtcc agctctccat cgcctccttt480
tggtcactct gctgctgtaa gccctacctt catgccccgg tccactcagc ctttaacctt540
taccactgcc acttttgctg ccaccaagtt cggctctacc aaaatgaaga atagtggccg600
tagcaacaag gttgcacgta cttctcccat caacctcggc ttgaatgtga atgacctctt660
gaagcagaaa gccatctctt cctcaatgca ctctctgtat gggcttggct tgggtagcca720
gcagcagcca cagcaacagc agcagccagc ccagccgcca ccgccaccac caccaccaca 780
gcagcaacaa cagcagaaaa cctctgctct ttctcctaat gccaaggaat ttatttttcc 840
taatatgcag ggtcaaggta gtagtaccaa tggaatgttc ccaggtgaca gcccccttaa 900
cctcagtcct ctccagtaca gtaatgcctt tgatgtgttt gcagcctatg gaggcctcaa 960
tgagaagtct tttgtagatg gcttgaattt tagcttaaat aacatgcagt attctaacca1020
gcaattccag cctgttatgg ctaactaaaa aaaagaaaat gtatcgtaca agttaaaatg1080
cacgggc 1087
<210>94
<211>345
<212>PRT
<213>人類
<400>94
Met Gln Leu Glu Ile Gln Val Ala Leu Asn Phe Ile Ile Ser Tyr Leu
1 5 10 15
Tyr Asn Lys Leu Pro Arg Arg Arg Val Asn Ile Phe Gly Glu Glu Leu
20 25 30
Glu Arg Leu Leu Lys Lys Lys Tyr Glu Gly His Trp Tyr Pro Glu Lys
35 40 45
Pro Tyr Lys Gly Ser Gly Phe Arg Cys Ile His Ile Gly Glu Lys Val
50 55 60
Asp Pro Val Ile Glu Gln Ala Ser Lys Glu Ser Gly Leu Asp Ile Asp
65 70 75 80
Asp Val Arg Gly Asn Leu Pro Gln Asp Leu Ser Val Trp Val Asp Pro
85 90 95
Phe Glu Val Ser Tyr Gln Ile Gly Glu Lys Gly Pro Val Lys Val Leu
100 105 110
Tyr Val Asp Asp Asn Asn Glu Asn Gly Cys Glu Leu Asp Lys Glu Ile
115 120 125
Lys Asn Ser Phe Asn Pro Glu Ala Gln Val Phe Met Pro Ile Ser Asp
130 135 140
Pro Ala Ser Ser Val Ser Ser Ser Pro Ser Pro Pro Phe Gly His Ser
145 150 155 160
Ala Ala Val Ser Pro Thr Phe Met Pro Arg Ser Thr Gln Pro Leu Thr
165 170 175
Phe Thr Thr Ala Thr Phe Ala Ala Thr Lys Phe Gly Ser Thr Lys Met
180 185 190
Lys Asn Ser Gly Arg Ser Asn Lys Val Ala Arg Thr Ser Pro Ile Asn
195 200 205
Leu Gly Leu Asn Val Asn Asp Leu Leu Lys Gln Lys Ala Ile Ser Ser
210 215 220
Ser Met His Ser Leu Tyr Gly Leu Gly Leu Gly Ser Gln Gln Gln Pro
225 230 235 240
Gln Gln Gln Gln Gln Pro Ala Gln Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro
245 250 255
Gln Gln Gln Gln Gln Gln Lys Thr Ser Ala Leu Ser Pro Asn Ala Lys
260 265 270
Glu Phe Ile Phe Pro Asn Met Gln Gly Gln Gly Ser Ser Thr Asn Gly
275 280 285
Met Phe Pro Gly Asp Ser Pro Leu Asn Leu Ser Pro Leu Gln Tyr Ser
290 295 300
Asn Ala Phe Asp Val Phe Ala Ala Tyr Gly Gly Leu Asn Glu Lys Ser
305 310 315 320
Phe Val Asp Gly Leu Asn Phe Ser Leu Asn Asn Met Gln Tyr Ser Asn
325 330 335
Gln Gln Phe Gln Pro Val Met Ala Asn
340 345
<210>95
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PIG49的引物H-AP10
<400>95
aagcttccac gta 13
<210>96
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PIG49的oligo-dT錨定引物
<400>96
aagctttttt ttttta 16
<210>97
<211>826
<212>DNA
<213>人類
<400>97
ggcgctgagt tttgtctccc cggccgtctg ggcgcgcgcg ggtgtcccag aatgaaatat 60
gactgaggac tctcagagaa actttcgttc agtatattat gagaaagtgg ggtttcgtgg120
agttgaagaa aagaaatcat tagaaattct cctaaaagat gaccgtctgg atactgagaa180
actttgtact tttagtcaga ggttccctct cccgtccatg taccgtgcat tggtatggaa240
ggtgcttcta ggaatcttgc ctccacacca cgagtcccat gccaaggtga tgatgtatcg300
taaggagcag tacttggatg tccttcatgc cctgaaagtc gttcgctttg ttagtgatgc360
cacacctcag gctgaagtct atctccgcat gtatcagctg gagtctggga agttacctcg420
aagtccctct tttccactgc caaaagcgtt tgaacaatac ttgaatctgg aagatggcag480
actgctgact catctgagga tgtgttccgc ggcgcccaaa cttccttatg atctctggtt540
caagaggtgc tttgcgggat gtttgcctga atccagttta cagagggttt gggataaagt600
tgtgagtgga tcctgtaaga tcctagtttt tgtagctgtc gaaattttat taacctttaa660
aataaaagtt atggcactga acagtgcaga gaagataaca aagtttctgg aaaatattcc720
ccaggacagc tcagacgcga tcgtgagcaa ggccattgac ttgtggcaca aacactgtgg780
gaccccggtc cattcaagct gaacgcaccc gctggttgtg gaccgt 826
<210>98
<211>247
<212>PRT
<213>人類
<400>98
Met Thr Glu Asp Ser Gln Arg Asn Phe Arg Ser Val Tyr Tyr Glu Lys
1 5 10 15
Val Gly Phe Arg Gly Val Glu Glu Lys Lys Ser Leu Glu Ile Leu Leu
20 25 30
Lys Asp Asp Arg Leu Asp Thr Glu Lys Leu Cys Thr Phe Ser Gln Arg
35 40 45
Phe Pro Leu Pro Ser Met Tyr Arg Ala Leu Val Trp Lys Val Leu Leu
50 55 60
Gly Ile Leu Pro Pro His His Glu Ser His Ala Lys Val Met Met Tyr
65 70 75 80
Arg Lys Glu Gln Tyr Leu Asp Val Leu His Ala Leu Lys Val Val Arg
85 90 95
Phe Val Ser Asp Ala Thr Pro Gln Ala Glu Val Tyr Leu Arg Met Tyr
100 105 110
Gln Leu Glu Ser Gly Lys Leu Pro Arg Ser Pro Ser Phe Pro Leu Pro
115 120 125
Lys Ala Phe Glu Gln Tyr Leu Asn Leu Glu Asp Gly Arg Leu Leu Thr
130 135 140
His Leu Arg Met Cys Ser Ala Ala Pro Lys Leu Pro Tyr Asp Leu Trp
145 150 155 160
Phe Lys Arg Cys Phe Ala Gly Cys Leu Pro Glu Ser Ser Leu Gln Arg
165 170 175
Val Trp Asp Lys Val Val Ser Gly Ser Cys Lys Ile Leu Val Phe Val
180 185 190
Ala Val Glu Ile Leu Leu Thr Phe Lys Ile Lys Val Met Ala Leu Asn
195 200 205
Ser Ala Glu Lys Ile Thr Lys Phe Leu Glu Asn Ile Pro Gln Asp Ser
210 215 220
Ser Asp Ala Ile Val Ser Lys Ala Ile Asp Leu Trp His Lys His Cys
225 230 235 240
Gly Thr Pro Val His Ser Ser
245
<210>99
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PIG51的引物H-AP22
<400>99
aagcttttga tcc 13
<210>100
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PIG51的oligo-dT錨定引物
<400>100
aagctttttt tttttg16
<210>101
<211>207
<212>DNA
<213>人類
<400>101
acgagactgc acggattgtt ttaagaaaat ggcagacaaa ccagacatgg gggaaatcgc 60
cagcttcgat aaggccaagc tgaagaaaac ggagacgcag gagaagaaca ccctgccgac120
caaagagacc attgagcagg agaagcggag tgaaatttcc taagatcctg gaggatttcc180
tacccccgtc ctcttcgaga ccccagt207
<210>102
<211>44
<212>PRT
<213>人類
<400>102
Met Ala Asp Lys Pro Asp Met Gly Glu Ile Ala Ser Phe Asp Lys Ala
1 5 10 15
Lys Leu Lys Lys Thr Glu Thr Gln Glu Lys Asn Thr Leu Pro Thr Lys
20 25 30
Glu Thr Ile Glu Gln Glu Lys Arg Ser Glu Ile Ser
35 40
<210>103
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>MIG12的引物H-AP12
<400>103
aagcttgagt gct 13
<210>104
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>MIG12的oligo-dT錨定引物
<400>104
aagctttttt tttttc 16
<210>105
<211>1527
<212>DNA
<213>人類
<400>105
agaatgctgg agcctttgcc ctgttgggac gctgcgaaag atctgaaaga acctcagtgc 60
cctcctgggg acagggtggg tgtgcagcct gggaactcca gggtttggca gggcaccatg120
gagaaagccg gtttggcttg gacgcgtggc acaggggtgc aatcagaggg gacttgggaa180
agccagcggc aggacagtga tgccctccca agtccggagc tgctacccca agatcaggac240
aagcctttcc tgaggaaggc ctgcagcccc agcaacatac ctgctgtcat cattacagac300
atgggcaccc aggaggatgg ggccttggag gagacgcagg gaagccctcg gggcaacctg360
cccctgagga aactgtcctc ttcctcggcc tcctccacgg gcttctcctc atcctacgaa420
gactcagagg aggacatctc cagtgaccct gagcgcaccc tggaccccaa ctcagccttc480
ctgcataccc tggaccagca gaaacccaga gtgagcaaat catggaggaa gataaaaaac540
atggtgcact ggtctccctt cgtcatgtcc ttcaagaaga agtacccctg gatccagctg600
gcaggacacg cagggagttt caaggcagct gccaatggca ggatcctgaa gaagcactgt660
gagtcagagc agcgctgcct ggaccggctg atggtggatg tgctgaggcc cttcgtacct720
gcctaccatg gggatgtggt gaaggacggg gagcgctaca accagatgga cgacctgctg780
gccgacttcg actcgccctg tgtgatggac tgcaagatgg gaatcaggac ctacctggag840
gaggagctca cgaaggcccg gaagaagccc agcctgcgga aggacatgta ccagaagatg900
atcgaggtgg accccgaggc ccccaccgag gaggaaaaag cacagcgggc tgtgaccaag 960
ccacggtaca tgcagtggcg ggagaccatc agctccacgg ccaccctggg gttcaggatc1020
gagggaatca agaaagaaga cggcaccgtg aaccgggact tcaagaagac caaaacgagg1080
gagcaggtca ccgaggcctt cagagagttc actaaaggaa accataacat cctgatcgcc1140
tatcgggacc ggctgaaggc cattcgaacc actctagaag tttctccctt cttcaagtgc1200
cacgaggtca ttggcagctc cctcctcttc atccacgaca agaaggaaca ggccaaagtg1260
tggatgatcg actttgggaa aaccacgccc ctgcctgagg gccagaccct gcagcatgac1320
gtcccctggc aggaggggaa ccgggaggat ggctacctct cggggctcaa taacctcgtc1380
gacatcctga ccgagatgtc ccaggatgcc ccactcgcct gagctgccca cgccctccct1440
ggcccccgcc tgggcctcct ttcctcctcc tgtgcttcct ttctcgttcc taacttttcc1500
ttcacttaca cctgactgac cctcctg1527
<210>106
<211>472
<212>PRT
<213>人類
<400>106
Met Leu Glu Pro Leu Pro Cys Trp Asp Ala Ala Lys Asp Leu Lys Glu
1 5 10 15
Pro Gln Cys Pro Pro Gly Asp Arg Val Gly Val Gln Pro Gly Asn Ser
20 25 30
Arg Val Trp Gln Gly Thr Met Glu Lys Ala Gly Leu Ala Trp Thr Arg
35 40 45
Gly Thr Gly Val Gln Ser Glu Gly Thr Trp Glu Ser Gln Arg Gln Asp
50 55 60
Ser Asp Ala Leu Pro Ser Pro Glu Leu Leu Pro Gln Asp Gln Asp Lys
65 70 75 80
Pro Phe Leu Arg Lys Ala Cys Ser Pro Ser Asn Ile Pro Ala Val Ile
85 90 95
Ile Thr Asp Met Gly Thr Gln Glu Asp Gly Ala Leu Glu Glu Thr Gln
100 105 110
Gly Ser Pro Arg Gly Asn Leu Pro Leu Arg Lys Leu Ser Ser Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Ser Thr Gly Phe Ser Ser Ser Tyr Glu Asp Ser Glu Glu Asp
130 135 140
Ile Ser Ser Asp Pro Glu Arg Thr Leu Asp Pro Asn Ser Ala Phe Leu
145 150 155 160
His Thr Leu Asp Gln Gln Lys Pro Arg Val Ser Lys Ser Trp Arg Lys
165 170 175
Ile Lys Asn Met Val His Trp Ser Pro Phe Val Met Ser Phe Lys Lys
180 185 190
Lys Tyr Pro Trp Ile Gln Leu Ala Gly His Ala Gly Ser Phe Lys Ala
195 200 205
Ala Ala Asn Gly Arg Ile Leu Lys Lys His Cys Glu Ser Glu Gln Arg
210 215 220
Cys Leu Asp Arg Leu Met Val Asp Val Leu Arg Pro Phe Val Pro Ala
225 230 235 240
Tyr His Gly Asp Val Val Lys Asp Gly Glu Arg Tyr Asn Gln Met Asp
245 250 255
Asp Leu Leu Ala Asp Phe Asp Ser Pro Cys Val Met Asp Cys Lys Met
260 265 270
Gly Ile Arg Thr Tyr Leu Glu Glu Glu Leu Thr Lys Ala Arg Lys Lys
275 280 285
Pro Ser Leu Arg Lys Asp Met Tyr Gln Lys Met Ile Glu Val Asp Pro
290 295 300
Glu Ala Pro Thr Glu Glu Glu Lys Ala Gln Arg Ala Val Thr Lys Pro
305 310 315 320
Arg Tyr Met Gln Trp Arg Glu Thr Ile Ser Ser Thr Ala Thr Leu Gly
325 330 335
Phe Arg Ile Glu Gly Ile Lys Lys Glu Asp Gly Thr Val Asn Arg Asp
340 345 350
Phe Lys Lys Thr Lys Thr Arg Glu Gln Val Thr Glu Ala Phe Arg Glu
355 360 365
Phe Thr Lys Gly Asn His Asn Ile Leu Ile Ala Tyr Arg Asp Arg Leu
370 375 380
Lys Ala Ile Arg Thr Thr Leu Glu Val Ser Pro Phe Phe Lys Cys His
385 390 395 400
Glu Val Ile Gly Ser Ser Leu Leu Phe Ile His Asp Lys Lys Glu Gln
405 410 415
Ala Lys Val Trp Met Ile Asp Phe Gly Lys Thr Thr Pro Leu Pro Glu
420 425 430
Gly Gln Thr Leu Gln His Asp Val Pro Trp Gln Glu Gly Asn Arg Glu
435 440 445
Asp Gly Tyr Leu Ser Gly Leu Asn Asn Leu Val Asp Ile Leu Thr Glu
450 455 460
Met Ser Gln Asp Ala Pro Leu Ala
465 470
<210>107
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PIG37的引物H-AP10
<400>107
aagcttccac gta 13
<210>108
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>PIG37的oligo-dT錨定引物
<400>108
aagctttttt tttttg 16
<210>109
<211>415
<212>DNA
<213>人類
<400>109
gcagcccgac tagcagtcta gaggcctgag gcttctgggt cctggtgacg gggctggcat 60
gaccccgggg gtcgtccatg ccagtccgcc tcagtcgcag agggtccctc ggcaagcgcc120
ctgtgagtgg gccattcgga acattggaca gaagcccaaa gagccaaatt gtcacaattg180
tggaacccac attggcctga gatccaaaac gcttcgaggc accccaaatt acctgcccat240
tcgtcaggac acccacccac ccagtgttat attctgcctc gccggagtgg gtgttcccgg300
gggcacttgc cgaccagccc cttgcgtccc caggtttgca gctctcccct gggccactaa360
ccatcctggc ccgggctgcc tgtctgacct ccgtgcctag tcgtggctct ccatc 415
<210>110
<211>113
<212>PRT
<213>人類
<400>110
Met Thr Pro Gly Val Val His Ala Ser Pro Pro Gln Ser Gln Arg Val
1 5 10 15
Pro Arg Gln Ala Pro Cys Glu Trp Ala Ile Arg Asn Ile Gly Gln Lys
20 25 30
Pro Lys Glu Pro Asn Cys His Asn Cys Gly Thr His Ile Gly Leu Arg
35 40 45
Ser Lys Thr Leu Arg Gly Thr Pro Asn Tyr Leu Pro Ile Arg Gln Asp
50 55 60
Thr His Pro Pro Ser Val Ile Phe Cys Leu Ala Gly Val Gly Val Pro
65 70 75 80
Gly Gly Thr Cys Arg Pro Ala Pro Cys Val Pro Arg Phe Ala Ala Leu
85 90 95
Pro Trp Ala Thr Asn His Pro Gly Pro Gly Cys Leu Ser Asp Leu Arg
100 105 110
Ala
<210>111
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG44的引物H-AP12
<400>111
aagcttgagt gct 13
<210>112
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG44的oligo-dT錨定引物
<400>112
aagctttttt tttttg 16
<210>113
<211>723
<212>DNA
<213>人類
<400>113
cgggagaacg ataatgcaaa gtgctatgtt cttggctgtt caacacgact gcagacccat 60
ggacaagagc gcaggcagtg gccacaagag cgaggagaag cgagaaaaga tgaaacggac120
ccttttaaaa gattggaaga cccgtttgag ctacttctta caaaattcct ctactcctgg180
gaagcccaaa accggcaaaa aaagcaaaca gcaagctttc atcaagcctt ctcctgagga240
agcacagctg tggtcagaag catttgacga gctgctagcc agcaaatatg gtcttgctgc300
attcagggct tttttaaagt cggaattctg tgaagaaaat attgaattct ggctggcctg360
tgaagacttc aaaaaaacca aatcacccca aaagctgtcc tcaaaagcaa ggaaaatata420
tactgacttc atagaaaagg aagctccaaa agagataaac atagattttc aaaccaaaac480
tctgattgcc cagaatatac aagaagctac aagtggctgc tttacaactg cccagaaaag540
ggtatacagc ttgatggaga acaactctta tcctcgtttc ttggagtcag aattctacca600
ggacttgtgt aaaaagccac aaatcaccac agagcctcat gctacatgaa atgtaaaagg660
gagcccagaa atggaggaca tttcattctt tttcctgagg ggaaggactg tgacctgcca720
taa 723
<210>114
<211>211
<212>PRT
<213>人類
<400>114
Met Gln Ser Ala Met Phe Leu Ala Val Gln His Asp Cys Arg Pro Met
1 5 10 15
Asp Lys Ser Ala Gly Ser Gly His Lys Ser Glu Glu Lys Arg Glu Lys
20 25 30
Met Lys Arg Thr Leu Leu Lys Asp Trp Lys Thr Arg Leu Ser Tyr Phe
35 40 45
Leu Gln Asn Ser Ser Thr Pro Gly Lys Pro Lys Thr Gly Lys Lys Ser
50 55 60
Lys Gln Gln Ala Phe Ile Lys Pro Ser Pro Glu Glu Ala Gln Leu Trp
65 70 75 80
Ser Glu Ala Phe Asp Glu Leu Leu Ala Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Ala
85 90 95
Phe Arg Ala Phe Leu Lys Ser Glu Phe Cys Glu Glu Asn Ile Glu Phe
100 105 110
Trp Leu Ala Cys Glu Asp Phe Lys Lys Thr Lys Ser Pro Gln Lys Leu
115 120 125
Ser Ser Lys Ala Arg Lys Ile Tyr Thr Asp Phe Ile Glu Lys Glu Ala
130 135 140
Pro Lys Glu Ile Asn Ile Asp Phe Gln Thr Lys Thr Leu Ile Ala Gln
145 150 155 160
Asn Ile Gln Glu Ala Thr Ser Gly Cys Phe Thr Thr Ala Gln Lys Arg
165 170 175
Val Tyr Ser Leu Met Glu Asn Asn Ser Tyr Pro Arg Phe Leu Glu Ser
180 185 190
Glu Phe Tyr Gln Asp Leu Cys Lys Lys Pro Gln Ile Thr Thr Glu Pro
195 200 205
His Ala Thr
210
<210>115
<211>13
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG31的引物H-AP4
<400>115
aagcttctca acg 13
<210>116
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GIG31的oligo-dT錨定引物
<400>116
aagctttttt ttttta 1權利要求
1.一種人抑癌蛋白，其具有選自由SEQ ID NO2、SEQ ID NO6、SEQID NO10、SEQ ID NO14、SEQ ID NO18、SEQ ID NO22、SEQ ID NO26、SEQ ID NO30、SEQ ID NO34、SEQ ID NO38、SEQ ID NO42、SEQ ID NO46、SEQ ID NO50、SEQ ID NO54、SEQ ID NO58、SEQ ID NO62、SEQID NO66、SEQ ID NO70、SEQ ID NO74、SEQ ID NO78、SEQ ID NO82、SEQ ID NO86、SEQ ID NO90、SEQ ID NO94、SEQ ID NO98、SEQ ID NO102、SEQ ID NO106、SEQ ID NO110和SEQ ID NO114組成的組中的氨基酸序列。
2.根據權利要求1所述的人抑癌蛋白，其中，所述癌癥為選自由正常乳腺、腦、心臟、肌肉、大腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血組成的組中的組織的癌癥。
3.一種編碼權利要求1中所述的原癌蛋白的人抑癌基因，所述人抑癌基因由選自由SEQ ID NO1、SEQ ID NO5、SEQ ID NO9、SEQ ID NO13、SEQ ID NO17、SEQ ID NO21、SEQ ID NO25、SEQ ID NO29、SEQ ID NO33、SEQ ID NO37、SEQ ID NO41、SEQ ID NO45、SEQ ID NO49、SEQID NO53、SEQ ID NO57、SEQ ID NO61、SEQ ID NO65、SEQ ID NO69、SEQ ID NO73、SEQ ID NO77、SEQ ID NO81、SEQ ID NO85、SEQ ID NO89、SEQ ID NO93、SEQ ID NO97、SEQ ID NO101、SEQ ID NO105、SEQ ID NO109和SEQ ID NO113組成的組中的DNA序列表示。
4.根據權利要求3所述的人抑癌基因，其中，所述癌癥為選自由正常乳腺、腦、心臟、肌肉、大腸、胸腺、脾、腎、肝、小腸、胎盤、肺和外周血組成的組中的組織的癌癥。
全文摘要
本發明公開了人抑癌基因、由其編碼的蛋白質、包含該基因的表達載體以及用該載體轉化的微生物。本發明的抑癌基因可以有效地用于診斷、預防和治療人類癌癥。
文檔編號C07K14/47GK101184774SQ200680018897
公開日2008年5月21日 申請日期2006年3月30日 優先權日2005年3月30日
發明者金弦起, 金振宇 申請人:金弦起